Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MilenaFA.pdf: 1164866 bytes, checksum: 847b20831744976f00087ef23a650106 (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Gossypium mustelinum Miers ex Watt is the only cotton species native from Brazil. It is endemic of the semi-arid region from North-east of the country, where it occur near from resilient water sources. The threats to the in situ conservation of the populations are caused by human interference in its habitat, mainly by excessive cattle graze and deforestation. Establish efficient strategies of in situ conservation depend on the accomplishment of a diagnosis of how the specie is found in its natural environment, and the knowledge about the genetic structure of the populations. The objectives of this work were i) to determine the in situ conditions of two populations present in rivers from basin of Rio Paragua?u at the Bahia State, ii) to evaluate the structure and genetic variability presented in both populations, iii) to establish in situ and ex situ conservation strategies. It were realized collection in november 2007, when was realized in situ characterization of G. mustelinum. SSR markers were used for analyze 218 genotypes deriving from two populations of the G. mustelinum, localized at Toc? river and the Capivara river. The allelic frequencies, the heterozigosity and the F statics were estimated. All the plants were classified as wild and natives, and there was no evidence of the use the plants or its parts. The populations showed different conservation conditions in situ. Few plantlets were found in sites with excessive cattle feed, an indication that the damages in young plants should be high enough to compromise the renovation of the populations. On the other hand, populations were well preserved when the anthropic damages was low or inexistent. The 14 SSR primer pairs amplified 17 loci with a medium number of 5 alleles per locus (a total of 85 alleles). The high level of endogamy estimated (FIS=0,808) and the low observed heterozygosity (H0=0,093) were indicatives that the populations reproduce mainly by selfing, geitonogamy and crosses between related individuals. The genetic diversity was high (HE=0,482) and the differentiation between the populations was very high (FST=0,328). At least two sites from both populations of G. mustelinum must be preserved to achieve suitable in situ conservation. Actions that preserve the gallery forest and keep the cattle away should implemented, and could be as simple as erecting a fence. It is not possible anticipated if the in situ preservation will be possible. Therefore collections and ex situ preservation of representative specimens are essential to conserve the genetic diversity of native G. mustelinum / Gossypium mustelinum Miers ex Watt ? a ?nica esp?cie de algod?o nativa do Brasil. ? uma esp?cie end?mica do semi-?rido nordestino do pa?s, ocorrendo pr?ximo a fontes de ?gua mais duradouras. Os riscos para conserva??o in situ das popula??es est?o associados a interfer?ncia humana em seu habitat, principalmente devido ao excessivo pastejo por bovinos e caprinos, al?m do desmatamento em matas ciliares. Estabelecer estrat?gias eficazes de conserva??o in situ depende da realiza??o de um diagn?stico da esp?cie em seu ambiente natural, e do conhecimento acerca da estrutura gen?tica das popula??es. Os objetivos deste trabalho foram: i) determinar as condi??es in situ de duas popula??es presentes em rios da bacia do Rio Paragua?u no estado da Bahia, ii) avaliar a estrutura e variabilidade gen?tica presente em ambas as popula??es, iii) e estabelecer estrat?gias de conserva??o in situ e ex situ. Foram realizadas coletas em novembro de 2007, quando foi realizada a caracteriza??o in situ de G. mustelinum. Marcadores SSR foram usados para analisar 218 gen?tipos de duas popula??es, localizadas nos rios Toc? e Capivara. As freq??ncias al?licas, a heterozigozidade e as estat?sticas F foram estimadas. Todas as plantas foram classificadas como selvagens e nativas, e nenhuma evidencia de explora??o antr?pica foi observada. As popula??es apresentavam diferentes condi??es de conserva??o in situ. Poucas plantas foram encontradas em locais onde havia pr?tica de pecu?ria extensiva, um ind?cio de que os danos causados a plantas jovens sejam maiores, comprometendo a renova??o das popula??es. Em contraste, popula??es foram encontradas em adequadas condi??es de preserva??o quando os danos causados pela a??o antr?pica eram pequenos ou inexistentes. Os 14 pares de primers SSR amplificaram 17 locos com n?mero m?dio de 5 alelos por loco (85 alelos no total). O alto ?ndice de endogamia estimado (FIS=0,808) e a baixa quantidade de heterozigotos (Ho=0,093) indicam que as popula??es propagam-se preferencialmente por autofecunda??o, geitonogamia e cruzamentos entre indiv?duos aparentados. A diversidade gen?tica total foi alta (HE=0,482) e a diferencia??o entre as popula??es foi muito elevada (FST=0,328). No m?nimo duas sub-popula??es devem ser preservadas em cada rio para uma adequada conserva??o in situ. A??es de preserva??o das matas ciliares e que impe?am o acesso do gado ?s popula??es devem ser implementadas, erguendo cercas pr?ximas as plantas. N?o ? poss?vel prever se as sugest?es propostas para preserva??o in situ ser?o implementadas. Coletas devem ser intensificadas e a??es para preserva??o ex situ devem ser realizadas para conserva??o da diversidade gen?tica presente nesta esp?cie nativa do Brasil

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AmandaLSS.pdf: 2422936 bytes, checksum: d5a0f2bb2f42d87bacd7a1d2c3f5c6bc (MD5) Previous issue date: 2009-03-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Bacteria trom Shewanella and Geobacter ganera are the most studied iron-reducing microorganisms particularly due to their electron transport systems and contribution to some industrial and environmental problems, including steel corrosion, bioenergy and bioremediation of petroleum-impacted sites. The present study was focused in two ways: the first is an in silico comparative ecogenomic study of Shewanella spp. with sequenced genomes, and the second is an experimental metagenomic work to detect iron-reducing Shewanella through PCR-DGGE of a metabolic gene. The in silico study resulted in positive correIation between copy number of 16S rDNA and genome size in Shewanella spp., with clusters of rrn near lhe origin of replication. This way, the genus is inferred as opportunist. There are no compact genomes and their sequences length varied, ranging from 4306142 nt in S. amazonensis SB2B to 5935403 nt in S. woodyi ATCC 51908, without correIation to temperature range characteristic of each specie. Intragenomic 16S rDNA sequences possess little divergence, but reasonable to resuIt in different phyIogenetic trees, depending on the sequence that is chosen to compare. For moIecuIar detection of iron-reducing Shewanella, it is proposed the mtrB gene as new biomarker. because it codes to a fundamental protein at Fe (III)-reduction. The specific primers were designed and evaluated in silico and resulted in a fragment of 360 pb. In the second study, these primers were tested in a genomic sample from S. oneidensis MR-1, amplifying the expected region. After this successfuI resuIt, the primer set was used as a tool to assess the iron-reducing communities of ShewaneIla genus under an environmental stress, i.e. crude oil contamination in mangrove sediment in Rio Grande do Norte State (Brazil). The primers presented high specificity and the reactions performed resulted in one single band of ampIification in the metagenomic samples. The fingerprinting obtained at DGGE reveaIed temporal variation of Shewanella spp. in analyzed samples. The resuIts presented show the detection of a biotechnological important group of microorganisms, the iron-reducing Shewanella spp. using a metabolic gane as target. It is concluded there are eight or more 16S rDNA sequences in Shewanella genus, with little divergence among them that affects the phylogeny; the pair of primers designed to ampIify mtrB sequences is a viable alternative to detect iron-reducing ShewanelIa in metagenomic approaches; such bacteria are present in the mangrove sediment anaIyzed, with temporal variations in the samples. This is the first experimental study that screened the iron-reducing Shewanella genus in a metagenomic experiment of mangrove sediments subjected to oil contamination through a key metabolic gene / Bact?rias dos g?neros Shewanella e Geobacter s?o os microrganismos redutores de ferro mais estudados. Esse interesse ocorre particularmente devido aos seus sistemas de transporte de el?trons e contribui??o em alguns problemas industriais e ambientais, tais como corros?o de oIeodutos, bioenergia e biorremedia??o de locais contaminados com petr?leo. O presente estudo foi tocado em duas partes: a primeira ? um estudo ecogen?mico comparativo de ShewanelIa spp. com genomas seq?enciados, e a segunda ? um trabalho metagen?mico experimental para detectar Shewanella redutoras de ferro atrav?s de PCR-DGGE de um gene metab?lico. O estudo in silico resultou em correla??o positiva entre o n?mero de c?pias 16S rDNA e tamanho do genoma em ShewaneIla spp., com agrupamentos de rrn. pr?ximo ? origem de replica??o. Desta maneira, o g?nero ? inferido como oportunista. N?o existem genomas compactos e o tamanho de suas sequ?ncias variam de 4306142 nt em S. amazonensis SB2B at? 5935403 nt em S. woodyi ATCC 51908, sem correla??o com a faixa de temperatura caracter?stica de cada esp?cie. Sequ?ncias intragen?micas de 16S rDNA possuem pouca diverg?ncia. mas razo?vel para resultar em diferentes ?rvores filogen?ticas. dependendo da sequ?ncia que ? escolhida para compara??o. Para a detec??o moIecuIar de ShewanelIa redutoras de ferro, ? proposto o gene mtrB como um novo biomarcador, por ser codante de uma prote?na fundamental na redu?ao de Fe (III). Os primers espec?ficos foram desenhados e avaliados in silico e resultou em um fragmento de 360 pb. No segundo estudo, esses primers foram testados em . amostra gen?mica de S. oneidensis MR-1, amplificando a regi?o esperada. Depois desse resultado favor?vel, o par de primers foi utilizado como ferramenta para acessar as comunidades redutoras de ferro do g?nero ShewanelIa sob um stress ambiental - contamina??o com ?leo cru em sedimento de mangue, no Estado do Grande do Norte (Brasil). Os primers apresentaram alta especificidade e as rea??es resultaram em banda ?nica de amplifica??o das amostras metagen?micas. O perfil obtido no DGGE revelou varia??o temporal de ShewanelIa spp. nas amostras analisadas. Os resultados apresentados mostram a defec??o de um grupo de microrganismos biotecnologicamente importante. ShewaneIla spp. redutoras de ferro, usando um gene metab?lico como alvo. Concluiu-se que existem oito ou mais sequ?ncias 16S rDNA no g?nero ShewaneIla, com pouca diverg?ncia entre elas que afetam a filogenia; o par de primers desenhados para amplificar sequ?ncias mtrB ? uma alternativa vi?vel para detectar Shewanella redutoras de ferro em abordagens metagen?micas; tais bact?rias est?o presentes no sedimento de mangue analisado, com varia??es temporais nas amostras. Este ? o primeiro estudo experimental que examina Shewanella redutoras de ferro em um experimento metagen?mico de sedimento de mangue submetido a contamina??o por ?leo atrav?s de um gene metab?lico

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-05-17T11:10:23Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Allancer Divino de Carvalho Nunes - 2014.pdf: 5175346 bytes, checksum: 1e60736516af5e62d78025a4446fc336 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2018-05-17T12:59:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Allancer Divino de Carvalho Nunes - 2014.pdf: 5175346 bytes, checksum: 1e60736516af5e62d78025a4446fc336 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-17T12:59:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Allancer Divino de Carvalho Nunes - 2014.pdf: 5175346 bytes, checksum: 1e60736516af5e62d78025a4446fc336 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Magnetic Nanoparticles (MNPs) have been used for various biomedical applications. Importantly, manganese ferrite-based nanoparticles have a useful magnetic resonance imaging characteristics and potential for magnetic hyperthermia treatment, but their effects in the cardiovascular system are poorly reported. Thus, the objectives of this study were to determine the cardiovascular effects of four different types of manganese ferrite-based nanoparticles: albumin-coated (MnFe2O4 Albumin); citrate-coated (MnFe2O4 Citrate); tripolyphosphate-coated (MnFe2O4 Phosphate); and bare nanoparticles (MnFe2O4 Ionic). The direct effects of the MNPs on cardiac contractility were evaluated in isolated perfused rat hearts. The MnFe2O4 Citrate, but not MnFe2O4 Phosphate and MnFe2O4 Ionic induced a transient decreased in the Left Ventricular End Systolic Pressure. The MnFe2O4 Phosphate and MnFe2O4 Ionic, but not MnFe2O4 Citrate induced an increase in Left Ventricular End Diastolic Pressure which resulted decrease in a Left Ventricular End Developed Pressure. Indeed, MnFe2O4 Phosphate and MnFe2O4 Ionic also caused a decrease in the maximum dP/dt and minimum dP/dt. The three MNPs studied induced an increase in the perfusion pressure of isolated hearts. It is important to note that the ionic nanoparticle induced more significant changes in cardiac function. Interestingly, coating the bare nanoparticles with albumin reverted the MnFe2O4 Ionic-induced cardiac effects. MnFe2O4 Ionic, but not MnFe2O4 Phosphate or MnFe2O4 Citratre, induced a slight vasorelaxant effect in the isolated aortic rings. None of the MNPs were able to change heart rate or arterial blood pressure in conscious rats. In summary, the responses on ventricular function were found to be strongly dependent upon the surface nanoparticles coating layer. Also, although the MNPs were able to induce effects ex vivo, no significant changes were observed in vivo. Thus, given the proper dosages, these MNPs should be considered for possible therapeutic applications. / As Nanopartículas Magnéticas (NPMs) têm sido utilizadas em várias aplicações biomédicas. É importante ressaltar que as nanopartículas de Ferrita de Manganês (MnFe2O4) possuem características essenciais para a ressonância magnética e grande potencial para o tratamento com hipertermia magnética, entretanto seus efeitos sobre o sistema cardiovascular são pouco relatados. Assim, o objetivo desse estudo foi determinar os efeitos cardiovasculares de quatro tipos diferentes de nanopartículas de ferrita de manganês: recoberta com a albumina (MnFe2O4 Albumina); recoberta com citrato (MnFe2O4 Citrato); recoberta com tripolifosfato (MnFe2O4 Fosfato); erecoberta com iônico (MnFe2O4 Iônico). Os efeitos diretos das NPMs na contratilidade cardíaca foram avaliados em corações isolados de ratos. A nanopartícula MnFe2O4 Citrato, e não MnFe2O4 Fosfato e Iônico induziu uma diminuição transitória da Pressão Intraventricular Sistólica (PIS). Somente as nanopartículas MnFe2O4 Fosfato e Iônico aumentaram a Pressão Intraventricular Diastólica (PID), resultando na diminuição da Pressão Desenvolvida no Ventrículo Esquerdo (PDVE). Essas nanopartículas também causaram dimunição da dP/dt máxima e dP/dt mínima. Essas três nanopartículas magnéticas estudadas induziram um aumento na Pressão de Perfusão (PP) de corações isolados. É importante notar que a nanopartícula iônico induziu as maiores alterações significantes na função cardíaca. Interessantemente o revestimento dessas nanopartículas com Albumina reverteram os efeitos cardíacos provocados pela MnFe2O4 Iônico. A MnFe2O4 foi a única a causar um ligeiro efeito vasorrelaxante em anéis isolados de aorta. Nenhuma das NPMs alterou a frequência cardíaca e pressão arterial em ratos acordados. Sumarizando, os efeitos encontrados na função ventricular estão fortemente ligados com a superfície de recobrimento das nanopartículas. Além disso as NPMs induziram efeitos ex vivo, entretanto não foram observados nenhum efeito in vivo. Assim, tendo em conta as dosagens adequadas, estas NPMs devem ser consideradas para possíveis aplicações terapêuticas.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Angela Adamski.pdf: 1384065 bytes, checksum: bc97c8358ac9d31efc3a7a2dd01716c7 (MD5) Previous issue date: 2010-02-24 / Thyroid nodules are common in clinical practice and the incidence of thyroid cancer is increasing throughout the world. Certainly, an important factor for the increase of the incidence is the use of ultrasound and PAFF. The identification of genetic polymosphism is important for understanding the potential mechanisms involved in thyroid carcinogenesis. We hypothesized that polymorphisms of xenobiotic enzyme system (CYP1A1, GSTM1 and GSTT1) and the common germline polymorphism of TP53 gene at codon 72 may be associated with the risk of thyroid cancer. To evaluate the role of such polymorphisms, we investigated 122 cases of thyroid nodules, classified according to the following: 35 malignant neoplasic nodules (MNN), 20 benign neoplasic nodules (BNN) and 67 non-neoplasic nodules (NNN) compared with 134 controls of the healthy individuals randomly selected. The PCR-RFLP was used in the analysis of the CYP1A1m1 and CYP1Am2 genotypes; the multiplex PCR was used in the deletion analysis of the GSTM1 and GSTT1; and for the determination of the polymorphism in the gene TP5372, the samples were submitted to conventional PCR reaction. We included case-control studies that compare the incidence of germline polymorphism of TP5372 in patients with thyroid cancer by DerSimonian-Laird method. Our results demonstrated that CYP1A1m1 and CYP1A1m2 genotypes were frequent not only as neoplasic thyroid nodules and non-neoplasic thyroid nodules but also in the control group, which suggests that those are not associated with thyroid nodules. The null genotype for the GSTT1 gene was predominant in benign nodules compared with the control group (p<0,005) indicated that individuals that possess such null genotypes presented a predisposition to benign thyroid diseases than malignant. The risk analysis, done by Odds Ratio, suggests that the risk genotypes GSTM1 (OR=12,82; p=0,004) and GSTT1 (OR=4,53; p<0,0001) contribute to the development of the BNN and NNN, respectively. The frequency of the p53 Arg allele was significantly higher in both patient and control groups. The genotype p53Arg Arg presents a lower risk to thyroid cancer, indicating that the allele arginine in homozygosis can present a protective effect against thyroid carcinogenesis (OR: 0.15; p<0.0001). The data of the meta-analysis demonstrates that the relation between the genotype and phenotype from the TP5372 polymorphism is not associated with the genetic susceptibility at thyroid cancer. The high incidence of thyroid pathologies among women is a characteristic not completely understood. Therefore, some factors, such as the imbalance of sexual hormones; nutritional deficiencies, especially in iodine; therapeutic exposure to radiation; failures in the control systems of the cellular cycle; and the genetic polymorphism could explain the high incidence of thyroid disease among women. Although the interindividual variation in the susceptibility to thyroid diseases could indicate new perspectives to an early diagnostic and prognostic, the polymorphic profile requires additional studies. / Os nódulos da tiróide são comuns na prática clínica e a incidência do câncer de tiróide tem sido reconhecida em várias partes do mundo. Certamente, um importante fator para o aumento da incidência é a utilização dos exames ultra-sonográficos e PAFF. A identificação de polimorfismos genéticos é importante para compreender os mecanismos potenciais envolvidos na carcinogênese tiroideana. Nossa proposta foi avaliar o polimorfismo das enzimas do metabolismo de xenobióticos (CYP1A1, GSTM1 e GSTT1) e do gene TP53 no códon 72 e a associação destes com o risco de desenvolvimento do câncer da tiróide. Para avaliar o papel de tais polimorfismos, 122 casos de nódulos tiroideanos, destes, 35 apresentaram nódulos neoplásicos malignos (NNM), 20 nódulos neoplásicos benignos (NNB) e 67 nódulos não neoplásicos (NNN) comparados ao grupo controle de 134 indivíduos saudáveis, os quais foram selecionados aleatoriamente. Para a análise dos genótipos de CYP1A1m1 e CYP1A1m2 foi utilizado PCR RFLP, na análise das deleções de GSTM1 e GSTT1 utilizou-se a técnica PCR-multiplex e para a determinação do polimorfismo do gene TP5372 as amostras foram submetidas à reação de PCR. Foi incluído na análise do polimorfismo de TP5372, uma meta-análise de estudos caso-controle com pacientes com carcinomas tiroideanos utilizando o método de DerSimonian-Laird. Os resultados demonstraram que o genótipo homozigoto selvagem de CYP1A1m1 e CYP1A1m2 foram freqüentes tanto nos nódulos tiroideanos neoplásicos e não neoplásicos quanto no grupo controle, sugerindo que os mesmos não estão associados ao risco de desenvolvimento de nódulos tiroideanos. O genótipo nulo para o gene GSTT1 foi predominante em nódulos benignos em comparação ao grupo controle (p<0,005), indicando que o mesmo contribui a uma predisposição aumentada para doença tiroideana benigna do que para maligna. A análise de risco por Odds Ratio, sugere que os pacientes que apresentam genótipos de risco GSTM1 (OR=12,82; p=0,004) e GSTT1 (OR=4,53; p<0,0001) contribuem para o desenvolvimento de NNB e NNN, respectivamente. A frequência do alelo p53Arg foi significativamente maior em ambos os grupos de pacientes e grupo controle. A comparação da frequência genotípica dos pacientes NNM, NNB e NNN com o grupo controle demonstrou que genótipo p53Arg Arg apresenta menor risco para NNM, sugerindo que a presença do alelo arginina em homozigose possua um efeito protetor contra a carcinogênese tiroideana (OR:0,15; p<0,0001). Os dados gerados pela meta-análise demonstraram que a relação entre o genótipo e o fenótipo originado do polimorfismo de TP5372 não está associada à susceptibilidade genética ao câncer de tiróide. A alta incidência de patologias da tiróide entre as mulheres é uma característica complexa a ser compreendida. Assim, fatores como o desequilíbrio dos hormônios sexuais, nutricionais especialmente a carência de iodo na dieta, exposição terapêutica à radiação, falhas nos sistemas de controle do ciclo celular e o polimorfismo genético poderiam explicar o aumento da incidência de doença tiroideana em mulheres. Embora, as variações interindividuais na susceptibilidade às doenças da tiróide poderiam indicar novas perspectivas para o diagnóstico precoce e prognóstico, o perfil polimórfico requer estudos adicionais.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:10:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese-Erika2009.pdf: 3993118 bytes, checksum: 2852e36019237acb54dcbae5e0aa2faf (MD5) Previous issue date: 2009-08-14 / Magnetic nanoparticles (MNPs) have been used in a great variety of biomedical applications, especially in cancer treatment, drug delivery, and diagnosis by magnetic resonance imaging. Embryonic stem cells (ESCs), due to its capacity of auto-renewal and differentiation in some types of cells, offer a great potential for its use in tissue regeneration and in alternative treatments for many degenerative diseases. The study had as aims: i) to evaluate in vitro citotoxicity of maghemite nanoparticles functionalized with lauric acid, DMSA, and citrate in human melanoma cells (SK-MEL-37) by the MTT assay, electronic microscopy, and DNA electroforesis by agarose gel; ii) to develop a culture system using the previously selected MNPs and a magnet to expand in vitro murine embryonic stem cells (mESCs) in the absence of a co-culture of murine embryonic fibroblasts (MEF) (the indifferentiated state of the mES was analyzed by alkaline phosphatase cytochemistry, electronic microscopy, and analysis of Oct-4 and Nanog gene expression by RT-PCR); iii) to isolate and expand ESCs from bovine blastocysts, and to characterize its pluripotency by analysis of Oct-4 and STAT-3 gene expression by RT-PCR. The MNPs coated with lauric acid, citrate, and DMSA showed no citotoxicity, judging by the high values of IC50 found (254, 433 and 2260 &#956;g-iron/ml, respectively), and that the nanoparticles coated with citrate was chosen to expand the mESCs. The doubling time for the cells cultivated in the presence of MNPs was slightly higher than in the presence of MEF (20.67 ± 0.19 vs. 15.95 ± 0.21) (p= 0.001). The mESCs cultivated in the presence of MNPs showed morphology similar to ESCs, and its pluripotency was confirmed by expression of indifferentiation markers Oct-4 and Nanog by RT-PCR and high alkaline phosphatase activity. One bovine embryonic stem cell (bESCs) line was obtained and maintained by six subcultures for 60 days period. The pluripotency of the bESCs was confirmed morphologically as well as by Oct-4 e STAT-3 gene expression / As nanopartículas magnéticas (NPM) têm sido utilizadas em inúmeras aplicações biomédicas, destacando-se no tratamento do câncer, carreamento de drogas e diagnóstico por imagem de ressonância. As células tronco embrionárias (ES), devido à sua capacidade de auto-renovação e de diferenciação em vários tipos de células, oferecem um grande potencial para sua utilização na regeneração de tecidos e em tratamentos alternativos para muitas doenças degenerativas. Os objetivos do estudo foram: i) avaliar a citotoxicidade in vitro de NPM de maghemita funcionalizadas com ácido láurico, DMSA e citrato em células de melanoma humano (SK-MEL-37) através de ensaio de MTT, microscopia eletrônica e eletroforese de DNA em gel de agarose; ii) desenvolver um sistema de cultura utilizando as NPM previamente selecionadas e um magneto para expandir in vitro células tronco embrionárias murinas (mES) na ausência de co-cultura de fibroblastos embrionários murinos (MEF) (o estado indiferenciado das células mES foi analisado por citoquímica para fosfatase alcalina, por microscopia eletrônica e análise da expressão de genes Oct-4 e Nanog por RT-PCR); iii) isolar e expandir células ES a partir de blastocistos bovinos, e caracterizar a sua pluripotência por meio da análise da expressão dos genes Oct-4 e STAT-3 por RT-PCR. As NPM revestidas com ácido láurico, citrato e DMSA não apresentaram citotoxicidade, a julgar pelos altos valores de IC50 encontrados (254, 433 e 2260 &#956;g de ferro/mL, respectivamente), sendo que as nanoparticulas revestidas com citrato foram as escolhidas para serem utilizadas como suporte para expandir as células mES. O tempo de duplicação para as células cultivadas na presença da NPM foi ligeiramente maior do que na presença com co-cultura de MEF (20,67 ± 0,19 vs. 15,95 ± 0,21) (p= 0,001). A morfologia das células mES cultivadas na presença da NPM foi semelhante à de células ES, sendo que, a sua pluripotência foi confirmada pela expressão dos marcadores de indiferenciação Oct-4 e Nanog por RT-PCR e da alta atividade de fosfatase alcalina. Uma linhagem de células tronco embrionárias bovinas (bES) foi obtida e mantida por seis subcultivos por período de 60 dias. A pluripotência das células bES foi confirmada morfologicamente, bem como pela expressão dos genes do estado indiferenciado Oct-4 e STAT-3

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:10:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Flavio Marques Lopes.pdf: 1637206 bytes, checksum: 95899c1fbc6b76141c229cf07f0d9d1b (MD5) Previous issue date: 2008-10-23 / In this research, open ground samples (Brazilian Savannah Cerrado) proceeding from treated cultures of soy with Opera® (epoxiconazol and piraclostrobin) had been used as source of resistant microorganisms to fungicide. The sample were collected in July 2006, in three points of planted area and two depths, 0 to 20 cm, and from 80 cm to 1m, next to the state highway GO-139, in the towns of São Miguel do Passa Quatro, in a producing farm model of soy seeds, where Opera® was used since its launching in 2002. The collection point was characterized as a risk place for ecological accidents, presenting area with extensive agriculture activity, intense use of pest management, soil with good level of infiltration and storage of water, and areas of declivity. The microorganism s selection was carried through using selective solid J.E. supplemented with 0.1% of Opera® with microorganisms collected in depth of 80cm. In a previous selection, 9 microorganisms were isolated, and from these, the one that showed a better growth within the selective J.E. liquid supplemented with 0.03% of Opera® (1805) was chosen for the development of this research. The analysis for coloration of Gram-negative showed that the isolated microorganism is one bacillococcus Gram-negative with poliphormic characteristics, being sensible to all the tested antibiotics. Biochemical identification made through the method of Bactray®, presented a correlaction of 99% with the genus Klebsiella. Through molecular identification by the gene 16S rDNA, it was possible to find a correlaction of 99% of similarity with the species K.pneumoniae and K. oxytoca. The proteins released by the Klebsiella in a supplemented environment with 0.03% of Opera had been precipitated with acetone, obtaining two proteinic fractions, a soluble (FS) and the other insoluble (FI) in a 0,1 mol L-1 phosphate buffer, pH 6.0. In the soluble solution (FS), it was found an oxirredutase from the peroxidases family, which uses hydrogen peroxide as an agent and several substrates as reducing agents, presenting greater activity for pyrogallol, TMB, o-dianisidine and catechol. In a chromatogram obtained through separation by molecular exclusion in Sephadex G- 100, two peaks with peroxidasic activities had been observed. Peak 1 presented two bands in SDS-PAGE, one with39.3 kDa and another one with 24.6 kDa. In the FI, it was possible to determine the presence of one hydrolysis with capacity to break the bonds between the ester molecule, from the family of carboxylesterases esterase B. The esterase B presented activity against casein substrates (9.3 UE), BApNA (1.31 UE), pNPP (0.01), presenting 5,4% activity of inhibition after incubation with E64, 6.5% activity of inhibition after incubation with protease inhibitors cocktail containing AEBSF and 7.5% of inhibition after incubation with TLCK. The electrophoreses of FI presented two protein bands with molecular mass of approximately 61.7 kDa for superior band and 60.7 kDa for the inferior band. The enzymatic characterization using pNPP showed high activity in pH 5.0 and pH 7.0. Esterase B kept 100% of activity after 120 minutes of incubation at 60oC. The presence of ZnCl2, EDTA, MgSO4 and CuSO4 had presented an inhibition effect of 16%, 16%, 23.2% and 40.8% respectively, within the enzyme activity. Esterase B slightly presented higher activity in the presence of DMSO and acetone, and a reduction of up to 87% comparing to isopropyl alcohol (lower polarity). The vale of Km using pNPP as substratum was of 3.4 mmol L-1, with a Vmax of 0.019 UE. When the selective J.E. supplemented with 0.03% Opera was treated with Klebsiella for 120 h, it had a reduction of 43.7% in the absorbance of the compounds with a peak of 200 nm, 55.7% - 220 nm and 28.7% - 260 nm. Using released enzymes by Klebsiella for treatment of the epoxiconazol standards in the reduction of the absorbance 200, 220 and 260 nm the observed results were 99.7%, 95.7% and 99.5% respectively. Whereas for the pyraclostrobin, the observed reduction were 95.5% and 80.2% for the wave lengths 200 and 260 nm respectively / Neste trabalho amostras de solo de cerrado provenientes de culturas de soja tratadas com Opera® (epoxiconazol e piraclostrobin) foram utilizadas como fonte de microrganismos resistentes ao fungicida. A coleta foi realizada no mês de julho de 2006, em três pontos de área plantada e em duas profundidades, 0 a 20 cm e de 80 cm a 1 m, próximo à rodovia estadual GO-139, no município de São Miguel do Passa Quatro, em uma fazenda modelo produtora de sementes, em que o Opera® foi utilizado desde o seu lançamento em 2002. O ponto de coleta foi caracterizado como um local de risco a acidentes ecológicos, apresentando área com atividade agrícola extensiva, uso intenso de defensivos agrícolas, solos com boa taxa de infiltração e armazenamento de água e áreas de declividade. A seleção dos microrganismos foi feita com meio seletivo J. E. sólido - suplementado com 0,1% de Opera®, com microrganismos coletados na profundidade de 80 cm. Na primeira etapa 9 microrganismos foram isolados e, destes, o microrganismo 1805 foi o que apresentou melhor crescimento em meio seletivo J. E. líquido - suplementado com 0,03% de Opera® sendo escolhido para o desenvolvimento deste trabalho. A análise por coloração de Gram mostrou que o microrganismo isolado é um bacilococco Gram-negativo com características polimórficas, sendo sensível a todos os antibióticos testados. A identificação bioquímica pelo método de Bactray® apresentou correlação a nível de 99% com o gênero Klebsiella. Através de identificação molecular pelo gene 16S rDNA foi possível encontrar uma correlação de 99% de similaridade com as espécies K. pneumoniae e K. oxytoca. As proteínas secretadas pela Klebsiella em meio suplementado com 0,03% de Opera® foram precipitadas com acetona, obtendo duas frações protéicas, uma solúvel (FS) e outra insolúvel (FI) em tampão fosfato 0,1 mol L-1, pH 6,0. Na FS foi encontrada uma oxirredutase da família das peroxidases, que utiliza o peróxido de hidrogênio como agente oxidante e vários substratos como agentes redutores, apresentando maior atividade para pirogalol, TMB, o- ianizidina e catecol. No cromatograma obtido na separação por exclusão molecular em Sephadex G-100 foram observados dois picos com atividade peroxidásica. O pico 1 apresentou duas bandas em SDS-PAGE, uma mais forte com 39,3 kDa e outra com 24,6 kDa. Na FI foi possível determinar a presença de uma hidrolase, com capacidade de degradação de ligações éster, da família das carboxilesterases esterase B. A esterase B apresentou atividade contra os substratos caseína (9,3 UE), BApNA (1,31 UE), pNPP (0,01 UE), apresentando 5,4% de inibição com E64, 6,5% de inibição após incubação com coquetel de inibidores contendo AEBSF e 7,5% de inibição após incubação com TLCK. A eletroforese da FI apresentou duas bandas de proteínas com massa molecular de aproximadamente 61,7 kDa para a banda superior e 60,7 kDa para a banda inferior. A caracterização enzimática utilizando pNPP mostrou atividade alta em pH 5,0 e em pH 7,0. A esterase B manteve 100% de atividade após 120 minutos de incubação a 60 ºC. A presença de ZnCl2 aumentou a atividade em 14,2%, FeCl3 e MnSO4 não tiveram efeito significativo sobre a atividade e os demais sais, CaCl2, EDTA, MgSO4 e CuSO4 apresentaram um efeito inibitório de 16%, 16%, 23,2% e 40,8% respectivamente, na atividade da enzima. A esterase B apresentou atividade ligeiramente mais alta na presença de DMSO e acetona, e uma redução de até 87% frente ao isopropanol (solvente com menor polaridade). O valor de Km encontrado utilizando pNPP como substrato foi de 3,4 mmol L-1, com uma Vmáx de 0,019 UE. Quando o meio seletivo J. E. suplementado com 0,03% de Opera foi tratado com a Klebsiella por 120 h, houve uma diminuição 43,7% na absorvância dos compostos com pico a 200 nm, 55,7% a 220 nm e 28,7% a 260 nm. Usando as enzimas secretadas pela Klebsiella para tratamento do padrão epoxiconazol a redução da absorvância observada em 200, 220 e 260 nm foi de 99,7%, 95,7% e 99,5% respectivamente. Para o piraclostrobin a redução observada foi de 95,5 e 80,2% nos comprimentos de onda 200 e 260 nm respectivamente

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:10:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Paulo Roberto de M Reis.pdf: 1933722 bytes, checksum: 7d817f5376870e9e403094af501ffaa7 (MD5) Previous issue date: 2009-11-27 / Synadenium umbellatum Pax (1894) is a vegetable species from Euphorbiaceae&#8223;s family. The species of this family produce latex. The latex extracted from S. umbellatum has been used by the Brazilian people as anti-tumoral, anti-inflammatory and wound healing agents. However, this latex presents toxic substances and proteolic enzymes. The aim of this work was to evaluate the possible genotoxic, antigenotoxic, cytotoxic, angiogenic and wound healing activities of S. umbellatum latex (SuL) in rats. The genotoxic and antigenotoxic activities were evaluated by mouse bone marrow micronucleus test. An alkylant agent mitomycin C (4 mg.kg-1 body weight) was used as a positive control. For all doses, micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) frequency was evaluated after 24 hours of treatment. To evaluate the antimutagenic activity, animals were treated with 10, 30, 50 and 100 mg.kg-1 and 4 mg. kg-1 of mitomycin C (MMC) simultaneously. The frequency of MNPCE was evaluated 24 hours after exposure. Cytotoxicity was evaluated by the polychromatic and normochromatic erythrocytes ratio (PCE/NCE). Angiogenic activity of the SuL was evaluated in chorioallantoic membrane (CAM) of fertilized chicken eggs. The concentrations of the SuL were of 10 and 20 mg/mL. Wound healing activity was evaluated in skin of rats. The skin fragment was removed with area 3 x 2,5 cm and submitted to topic application with 5 mL of SuL (concentration 10 mg/mL) and positive and negative controls. The results showed that the SuL was strongly mutagenic, cytotoxic, and antimutagenic, and a moderate activity of anticytotoxicity. In the evaluation of the angiogenesis, the SuL has promoted the increase of the proliferation of blood vessels in the chorioallantoic membrane of fertilized chicken eggs and it also induced the increase of velocity of wound healing in rat skin lesion. / A espécie vegetal Synadenium umbellatum Pax (1894), conhecida vulgarmente por cola-nota, pertencente à família das Euphorbiaceae e apresenta uma seiva leitosa conhecida por látex. Na medicina popular o látex extraído do gênero Synadenium apresenta substâncias tóxicas e enzimas proteolíticas. Devido ao uso popular do látex dessa planta como antiinflamatório, cicatrizante, antineoplásico e outros, o presente estudo teve como objetivo avaliar a atividade genotóxica, antigenotóxica, citotóxica, angiogênica e o potencial de indução de cicatrização do látex da Synadenium umbellatum (SuL). Na avaliação da atividade genotóxica e antigenotóxica utilizou-se o Teste do Micronúcleo em medula óssea de camundongos. Um agente alquilante, mitomicina C, foi utilizado como controle positivo. Na avaliação da atividade angiogênica, o ensaio utilizado foi a membrana corio-alantóidea do ovo embrionado de galinha e no estudo da cicatrização em feridas limpas em dorso de rato foi medida a velocidade de cicatrização da ferida do grupo tratado com SuL e dos grupos controles. Para o teste do micronúcleo, os animais foram tratados com diferentes doses (10, 30, 50, e 100 mg.kg-1 ) do SuL, via intraperitoneal. Para o teste de antimutagenicidade, os animais foram tratados com as mesmas doses utilizadas na avaliação da mutagenicidade juntamente com uma dose única de Mitomicina C (4 mg.Kg-1). Para o teste da angiogênese utilizou-se a membrana corio-alantóide do ovo embrionado de galinha e as concentrações utilizadas do látex foram de 10 e 20 mg/mL. Para o estudo da cicatrização foi utilizada a técnica de feridas limpas em dorso de ratos que foram submetidos a uma lesão padronizada na pele de 3 x 2,5 cm e posteriormente tratados com 5 mL do SuL, na concentração de 10 mg/mL, como controle positivo utilizou-se a biomembrana de látex da Hevea brasiliensis e controle negativo, a salina 0,9%. Foram avaliadas a velocidade de cicatrização do SuL e controles negativo e positivo. Os resultados mostraram que o látex da S. umbellatum foi altamente mutagênico, citotóxico, e antimutagênico e uma ação moderada de anticitotoxicidade. Na avaliação da atividade angiogênica, o látex promoveu um aumento na proliferação de vasos sangüíneos na membrana corio-alantóidea do ovo embrionado de galinha e também induziu um aumento na velocidade de cicatrização nas feridas limpa na pele do dorso de ratos.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao - Mestrado em Biologia - ICB-UFG - Rodrigo Santos.pdf: 3002708 bytes, checksum: 4989a790c4cb26bc50f51abf0c8cfe16 (MD5) Previous issue date: 2009-05-29 / The fungus Paracoccidioides brasiliensis is a human pathogen with a wide distribution in Latin America. The fungus causes paracoccidioidomycosis when mycelia reachs the lungs. The success of the infection depends on the acquisition of essential micronutrients such as copper, which is required as cofactor for a variety of enzymes important in biological in several processes, such as respiration, growth and acquisition of iron. Previous studies, of the Laboratory of Molecular Biology showed that a high affinity copper transporter (PbCTR3) is a molecule highly expressed and probably necessary for the infection establishment of by P. brasiliensis. In the present study were isolated and characterized the genomic and cDNA sequences encoding for PbCTR3 of P. brasiliensis. The cDNA presented 582 base pairs and encodes for a protein with 193 amino acids, predicted molecular mass of 21.5 kDa and pI of 8.6. The genomic sequence has four exons interrupted by three introns. In silico analysis was performed on the database of the structural genome of P. brasiliensis (http://www.broad.mit.edu/annotation/genome/paracoccidioides_brasiliensisMultiHome.html) , where genes involved in maintaining the homeostasis of copper have been identified and used to design of a model of copper homeostasis in P. brasiliensis. The transcriptional behavior of Pbctr3 and genes involved in copper homeostasis were examined during exposure of yeast cells of P. brasiliensis to copper and iron depletion conditions, by real time qRTPCR. It was demonstrated a significant change in transcription lovel those of genes in the absence of copper, as well as in the combined absence of both metals. qRT-PCR was used to analyze the expression of Pbctr3 and Pbcrp (which encodes a protein responsive to copper) in yeast cells of P. brasiliensis derived from infected lungs and spleen at different time points of infection. The expression of Pbctr3 and Pbcrp was super-regulated during experimental infection. Taken together, these data suggest the importance of PbCtr3 and of absorbing copper / iron during the infectious process / O fungo Paracoccidioides brasiliensis é um patógeno humano com ampla distribuição na América Latina. O fungo causa a paracoccidioidomicose quando propágulos da fase miceliana atingem os pulmões do hospedeiro. O sucesso da infecção depende da aquisição de micronutrientes essenciais como o cobre, o qual é requerido como cofator por uma diversidade de enzimas importantes em processos biológicos essenciais, tais como: respiração, crescimento e aquisição de ferro. Estudos prévios, do Laboratório de Biologia Molecular, demonstraram que um transportador de cobre de alta afinidade (PbCTR3) é uma molécula altamente expressa e provavelmente necessária para o estabelecimento da infecção por P. brasiliensis. No presente estudo foram isoladas e caracterizadas as seqüências genômica e do cDNA que codificam para PbCTR3 de P. brasiliensis. O cDNA apresentou 582 pares de bases e codifica para uma proteína com 193 aminoácidos, massa molecular predita de 21,5 kDa e pI de 8.6. A seqüência genômica apresenta quatro exons interrompidos por três introns. Análises in silico foram realizadas no banco de dados do genoma estrutural de P. brasiliensis (http:www.broad.mit.edu/annotation/genome/paracoccidioides_brasiliensis/ MultiHome.html), onde genes envolvidos na manutenção da homeostase de cobre foram identificados e as seqüências utilizadas para a elaboração de um modelo de fatores envolvidos na manutenção da homeostase de cobre por P.brasiliensis. O comportamento transcricional do gene Pbctr3 e de genes envolvidos na manutenção da homeostase de cobre foram analisados durante a exposição de células leveduriformes de P. brasiliensis em condições de depleção de cobre e ferro por qRT-PCR em tempo real. Foi demonstrada uma alteração significativa no nível de transcrição dos genes na ausência de cobre, assim como na ausência combinada dos dois metais. qRT-PCR em tempo real foi utilizado para analisar a expressão de Pbctr3 e de Pbcrp (que codifica uma proteína responsiva ao cobre) em células leveduriformes de P. brasiliensis derivadas de pulmão e baço infectados, em diferentes tempos. A expressão de Pbctr3 e Pbcrp foi super-regulada durante a infecção experimental. Tomados em conjunto, esses dados sugerem a importância de Pbctr3 e do sistema de absorção cobre/ ferro durante o processo infeccioso

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2017-09-21T20:27:37Z No. of bitstreams: 2 Tese - Fabiana Ribeiro da Mata - 2017.pdf: 5224228 bytes, checksum: 062f7a43994431350fa0acd55b4f076c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-09-22T11:44:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Fabiana Ribeiro da Mata - 2017.pdf: 5224228 bytes, checksum: 062f7a43994431350fa0acd55b4f076c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-22T11:44:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Fabiana Ribeiro da Mata - 2017.pdf: 5224228 bytes, checksum: 062f7a43994431350fa0acd55b4f076c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-04-13 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Members of the genus Paracoccidioides are known pathogens of humans that can be isolated from different infection sites. To investigate the expression rates of proteins expressed by different isolates, of the genus Paracoccidioides, including one isolate of P. lutzii (Pb01), and three isolates of P. brasiliensis (Pb03, Pb339 and PbEPM83) using sodium acetate, as carbon source, proteins quantities were determined using label-free and data independent LC-MSE. Statistical analysis provided the comparison of proteins profiles in the isolates. A total of 1160, 1211, 1280 and 1462 proteins were reproducibly identified, and relatively quantified in P. lutzii e P. brasiliensis isolates Pb03, Pb339 e PbEPM83, respectively. Notably, a total of 526, 435, 744 and 747 proteins were differentially expressed among P. lutzii and the P. brasiliensis isolates Pb03, Pb339 and PbEPM83, respectively with a fold change equal or higher than 1.5. The analysis revealed the reorganization of metabolism through the induction of proteins related to gluconeogenesis, stress response and amino acid degradation in the four isolates evaluated. The differences between the isolates were observed as follows: greater increases in the expression levels of proteins belonging to the cycle of glyoxalate, TCA and respiratory chain, ethanol production and β-oxidation were observed in the isolatesPPEPM83 and Pb01; Cyclic and cyclocyclic proteins of the methylcitrate were induced in Pb339. Proteomic profiles indicate that the four isolates reorganize the metabolism for the use of acetate as a carbon source. / Membros do gênero Paracoccidioides são patógenos conhecidos de seres humanos que podem ser isolados de diferentes locais de infecção. Para investigar as taxas de expressão das proteínas expressas por diferentes isolados, do gênero Paracoccidioides, incluindo um isolado de P. lutzii (Pb01) e três isolados de P. brasiliensis (Pb03, Pb339 e PbEPM83) usando acetato de sódio, como fonte de carbono, As quantidades de proteínas foram determinadas usando o uso de LC-MSE independente de etiquetas e de dados. A análise estatística proporcionou a comparação de perfis de proteínas nos isolados. Um total de 1160, 1211, 1280 e 1462 proteínas foram identificadas de forma reprodutiva, e relativamente quantificadas em isolados de P. lutzii e P. brasiliensis Pb03, Pb339 e PbEPM83, respectivamente. Nomeadamente, um total de 526, 435, 744 e 747 proteínas foram diferencialmente expressas entre P. lutzii e os isolados de P. brasiliensis Pb03, Pb339 e PbEPM83, respectivamente, com uma mudança de dobra igual ou superior a 1,5. A análise revelou a reorganização do metabolismo através da indução de proteínas relacionadas à gliconeogênese, resposta ao estresse e degradação de aminoácidos nos quatro isolados avaliados. As diferenças entre os isolados foram observadas como segue: maiores aumentos nos níveis de expressão de proteínas pertencentes ao ciclo do glioxalato, TCA e cadeia respiratória, produção de etanol e β-oxidação foram observadas nos isoladosnPbEPM83 e Pb01; As proteínas do ciclo da e do ciclo do metilcitrato apresentaram induzidas no Pb339. Os perfis proteômicos indicam que os quatro isolados reorganizam o metabolismo para o uso do acetato como fonte de carbono.

Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-09-14T17:40:15Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Isabella Inês Rodrigues Rosa - 2016.pdf: 1910068 bytes, checksum: 8f551746fe8c21347507aecf98f02609 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-09-14T17:41:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Isabella Inês Rodrigues Rosa - 2016.pdf: 1910068 bytes, checksum: 8f551746fe8c21347507aecf98f02609 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-14T17:41:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Isabella Inês Rodrigues Rosa - 2016.pdf: 1910068 bytes, checksum: 8f551746fe8c21347507aecf98f02609 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-06-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Staphylococcus saprophyticus is a pathogenic bacterium of the urinary tract and the main etiological agent of urinary tract infections by Gram-positive bacteria. Although S. saprophyticus potentially can cause serious infections such as pyelonephritis, septicemia, endocarditis and nephrolithiasis, and also multidrug resistance has been reported, not much is known about the mechanisms used by this bacterium during infection. Secreted proteins might be essential on those mechanisms if their role is accomplished during phagocytosis by their assistance of an active infection in phagocytic cells, protecting against oxidative stress and increasing the persistence of bacterial cells within phagocytes, and / or causing lysis of the host cell. Recently our group identified the immunogenic protein SsaA in the secretome of S. saprophyticus. This protein had been previously identified in S. aureus proteome, and it appears to be controlled by regulatory systems for known virulence factors. It also presents similarities with lytic proteins and proteins that assist the persistence within phagocytic cells. However, no approach had analyzed the contribution of SsaA during infection, therefore, through the construction a cloning vector containing the S. saprophyticus gene ssaA, heterologous expression of the recombinant protein and the production of specific polyclonal antibodies, it was able to verify the interaction of SsaA and proteins from macrophages infected by bacterial cells. Through immunofluorescence microscopy, it was verified that the dispersion of SsaA is not limited to phagocytic cells but it was throughout their cytoplasm after internalization of the bacterium. These findings together with other evidence in the literature suggest that SsaA is used during infection by S. saprophyticus, more specifically during phagocytosis. Further approaches are required to confirm if SsaA has a lytic activity and also characterize this protein as a virulence factor, contributing to elucidate strategies used by S. saprophyticus during infection in the human host. / Staphylococcus saprophyticus é uma bactéria patogênica do trato urinário e principal agente etiológico de infecções urinárias por bactérias Gram-positivas. Apesar de potencialmente S. saprophyticus ocasionar infecções graves como pielonefrite, septicemia, nefrolitíase e endocardite, e relatos de multirresistência a antibióticos, relativamente pouco é conhecido sobre os mecanismos utilizados por esta bactéria durante infecção. Proteínas secretadas podem ser essenciais nesses mecanismos se seus papéis forem durante fagocitose auxiliando uma internalização ativa na célula fagocítica, protegendo contra o estresse oxidativo e aumentando a persistência de células bacterianas no interior de fagócitos, e/ou causando lise da célula hospedeira. Recentemente nosso grupo identificou a proteína imunogênica SsaA no secretoma de S. saprophyticus. Essa proteína já havia sido identificada em S. aureus como altamente imunogênica, e parece estar relacionada a fatores de virulência como o Antígeno Imunodominante A (IsaA), a proteína Urease, a hidrolase de peptideoglicano LytM, a Proteína Repressora de Toxinas (Rot) e a proteína de choque térmico HslU. Contudo, poucos estudos conseguem identificar a proteína SsaA secretada e nenhum analisa sua contribuição durante infecção por bactérias do gênero Staphylococcus. Através da construção de um vetor de clonagem contendo o gene ssaA de S. saprophyticus, expressão heteróloga da proteína recombinante e produção de anticorpos policlonais específicos, foi possível verificar a interação entre SsaA e proteínas de macrófagos infectados por células de S. saprophyticus. Através de microscopia de imunofluorescência, foi verificado que a secreção de SsaA não é limitada à fagossomos, mas esta proteína é dispersa em todo o citoplasma da célula fagocítica após internalização de células bacterianas. Os resultados encontrados sugerem que SsaA é utilizada por S. saprophyticus durante infecção, especificamente durante fagocitose. Estudos posteriores serão necessários para confirmar se SsaA possui atividade lítica e caracteriza-la como fator de virulência, contribuindo para elucidar estratégias utilizadas por S. saprophyticus durante infecção no hospedeiro humano.