Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-07T10:43:43Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vanessa Bernardes - 2014.pdf: 2035312 bytes, checksum: 8b960a119417d6138d7c9fbbdf6c6ad0 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-07T10:46:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vanessa Bernardes - 2014.pdf: 2035312 bytes, checksum: 8b960a119417d6138d7c9fbbdf6c6ad0 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-07T10:46:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vanessa Bernardes - 2014.pdf: 2035312 bytes, checksum: 8b960a119417d6138d7c9fbbdf6c6ad0 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-03-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Molecular markers are identifiable DNA sequences found at specific sites in the genome and transmitted by the standard laws of inheritance from one generation to the next. Markers known as microsatellite are indicated for genetic population analysis; due they are widely distributed in the genome and their high polymorphic information content per locus. To support different management practices, genebanks, conservation studies is important to perform the analysis of genetic variability in natural populations of the species of interest. In the biome Cerrado there are inumerous medicinal and fruit trees that are used in a extractive way, among them are those of the gender Byrsonima sp. popularly known as murici, belonging to the family Malpighiaceae. In Brazil presents about 70 species with wide distribution in the Cerrado. The murici is a multi- potential plant and although not be domesticated, its economic exploitation can be viable. In this context, the objective was to develop a set of microsatellite markers for species Byrsonima cydoniifolia A. JUSS. and test the potential transferability of this set of markers for species Byrsonima crassifolia L. Kunth. The microsatellite regions were isolated using genomic libraries enriched for repetitive regions and then they were used for primer design. Using the primers designed temociclagem conditions were tested and the products were characterized using the DNA of 90 individuals of B. cydoniifolia and 24 indivuduals of B. crassifolia. Of these, 14 loci were polymorphic and 3 monomorphic in three populations of B. cydoniifolia. The number of alleles ranged from 3 to 17, with an average of 10.45 alleles per locus. The observed heterozygosity was similar to the expected heterozygosity, the values ranged from 0.20 to 0.92 and 0.43 to 0.92; respectively. 39 private alleles were identified. This set of markers showed high combined probability of paternity exclusion (Q) equal to 0.999 and combined probability of identity (I) equal to I=7.84x10-1. The global values for the fixation index (FIS) were not significant (P<0.05), whereas the values of FST=0,082 and FIT=0,143 were significant. For Byrsonima crassifolia species, nine pairs of primers produced good patterns of cross amplification in the study population, with a mean of 7.56 alleles per locus. The observed heterozygosity ranged from 0.250 to 0.958, which was higher than the expected heterozygosity ranging from 0.223 to 0.905. The combined probability of paternity exclusion (Q) was equal to 0.99847 and high combined probability of identity equal to 6.42x10-9. The strategy of development of microsatellite markers from the genomic library enriched methodology was efficient to generate a panel with eleven polymorphic microsatellite markers for B. cydoniifolia and nine polymorphic microsatellite markers successfully transferred to B. crassifolia, providing a useful tool for population genetic studies not only for the species B. cydoniifolia and B. crassifolia, but possibly for other related species evolutionarily. / Marcadores moleculares são sequências de DNA identificáveis, encontrados em locais específicos do genoma e transmitidos pelas leis padrão de herança de uma geração para a seguinte. Os marcadores moleculares conhecidos como microssatélites são indicados para análises genético-populacionais, por serem amplamente distribuídos no genoma e apresentarem alto conteúdo de informação polimórfica por loco. Para subsidiar diferentes práticas de manejo, bancos de germoplasma e estudos de conservação é importante realizar a análise da variabilidade genética nas populações naturais das espécies de interesse. No bioma Cerrado encontram-se inúmeras espécies medicinais e frutíferas que são utilizadas de forma extrativista, dentre elas estão as do gênero Byrsonima sp., conhecidas popularmente como murici, que são pertencentes à família Malpighiaceae. No Brasil, existem cerca de 70 espécies com ampla distribuição no Cerrado. O murici é uma planta de múltiplas potencialidades e apesar de não ser domesticada, a sua exploração econômica apresenta potencial. Nesse contexto, o objetivo do trabalho foi desenvolver um conjunto de marcadores microssatélites para a espécie Byrsonima cydoniifolia A. JUSS. e testar o potencial de transferibilidade deste conjunto de marcadores para a espécie Byrsonima crassifolia L. Kunth. As regiões microssatélites foram isoladas utilizando bibliotecas genômicas enriquecida para regiões repetitivas e, posteriormente, as mesmas foram utilizadas para o desenho de primers. A partir dos primers desenvolvidos foram testadas condições de temociclagem e seus produtos foram caracterizados utilizando o DNA de 90 indivíduos de B. cydoniifolia e 24 indivíduos de B. crassifolia. Das 60 sequências obtidas, foi possível identificar 22 regiões microssatélites e desenhar pares de primers para 17. Destes, 14 locos apresentaram polimorfismo e três foram monomórficos em três populações de B. cydoniifolia. O número de alelos variou de 3 a 17, com uma média de 10,45 alelos por loco. A heterozigosidade observada foi semelhante à heterozigosidade esperada, com os valores variando de 0,20 a 0,92 e 0,43 a 0,92, respectivamente. Foram identificados 39 alelos privados. Este conjunto de marcadores apresentou alta probabilidade combinada de exclusão de paternidade (Q) igual a 0,999 e probabilidade de identidade combinada (I) igual a I=7,84x10-1. Os valores globais obtidos para o índice de fixação (FIS) não foram significativos (P<0,05), enquanto que os valores de FST=0,082 e FIT=0,143 foram significativos. Para a espécie Byrsonima crassifolia, nove pares de primers produziram bons padrões de amplificação cruzada na população avaliada, apresentando uma média de 7,56 alelos por loco. A heterozigosidade observada variou de 0,250 a 0,958, maior do que a heterozigosidade esperada, que variou de 0,223 a 0,905. A probabilidade combinada de exclusão de paternidade (Q) foi alta igual a 0,998 e a probabilidade combinada de identidade igual a 6,42x10-9. A estratégia de desenvolvimento de marcadores microssatélites a partir da metodologia de biblioteca genômica enriquecida foi eficiente para gerar um painel com onze marcadores microssatélites polimórficos para B. cydoniifolia e nove marcadores microssatélites polimórficos transferidos com sucesso para B. crassifolia, disponibilizando uma ferramenta útil para estudos genético-populacionais não só para as espécies B. cydoniifolia e B. crassifolia, mas possivelmente para outras espécies próximas evolutivamente.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-07T11:33:43Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Macks Wendhell Gonçalves - 2015.pdf: 2230980 bytes, checksum: 89b6fe4e650d5cf40d848556e6b1de0a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-07T11:35:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Macks Wendhell Gonçalves - 2015.pdf: 2230980 bytes, checksum: 89b6fe4e650d5cf40d848556e6b1de0a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-07T11:35:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Macks Wendhell Gonçalves - 2015.pdf: 2230980 bytes, checksum: 89b6fe4e650d5cf40d848556e6b1de0a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-02-20 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Amphibian populations have declined in many areas of the world. These declines seem to have worsened over the past 25 years and amphibians are now more threatened than other taxa, such as mammals or birds. Numerous factors contribute to this decrease; however, environmental pollution has recently been cited as a major factor. These vertebrates are important in natural control of several pests in natural and agricultural areas, where they are constantly exposed to large amounts of pesticides. Genotoxicity studies with amphibians are important to detect indicator species of environmental change. Amphibians are particularly sensitive to these variations due to their behavioral and physiological characteristics, such as, permeable skin (cutaneous respiration), low mobility and life cycle with simultaneous dependence of the aquatic and terrestrial environment. In this context, these animals could be used as bioindicators of the environmental quality in genotoxicity and mutagenicity studies. The aim of this study was to analyze the genomic damage in tadpoles of Dendropsophus minutus and Physalaemus cuvieri sampled in perturbed and natural areas, by the comet assay and micronucleus test. We found that the tadpoles of D. minutus and P. cuvieri collected in perturbed areas had the highest extensions of DNA damage compared to the tadpoles of natural areas. Tadpoles sampled in soybean crop areas had higher DNA damage, followed by those sampled in the cornfields. In contrast, the frequency of DNA damage in tadpoles of natural areas were significantly lower in relation to DNA damage suffered by tadpoles of agricultural areas. Thus, we can conclude that tadpoles of D. minutus and P. cuvieri sampled in this study can be considered excellent sentinel organisms, as they were sensitive to environmental changes. In addition, we can highlight the advantages of using the comet assay in environmental genotoxicity studies, such as its speed, high sensitivity in detecting DNA damage in the genome of amphibians, for a relatively low cost. However, it is necessary to invest in the standardization of methodologies for field studies, thus the results could be compared between different laboratories, and make environmental genotoxicity studies, involving aquatic organisms, more informative and applicable as a practical laboratory routine. / Populações de anfíbios tem diminuído em diversas áreas do mundo. Estes declínios têm se agravado nos últimos 25 anos, fazendo com que esses animais sejam agora considerados mais ameaçados do que outros táxons como por exemplo, mamíferos e aves. Numerosos fatores contribuem para esse decréscimo, no entanto, a poluição do meio ambiente tem sido recentemente citada como um dos principais fatores. Estes vertebrados são importantes no controle natural de pragas em áreas naturais e agrícolas, onde estão constantemente expostos a grandes quantidades de pesticidas. Estudos de genotoxicidade com anfíbios anuros se fazem importantes para se detectar espécies indicadoras de mudanças ambientais. Os anfíbios são particularmente sensíveis a essas variações devido às suas características comportamentais e fisiológicas, tais como, pele permeável (respiração cutânea), pouca mobilidade e ciclo de vida com dependência simultânea do ambiente aquático e terrestre. Neste contexto, estes animais podem ser utilizados como bioindicadores da qualidade ambiental em estudos de genotoxicidade e mutagenicidade. O objetivo deste estudo foi analisar os danos genômicos em girinos de Dendropsophus minutus e Physalaemus cuvieri amostrados em áreas antropizadas e naturais, via ensaio cometa e teste do micronúcleo. Os resultados deste estudo detectaram que os girinos de D. minutus e P. cuvieri amostrados em áreas antropizadas apresentaram as maiores extensões de danos genômicos quando comparados com os girinos de áreas naturais. Os girinos coletados nas áreas de lavoura de soja tiveram maiores danos no DNA, seguidos daqueles amostrados nas plantações de milho. Em contrapartida, a frequência de danos genômicos nos girinos de áreas naturais foram significativamente menores em relação aos danos genômicos sofridos pelos girinos das áreas agrícolas. Assim, pode se concluir que os girinos das espécies D. minutus e P. cuvieri amostrados neste estudo podem ser consideradas excelentes bioindicadores, uma vez que se mostraram sensíveis a alterações ambientais. Além disso, podese ressaltar as vantagens de se utilizar o ensaio cometa em estudos de genotoxicidade ambiental, como sua rapidez, alta sensibilidade em detectar danos no DNA no genoma de anfíbios, por um custo relativamente baixo. No entanto faz-se necessário a normatização de uma metodologia para estudos de campo, de forma que, os resultados possam ser comparados entre laboratórios diferentes, tornando assim, os estudos de genotoxicidade ambiental envolvendo organismos aquáticos mais informativos e aplicados como uma prática de rotina.

Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-12-29T19:05:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação-Fernando Santiago Pires-2013.pdf: 1915773 bytes, checksum: 124080395d9b5ba7bc8951e1ec35c371 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-12-29T19:06:19Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação-Fernando Santiago Pires-2013.pdf: 1915773 bytes, checksum: 124080395d9b5ba7bc8951e1ec35c371 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-29T19:06:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação-Fernando Santiago Pires-2013.pdf: 1915773 bytes, checksum: 124080395d9b5ba7bc8951e1ec35c371 (MD5) Previous issue date: 2013-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Xenobiotics pesticides are widely used in crops or even gardening throughout the world with purpose of a broad spectrum pest control, herbicides with glyphosate (N- phosphonomethyl glycine) as an active ingredient stands out amongst that group. The glyphosate (GLI) participates in a unique metabolic pathway during the synthesis of amino acids in plants, although, in animals it was thought to be harmless. However, literature indicates toxicity from commercial solutions, but few studies done with pure GLI. Moreover, to verify toxic potential of GLI, experiments done using Nuclear Magnetic Resonance (NMR). Furthermore, the test tanks were examined the presence of GLI for a period of 96 hours. It is because the GLI, during the metabolism of prokaryotes, converts to Aminomethylphosphonic acid (AMPA). The results showed the absence of AMPA at 96 hours of exposure, whereas, any changes were attributed to GLI in these animals. Primarily, the dose of CL50-96h for the experimental animal, Poecilia reticulata (guppy), was determined. It estimated at 68.51 ± 2.2 mg/L for males and at 70.56 ± 2.96 mg/L for females. The lethal dose calculated according to the recommended guidelines from the Organisation for Economic Co-operation and Development (OECD). During these tests the animals in the experimental group (EG) exposed at concentrations of 50, 55, 60.5, 66.5 and 73.2 mg/L showed swimming changes (17.5% - lethargy, 11.1 % - irregular swimming and 45.9% - hypoxia). Respiratory changes (8.3% - swam to the tank surface, 1.8% - hypo oxygenated) and changes in color pattern, such as loss of intensity of the hues orange, red, blue, and assuming a dull coloration (14.3%) in all EG. Subsequently, male’s guppy treated with sublethal doses of pure GLI in concentrations of 17.13 mg/L (25% CL50), 34.26 mg/L (50% CL50) and 51.39 mg/L (75% CL50) as per 203 guidelines of the OECD. After euthanasia, by descerebration, the male animals were dissected and the testicles fixed in buffered paraformaldehyde, sectioned in 2.0 μm slices by an ultramicrotome and placed in histoResin®. The sections stained with hematoxylin and toluidine blue/Floxine B, then photographed under light microscope. The program Image-Pro Plus provided the images, which analyzed by the program Statistica 7.0. Consequently, the data reviewed that GLI has toxic potential. It has the potential to: cause testicular regression - morphometric measures decrease, reduce the number of the spermatic compartments, reduce the gonad index (Igs) and promote histopathology which may lead to reduction or loss of function. Thus, characterizing a process of demasculinization, which indicates endocrine disruption. / Agrotóxicos são xenobióticos utilizados largamente nos lavouras ou mesmo em jardinagem em todo mundo para o controle de pragas agrícolas, e entre eles destacam-se os herbicidas a base de Glifosato (N-fosfonometil-glicina). O Glifosato (GLI) participa de uma rota metabólica exclusiva na síntese de aminoácidos nas plantas e foi considerado inofensivo aos animais. Contudo, há relatos na literatura que indicam a toxicidade das soluções comerciais à base de GLI, mas poucos abordam a atividade do GLI puro. Dessa maneira, para se verificar o potencial toxico do GLI, primeiramente, experimentos com Ressonância Magnética Nuclear (RMN) foram realizados para verificar a presença de GLI nos aquários testes pelo tempo de 96h. Isso foi feito porque o GLI pode ser convertido a ácido aminometil fosfônico (AMPA) pelo metabolismo de procariotos. Os resultados demonstraram ausência de AMPA até 96h de exposição e dessa forma foi atribuído ao GLI qualquer alteração presente nos animais testes. Depois foi determinado o valor da CL50-96h para o animal experimental Poecilia reticulata (guarú). Essa foi estimada em 68,51 ± 2,2 mg/L para machos e 70,56 ± 2,96 mg/L para fêmeas. Os testes de toxicidade letal para o cálculo da CL50-96h foram feitos de acordo com as recomendações do guia 203 da Organização para cooperação e desenvolvimento do comércio (OECD). Durante esses testes os animais do grupo experimental (GE) expostos nas concentrações de 50; 55; 60,5; 66,5 e 73,2 mg/L apresentaram alterações comportamentais como distúrbios natatórios (17,5% – letargia; 11,1% – natação irregular e 45,9% – hipoatividade), respiratórios (8,3% – nado na superfície do aquário; 1,8% – hipóxia) e alterações no padrão da coloração (14,3%) como perda da intensidade das matizes laranja, vermelha e azul e dos tons acetinados em todos os GE. Posteriormente guarús machos foram tratados com doses subletais do GLI puro nas concentrações de 17,13 mg/L (25% da CL50), 34,26 mg/L (50% da CL50) e de 51,39 mg/L (75% da CL50) conforme o guia 203 da OECD. Após a eutanásia por descerebração, os animais foram dissecados e os testículos foram fixados em paraformaldeído tamponado, inclusos em historresina e seccionados a 2,0 μm em ultramicrótomo. Os cortes foram corados com Azul de toluidina e hematoxilina/floxina e posteriormente fotografados em fotomicroscópio. As imagens forneceram dados obtidos pelo programa Image Pro-Plus que foram analisados pelo programa Statistica 7.0. Foi demonstrado que o GLI apresenta potencial tóxico para o guarú por causar regressão testicular pela redução das medidas morfométricas, redução do número de compartimentos espermáticos, redução do Índice gonadossomático (Igs) e por promover histopatologias que podem levar a diminuição ou a perda da funcionalidade do testículo. Tal processo caracteriza a desmasculinização, um indicativo de disrupção endócrina.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-07-13T21:03:27Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Priscila Elias Campos Naves - 2012.pdf: 1687485 bytes, checksum: 4d21dacd2ba42ae2bd0c8df7e82075b0 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-07-14T13:01:06Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Priscila Elias Campos Naves - 2012.pdf: 1687485 bytes, checksum: 4d21dacd2ba42ae2bd0c8df7e82075b0 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-14T13:01:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Priscila Elias Campos Naves - 2012.pdf: 1687485 bytes, checksum: 4d21dacd2ba42ae2bd0c8df7e82075b0 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2012-08-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Paracoccidioides is a thermal dimorphic fungus that causes Paracoccidioidomycosis (PCM), an endemic disease in Latin America. Immune cells have a variety of defense mechanisms against pathogens, such as the production and release of nitric oxide (NO), one of the reactive nitrogen species (RNS). RNS react with cellular components, resulting in damage to DNA and membranes, inhibition of repiration and inactivation of cellular enzymes. To understand how Paracoccidioides responds to nitrosative stress, this study aims to identify genes that might contribute to this response. The Paracoccidioides yeast cells grouth was evaluated in the presence of various concentrations of sodium nitrite (NaNO2). The nitrosative stress was confirmed by quantification of nitrite in the cultures supernatant and by the inhibition of the cytochrome c oxidase (complex IV) activity. The transcriptional analyzes were performed by sequencing a cDNA library constructed with Paracoccidioides mRNA obtained after incubation of fungal cells with 500 µM NaNO2 during 1 h. The results show the induction of transcripts related to several cellular pathways, including genes of mitochondrial electron transport chain. The expression of selected transcripts was confirmed by quantitative real time RT-PCR. Moreover, mitochondrial activity measured by XTT method was reduced in the presence of NaNO2 during the first 2 hours of treatment. Additionally, the NADP+/NADPH ratio is lower during nitrosative stress, as demonstrated. The results suggest that the induction of transcripts associated with energy production during nitrosative stress may reflect a compensatory effect on the inhibition of enzymes that carry out this metabolic function, probably to ensure the production of energy and/or contribute to the redox balance by generation of NADPH. / Paracoccidioides é um fungo termodimórfico causador da Paracoccidioidomicose (PCM), uma doença endêmica na América Latina. Células do sistema imune humano possuem uma variedade de mecanismos de defesa contra patógenos, como a produção e liberação de óxido nítrico (NO), uma das espécies reativas de nitrogênio (RNS). RNS reagem com os componentes celulares, o que resulta em danos ao DNA e membranas, inibição da respiração e inativação de enzimas celulares. Para entender como Paracoccidioides responde ao estresse nitrosativo, esse trabalho tem como objetivo identificar genes que possam contribuir para esta resposta. O crescimento de células de levedura de Paracoccidioides foi avaliado na presença de várias concentrações de nitrito de sódio (NaNO2). O estresse nitrosativo foi confirmado através da quantificação de nitrito no sobrenadante das culturas e da inibição da atividade da enzima citocromo c oxidase (Complexo IV). As análises transcricionais foram feitas a partir do sequenciamento da biblioteca de cDNA construída utilizando-se mRNA obtido após incubação de células leveduriformes de Paracoccidioides na presença de 500µM de NaNO2 durante 1 hora. Os resultados mostram a indução de transcritos relacionados a várias vias celulares, incluindo genes da cadeia mitocondrial transportadora de elétrons. A expressão de alguns desses transcritos foi confirmada por PCR quantitativo em tempo real. Adicionalmente, a atividade mitocondrial, avaliada através do método do XTT, apresentou-se reduzida na presença de NaNO2 durante as primeiras 2 horas de tratamento. A razão NADP+/NADPH foi avaliada, apresentando-se menor durante o estresse nitrosativo. Os resultados sugerem que a indução de transcritos relacionados à produção de energia durante o estresse nitrosativo possa refletir um efeito compensatório sobre a inibição de enzimas que desempenham esta função metabólica, provavelmente para assegurar a produção de energia e/ou contribuir para o balanço redox através da geração de NADPH.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2017-08-08T11:37:43Z No. of bitstreams: 2 Tese - Caroline Oliveira de Araújo Melo - 2017.pdf: 3534804 bytes, checksum: e2352db895513b3e3c11c5732eff4bda (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-08-08T15:00:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Caroline Oliveira de Araújo Melo - 2017.pdf: 3534804 bytes, checksum: e2352db895513b3e3c11c5732eff4bda (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-08T15:00:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Caroline Oliveira de Araújo Melo - 2017.pdf: 3534804 bytes, checksum: e2352db895513b3e3c11c5732eff4bda (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-07-06 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Alcohol abuse is related to approximately 3.3 million annual deaths worldwide and is considered the first risk factor for the global burden of disease in countries of the Americas. Long-term abuse of alcohol induces numerous molecular and biochemical changes in alcohol-related tissues. It is believed that the toxic effects of alcohol are mediated by DNA damage by several mechanisms, such as by the induction of oxidative damage, DNA adducts, crosslinks and DNA strand breaks. In this sense, the aim of this study was to verify the frequency of polymorphisms in the repair and detoxification genes and the association with the DNA damage in alcoholics. The analysis of the obtained results showed a greater genotoxic damage in the alcoholics, when carrying out the Comet Assay. A point of variation was found in the GSTP1 gene and another point of variation in the XRCC1 gene. However, no statistically significant differences were observed between GSTM1 and GSTT1 genotypes and genetic damage. In this context, it can be concluded that the Comet Assay is a very effective and inexpensive method for the analysis of genotoxic damage. / O consumo abusivo do álcool está relacionado a aproximadamente 3,3 milhões de mortes anuais em todo o mundo, sendo considerado o primeiro fator de risco para a carga global de doenças em países das Américas. O abuso da ingestão de álcool em longo prazo induz inúmeras alterações moleculares e bioquímicas nos tecidos relacionadas ao álcool. Acredita-se que os efeitos tóxicos do álcool sejam mediados por danos ao DNA por vários mecanismos, como pela indução dos danos oxidativos, pelos adutos de DNA, pelos crosslinks e pelas quebras de fitas de DNA. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho foi de verificar a frequência de polimorfismos nos genes de reparo e detoxificação e a associação com o dano no DNA em etilistas. A análise dos resultados obtidos mostrou um maior dano genotóxico nos etilistas, ao realizar o Ensaio Cometa. Foi encontrado um ponto de variação no gene GSTP1 e um ponto de variação no gene XRCC1. No entanto, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os genótipos GSTM1 e GSTT1 e os danos genéticos. Nesse contexto, pode-se concluir que o Ensaio Cometa é um método bastante eficaz e barato para a análise de danos genotóxicos.

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-09-12T20:26:04Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Raimundo Lima da Silva Junior - 2008.pdf: 5070455 bytes, checksum: 3393ae35ddba4af1c14d43ce110ef279 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-15T12:45:04Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Raimundo Lima da Silva Junior - 2008.pdf: 5070455 bytes, checksum: 3393ae35ddba4af1c14d43ce110ef279 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T12:45:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Raimundo Lima da Silva Junior - 2008.pdf: 5070455 bytes, checksum: 3393ae35ddba4af1c14d43ce110ef279 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2008-05-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The larynx is a tubular organ of the aerodigestive tract whose main function is the production of voice, in addition to tasks related to the protection of the lower airways and swallowing food. The squamous cell carcinoma presents itself as a multifactorial disease and epigenetic being influenced by environmental factors, behavioural and relate to the individual. Several polymorphic genes that encode enzymes involved in the biotransformation of the carcinogens have been associated to the development of cancer, especially in squamous cell carcinoma of head and neck. The CYP1A1m, GSTM1 and GSTT1 genes which catalyzes the oxidation of PAHs in phenolic and epoxides products. The purpose of this study was to evaluate the epidemiological data of patients diagnosed with squamous cell carcinoma of the larynx from the Cancer Registry of Population basis of Goiânia and from Association of Cancer Combat in Goiânia, analyzing data from 63 medical records followed in a period of 6 year; establish the allelic profiles of the gene CYP1A1m, GSTM1 and GSTT1 in casecontrol groups investigating the degrees of suscetibility of patients diagnosed with squamous cell carcinoma (SCC) of the larynx, according to smoking and alcoholism habits. In total 112 samples were evaluated, 63 from patients with SCC of the larynx and 49 patients in the control group. The CEC of the larynx was about 3,5 times more frequent in men than in women. The rate of survival on general was approximately 66% to 6 years. The smoking and ethilic habits associated have a significantly lower survival. No significant differences were found in the staging analysis and treatment of patients. Were found allelic frequencies of CYP1A1m1 of 52,4% (34/62) and 63,3% (31/49) for the wild allele T and 44,4% (28/62) and 34,7% (18/49) for the mutant allele C. There were no statistically significant associations between allelic variants and genotypic CYP1A1m1 with squamous cell carcinoma of the larynx. Positive genotypic frequencies were observed for the genes GSTM1 and GSTT1 of 41.3% (26/63) and 54.0% (34/63) to the patients with laryngeal cancer, and 49,0% (24/49) and 51,0% (25/49) for the control group, respectively. For the assessment of genotype GSTM1 (null) and GSTT1 (null), the patients if the case group had 58,7% (37/63) and 46,0% (29/63) of genotypes for GSTM1 null and GSTT1, while the patients in the control group showed 51,0% (25/49) and 40,8% (20/49). There was no statistically significance in associations of genotypic variants GSTM1 (null) and GSTT1 (null) with the larynx squamous cell carcinoma. In this context, an experimental study was accomplished in the intention of evaluating the function of the genes Cyp and Gst in the metabolism of the Cyclophosphamide. This study addressed the Cyclophosphamide toxicological evaluation and analysis of the polymorphism of Cyp2a29 and Gstp1 BALB/c genes in mice, correlating them with the toxicity of drugs through the assessment of organs commonly affected. It was determinated the DL50 of the 474mg/kg. Subsequently, another 40 mice were used on the assessment of the genetic polymorphism of genes Cyp2a29 and Gstp1. As for toxicity, cyclophosphamide caused reduction in body weight at different doses and kidneys, spleen, liver, heart and lungs. The animals that received a dose of 500mg/Kg died in 24 hours, three animals with a dose of 250mg/Kg died the end of one week. The evaluation of toxicity showed changes of varying degrees of congestion observed in the spleen, liver and heart. There were not found statistically significant differences between the frequencies of allelic and genotypic to Cyp2a29 and Gstp1 in groups of animals studied. This observation should be probably the characteristic line BALB/c are isogenic. Studies that make the use se of tests of genetic suscetibility, epidemic evaluation, combined to the evaluation anatomopathological they allow the study of the interaction genetic atmosphere and a possible standardization of various chemotherapy protocols for treatment. / A laringe é um órgão tubular do trato aerodigestivo cuja principal função é a produção da voz, além de funções relacionadas com a proteção das vias aéreas inferiores e deglutição alimentar. O carcinoma de células escamosas (CEC) de laringe apresenta-se como uma doença multifatorial e epigenética sendo influenciada por fatores ambientais, comportamentais e inerentes ao indivíduo. Vários genes polimórficos que codificam enzimas envolvidas na biotransformação de carcinógenos têm sido associados ao desenvolvimento de câncer, sobretudo no carcinoma espinocelular de cabeça e pescoço. Os genes CYP1A1m1, GSTM1 e GSTT1 são fundamentais no processo de detoxificação de Poli - Hidrocarbonetos Aromáticos (PHA) e de diversas moléculas endógenas, facilitando o seu metabolismo e excreção. Os objetivos do presente estudo foram de avaliar os dados epidemiológicos de pacientes diagnosticados com CEC da laringe do Registro de Câncer de Base Populacional de Goiânia (RCBP) da Associação de Combate ao Câncer em Goiás (ACCG), analisando os dados de 63 prontuários acompanhados num período de 6 anos; estabelecer os perfis alélicos dos genes CYP1A1m1, GSTM1 e GSTT1 em grupos caso-controle investigando os graus de suscetibilidade dos pacientes diagnosticados com CEC de laringe, segundo hábitos tabagistas e etilistas. Ao total foram avaliadas 112 amostras, sendo 63 provenientes de pacientes com CEC da laringe e 49 de pacientes do grupo controle. O CEC da laringe se mostrou cerca de 3,5 vezes mais freqüente em homens que em mulheres. A taxa de sobrevida relativa geral foi de aproximadamente 66% para 6 anos. Os hábitos tabagista e etilista concomitantes apresentam uma sobrevida consideravelmente menor. Foram encontradas freqüências alélicas para CYP1A1m1 de 52,4% (34/62) e 63,3% (31/49) para o alelo selvagem T e 44,4% (28/62) e 34,7% (18/49) para o alelo mutante C. Não foram encontradas associações estatisticamente significativas das variantes alélicas e genotípicas CYP1A1m1 para o CEC da laringe. Quanto aos genes GSTM1 e GSTT1 foram observadas freqüências genotípicas positivas para os genes GSTM1 e GSTT1 de 41,3% (26/63) e 54,0% (34/63) para os pacientes com carcinomas laríngeos, e de 49,0% (24/49) e 51,0% (25/49) para o grupo controle, respectivamente. Para a avaliação do genótipo GSTM1 (nulo) e GSTT1 (nulo), os pacientes do grupo caso apresentaram 58,7% (37/63) e 46,0% (29/63) de genótipos nulos para GSTM1 e GSTT1, enquanto que os pacientes do grupo controle apresentaram 51,0% (25/49) e 40,8% (20/49). Não foram encontradas associações estatisticamente significativas das variantes genotípicas GSTM1 (nulo) e GSTT1 (nulo) para o CEC da laringe. Neste contexto, foi realizado um estudo experimental no intuito de avaliar o papel dos genes Cyp e Gst no metabolismo da ciclofosfamida. Tal estudo abordou avaliações toxicológicas da Ciclofosfamida e a análise do polimorfismo dos genes Cyp2a29 e Gstp1 em camundongos BALB/c e correlacionando-os com a toxicidade da droga através da avaliação dos órgãos comumente afetados. A DL50 da droga observada em 40 camundongos foi de 474mg/Kg. Posteriormente, outros 40 camundongos foram utilizados na avaliação do polimorfismo genético dos genes Cyp2a29 e Gstp1. Quanto à toxicidade, a ciclofosfamida ocasionou redução da massa corporal nos rins, baço, fígado, coração e pulmões. A avaliação da toxicidade demonstrou alterações de diferentes graus de congestão observados no baço, fígado e coração. Não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas entre as freqüências alélicas e genotípicas de Cyp2a29 e Gstp1 nos grupos dos animais estudados. Estudos que preconizem a utilização de testes toxicológicos combinados à avaliação anatomopatológica e investigação da variabilidade genética permitem a padronização de protocolos de tratamento de diversos quimioterápicos.

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2016-10-05T10:38:29Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Enio Saraiva Soares - 2016.pdf: 2392510 bytes, checksum: 37b84e9c9bc76eaf406e92f41d3828bb (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-10-05T10:58:52Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Enio Saraiva Soares - 2016.pdf: 2392510 bytes, checksum: 37b84e9c9bc76eaf406e92f41d3828bb (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-05T10:58:52Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Enio Saraiva Soares - 2016.pdf: 2392510 bytes, checksum: 37b84e9c9bc76eaf406e92f41d3828bb (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-04-29 / Currently there are different approaches to synthesize and discover new compounds, but the pursuit of these products on biodiversity is still advantageous. In bioprospecting microorganisms, which often are seeking their properties that can be exploited in biotechnology products. This is the case of chitinases, enzymes that degrade chitin. Chitinases (EC 3.2.1.29) are glycosyl hydrolases type enzymes that specifically cleave β-1,4 bonds between N-acetylglucosamines units of chitin with sizes ranging from 20 kDa to 90 kDa. The main producers of chitinase are the bodies that have chitin in their cell wall or exoskeleton, such as insects, crustaceans, fungi, algae, among others. This study aimed to select and identify producing bacteria chitinase in soil samples from different coastal regions of southern Brazil. Seventeen soil samples, collected close to fishing for shellfish waste disposal sites, were prepared and seeded in four minimum culture medium containing colloidal chitin as the sole source of carbon and energy, incubated and the colonies were isolated and purified. After yielded a total of thirteen isolates that were submitted to enzymatic index test, stressed that four isolates. The four isolated genomic DNA was extracted, amplified and purified, and sequenced region encoding 16S rRNA of these organisms. Bacteria were then pooled and identified by construction of a phylogenetic tree. The results showed the presence of the species Paenibacillus illinoisensis and Paenibacillus chitinolyticus and two members of the genus Bacillus. Future studies may indicate the possibility of its use as a source of genes for biotechnological applications such as the production of new biopesticides. / Existem atualmente diferentes abordagens para se sintetizar e descobrir novos compostos, mas a busca desses produtos na biodiversidade ainda é vantajosa. Na bioprospecção de microrganismos, o que muitas vezes se busca são as suas propriedades que possam ser aproveitadas em produtos biotecnológicos. Esse é o caso das quitinases, enzimas capazes de degradar a quitina. As quitinases (EC 3.2.1.29) são enzimas do tipo glicosilhidrolases, com tamanhos que variam de 20 kDa até 90 kDa, que clivam especificamente as ligações β-1,4 entre unidades de N-acetilglicosaminas da quitina. Os principais produtores de quitinases são os organismos que possuem quitina no seu exoesqueleto ou parede celular, como insetos, crustáceos, fungos, algas, bactérias entre outros. O presente estudo teve como objetivo selecionar e identificar bactérias produtoras de quitinases em amostras de solos de diferentes locais litorâneos da região Sul do Brasil. Dezessete amostras de solo, coletadas próximo a locais de descarte de resíduos de crustáceos por pescadores, foram preparadas e semeadas em meio de cultura mínimo contendo quitina coloidal como única fonte de carbono e energia, incubadas e as colônias foram isoladas e purificadas. Ao fim obteve-se um total de treze isolados de bactérias, que foram submetidas ao teste de índice enzimático, que destacou desses quatro isolados. O DNA genômico de quatro isolados foi extraído, amplificado e purificado, sendo sequenciada a região codificadora do gene 16S rRNA destes microrganismos. As bactérias foram então agrupadas e identificadas pela construção de uma árvore filogenética. Os resultados mostraram a presença das espécies Paenibacillus illinoisensis e Paenibacillus chitinolyticus além de dois membros do gênero Bacillus. Estudos futuros poderão indicar a possibilidade de seu uso como fonte de genes para aplicação biotecnológica, como a produção de novos bioinseticidas.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-03-12T16:44:52Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rejane Araújo Guimarães - 2014.pdf: 1258382 bytes, checksum: cdef87095b435bfcbc107052f516ff89 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2015-03-13T19:02:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rejane Araújo Guimarães - 2014.pdf: 1258382 bytes, checksum: cdef87095b435bfcbc107052f516ff89 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T19:02:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Rejane Araújo Guimarães - 2014.pdf: 1258382 bytes, checksum: cdef87095b435bfcbc107052f516ff89 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-02-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The distribution patterns of genetic variability within and among subpopulations are important to know the performance of evolutionary processes, to adopt effective conservation strategies and to use genetic plant resources. The population genetic structure is focused on how the genetic variability is distributed within and between subpopulations. Microsatellite markers are especially useful for such analyzes because are highly informative. The Baru (Dipteryx alata Vogel), belongs to the Fabaceae family and is widely distributed in the Cerrado biome, also has a great potential for use in local cooking, as ornamental plant and in popular medicine, so being an important genetic resource plant. This study aimed to evaluate the genetic structure among subpopulations of D. alata which constitute a germplasm collection, maintained by the Escola de Agronomia, of the Universidade Federal de Goiás. The collection consists of 600 individuals from 150 progenies of 25 subpopulations from different regions of Cerrado biome. Nine pairs of primers were used, eight developed for the species D. alata and one developed and transferred from Phaseolus vulgaris for molecular analysis. The number of alleles ranged from 2 to 14 alleles, with an average of 5.5 allele per locus. The average of observed heterozygosity was equal to 0.340 and ranged from 0.102 (DaE06) to 0.711 (DaE41). The expected heterozygosity, under the condition of Hardy-Weinberg equilibrium was equal to 0.383, ranging from 0.162 (DaE06) and 0.809 (DaE41). The analysis of population genetic structure showed a level of medium relatedness between individuals of the same progeny (θs) of 0.169, which is equivalent to that kinship expected for a mixture of half-sibs and full sibs. From the value θs, it can be concluded that there is a high genetic differentiation between the progenies. When evaluated the subpopulations was found an estimated θp equal to 0.097, suggesting that there is a moderate genetic structure. The value of overall intrapopulation fixation index (f=0.122) indicated the presence of low inbreeding in subpopulations that composes the collection of germplasm. The estimated apparent outcrossing rate (ta) value was equal to 0.78. The overall F value was significant and equal to 0.27. The analysis of population genetic structure revealed the presence of genetic structure among subpopulations and among progenies within of the subpopulations. This reveals that the germplasm collection of D. alata presents genetic diversity within and among populations, indicating that the conservation strategies should consider both levels. / Os padrões de distribuição da variabilidade genética dentro e entre subpopulações são importantes a fim de conhecer a atuação dos processos evolutivos, para a adoção de estratégias eficazes de conservação e uso de recursos genéticos vegetais. A estrutura genética populacional está relacionada com a forma como a variabilidade genética está distribuída dentro e entre as subpopulações. Os marcadores microssatélites são especialmente úteis para tais análises por serem altamente informativos. O Baru (Dipteryx alata Vogel), pertence à família Fabaceae e apresenta ampla distribuição no bioma Cerrado e um grande potencial para o uso na culinária local, ornamental e medicinal, sendo um importante recurso genético vegetal. Este estudo teve como objetivo avaliar a estrutura genética entre subpopulações de D. alata que constituem uma coleção de germoplasma, mantida pela Escola de Agronomia da Universidade Federal de Goiás. A coleção consiste de 600 indivíduos de 150 progênies de 25 subpopulações provenientes de diferentes regiões do bioma Cerrado. Foram utilizados nove pares de primers, oito desenvolvidos para a espécie D. alata e um desenvolvido e transferido de Phaseolus vulgaris para a análise molecular. Foram observados entre 2 e 14 alelos, com média de 5,5 alelo por loco. O valor médio de heterozigosidade observada foi igual a 0,340 e variou de 0,102 (DaE06) a 0,711 (DaE41). A heterozigosidade esperada, sob a condição de equilíbrio de Hardy-Weinberg, foi igual a 0,383, variando entre 0,162 (DaE06) e 0,809 (DaE41). A analise de estrutura genética populacional apresentou um nível de parentesco médio entre indivíduos de uma mesma progênie (θs) de 0,169, o que equivale ao parentesco esperado para uma mistura de meio-irmãos e irmãos completos. A partir do valor de θs, pode-se concluir que há uma alta diferenciação genética entre as progênies. Quando avaliadas as subpopulações, foi encontrado um valor estimado de θp igual a 0,097, sugerindo que existe uma moderada estruturação genética. O valor do índice de fixação intrapopulacional global (f=0,122) indicou a presença de baixa endogamia nas subpopulações que compõem a coleção de germoplasma. A estimativa da taxa de fecundação cruzada aparente (ta) teve valor igual a 0,78. O valor global de F foi significativo e igual a 0,27. A análise de estrutura genética populacional revelou presença de estruturação genética entre subpopulações e entre progênies dentro de subpopulações. Isso revela que a coleção de germoplasma de baru apresenta diversidade genética entre e dentro de populações, indicando que as estratégias de conservação devem considerar os dois níveis.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_andre_grassmann.pdf: 1497268 bytes, checksum: 73f55a329ef2c9be70227b63b45785a2 (MD5) Previous issue date: 2011-02-28 / Leptospirosis is an infectious disease that affects humans, wild and domestic animals worldwide. Pathogenic spirochetes from the Leptospira genus are the causative agents of this zoonosis. The several Leptospira species have noted antigenic diversity, even within the same species. This is the main reason current bacterin vaccines have limitations, such as adverse effects and short term immunity, restricting their use in human populations. The need for effective leptospirosis vaccines promoted studies on characterization of new vaccine candidates. The 32 kDa outer membrane lipoprotein, LipL32, is the most abundant protein in the whole leptospira proteome, it is conserved in all pathogenic serovars and absent in saprophytes. This protein is immunogenic and able to bind to mammalian extracellular matrix. However, LipL32 subunit vaccines did not protect animals against challenge. In an attempt to solve this, we use LipL32 fused and coadministered with B subunit of the Escherichia coli heat-labile enterotoxin (LTB) to enhance the immune response. LTB is a non-toxic molecule with immunoestimulatory and immunomodulatory properties. The recombinant proteins rLTB, rLipL32 and rLTB::LipL32 were expressed in E. coli, purified and characterized. Female hamsters were distributed in groups as follows: rLTB; rLTB+rLipL32; rLTB::LipL32, homologous bacterin; PBS. The serum from each animal was collected for humoral immune response determination by ELISA. The animals were challenged with 5×LD50 dose of Leptospira interrogans strain Fiocruz L1-130. Both treatments induced high titers of anti-rLipL32 antibodies. The rLTB+rLipL32 and rLTB::LipL32 treatments afforded significant protective response upon challenge, when compared to control groups (p<0.05). No prior study with leptospirosis had used LTB as the adjuvant, or fused antigens in an attempt to control this disease. Furthermore, this is the first report of a protective subunit vaccine using rLipL32 as the antigen, and an important contribution towards the development of improved leptospirosis vaccines. / A leptospirose é uma doença infecciosa que afeta humanos e animais silvestres e domésticos em todo mundo. As espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira são os agentes causadores desta zoonose. As diversas espécies de leptospiras possuem notada diversidade antigênica, inclusive em uma mesma espécie. Esta característica resulta em limitação das atuais vacinas bacterinas que não induzem proteção cruzada entre os diferentes sorovares. Além disso, estas vacinas geram efeitos adversos e imunidade de curta duração, restringindo seu uso em populações humanas. A necessidade de novas vacinas eficazes contra a leptospirose estimulou estudos para caracterizar novos antígenos vacinais. A lipoproteína de membrana externa de 32 kDa, LipL32 é a proteína mais abundante no proteoma total da leptospira, conservada entre todos os sorovares patogênicos e ausente nas leptospiras saprófitas. Esta proteína é imunogênica e possui habilidade de ligar-se à matriz extracelular de mamíferos. Porém, animais inoculados com vacinas de subunidade utilizando LipL32 não sobrevivem ao desafio. Em função disso, utilizamos LipL32 fusionada e co-administrada com a subunidade B da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (LTB) para melhorar a resposta imune. LTB é uma molécula atóxica com reconhecida atividade imunoestimuladora e imunomoduladora. As proteínas recombinantes rLTB, rLipL32 e rLTB::LipL32 foram produzidas em E. coli, purificadas e caracterizadas. Hamsters fêmeas foram distribuídas em grupos e inoculadas com duas doses, da seguinte forma: rLTB; rLTB+rLipL32; rLTB::LipL32, bacterina homóloga e PBS. Soro foi coletado individualmente para determinação da resposta imune humoral por ELISA. Os animais foram desafiados com uma dose de 5×DL50 de Leptospira interrogans cepa Fiocruz L1-130. Os tratamentos induziram altos títulos de anticorpos anti-rLipL32. Os tratamentos rLTB+rLipL32 e rLTB::LipL32 induziram resposta protetora significativa frente ao desafio quando comparados com os grupos controle (p<0,05). Nenhum estudo anterior usou LTB como adjuvante para uma vacina contra leptospirose, tampouco antígenos fusionados com o intuito de controlar esta doença. Além disso, este é o primeiro relato de indução de imunidade protetora utilizando rLipL32 como vacina de subunidade, uma importante contribuição para o desenvolvimento de vacinas mais eficazes contra leptospirose.

Made available in DSpace on 2015-03-04T18:50:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Diogo_Marinho.pdf: 3506314 bytes, checksum: 33551832c16356372e97856d79324b25 (MD5) Previous issue date: 2011-03-24 / Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nivel Superior / Os métodos computacionais de docking receptor-ligante são importantes ferramentas utilizadas em estudos na quimica medicinal, auxiliando o processo de descoberta de novos fármacos para alvos moleculares envolvidos em doenças sem tratamento, ou que necessitam de novos tratamentos quimioterápicos. Estes métodos são parte importante dentro da abordagem conhecida como desenho racional de fármacos baseado em estruturas. Esta dissertação apresenta o desenvolvimento da nova versão do programa Dockthor, para docking molecular de ligante flexível, tendo como inovações: (i) uma nova e completa implementação computacional com o aperfeiçoamento do algoritmo genético não-geracional de múltiplas soluções; (ii) a implementação do campo de força molecular MMFF94; (iii) a criação de ferramentas auxiliares para parametrização automática de ligantes, cofatores e receptores protéicos; (iv) introdução da opção de triagem virtual. A nova versão do programa foi validada utilizando dois conjuntos teste. O primeiro envolvendo cinco ligantes altamente flexíveis do receptor HIV-I protease. O segundo, envolvendo 35 complexos receptor-ligante com uma grande diversidade strutural e química nos ligantes, associados a receptores representativos de 18 famílias de proteínas. A validação do programa foi feita através de experimentos de redocking sem utilizar nenhuma etapa de pré-otimizacão do ligante dentro do sítio receptor. Os resultados obtidos são considerados muito bons nos seguintes aspectos: (i) foi obtida uma taxa de sucesso de cerca de 80% (90%) no redocking de ligantes da HIV-1 protease considerando as solucoes de menor energia (menorRMSD); (ii) foi obtida uma taxa de sucesso de cerca de 94% (99%) no redocking do conjunto mais amplo de ligantes considerando as solucoes de menor energia (menor RMSD); (iii) com exceção de dois casos, todas as soluções de menor energia encontradas apresentavam um RMSD < 2.5 _A com relação a estrutura experimental. Os excelentes resultados obtidos nos experimentos de redocking mostram que o programa está apto para estudos de interações receptor-ligante envolvendo moléculas de interesse na química medicinal. As facilidades introduzidas no programa Dockthor permitirão a sua disponibilização e uso pela comunidade acadêmica e grupos de pesquisa atuantes na área de desenho racional de fármacos.