Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao mestrado Thiago Rocha.pdf: 3202693 bytes, checksum: 0519000d8f7c06ef3d8a404097ad8a82 (MD5) Previous issue date: 2012-02-29 / The mechanism of acute toxicity of the commercial formulation glyphosate, Roundup Transorb® (RDT), was investigated in the guppy (Poecilia reticulata) gills using proteomic technologies associated with analyses of histopathological indexes (HI´s), followed by quantification of histopathological lesions of the gills. Additionally, the present study describes a protocol for the analysis of fish behavior using measurements of the Index of morphofunctional behavior (Imb) and Total (Itb). The results indicate that the acute toxicity of RDT may change P. reticulata behavior as a consequence of changes in the expression of proteins associated with cyto-histopathological lesions of the gills. RDT LC50,96h for guppy females was 7.54 ± 0.93 μL.L-1, indicating that the species is moderately sensitive to this herbicide. Acute exposure to RDT sublethal concentration of 3.8 μL.L-1 induced time-dependent histopathological lesions of the gills in different epithelial and muscle cell types. HI´s were related to increase in severity and frequency of histopathological lesions and suggest that RDT may cause regressive, circulatory, and progressive disorders in the guppy gills. Two-dimensional electrophoresis associated with mass spectrometry and biocomputing permitted to verify 48 spots of proteins/isoforms regulated by RDT, which are involved in different cell processes, such as energy metabolism, regulation and maintenance of cytoskeleton, metabolism of nucleic acids and proteins in response to stress. The study of behavior biomarkers (BM´s) indicates that Imb and Itb were viable in the analysis of P. reticulata behavioral changes induced by RDT. Furthermore, proteomic and histological changes in the gills of P. reticulata induced by RDT may be histopathological and proteomic BM´s to biomonitor water pollution caused by glyphosate-based herbicides. / O mecanismo de toxicidade aguda da formulação comercial de glifosato, Roundup Transorb® (RDT), foi investigado para as brânquias do guaru (Poecilia reticulata) por meio de tecnologias proteômicas associadas às análises dos índices histopatológicos (HI´s), seguido da quantificação das lesões histopatológicas branquiais. Além disso, o presente trabalho também descreve um protocolo para análise do comportamento de peixes utilizando mensurações dos Índices de Comportamento Morfofuncional (Icmf) e Total (Ict). Os resultados indicam que a toxicidade aguda do RDT pode alterar o comportamento de P. reticulata como reflexo das mudanças de expressão das proteínas associadas às lesões cito-histopatológicas branquiais. A CL50,96h do RDT para as fêmeas do guaru foi de 7,54 ± 0,93 μL.L-1, a qual indica que esta espécie é moderadamente sensível a esse herbicida. A exposição aguda à concentração subletal de 3,8 μL.L-1 de RDT induziu lesões histopatológicas branquiais de modo tempo dependente em diferentes tipos celulares epiteliais e muscular. Os HI´s foram relacionados com o aumento da severidade e da frequência das lesões histopatológicas e apontam que o RDT pode causar distúrbios regressivos, circulatórios e progressivos nas brânquias do guaru. A eletroforese bidimensional associada à espectrometria de massa e bioinformática permitiu verificar 48 spots de proteínas/isoformas reguladas pelo RDT, as quais estão envolvidas em distintos processos celulares, tais como metabolismo energético, regulação e manutenção do citoesqueleto, metabolismo de ácidos nucléicos e proteínas de resposta ao estresse. O estudo dos biomarcadores (BM´s) comportamentais indica que o Icmf e o Ict foram viáveis na análise das alterações comportamentais de P. reticulata induzidas pelo RDT. Ademais, as modificações proteômicas e histológicas nas brânquias de P. reticulata induzidas pelo RDT podem ser BM´s histopatológicos e proteômicos no biomonitoramento da poluição aquática por herbicidas baseados em glifosato.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 fernanda.pdf: 2058487 bytes, checksum: 8d18627071331444bbad758cdb3863e5 (MD5) Previous issue date: 2006-08-31 / The temperature-dependent dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of Paracoccidioidomycosis (PCM), a human systemic mycosis highly prevalent in countries of Latin America. P. brasiliensis is subjected to different insults from human host, such as oxidative stress caused by reactive oxygen species produced by the host during the infection. Thioredoxin (TRX) is an intracellular redox protein that is required to maintain redox homeostasis in response to both reductive and oxidative stress conditions in several organisms. We report here the characterization of a 811 bp cDNA Pbtrx1, encoding a PbTRX1 of 116 amino acids, with a predicted molecular mass of 12 kDa and pI 5.2. This putative protein presented one highly conserved active site motif (WCGPC) between TRXs from several organisms. The phylogenetic analysis performed with PbTRX1 and TRXs from other organisms, putted P. brasiliensis in the fungi clade. We also performed the prediction of the secondary structure of PbTRX1 that shows a pattern characteristic of the open twisted alpha/beta, similar to TRX secondary structures described in other fungus. In order to obtain the recombinant PbTRX1, the expression construct pGEX-4T-3-trx1 was introduced into Escherichia coli cells and the expression and purification of the recombinant protein was obtained. The recPbTRX1 and PbTRX1 from yeast cells extract were found to catalyze the reduction of insulin. However the PbTRX1 from yeast cells extract treated with H2O2 showed highly insulin reduction activity than the yeast cells no treated. PbTRX1 was detected by Western blotting in the extracts from yeast cells growth and from mycelium to yeast transition. The yeast cells growth was significantly inhibited by H2O2; however the mycelium to yeast transition was little affected by this oxidant. Semi-quantitative RT-PCR was employed to analysis the expression of Pbtrx1 gene in response to H2O2. The level of Pbtrx1 transcripts was higher in yeast cells treated with H2O2 than in yeast cells no treated. To realize how P. brasiliensis deals with oxidative stress is essential to understand the mechanisms involved in its survival in the host. It may be possible that PbTRX1 enhances survival of P. brasiliensis in the host, protecting the fungus against the reactive oxygen species and allowing, in this way, the progress of the infection. / O fungo termodimórfico, Paracoccidioides brasiliensis, é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), uma micose sistêmica humana, com alta prevalência na América Latina. No hospedeiro humano, o fungo P. brasiliensis está sujeito a vários insultos, tais como o estresse oxidativo causado pelas espécies reativas de oxigênio, que são produzidas pelas células de defesa do hospedeiro durante a infecção. A tiorredoxina (TRX) é proteina redox intracelular que participa da manutenção da homeostase redox da célula, tanto em condições de estresse oxidativo quanto redutor. Neste trabalho apresentamos a caracterização de um cDNA de 811 pb, designado como Pbtrx1, que codifica para uma proteína, PbTRX1, de 116 resíduos de aminoácidos com massa molecular predita de 12 kDa e pI de 5,2. PbTRX1 apresentou um motivo de sítio ativo conservado (WCGPC) entre as TRXs de vários organismos. Análise filogenética com PbTRX1 e TRXs de outros organismos colocou P. brasiliensis no clado de fungos. Foi também realizada a predição da estrutura secundária da PbTRX1, que apresentou um padrão característico formado por cadeias-β que estão envolvidas por α-hélices. Para obter a proteína recombinante, recPbTRX1, foi realizada a construção do pGEX-4T-3-trx1 e este foi introduzido nas células de Escherichia coli. Assim, a expressão e purificação da proteína recombinante foi obtida. A proteína recPbTRX1 e a PbTRX1, presente no extrato protéico de células leveduriformes, apresentaram atividade redutora de insulina. Entretanto, a PbTRX1 presente no extrato protéico de células leveduriformes tratadas com H2O2, mostrou maior atividade redutora de insulina quando comparada com extrato de células leveduriformes não tratadas. A PbTRX1 foi detectada, por Western blotting, em extratos de células leveduriformes em crescimento e durante a transição de micélio para levedura. O crescimento das células leveduriformes foi inibido por H2O2, entretanto a transição de micélio para levedura foi pouco afetada por este oxidante. A técnica de RT-PCR semi-quantitativo foi empregada para análise da expressão do Pbtrx1 em resposta ao H2O2. O nível de transcritos de Pbtrx1 foi maior nas células leveduriformes tratadas com H2O2 do que nas células não tratadas. Para compreender como P. brasiliensis lida com estresse oxidativo é essencial entender os mecanismos envolvidos em sua sobrevivência no hospedeiro. É possível que PbTRX1 aumente a sobrevivência de P. brasiliensis no hospedeiro, protegendo o fungo contra espécies reativas de oxigênio e, desta maneira, permitindo o progresso da infecção.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pabline marinho 1.pdf: 394787 bytes, checksum: 1f2c3791104aa80d0a7f1fcfead4fa07 (MD5) Previous issue date: 2008-02-23 / Solanum paniculatum L., popularly known as jurubeba, is a widespread plant species used in Brazilian folk medicine as a tonic, antifever agent, colagogue, bitter, and eupeptic to treat liver and gastric dysfunctions. The chemical composition of Solanum paniculatum has long been studied and many substances have been isolated from the entire plant, including alkaloids, resins, glucids and saponins. The aim of this study was to evaluate the mutagenic, antimutagenic and cytotoxic effects of jurubeba s ethanolic leaf and fruits extracts using micronucleus test in mice bone marrow. The experimental procedure was performed according Schimid (1975). Swiss mice were orally treated with three different concentrations (100, 200 or 300 mg/kg) of leaf or fruit extracts of S. paniculatum. To evaluate the antimutagenic activity were used the same doses of the extract simultaneously with a single dose of Mitomicin C (4mg/kg) i.p. Cytotoxicity was evaluated by the polychromatic and normochromatic erythrocytes ratio. Our results have indicated that the ethanolic leaf extract of S. paniculatum did not exhibit mutagenic effect in mice, but it showed antimutagenic effects in this extract towards MMC. The cytotoxicity was strongly demonstrated specially for higher doses. Meanwhile, the ethanolic fruit extract of S. paniculatum was mutagenic only in dose of 200 mg/Kg at time of 48 hours. It was showed the cytotoxic activity for higher doses. However, no antimutagenic effect was evidenced by fruit extract. / Solanum paniculatum L., vulgarmente conhecida como jurubeba, ocorre em toda a América tropical, especialmente no Cerrado. A ela são atribuídas propriedades medicinais, sendo popularmente utilizada no tratamento da icterícia, da hepatite crônica, de febres intermitentes, ressaca, indigestão e como cicatrizante, além de usos culinários. A análise fitoquímica dessa espécie detectou substâncias como: alcalóides, glicoalcalóides, saponinas e resinas. Devido à grande utilização da planta Solanum paniculatum pela população como recurso terapêutico e alimentício, o presente estudo teve como objetivo avaliar a atividade mutagênica, antimutagênica e citotóxica do extrato etanólico das folhas e frutos de S. paniculatum utilizando o Teste do Micronúcleo em medula óssea de camundongos. O procedimento experimental foi realizado de acordo com Schimid (1975). Os animais foram tratados via gavage em três diferentes concentrações (100, 200 ou 300 mg/kg) do extrato etanólico das folhas ou dos frutos de Solanum paniculatum. As mesmas dosagens juntamente com uma dose única de Mitomicina C (4 mg/Kg) i.p. foram administradas na avaliação da antimutagenicidade. Genotoxicidade e antigenotoxicidade foram avaliadas pela freqüência de eritrócitos policromáticos micronucleados, enquanto a citotoxicidade foi avaliada pela relação entre eritrócitos policromáticos e normocromáticos. Os resultados mostraram que o extrato etanólico das folhas de S. paniculatum não demonstrou ação mutagênica, no entanto, em doses mais elevadas o extrato exibiu a atividade citotóxica e antimutagênica. Quanto ao extrato etanólico dos frutos, este demonstrou atividade mutagênica na dose de 200 mg/Kg em 48 horas de administração, foi mostrada ação citotóxica em doses mais elevadas e não foi observada ação moduladora de mutagenicidade induzida por mitomicina C.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mirelle Bb.pdf: 2549462 bytes, checksum: 7f8ae645314de6fb536a8445eb69e03e (MD5) Previous issue date: 2010-01-29 / Paracoccidioides brasiliensis is a thermodimorphic fungus that causes paracoccidioidomycosis (PCM), a systemic mycosis prevalent in South America. In humans, infection starts by inhalation of fungal propagules that reach the pulmonary epithelium. The cell wall presents an essential role in the pathobiology of P. brasiliensis, since it is involved in the morphogenetic changes associated with the life cycle of this pathogen. The biosynthesis and remodeling of the cell wall polysaccharide network is required for fungal growth and glycosylphosphatidylinositol (GPI)-anchored proteins are involved in these processes. The enzymes of the glucan-elongating (GEL) family are GPI-anchored proteins which have beta-1,3-glucanosyltransferase activity and play important role in the cross-linking of cell wall components in fungi. The P. brasiliensis genome possess 3 genes that encode for beta-1,3-glucanosyltransferases (Gel1p, Gel2p e Gel3p). With the aim of searching for other possible functions for beta-1,3-glucanosyltransferase 3 (PbGel3p) in P. brasiliensis, the interactions between this protein and others proteins of the fungus were investigated through the Saccharomyces cerevisiae two-hybrid system and pull-down assay. The two-hybrid system enables the study of interactions in vivo and, through this approach, 8 proteins which interact with PbGel3p were identified. The interaction with phosphatidylinositol- 4-phosphate 5-kinase its3 and protein kinase Dsk1p suggest the participation of PbGel3p in the cell division cycle. The RNA helicase Dbp5p, whose interaction with PbGel3p was in vitro confirmed by coimunoprecipitation, and the 5'-3' exoribonuclease are involved in the mRNA metabolism suggesting a function for PbGel3p in this process. The interaction between PbGel3p and the lipase/serine esterase, which participates on the biosynthesis of the GPI-anchor, was also confirmed by coimunoprecipitation. PbGel3p also interacts with the transcription factor Ctf1Bp and the 3-oxoacyl reductase enzyme, which suggests its involvement in the lipid metabolism. The interaction with the leptomycin B resistance protein Pmd1p suggests a role for PbGel3p in the response to antifungal drugs. The in vitro pull-down assay resulted in the identification of P. brasiliensis 70 kDa heat shock protein. The interaction with this protein suggests that PbGel3p may act in the response to stress conditions, as in the temperature increase. On basis of these data, functional studies may be carried out in order to confirm the Gel3p multifunctionality in P. brasiliensis. / Paracoccidioides brasiliensis é um fungo termodimórfico, causador da paracoccidioidomicose, uma micose sistêmica prevalente na América do Sul. A infecção em humanos inicia-se com a inalação de propágulos fúngicos que atingem o epitélio pulmonar. A parede celular desempenha um papel importante na patobiologia do P. brasiliensis, pois está envolvida nas mudanças morfogenéticas associadas com o ciclo de vida deste patógeno. A biossíntese e o remodelamento dos polissacarídeos da parede celular são essenciais para o crescimento do fungo e proteínas glicosilfosfatidilinositol (GPI)-ancoradas estão envolvidas nesses processos. As enzimas da família glicanosiltransferase alongando glicana (GEL) são proteínas GPI-ancoradas que possuem atividade de beta-1,3-glicanosiltransferase e desempenham um importante papel nas ligações cruzadas dos componentes da parede celular em fungos. O genoma de P. brasiliensis possui 3 genes codificantes para beta-1,3-glicanosiltransferases (Gel1p, Gel2p e Gel3p). Com o objetivo de se buscar outras possíveis funções da beta- 1,3-glicanosiltransferase 3 (PbGel3p) em P. brasiliensis, as interações entre essa proteína e outras proteínas do fungo foram investigadas através do sistema de duplohíbrido em Saccharomyces cerevisiae e do ensaio de pull-down. O sistema duplohíbrido permite o estudo das interações in vivo e, através dele, foram identificadas 8 proteínas que interagem com PbGel3p. A interação com a fosfatidilinositol-4-fosfato 5- quinase its3 e com a Dsk1 proteína quinase sugere a participação de PbGel3p no ciclo de divisão celular. A RNA helicase Dbp5p, cuja interação com PbGel3p foi confirmada in vitro através do ensaio de coimunoprecipitação, e a 5'-3' exoribonuclease estão envolvidas no metabolismo de RNAm, sugerindo uma função para PbGel3p nesse processo. A interação entre PbGel3p e a enzima serina esterase/lipase, que participa da via de biossíntese da âncora GPI, também foi confirmada por coimunoprecipitação. PbGel3p interage com o fator de transcrição Ctf1Bp e enzima 3-oxoacil redutase, fato que sugere seu envolvimento no metabolismo de lipídeos de P. brasiliensis. A interação com a proteína de resistência à leptomicina B Pmd1p sugere um papel para PbGel3p na resposta à agentes antifúngicos. O ensaio de pull-down in vitro resultou na identificação da proteína de choque térmico de 70 kDa de P. brasiliensis. A interação com essa proteína sugere que PbGel3p pode atuar na resposta à condições de estresse, como o aumento de temperatura. Com base nesses dados, estudos funcionais devem ser realizados para confirmar a multifuncionalidade de Gel3p em P. brasiliensis.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao maloni mafei.pdf: 350517 bytes, checksum: d69b3acfe7bd57117eea8da3eb53fbcb (MD5) Previous issue date: 2009-06-29 / Nitrogen is considered an essential element for plants, since it is involved in the composition of various biomolecules such as ATP, NADH, NADPH, proteins, enzymes and chlorophyll. The chlorophyll is a pigment from the leaves of plants, which is directly associated with the potential of photosynthetic activity, as well as the nutritional status of the plant. The use of the variable fluorescence of chlorophyll has been widespread, especially in the study of photosynthetic capacity of plants, as a nondestructive method that allows qualitative and quantitative analysis of the absorption and utilization of light energy by photosynthetic apparatus. The objective of this research was to quantify the emission of the chlorophyll a fluorescence (F0, initial fluorescence; Variable-Fv, Fm-Maximum, Terminal-Ft and Efficiency Fotoquímica- Fv/Fm) in photosystem II and the dry matter in bean (Phaseolus vulgaris L .) and soybean (Glycine max (L.) Merr.) submitted the application of nitrogen in the form of ammonium sulfate in coverage. The experimental design was completely randomized in factorial formed by two legumes, two readings and two levels of nitrogen N0 = 0.000 g.kg-1 (control) and N1 = 0,060 g.kg-1. Nitrogen fertilization with ammonium sulfate in coverage influenced the minimum fluorescence (F0) and not influenced by other variables of fluorescence in bean and soybean. Increased the dry mass of branches for the bean, to have influenced the increase in soybean dry masses of shells of pods and number of pods / O nitrogênio é considerado um elemento essencial para as plantas, visto que ele está envolvido na composição de várias biomoléculas como ATP, NADH, NADPH, proteínas, enzimas e clorofila. A clorofila está diretamente associado com o potencial da atividade fotossintética, assim como, o estado nutricional da planta. O uso de variáveis da fluorescência das clorofilas tem sido difundido, principalmente no estudo da capacidade fotossintética das plantas, por ser um método não-destrutivo que permite a análise qualitativa e quantitativa da absorção e aproveitamento da energia luminosa pelo aparelho fotossintético. O objetivo desta pesquisa foi quantificar a emissão de fluorescência pela clorofila a (Fluorescência Inicial (F0); Variável (Fv); Máxima (Fm); Terminal (Ft) e Máxima Eficiência Fotoquímica (Fv/Fm) no fotossistema II e a massa seca em feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.) e soja (Glycine max (L.) Merr.), submetidos à aplicação de nitrogênio na forma de sulfato de amônio, em cobertura. O delineamento experimental foi o inteiramente casualizado, em fatorial formado pelas duas leguminosas, duas leituras e dois níveis de nitrogênio N0 = 0,000 g.kg-1 (testemunha) e N1 = 0,060 g.kg-1. A adubação nitrogenada com sulfato de amônio em cobertura influenciou a fluorescência mínima (F0) e não influenciou nas demais variáveis da fluorescência em feijoeiro e soja. Proporcionou aumento das massa seca dos ramos para o feijoeiro, já para soja influenciou no aumento das massas secas das cascas das vagens e número de vagens

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernando Medeiros Bastos.pdf: 1326982 bytes, checksum: fa537bd70ed08e84642f9fc192266e56 (MD5) Previous issue date: 2008-05-30 / Endoxylanases are the main group of enzymes involved in the hydrolysis of xylan. This enzymes have application in industrial proposes, like as drink, food, feed, clothes industries and for bleaching cellulose paper pulps. In bread making the xylanases have been used to improve processing and product quality of loaf, leading soft dough and loaf with larger volume as well as an improved crumb structure. The xylanolitic enzymes produced by filamentous fungi constitute an enzymatic pool with distinct activities which make their use in industrial process more difficult, the obtainment of recombinant microorganisms constitutes a strategy to achieve suitable enzymes to industrial process. The thermophilic fungus Humicola grisea var. thermoidea has proved to be a good source of xylanolitic enzymes. The gene Hxyn2 from H. grisea codes a xylanase with 23 kDa that belongs to G/11 family of glycosil-hydrolases. Its cDNA was cloned in the vector pHILD2 and expressed in yeast Pichia pastoris under the control of the promoter AOX1. The transformants were chosen trough genetic stability and capacity to produce and secrete the enzyme HXYN2r into culture medium. The purified HXYN2r showed a high xylanolitic activity with an optimum temperature of 60 ºC and an optimum pH value of 6.5. The aim of this project was the production, purification and application of HXYN2r enzyme in bread making tests. The production in the optimized medium obtained 100 mg of active xylanase per liter of medium BMMY-U. This quantify of enzyme presented 40% of the total proteins in culture supernatants. The proteins of culture supernatants was concentrated by liofylization and fractionated by into a chromatographic column of gel filtration Sephacryl S-100. The purified xylanase presented specific activity of 2250 U/mg and the purification profit was 6.4%. The 23 kDa protein was confirmed by the activity on Zymogram assay. The pure xylanase was added at the rate of 45 and 90 U/Kg of wheat flour in the bread making tests. In this rates it was not observed any effect of xylanase in specific volume either in crumb structure. The HXYN2r enzyme was partially purified by a heat treatment (45 min at 60 °C) and was concentrated by liofylization and a yield of 17.9% was obtained. The partially purified HXYN2r was added at the rates of 500, 1500, 3000, 4500 and 6000 U/kg of wheat flour. The added xylanase improved the specific volume and the crumb structure, but any effect was observed in the moisture content of the loaf. The best result was the rise of 16.0 % in loaf specific volume with the dose of 3000 U/kg of wheat flour. This effect was similar to the obtained with a commercial xylanase added to the dough in equal dose. The results presented suggest that the xylanase from H. grisea can be used in bread making to improve specific volume. / As endoxilanases formam o principal grupo de enzimas hidrolíticas envolvidas na degradação da xilana. Estas enzimas têm vasta aplicação no setor industrial, como nas indústrias de bebidas, alimentícia, têxtil, de rações e de celulose (biobranqueamento). As xilanases têm sido empregadas na panificação para melhorar o processamento e a qualidade do pão, levando a obtenção de uma massa mais macia, pães com maior volume e com melhor estrutura de miolo. As enzimas xilanolíticas produzidas por fungos constituem um conjunto enzimático com atividades distintas, dificultando a sua utilização direta nos processos industriais. Uma estratégia utilizada atualmente se baseia na obtenção de microrganismos recombinantes que produzam enzimas com atividades específicas e adequadas aos diferentes processos industriais. O fungo termofílico Humicola grisea var. thermoidea tem sido uma boa fonte de enzimas xilanolíticas. O gene Hxyn2 deste fungo codifica uma endoxilanase de 23 kDa pertencente a família G/11 das glicosil hidrolases. Para a produção da enzima recombinante HXYN2r, o cDNA correspondente ao gene Hxyn2 (cDNA-xyn2) foi clonado no vetor pHILD2 e expresso na levedura P. pastoris sob o controle do promotor AOX1. Os transformantes foram selecionados quanto à estabilidade genética e capacidade de produzir e secretar a enzima HXYN2r ativa para o meio de cultura. A enzima HXYN2r purificada apresentou temperatura ótima a 60°C e pH ótimo de 6,5. O presente trabalho teve como objetivo a produção, purificação e aplicação da enzima HXYN2r em testes de panificação. A produção da enzima foi realizada em condições ótimas, obtendo 100 mg de proteína/L de meio BMMY-U (Meio de cultura complexo contendo metanol e uréia), sendo que a quantidade de enzima no meio de cultura representou 40% do total das proteínas secretadas. Para a purificação de HXYN2r, as proteínas do sobrenadante de cultura foram concentradas por liofilização e fracionadas por cromatografia de gel filtração S-100. A enzima purificada apresentou uma atividade específica de 2250 U/mg, com um rendimento de purificação de 6,4%. A proteína de aproximadamente 23 kDa foi confirmada pela presença de uma banda de xilanase no gel de zimograma. A enzima pura foi adicionada à massa para testes de panificação nas concentrações de 45 e 90 U /kg de farinha, nestas concentrações não foi observado alteração no volume específico dos pães e nem na estrutura do miolo. A enzima HXYN2r também foi parcialmente purificada por tratamento térmico (60 °C por 45 min) e concentrada por liofilização, obtendo um rendimento de 17,9 %. A enzima HXYN2r parcialmente purificada foi testada na panificação nas concentrações de 500, 1500, 3000, 4500 e 6000 U/Kg de farinha. A suplementação da xilanase aumentou o volume específico dos pães, melhorou a estrutura do miolo e não foi observada nenhuma alteração no conteúdo de umidade dos pães em relação ao pão controle. O melhor resultado apresentado foi o aumento de 16,0 % no volume específico dos pães suplementados com 3000 U de HXYN2r por quilo de farinha, resultado semelhante ao obtido com a adição de uma preparação enzimática comercial contendo xilanase nas mesmas concentrações. Os resultados apresentados sugerem que a xilanase do H. grisea pode ser usada na panificação para a melhoria do volume específico dos pães.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2015-10-26T16:54:27Z No. of bitstreams: 2 Tese - Flávia de Castro Pereira - 2014.pdf: 7274098 bytes, checksum: 2478fc770e9bfbd8ffb6361d038b525d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-10-27T14:38:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Flávia de Castro Pereira - 2014.pdf: 7274098 bytes, checksum: 2478fc770e9bfbd8ffb6361d038b525d (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-10-27T14:38:45Z (GMT). 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This study ranges the citotoxic activity of ruthenium (III) compound cis- Tetraammine(oxalato)Ruthenium(III) Dithionate - {Cis-[Ru(C2O4)(NH3)4]2(S2O6)} to treat human erythroleukemia (K562) tumor cell lineand the complex of ruthenium (II) coordinated a phosphine ligand and nitrile front tumor lineage S180 through the techniques of assay cell viability, assay kinetics of cell cycle phases, annexin V assay/ propidium iodide, test of mitochondrial membrane potential, test comet and gene expression through real time PCR. Both antiproliferative and cytotoxic activity revealed that K562 cells cultured with ruthenium (III) compound showed meaningful decrease in proliferation. Ruthenium(III) compound induced the IC50 value was of 18.28 μM set againts the cell cycle profiles cells not treated. Flow cytometric analysis indicated a sub-G1 arresting effect of ruthenium compound on K562 cells. Through the cell viability assay through MTT reduction technique, it was found that the complex of ruthenium (II) phosphine coordinated and nitrile presented cytotoxic activity when facing the tumor strain S180 with IC50 17.02±8.21μM and IC50 de 53.73 ± 5.71 μM for lymphocyte. When analyzing the cell cycle of tumor cells S180 treated with complex of ruthenium (II) caused increase in cells in G0/G1 and in S phase decreased. We observed an increase G2 / M. In the analysis of apoptosis assays, the results pointed that the complex ruthenium (II) induced cell death via apoptosis in tumor strain S180 as proved the increase in annexin cells V positive, depolarization of the mitochondrial membrane potential, activation of caspase 3 (Casp3) and 8 (Casp8) and increased expression levels of caspase-3 (Casp3) (mRNA), Bax (mRNA) and Tp53. The results lead to the conclusion that both complexes of ruthenium (II) and (III) induce cytotoxic activity against cell models tested, and that this activity correlates with alterations in cell cycle phases and induction of cell death via apoptosis. / Fármacos à base de cisplatina ainda são os anticancerígenos mais utilizados no mundo. Os compostos de rutênio têm sido objetos de grande atenção devido as suas propriedades antimetastática, baixa toxicidade e vários estados de oxidação (Ru (II), Ru (III) e Ru (IIV)) em condições fisiológicas. O presente trabalho teve como objetivo investigar in vitro os efeitos citotóxico e mecanismo de morte do complexo Ditionato de cis-Tetraamino(oxalato)rutênio(III) na linhagem tumoral de leucemia mielóide crônica (K562) e do complexo de rutênio (II) coordenado a ligante fosfina e nitrila [RuCl(bcn)(bipy)(dppe)]PF6, em linhagem tumoral S180 a partir das técnicas de ensaio de viabilidade celular, ensaio de cinética das fases do ciclo celular, ensaio anexina V/Iodeto de Propídeo, ensaio de potencial de membrana mitocondrial e expressão gênica por PCR em tempo real. Os resultados mostraram que o complexo de rutênio (III) provoca uma significativa redução na proliferação de células K562. O complexo de rutênio (III) induziu uma IC50 =18,28 μM. A análise por citometria de fluxo indicou um efeito sub-G1 dos complexos de rutênio sobre células de K562. O composto provocou um aumento de dano significativo nas células em todas as concentrações testadas em comparação ao controle negativo, o que pode ser associado à citotoxicidade com efeito direto sobre o DNA das células de K562. A partir do ensaio de viabilidade celular pela técnica de redução do MTT, verificou-se que o complexo de rutênio (II) coordenado a fosfina e nitrila apresentou atividade citotóxica frente à linhagem tumoral S180 com IC50 17,02±8,21μM e IC50 de 53,73 ± 5,71 para linfócito. Na análise do ciclo celular de células tumorais S180 tratadas com o complexo de rutênio (II), casou indução de G0/G1, fase S e G2/M. Na análise dos ensaios de apoptose, os resultados demonstraram que o complexo de rutênio (II) induziu morte celular via apoptose na linhagem tumoral S180, como evidenciado pelo aumento no número de células anexina V positivo, despolarização do potencial de membrana mitocondrial, ativação das caspase 3 (Casp3) e 8 (Casp8) e aumento dos níveis de expressão de caspase-3 (Casp3) (mRNA), Bax (mRNA) e Tp53 . A partir dos resultados conclui-se que ambos os complexos de rutênio (II) e (III) induzem atividade citotóxica frente aos modelos de células testadas, sendo que a atividade está correlacionada às alterações nas fases do ciclo celular e indução de morte celular via apoptose.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2015-11-11T18:59:23Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Sardinha de Oliveira - 2014.pdf: 1412743 bytes, checksum: d9f93cb6e80442a38393a204842830c9 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-12T09:26:51Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Sardinha de Oliveira - 2014.pdf: 1412743 bytes, checksum: d9f93cb6e80442a38393a204842830c9 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-12T09:26:51Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Thiago Sardinha de Oliveira - 2014.pdf: 1412743 bytes, checksum: d9f93cb6e80442a38393a204842830c9 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-09-19 / Endogenous estrogens have been associated with greater vascular protection in premenopausal women, and the increased risk of cardiovascular diseases in postmenopausal women can be associated to the decrease in plasma estrogen levels. Furthermore recently studies showed that the use of estrogens, like estrone, exhibits remarkable vascular effect when used on isolated arteries, however any investigation was made to elucidate the mechanism of action of this compound. So, the present study was designed to investigate the ability of estrone to induce vascular relaxation and modulate NO-dependent signaling pathway and analyzed the role of estrogens receptor on estrone-mediated vascular relaxation, compared with the effects promoted by 17β-estradiol. 12 week-old male Wistar rats were used to the vascular reactivity, which was performed in an organ bath study for an isometric tension recording. To the experimental protocols, concentration-response curves (0.1 - 100μM) to estrone or 17β - estradiol were performed. The mechanism contributing to estrone-induced effects were determined comparing with the vascular effects induced by 17β - estradiol that have its effect vascular well characterized. It was observed that the vascular relaxation promoted by estrone is dependent on the endothelium and the estrogen receptor. The vasorelaxant effect promoted by estrone was significantly altered in the presence of the inhibitor of PI3K signaling pathway (wortmannin) and the Ca2+-CaM complex inhibitor (calmidazolium), showing the involvement of PI3K/Ca2+-CaM signaling pathways. This study demonstrate that estrone promoted vasorelaxant effect on rat thoracic aortic on endotheliumdependent manner and its effect depends on the estrogen receptors that activate the PI3K pathway and the Ca2+-calmodulin complex which subsequently activates the NO/cGMP pathway. These results contribute to the better understanding of the role of estrone in the conjugated equine estrogen (CEE) which could be associated to the benefits effects of estrogens in the CEE therapy. / Os estrogênios endógenos têm sido associados com uma maior proteção do sistema vascular em mulheres na pré-menopausa, uma vez que os riscos de doenças cardiovasculares em mulheres na pós-menopausa são maiores, alterações estas que se devem à diminuição nos níveis plasmáticos de estrogênios. Além disso, estudos recentes mostraram que o uso de estrogênios, como a estrona, apresenta notável efeito vasorelaxante quando avaliado seu efeito em artérias isoladas, no entanto, nenhuma investigação foi realizada para elucidar o mecanismo de acção deste composto. Assim, o presente estudo procurou investigar o efeito da estrona em aorta de ratos, verificando seu efeito em induzir o relaxamento vascular e modular a via de sinalização dependente do óxido nítrico (NO), e ainda o papel dos receptores de estrogênios, comparando com os efeitos promovidos pelo 17β- estradiol. Os animais utilizados neste estudo foram ratos Wistar com 12 semanas de idade, os quais foram utilizados para realização da reatividade vascular em banho de órgãos isolados. Para os protocolos experimentais, curvas de concentraçãoresposta (0,1-100μM) foram feitas para a estrona ou para o 17β-estradiol e as tensões isométricas gravadas. Os mecanismos envolvidos no efeito induzido pela estrona foram determinados através da incubação de inibidores farmacológicos e comparado ao efeito do 17β-estradiol, que tem seu efeito vascular bem caracterizado. Observou-se que a estrona promove efeito vasorelaxante em aorta torácica de ratos, e que o relaxamento vascular promovido por ela é dependente do endotélio e do receptor de estrogênios. Após ativação do receptor de estrogênios, este ativa as vias de sinalização PI3K e Ca2+-CaM que posteriormente ativam a via NO/GMPc. Estes resultados contribuem para o melhor entendimento do papel da estrona em preparações de estrogênios conjugados equinos (CEE), que pode estar associado aos efeitos de benefícios dos estrogênios na terapia CEE.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-02-11T12:23:04Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Michelle Furquim Leão - 2007.pdf: 19618077 bytes, checksum: 185360e935aab77ea3553e7a7d1c4093 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-02-12T10:57:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Michelle Furquim Leão - 2007.pdf: 19618077 bytes, checksum: 185360e935aab77ea3553e7a7d1c4093 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-12T10:57:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Michelle Furquim Leão - 2007.pdf: 19618077 bytes, checksum: 185360e935aab77ea3553e7a7d1c4093 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2007-08-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The sharp toxicity of the herbicide original Roundup (Glifosato), one of the more acquaintances and maybe one of the more used dessecantes in direct planting in the farmings in the area Centro Oeste and in every country now, it was investigated through the effects detected in the fish Poecilia viviparous... / A toxicidade aguda do herbicida Roundup original (Glifosato), um dos mais conhecidos e talvez um dos mais utilizados dessecantes em plantio direto nas lavouras na região Centro Oeste e em todo país atualmente, foi investigada através dos efeitos detectados no peixe Poecilia vivípara...

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-20T13:30:13Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daiany Priscilla Bueno da Silva - 2015.pdf: 1122736 bytes, checksum: fc98524b1ad5d0e3a0cb2e1cc87bc933 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-04-20T13:32:30Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daiany Priscilla Bueno da Silva - 2015.pdf: 1122736 bytes, checksum: fc98524b1ad5d0e3a0cb2e1cc87bc933 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-20T13:32:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Daiany Priscilla Bueno da Silva - 2015.pdf: 1122736 bytes, checksum: fc98524b1ad5d0e3a0cb2e1cc87bc933 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The piperazines derivatives are an important class of chemical compounds with a broad spectrum of biological activities such as anti-infectious activity, anti-carcinogenic, anti-nociceptive, anti-hypertensive, anxiolytic and vasorelaxant and are attractive candidates for development of new analgesics and anti-inflammatories drugs. The aim of this study was evaluate the effects of piperazine compound LQFM-008 (4-[(1-phenyl-1H-pyrazol-4-yl) methyl]1-piperazine carboxylic acid ethyl ester) in acute tests of nociception and inflammation and characterize that the mechanisms are involved in the antinociceptive effect. For this study were used male mice weighing between 25 and 35g. In the formalin test, the treatments with LQFM-008 at doses of 48 and 96 μmol/kg (p.o.) reduced the licking time at both neurogenic and inflammatory phases of this test. The anti-inflammatory activity was confirmed, since LQFM-008 at doses of 48 and 96 μmol/kg (p.o.) reduced the formation of paw edema induced by carrageenan at all hours of the test and LQFM-008 in pleurisy test at dose of 96 μmol/kg (p.o.) also reduced leukocyte migration and protein exudation. In the tail-flick and the hot plate tests, the treatment with LQFM-008 at doses of 48 and 96 μmol/kg (p.o.) increased the latency to thermal stimulus, suggesting the involvement of central mechanisms in the antinociceptive effect LQFM-008. The pre-treatment of animals with naloxone (7.5 μmol/kg s.c.) reversed the antinociceptive effect of LQFM-008 only in the first phase of the formalin test, however, the pre-treatment with NAN-190 (1.3 μmol/kg i.p.) and PCPA (500 μmol/kg i.p.) reversed the antinociceptive effect of LQFM-008 in both phases of the test. Thus, the piperazine derivative LQFM-008 exhibit antinociceptive and anti-inflammatory activities in acute test and the antinociceptive effect is resulting from a central action with involvement of opioid receptors and the serotonin pathway. / Os derivados piperazínicos constituem uma importante classe de compostos químicos com largo espectro de atividades biológicas, tais como atividade anti-infecciosa, anti-cancerígena, antinociceptiva, anti-hipertensiva, vasorrelaxante e ansiolítica, tornando-se candidatos atrativos para desenvolvimento de novos fármacos analgésicos e anti-inflamatórios. O objetivo do presente trabalho foi avaliar os efeitos do composto piperazínico LQFM-008 (4-((1-fenil-1H-pirazol-4-il) metil) piperazina-1-carboxilato) em testes agudos de nocicepção e inflamação, buscando caracterizar quais os mecanismos de ação estariam envolvidos no efeito antinociceptivo. Para este estudo foram utilizados camundongos machos, pesando entre 25 e 35g. No teste da formalina os tratamentos com LQFM-008 nas doses de 48 e 96 μmol/kg (v.o.) reduziram o tempo de reatividade à dor tanto na fase neurogênica quanto na fase inflamatória do teste. A atividade anti-inflamatória foi confirmada, uma vez que LQFM-008 nas doses de 48 e 96 μmol/kg (v.o.) reduziu a formação do edema de pata induzido por carragenina em todas as horas deste teste e no teste de pleurisia LQFM-008 na dose de 96 μmol/kg também reduziu a migração de leucócitos e a exsudação proteica. Nos testes de flexão de cauda e da placa quente, o tratamento com LQFM-008 48 e 96 μmol/kg (v.o.) aumentou a latência ao estímulo térmico, sugerindo o envolvimento de mecanismos centrais no efeito antinociceptivo de LQFM-008. O pré-tratamento dos animais com naloxona (7,5 μmol/kg s.c.) reverteu o efeito antinociceptivo de LQFM-008 apenas na primeira fase do teste da formalina, no entanto, os pré-tratamentos com NAN-190 (1,3 μmol/kg i.p.) e PCPA (500 μmol/kg i.p.) reverteram o efeito antinociceptivo de LQFM-008 em ambas as fases do teste. Assim o derivado piperazínico LQFM-008 apresenta atividade antinoceptiva e anti-inflamatória em testes agudos, sendo efeito antinociceptivo decorrente de uma ação central com envolvimento dos receptores opióides e da via serotoninérgica.