Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-03-31T17:24:43Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Andrea Santana de Oliveira - 2016.pdf: 1927842 bytes, checksum: 5b65d88f78b5077ed835f4eb96131b65 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-04-03T12:01:56Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Andrea Santana de Oliveira - 2016.pdf: 1927842 bytes, checksum: 5b65d88f78b5077ed835f4eb96131b65 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-03T12:01:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Andrea Santana de Oliveira - 2016.pdf: 1927842 bytes, checksum: 5b65d88f78b5077ed835f4eb96131b65 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-09-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Staphylococcus saprophyticus is a Gram-positive bacterium responsible for genitourinary infections, mainly affecting young sexually active women. Along with Escherichia coli is responsible for 90% of infections in fertile women, however, can cause infections in men and women of all ages. The repertoire of proteins secreted by pathogenic microorganisms is used to ensure success in the establishment of infection and persistence in the host. In this sense, this study aimed to comparative characterization of extracellular proteome of 3 clinical strain of S. saprophyticus, in order to detect possible differences in the secretion of proteins related to virulence and adaptation of the microorganism. The strains used in the study are called ATCC 15305, 7108 and 9325. Ultra-Performance Liquid Chromatography coupled to Mass Spectrometry in tandem (UPLC-MSE) have identified a total of 159 proteins. Among them, 44 were found in exoproteome of 3 strain, while 20 only in strains ATCC 15305 and 7108, 11 in ATCC 15305 and 9325, and 12 in 7108 and 9325. Fifteen peptides were expressed exclusively by S. saprophyticus 9325, 21 by ATCC 15305 strain and 36 by 7108. The three strain secreted molecules with biological function related to the glycolytic pathway, such as the triosephosphate isomerase (TPI), enolase, glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and fructose-bisphosphate aldolase, molecules clearly involved in extracellular processes from other pathogenic organisms, proteins known as "moonlighting". Proteins involved in defense against stress, such as catalase, alkyl hydroperoxide reductase subunit C (AhpC), superoxide dismutase (SOD), were also detected in the analysis, among others related to metabolic processes such as lactic fermentation, cell wall synthesis, protein processing, and iron metabolism. Staphylococcal secretory antigen A (SsaA), a immunogenic molecule previously detected in ATCC 15305 strain, was not detected in strain 7108, as confirmed by Western-blotting assay. PCR reactions with specific primers and genomic DNA of the 3 strains and subsequent sequencing ssaA gene, showed that the strain has the gene under conditions identical to those found in S. saprophyticus ATCC 15305 and 9325, but is not able to secrete the antigen into the extracellular milieu, under environmental conditions in study. In exoproteome S. saprophyticus 7108 was found to take a greater amount of unique proteins, including four of the class of peptidases, enzymes often identified as potential virulence factors of bacterial. Thus, the differences found in repertoire of extracellular proteins of three clinical strain of S. saprophyticus, demonstrate a metabolic flexibility used by this uropathogen to promote pathogenesis in human genitourinary tract. / Staphylococcus saprophyticus é uma bactéria Gram-positiva responsável por infecções do trato geniturinário, acometendo principalmente mulheres jovens sexualmente ativas. Junto com Escherichia coli, é responsável por 90% das infecções em mulheres férteis, entretanto, pode causar infecções em homens e mulheres de todas as idades. O repertório de proteínas secretadas por microrganismos patogênicos é utilizado para garantir sucesso no estabelecimento da infecção e na persistência dentro do hospedeiro. Nesse sentido, este trabalho teve como objetivo principal a caracterização comparativa do proteoma extracelular de 3 cepas clínicas de S. saprophyticus, com a finalidade de detectar possíveis diferenças na secreção de proteínas relacionadas à virulência e adaptação do microrganismo. As cepas utilizadas no estudo são denominadas de ATCC 15305, 7108 e 9325. Por meio da Cromatografia Líquida de Ultra Desempenho acoplada à Espectrometria de Massas in tandem (UPLC-MSE), foram identificadas um total de 159 proteínas. Dentre elas, 44 foram encontradas no exoproteoma dos 3 cepas, enquanto que 20 apenas nas cepas ATCC 15305 e 7108, 11 em ATCC 15305 e 9325, e 12 nas cepas 7108 e 9325. Quinze peptídeos foram expressos exclusivamente por S. saprophyticus 9325, 21 pelo ATCC 15305 e 36 pela cepa 7108. Os três cepas secretaram moléculas com função biológica relacionada à via glicolítica, como a triose-fosfato isomerase (TPI), enolase, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) e frutose-bifosfato aldolase, moléculas claramente envolvidas em processos extracelulares de outros organismos patogênicos, conhecidas como proteínas “moonlighting”. Proteínas envolvidas na defesa contra o estresse, como a catalase, a alquil hidroperóxido redutase subunidade C (AhpC), a superóxido dismutase (SOD), também foram detectadas na análise, dentre outras relacionadas à processos metabólicos como fermentação lática, síntese de parede celular, processamento de proteínas e metabolismo do ferro. O antígeno estafilocócico secretado A (SsaA), uma molécula imunogênica detectada previamente na cepa ATCC 15305, não foi detectada na cepa 7108, dado confirmado por ensaio de Western-blotting. Reações de PCR com primers específicos e DNA genômico das 3 cepas e posterior sequenciamento do gene ssaA, mostrou que a cepa possui o gene em condições idênticas ao encontrado em S. saprophyticus ATCC 15305 e 9325, porém não é capaz de secretar o antígeno para o meio extracelular, nas condições ambientais em estudo. No exoproteoma de S. saprophyticus 7108 foi encontrada uma maior quantidade de proteínas exclusivas, incluindo quatro da classe das peptidases, enzimas apontadas muitas vezes como potenciais fatores de virulência bacteriana. Desta forma, as diferenças encontradas no repertório de proteínas extracelulares de 3 cepas clínicas de S. saprophyticus, demonstram uma flexibilidade metabólica utilizada por este uropatógeno em promover a patogênese no trato geniturinário humano.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_simone_simionatto.pdf: 333806 bytes, checksum: 6d2a7ca25216004656318115c514c721 (MD5) Previous issue date: 2008-10-10 / Mycoplasma hyopneumoniae is the etiological agent of porcine enzootic pneumonia (EP), a respiratory disease responsible for significant economic losses. Commercial vaccines are widely used in the control of this disease, however, they provide only partial protection. Besides, their preparation is expensive because of fastidiously growth of M. hyopneumoniae in vitro. Therefore, the development of alternatives for EP prophylaxis is important for improving health conditions of pigs. Recombinant DNA technology can be used to overcome problems with conventional vaccines. Nevertheless, because of the use of TGA and not TGG to code for tryptophan, translation of mycoplasmal genes terminates prematurely when cloned in other bacteria, such as Escherichia coli. Because of this, the number of antigenic proteins characterized to date in vaccine formulations or immunodiagnostic tests is still restricted. In this work, 63 genetic fragments were selected, which correspond to 48 sequences coding (CDS) of M. hyopneumoniae. First, an overlap extension-PCR method for site-directed mutagenesis of M. hyopneumoniae genes was standardized, aiming at substituting TGA codon by TGG. With this improved method, site-directed mutagenesis was successfully achieved in 14 M. hyopneumoniae genes. Other selected genes were amplified by PCR and cloned into Champion pET200D/TOPO®. A total of 59 genetic fragments were efficiently cloned. From these, 49 had their proteins expressed in E. coli and 35 were purified by affinity chromatography using Ni- Sepharose columns (HisTrap ). Immunogenic and antigenic properties of these proteins were analyzed. For this, the proteins were tested against sera from hyperimmune and from convalescent pigs through ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) and Western blot. Nineteen recombinant proteins were specifically recognized by convalescent pig sera indicates they are expressed during infection. Immune humoral response against recombinant proteins was evaluated in BALB/c mice by ELISA. The results showed that antigens induce variable levels of antibodies, which allows inferring the immunogenicity of each antigen. Sera from inoculated mice with twenty recombinant proteins were able to recognize the native protein by ELISA. This study allowed identifying and characterizing new immunogenic proteins according to their potential for use in diagnostic tests and/or vaccine. These data represent an important contribution for the development of more efficient serological tests and a subunit vaccine for controlling M. hyopneumoniae infections in pigs. / Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da pneumonia enzoótica suína (PES), uma doença respiratória responsável por significativas perdas econômicas. Vacinas comerciais são mundialmente utilizadas no controle desta doença, porém proporcionam apenas proteção parcial. Além disso, são caras devido ao crescimento fastidioso do M. hyopneumoniae in vitro. Desta forma, o desenvolvimento de alternativas para a profilaxia da PES é fundamental para a melhoria da sanidade dos suínos. A tecnologia do DNA recombinante pode ser usada para superar problemas com as vacinas convencionais. No entanto, pela utilização de códons TGA e não TGG para codificar o amino ácido triptofano, a tradução de genes de micoplasmas termina prematuramente quando clonados e expressos em outras bactérias, como Escherichia coli. Devido a isso, o número de proteínas antigênicas de M. hyopneumoniae caracterizadas e testadas como vacinas ou em testes de imunodiagnóstico ainda é restrito. Neste trabalho, 63 fragmentos gênicos foram selecionados, os quais correspondem a 48 seqüências codificadoras (CDS) de M. hyopneumoniae. Num primeiro momento, foi padronizado um método de PCR de sobreposição para mutagênese sítio-dirigida de genes de M. hyopneumoniae, objetivando a substituição do códon TGA por TGG, na seqüência do DNA. Com esse método, a mutagênese sítio-dirigida foi realizada com sucesso em 14 genes de M. hyopneumoniae. Os demais genes selecionados foram amplificados por PCR e clonados no vetor Champion pET200D/TOPO®. No total, 59 fragmentos gênicos foram clonados eficientemente. Destes, 49 tiveram suas proteínas expressas em E. coli e 35 foram purificadas por cromatografia de afinidade em coluna de Ni- Sepharose (HisTrap ). As propriedades antigênicas e imunogênicas destas proteínas foram analisadas. Para isso, as proteínas foram testadas contra soro de suínos convalescentes e soro hiperimune através de ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) e Western blot. Dezenove proteínas recombinantes foram reconhecidas especificamente por soro de suínos convalescentes, indicando que elas são expressas durante a infecção. Resposta imune humoral contra as proteínas recombinantes foi avaliada em camundongos BALB/c através de ELISA. Os resultados demonstraram que os antígenos induzem um nível variável de anticorpos, o que nos permite inferir quanto à capacidade imunogênica de cada antígeno. O soro dos camundongos inoculados com 20 proteínas foi capaz de reconhecer as proteínas nativas através de ELISA. Este estudo permitiu identificar e caracterizar novas proteínas imunogênicas de acordo com o seu potencial para uso em testes de diagnóstico e/ou vacina. Estes dados representam uma importante contribuição para o desenvolvimento de testes sorológicos mais efecientes e vacinas de subunidade para o controle da infecção causada por M. hyopneumoniae em suínos.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_ana_munhoz_vianna.pdf: 719262 bytes, checksum: c1b68d796b66c4c6c3d0037b6024cb3d (MD5) Previous issue date: 2011-07-25 / The equine piroplasmosis caused by Theileria equi is considered one of the most important equine diseases in both tropical and subtropical countries. Theileriosis is endemic in Brazil and causes significant economic losses for equine breeders. Disease-free countries restrict horse transit coming from endemic areas due to the high prevalence of asymptomatic carrier animals. In order to prevent and control this disease, it is therefore necessary to develop efficient diagnostic methods. Previous Theileria equi immunological diagnostic studies have been based in outer membrane antigens. Equi merozoite antigen (EMA) is a major outer membrane antigen of this protozoan, recognized by antibodies of Theileria equi positive horses. In this study, we reported the expression, purification and characterization of EMA-2 protein of Theileria equi in the yeast Pichia pastoris. The EMA-2 gene was cloned into the expression vector pPICZαB and the expressed protein was secreted to the medium as a soluble form. The expression and antigenicity of rEMA-2 protein was demonstrated by Dot and Western Blotting, using anti-histidine and equine Theileriosis clinically positive antibodies. An indirect ELISA with the rEMA-2 was performed and it was possible to differentiate with more than a threefold difference between negative and positive serum from horses confirmed with Theileriosis. The data obtained in this work suggest that the rEMA-2 protein expressed in P. pastoris is a potential candidate for use as antigen in immunodiagnostic of T. equi. / A Piroplasmose equina causada por Theileria equi é considerada uma das mais importantes doenças dos equinos em regiões tropicais e subtropicais. Acomete os equinos de forma endêmica no Brasil levando a significativas perdas econômicas. Países livres da doença não permitem a entrada de animais provindos de regiões endêmicas devido à alta prevalência de animais assintomáticos. Para controle e prevenção desta enfermidade se faz necessário desenvolvimento de métodos de diagnóstico eficazes. Os estudos sobre o diagnóstico imunológico para Theileriose concentram-se em antígenos da membrana externa. O principal antígeno da membrana externa deste protozoário, Equi Antígeno Merozoite (EMA) é reconhecido por anticorpos de cavalos positivos para Theileria equi. Neste estudo reportamos a expressão, purificação e a caracterização da proteína EMA-2 de Theileria equi na levedura Pichia pastoris. O gene EMA-2 foi clonado no vetor de expressão pPICZαB sendo a proteína expressa, secretada de forma solúvel ao meio. A expressão e antigenicidade da proteína rEMA-2 foi demonstrado por Dot e Western Blotting utilizando-se anti-histidina e anticorpos de equinos clinicamente positivos para Theileriose. Um ELISA indireto com rEMA-2 foi realizado e foi possível determinar uma diferença de mais de três vezes entre os soros de equinos confirmados como positivos e negativos para Theileriose. Com os dados obtidos neste trabalho podemos sugerir que a proteína rEMA-2 é um potencial candidato para ser utilizado como antígeno em imunodiagnóstico de T. equi.

Made available in DSpace on 2015-03-04T18:51:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thesis_final.pdf: 17163181 bytes, checksum: 00c96f156953680b2cfcf263393486b2 (MD5) Previous issue date: 2008-04-30 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientifico e Tecnologico / The goal of ab initio protein structure prediction (PSP) methods is to predict, based on first principles, the three-dimensional structure that a given amino-acid sequence will assume. These methods have important biotechnological applications from the creation of new proteins, drug design (the receptor's structure), the refinement of theoretical models and the elucidation of structures from sparse experimental data. The prediction encompasses an optimization problem with thousands of degrees of freedom and is associated with extremely complex energy hypersurfaces. This results in a problem that is difficult to treat computationally. In this work a simplified three-dimensional protein model (hydrophobic-polar model, HP) was used in order to reduce the computational costs of the PSP problem allowing for the fast development of a robust and efficient genetic algorithms based methodology. This methodology was then adapted to an all-atoms protein model. During the development different strategies for the PSP problem were analyzed. A new crowding based approach is described for the maintenance of diversity within the population which resulted in achieving multiple solutions. The HP model's methodology was tested against all 35 major sequences from the literature and the comparative results showed that the proposed genetic algorithm is superior to other evolutionary algorithms and comparable to specialized methods. The algorithm applied to the all-atoms model was initially tested with poli-alanines and later with five other proteins. Structures with RMSDs ranging from 2.0 to 6.7 Å were found and the proposed algorithm was superior to others similar methods, in terms of computational costs. The results obtained showed that optimization strategies with multiple solutions characteristics present two advantages. The first one is the more efficient investigation of a complex hypersurface, with better chances of finding optimal solutions; the second one is increasing the probability of finding structures close to those experimentally determined, even when they are not near the global optimum of the energy hypersurface. / Métodos de predição ab initio de estrutura de proteínas (PSP) buscam prever, baseando-se em primeiros princípios, a estrutura tridimensional que uma dada seqüência de aminoácidos irá adotar no espaço. Os métodos de predição ab initio atualmente possuem aplicações biotecnológicas que envolvem desde a criação de novas proteínas, o auxílio no desenho racional de fármacos (estrutura do receptor), o refinamento de modelos teóricos e a obtenção de estruturas a partir de dados experimentais incompletos. Entretanto, a predição envolve um problema de otimização que lida com milhares de graus de liberdade e está associado à hipersuperfícies de energia extremamente complexas o que torna o problema difícil de ser tratado computacionalmente. Neste trabalho utilizamos um modelo tridimensional de proteínas simplificado (modelo hidrofóbico-polar, HP) para reduzir os custos computacionais associados ao problema de PSP de modo que uma metodologia de otimização, robusta e eficiente, baseada em algoritmos genéticos, fosse desenvolvida mais rapidamente. Em seguida a metodologia foi adaptada para um modelo com descrição atômica que utiliza um campo de forças clássico como função de energia. Durante o desenvolvimento foram implementadas e analisadas várias estratégias para o problema. Foi descrita uma nova abordagem, baseada em crowding, para a manutenção da diversidade na população que resulta na obtenção simultânea de múltiplas soluções. A metodologia para o modelo HP foi aplicada a 35 seqüências disponíveis na literatura e os resultados comparativos mostraram que o algoritmo genético desenvolvido é superior a outros algoritmos evolutivos publicados, e comparável a métodos especializados. A metodologia para o modelo atômico foi inicialmente testada em poli-alaninas e em seguida em cinco outras proteínas de maior complexidade. Foram encontradas estruturas apresentando RMSDs entre 2,0 e 6,7 Å, em relação à estrutura determinada experimentalmente. O algoritmo genético se mostrou superior a outros métodos semelhantes, em termos de custo computacional. Os resultados obtidos mostram que as estratégias de otimização envolvendo a busca por múltiplos mínimos possuem duas grandes vantagens. A primeira delas está em uma investigação mais efetiva de uma hipersuperfície complexa aumentando a probabilidade de se encontrar soluções ótimas (de mais baixa energia); a segunda delas está no aumento da probabilidade de se obter estruturas próximas daquelas determinadas experimentalmente mesmo quando estas não são o mínimo global da hipersuperfície de energia investigada.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-10-17T13:09:25Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PerfilMulheresRibeirinhas.pdf: 2298059 bytes, checksum: 1c7ff2839e200c25e7e84f2a6fa63b56 (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-10-25T16:10:14Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PerfilMulheresRibeirinhas.pdf: 2298059 bytes, checksum: 1c7ff2839e200c25e7e84f2a6fa63b56 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-25T16:10:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PerfilMulheresRibeirinhas.pdf: 2298059 bytes, checksum: 1c7ff2839e200c25e7e84f2a6fa63b56 (MD5) Previous issue date: 2015 / O papilomavírus humano (HPV) é responsável pela infecção sexualmente transmissível mais comum no mundo e é reconhecido como principal agente causador do câncer do colo do útero, porém pouco se conhece sobre a prevalência deste vírus em comunidades isoladas da Amazônia. Objetivamos neste estudo identificar, entre mulheres de comunidades ribeirinhas de diversos municípios do Estado do Pará - Brasil, a prevalência geral e específica dos tipos 16 e 18 da infecção pelo HPV, construindo um perfil epidemiológico das mulheres positivas para o vírus e seus tipos em questão. No período compreendido entre fevereiro e dezembro de 2008, foram coletadas amostras de cérvice uterina de mulheres ribeirinhas através de busca ativa para a realização do exame citopatológico. Nestas amostras, foi realizada a pesquisa molecular de HPV através da reação em cadeia da polimerase convencional (PCR) seguida de uma PCR em tempo real específica para os tipos 16 e 18. Das 353 amostras analisadas, 58 (16,4%) foram positivas para HPV, 8 (2,3%) foram identificadas positivas para o tipo 16 e 5 (1,4%) positivas para o tipo 18 havendo um caso de infecção múltipla pelos tipos investigados. Mulheres abaixo dos 16 anos apresentaram 34,6% taxa de prevalência e mulheres entre 52 e 66 anos taxa de 29,8% (p = 0,003), mulheres que relataram possuir único parceiro sexual fixo apresentaram menor prevalência da infecção viral (11,8%) (p<0,001). Houve um aumento relativo na presença viral de acordo com a severidade citológica apresentada (p=0,026). Não foi constatada associação estatística entre os tipos virais 16 e 18 com as variáveis epidemiológicas investigadas. A presença de HPV e seus tipos mais associados ao câncer de colo de útero destaca a importância de ações específicas, voltadas para a prevenção da transmissão e o rastreamento das lesões relacionadas a este vírus, em comunidades ribeirinhas a Amazônia brasileira. / The human papilomavírus (HPV) is the cause of the most common sexually transmitted infection in the world and is recognized as the main causative agent of cervical cancer, but little is known about the prevalence of this virus in isolated communities in the Amazon. We aimed in this study to identify among women in riverside communities of several municipalities in the state of Pará - Brazil, the general and specific prevalence of HPV infection and HPV types 16 and 18, building an epidemiological profile of women positive for the virus and these types. Between February and December 2008, cervical samples riverside women were collected on active serach for the Pap smear testing. In these samples, molecular analysis of HPV were performed by conventional polymerase chain reaction (PCR) followed by real-time PCR to diagnose types 16 and 18. Of the 353 samples tested, 58 (16.4%) were positive for HPV , of these 8 (2,3%) were identified positive for type 16 and 5 (1,4 %) were positive for type 18 with one case of infection by both types investigated . Women under 16 years had 34.6 % prevalence had rate and women between 52 and 66 years rate of 29.8 % (p=0.003), women who reported having only one fixed sexual partner had lower prevalence of viral infection (11,8%) (p<0,001). There was a relative increase in viral presence in accordance with the severity cytological shown (p = 0.026). There was no statistical association between viral types 16 and 18 with the variables investigated. The presence of HPV and its most associated with cervical cancer types highlights the importance of specific actions aimed at the prevention, transmission and screening of lesions related to this virus in the river communities of the target municipalities.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-10-17T14:19:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_DeteccaoVirusInfluenza.pdf: 2105812 bytes, checksum: 592b69e553c78f97d0a3a3db69ed7c2f (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-10-30T13:26:13Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_DeteccaoVirusInfluenza.pdf: 2105812 bytes, checksum: 592b69e553c78f97d0a3a3db69ed7c2f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-30T13:26:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_DeteccaoVirusInfluenza.pdf: 2105812 bytes, checksum: 592b69e553c78f97d0a3a3db69ed7c2f (MD5) Previous issue date: 2014 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O vírus Influenza A é conhecido pela sua capacidade de infectar uma ampla variedade de animais, como os mamíferos (humanos, suínos, equinos, cetáceos, morcegos), aves domésticas (galinha [Gallus gallus], ganso, peru [Meleagris ocellata]), além de aves selvagens das ordens Charadriiformes (gaivotas, andorinhas, aves marinhas e maçaricos) e Anseriformes (pato, ganso selvagem e cisne) sendo estas seu hospedeiro natural. Compreender o movimento de longa distância de aves selvagens migratórias é crucial para explicar a circulação de vírus da gripe aviária. Este evento de circulação faz com que as aves atuem como importante meio de propagação do vírus ao longo de uma rota migratória, fato este já amplamente aceito. Entre os anos de 2006 e 2007 foram coletadas 2.252 amostras (swab de traquéia e cloaca), obtidas em locais que fazem parte da rota de migração do Atlântico e Mississipi, a partir de uma variedade de espécies de aves em regiões dos estados da Bahia, Pará e Pernambuco, para vigilância epidemiológica dos vírus Oeste do Nilo e Influenza. O objetivo deste estudo foi investigar a circulação de vírus Influenza entre aves migratórias que utilizam as rotas que passam pelos estados brasileiros supracitados. Para isso, as amostras foram analisadas através de técnicas de biologia molecular, que compreenderam duas etapas principais: a) extração de DNA/RNA a partir do espécime biológico; b) amplificação do gene controle codificador da Citocromooxidase pela técnica Reação em Cadeia mediada pela Polimerase (PCR) e amplificação do RNAv pela técnica de Transcrição Reversa seguida pela PCR em tempo real (RT-qPCR). Os resultados obtidos mostraram que do total de amostras testadas, 7,2% (n = 158) foram positivas por rRT-PCR para o vírus Influenza A. Observou-se uma diferença de positividade para o virus entre as espécies de aves analisadas, sendo esta de 3,6% para a ordem Charadriformes, 26,3% entre as aves da a ordem Anseriformes, 5,3% das aves pertencentes a ordem Pelecaniformes e 10,9% para aquelas da ordem Suliformes. Entre as amostras das ordens Passeriformes e Columbiformes, nenhuma amostra revelou-se positiva para vírus Influenza. Os dados sugerem variação entre os locais de coleta, tendo o estado do Pará com o menor percentual de positividade, a Bahia com segunda maior taxa e por fim Pernambuco apresentando maior valor de prevalência absoluta. Este estudo mostra que apesar de raras investigações realizadas no território brasileiro, constata-se circulação de vírus Influenza A entre diversas espécies de aves migratórias que utilizam os estados do Pará, Bahia e Pernambuco como locais de parada e reprodução de suas espécies. Estes achados justificam novas investigações para compreender a dinâmica dos vírus da gripe aviária na população de aves selvagens circulantes no Brasil, e seu papel como fonte em potencial de infecção para outros animais, inclusive o homem. / The Influenza virus is known for its ability to infect a wide variety of animals, such as mammals (humans, pigs, horses, whales), domestic birds (chicken [Gallus gallus], goose, turkey [Meleagris ocellata]) beyond wild birds of the orders Anseriformes (duck, wild goose and swan) and Charadriiformes (seagulls, swallows, aquatic birds and sandpipers) these being its natural host. Comprehend the movement of long distance migratory wild birds is crucial to explain the movement of avian influenza viruses. This event causes movement of the birds are acting as an important means of spreading the virus along a migratory route, a fact widely accepted. During the period 2006 and 2007, samples were collected 2,252 samples from a variety of bird species captured in locations which are part of the Atlantic migration route and Mississippi, in the states of Bahia, Para and Pernambuco for epidemiological surveillance of West Nile virus and influenza. The objective of this study was to investigate the circulation of influenza virus among migratory birds that use the routes that pass the above states. For this, the samples were analyzed by means of molecular biological techniques, which comprised two main steps: a) extraction of DNA / RNA from the biological specimen; b) amplification of the gene encoding cytochrome oxidase control of by the technical Polymerase Chain Reaction (PCR) and amplification of the vRNA by Real time Reverse Transcripition polimerase chain reaction (RT-qPCR). The results obtained showed that the total samples tested, 7.2% (n = 158) were positive by RT-qPCR for Influenza A virus. We observed a difference in positivity for the virus among bird species analyzed, which is 3.58% for Charadriformes order, 26.3% among the birds of the order Anseriformes, 5.3% of birds belonging to the order Pelecaniformes and 10.9% for those order Suliformes. Among the samples of the orders Passeriformes and Columbiformes, no sample was positive for Influenza Virus. The data suggest variation among the sampling sites, and the state of Para with the lowest percentage of positivity, the second highest rate with Bahia and Pernambuco finally presenting higher prevalence of absolute value. This study shows that although rare investigations in Brazilian territory, there has been movement of Influenza A viruses among several species of migratory birds that utilize the states of Para, Bahia and Pernambuco as stopping places and reproduction of their species. These findings justify further investigations to understand the dynamics of avian influenza viruses circulating in the population of wild birds in Brazil, and its role as a potential source of infection for other animals, including humans.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Daniele Tasior.pdf: 2815536 bytes, checksum: dc7cea7fc9b3fc00f6be08c2ce7825cd (MD5) Previous issue date: 2014-06-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The study aimed to characterize the resistance of F2:3 progenies of maize inoculated with Colletotrichum graminicola, genetic parameters and map genomic regions associated with quantitative resistance alleles to anthracnose stalk in tropical maize determining the effects of each locus on resistance/susceptibility C. graminicola. Individuals of the F2 generation were selfed to generate F2:3 progenies, which were evaluated phenotypically for resistance to anthracnose stalk in three experiments. The treatments were consisted of 121 F2:3progenies, parental lines (L04-2 and L99-4) and the F1 generation, which were used as control. The experimental plots were arranged in a randomized block design with three replications. Each plot consisted in one row of 3 m in length with rows spaced 0.90 m apart, with a total of 15 plants per plot. The plants were inoculated in the anthesis stage by injecting 1 mL of spore suspension into the first or second elongated internode above ground. The data was collected 30 days after inoculation by evaluating the internal lesion length (CINT), external lesion length (CEXT) in cm and the number of discolored internodes (INT). From the phenotypic evaluations of 121 F2:3 progenies genetic parameters were associated with resistance to all three forms of assessment (CINT, INT and CEXT) in each experiment. The association of microsatellites and AFLP markers to resistance alleles was performed using multiple regression. AFLP and SSR loci used to form the construction of the linkage map by MAPMAKER version 3.0. Detection of the QRL was performed by composite interval mapping method using QTLCartographer program. The experimental results showed the existence of high genetic variability among the F2:3 progenies for resistance/susceptibility to C. graminicola. The forms of assessment of anthracnose stalk (CINT, INT and CEXT) were equally effective in discriminating susceptible from resistant individuals. The high broad-sense heritability confirms the great contribution of genetic variance for resistance, which ensures genetic gain for artificial selection in this pathosystem. The AFLP marker E55534 individually explained the greatest proportion of the phenotypic variation for the internal length (- 28.43%), external lesion length (- 27.70%) and the number of discolored internodes (- 27.45%) in F2:3 progenies of maize. The composite interval mapping identified 31 QRLs to anthracnose stalk segregating in the mapping population, which were mapped across the 10 linkage groups. This is the first report of the QRL to anthracnose stalk mapped on chromosomes 2, 3 and 10. At large number of mapped QRL is suggested that the inheritance of resistance in this tropical germplasm is more complex, conditioned by a large number of genes, some large phenotypic effects and the vast majority with small effects for resistance in this pathosystem. / O trabalho objetivou caracterizar a resistência de progênies F2:3 de milho inoculados com Colletotrichum graminicola, estimar os parâmetros genéticos e mapear regiões genômicas associados à alelos de resistência quantitativa à antracnose do colmo em milho tropical determinando os efeitos de cada loco sobre a resistência/suscetibilidade a C. graminicola. Os indivíduos da geração F2 foram autofecundados para gerar as progênies F2:3, as quais foram avaliadas fenotipicamente para resistência à antracnose do colmo em três experimentos de campo. Os tratamentos foram constituídos de 121 progênies F2:3, linhagens parentais (L04-2 e L99-4) e da geração F1, os quais foram utilizados como tratamentos controle. O delineamento experimental foi o de blocos aleatorizados, com três repetições. Cada parcela foi constituída de 3 m de comprimento e 0,90 m na entrelinha, com aproximadamente 15 plantas por parcela. As plantas dos experimentos foram inoculadas no estádio de florescimento pleno da cultura, através da injeção de 1mL da suspensão de esporos, no meio do primeiro ou segundo internódio visível acima do solo. A avaliação dos sintomas foi realizado 30 dias após a inoculação, através da avaliação do comprimento interno de lesão (CINT), comprimento externo de lesão (CEXT) em cm e do número de internódios descoloridos (INT). A partir das avaliações fenotípicas das 121 progênies F2:3 foram estimados os parâmetros genéticos associados a resistência para as três características avaliadas (CINT, CEXT e INT) em cada experimento. A associação dos marcadores microssatélites e AFLPs a alelos de resistência foi realizada através da regressão linear múltipla. Locos SSR e AFLPs foram utilizados na construção do mapa de ligação através do MAPMAKER versão 3.0. A detecção dos QRLs foi realizada pelo método de mapeamento por intervalo composto utilizando o programa QTLCartographer. Os resultados experimentais evidenciaram existência de grande variabilidade genética entre as progênies F2:3 de milho para resistência/suscetibilidade à C. graminicola. As formas de avaliação da antracnose do colmo (CINT, CEXT e INT), foram igualmente eficientes em discriminar os indivíduos resistentes dos suscetíveis. Os elevados coeficientes de herdabilidade no sentido amplo confirmam a grande contribuição da variância genética para resistência, o que assegura ganhos genéticos com a seleção artificial neste patossistema. A regressão linear múltipla possibilitou identificar marcadores microssatélites e AFLPs altamente associados a alelos de resistência à C. graminicola. O marcador AFLP E55534 explicou individualmente a maior proporção da variação fenotípica para o comprimento interno (- 28,43%), comprimento externo de lesão (- 27,70%) e para o número de internódios descoloridos (- 27,45%) nas progênies F2:3 de milho. O mapeamento por intervalo composto identificou 31 QRLs à antracnose do colmo segregando na população de mapeamento, os quais foram mapeados entre os 10 grupos de ligação. Este é o primeiro relato de QRLs à antracnose do colmo mapeados nos cromossomos 2, 3 e 10. Pelo grande número de QRLs mapeados sugere-se que a herança da resistência neste germoplasma tropical seja mais complexa, condicionada por um grande número de genes, sendo alguns de grande efeito fenotípico e a grande maioria com pequenos efeitos para a resistência neste patossistema.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rubia Caldas.pdf: 1293952 bytes, checksum: 52cae77ba14b2beb72e4443c324cd16c (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / High blood pressure (HBP) is a multifactorial clinical condition characterized by high and sustained levels of blood pressure (BP). The renin-angiotensin system is involved in the control of the BP, and has as a component the angiotensin converting enzyme (ACE). Recent studies that relate gene variants of Angiotensin Converting Enzyme (ACE) gene, increase the risk of hypertension, compared with the presence of the allele D. Thus, it becomes necessary studies aimed at investigating the relationship of the polymorphism in intron 16 of the ACE gene with hypertension. The aim of the study was to verify the relationship between I / D polymorphism of the ACE gene and genotypic variants with the installation of HBP in four distinct groups. Participants were 112 individuals arranged in the following groups: normotensive (control), hypertensive and non-obese, hypertensive and obese and hypertensive and with type II diabetes mellitus. We evaluated the possible relationship between I/D polymorphism of the ACE gene in different groups of hypertensive patients, but there was no significant difference between the genotypes in different groups in the sample. Regarding the epidemiology higher the body mass index (BMI), waist circumference, triglycerides and cholesterol levels and physical inactivity, was greater incidence of hypertension in the population. The data obtained in this study reinforce environmental interference that are prevalent in the evolution of the framework of HBP and not related to the frequency of the D allele in the population studied. / A hipertensão arterial sistêmica (HAS) é uma condição clínica multifatorial caracterizada por níveis elevados e sustentados de pressão arterial (PA). O sistema renina-angiotensina está envolvido no controle da PA, e tem como um dos componentes a enzima conversora de angiotensina (ECA). Estudos recentes relacionam que variantes do gene da Enzima Conversora de Angiotensina (ECA) aumentam o risco de HAS, com relação à presença do alelo D. Com isso, se fazem necessários estudos voltados à investigação da relação do polimorfismo no íntron 16 do gene da ECA com a HAS. O objetivo do estudo foi verificar a existência de relação do polimorfismo I/D do gene da ECA e suas variantes genotípicas com a instalação da HAS, em quatro grupos distintos. Participaram da pesquisa 112 indivíduos arranjados nos seguintes grupos: normotenso (controle), hipertenso e não obeso, hipertenso e obeso, e hipertenso e com diabetes mellitus tipo II. Foi avaliada a possível relação do polimorfismo I/D do gene da ECA, em diferentes grupos de hipertensos, porém não foi encontrada diferença significativa quanto aos genótipos nos diferentes grupos na amostra analisada. Em relação à epidemiologia, quanto maior o índice de massa corporal (IMC), cintura abdominal, valores de colesterol e triglicerídeos e sedentarismo, maior foi a incidência de HAS na população. Os dados obtidos no presente estudo reforçam que interferências ambientais são prevalentes na evolução do quadro de HAS, e não relacionado à frequência do alelo D na população analisada.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cleberson Cezario Primo.pdf: 3495062 bytes, checksum: 39e96203835221786c05ef8ab3b75523 (MD5) Previous issue date: 2015-02-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Loricariidae family (Actinopterygii: Siluriformes) is morphologically diverse, has a number close to 900 valid species, distributed in seven subfamilies (Lithogeneinae, Delturinae, Neoplecostominae, Hypoptopomatinae, Loricariinae, Ancistrinae and Hypostominae). However, cytogenetic studies in species of the family show evolutionary trends of karyotype diversification well defined for each of the subfamilies and the diploid number (2n) of 54 chromosomes is considered basal. Among the representatives of the subfamily Loricariinae, the variation of 2n is 36 to 74 chromosomes. Given these data, the Robertsonian rearrangements are the main mechanisms to explain the chromosome number variation in the subfamily. Rineloricaria is the most specious genus of Loricariinae, porting species with 2n = 36 to 2n = 70 chromosomes. However, little is known about what types of repetitive DNAs originate fission and fusion chromosome events. In this study, species of Rineloricaria from different rivers of the Paraná drainage were studied: Rineloricaria latirostris (Laranjinha river, Cinzas basin and Barra Grande river, Ivaí basin); Rineloricaria pentamaculata (Barra Grande and Juruba rivers, Tibagi basin); and, Rineloricaria stellata and Rineloricaria capitonia (Upper Uruguai river). The aim of this study was to characterize the karyotypes of populations/species of Rineloricaria and to check what types of repetitive DNAs may be related to Robertsonian events in the genus. In R. latirostris was detected 2n = 46 chromosomes for both populations, as well as for a triploid specimen from Laranjinha river. Rineloricaria pentamaculata had 2n = 56 chromosomes to populations from Barra Grande and Juruba rivers and a karyomorph in Barra Grande river with 2n = 54 chromosomes. Rineloricaria stellata had 2n = 54 chromosomes, while R. capitonia presented 2n = 64 chromosomes, both from the Uruguai river. The results using the chromosomal markers of 18S rDNA, 5S rDNA and TTAGGGn telomeric probe showed that these repetitive DNAs participated in end to end fusions of the st/a chromosomes in the karyotype diversification of R. latirostris. Vestiges of interstitial telomeric sites (ITS) were also detected in R. pentamaculata, karyomorph of 54 chromosomes from the Barra Grande river, suggesting chromosomal fusion to the diversification of this karyotype. The wide range of 2n between R. stellata and R. capitonia is compatible to the reproductive isolation of syntopic species and the diversification of R. capitonia can be explained by centric fusions. In addition to Robertsonian rearrangements, the pericentric inversions also assisted in the diversification of karyotypic formulas among the species/populations. In situ localization analysis using the transposable element Tc1-Mariner Like probe showed no evidence of the participation of transposon in chromosomal rearrangements and dispersion of multiple sites of 5S rDNA in Rineloricaria. Furthermore, analyzes of the Tc1-Mariner Like sequences showed intense molecular degeneration, especially in transposase domains. These results indicate the absence of activity of these sequences, which must be inert or serve to other genomic functions in the genus. Thus, this study discusses the telomeric instability, repetitive DNAs and the participation of rDNA gene families in karyotype diversification events in Rineloricaria. / A família Loricariidae (Actinopterygii: Siluriformes) é extremamente diversificada morfologicamente, conta com um número próximo a 900 espécies válidas, distribuídas em sete subfamílias (Lithogeneinae, Delturinae, Neoplecostominae, Hypoptopomatinae, Loricariinae, Ancistrinae e Hypostominae). Não obstante, os estudos citogenéticos em representantes da família mostram tendências evolutivas da diversificação cariotípica bem definidas para cada uma das subfamílias, sendo considerado basal o número diploide (2n) de 54 cromossomos. Entre os representantes da subfamília Loricariinae a variação do 2n é de 36 a 74 cromossomos. Diante destes dados, os rearranjos Robertsonianos são os principais mecanismos para explicar a variação cromossômica numérica na subfamília. Rineloricaria é o gênero mais especioso de Loricariinae, com espécies apresentando 2n = 36 até 2n = 70 cromossomos. Contudo, pouco se sabe sobre quais os tipos de DNAs repetitivos originam os eventos de fissão e fusão cromossômica. Neste estudo, foram avaliadas espécies de Rineloricaria de diferentes rios do sistema hidrográfico do Paraná: Rineloricaria latirostris (rio Laranjinha, bacia do rio das Cinzas e rio Barra Grande, bacia do rio Ivaí); Rineloricaria pentamaculata (rio Barra Grande e rio Juruba, bacia do rio Tibagi); e, Rineloricaria stellata e Rineloricaria capitonia (Alto Rio Uruguai). O objetivo foi de caracterizar cariotipicamente as populações/espécies de Rineloricaria estudadas, além de verificar quais os tipos de DNAs repetitivos podem estar relacionados aos eventos Robertsonianos no gênero. Em R. latirostris foi detectado 2n = 46 cromossomos para ambas populações, além de um exemplar triploide para o rio Laranjinha. Rineloricaria pentamaculata apresentou 2n = 56 cromossomos para as populações dos rios Barra Grande e Juruba e um cariomorfo 2n = 54 cromossomos no rio Barra Grande. Rineloricaria stellata apresentou 2n = 54 cromossomos, enquanto R. capitonia detém 2n = 64 cromossomos, ambas do rio Uruguai. Os resultados com marcadores cromossômicos de rDNA 18S, rDNA 5S e sonda TTAGGGn evidenciaram que estes DNAs repetitivos participaram dos eventos de fusão terminal para terminal (end to end fusions) de cromossomos st/a na diversificação cariotípica de R. latirostris. Vestígios de sítios teloméricos intersticiais (ITS) foram evidenciados também em R. pentamaculata, cariomorfo de 54 cromossomos do rio Barra Grande, sugerindo fusão cromossômica para a diversificação deste cariótipo. A ampla variação de 2n entre R. stellata e R. capitonia é compatível para o isolamento reprodutivo das espécies sintópicas e pode ser explicado por fissões cêntricas na diversificação de R. capitonia. Além dos rearranjos Robertsonianos, as inversões pericêntricas também auxiliaram na diversificação de fórmulas cariotípicas entre as espécies/populações. A análise de localização in situ do elemento transponível Tc1-Mariner Like não mostrou evidências da participação deste transposon nos rearranjos cromossômicos e na dispersão dos sítios múltiplos de rDNA 5S em Rineloricaria. Ainda, as análises das sequências Tc1-Mariner Like evidenciaram intensa degeneração molecular, principalmente nos domínios transposase. Estes resultados indicam a ausência de atividade destas sequências, as quais devem ser inertes ou servir para outras funções genômicas no gênero. Desta forma, este estudo discute a instabilidade telomérica, DNAs repetitivos e a participação das famílias gênicas de rDNA nos eventos de diversificação cariotípica em Rineloricaria.

Made available in DSpace on 2017-07-21T19:59:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Viviane D Nascimento.pdf: 4989006 bytes, checksum: 77cad9ec6df775a3c9e2287e13b3cba6 (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The Neotropical fish species diversity is underestimated. There are many factors that lead to these estimates, as the lack of sampling of headwaters regions, the wide range of different environments that predispose the insulation factors, among countless others. Yet, also contributes the occurrence of species complex, where morphologically similar populations are genetically isolated in gene flow.Parodontidae (Teleostei: Characiformes) is relatively small fish family, with 32 valid species and divided into three genera: Parodon, Apareiodon and Saccodon. Representative of these fish have innumeroushomoplasic diagnostics characters, which ones hinder the identification of species.This study evaluated the validity of the Apareiodon sp. species (Rio Verde population - Upper Rio Tibagi) compared to morphologically similar species Apareiodon ibitiensis. Cytogenetic results showed karyotype differences in Apareiodon sp., which has been shown to occur for the rio Paranapanema basin, while A. ibitiensis is foundedin the rio Tietê basin. Yet, was discussed also the role of the W chromosome differentiation in Apareiodonspeciation. The nucleotide divergence of the DNA barcode confirms the occurrence of different species to A. ibitiensis, Apareiodon sp. and for A. ibitiensis of the Rio São Francisco basin. Yet, an integrated analysis of the number of cusps in premaxillary teeth, cytogenetics and nucleotide divergence using DNA barcode for six different populations identified morphologically as Apareiodon affinis was also performed. In this study, the Upper Paraná River sampling sites showed the same build karyotype and low genetic divergence. In this study, the Upper Rio Paraná sampling localities showed the same karyotype organization and low genetic divergence. However, in the Upper Rio Cuiabá, Upper Rio Paraguay and Upper Rio Uruguay populations (System Lower Rio Paraná) the cytogenetic was different among the populations, nevertheless, a low value of genetic divergence was founded too. Yet, when the Upper Rio Paraná population were compared to the Lower Rio Paraná population, both cytogenetics as genetic divergence demonstrated the occurrence of different species. Thus, this study aimed to evaluate the occurrence of these species pairs and demonstrated the occurrence of morphologically similar populations, but genetically divergent due to gene flow restriction. / A diversidade de espécies de peixes Neotropicais é subestimada. Muitos são os fatores que levam a estas estimativas, como a falta de amostragem de regiões de pequenos córregos, a ampla gama de ambientes diferentes que predispõem a fatores de isolamento, entre inúmeros outros. Também contribui a ocorrência de complexo de espécies, onde populações morfologicamente semelhantes são geneticamente isoladas quanto ao fluxo gênico. A família Parodontidae (Teleostei: Characiformes) é relativamente pequena, com 32 espécies válidas e dividida em três gêneros: Parodon, Apareiodon e Saccodon. Representantes destes peixes apresentam inúmeros caracteres diagnósticos homoplásicos, os quais dificultam sobremaneira a identificação de espécies. Neste estudo foi avaliado a validade de Apareiodon sp. (população do rio Verde - Alto Rio Tibagi), quando comparada à espécie morfologicamente semelhante Apareiodon ibitiensis. Os resultados citogenéticos demonstraram diferenças cariotípicas para o denominado Apareiodon sp., o qual foi demonstrado ocorrer para a bacia do rio Paranapanema, enquanto A. ibitiensis é visualizado para a bacia do rio Tietê. Adicionalmente, foi discutido o papel da diferenciação do cromossomo W na especiação de Apareiodon. A divergência nucleotídica do marcador Barcode corrobora a ocorrência de espécies divergentes para A. ibitiensis, Apareiodon sp. e também para o A. ibitiensis da bacia do rio São Francisco. Também foi realizada uma análise integrada de número de cúspides nos dentes sinfiseanos, citogenética e divergência nucleotídica do marcador Barcode para seis diferentes populações identificadas morfologicamente como Apareiodon affinis. Neste estudo, os pontos de amostragem do Alto Rio Paraná mostraram a mesma constituição cariotípica e baixo nível de divergência genética. Já as populações do Alto Rio Cuiabá, Alto Rio Paraguai e Alto Rio Uruguai (Sistema do Baixo Rio Paraná) mostraram estruturas citogenéticas definidas em suas populações, no entanto, um baixo valor de divergência genética. Ainda, quando comparadas as populações do Alto Rio Paraná às do Baixo, tanto a citogenética quanto a divergência genética demonstraram a ocorrência de espécies distintas. Desta forma, este estudo buscou avaliar a ocorrência destes pares de espécies e demonstrou a ocorrência de populações morfologicamente semelhantes, porém geneticamente divergentes e com restrição ao fluxo gênico.