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Infer?ncias carioevolutivas sobre grupos cr?pticos de peixes marinhos e estuarinosAra?jo, Washington Candeia de 26 February 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Cytogenetic studies have been revealing a great diversity not detected, until then, in several families of fishes. Many of these groups, especially those that exhibit great diversity, like Perciformes and Siluriformes, possess species with difficult
morphologic characterization, called cryptic species, commonly detected through karyotypic analyses, which reveals outstanding interespecific variations with
relationship to the number and its chromosomal structures. Thus, the present work intends to contribute for the cytogenetic knowledge of marine and brackish fish
species, because they peculiar life habits and by lack of cytogenetic data of your genetic aspects. Therefore, cytogenetic studies were developed in a species of
Apogonidae (Perciformes), two species of sea catfishes of the family Ariidae (Siluriformes) and brackish fish Paurachenipterus galeatus (Siluriformes, Auchenipteridae), through C banding, Ag-NOR, use of base-specific flourochromes (DAPI and CMA3), as well as FISH (Fluorescent in situ hybridization) using ribosomal DNA probes 5S and 18S. The present results
contribute to a better understanding of the processes of differentiation patterns and chromosome evolution in these groups. The use of other approaches (the morphology and molecular tools) will allow a larger understanding of the genetic
and biological diversity of the Brazilian ichthyofauna. / Estudos citogen?ticos t?m revelado uma grande diversidade at? ent?o n?o detectada em diversas fam?lias de peixes. Muitos destes grupos, sobretudo os que exibem grande diversidade, como Perciformes e Siluriformes, possuem esp?cies de dif?cil caracteriza??o morfol?gica, chamadas de esp?cies cr?pticas, muitas vezes s? detectadas atrav?s de an?lises cariot?picas, as quais revelam varia??es
interespec?ficas marcantes quanto ao n?mero e estrutura cromoss?mica. Desta forma, o presente trabalho pretende contribuir para o conhecimento citogen?tico de esp?cies marinhos e estuarinos, que, por n?o serem exploradas
comercialmente ou terem h?bitos de vida peculiares s?o pouco estudadas quanto aos seus aspectos gen?ticos. Assim, an?lises cariot?picas foram desenvolvidas em uma esp?cie da fam?lia Apogonidae (Perciformes), em duas esp?cies de bagres
marinhos da fam?lia Ariidae (Siluriformes), al?m de uma esp?cie de siluriforme estuarino, Paurachenipterus galeatus (Auchenipteridae) atrav?s de bandamento C, Ag-RONs, colora??o com DAPI e CMA3, bem como pela FISH (Fluorescent in situ hibridization), utilizando sondas ribossomais 5S e 18S. Os resultados aqui apresentados indicam grande diversidade inerente a estes grupos. Outras
abordagens (an?lises morfol?gicas e ferramentas moleculares) permitir?o obter maior entendimento acerca da diversidade biol?gica da ictiofauna brasileira
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Morfologia, taxonomia, filogenia, anatomia foliar e titoquímica de espécies do gênero Hyptis Jacq. (Labiatae) ocorrentes em em Goiás e Tocantins / Morphology, taxonomy, phylogeny, leaf anatomy and titoquímica species of the genus Hyptis Jacq. (Labiatae) occurring in Goiás and TocantinsFERREIRA, Heleno Dias 29 April 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010-04-29 / The genus Hyptis, with 280 species worldwide, belongs to the family Labiatae (Lamiaceae), subfamily Nepetoideae, tribe Ocimae, and subtribe Hyptidinae. The genus was divided in 27
sections, with 13 of them (Apodotes, Cephalohyptis, Cyanocephalanthus, Cyrta, Eriosphaeria, Gymneia, Induratae, Mesosphaeria, Polydesmia, Pusilae, Trichosphaeria, and Hylodontes) occur in the states of Goiás and Tocantins (Brazil). The collection of botanical material for morphological, taxonomical, anatomical, phytochemical studies, as well as geographical distribution and phylogenetic relationships, was realized with several field trips in the states of Goiás and Tocantins. For morphological studies, several loans of herbarium specimens of Hyptis were requested from Brazilian and international institutions. The genus Hyptis is mostly
American, with Neotropical distribution, ranging from southern United States to Argentina. In South America, most species of Hyptis are associated with open areas, and occur from 300 m altitude in the valley of the Rio Araguaia, in Goiás, to 3300 m in the western slopes of the Peruvian Andes. In Goiás and Tocantins they can be found in several vegetation types: cerrado, rocky outcrops, margins of cow pastures, cultivated fields, wet fields, humid forests, and flooded areas with Mauritia palms. In these states they occur in a variety of soils: sandy, sandygravelly, with rocky outcrops, hydromorphic, and latossoils. Specie of the section Cyrta are
exclusive of humid and flooded soils. The two main centers of diversity of Hyptis in Brazil are in the states of Minas Gerais and Goiás. Many herbarium specimens were analyzed and many
species were studied and collected during field trips in Goiás and Tocantins. The geographic position of each collection was verified with the use of a GPS instrument. The specimens
collected were deposited in the UFG Herbarium of the Federal University of Goiás. Thirty-two distribution maps of Hyptis in Goiás and Tocantins were elaborated from the specimens studied. A total of 89 species was catalogued, and 18 of them reported from Goiás and Tocantins were not found during the collecting trips. A key for the identification of the species was elaborated using morphological characters. A parsimony analysis using 35 morphological characters was
realized, obtaining 1864 most parsimonious trees and a strict consensus tree. The parsimony analysis supports the monophyly of the sections Gymneya, Cyrta, Apodotes, and Cyanocephalus (except for the H. nitidula - H. peduncularis clade), and indicates that the sections Mesospheria,
Xylodontes, Hyptis, Polydesmia, and Eriosphaeria are not monophyletic. Section Trichosphaeria is not well resolved. An anatomical study of 60 species, representing 11 sections
of Hyptis, was undertaken. Some characters, as hypodermis, schlerenchimatic sheath extensions, trichomes, stomatal cripts, supply useful taxonomic for inferring phylogenetic relationships within the genus. For the analyses of chemical components, 29 species and two varieties of Hyptis were selected. With the chemical analises, 216 constituents of essential oils were identified, mostly monotherpenes and sesquiterpenes. Average percentage and pattern of each chemical component were calculated. The most common chemical components were arbitrarily selected, as present in nine or more species: sabinene (9 spp.), 1, alpha-tujene, alpha-cubebene, beta-selinene, and 14-hidroxy-(Z)-cariophyllene (10 spp.). alpha-muurolol and 8(13)-dien- 5beta-ol (11 spp.), mircene, cariophil-4 and germacrene B (12 spp.), gamma-cadinene, epialpha- caninol (13 spp.) and 14-hydroxy-9-epi-(E)-cariofilene (13 spp.), 1-epi-cubenol- and gamma-muurolene (14 spp.), humulene poxide II and bicyclogermacrene (16 spp.), betaelemene and alpha-cadinol (17 spp.), beta-pinene (18 spp.), limonene (19 spp.), espatulenol and germacrene D (24 spp.), alpha copaene and beta-bourbonene (25 spp.), delta-cadinene (26 spp.), alpha-humulene (27 spp.), cariofilene oxide and (E)-cariofilene (28 spp.). Two dendrograms were obtained with two multivariate analyses of chemical constituents, one with quantitative data and the other with qualitative data (presence/absence). Species of section Cyanocephalus were the only ones found in a consistent group in both dendrograms based on chemical constituents. The data obtained in the present study contribute important information for the taxonomy and phylogenetic relationships of the genus Hyptis and the subtribe Hyptidinae, and ultimately for the family Labiatae. / O gênero Hyptis, com 280 espécies, pertence à família Labiatae, subfamília Nepetoideae, tribo Ocimae e subtribo Hyptidinae. O gênero Hyptis foi dividido em 27 seções, sendo que 13 seções (Apodotes, Cephalohyptis, Cyanocephalus, Cyrta, Eriosphaeria, Pachyphyllae, Gymneia, Induratae, Mesosphaeria, Polydesmia, Pusilae, Trichosphaeria e Xylodontes) ocorrem em Goiás/Tocantins. Para coleta do material botânico, destinado aos estudos morfológicos,
taxonômicos, anatômicos, fitoquímicos, distribuição geográficas e relações filogenéticas, foram realizadas excursões de campo em Goiás e algumas regiões do Tocantins.Para complementação dos dados morfológicos, foram solicitados exemplares de espécies de Hyptis dos diferentes herbários do Brasil e de outros países. O gênero Hyptis é essencialmente americano com distribuição na Região Neotropical, estendendo desde o sul dos Estados Unidos da América até a Argentina. As espécies de Hyptis estão associadas principalmente a áreas abertas. A altitude de ocorrência varia desde 300m, como no vale do Rio Araguaia em Goiás, até 3300m no oeste dos Andes do Peru. Habitat e solos em que ocorrem as espécies em Goiás/ Tocantins são variados. Podendo ser encontradas nos cerrados, campos rupestres, margens de lavouras, lotes
baldios, brejos, campos úmidos e veredas. Podem ocorrer em solos arenosos, arenosopedregosos,
solos com afloramento rochosos, latossolos e solos hidromórficos. As espécies da
seção Cyrta são exclusivas de ambientes úmidos e pantanosos. Os dois principais centros de
diversidade de Hyptis, no Brasil, são Minas Gerais e Goiás. Foram analisadas exsicatas de
diversos herbários e indivíduos coletados de diferentes espécies nas excursões de campo em
Goiás e Tocantins. Os espécimes coletados foram depositados no Herbário UFG, da
Universidade Federal de Goiás. Foram elaborados 32 mapas de distribuição geográfica de
Hyptis. A posição geográfica de cada espécime coletado no campo foi verificada com auxílio
de GPS. Foram catalogadas 89 espécies, sendo que 18 espécies citadas para Goiás/Tocantins não foram coletadas nas excursões de campo. Baseado nos caracteres morfológicos foi elaborada uma chave de identificação das espécies. Desses caracteres foram selecionados 35
para análise de parcimônia, obtendo 1864 árvores igualmente parcimoniosas e a árvore consenso estrito. A análise de parcimônia suporta que as seções Gymneia, Pusillae, Apodotes e Cyanocephalus (exceto o clado formado por H. nitidula e H. peduncularis) são monofiléticas, enquanto que as seções Mesosphaeria, Xylodontes, Polydesmia e Eriosphaeria não são
consideradas monofiléticas. Trichosphaeria é uma seção que não está bem resolvida. Foi realizado estudo anatômico de 60 espécies de Hyptis, distribuídas em 11 seções. Alguns caracteres como hipoderme, extensão de bainha parenquimática, tricomas, criptas estomáticas são úteis para a taxonomia e para inferir relações filogenéticas dentro do gênero. Para análise dos componentes químicos, dos óleos esssenciais foram selecionados 29 espécies e duas variedades de Hyptis. Através de análise química foram identificados 216 componente dos óleos essenciais, principalmente monoterpenos e sesquiterpenos. Foram feitos os cálculos das médias percentuais e desvios padrões de cada componente químico. Arbitrariamente foram considerados os componentes químicos mais comuns aqueles presentes em nove ou mais espécies: sabineno (9 spp), 1, α-tujeno, α-cubebeno (9 spp), β-selineno e 14-hidroxi-(Z)- cariofileno (10 spp), α-muurulol e 8(13)-dien-5 β-ol (11 spp), mircenno, cariofila-4 e germacreno β (12 spp), γ-cadineno, epi- α-cadinol e 14-hidroxi-9-epi-(E)-cariofileno (13 spp), 1-epi-cubenol e γ-muuroleno (14 spp), póxido de hemuleno II e biciclogermacreno (16 spp), β- elemeno e α-cadinol (17 spp), β-pineno (18 spp), limoneno (19 spp), espatulenol e germacreno D (24 spp), α-copaeno e β-bourboneno (25 spp), δ-cadineno (26 spp), α-humuleno (27 spp),óxido de cariofileno e (E)-cariofileno (28 spp). Atravé de análise multivariada dos constituintes químicos foram elaborados dois dendrogramas, um baseado em dados quantitativos e outro em dados qualitativos (presença/ausência). As espécies da seção Cyanocephalus foram as únicas que formaram grupos muito afim, em ambos os dendrogramas, baseados nos constituintes químicos. Os dados obtidos, no presente trabalho, contribuirá para a taxonomia, anatomia, distribuição geográfica e relações filogenéticas do gênero Hyptis e da subtribo Hyptidinae, bem como para melhor conhecimento da família Labiatae.
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Biotividade de extratos e frações das folhas da Eugenia uniflora L. e da Hyptidendron canum (Pohl ex Benth.) Harley em microrganismos (Bactérias e fungo) e em Oreochromis nilotius / Bioactivity of extracts and fractions from leaves of Eugenia L. uniflora and Hyptidendron canum (Pohl ex Benth.) Harley in microorganisms (bacteria and fungi) and Oreochromis nilotiusFIUZA, Tatiana de Sousa 22 January 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-01-22 / The purpose of this work is to perform the pharmacognostic studies of the species Hyptidendron canum (Pohl ex Benth.) Harley (Lamiaceae) and Eugenia uniflora L. (Myrtaceae), investigate the population variability of the constituents of the essential oil from H. canum leaves and inflorescences, and assess the bioactivity of the crude ethanol extracts and fractions from leaves of this plants against microorganisms (bacteria and the fungus Candida albicans) and on Oreochromis niloticus Linnaeus. For the variability study of the H. canum essential oil, samples obtained from leaves and inflorescences from Hidrolândia, Silvânia, Bela Vista and Goiânia cities were analyzed by gas chromatography and gas
chromatography with mass spectrometry. The anatomic analysis and the phytochemical screening of the leaves from the two species were performed using conventional techniques. The antimicrobial activity was assessed with Gram-positive and Gram-negative bacteria and with the Candida albicans fungus using the well diffusion test and the agar dilution method to determine the minimal inhibitory concentration (MIC). The biological activities of the crude
ethanol extract and ethyl acetate, hexanic and chloroformic fractions of the leaves from the two species were tested in O. niloticus fish hepatopancreas and gill. The H. canum essential oils analysis indicated high chemovariability in the oils from different locations. The phytochemical screening and the thin layer chromatography (TLC) analysis of the H. canum
leaves evidenced the presence of flavonoids, saponins, terpenes and lignans, while the E. uniflora leaves evidenced the presence of tannins, steroids, triterpenes, anthraquinonic
heterosides, saponinic and flavonoids. As for the antimicrobial activity testing, the crude ethanol extracts from both species presented antimicrobial activity against all the microorganisms
tested and the E. uniflora ethyl acetate fraction presented satisfactory activity against resistant Pseudomonas aeruginosa. The H. canum crude extract and fractions
presented vasoactive activity in the hepatopancreas and gill of the tilapias, causing varying degrees of vasodilation and vascular congestion. An apparent proliferation of blood capillaries was detected in the hepatopancreas of the fish that ingested the hexanic fraction. The E. uniflora crude extract and the ethyl acetate, chloroform and hexanic fractions caused vasodilation, vascular congestion and tissue alterations in the O. niloticus hepatopancreas and gills / O presente trabalho teve por objetivo realizae o estudo farmacognóstico das espécies Hyptidendron canum (Pohl ex Benth.) Harley (Lamiaceae) e Eugenia uniflora L. (Myrtaceae),
investigar a variabilidade populacional dos constituintes do óleo essencial das folhas e inflorescências da H. canum e avaliar a bioatividade dos extratos etanólicos brutos e das
frações das folhas das referidas plantas contra icrorganismos (bactérias e fungo) e em Oreochromis niloticus Linnaeus. Para o estudo da variabilidade do óleo essencial da H. canum, as folhas e inflorescências foram coletadas nos municípos de Hidrolândia, de Silvânia, de Bela Vista e de Goiânia e seus óleos essenciais foram analisados por cromatografia gasosa
e cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa. A análise anatômica e a prospecção fitoquímica das folhas das duas espécies foram realizadas utilizando as técnicas convencionais. A atividade antimicrobiana foi avaliada com bactérias Gram-positivas e Gramnegativas e com o fungo Candida albicans, usando o teste de difusão em poço e o método de diluição em ágar, para determinar a concentração inibitória mínima (CIM). As atividades biológicas do extrato etanólico bruto e das frações acetato de etila, hexânica e clorofórmica das folhas das duas espécies foram avaliadas no hepatopâncreas e brânquias do peixe O. niloticus L. A análise dos óleos essenciais da H. canum indicou elevada quimiovariabilidade nos óleos dos diferentes locais. A triagem fitoquímica e a cromatografia em camada delgada (CCD) das folhas da H. canum evidenciaram a presença de flavonóides, saponinas, terpenos e lignanas e das folhas da E. uniflora, a presença de taninos, esteróides, triterpenos, heterosídeos antraquinônicos, saponínicos e flavonóides. Na avaliação da atividade antimicrobiana, observou-se que os extratos etanólicos brutos das duas espécies demonstraram atividade antimicrobiana contra todos os microrganismos testados, e a fração acetato de etila da E. uniflora apresentou boa atividade contra Pseudomonas aeruginosa resistentes aos antibióticos convencionais. O extrato bruto e as frações da H. canum apresentaram atividade vasoativa no hepatopâncreas e brânquias das tilápias, promovendo, em maior ou menor grau, vasodilatação e congestão vascular. Detectou-se ainda aparente proliferação dos capilares sanguíneos no hepatopâncreas dos peixes tratados com a fração hexânica. Verificou-se que tanto o extrato bruto, quanto as frações acetato de etila, clorofórmica e hexânica da E. uniflora promoveram, no hepatopâncreas e nas brânquias de O.
niloticus, vasodilatação, congestão vascular e alterações teciduais
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Identificação proteômica, expressão heteróloga, citolocalização, estudos de regulação transcricional e traducional da Aconitase Mitocondrial de Paracoccidioides brasiliensis / Identification,characterization and regulation studies of the mitochondrial Aconitase of Paracoccidioides brasiliensisBRITO, Wesley de Almeida 18 November 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009-11-18 / Paracoccidioides brasiliensis is a thermal-dimorphic fungus, the causative agent of
Paracoccidioidomycosis (PCM), an important endemic mycosis in Latin America. A protein
species preferentially expressed in yeast cells with a molecular mass of 80kDa and isoeletric
point (pI) of 7.79 was isolated from the proteome of P. brasiliensis and characterized as an
aconitase (E.C. 4.2.1.3). Aconitase is an enzyme that catalyzes the isomerization of citrate to
isocitrate in both the Krebs cycle (KC) and the glyoxylate cycle (GC). We report the cloning and
characterization of the cDNA encoding the aconitase of P. brasiliensis (PbACO). The cDNA
showed a 2337 bp open reading frame (ORF) and encoded a predicted protein with 779 amino
acids. A polyclonal antibody against the purified recombinant PbACO was obtained in order to
analyze the subcellular localization of the molecule in P. brasiliensis. The protein is present in
the extracellular fluid, cell wall, mitochondria, cytosol and peroxisomes of yeast cells as
demonstrated by western blot and immunocytochemistry analysis. The expression analysis of the
Pbaco gene was performed through quantitative real time RT-PCR and results demonstrated
increasing expression during differentiation from mycelium to yeast cells. Real time RT-PCR
assays was also used to evaluate the Pbaco expression when the fungus grows on media with
acetate and ethanol as sole carbon sources and in different iron levels. The results demonstrated
that Pbaco transcript is over expressed in acetate and ethanol as sole carbon sources and in highiron
conditions. / Paracoccidioides brasiliensis é um fungo termodimórfico, agente causador de uma importante micose
sistêmica na América Latina, a paracoccidioidomicose (PCM). Uma proteína apresentando massa
molecular de 80kDa e ponto isoelétrico (pI) de 7,79, preferencialmente expressa em células
leveduriformes, foi isolada do proteoma de P. brasiliensis e caracterizada como uma aconitase
(EC 4.2.1.3). Aconitase é uma enzima que catalisa a isomerização do citrato em isocitrato tanto
no ciclo de Krebs (CK) quanto no ciclo glioxalato (CG). No presente estudo reportamos a
clonagem e caracterização do cDNA da aconitase de P. brasiliensis (PbACO). O cDNA
apresentou um quadro aberto de leitura (ORF) com 2337 pares de bases, codificando uma predita
proteína com 779 resíduos de aminoácidos. Objetivando a localização da aconitase de P.
brasiliensis foi produzida e purificada uma proteína recombinante a qual foi utilizada para a
produção de um anticorpo policlonal anti-PbACO. A proteína foi localizada no fluído
extracelular, parede celular, mitocôndria, citosol e nos peroxissomos de células leveduriformes,
como demonstrado por ensaios de Western blotting e por imunocitoquímica. A análise da
expressão do gene Pbaco foi realizada através RT-PCR em tempo real e os resultados
demonstraram um aumento da expressão durante a diferenciação celular de micélio para
levedura. A expressão Pbaco também foi avaliada quando o fungo é cultivado em meios de
cultura contendo acetato e etanol como única fonte de carbono bem como em diferentes
concentrações de ferro. Os resultados demonstraram que o transcrito de Pbaco é mais expresso
em acetato e etanol como única fonte de carbono e em altas concentrações de ferro.
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Inibição da isocitrato liase de Paracoccidioides brasiliensis pelo produto natural argentilactona / Inhibition of isocitrate lyase by Paracoccidioides brasiliensis natural product argentilactonePRADO, Renata Silva do 20 November 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010-11-20 / The fungus Paracoccidioides brasiliensis is the causative agent of paracoccidioidomicosys (PCM), the most prevalent human systemic mycosis in Latin America. The toxicity of drugs and the appearance of resistant strains have imposition the search for new therapeutic approaches. Plants with reputed antimicrobial uses represent a rich source for the screening of potential antifungal compounds. In this work, we investigated the inhibitory action of argentilactone, extracted from the essential oil of Hyptis ovalifolia, and its analogues on P. brasiliensis yeast cells, during the differentiation from mycelium to yeast, on native and recombinant PbICL. Sensitivity tests on plates, which assessed the activity of argentilactone on yeast cells of P. brasiliensis showed both argentilactone as reduced argentilactone interfered in fungus growth, affecting the cells in a dose-dependent way. The experiments evaluating the minimum inhibitory concentration (MIC), which evaluated the influence of the compounds during the transition from mycelium to yeast in P. brasiliensis showed that argentilactone and reduced argentilactone interferes in this process, also in a dose-dependent way. A specific activity of isocitrate lyase of the fungus, both recombinant as native, as measured by tests of enzyme activity was also affected by the compounds. The type of inhibition promoted by argentilactone and reduced argentilactone was defined as inhibition of mixed type through tests of enzyme kinetics. Different carbon sources (acetate and glucose) have directly influence on the processs of inhibition. The analogues epoxy argentilactone and diol argentilactone not inhibit the growth and differentiation of P. brasiliensis. In addition, it not inhibited the enzyme isocitrate lyase native or recombinant. / O fungo Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose (PCM), micose humana sistêmica de maior prevalência na América Latina. Devido à toxicidade dos antifúngicos existentes, e ao aparecimento de isolados resistentes, estudos em busca de novas terapias tem adquirido relevância. Plantas com propriedades terapêuticas representam uma fonte em potencial para descoberta de novos antifúngicos. Neste trabalho, foi investigada a influência de argentilactona, extraída do óleo essencial de Hyptis ovalifolia, e seus análogos obtidos sinteticamente sobre células leveduriformes de P. brasiliensis, durante o processo de diferenciação de micélio para levedura e sobre a enzima isocitrato liase recombinate (PbICLr) e nativa. Os testes de sensibilidade em placas, que avaliaram a atividade de argentilactona sobre células leveduriformes de P. brasiliensis, mostraram que tanto argentilactona como argentilactona reduzida interferiram no crescimento do fungo, afetando as células de modo dose-dependente. Os experimentos de avaliação de concentração inibitória mínima (CIM), que avaliaram a influência dos compostos durante a transição de micélio para levedura em P. brasiliensis mostraram que argentilactona e argentilactona reduzida interferem nesse processo, também de modo dose-dependente. A atividade específica da isocitrato liase do fungo, tanto recombinante como nativa, mensurada por testes de atividade enzimática, também foi afetada pelos compostos. O tipo de inibição promovida pela argentilactona e argentilactona reduzida foi definido como inibição do tipo mista, através de testes de cinética enzimática. Diferentes fontes de carbono (acetato e glicose) influenciaram diretamente o processo de inibição. Os análogos epoxi argentilactona e diol argentilactona não inibiram o crescimento de células leveduriformes e o processo de diferenciação de P. brasiliensis. Em adição, também não inibiram a atividade da enzima isocitrato liase recombinante e nativa.
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Atividade Antiproliferativa de Benzaldeído Canfeno Tiossemicarbazonas em Células de Melanoma Humano (SK-MEL-37) / Antiproliferative Activity Benzaldehyde Camphene Thiosemicarbazone in Human Melanoma Ceels(SK-MEL-37)SOARES, Paula Roberta Otaviano 21 May 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008-05-21 / The thiosemicarbazones are chemical compounds of considerable scientific interest
due to their important biological properties, such as antitumoral, antibacterial, antiviral, and
antiprotozoal, among others. The studied compounds have the natural monoterpene
camphene in the R4 position and the benzaldehyde in R2, with the substitution in the ring for
different (R) groups, making this work unique.
In this way, thirteen different compounds were derived from the benzaldehyde
camphene thiosemicarbazone: camphene isotyiocyanate, camphene thiosemicarbazide,
benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, p-metyl benzaldehyde camphene
thiosemicarbazone, p-methoxy benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, o-chloro
benzaldehyde camphene thiosecarbazone, m-chloro benzaldehyde camphene
thiosemicarbazone, p-chloro-benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, o-nitrobenzaldehyde
camphene thiosemicarbazone, m-nitro- benzaldehyde camphene
thiosemicarbazone, p-nitrobenzaldehyde camphene thiosemicarbazone, p-dimetylamino
benzaldehyde camphene thiosemicarbazone and p-hydroxy benzaldehyde camphene
thiosemicarbazone. The experiments were conducted in vitro using human melanoma cells
(SK-Mel-37), because the melanoma is the most serious type of skin cancer due to its high
possibility to metastasize and its resistance to the induction of apoptosis by antineoplastic
drugs. We first performed a visual screening to observe if there was detachment of more
than 85% of the total number of cells, after treatment with the sole concentration of 100 μM.
Thus, six compounds were selected: benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, m-chloro
benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, m-nitro-benzaldehyde camphene
thiosemicarbazone, p-dimetylamino benzaldehyde camphene thiosemicarbazone, p-hydroxy
benzaldehyde camphene thiosemicarbazone e p-methoxy benzaldehyde camphene
thiosemicarbazone. The morphological analysis of the treated cells, by inverted phase
contrast microscope and Giemsa stain, showed intense cellular vacuolization and nuclear
fragmentation. In the cellular viability test, through the MTT colorimetric assay, the
compounds showed IC50 (inhibitory concentration for 50% of the cells) values between 12, 84
μM and 32, 18 μM, which are bellow of those described in the literature for compounds with
antineoplastic action. The analysis of nuclear fragmentation by fluorescence microscopy was
performed by the incorporation of propidium iodide, and it was observed, at different time
points, a progressive increase of cellular damage and a pronounced nuclear fragmentation
after the cellular detachment. The analysis of the DNA fragmentation by agarose gel
electrophoresis revealed that the unequivocal cytotoxic action of the compounds occurred by
apoptosis. Our results showed that six compounds derived from the benzaldehyde
camphene thiosemicarbazones had cytotoxic activity in human melanoma cells (SK-Mel-37)
in vitro, and constitute potential candidates for future analysis aiming its therapeutic
application. / As tiossemicarbazonas são compostos de considerável interesse científico devido às
suas importantes propriedades biológicas, tais como antitumoral, antimicrobiana, antiviral,
antiprotozoária, dentre outras. Os compostos estudados apresentam o monoterpeno natural
canfeno na posição R4 e o benzaldeído em R2, com substituição no anel por diferentes
grupos (R), o que confere ao presente trabalho um caráter inédito.
Dessa forma, foram apresentados para este estudo onze diferentes compostos
derivados de benzaldeído canfeno tiossemicarbazona: benzaldeído canfeno
tiossecarbazona, p-metil benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, p-metóxi benzaldeído
canfeno tiossemicarbazona, o-cloro benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, m-cloro
benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, p-cloro benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, onitro
benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, m-nitro benzaldeído canfeno
tiossemicarbazona, p-nitro benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, p-dimetilamino
benzaldeído canfeno tiossemicarbazona e p-hidróxi benzaldeído canfeno
tiossemicarbazona, além de isotiocianato canfeno e canfeno tiossemicarbazida. Os
experimentos foram realizados in vitro utilizando-se células de melanoma humano (SKMel-
37), visto que o melanoma é o tipo mais grave de câncer de pele devido à sua alta
possibilidade de metástase e resistência à indução de apoptose por drogas antineoplásicas.
Inicialmente, realizamos um screening visual observando-se o desprendimento de mais de
85% do total das células, após tratamento com a concentração única de 100 μM. Dessa
análise, foram selecionados seis compostos: benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, mcloro-
benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, m-nitro-benzaldeído canfeno
tiossemicarbazona, p-dimetilamino-benzaldeído canfeno tiossemicarbazona, p-hidróxibenzaldeído
canfeno tiossemicarbazona e p-metóxi benzaldeído canfeno
tiossemicarbazona. A análise morfológica das células tratadas e coradas com Giemsa e
observadas através de microscópio óptico invertido em contraste de fase demonstrou
intensa vacuolização celular e fragmentação nuclear. Na análise da viabilidade celular,
através do ensaio colorimétrico do MTT, os compostos apresentaram valores de IC50
(Concentração Inibitória para 50% das células) entre 12,84 μM e 32,18 μM, valores que se
encontram abaixo do descrito na literatura para compostos com ação antineoplásica. A
análise da fragmentação nuclear através de microscopia de fluorescência foi realizada pela
incorporação de iodeto de propídio. Observamos, em diferentes tempos, o aumento
progressivo dos danos celulares e a fragmentação nuclear pronunciada após o
desprendimento das células. A análise de fragmentação de DNA por eletroforese em gel de
agarose revelou de maneira inequívoca que a ação citotóxica observada ocorre por
apoptose. Os resultados obtidos demonstraram que seis compostos derivados do
benzaldeído canfeno tiossemicarbazonas apresentaram atividade citotóxica em células de
melanoma humano (SK-Mel-37) in vitro, e são candidatos promissores para as análises
futuras visando à sua aplicação terapêutica.
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207 |
Caracterização de um Antígeno Rico em Prolina(PRA/Ag2) do fungo patogênico humano Paracoccidioides brasiliensis / Characterization of a Proline-Rich Antigen (PRA/Ag2) of the human pathogenic fungus Paracoccidioides brasiliensisCASTRO, Kelly Pacheco de 31 January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008-01-31 / The dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis is the causative agent of the
most frequent systemic mycosis in Latin America. In humans, infection starts by
inhalation of fungal propagules, which reach the pulmonary epithelium and differentiate
into the yeast parasitic phase. Here we describe the characterization of a proline-rich
protein (PRA/Ag2) homologue of P. brasiliensis, a predictable cell wall protein, first
identified in Coccidioides immitis. The protein, the cDNA and genomic sequences were
analyzed. Southern blot analysis suggested that there is one copy of the gene in P.
brasiliensis. The cloned cDNA was expressed in Escherichia coli and the purified
rPbPRA/Ag2 was used to obtain polyclonal antibody. The purified recombinant protein
was recognized by sera of patients with proven paracoccidioidomycosis and not by sera
of healthy individuals. Immunoelectron microscopy and biochemical studies
demonstrated the presence of PbPRA/Ag2 in the fungal cell wall, linked through a GPIanchor.
The expression of the Pbpra/ag2 gene was analyzed by real time PCR and
results demonstrated developmental regulation in phases of P. brasiliensis, with a
higher expression in the mycelium saprobic phase. The protein expression analyses
corroborate the transcript levels. / O fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis é o agente causador da micose sistêmica mais prevalente na América Latina. Em humanos, a infecção se dá pela inalação de propágulos do fungo, que ao alcançarem o epitélio pulmonar transformam se na fase leveduriforme, parasitária, do fungo P. brasiliensis. Neste trabalho,descrevemos a caracterização de um homólogo de PRA/Ag2 (Antígeno rico em prolina), uma proteína predita de parede celular, primeiramente identificada em Coccidioides immitis. A proteína, o cDNA e a seqüência genômica foram analisados.
Análises através de Southern blot sugerem que há somente uma cópia do gene em
P.brasiliensis. O cDNA clonado foi expresso em Escherichia coli e a rPbPRA/Ag2
purificada foi utilizada para obtenção do anticorpo policlonal. A proteína recombinante
purificada foi reconhecida pelo soro de pacientes com paracoccidioidomicose
comprovada e não foi reconhecida pelo soro de pacientes saudáveis. Microscopia
eletrônica e estudos bioquímicos demonstraram a presença do PbPRA/Ag2 na parede
celular de P. brasiliensis, ligada através de uma âncora de GPI. A expressão do gene
que codifica Pbpra/ag2 foi analisada através de PCR em Tempo Real e os resultados
demonstraram regulação da expressão nas fases de P. brasiliensis, com maior nível de
expressão na fase miceliana. Análises da expressão protéica corroboram os resultados
da RT-PCR em Tempo Real.
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Avaliação do Potencial Citotóxico, Genotóxico e Antitumoral do Ditionato de cis-Tetraamino(oxalato)rutênio(III) em Diferentes Linhagens Celulares / Assessment of the Potential genotoxic and the Antitumor Ditionato Tetraamino cis-(oxalate) ruthenium (III) in Different Cell linesPEREIRA, Flávia de Castro 22 January 2010 (has links)
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Dissertacao Flavia de Castro Pereira UFG 2010 - part 1.pdf: 495954 bytes, checksum: 284a68ffbde993ede09791444dec1865 (MD5)
Previous issue date: 2010-01-22 / Despite the resounding success of cisplatin and closely related platinum antitumor agents, the movement of other transition-metal antitumor agents toward the clinic has been exceptionally slow. Non-Platinum chemotherapeutic metallopharmaceuticals hold much promise for the future, and needs to be actively explored in a large variety of tumor types in combination therapies. The preparations of metallocomplexes with potential antitumor activity has been one of the main targets of transition metal chemistry since Rosenberg s discovery of cisplatin cisdiamminedichloridoplatinum (II), cis-[Pt(NH3)2Cl2]} cytotoxic activity in the 1960s. In 1978, cisplatin was approved as the first platinumbased drug for the oncology
treatment, although several negative side-effects (nephrotoxicity, neurotoxicity, nausea, etc.) had been induced on treated patients. Nevertheless, cisplatin was
followed by carboplatin {cis-diammine-1,1´ - yclobutanedicarboxylateplatinum(II), [Pt(NH3)2(cbdc)], approved in 1985} and oxaliplatin 1R,2Rdiamminocyclohexaneoxalatoplatinum(II), [Pt(dach)(ox)], approved in 1996}, which met requirements of improving antitumor activity and reducing disadvantages of
cisplatin, carboplatin and oxaliplatin represent the second, and third platinum-based drug generations, respectively. Nowadays, not only platinum-bearing complexes are
extensively studied with the aim to broaden a spectrum of transition metal-based complexes which could be used in the treatment of cancer. Ruthenium complexes
have shown potential utility in chemotherapy and photodynamic therapy. Ruthenium complexes generally have lower toxicities compared to cisplatin attributed to their
specific accumulation in cancer tissues. In vitro and in vivo studies show high anticancer activity of Ruthenium complexes and some of them are currently undergoing clinical trials. In the present work we studied the antitumor activity of the
Ruthenium(III) compound cis-Tetraammine(oxalato)Ruthenium(III) Dithionate {cis- [Ru(C2O4)(NH3)4]2(S2O6)} against different tumor and normal cells lineages, analising cell viabilities, cell cycle distribution, apoptosis induction mecanistics and genome DNA damage. Correlation tests were performed to determine the effects of the time of exposure and concentration of Ruthenium complex on mitotic index (MI) and mitotic aberration index on Allium cepa root cells. A comparison of MI results of cis- [Ru(C2O4)(NH3)4]2(S2O6) to those of lead nitrate reveals that the Ruthenium complex
demonstrates an average mitotic inhibition eightfold higher than lead, with the frequency of cellular abnormalities almost fourfold lower and mitotic aberration threefold lower. A. cepa root cells exposed to a range of Ruthenium complex
concentrations did not display significant clastogenic effects. The cis- Tetraammine(oxalato)Ruthenium(III) Dithionate therefore exhibits a remarkable capacity to inhibit mitosis, perhaps by inhibiting DNA synthesis or blocking the cell
cycle in the G2 phase. Results showed that Ruthenium(III) causes a significant reduction of proliferation of A549 cells with viabilities ranging from 55.5% to 24.6% when treated with 40 μM for 24 and 48h; and 32% to 18.2% when treated with 150 μM for 24 and 48h. The Ruthenium(III) compound induced a moderate (31.9% and 39.6% for concentrations 10 and 40 μM, respectively) to high degree (74% for concentration 32 μM) of cytotoxic activity against A549 cells (IC50= 33.72 μM). On the other hand, the normal lung fibroblast MRC-5 did not show significant reduction
proliferation in the presence of Ruthenium(III) compound. Even when treated with higher concentrations of cis-Tetraammine(oxalato)Ruthenium(III) Dithionate for 48
hours, MRC-5 cells showed viabilities ranging from 85% to 78,4% for 40 μM and 150 μM, respectively. The antiproliferative and cytotoxic activity revealed that K562 cells
cultured with concentrations 40 and 150 μg mL-1 of Ruthenium(III) compound showed significant reduction of proliferation after 72h of exposition, with viabilities ranging from 88.2% to 55.6% when treated with 40 μM for 24 and 72h; and 76.2% to 26.7% when treated with 150 μM for 24 and 72h. The Ruthenium(III) compound induced low [22.4% (24h) to 28.2% (48h) and 29.8% (24h) to 35.7% (48h) for concentrations 10
and 40 μM, respectively] to moderate [44% (24h) and 53% (48h) for concentration 150 μM] of cytotoxic activity against K562. After incubation for 48 h, the IC50 value was 18.28 μM. Compared to the cell cycle profiles of untreated cells, flow cytometric analysis indicated a sub-G1 arresting effect of Ruthenium compound on K562 cells, inducing a 1.7-fold, 2.2-fold and 2.4-fold increase in the number of sub-G1 cells for
24, 48 and 72 h, respectively, when compared to control. The compound also caused a significant increase in tailed cells in any of the concentrations tested compared with negative control that can be associated cytotoxicity with direct effect on K562 cells DNA. / Apesar do sucesso da cisplatina e dos medicamentos à base de platina, o mercado de fármacos ainda é acessível para novas drogas á base de metal que oferecem uma melhor viabilidade, tais como a administração oral, o que pode ajudar
a diminuir os efeitos colaterais graves e custos clínicos. Além disso, novos estudos concentram-se na investigação de novas drogas com maior eficácia, ou seja, drogas que interajam de forma diferente com o DNA, o que pode levar à superação da resistência inata ou adquirida de certos tipos de tumores. Dentre os vários complexos a base de metais desenvolvidos, os complexos de rutênio (III) representam uma nova família de promissores agentes anticâncer. No presente
estudo foi investigado in vitro o efeito do composto Ditionato de cis- Tetraamino(oxalato)rutênio(III) sobre a viabilidade celular, distribuição das fases do ciclo celular, mecanismos de indução de apoptose e danos a molécula de DNA. Os
resultados provenientes da análise do teste Allium cepa mostraram um efeito tempo dose-dependente. A avaliação mostrou que a concentração de rutênio teve um impacto maior do que o tempo de exposição. O efeito também se mostrou cumulativo, com uma quase completa inibição da mitose em uma concentração de rutênio de 0,1 mg mL-1 ou superior por períodos superiores a 24 h. Por outro lado, os
resultados não revelaram efeitos clastogênicos significativos nas células meristemáticas expostas ao complexo de rutênio (III). A comparação entre os valores dos Índice Mitótico de células meristemáticas de cebolas tratadas com o complexo de rutênio em relação às células tratadas com nitrato de chumbo também mostrou que o complexo de rutênio induziu uma inibição mitótica média oito vezes maior do que o chumbo. Notadamente, as freqüências de anomalias e aberrações celulares mitóticas foram quase quatro vezes e três vezes menores, respectivamente. Os resultados mostram que o composto estudado causa significativa redução da proliferação das células A549 com viabilidades entre 55,5%
para 24,6% quando tratados com 40 μM por 24 e 48h; e 32% para 18,2% quando tratados com 150 μM por 24 e 48h. O composto de rutênio(III) induz moderada (31,9% e 39,6% para concentrações 10 e 40 μM, respectivamente) para alta
degradação (74% para a concentração 150 μM) para avaliação da atividade citotóxica das células A549 (IC50= 33,72 μM). Quanto à linhagem de fibroblasto de pulmão humano normal MRC-5, não mostrou redução significativa na proliferação celular na presença do composto. Quando tratadas com altas concentrações do Ditionato cis-Tetraamino(oxalato)rutênio(III) por 48 horas, celulas MRC-5 mostraram
viabilidades altas de 85% e 78,4% para 40 μM e 150 μM, respectivamente. A atividade citotóxica e antiproliferativa revelou que a cultura de células K562 nas concentrações de 40 e 150 μg mL-1 do composto de Rutênio(III) mostrou redução significativa na proliferação 72h de exposição, com viabilidades de 88,2% para 55,6% quando tratadas com 40 μM por 24 e 72h; e 76,2% para 26,7% quando tratadas com 150 μM por 24 e 72h. O composto de Rutênio(III) induziu baixa [22,4% (24h) para 28,2% (48h) e 29,8% (24h) para 35,7% (48h) para concentrações de 10 e 40 μM, respectivamente] para moderada [44% (24h) e 53% (48h) para concentrações de 150 μM] atividade citotóxica em células K562. Após a incubação de 48 h, o valor da IC50 foi de 18,28 μM. Quando comparado o ciclo celular de células não tratadas, a análise indica que as células foram arrastadas para sub-G1
apresentando um aumento de 1,7 para 2,2 e 2.4% no número de células em sub-G1 por 24, 48 e 72 h, respectivamente, quando comparado com o grupo controle. O composto também causou um significativo aumento em danos celulares nas concentrações testadas quando comparado com o controle negativo, o que pode estar associado com efeitos citotóxicos diretamente no DNA celular.
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Avaliação de critérios de compatibilidade entre pares de primers para otimização de sistemas multiplex de genotipagem / Evaluation of compatibility criteria among primers pairs for optimizing multiplex genotyping systemsBARBOSA, Ana Clara de Oliveira Ferraz 12 January 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010-01-12 / The progress of Molecular Biology and Genetics provided the appearance of
several molecular markers that detect the genetic polymorphism directly at DNA.
Among these markers are the microsatellites (SSR), which are distinguished by their
high degree of polymorphism. The use of these markers for individual genotyping has
evolved into multiplex systems, which allow many SSR fragments to be detected and
analyzed simultaneously. Currently there are several articles in literature discussing
the criteria to be used in the primer design for use in PCR, as well as various
softwares are available for this end. However, there are few studies and tools for the
analysis of compatibility between pairs of primers for use in multiplex systems,
where multiple fragments are simultaneously amplified using PCR. This paper
evaluated different criteria for compatibility between pairs of primers. A set of 74
combinations of pairs of primers, involving the amplification of 94 SSR loci were
evaluated in duplex systems. The same combinations were evaluated according to
different criteria, including the degree of complementarity between primers, the
magnitude of differences of denaturation temperatures (Tm) and the tendency to
annealing between pairs of primers based on the Gibbs free energy resulting from the
association between them. The comparison between the different criteria allowed the
identification of a set of criteria with positive predictive value equal to 94%. These
criteria were implemented for use in a software called Multiplexer, which from the analysis in sequence of pairs of primers, suggests compatible combinations for use in
multiplex genotyping systems. Using this tool can significantly reduce the costs
related to laboratory activities for genotyping using PCR. / Os avanços da Biologia Molecular e da Genética proporcionaram o
surgimento de diversos marcadores moleculares que detectam o polimorfismo
genético diretamente no DNA. Entre estes marcadores se encontram os
microssatélites (SSR), que se destacam pelo seu elevado grau de polimorfismo. O uso
desses marcadores para fins de genotipagem individual tem evoluído para sistemas
multiplex, os quais permitem que vários fragmentos SSR sejam detectados e
analisados simultaneamente. Atualmente são abundantes na literatura artigos que
discutem os critérios a serem utilizados no desenho de pares de primers para
aplicação em PCR, bem como estão disponíveis diversos softwares para este fim. No
entanto, ainda são escassos os estudos e ferramentas destinados à análise de
compatibilidade entre pares de primers para aplicação em sistemas multiplex, onde
vários fragmentos são amplificados simultaneamente por PCR. Neste trabalho são
avaliados diferentes critérios de compatibilidade entre pares de primers. Um conjunto
de 74 combinações de pares de primers, envolvendo a amplificação de 94 locos SSR
foram avaliados em sistemas duplex. As mesmas combinações foram avaliadas
segundo diferentes critérios, incluindo o grau de complementariedade entre primers,
magnitude das diferenças de temperaturas de desnaturação (Tm) e a tendência ao
anelamento entre pares de primers com base na energia livre de Gibbs resultante da associação entre eles. A comparação entre os diferentes critérios permitiu a
identificação de um conjunto de critérios com valor preditivo positivo igual a 94%.
Estes critérios foram implementados para utilização em um software denominado
Multiplexer, que a partir da análise de sequências de pares de primers, sugere
combinações compatíveis para a utilização em sistemas de genotipagem multiplex. O
uso dessa ferramenta pode reduzir consideravelmente os custos laboratoriais relativos
às atividades de genotipagem utilizando PCR.
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Estudo do potencial genotóxico, citotóxico e antitumoral do composto Cloreto de cis-tetraaminodiclororutênio(III) sobre diferentes células tumorais / To study the potential genotoxic, cytotoxic and antitumor compound Chloride, cis-tetraaminodiclororutênio (III) on various tumor cellsLIMA, Aliny Pereira de 29 January 2010 (has links)
Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2010-01-29 / Current inorganic drugs such cisplatin and related compounds widely used in the
treatment cancer, however its application is limited by its severe toxicity and drug
resistence. These limitations have prompted a search for news metal-based
antitumor agents. Ruthenium (III) complexes represent a new family of promising
metal-based anticancer drugs. In the present study, was investigated in vitro the
effects of the compound on cell viability, cintetics cell cycle phases, mechanisms of
apoptosis and DNA damage on tumors cells. Results of the viability using MTT
reduction test and the trypan blue exclusion assay on K-562 cells revealed that this
compound significantly reduced the viability of the K-562 tumors cells (IC50
approximately 10.74 and 73.45 μM), respectively, moreover viability assays on
A549 lung tumor cells showed that cis-(dichloro)tetrammineruthenium(III) induced
effect moderate this cell lines (IC50 > 383 μM). Additionally was observed that this
compound exhibits little cytotoxicity towards MRC-5 normal human fibroblast cells
(IC50 > 383 μM) when compared to K562 tumor cell line (IC50 10.74 μM).
Clonogenic Assay was performed on A549 cells, and observed that lower
concentrations (0.38 and 3.8 μM) cis-(dichloro)tetrammineruthenium(III) diminished
colony forming ability and highest concentrations (95 and 383 μM) no colony was
observed. In cell cycle analysis on K-562 and S180 tumor cells cistetrammineruthenium(
III) induced change in the distribution the cell cycle phase
since that % of cells entering G1, S and G2 was decreased, correlating with
increase in the proportion of cells in the sub-G1-peak (indicating apoptosis). In the
analysis of damage to the DNA molecule of S180 cells using the comet assay, it
was observed that the ruthenium compound induced damage to the DNA molecule
to both treatments (24 and 48 h) as evidenced by an increase in damage index. In
addition, cis-[RuCl2(NH3)4]Cl treatment induced apoptosis in cells K-562 as
evidenced for increased DNA content in the sub-G1 peak (75.35%) and a
significant increase in caspase-3, 8 and 9 activity. In tumor cells S180 the
apoptosis was demonstrated for by a increase numbers of Annexin V-positive cells
and fragmentation DNA. Taken together, these findings strongly demonstrate that
cis-[RuCl2(NH3)4]Cl exerts antitumor activity and this activity correlates with DNA
damage, process apoptotic and change cell cycle. / Atualmente drogas inorgânicas como cisplatina e compostos relacionados são
amplamente utilizados no tratamento do câncer, no entanto a aplicação destas
drogas é limitada devido a severa toxicidade e resistência. Estas limitações têm
promovido o desenvolvimento de novos agentes antitumorais baseados em metais
que sejam mais eficazes. Dentre os vários complexos a base de metais
desenvolvidos, complexos de rutênio (III) representam uma nova família de
promissores agentes anticâncer. No presente estudo foi investigado in vitro o
efeito do composto cis-tetraaminodiclororutênio(III) sobre a viabilidade celular,
cinética das fases do ciclo celular, mecanismos de indução de apoptose e danos a
molécula de DNA. Os resultados de viabilidade celular utilizando os ensaios de
redução do MTT e azul de tripano sobre células leucêmicas K-562 demonstrou
que o composto reduziu significativamente a viabilidade celular (IC50
aproximadamente 10.74 e 73.45 μM), respectivamente, por outro lado, a
viabilidade celular de células tumorais de pulmão A549 foi pouco afetada após
tratamento com cis-tetraaminodiclororutênio(III) (IC50 > 383 μM). Adicionalmente,
foi observado que cis-tetraaminodiclororutênio(III) exibiu uma moderada
citotoxicidade sobre células normais de fibroblasto humano MRC-5 (IC50 > 383
μM) quando comparado a linhagem tumoral K-562 (10.74 e 73.45 μM) O ensaio
clonogênico foi realizado em células tumorais A549, e por meio dos resultados
obtidos verificou-se que em baixas concentrações do composto (0,38 e 3,8 μM)
houve a diminuição na capacidade das células de formarem colônias e em
concentrações elevadas 95 e 383 μM não houve a formação de nenhuma colônia.
Na análise do ciclo celular de células tumorais K-562 e S-180, cistetraaminodiclororutênio(
III) alterou a distribuição das fases do ciclo celular de
ambas as células, visto que a porcentagem de células nas fases G1, S e G2
diminuiu, o qual correlacionou com uma aumento do número de células em sub-
G1 (indicativo de apoptose). Na análise de danos a molécula de DNA de células
S180 utilizando o ensaio cometa, pôde-se observar que o composto induziu danos
à molécula de DNA para ambos os tratamentos (24 e 48 h) como evidenciado por
um aumento do índice de dano. Além disto, o tratamento com cistetraaminodiclororutênio(
III) levou a indução de apoptose nas células S180 como
evidenciado pelo aumento no número de células Anexina positiva. Em células
K562 a indução de apoptose após tratamento com o composto foi demonstrado
pelo aumento no conteúdo de DNA em picos sub-G1 (75,35%) e um aumento na
atividade de caspase 3, 8 e 9. Estes dados em conjunto demonstraram que o
composto cis-tetraaminodiclororutênio(III) apresentou efeito citotóxico frente as
linhagens testadas e esta atividade está correlacionada com danos à molécula de
DNA, alterações nas fases do ciclo celular e indução de apoptose.
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