Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 835531 bytes, checksum: 813caac126d354619ba3de602cddedc4 (MD5) Previous issue date: 2011-02-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The Feline coronavirus (FCoV) is an enveloped virus RNA single-stranded, which belongs to the family Coronaviridae and the order Nidovirales. This virus is an important pathogen of wild and domestic cats and can cause a mild or inapparent enteric infection and also a rare and fatal disease called feline infectious peritonitis (FIP). The precise cause of FIP is still unknown but some hypotheses are suggested. The most accepted hypothesis is the theory of internal mutation that suggests a less virulent biotype of FCoV (FECV), would lead to other more pathogenic biotype (FIPV), capable of infecting monocytes and macrophages leading to FIP. However, despite being the most mentioned, there are still uncertainties in the relationship of the FCoV genome with the disease phenotype. This work presents a review from different FCoV studies attempt to elucidate existing theories on the pathogenesis of FCoV infection and tested through phylogenetic and phylogeographic approaches, the 7b gene of the first Brazilians FCoV sequences of asymptomatic and symptomatic cats in order to study the correlation between genetic diversity of this gene and differentiation of the two biotypes (FECV and FIPV). The 7b gene was shown to be highly conserved among the isolates and there was no differentiation between FIPV and FECV biotypes in phylogeographical and phylogenetic analysis, calling into question the theory of mutation. / O Feline coronavirus (FCoV) é um vírus envelopado de RNA fita simples, pertencente a família Coronaviridae e a ordem Nidovirales. Esse vírus é um importante patógeno de felinos domésticos e selvagens e pode causar uma inaparente ou leve infecção entérica e também causar uma doença imunomediada e fatal denominada peritonite infecciosa felina (PIF). A causa precisa da PIF ainda é desconhecida, mas algumas hipóteses são sugeridas. A hipótese mais aceita é a teoria da mutação interna que sugere que um biotipo menos virulento do FCoV (FECV), daria origem a outro biotipo mais patogênico (FIPV), capaz de infectar monócitos e macrófagos levando a PIF. Entretanto, apesar de ser a mais citada, ainda existem incertezas da relação do genoma do FCoV com o fenótipo da doença. Este trabalho, apresenta uma revisão com as diferentes pesquisas que tentam elucidar as teorias existentes sobre a patogênese da infecção pelo FCoV e testa, por meio de abordagens filogenética e filogeográfica, o gene 7b das primeiras sequências brasileiras de FCoV de gatos assintomáticos e sintomáticos, a fim de estudar, a correlação entre a diversidade genética desse gene e a diferenciação dos dois biotipos (FIPV e FECV). O gene 7b se mostrou altamente conservado entre os isolados virais e não houve diferenciação, na análise filogenética e filogeográfica, dos biotipos FIPV e FECV, pondo em questionamento a teoria da mutação.

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JairMS.pdf: 604378 bytes, checksum: 8f3220e89d5c178954aadb5186b98f52 (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Hybrids among transgenic plants and related species are expected to occur if they are sympatric and when there are not crossing barriers; as is the case, in Brazil, of cry1Ac transgenic cotton and Gossypium barbadense. This species has been maintained as dooryard plants, and should be preserved as a genetic resource. Hybrids were evaluated about traits related to fitness, leading to infer about its chances of survivor and selection. A barbadense genotype collected at the state of Mato Grosso was outcrossed to the variety DP 404, containing the gene cry1Ac, and to the isoline DP 404. All the F1 individuals and 122 among 170 F2 individuals expressed the toxin, and presented levels of resistance to pink bollworm (Pectinophora gossypiella) and cotton leafworm (Alabama argillacea) equivalent to the transgenic parent and superior to the isoline, barbadense or non transgenic hybrids. The percentage of germination and number of days to germinate did not differ among genotypes. Anthesis of the first flower and opening of the first cotton boll occurred earlier for herbaceous cotton and F1 hybrids than F2 population in average; all the populations presented a number of days to flower and opening of the first boll smaller then barbadense. The highest plants were barbadenses, and herbaceus the smallest, with F1 and F2 populations presenting intermediary heights. The number of seeds per plants were superior for F1 hybrids an herbaceous cotton, F2 populations were in average intermediary; the barbadense genotype produced the smallest number of seeds per plant. Pink bollworm, mainly, and also cotton leafworm, are important barbadense pests, so the transgene positive effect could favor the selection of hybrids, and hence G. hirsutum genome, against the maintenance of pure G. barbadense genome. The selection may be influenced by the plant uses: the smaller size of hybrids when compared to the barbadense may lead them to be differentiated from these parents to which medicinal properties are attributed; on the other hand, the greater boll production may favor hybrids maintenance with the purpose of producing lamp wicks, or use as an ornamental or swab / Espera-se que hibrida??es entre plantas transg?nicas e esp?cies pr?ximas ocorram sempre que haja simpatria e n?o existam barreiras de cruzamento, como ? o caso, no Brasil, do algodoeiro contendo o gene cry1Ac e a esp?cie Gossypium barbadense. Os barbadenses v?m sendo mantidos em quintais, e ? importante sua preserva??o como recurso gen?tico. H?bridos foram avaliados para caracteres relacionados com a adaptabilidade, inferindo sobre suas chances de sobreviv?ncia e sele??o. Para isto, obtiveram-se plantas F1 e F2 do cruzamento entre um algodoeiro barbadense coletado no estado de Mato Grosso com as cultivares DP404, contendo cry1Ac, e de sua isolinha DP4049. Todos os 37 indiv?duos F1 e 122 dentre 170 indiv?duos F2 avaliados expressaram cry1Ac, e apresentaram n?veis de resist?ncia ?s lagartas rosada (Pectinophora gossypiella) e curuquer?-doalgodoeiro (Alabama argillacea) equivalentes ao parental transg?nicos e superiores a isolinha, barbadense e h?bridos que n?o continham o transgene. N?o foram observadas diferen?as significativas para a porcentagem de germina??o ou quantidade de dias para germina??o. O florescimento e abertura do primeiro capulho ocorreram mais cedo nos algodoeiros herb?ceos e nos h?bridos que nas popula??es F2 em m?dia; todas as popula??es apresentaram um n?mero de dias para o florescimento e abertura do primeiro capulho significativamente mais baixo que os barbadenses. As plantas mais altas na matura??o eram os barbadenses, e os herb?ceos as mais baixas, sendo as popula??es F1 e F2 intermedi?rias. O n?mero de sementes por planta foi superior nos h?bridos F1 e algodoeiros herb?ceos, sendo as popula??es F2 intermedi?rias em m?dia, e os barbadenses aqueles que produziram menor n?mero de sementes. A lagarta rosada, principalmente, e tamb?m a curuquer?-do-algodoeiro s?o importantes pragas de G. barbadense, portanto o efeito positivo do transgene pode favorecer a sele??o de h?bridos contendo o transgene, e deste modo favorecer plantas que cont?m genoma de G. hirsutum, em detrimento da pureza do genoma de barbadense. A sele??o deve ser influenciada pelos usos da planta: o fato de os h?bridos serem mais baixos pode diferenci?-los dos pais barbadenses aos quais a propriedades medicinais s?o atribuidas; por outro lado, a produ??o bem maior de capulhos pode favorecer a manuten??o dos h?bridos quando se visa confec??o de pavios ou ornamenta??o de quintais e jardins

Made available in DSpace on 2014-12-17T15:18:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CarolinaCSO.pdf: 673645 bytes, checksum: 65edb3dd5d260d66ee98b34da41f4185 (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / Gluconacetobacter diazotrophicus ? uma alfa-proteobact?ria Gram-negativa, tolerante a meios ?cidos, fixadora de nitrog?nio atmosf?rico e foi a primeira bact?ria diazotr?fica endof?tica isolada da cana-de-a??car. Por sua vez, Gluconobacter oxydans, tamb?m alfa-proteobact?ria Gram-negativa, possui a capacidade de oxidar incompletamente alco?is e carboidratos. Ambas de interesse biotecnol?gico e industrial, essas bact?rias tiveram seus genomas seq?enciados completamente em 2007. Desta forma, foi de interesse desse trabalho analisar e comparar os genes de reparo do DNA devido sua import?ncia na manuten??o da integridade gen?mica. Sendo assim, as vias de reparo presentes nos dois organismos foram identificadas, utilizando como base uma terceira alfa-proteobact?ria, a Caulobacter crescentus, cujos genes de reparo foram descritos por um trabalho anterior e tamb?m os genes bem estabelecidos para o reparo do DNA em Escherichia coli. Para esse estudo, um banco de dados contendo ort?logos para os genes de reparo de DNA encontrados nos organismos foi criado e an?lises comparativas por similaridade usando o pacote Blast e o software Clustal foram feitas. Este estudo demonstrou que as principais vias de reparo ao DNA reparos por excis?o, reparo direto, reparo recombinacional e reparo pelo sistema SOS est?o presentes nos organismos analisados, demonstrando, na maioria das vezes, boa similaridade com E. coli. Interessantemente, foram encontradas duplica??es g?nicas nos quais uma das c?pias estava presente no cromossomo e a outra, no plasm?deo, como no caso de UvrD, DnaE e Ssb, possivelmente caracterizando eventos de transfer?ncia lateral. Por fim, uma grande novidade foi a identifica??o de ort?logos para RecB em G. diazotrophicus e G. oxydans e de ort?logos duplicados de RecD em G. diazotrophicus. At? o momento, n?o havia sido relatada a presen?a de membros da via de inicia??o RecBCD do reparo recombinacional em alfaproteobact?rias

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2014-10-30T18:14:19Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Denise da Silva Pinheiro.pdf: 1388647 bytes, checksum: e26020f5d13976c2a4920327b71bc5c4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-10-31T09:40:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Denise da Silva Pinheiro.pdf: 1388647 bytes, checksum: e26020f5d13976c2a4920327b71bc5c4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-10-31T09:40:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Denise da Silva Pinheiro.pdf: 1388647 bytes, checksum: e26020f5d13976c2a4920327b71bc5c4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-08-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / In the pathogenesis of type 2 diabetes mellitus (DM2), it is observed that the increased oxidative stress may contribute to decreased insulin production and destruction of pancreatic β cells. Individuals who have no activity of GSTM1 and GSTT1 isoforms may have an increased susceptibility to damage caused by reactive species to pancreatic β cells, since these cells express low levels of antioxidant enzymes. This case-control study aimed to analyze the genotypic profiles of the deletion polymorphism of GSTM1 and GSTT1 genes by molecular assays (conventional PCR and qPCR) to associate these polymorphisms with DM2 risk, considering that studies with this approach have not been conducted in Brazil. Data of clinical, laboratorial and demographic variables of 120 patients and 147 controls were obtained through interviews and information from medical charts (patients) or results of recent clinical and laboratory exams (controls). It was found that diabetic patients had a higher frequency of GSTT1-null genotype (29.2%) than non-diabetic subjects (12.2%), and those with the risk genotype have an increased predisposition to diabetes from approximately 3.2 times (p = 0.0004). However, there was no association of GSTM1-null with DM2 susceptibility. The analysis of the influence of GSTT1 deletion on clinical and biochemical changes in the case group showed that the risk genotype may contribute to the development of DM2 complications related to dyslipidemia, due to the association of GSTT1-null with significantly higher levels of triglycerides (p = 0.0242) and VLDL-cholesterol levels (p = 0.0252) compared to patients without the risk genotype. Additionally, GSTM1-null was associated with elevated levels of fasting glucose, glycated hemoglobin and blood pressure. We emphasized a necessity for applying log-linear analysis in order to explore an interaction between these polymorphisms properly. These results suggest that GSTT1 polymorphism may play an important role in the pathogenesis of DM2 in Brazilian population. Then, this gene could be added to a set of genetic markers to identify individuals at increased risk for developing DM2. Although there was no association of GSTM1 deletion polymorphism with susceptibility to DM2, it was verified the influence of this polymorphism on important clinical parameters related to glycemia and blood pressure levels. This finding suggests that GSTM1-null, GSTT1-null as well, may contribute to the clinical course of diabetic patients. / Na patogênese do diabetes mellitus tipo 2 (DM2), observa-se que o estresse oxidativo aumentado pode contribuir na diminuição da produção de insulina e destruição das células β pancreáticas. Indivíduos que apresentam ausência de atividade das isoformas GSTM1 e GSTT1 podem apresentar uma susceptibilidade aumentada aos danos causados por espécies reativas às células β pancreáticas, uma vez que estas células expressam baixos níveis de enzimas antioxidantes. O presente estudo caso-controle visou analisar os perfis genotípicos do polimorfismo de deleção dos genes GSTM1 e GSTT1 por ensaios moleculares (PCR convencional e qPCR) para associar tais polimorfismos com o risco ao DM2, considerando que ainda não foram realizados estudos com este enfoque no Brasil. Dados clínicolaboratoriais e demográficos de 120 pacientes e 147 controles foram obtidos por meio de entrevistas e consulta a prontuários (pacientes) e a resultados de exames recentes (controles). Foi verificado que os pacientes diabéticos apresentaram uma frequência mais elevada de genótipo GSTT1-nulo (29,2%) do que indivíduos não-diabéticos (12,2%), e que aqueles que apresentam o genótipo de risco possuem uma predisposição aumentada a diabetes de aproximadamente 3,2 vezes (p = 0,0004). No entanto, não houve associação de GSTM1-nulo com a susceptibilidade ao DM2. A análise da influência da deleção de GSTT1 sobre alterações bioquímicas e clínicas no grupo caso demonstrou que o genótipo de risco pode contribuir para o desenvolvimento de complicações do DM2 relacionadas à dislipidemia, em função da associação de GSTT1-nulo com níveis significativamente mais elevados de triglicérides (p = 0,0242) e VLDL-colesterol (p = 0,0252) em comparação aos pacientes sem o genótipo de risco. Adicionalmente, GSTM1-nulo teve associação com níveis elevados de glicemia de jejum, hemoglobina glicada e pressão sanguínea. Foi enfatizada a necessidade de aplicação da análise log-linear para investigar a interação entre os polimorfismos apropriadamente. Os resultados obtidos sugerem que o polimorfismo de deleção de GSTT1 pode desempenhar um importante papel na patogênese do DM2 na população brasileira. Portanto, este gene poderia ser adicionado a um painel de marcadores genéticos para identificação de indivíduos com alto risco ao desenvolvimento do DM2. Embora não tenha ocorrido associação do polimorfismo de deleção de GSTM1 com a susceptibilidade ao DM2, foi verificada a influência deste polimorfismo sobre importantes parâmetros relacionados ao controle glicêmico e pressórico. Estes achados sugerem que GSTM1-nulo, assim como GSTT1-nulo, podem contribuir para a evolução clínica dos pacientes diabéticos.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacvao Silvio R C Barbosa 2008.pdf: 717228 bytes, checksum: d0896c3b0c9fa5a05f9d7107c2e59def (MD5) Previous issue date: 2008-05-30 / The fungus Sclerotinia sclerotiorum can interact with a great range of vegetable species as well as to obey to the discharge especificity and patogenic specialization . It is capable to digest the cellular wall of host plants using for such a series of biochemical mechanisms and morfogenetics that optimize the invasion. Several enzymes are produced during the interaction plant-host and among them they stand out the family of the poligalacturonases (PGs) and them beta glucanases. PGs catalyze the hydrolysis of the connection glycosídic bond - 1,4 and them beta glucanases liberate glucans and oligossacarídeos during the hydrolysis. Our work tried to characterize, besides the pH, the action of these enzymes, as well as the gene expression during the interaction with bean (Phaseolus vulgaris) and under different cultivation means, pectin 1%, wall extract 1% and glucose 1%. The activities were measured by the method DNS where the amount was measured of you sugar reducers in the middle and the gene expression through electrophoretic profiles analyzed after the technique of RT-PCR. The results showed variation of the activity of PGs in the interaction being the middle with pectin with larger expression of them. Them beta 1,3 and beta 1,4 glucanases were expressed in both culture means proposed, however there was larger production of beta 1,3 during the invasion. The variation of the expression of such enzymes in different culture means suggests complexity of specific biochemical roles for your production raising new approaches for the recognition of the roads that they promote the development of the disease / O fungo Sclerotinia sclerotiorum, pode interagir com uma grande gama de espécies vegetais bem como obedecer à alta especificidade e especialização patogênica. Ele é capaz de digerir a parede celular de plantas hospedeiras utilizando para tal uma série de mecanismos bioquímicos e morfogenéticos que otimizam a invasão. Várias enzimas são produzidas durante a interação planta-hospedeiro e dentre elas se destacam a família das poligalacturonases (PGs) e as beta glucanases. As PGs catalisam a hidrólise da ligação glicosídica α- 1-4 e as beta glucanases liberam glucanas e oligossacarídeos durante a hidrólise. Nosso trabalho procurou caracterizar, além do monitoramento do pH, a ação destas enzimas, bem como a expressão gênica durante a interação com feijão ( Phaseolus vulgaris ) e sob diferentes meios de cultivo, pectina a 1%, extrato de parede celular de plantas de feijoeiro a 1% e glicose 1%. As atividades foram medidas pelo método DNS onde mediu-se a quantidade de açucares redutores no meio e a expressão gênica através de perfis eletroforéticos analisados após a técnica de RT-PCR. Os resultados mostraram variação da atividade das PGs na interação sendo o meio com pectina com maior expressão delas. As beta 1,3 e beta 1,4 glucanases foram expressas em ambos os meios de cultura propostos, contudo houve maior produção de beta 1,3 durante a invasão. A variação da expressão de tais enzimas em diferentes meios de cultura sugerem complexidade de rotas bioquímicas específicas para sua produção suscitando novas abordagens para o reconhecimento dos caminhos que promovem o desenvolvimento da doença.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LOPES FAC Dissertacao.pdf: 1587334 bytes, checksum: 1fcac951d597992ec49231a64f8eff03 (MD5) Previous issue date: 2012-02-24 / Devido aos efeitos danosos causados ao meio ambiemte e à procura por métodos mais eficientes, o uso de agrodefensivos vem sendo gradualmente substituído pelo uso de agentes de controle biológico. A utilização do gênero Trichoderma tem sido satisfatória no controle de vários fitopatógenos em diversas culturas agrícolas por meio da competição por nutrientes, produção de antibióticos e do micoparasitismo. Esse gênero possui sua taxonomia bastante discutida, porém com o advento de técnicas moleculares o problema da identificação da espécie do isolado estudado vem sendo resolvido. Os objetivos desse trabalho foram identificar isolados de Trichoderma spp. provenientes de diversas espécies cultivadas, além de visualizar as relações filogenéticas, e realizar a avaliação da atividade específica de enzimas hidrolíticas frente aos fitopatógenos Fusarium solani, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani e Sclerotinia sclerotiorum. Dentro os 100 isolados, 96 isolados foram identficados, sendo 43 isolados da espécie T. harzianum, 33 isolados de T. asperellum, 6 isolados de T. tomentosum, 5 isolados de T. koningiopsis, 4 isolados de T. erinaceum, 2 isolados de T. ghanense, 1 isolado de T. virens, 1 isolado de T. brevicompactum e 1 isolado de T. hamatum. Quatro isolados não foram identificados por nenhuma ferramenta molecular ou por análise filogenética. No estudo feito com as enzimas em F. oxysporum, todas as correlações apresentadas entre as atividades específicas são significativas, possuíam valores elevados de coeficiente de Pearson e positivos. Em F. solani, os resultados foram bastante semelhantes aos encontrados em F. oxysporum. Na indução com parede celular de R. solani, foram observadas correlações entre enzimas que desempenham papel fundamental no processo de micoparasitismo. Em S. sclerotiorum, foram observadas correlações entre enzimas envolvidas no processo de micoparasitismo. Os isolados T. asperellum 356/01, que obteve destaque em todas as enzimas estudadas em parede celular de F. oxysporum, T. asperellum 40T/03 e T. harzianum 100T/01, se destacando em praticamente todas as enzimas em F. solani, Trichoderma spp. 55/03, que apresentou as maiores atividades em Fosfatase ácida e Proteases em parede celular de R. solani, e o isolado T. erinaceum 17/06, possuindo atividades expressivas em NAGase nas paredes celulares de F. solani e R. solani e em β-1,3-glicanase na parede celular de R. solani, são alguns organismos que possuem um grande potencial para um futuro uso biotecnológico. Todos esses resultados levantados propiciam um melhor entendimento do mecanismo de micoparasitismo do gênero Trichoderma frente a fitopatógenos de grande importância

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao parte 1 lidiane biologia.pdf: 35041 bytes, checksum: c58f88ce1be4655ee71c7b5ab0bef247 (MD5) Previous issue date: 2008-04-03 / Paracoccidoides brasiliensis is a human pathogenic dimorphic fungus. The recombinant chitinase from P. brasiliensis, Pbcts1r, was overexpressed in Escherichia coli using pET-32a (+) as vector. The enzyme was produced as inclusion bodies and became soluble by Sarkosyl being purified by a single step using a Ni-NTA resin. Pbcts1r showed activity against 4-MU-(GlcNAc)3 and 4-MU-(GlcNAc)2, presenting a endochitinase activity. Immunoblot reaction with anti-Pbcts1r identified two proteins in yeast crude extract. A partial purification of P. brasiliensis yeast crude extract by cationic-exchange chromatography on HPLC revealed two different chitinases, Pbcts1 and Pbcts2, with molecular mass of 45 kDa and 34 kDa, respectively. Pbcts2 has exochitinase activity and Pbcts1 has endochitinase activities. Reactions with anti- Pbcts1r showed the presence of Pbcts1 and Pbcts2 in crude extracts of yeast and transition from mycelium to yeast. On mycelium crude extracts was found only Pbcts1 and on yeast cell wall extract only Pbcts2. Both proteins were found to be secreted by yeast parasitic phase showing their probable importance in the permanence of the fungus in the human host. Phylogenetic relationships between the orthologs Pbcts1 and the putative Pbcts2 indicated the presence of a common ancestral. During evolution, P. brasiliensis could have acquired Pbcts2 and Pbcts1 playing distinct roles in order to growth and survive in diverse environment on saprophytic and parasitic phases / Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico patogênico humano. A quitinase recombinante de P. brasiliensis, Pbcts1r, foi superexpressa em Escherichia coli utilizando pET-32(a)+ como vetor. A enzima foi produzida em corpos de inclusão e se tornou solúvel pela adição de sarkosyl, sendo purificada em um único passo com a utilização da resina Ni-NTA. Pbcts1r mostrou atividade diante de 4-MU-(GlcNAc)3 e 4- MU-(GlcNAc)2, apresentando atividade de endoquitinase. A reação de imunoblot com anti-Pbcts1r identificou duas proteínas no extrato bruto de levedura. A purificação parcial do extrato bruto de P. brasiliensis por cromatografia de troca-catiônica em HPLC revelou duas quitinases diferentes, Pbcts1 e Pbcts2, com massas moleculares de 45 e 34 kDa, respectivamente. Pbcts2 tem atividade de exoquitinase e Pbcts1 de endoquitinase. Reações com anti-Pbcts1r mostraram a presença de Pbcts1 e Pbcts2 no extrato bruto de levedura e transição de micélio para levedura. No extrato bruto de micélio foi encontrado somente Pbcts1 e no extrato de parede celular de levedura somente Pbcts2. Ambas as proteínas foram encontradas secretadas pela fase parasitária (levedura), mostrando a provável importância dessas proteínas na permanência do fungo no hospedeiro. Relações filogenéticas entre os ortólogos Pbcts1 e a provável Pbcts2 indicam a presença de um ancestral comum. Durante a evolução, P. brasiliensis poderia ter adquirido Pbcts2 e Pbcts1 desempenhando diferentes papéis para o crescimento e sobrevivência do fungo na fase saprofítica e parasitária

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao FINAL_EF_corrigida_BC-UFG.pdf: 1485117 bytes, checksum: ecdc9729cc08da2832a6566c39052f65 (MD5) Previous issue date: 2010-01-28 / The cell wall of pathogenic microbes acts as an initial barrier that is in contact with hostile environments. Besides functioning as a mechanical barrier, it harbours an immunogenic macromolecules arsenal. One of the ways that proteins can be associated to the cell wall, it is through GPI anchor. The hydrophobic C-terminal end of the β-1,3-glucanosyltransferase enzyme of the human pathogenic fungus Paracoccidioides brasiliensis is characteristic of GPI anchored proteins. The β-1,3-glucan assembling and rearrangement are essential since this molecule acts as a scaffold to support cell wall proteins and polysaccharides. In the thermodimorphic fungus P. brasiliensis, β-1,3-glucan is found predominantly in mycelium form and α-1,3-glucan is predominant in the yeast form. In this work, it was screened possible protein-protein interactions performed by β-1,3-glucanosyltransferase 1 of P. brasiliensis (PbGel1p). To obtain these results, a P. brasiliensis cDNA library was screened with PbGel1p using the Saccharomyces cerevisiae two hybrid system. In addition, pull-down assay was used as an in vitro complementary technique to isolate proteins that interact direct or indirectly with PbGel1p. It was screened 38 gene products using two hybrid system and it was identified 3 proteins using the pull-down assay associated with mass spectrometry. The PbGel1p role in the cell wall maintenance and remodeling was indicated through the analysis of screened interactions, like alpha-glucosides permease, acid phosphatase, GDSL lipase, septin, actin, tubulin, HSP90 and pyruvate kinase. Furthermore, nuclear localization of PbGel1p and its role in the locus-specific transcriptional silencing were suggested based on such interactions: Qde2 argonaute, transcription elongation factor spt6, others transcription factors and ATP-citrate synthase. Therefore, this study indicated, for the first time, that PbGel1p has multiple location and it participates either in roles classically described for glucanosyltransferases, as the cell wall remodeling, or in recently described functions for this family of proteins, as the locus-specific transcriptional silencing. / A parede celular de microrganismos patogênicos atua como uma barreira inicial no contato entre o parasito e o hospedeiro. Além de funcionar como uma barreira mecânica, ela abriga um arsenal de macromoléculas imunogênicas. Uma forma pela qual as proteínas estão associadas à parede celular é por meio de âncoras-GPI. A extremidade carboxila hidrofóbica da enzima β-1,3-glicanosiltransferase do fungo patogênico humano Paracoccidioides brasiliensis é característica de proteínas GPI-ancoradas. A montagem e o rearranjo de β-1,3- glicana são de fundamental importância porque esta molécula serve como um esqueleto sobre o qual outros polissacarídeos e proteínas da parede celular estão associados. No fungo termodimórfico P. brasiliensis, β-1,3-glicana é encontrada prioritariamente em micélio, sendo α-1,3-glicana predominante em levedura. Foram rastreadas neste trabalho possíveis interações proteína-proteína realizadas pela β-1,3-glicanosiltransferase 1 de P. brasiliensis (PbGel1p). Para isso utilizou-se a técnica de duplo-híbrido em Saccharomyces cerevisiae, rastreando-se uma biblioteca de cDNA do fungo P. brasiliensis com a enzima estudada. Adicionalmente, foi utilizado, como técnica complementar, o ensaio de pull-down, que isolou in vitro proteínas que interagem direta ou indiretamente com a PbGel1p. Foi possível rastrear 38 produtos gênicos através do sistema de duplo híbrido e isolar três proteínas pelo ensaio de pull-down, identificadas por espectrometria de massas. O papel da PbGel1p na manutenção e no remodelamento da parede celular do fungo foi indicado através da análise das interações rastreadas, como permease de α-glicosídeos, fosfatase ácida, lipase da família GDSL, septina, actina, tubulina, HSP90 e piruvato quinase. Além disso, foram sugeridos a localização da PbGel1p no núcleo das células do fungo e seu papel no silenciamento gênico mediado por alterações estruturais, por meio do rastreamento das seguintes proteínas ligantes a PbGel1p: argonauta Qde2, fator de alongamento transcricional spt6, outros fatores transcricionais e ATP-citrato sintase. Portanto, este estudo indicou, pela primeira vez, que PbGel1p tem localização múltipla e participa tanto de funções classicamente descritas para glicanosiltransferases, como o remodelamento da parede celular, quanto de funções recentemente descritas para essa família de proteínas, como o silenciamento transcricional sítio-específico.

Submitted by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-05-19T13:06:21Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruna Ferreira Silva - 2014.pdf: 2919390 bytes, checksum: 2190735798cc33f163fa7a9b67edf9ca (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Matias (lua_matias@yahoo.com.br) on 2015-05-19T14:23:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruna Ferreira Silva - 2014.pdf: 2919390 bytes, checksum: 2190735798cc33f163fa7a9b67edf9ca (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-19T14:23:40Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Bruna Ferreira Silva - 2014.pdf: 2919390 bytes, checksum: 2190735798cc33f163fa7a9b67edf9ca (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-09-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study was divided in two chapters. The first one focused the quantification of 26 chemical elements by ICP OES in 56 marine microalgae samples, which are potential raw material for biodiesel production. The results showed that most of these biomasses have more than 18% dry mass of these elements, when added, being much superior to freshwater microalgae and oilseeds already used in the process. These high contents were determined by Na, followed by, Mg, K and Ca, which are natural seawater constituents. It was possible to observe biosorption patterns of some chemical elements by the use of chemmometrics analysis. Among analyzed strains, P. tricornutum cultivated in f/2 media, washed with ammonium formiate and dried in incubator at 60ºC, seems to be the most promising to biodiesel destination. However, in order to get the main purpose of this study, elements profiles presented by microalgae aren't favorable, since small amounts of these elements are allowed in biodiesel because they are responsible for its oxidation and reaction with engine parts. Thus, in the second chapter it was evaluated biomass washing with water, in order to approach their compositions to conventional oilseeds. This step presents considerable removal of these elements by using 43 mL water to 1 g biomass, reaching 8% dry weight washed biomass. Therefore, it becomes preferable the use of freshwater microalgae for biodiesel production, leaving marine microalgae to other uses. / O presente estudo foi dividido em dois capítulos sendo que o primeiro focou à quantificação de 26 elementos químicos por ICP OES em 56 amostras de microalgas marinhas, que são potencial matéria-prima para a produção de biodiesel. Os resultados mostraram que a maioria destas biomassas continha mais de 18% em massa desses elementos, quando somados, sendo muito superior ao encontrado na literatura para microalgas dulcícolas e oleaginosas já utilizadas no processo. Além disso, estes elevados conteúdos foram determinados pelo elemento Na, seguido por Mg, K e Ca, que são constituintes naturais da água do mar. Foi possível observar, também, padrões de biossorção de alguns elementos químicos por meio da utilização de análise quimiométrica. Dentre as cepas analisadas, P. tricornutum cultivada em meio f/2, lavada com formiato de amônio e seca em estufa a 60ºC mostrou-se a mais promissora para tal destinação. Todavia, em vista do principal objetivo, os perfis de elementos apresentados por grande parte das microalgas não são favoráveis, já que pequenas quantidades destes elementos são permitidas no biodiesel por serem responsáveis pela oxidação do combustível e reações com partes do motor. Dessa forma, no segundo capítulo avaliou-se a lavagem da biomassa com água, a fim de aproximar suas composições às de oleaginosas convencionais. Os resultados dessa etapa mostraram que tais elementos são removidos consideravelmente com a proporção de 43 mL de água para 1 g de biomassa, atingindo até 8% em massa da microalga lavada. Assim, torna-se preferível o uso de microalgas dulcícolas para a produção de biodiesel, deixando as microalgas marinhas para outras finalidades.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2015-11-19T17:05:05Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Rodrigues de Oliveira - 2015.pdf: 1754949 bytes, checksum: 32fc5784ffa91959642465ef80f3019f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2015-11-20T13:06:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Rodrigues de Oliveira - 2015.pdf: 1754949 bytes, checksum: 32fc5784ffa91959642465ef80f3019f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T13:06:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Amanda Rodrigues de Oliveira - 2015.pdf: 1754949 bytes, checksum: 32fc5784ffa91959642465ef80f3019f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-03-10 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Paracoccidioides is a termodimorphic fungus that causes paracoccidioidomycosis (PCM), the most frequent systemic mycosis that affects mainly the rural population in Latin America. The fungus grows as yeast when grown at 35-37° C and as mycelium at temperatures below 28° C. The establishment and severity of the disease depends on factors inherent to the fungus and the host. The diversity presented among isolates of the same genus has been explored between the microorganisms and attempt to clarify differences possibly related to virulence existing between isolates that cause the same disease. The secretion of proteins in a cell is a highly dynamic mechanism and is directly involved in the first pathogen contact with the host cells, enabling their survival, multiplication and dissemination. In order to try to elucidate this diversity the proteomic profile of secretome of two isolates of Paracoccidioides, PbEpm83 and Pb01, that in our experimental conditions of infection showed different behaviors was characterized. The use of Ultra Performance liquid chromatography coupled to mass spectrometry (UPLC-MSE) allowed the identification of 92 proteins / isoforms among the strains. Of the 92 proteins identified, 36 were preferentially secreted in PbEpm83 and 35 preferentially secreted in Pb01. Among the identified we can highlight proteins related to various biological processes: adhesion to the ECM, proteins related to thermal and oxidative stress, cell rescue, defense and virulence, proteins with immunogenic capacity, proteins related to defense against antifungal, heat shock proteins, among others. Our analysis showed that most of the proteins identified using non-conventional secretory pathways. Among the identified proteins there are already related proteins as virulence factors, such as, ATP synthase, mitochondrial Peroxiredoxin PRX 1, fructose bisphosphate aldolase, Didpeptidil peptidase, Thioredoxin, TCTP, Hsp70 and Hsp88. Our results highlight the importance of secreted proteins in the establishment of infection and that these species, within the same genus, maintain differences in the levels of protein expression that may reflect their behavior in the success of the infection. / Paracoccidioides é um fungo termodimórfico causador da paracoccidioidomicose (PCM), a mais frequente micose sistêmica que afeta, principalmente, a população rural na América Latina. O fungo cresce como levedura quando cultivado à 35-37 °C e como micélio à temperaturas inferiores à 28 °C. O estabelecimento e severidade da doença dependem de fatores inerentes ao fungo bem como ao hospedeiro. A diversidade apresentada entre isolados de um mesmo gênero tem sido explorada entre micro-organismos e procura elucidar diferenças possivelmente relacionadas à virulência existentes entre isolados que causam a mesma doença. A secreção de proteínas em uma célula é um mecanismo altamente dinâmico e que está diretamente envolvido nos primeiros contatos do patógeno com as células do hospedeiro, capacitando sua sobrevivência, multiplicação e disseminação. A fim de tentar elucidar essa diversidade o perfil proteômico do secretoma de dois isolados de Paracoccidioides, PbEpm83 e Pb01, pertencentes à duas espécies filogenéticas diferentes, que em nossas condições experimentais de infecção apresentaram comportamentos diferentes foi caracterizado. A utilização da Cromatografia Líquida de Ultraperformance acoplada à Espectrometria de Massas (UPLC-MSE) permitiu a identificação de 92 proteínas/isoformas entre as amostras testadas. Das 92 proteínas identificadas, 36 foram preferencialmente secretadas em PbEpm83 e 35 preferencialmente secretadas em Pb01. Dentre as identificadas podemos destacar proteínas relacionadas à vários processos biológicos: adesão à MEC, proteínas relacionadas ao estresse térmico e oxidativo, resgate celular, defesa e virulência, proteínas com capacidades imunogênicas, proteínas relacionadas à defesa contra antifúngicos, proteínas de choque térmico, entre outras funções. Nossas análises mostraram que a maioria das proteínas identificadas utilizam vias secretórias não-convencionais. Entre as proteínas identificadas estão proteínas já relacionadas como fatores de virulência: ATP sintase, Peroxirredoxina mitocondrial PRX 1, Frutose bifosfato aldolase, Didpeptidil peptidase, Tioredoxina, TCTP, Hsp70 e Hsp88. Nossos resultados ressaltam a importância das proteínas secretadas no estabelecimento da infecção e que estas espécies dentro do mesmo gênero mantêm diferenças nos níveis de expressão proteica que podem refletir em seu comportamento no sucesso da infecção.