• Refine Query
  • Source
  • Publication year
  • to
  • Language
  • 219
  • Tagged with
  • 219
  • 219
  • 219
  • 191
  • 191
  • 178
  • 31
  • 28
  • 27
  • 24
  • 17
  • 13
  • 13
  • 12
  • 11
  • About
  • The Global ETD Search service is a free service for researchers to find electronic theses and dissertations. This service is provided by the Networked Digital Library of Theses and Dissertations.
    Our metadata is collected from universities around the world. If you manage a university/consortium/country archive and want to be added, details can be found on the NDLTD website.
111

Inibição da atividade da Tirosinase por análogos do ácido Kójico

CARDOSO, Erica de Tássia Carvalho 14 November 2014 (has links)
Submitted by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2015-04-22T14:56:58Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_InibicaoAtividadeTirosinase.pdf: 1540557 bytes, checksum: bf7b5b8f8fb58780ffe88b1bcf2dcf67 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2015-04-22T17:03:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_InibicaoAtividadeTirosinase.pdf: 1540557 bytes, checksum: bf7b5b8f8fb58780ffe88b1bcf2dcf67 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-22T17:03:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_InibicaoAtividadeTirosinase.pdf: 1540557 bytes, checksum: bf7b5b8f8fb58780ffe88b1bcf2dcf67 (MD5) Previous issue date: 2014 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / A tirosinase é uma enzima chave para a biossíntese de melanina. É uma enzima “cobre-dependente” que pode existir em três estados intermediários: desoxi (Cu1+ -Cu1+), oxi (Cu 2+ - O2 -Cu2+) e met (Cu2+) - Cu2+). Apresenta atividade bifuncional, pois oxida fenóis ou catecóis em seus o-difenóis correspondentes, sendo que o processo de oxidação de fenóis pode ser descrito por cinética de Michaelis-Menten. Distúrbios na tirosinase estão associados com hiperpigmentação e escurecimento enzimático de frutas e fungos. Assim a busca por substâncias de origem natural ou sintética capazes de regular o comportamento desta enzima é fator chave para o tratamento de tais desordens. Nesta perspectiva, no presente trabalho buscou-se analisar bioquimicamente a atividade anti-tirosinase de análogos do ácido kójico derivados de 4H- pironas (S-01, S-02, S-03 e S-04) e derivados de diidropirano [3, 2-b] cromenodionas (S-05, S-06, S-07 e S-08), quimicamente planejadas por modelagem molecular no LPDF, do ICEN da UFPA. A cinética das substâncias S-02, S-04, S-06, S-07 e S-08 apresentaram inibição do tipo competitiva, semelhante ao padrão de inibição do ácido kójico, com valores de Ki de 145,0 ± 20,0 μM; 64,0 ± 10,0 μM; 4,0 ± 0,0 μM; 6,0 ± 0,0 μM; 9,0 ± 0,0 μM, respectivamente, e de 5,0 ± 0,0 μM para o ácido kójico, enquanto a substância S-01 apresentou uma inibição do tipo mista (Ki = 999,0 ± 150,0 μM). Já as substâncias S-03 e S-05 não apresentaram atividade inibitória. As substâncias testadas demonstraram alto grau de segurança tanto na integridade de membrana de eritrócitos em teste de hemólise, quanto na viabilidade em teste com MTT em culturas de fibroblasto MRC5, em cultura de células nervosas de retina de embrião de galinha e em melanoma B16F10. Assim, demonstrou-se que as substâncias S-02, S-04, S-06, S-07 e S-08 apresentam atividade como potentes inibidores de tirosinase, podendo ser candidatos no tratamento de desordens de pigmentação. / Tyrosinase is an enzyme’s key for melanin biosynthesis. It is a "copper-dependent" enzyme which exhibits three intermediate states: deoxy (Cu1+ -Cu1+), oxi (Cu 2+ - O2 -Cu2+) e met (Cu2+) - Cu2+). This enzyme has bifunctional activity since it can oxidize phenol or catechols in their corresponding o-diphenols. In addition, oxidation of phenols can be described by Michaelis-Menten kinetics. Hyperpigmentation disorders and enzymatic browning of fruit and fungi is associated with tyrosinase.Therefore the research for substances of natural or synthetic origin that could have an effective regulation on the behavior of this enzyme is a key factor of the treatment of such disorders. In this perspective, the present study consisted in analyze the biochemically anti-tyrosinase activity of kojic acid and its analogues derivatives from 4H-pyrones (S-01, S-02, S-03 and S-04) and derivatives from diidropirano [3, 2-b] cromenodionas (S-05, S-06, S-07 and S-08) chemically designed by molecular modeling in LPDF from ICEN UFPa. The kinetics of substances S-02, S-04, S-06, S-07 and S-08 showed competitive inhibition, similar to the pattern of inhibition of kojic acid with Ki values = 145,0 ± 20,0 μM; 64,0 ± 10,0 μM; 4,0 ± 0,0 μM; 6,0 ± 0,0 μM; 9,0 ± 0,0 μM, respectively, and 5,0 ± 0.0 μM for kojic acid, while S-01 had mixed type of inhibition (Ki = 999,0 ± 150,0 μM). Since the S-03 and S-05 substances showed no inhibitory activity. The substances tested demonstrated a high degree of safety both in the integrity of the erythrocyte membrane in the hemolysis test as in the test with MTT viability in cultures of MRC5 fibroblasts, culture of nerve cells from chicken embryo retina and B16F10 melanoma. Thus, it was demonstrated that S-02, S-04, S-06, S-07 and S-08 substances have potent activity as inhibitors of tyrosinase and may be candidates for the treatment of pigmentation disorders.
112

Variabilidade alélica e expressão do gene ABCA4 em sujeitos diagnosticados com a maculopatia de Stargardt: associação com a função e estrutura da retina e morfologia celular granulocítica

CARVALHO FILHO, Nelson Monte de 24 June 2015 (has links)
Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-22T12:41:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VariabilidadeAlelicaExpressao.pdf: 6674673 bytes, checksum: 0ec2d9f9a77ab69b8cf5669cccae4516 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-03-27T11:34:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VariabilidadeAlelicaExpressao.pdf: 6674673 bytes, checksum: 0ec2d9f9a77ab69b8cf5669cccae4516 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-27T11:34:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_VariabilidadeAlelicaExpressao.pdf: 6674673 bytes, checksum: 0ec2d9f9a77ab69b8cf5669cccae4516 (MD5) Previous issue date: 2015-06-24 / A maculopatia autossômica recessiva de Stargardt se caracteriza pela perda progressiva simétrica da visão na região central do campo visual em indivíduos entre a primeira e segunda décadas de vida. Também fazem parte do diagnóstico clínico a presença de lesões maculares pontuais de coloração amarelo-esbranquiçadas encontradas nas regiões foveal e parafoveal, além da deposição de lipofuscina gerando hipofluorescência e atrofia córiocapilar e do epitélio pigmentado da retina. A acuidade visual dos portadores da degeneração de Stargardt decresce com o seu progresso e tende a se estabilizar entre 20/200 (1,0 logMAR) a 20/400 (1,3 logMAR). Esta tese teve como objetivos a investigação da ocorrência de associações entre as variantes alélicas (mutações) e os níveis de expressão do gene ABCA4 com a morfologia dos granulócitos periféricos e os fenótipos clínicos, eletrofisiológicos e de estrutura da retina em pacientes portadores da maculopatia de Stargardt. Nos onze sujeitos selecionados foram identificadas quatro variantes do tipo não-sinônimas e três do tipo sinônimas. A combinação alélica L1395P/D1817E foi encontrada em 64% dos 22 cromossomos analisados sugerindo a ocorrência do efeito do fundador. Não foi possível a associação entre os genótipos e os fenótipos analisados. Os valores diferenciais de expressão do gene ABCA4 obtidos entre pacientes e grupo controle, bem como a prevalência de neutrófilos bastonados na circulação sanguínea periférica sugerem a possibilidade de servirem como biomarcadores para Stargardt. As imagens retinográficas e angiográficas obtidas permitiram a classificação em estágios I, II e III de comprometimento retiniano nos sujeitos investigados. O valores de espessura da região central da mácula dos pacientes foram bem menores do que aqueles obtidos para os controles, evidenciando a perda da camada de fotorreceptores. Os achados eletrorretinográficos de campo total em função do tempo de adaptação ao claro possibilitaram a caracterização das perdas funcionais nos sujeitos investigados. / The autosomal recessive Stargardt's maculopathy is characterized by symmetrical progressive loss of central vision in patients’ first and second decades of life. It is also part of the clinical diagnosis the presence of yellowish-white color specific macular lesions found in the parafoveal and foveal regions, besides lipofuscin deposition generating hypofluorescence and atrophy of choriocapillaris and retinal pigment epithelium. Visual acuity of the Stargardt’s degeneration carriers decreases with their progress and tend to stabilize between 20/200 (1.0 logMAR) to 20/400 (1.3 logMAR). This thesis aimed to investigate the occurrence of association between allelic variants (mutations) and ABCA4 gene expression levels with the peripheral granulocytes morphology and clinical phenotypes, electrophysiological and retinal structure in patients harboring Stargardt’s maculopathy. Four non-synonymous and three synonymous allelic variants were identified among eleven selected subjects. The allelic combination L1395P/D1817E was found in 64% of the 22 chromosomes analyzed suggesting the occurrence of founder effect. There were no association between genotypes and clinical phenotypes analyzed. The differential values obtained for ABCA4 gene expression between patients and controls, as well as the prevalence of banded neutrophils in the peripheral blood circulation suggest the possibility they could serve as biomarkers for Stargardt. The eye fundus and angiographic images were used for the classification in the stages I, II and III of retinal impairment in subjects investigated. The thickness values of the central region of the macula among patients were much lower than those obtained for the controls, indicating a loss of photoreceptor layer. Full-field electroretinographic findings of light adapted eyes during the course of time enabled the characterization of the functional losses in investigated subjects.
113

Avaliação de biomarcadores sorológicos em um estudo de busca ativa de casos novos de hanseníase em área hiperendêmica / Serological biomarker assessment in a study of active new cases finding for leprosy in a hiperendemic area

GOBBO, Angélica Rita 07 October 2016 (has links)
Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-03-27T13:22:11Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoBiomarcadoresSorologicos.pdf: 1278219 bytes, checksum: 62fbca646d7691c03df3cb6f6dd5321f (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-03-29T16:10:23Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoBiomarcadoresSorologicos.pdf: 1278219 bytes, checksum: 62fbca646d7691c03df3cb6f6dd5321f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-29T16:10:23Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AvaliacaoBiomarcadoresSorologicos.pdf: 1278219 bytes, checksum: 62fbca646d7691c03df3cb6f6dd5321f (MD5) Previous issue date: 2016-10-07 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / A hanseníase é uma doença infecciosa crônica caracterizada por alterações de sensibilidade tátil, térmica e dolorosa na pele e nervos periféricos. Devido a ausência de diagnóstico laboratorial para a hanseníase, novas ferramentas que contribuam para a identificação de casos são necessárias para permitir o tratamento dos doentes antes da progressão para incapacidades físicas. Nesse sentido, o presente estudo objetivou avaliar a contribuição de biomarcadores sorológicos para o diagnóstico precoce da hanseníase. Foi realizado um estudo de busca ativa no distrito de Mosqueiro - Belém – Pará onde todos os participantes foram examinados clinicamente por médicos hansenologistas experientes e então 5mL de sangue periférico foram coletados para posteriores quantificações dos anticorpos anti-ND-O-BSA, anti-LID-1 e anti-NDO-LID pela técnica de ELISA. A ação de busca ativa no distrito de Mosqueiro diagnosticou 104 casos novos entre 895 indivíduos avaliados (11.6%), indicando uma alta endemia oculta que coincide com a alta soroprevalência de anticorpos anti-ND-O-BSA observada entre os estudantes. Foi observada uma diferença significativa entre os pacientes com diagnóstico tardio e precoce, sobretudo nas formas multibacilares. Todos os biomarcadores testados demonstraram resultados promissores na detecção dos casos tardios, tal como relatado na literatura, no entanto para os casos precoces estas moléculas identificaram corretamente apenas 50% dos indivíduos. Nenhum dos biomarcadores avaliados apresentou sensibilidade capaz de identificar todos os casos novos de hanseníase, sejam eles precocemente ou tardiamente diagnosticados. Apesar da molécula LID-1 ter evidenciado uma baixíssima sensibilidade para o diagnóstico precoce, sua alta especificidade e acurácia sugere sua utilização como uma potencial ferramenta de triagem sorológica para a identificação de sujeitos assintomáticos com alto risco de adoecimento. Assim, concluiu-se que apesar de nenhum biomarcador ter revelado utilidade no diagnóstico sorológico, a detecção dos anticorpos anti-LID-1 apresentou uma possível aplicabilidade na triagem dos indivíduos com maior risco de desenvolver a doença, contribuindo indiretamente para o diagnóstico da hanseníase. / Leprosy is a cronic infection diasease clinically characterized by changes in tactile, thermal and painful sensitivity in skin and peripheral nerves. Due to the absence of laboratory diagnosis of leprosy, new tools that contribute for identification of cases are necessary for enable patient treatment before progression to physical disabilities. In this sense, the present study aimed evaluate serological biomarkers contribution for early diagnosis of leprosy. Was perfomed an active case finding study in Mosqueiro district, Belém – Pará. All individuals were clinically examined by experient leprologists doctors and than 5mL of peripheral blood were colleted for future titration of anti-ND-O-BSA, anti-LID-1 e anti-NDO-LID by ELISA. The action of active finding in Mosqueiro district diagnosed 104 new cases of leprosy between 895 subjects examined (11.6%), indicating a high hidden endemy that agree with the high seroprevalence between schoolchildren. Were observed a significant difference among patients with late or early diagnoses, mainly in multibacillary forms. All biomarkers tested showed promising results in detection of late cases, such as related in literature, however, for early cases those molecules identified correctly only 50% of patients. None of biomarker tested presented sufficient sensitivity to detect all leprosy patients, early or lately diagnosed. Besides, LID-1 molecule had evidenced a lower sensitivity for early cases, their high especificity and accuracy suggest their use as a potential tool for serological screening to identify assintomatic subjects with high risk of illness. Thus, we concludes that besides no biomarker had reveled utility as a serological diagnostic tool, the detection of anti-LID-1 presented a possible aplicability as a screening marker of subjects with increased risk to develop leprosy, contributing indirectly for leprosy diagnosis.
114

Avaliação in vitro do efeito da metformina no tratamento de câncer de mama triplo negativo

Guimarães, Isabella dos Santos 26 April 2013 (has links)
Made available in DSpace on 2016-12-23T13:49:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Isabella dos Santos Guimaraes.pdf: 1486152 bytes, checksum: 65f12f2a8d639d0b762766b845fea774 (MD5) Previous issue date: 2013-04-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Triple-negative breast cancer (TNBC) is a heterogeneous and poor prognostic disease, partially due to its ineligibility to target therapy, and the high relapse index, despite the initial satisfactory response to antineoplastic drugs. Therefore, the identification of alternative substances is urgent, as herein presented with regard to metformina and TNBC (lineage MDAMB231). Despite the low percentage of apoptotic/necrotic cells induced by metformin, 4.1% (10 μM) e 8.8% (54 mM), there was a discrete increase of cells in sub-G0, which is in agreement with the low value, despite doubled, of apoptosis/necrosis induced by metformina 54 mM. Metformin reverted ERK constitutive activation, possible antineoplastic mechanism; however, only reduced cellular proliferation at high doses (10 μM vs. 54 mM, 9.8% vs. 45.23%, respectively), possibly due to the modulation of other mechanisms of action. Paclitaxel 0.25 μM induced apoptosis/necrosis in 29% of the cells, which is comparable to the 36.34% of dead cells obtained by MTT. Despite the cell cycle arrest in G2/M that favours its mechanism of action, its antineoplastic efficacy can be compromised by ERK constitutive activation, which is related to taxane chemoresistance. Metformin 10 μM combined with paclitaxel 0,25 μM, although synergic with regard to the antineoplastic effect (dead cells = 53.20%), kept constant the induction of apoptosis/necrosis when compared to paclitaxel alone, as the benefit of arresting the cell cycle at G2/M can be overcome by ERK constitutive activation. When administered at their IC50, metformin 54 mM and paclitaxel 0,25 μM, the percentage of apoptotic/necrotic cells increased to 41%, which is comparable to the decrease in cell proliferation (59.9% of dead cells). Worthwhile pointing that: i) ERK constitutive activation was reversed, favoring paclitaxel toxicity; ii) the number of cells in sub-G0 increased. Indeed, among the 41% apoptotic/necrotic cells, 21.4% derived from late apoptosis, thus justifying sub-G0 expansion. The data point to mutual synergism between metformina and paclitaxel. Our findings support that, among other mechanisms of action, metformina is an indirect inhibitor of ERK, possibly of mTOR as well, explaining, therefore, its potential application in the treatment of TNBC, a major challenge of clinical oncology / O câncer de mama triplo-negativo (TNBC) configura doença heterogênea e de prognóstico ruim, dentre outras razões, por não ser responsivo às terapias-alvo e pelo elevado índice de relapso da doença apesar da responsividade inicial satisfatória aos antineoplásicos. Sendo assim, há urgência na identificação de substâncias alternativas, como ora apresentado em relação à metformina e TNBC (linhagem MDAMB231). Embora a porcentagem total de células em apoptose/necrose induzida por metformina seja pequena, 4,1% (10 μM) e 8,8% (54 mM), houve aumento discreto de células na fase sub-G0; aspecto concordante com o valor baixo, ainda que dobrado, de indução apoptose/necrose por metformina 54 mM. Metformina reverteu a ativação constitutiva de ERK, possível mecanismo antineoplásico da droga, mas somente reduziu a proliferação celular em doses elevadas (10 μM vs. 54 mM, 9,8% vs. 45,23%, respectivamente), possivelmente pela modulação de outros mecanismos de ação. Paclitaxel 0,25 μM promoveu apoptose/necrose em 29% das células, valor compatível os 36,34% de células mortas por MTT. Apesar da parada do ciclo celular em G2/M, favorecendo seu mecanismo de ação, sua eficácia antineoplásica limitada pode decorrer da sustentação da ativação constitutiva de ERK, já relacionada à quimiorresistência ao taxano. A combinação de metformina 10 μM com paclitaxel 0,25 μM, embora seja sinérgica quanto à ação antineoplásica (células mortas = 53,20%), manteve constante a indução de apoptose/necrose quando comparado ao paclitaxel sozinho, já que o benefício do aumento de células em G2/M pode ter sido sobreposto pela ativação de ERK. Quando administradas em suas IC50, metformina 54 mM e paclitaxel 0,25 μM, o percentual total de células apoptóticas/necróticas aumentou para 41%, valor mais próximo àquele de diminuição da proliferação celular (59,9% de células mortas). É notório ter havido: i) reversão da ativação constitutiva de ERK, favorecendo a citotoxicidade de paclitaxel; ii) aumento de células em sub-G0. De fato, dos 41% de células em apoptose/necrose, 21,4% derivaram de efeito apoptótico tardio, justificando a expansão de sub-G0. Os dados apontam para sinergismo mútuo entre metformina e paclitaxel. Nossos achados evidenciam que, dentre outros possíveis mecanismos, a metformina atua como inibidor indireto de ERK, possivelmente também de mTOR, explicando, portanto, seu uso potencial no tratamento do TNBC, um dos grandes desafios da clínica oncológica
115

Papel do domínio desintegrina da ADAM9 humana na modulação da migração e invasão de células tumorais

Martin, Ana Carolina Baptista Moreno 25 February 2011 (has links)
Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3510.pdf: 4191245 bytes, checksum: 06d51dcbc27b48e71902ca9fa212b568 (MD5) Previous issue date: 2011-02-25 / Universidade Federal de Sao Carlos / Cancer metastasis is the major cause of death, consequently studies to understand the molecular mechanisms involved in this process are essential to the knowledge of this disease. Cell migration and invasion are part of the metastatic process; therefore, molecules that are able to prevent cell migration can be used as model to develop new anti-metastasis drugs. The aim of this project was to study the mechanisms involved on metastasis, then the disintegrin domain of a human ADAM9 (A Disintegin and Metalloprotease), ADAM9D, was cloned in the pGEX-4T-1 plasmid and was expressed in E. coli AD494(DE3) in a soluble and active form. Assays were performed using mama and prostate cancer cells (MDA-MB-231 and DU- 145 respectively) with ADAM9D to verify its functions and the interactions with its ligands. ADAM9D was able to bind to different integrins, β1, αvβ5, αvβ3 and α2 in both cell lines, but only with α6 in DU-145 cells. ADAM9D inhibited cell adhesion to collagen type I in MDAMB- 231 cell, however it did not have the same effect in DU-145 cells. During the proliferation assay ADAM9D did not affect the proliferation in all cell lines tested (MDAMB- 231, DU-145 and human fibroblasts). ADAM9D decreased cell invasion and migration in the transwell and wound healing assays, MMP-2 and MMP-9 had lower expression. ADAM9D decreased cell invasion and migration (wound healing assay), although in the transwell migration assay, ADAM9D increased cell migration and MMP-2/-9 expression. Therefore, this project provides more information about the disintegrin domain of ADAM9 and its role in cell invasion and migration of prostate and mama cancer cells. / A metástase é a maior causa de morte no câncer, desta forma estudos que visam compreender os mecanismos nela envolvidos são importantes para o entendimento deste processo. A migração e invasão celular participam do processo metastático, portanto, estudos de moléculas que impeçam a migração podem fornecer as bases para o desenvolvimento de fármacos anti-metastáticos. Com o objetivo de estudar os mecanismos envolvidos na metástase, o domínio desintegrina de uma ADAM (A Desintegrin And Metalloprotease) humana, a ADAM9D foi clonada em vetor bacteriano pGEX-4T-1 e expresso em células E. coli AD494(DE3) de forma solúvel e ativa. Ensaios celulares nas linhagens de câncer de mama (MDA-MB-231) e próstata (DU-145) foram realizados utilizando a ADAM9D no intuito de verificar suas funções e interações com ligantes. A ADAM9D é capaz de interagir com as integrinas β1, αvβ5, αvβ3 e α2 nas duas linhagens celulares e com a subunidade α6 somente na linhagem DU-145. A ADAM9D inibiu a adesão ao colágeno tipo I na linhagem MDA-MB-231, entretanto, não teve a mesma capacidade na linhagem DU-145. No ensaio de proliferação celular a ADAM9D não apresentou atividade em nenhuma das linhagens celulares testadas (Fibroblastos humanos, MDA-MB-231 e DU-145). Nas células MDA-MB- 231 a ADAM9D inibiu a invasão e migração em ensaios transwell e de wound healing, além de inibir a expressão das metalopeptidases de matriz, MMP2 e MMP-9. A ADAM9D, nas células de câncer de próstata, inibiu a invasão e a migração em ensaio de wound healing. Entretanto, no ensaio de migração transwell a ADAM9D provocou um aumento da migração celular e um aumento na expressão das MMP-2 e MMP-9 no ensaio wound healing. Portanto, este estudo foi capaz de fornecer mais informações sobre as funções do domínio desintegrina, e sobre seu papel na migração e invasão de células tumorais de câncer de mama e de próstata.
116

Modelagem por homologia da tubulina do Plasmodium falciparum e o estudo de lignanas ariltetralônicas antimaláricas por docking molecular

Corrêa, Denis da Silva 16 June 2015 (has links)
Submitted by Izabel Franco (izabel-franco@ufscar.br) on 2016-09-20T14:33:37Z No. of bitstreams: 1 TeseDSC.pdf: 4230414 bytes, checksum: d505357e4ed13e446578eb00507beec7 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T12:36:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseDSC.pdf: 4230414 bytes, checksum: d505357e4ed13e446578eb00507beec7 (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T12:36:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseDSC.pdf: 4230414 bytes, checksum: d505357e4ed13e446578eb00507beec7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-21T12:36:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseDSC.pdf: 4230414 bytes, checksum: d505357e4ed13e446578eb00507beec7 (MD5) Previous issue date: 2015-06-16 / Não recebi financiamento / Malaria is an acute febrile disease caused by protozoan parasites of the genus Plasmodium, being the species P. falciparum responsible for the most severe forms and deaths caused by the disease. These parasites have developed resistance to commonly used drugs and therefore there is a need to develop new antimalarial agents. Aryltetralone lignans are compounds that show antiplasmodial activity in vitro against P. falciparum, but its mechanism of action is still not fully understood. In this work, we postulate a plausible mode of action of some aryltetralone lignans and according to the obtained results we suggest modifications to the ligands for a better biological activity. In order to achieve our objectives we first performed a search for similar chemical compounds, for which their macromolecular targets were known. From the results obtained, P. falciparum tubulin was selected as a potential target for these lignans. Since there is no experimentally determined three-dimensional structure for this protein, we performed a molecular homology modeling of P. falciparum tubulin and the structure of bovine tubulin complexed with colchicine was selected as template. The analysis of the obtained model showed that the three dimensional structure of Plasmodium tubulin is conserved in relation to the bovine tubulin with some important substitutions occurring in the colchicine binding site region: Ala250B by Ser248B, Ala316B by Cys314B and Ile318B by Met316B. Then, molecular docking of the aryltetralone lignans, colchicine and podophyllotoxin was performed in the modeled P. falciparum tubulin. The docking calculations results allowed to conclude firstly that, although the amino acid substitutions in the binding site, the colchicine binding mode in the P. falciparum tubulin is exactly the same as that already described in the literature for bovine tubulin. As for podophyllotoxin, a different binding mode from that described in the literature for bovine tubulin was obtained due to the replacement of Ala250B by Ser248B and the Val318B by Met316B. For the aryltetralone lignans studied, three different binding modes were obtained: one exhibited by compounds 1, 2 and 3, another by 4 and 6, and a third one by 5. The lignans 1, 2 and 3 are oriented in a way so that the C ring containing the dimethoxy or methylenedioxy group is positioned in the same region obtained for the ring containing the trimethoxy group in the case of colchicine and podophyllotoxin, performing a C-H...π interaction with Leu246B. Lignans 4 and 6 orient themselves with the aromatic ring C between Ala180A and Leu246B and being held in this position by C-H...π interactions. Lignan 5 is oriented with the aromatic ring C between Leu246B and Leu253B, performing C-H...π interactions with these residues, in a similar way to what was obtained with colchicine in this site. So the likely mechanism of action of the aryltetralone lignans studied here would be their binding to the same colchicine binding site in the tubulin protein of P. falciparum and thereby interrupting the divisions and other cellular functions. / A malária é uma doença febril aguda causada por protozoários parasitas pertencentes ao gênero Plasmodium, sendo a espécie P. falciparum a responsável pela maioria das formas severas e mortes pela doença. Estes parasitas desenvolveram resistência aos fármacos comumente utilizados e, portanto, existe a necessidade de se desenvolver novos agentes antimaláricos. Lignanas ariltetralônicas são compostos que apresentam atividade antiplasmodial in vitro contra o P. falciparum, porém seu mecanismo de ação ainda não é totalmente compreendido. Neste trabalho, conseguimos postular o modo de ação de algumas lignanas ariltetralônicas e, a partir dos resultados obtidos, sugerimos modificações nestes compostos de modo a obter uma melhoria na sua atividade biológica. Para isso, primeiramente foi realizada uma busca por compostos químicos semelhantes, cujos alvos macromoleculares eram conhecidos. A partir dos resultados obtidos, selecionou-se a tubulina do P. falciparum como potencial alvo para estas lignanas. Como não há estrutura tridimensional determinada experimentalmente para esta proteína, foi realizada a modelagem molecular por homologia da tubulina do P. falciparum, selecionando como molde a estrutura da tubulina bovina complexada com colchicina. A partir da análise do modelo construído, verificou-se que a estrutura tridimensional da tubulina do Plasmodium é conservada em relação à tubulina bovina e que ocorrem algumas substituições importantes na região do sítio de ligação da colchicina: Ala250B por Ser248B, Ala316B por Cys314B e Ile318B por Met316B. Em seguida, foi realizado o docking molecular das lignanas ariltetralônicas, da colchicina e da podofilotoxina na tubulina do P. falciparum. Os resultados do docking permitiram concluir primeiramente que, embora ocorram algumas substituições de aminoácidos no sítio, o modo de ligação da colchicina na tubulina do P. falciparum é exatamente o mesmo ao já descrito na literatura para a tubulina bovina. Já para a podofilotoxina, foi obtido um modo de ligação diferente do descrito na literatura para a tubulina bovina, devido à substituição da Ala250B pela Ser248B e da Val318B pela Met316B. Para as lignanas ariltetralônicas estudadas, foram obtidos três modos de ligação diferentes: um exibido pelos compostos 1, 2 e 3, outro para 4 e 6 e um terceiro modo exclusivo para 5. As lignanas 1, 2 e 3 orientam-se de modo que o anel C, que contém o grupo dimetóxi ou metilenodióxi, se posiciona na mesma região do sítio obtida para o anel contendo o grupo trimetóxi da colchicina e da podofilotoxina, realizando uma interação C–H...π com a Leu246B. As lignanas 4 e 6 orientam-se com o anel aromático C entre a Ala180A e a Leu246B, sendo mantido nesta posição por interações C–H...π. No caso da lignana 5, esta se orienta com o anel aromático C entre a Leu246B e Leu253B, realizando interações C– H...π com estes resíduos, semelhante ao que foi obtido para a colchicina neste sítio. Assim, o mecanismo provável de ação das lignanas ariltetralônicas aqui estudadas passaria pela sua ligação ao mesmo sítio de ligação da colchicina na proteína tubulina do P. falciparum e, com isso, interrompendo as divisões e outras funções celulares.
117

Construção de um vetor viral, baseado no DNA-A do Tomato rugose mosaic virus (ToRMV), para a indução de silenciamento gênico em plantas hospedeiras / Construction of a viral vector based on DNA-A of Tomato rugose mosaic virus (ToRMV) for induction of gene silencing in host plants

Cardoso, Mariana Santos 20 February 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2015-03-26T13:42:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 737365 bytes, checksum: 3b9e993a4f8a367d7f1b82a2dded22f8 (MD5) Previous issue date: 2009-02-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Begomoviruses belong to the Geminiviridae family which includes viruses with genomes containing one or two single stranded DNA molecules within icosahedral geminate particles. Begomoviruses are transmitted by the whitefly Bemisia tabaci and may cause diseases of economical importance in several crops mainly in tropical and subtropical regions. In Brazil there are several reports of begomovirus causing serious losses to the common bean and tomato crops, and sporadic reports of infection of soybean. Virus-induced gene silencing (VIGS) is an attractive and fast alternative for studying the expression and function of genes because it does not require plant transformation. Viruses with RNA or DNA genomes have been successfully used as vectors to induce gene silencing in plants. However, there are few examples of efficient vectors for inoculation of tomato and soybean. The main goal of this work was to build a viral vector based on the DNA-A of the begomovirus Tomato rugose mosaic virus (ToRMV) to induce gene silencing in plants of soybean, tomato and Nicotiana benthamiana. The viral vector, designated pToR-A1.4ΔCP, was built from an infectious ToRMV-A clone from which the gene encoding the capsid protein was removed and replaced by the multiple cloning site of the plasmid vector pBluescript KS+ (pKS+). Like other begomoviruses, ToRMV does not require the capsid protein to cause a systemic infection. The construction of the viral vector was confirmed by PCR, enzymatic cleavage and DNA sequencing. To be used on gene silencing experiments, fragments from the following genes were PCR amplified from cDNA clones: phytoene desaturase (PDS) from soybean and tomato, myo-inositol-1-phosphate synthase (MIPS) from soybean and stachyose synthase (STS) from soybean. All fragments were amplified with primers contained restriction sites for cloning. After amplification, the fragments were cloned in pGEM-T Easy vector, sequenced and aligned to the corresponding cDNAs to confirm their identity. To clone these fragments in the viral vector they were cleaved out of the pGEM-T Easy vector, purified and cloned into the pToR-A1.4ΔCP vector previously cleaved at the multiple cloning site with the same enzymes used to cleave the plasmid vector. The ligation reaction used T4 DNA ligase and ultracompetent Escherichia coli cells were transformed by heat shock. Transformants colonies were analyzed by PCR and enzymatic cleaved. Systemic infection of soybean, tomato and Nicotiana benthamiana plants with the empty pToR-A1.4ΔCP vector co-inoculated with ToRMV DNA-B was checked by PCR 21 days after inoculation. In the case of N. benthamiana, the viral vector presented 82% infectivity, indicating the high potential of this vector for VIGS studies in this plant species. In the case of soybean and tomato, the viral vector presented low replication efficiency. New infectivity tests need to be done to confirm these results. It is expected that this viral vector will represent an alternative for functional genomic studies and for the analysis of genes involved in several biological processes. / Os begomovírus pertencem à família Geminiviridae, que inclui vírus com genoma composto por uma ou duas moléculas de DNA circular de fita simples, encapsidado em partículas icosaédricas geminadas. Os begomovírus são transmitidos pela mosca branca Bemisia tabaci e causam doenças de importância econômica em diversas culturas, principalmente em regiões tropicais e subtropicais. No Brasil, há diversos relatos de begomovírus causando sérias perdas nas culturas do feijoeiro e tomateiro e relatos esporádicos de incidência na cultura da soja. O silenciamento gênico induzido por vírus (VIGS) é uma alternativa atraente e rápida para o estudo da expressão e função de genes, pois não há necessidade de transformação genética da planta. Vírus com genoma de RNA e de DNA têm sido utilizados com sucesso como vetores para indução de silenciamento gênico em plantas. Entretanto, existem poucos vetores eficientes para a inoculação em plantas de tomate e de soja. O objetivo deste trabalho foi a construção de um vetor viral, baseado no DNA-A do begomovírus Tomato rugose mosaic virus (ToRMV), para a indução do silenciamento de genes em plantas de soja, tomate e Nicotiana benthamiana. O vetor viral, denominado pToR-A1.4ΔCP, foi construído a partir de um clone infeccioso do ToRMV-A do qual foi removido o gene da proteína capsidial, substituindo pelo sítio múltiplo de clonagem do vetor pBluescript KS+ (pKS+). Assim como outros begomovírus, o ToRMV não requer a proteína capsidial para causar infecção sistêmica. A construção do vetor viral foi confirmada por PCR, clivagem enzimática e sequenciamento. Para serem utilizados em experimentos de silenciamento gênico, fragmentos referentes aos genes fitoeno dessaturase (PDS) de soja e tomate, myo-inositol- 1-fosfato sintase (MIPS) de soja e estaquiose sintase (STS) de soja foram isolados a partir de cDNA dessas plantas, utilizando primers específicos, contendo sítios de restrição adequados para as clonagens. Após a amplificação, todos os fragmentos obtidos foram clonados em pGEM-T Easy, sequenciados e sua identificação foi confirmada por meio de alinhamento utilizando o algoritmo BLASTn. Para a clonagem no vetor viral, os fragmentos foram liberados do vetor pGEM-T Easy com as enzimas de restrição adequadas, purificados e inseridos no vetor pToR-A1.4ΔCP, previamente clivado em seu sítio múltiplo de clonagem com as mesmas enzimas. A reação de ligação foi realizada utilizando T4 DNA ligase e células de Escherichia coli ultracompetentes foram transformadas por meio de choque térmico. Os transformantes foram analisados por PCR e reação de clivagem enzimática. A infecção sistêmica de plantas de soja, tomate e Nicotiana benthamiana pelo vetor pToR-A1.4ΔCP vazio, inoculado conjuntamente com o DNA-B do ToRMV, foi diagnosticada via PCR aos 21 dias após a inoculação. Em N. benthamiana, o vetor viral apresentou 82% de infectividade, indicando um grande potencial de uso em estudos de VIGS nessa planta. Já em plantas de soja e tomate, o vetor viral apresentou baixa taxa de replicação. Portanto, novo teste de infectividade deve ser realizado para confirmar os resultados obtidos. Dessa forma, espera-se que este vetor viral sirva como um complemento e uma alternativa em estudos de genômica funcional e na análise de genes envolvidos em vários processos biológicos.
118

Prospec??o de genes de interesse biotecnol?gico : uma abordagem metagen?mica

Silva, Rita de C?ssia Barreto da 27 February 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RitaCBS.pdf: 230650 bytes, checksum: bb819a094849de9d25290b1c27ab5346 (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / The total number of prokaryotic cells on Earth has been estimated at 4 to 6x1030 and only about 1% of microorganisms present in the environment can be cultivated by standard techniques of cultivation and plating. Therefore, it is a huge biological and genetic pool that can be exploited, for the identification and characterization of genes with biotechnological potential. Within this perspective, the metagenomics approach was applied in this work. Functional screening methods were performed aiming to identify new genes related to DNA repair and / or oxidative stress resistance, hydrocarbon degradation and hydrolytic activities (lipase, amylase and protease). Metagenomic libraries were built utilizing DNA extracted from soil samples collected in Jo?o C?mara RN. The libraries were analyzed functionally using specific substrate containing solid medium (hydrolytic activity), supplemented with H2O2 (DNA repair and / or resistance to oxidative stress) and liquid medium supplemented with light Arabian oil (activity, degradation of hydrocarbons). After confirmation of activity and exclusion of false-positive results, 49 clones were obtained, being 2 positive for amylase activity, 22 resistant to oxidative stress generated by H2O2 and 25 clones active for hydrocarbons degradation. Analysis of the sequences showed hypothetical proteins, dienelactona hydrolase, DNA polymerase, acetyltransferase, phosphotransferase, methyltransferase, endonucleases, among other proteins. The sequence data obtained matched with the functions tested, highlighting the success of metagenomics approaches combined with functional screening methods, leading to very promising results / O n?mero total de c?lulas procari?ticas na Terra tem sido estimado em 4 a 6x1030 sendo que apenas cerca de 1% dos microrganismos presentes no meio ambiente pode ser cultivado, atrav?s de t?cnicas padr?o de cultivo e plaqueamento, se apresentando, portanto, como um enorme pool biol?gico e gen?tico que pode ser explorado, visando a identifica??o e a caracteriza??o de genes com potencial biotecnol?gico. Dentro desta perspectiva, a abordagem metagen?mica foi aplicada neste trabalho a partir de metodologias de sele??o funcional visando ? identifica??o de novos genes relacionados ao reparo de DNA e/ou resist?ncia a estresse oxidativo, genes relacionados com atividade de degrada??o de hidrocarbonetos, e atividade hidrol?tica (lipase, amilase e protease). Com esse objetivo, uma biblioteca metagen?mica, constru?da a partir de amostras de solo coletadas no munic?pio de Jo?o C?mara RN, foi analisada funcionalmente utilizando meios s?lidos contendo substratos espec?ficos (atividade hidrol?tica), suplementados com H2O2 (reparo de DNA e/ou resist?ncia a estresse oxidativo) e meio liquido suplementado com ?leo ?rabe leve (atividade de degrada??o de hidrocarbonetos). Ap?s confirma??o da atividade e exclus?o de falsos-positivos foram obtidos 49 clones, sendo 2 positivos para atividade amilase, 22 resistentes ao estresse oxidativo gerado por H2O2 e 25 com atividade de degrada??o de hidrocarbonetos, cuja an?lise das seq??ncias revelou,al?m de prote?nas hipot?ticas, dienolactona hidrolase, DNA polimerases, acetiltransferase, fosfotransferase, metiltransferase, endonucleases entre outras, cuja coer?ncia com as fun??es ensaiadas, ressalta o sucesso da abordagem metagen?mica aliada a metodologias funcionais e, os resultados obtidos bastante promissores. PALAVRAS CHAVE: Metagenoma, Biotecnologia
119

Caracteriza??o in situ e diversidade gen?tica de algodoeiros moc?s (Gossypium hissutum ra?a marie galante) da Regi?o Nordeste do Brasil / In situ characterization of moco cotton plants (Gossypium hirsutum race marie galante) of Brazil s Northeast region

Menezes, Ivandilson Pessoa Pinto de 26 February 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IvandilsonPPM.pdf: 2514597 bytes, checksum: 43b19b0aeeca04f9d3f3a1defc9d82cc (MD5) Previous issue date: 2009-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Brazil is one of the major centers of diversity for polyploid cotton plants; these plants belong to the genus Gossypium, which has three known species: G. hirsutum, G. barbadense and G. mustelinum. The Northeast is the only region where the three species occur, the last group being endemic. Northeast s cotton plants can be important sources of variability for genetic breeding. It is believed that great part of local diversity is being lost, due to economic, political, cultural and agricultural problems. In an attempt to mitigate this loss and delineate conservation strategies it is necessary to know how the species are found where they occur. The objective was to characterize and determine how plants are maintained in situ in the states of Maranh?o, Piau?, Cear?, Rio Grande do Norte and Para?ba at the beginning of the XXI century. The in situ characterization of G. hirsutum and G. barbadense was conducted through structured interviews with the cotton plants owners and through the analysis of the environment. The data were collected during expeditions undertaken between the years 2004 to 2005. Twenty-two plants were collected in the state of Para?ba, forty-four in the state of Rio Grande do Norte, one hundred and forty-six in the state of Cear?, forty in the state of Maranh?o and ninety-one plants in the state of Piau?. All plants collected in the states of Para?ba and Rio Grande do Norte belonged to moco type. Moco cotton plants also predominated in the other states, representing 92%, 62% and 78% of plants collected in Cear?, Piau? and Maranh?o, respectively. The other cotton plants collected belong to the species G. barbadense. The cotton plants were found in situ as dooryard plants, roads side, feral populations, cultivation or local varieties. Great part were dooryard plants (45.2%), being major in Piau? and Maranh?o. Cultivation predominated in Cear?; in Rio Grande do Norte feral populations were the most frequent and, in Para?ba, local varieties. The maintenance of moco plants is related, mainly, to the phytotherapic domestic use (20.9%) and to confection of lamp wicks (29.7%). Few inhabitants in Para?ba, Rio Grande do Norte, Piau? and none in Maranh?o used harvest the plants, storage the seeds or gin; however, in Cear?, 40.5% of owners affirmed that they harvested and commercialized the fiber. It was found that the maintenance of species is dependent of the fragile cultural habits of local inhabitants, therefore the maintenance in situ is not a suitable way to conservation of genetic resources. The efforts must be directed to the continuity of collections, maintenance and characterization ex situ / O Brasil ? um dos importantes centros de diversidade de algodoeiros polipl?ides pertencente ao g?nero Gossypium, com 3 esp?cies conhecidas: G. hirsutum, G. barbadense e G. mustelinum. O Nordeste ? a ?nica regi?o com ocorr?ncia das tr?s esp?cies, sendo a ?ltima end?mica. Os algodoeiros desta regi?o podem ser fontes importantes de variabilidade para o melhoramento gen?tico. Acredita-se que grande parte da diversidade local esteja sendo perdida, devido a problemas econ?micos, pol?ticos, culturais e agr?colas. Na tentativa de mitigar tal perda e delinear estrat?gias de conserva??o ? necess?rio conhecer como as esp?cies se encontram no local em que ocorrem. Objetivou-se caracterizar e determinar o modo com que as plantas s?o mantidas in situ nos estados do Maranh?o, Piau?, Cear?, Rio Grande do Norte e Para?ba no inicio do s?culo XXI. A caracteriza??o in situ de G. hirsutum e G. barbadense foi realizada por meio de entrevista estruturada com o propriet?rio e pela an?lise do ambiente. Os dados foram tomados durante expedi??es empreendidas entre os anos de 2004 a 2005. Foram coletadas 22 plantas no estado da Para?ba, 44 no estado do Rio Grande do Norte, 146 no estado do Cear?, 40 no estado do Maranh?o e 91 plantas no estado do Piau?. Todas as plantas coletadas nos estados da Para?ba e Rio Grande do Norte eram do tipo moc?. O algodoeiro moc? tamb?m predominou nos demais estados, representando 92%, 62% e 78% das plantas coletadas no Cear?, Piau? e Maranh?o, respectivamente. Os demais algodoeiros coletados pertencem a esp?cie G. barbadense. Os algodoeiros moc?s foram encontrados in situ na forma de planta de fundo de quintal, beira de estrada, feral, lavoura, variedade local. Em grande parte eram do tipo fundo de quintal (45,2%), sendo maioria no Piau? e Maranh?o. No Cear? predominou o tipo lavoura, no Rio Grande do Norte tipo feral e na Para?ba variedades locais. A manuten??o das plantas do tipo moc? est? ligada, principalmente, ao uso dom?stico fitoter?pico (20,9%) e confec??o de pavios para candeeiro (29,7%). Poucos moradores na Para?ba, Rio Grande do Norte, Piau? e nenhum no Maranh?o apresentaram o h?bito de realizar a colheita, armazenamento e beneficiamento das sementes, entretanto no Cear? 40,5% dos propriet?rios afirmaram realizar a colheita e comercializar a fibra. Verificou-se que a manuten??o da esp?cie ? dependente dos fr?geis h?bitos culturais da popula??o local, portanto a manuten??o in situ n?o ? um meio adequado ? conserva??o dos recursos gen?ticos. Os esfor?os devem ser direcionados para a continuidade das coletas, caracteriza??o e manuten??o ex situ
120

An?lise citogen?tica de c?lulas-tronco derivadas do subendot?lio da veia umbilical humana

Duarte, Denise de Medeiros 26 February 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DeniseMD.pdf: 54846 bytes, checksum: 61beb5b55055ae5d403c739177202529 (MD5) Previous issue date: 2009-02-26 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Mesenchymal stem cells (MSCs) are known as a population of multi-potential cells able to proliferate and differentiate into multiple mesodermal tissues including bone, cartilage, muscle, ligament, tendon, fat and stroma. Several applications of the study of EC can be emphasized the therapeutic techniques such as guided bone regeneration by implantation of EC in the affected site, without the need for bone grafts, using titanium as a vehicle. The process of cryopreservation is essential for the maintenance of cell cultures, since the cell line is frozen, it can be maintained in liquid nitrogen for an indefinite period and then thawed for therapeutic or experimental purposes. The aim of this study was to isolate a population of MSCs derived from the subendothelium of the umbilical vein human (MSCs-SUVH) to assess cytogenetic analysis by the possibility of appearance of chromosomal changes in two different situations: MSCs-SUVH regarding the process of cryopreservation and MSCs-SUVH grown on the surface of titanium. Flow cytometry analysis revealed that, this cell population was positive for the markers CD29, CD73 and CD90, but there was no expression of hematopoietic lineage markers, such as CD14, CD34 and CD45 and demonstrated capacity for osteogenic differentiation. The chromosomes obtained from the primary culture of MSCs-SUVH were analyzed by GTW banding technique, and results are described as guidelines to ISCN 2005. There was not the emergence of clonal chromosomal changes in the MSCs-SUVH in different situations analyzed. However one of the strings presented a balanced paracentric inversion, probably a cytogenetic constitutional alterations, which was present before and after the experimental situations that the MSCs-SUVH was submitted / C?lulas-tronco mesenquimais (CTMs) s?o conhecidas como uma popula??o de c?lulas capazes de se proliferar e diferenciar em m?ltiplos tecidos de origem mesod?rmico incluindo osso, cartilagem, m?sculo, ligamento, tend?o, gordura e estroma. Das diversas aplica??es do estudo das CTMs podem-se ressaltar as t?cnicas terap?uticas como a regenera??o ?ssea guiada atrav?s da implanta??o de CTMs no local afetado, sem a necessidade de enxertos ?sseos, usando o tit?nio como ve?culo. O processo de criopreserva??o ? essencial para a manuten??o de cultivos celulares, uma vez que a linhagem celular ? congelada, a mesma pode ser mantida em nitrog?nio l?quido por tempo indeterminado e depois descongelado para fins experimentais ou terap?uticos. Deste modo, o objetivo desse trabalho foi isolar uma popula??o de c?lulas-tronco mesenquimais derivadas do subendot?lio da veia umbilical humana (CTMs-SVUH) para avaliar atrav?s da an?lise citogen?tica a possibilidade de surgimento de altera??es cromoss?micas em duas diferentes situa??es: CTMs-SVUH frente ao processo de criopreserva??o e CTMs-SVUH cultivadas sobre a superf?cie de tit?nio. An?lise por citometria de fluxo revelou que, esta popula??o celular foi positiva para os marcadores CD29, CD73 e CD90, mas foram negativas para marcadores de linhagem hematopoi?tico como, CD14, CD34 e CD45 e demonstraram capacidade de diferencia??o osteog?nica. Os cromossomos obtidos a partir da cultura prim?ria de CTMs-SVUH foram analisados atrav?s da t?cnica de bandeamento GTW, e os resultados descritos conforme orienta??es do ISCN 2005. N?o houve o aparecimento de altera??es cromoss?micas clonais nas CTMs-SVUH nas diferentes situa??es analisadas. Entretanto um dos cord?es apresentou uma invers?o parac?ntrica balanceada, provavelmente uma altera??o citogen?tica constitucional, que esteve presente antes e depois das situa??es experimentais a que as CTM-SVUH foram submetidas

Page generated in 0.0317 seconds