Submitted by Alice Araujo (alice.caraujo@ufpe.br) on 2018-04-12T21:58:30Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Reginaldo Correia da Silva Filho.pdf: 4183934 bytes, checksum: 4b0fd8facd3c9bc7822f6851cebcf95d (MD5) / Made available in DSpace on 2018-04-12T21:58:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO Reginaldo Correia da Silva Filho.pdf: 4183934 bytes, checksum: 4b0fd8facd3c9bc7822f6851cebcf95d (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Plasticidade fenotípica pode ser definida como a propriedade de um genótipo individual gerar diferentes fenótipos, quando exposto a diferentes condições ambientais. O desenvolvimento fetal em mamíferos ocorre de forma complexa e envolve diferentes processos que são regulados por vias de sinalização. No entanto, essas vias de sinalização podem ser influenciadas pela interação entre fatores fetais intrínsecos (por exemplo, genética) e fatores ambientais extrínsecos (por exemplo, nutrição placentária e peso materno antes da gestação), podendo culminar em desenvolvimento anormal de órgãos. Apesar disso, um ambiente fetal inadequado não necessariamente resultará num desenvolvimento deletério e poucos estudos têm mostrado os mecanismos envolvidos na plasticidade do fígado frente ao insulto da restrição proteica perinatal. Este órgão atua como sensor inicial de nutrientes e tem um papel fundamental no metabolismo de carboidratos e lipídeos, além de apresentar uma alta capacidade plástica. Todas as etapas da oxidação de carboidratos, ácidos graxos e aminoácidos convergem no estágio final da respiração celular, em que a energia da oxidação dirige a síntese de ATP nas mitocôndrias. Além da produção de energia, esta organela tem emergido como mecanismo de sinalização, injúria e morte celular. Neste trabalho, objetivamos avaliar o efeito da restrição proteica materna (na gestação e lactação) na bioenergética mitocondrial e estado redox hepático de ratos machos aos 100 dias de vida. Observamos que em animais desnutridos, as mitocôndrias respiram mais rápido, são mais resistentes ao íon Ca2+, produzem menos EROs e mantêm a integridade de suas membranas. Essas mitocôndrias também apresentaram estrutura fusionada, alongadas, o que confere maior resistência e otimização da homeostase energética. Além do mais, o fígado desses animais possui maior expressão do gene PGC-1α e da proteína PPAR-γ e metaboliza mais ácidos graxos, poupando glicogênio para órgãos glicolíticos. Por fim, o fígado de animais desnutridos possui estado redox positivo e não apresenta estresse oxidativo. Nossos dados permitem sugerir que a plasticidade do fígado de animais cujas mães receberam dieta hipoprotéica durante a gestação e lactação parece estar associada a um mecanismo sinalizado pela maior eficiência das mitocôndrias para manter a homeostase energética e consequentemente a homeostase redox celular hepática. / Phenotypic plasticity can be defined as the property of an individual genotype generates different phenotypes when exposed to different environmental conditions. Fetal development in mammals occurs in complex ways and involves different processes that are regulated by signaling pathways. However, these signaling pathways may be influenced by the interaction between intrinsic fetal factors (e.g. genetics) and extrinsic environmental factors (e.g. placental nutrition and maternal weight before gestation), which may culminate in abnormal organ development. However, an inadequate fetal environment will not necessarily result in deleterious development and few studies have shown the mechanisms involved in the liver plasticity versus the insult of perinatal protein restriction. This organ acts as initial nutrient sensor and plays a key role on the metabolism of carbohydrates and lipids, besides presenting a high plastic capacity. All steps of the oxidation of carbohydrates, fatty acids and amino acids converge in the final stage of cellular respiration, in which the energy of oxidation directs the ATP synthesis in the mitochondria. In addition to energy production, this organelle has emerged as a mechanism of signaling, injury and cell death. In this work, we aimed to evaluate the effect of maternal protein restriction (in gestation and lactation) on mitochondrial bioenergetics and hepatic redox status of male rats at 100 days of life. We observed that in low protein animals, mitochondria breathe faster, are more resistant to the Ca2+ ion, produce fewer ROS and maintain the integrity of their membranes. These mitochondria also presented a fused structure, elongated, which confers greater resistance and optimizes energy homeostasis. Moreover, the liver of these animals has greater expression of the PGC-1α gene and the PPAR-γ protein and metabolizes more fatty acids, stores glycogen to glycolytic organs. Finally, the liver of low protein animals has a positive redox state and does not present oxidative stress. Our data suggest that liver plasticity of animals whose mothers received low protein diet during pregnancy and lactation seems to be associated with a mechanism signaled by the greater efficiency of mitochondria to maintaining energy homeostasis and consequently hepatic cellular redox homeostasis.

Orientador: Anibal Eugenio Vercesi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T17:46:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Inada_NataliaMayumi_D.pdf: 2015643 bytes, checksum: 46616bc6e9a94ab575e17060c6ed0645 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A ação das meso-porfirinas catiônica Fe(III)TMPyP e aniônica Fe(III)TPPS4 sobre a função mitocondrial e viabilidade de células de tumor de próstata LNCaP foi investigada. O tratamento das suspensões mitocondriais com 1 µM de Fe(III)TMPyP por 2 minutos e 45 segundos no escuro diminuiu o controle respiratório mitocondrial (C.R.) em 3%. A irradiação potencializou este efeito, induzindo uma queda no C.R. em 28%. A porfirina aniônica Fe(III)TPPS4, nas mesmas condições experimentais, não provocou efeito significativo algum. Ambas porfirinas aumentaram a produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) na presença de Ca2+; o efeito de Fe(III)TMPyP foi significativamente maior. Esta porfirina catiônica, porém não a aniônica, promoveu o fenômeno de transição de permeabilidade mitocondrial (TPM), sensível à ciclosporina A (CsA). Além disso, Fe(III)TMPyP apresentou uma constante de associação (Kb) com mitocôndrias 11 vezes maior que Fe(III)TPPS4, provavelmente devido às interações eletroestáticas entre a porfirina catiônica e a membrana mitocondrial interna, carregada negativamente. Observou-se também que ambas porfirinas diminuíram a viabilidade de células tumorais de maneira dose-dependente, apresentando um IC50 de aproximadamente 15 µM, após 48 h de incubação no escuro. Tratando as células com a dose de 10 µM para cada porfirina e um tempo menor de exposição no escuro (1 h), observou-se efeito significativo após a irradiação das amostras. Nas condições experimentais testadas, a morte celular predominante foi a necrose (26% das células tratadas com a porfirina aniônica e 29%, com a catiônica). A apoptose ocorreu após irradiação, sendo o efeito da Fe(III)TMPyP duas vezes maior (14%) que o efeito da Fe(III)TPPS4 (7%). Ambas porfirinas aumentaram de maneira significativa a concentração intracelular do íon Ca2+ ([Ca2+]cit) após a irradiação. Tanto a necrose, como a apoptose foram mediadas pelo aumento da [Ca2+]cit, uma vez que ambas foram inibidas pelo quelante de Ca2+ citosólico BAPTA/AM. A CsA preveniu as mortes necrótica e apoptótica das células LNCaP tratadas e irradiadas na presença de ambos compostos / Abstract: The action of irradiated cationic Fe(III)TMPyP and anionic Fe(III)TPPS4 forms of mesoporphyrins on mitochondrial functions was investigated using experimental conditions that caused minimal effects on mitochondria in the dark. Treatment of mitochondria with 1 µM Fe(III)TMPyP for 2 min decreased the respiratory control by 3% in the dark and 28% after irradiation. Fe(III)TPPS4 (1 µM) had no significant effect on respiratory control under any of the above conditions. Both porphyrins increased mitochondrial production of reactive oxygen species in the presence of Ca2+; however, the effect of Fe(III)TMPyP was significantly stronger. Fe(III)TMPyP but not Fe(III)TPPS4 promoted cyclosporin A-sensitive mitochondrial permeability transition. It was also observed that the association constant of Fe(III)TMPyP with mitochondria was 11 times higher than Fe(III)TPPS4. In conclusion, the damage to isolated mitochondria induced by Fe(III)TMPyP under illumination was larger than by Fe(III)TPPS4, probably because its cationic charge favors association with the mitochondrial membrane. The citotoxic effect of both porphyrins, prior the irradiation and upon the cell viability were dose-dependent and the IC50 were approximatly 15 µM, after 48 hours of incubation. No significantly cytotoxic effect was observed when the tumor cells were treated with 10 µM for each porphyrin, in a time of incubation in the dark of one hour. This was significant only after the photoactivation of the samples. In these conditions, the irradiation of the tumor cells induced cell death both via necrose and apoptose. Cell death via necrose was higher for both porphyrins. Irradiation of both porphyrins significantly increased the cytosolic Ca2+ concentration ([Ca2+]cit) of the LNCaP cells, which mediated cell death, once BAPTA/AM (an intracellular Ca2+ chelator) protected against cell death. Mitochondrial permeability transition (MPT) was probably participating in these mechanisms since cyclosporin A prevented cell death / Doutorado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Doutor em Fisiopatologia Medica

Submitted by Marlene Santos (marlene.bc.ufg@gmail.com) on 2016-09-21T17:44:11Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Wellington Roriz de Oliveira Júnior - 2016.pdf: 2334458 bytes, checksum: 6aeeb655f607e3d2a58fdb88ee7922f7 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2016-09-23T17:07:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Wellington Roriz de Oliveira Júnior - 2016.pdf: 2334458 bytes, checksum: 6aeeb655f607e3d2a58fdb88ee7922f7 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-23T17:07:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Wellington Roriz de Oliveira Júnior - 2016.pdf: 2334458 bytes, checksum: 6aeeb655f607e3d2a58fdb88ee7922f7 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-08-25 / This study has the objective to analyze the relationship between body and mind in Alexander Lowen´s publications to discuss how the body illness is related to the character structures. For this, we seek to know how the body appears as a concept in the perspective presented by the author; discuss how is and how historically builds the relationship between body and mind in his approach; know how the character and illness concepts were built in his theory; discuss how the author develops the relationship between both. It was assumed as hypothesis that the character appears as an important joint point between mind and body and that its constitution is related to the body illness. Bibliographic and qualitative research was used, and the method used was Categorical Content Analysis of Lowen publications, his precursors and also of current articles on the topic. Five categories were developed to analyze the collected information: child development; the concept of energy; the relationship between the ego and the body; the emotions and sexuality; and the individual's relationship with the historical and social context in which they live. We conclude that the character appears as a fundamental and resulting element in the relationship between mind and body and that its constitution follows the same function of the illness, which is to react to a stressor element and restore the body's balance. Therefore, there is a relationship between them, since different types of character handle the particular disease forms. It is noticed that individuals with a combination of oral and rigid traits have unique characteristics that make them more prone to bodily illness than individuals with other character structures. This way of categorization changes among the author´s publications. We emphasize the importance of the concepts discussed by Lowen in structuring his theory and in developing a perspective in psychology that addresses the body and mind in an integrated manner. / O presente trabalho tem como objetivo analisar a relação entre corpo e mente na obra de Alexander Lowen, no intento de discutir como o adoecimento corporal se relaciona com as estruturas de caráter. Para isso, busca-se: a) conhecer como o corpo aparece como conceito na perspectiva apresentada pelo autor; b) analisar como se dá e como se constrói historicamente a relação entre corpo e mente nessa abordagem; c) conhecer como se constroem e se fundamentam os conceitos de caráter e adoecimento em sua teoria; d) debater como o autor desenvolve a articulação entre ambos. Assumiu-se como hipóteses que o caráter se mostra como um ponto de articulação importante entre mente e corpo e que sua constituição está relacionada ao adoecimento corporal. Foi utilizada pesquisa bibliográfica, qualitativa, e o método utilizado foi a Análise de Conteúdo Categorial das obras de Lowen, assim como de seus precursores, bem como artigos atuais sobre a temática. Cinco categorias foram elaboradas para a análise dos dados coletados: o desenvolvimento infantil; o conceito de energia; a relação entre o ego e o corpo; as emoções e a sexualidade; e a relação do indivíduo com o contexto sócio-histórico em que vive. Conclui-se que o caráter se mostra como elemento fundamental e resultante na relação entre corpo e mente. Além disso, sua constituição segue a mesma função do adoecimento, que é a de reagir a um agente estressante e restabelecer o equilíbrio do organismo. Portanto, há uma relação entre ambos, uma vez que diferentes tipos de caráter lidam com a doença de formas particulares. Percebe-se que indivíduos com a combinação de traços orais e rígidos possuem características peculiares que os tornam mais propensos ao adoecimento corporal do que indivíduos com outras estruturas de caráter, embora essa forma de categorização se modifique ao longo da obra do autor. Ressalta-se a importância dos conceitos discutidos por Lowen na estruturação de sua teoria e no desenvolvimento de uma perspectiva em psicologia que aborde o corpo e a mente de forma integrada.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-06T13:56:13Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4206218 bytes, checksum: 1ab8811fdfb49e96c8403829a66a38e2 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-06T13:56:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 4206218 bytes, checksum: 1ab8811fdfb49e96c8403829a66a38e2 (MD5) Previous issue date: 2013-07-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Diante do contínuo aumento mundial de doenças como o câncer do tipo melanoma e infecções causadas por Staphylococus aureus resistentes à meticilina, a pesquisa por novos fármacos tem ganhado importância cada vez maior no mundo científico. O Brasil é um dos países com maior biodiversidade vegetal no mundo. Entretanto, muito pouco ainda se sabe sobre as propriedades terapêuticas desse patrimônio vegetal. O objetivo desse estudo foi avaliar, in vitro, o potencial citotóxico dos extratos hidroalcoólcios de Inga subnuda subsp. Luschnathiana (Benth.) T.D.Penn. (ingá) e Rollinia dolabripetala (Raddi) R.E. Fr. (araticum, marolo), dos flavonóides naringina e morina e de xantonas, sobre o câncer de pele do tipo melanoma, realizando um comparativo com a atividade do fármaco comercial 5-Fluoracil (5-FU). Os extratos também tiveram sua eficácia testada, in vitro, quanto ao seu potencial antioxidativo e potencial bactericida principalmente em cepas Gram-positivas. A avaliação da citotoxicidade foi baseada na linhagem B16F10 submetida ao ensaio colorimétrico do MTT. O extrato de I. subnuda apresentou ação bactericida contra todas as cepas bacterianas testadas, enquanto o extrato de R. dolabripetala apresentou atividade apenas contra S. aureus ATCC 29213. O extrato de I. subnuda desempenhou atividade antioxidante estatísticamente maior (p < 0,05) que os extratos de Gingko biloba (controle) e R. dolabripetala, tanto no teste do DPPH quanto no de peroxidação lipídica. No teste de citotoxicidade, a naringina foi considerada uma substância inativa para este tipo de câncerpatologia e a morina promoveu maior citotoxicidade no período de 72 horas (98,48% ± 0,71) com diferença significativa em relação ao controle (α < 0,05). Contudo, assim como a 1,7- dihidroxixantona, o potencial uso terapêutico da morina dificilmente será considerado devido a alta concentração necessária para desempenhar atividade citotóxica relevante (1,25x103 μg/mL). Assim, o extrato de ingá foi considerado o mais efetivo por, no tempo de 24, 48 e 72 horas, desencadear mais de 80% de citotoxicidade com a menor concentração (78,13 μg/mL). Os resultados indicam que ambos os extratos apresentam atividade antioxidante, antibacteriana e citotóxica, mas estudos posteriores são necessários para uma melhor compreensão das promissoras atividades biológicas dos extratos. / The increasing world-wide rates of deseases such as melanoma skin cancer and infections caused by methicillin-resistant strains of Staphylococcus aureus has historically attracted the attention of researchers about the development of new drugs. Brazil has one of the world's greatest biodiversity; nevertheless, the majority of plants with therapeutic potential still unclear. The aim of present study was to evaluate the in vitro antiproliferative activity of naringin, morin, xanthones and hydroalcoholic extracts of Inga subnuda subsp. Luschnathiana (Benth.) T.D.Penn. and Rollinia dolabripetala (Raddi) R.E. Fr., compared of Fluorouracil (5-FU). Both extracts were evalueted about their antioxidant capability and about their antimicrobial activity mainly against Gram- positive bacterias. The cytotoxicity test methodology was based on the MTT colorimetric assay and was performed on B16-F10 melanoma cells. The I. subnuda extract was effective against the three strains of bacteria, whereas the R. dolabripetala extract was effective just against S. aureus ATCC 29213. The I. subnuda extract performed a statistical higher antioxidant activity (p < 0,05) than the Gingko biloba (control) and R. dolabripetala extracts in both antioxidative tests. The naringin was considered as inactive substance against this cancer cell and the morin bring about the higher citotoxity in 72 hours (98,48% ± 0,71) with statistically significant difference compared to the control group (α < 0,05). On the other hand, as 1,7-dihydroxyxanthone, the therapeutic use of the morin for this porpose could be disregarded due the high concentration required for relevant citotoxity activity (1,25x10 3 μg/mL of both). Thus, the I. subnuda extract was regarded as the most effective tested substance by his up to 80% citotoxity capability under all treatment periodo (24, 48, 72 hours). Moreover, the citotoxity test of I. subnuda extract required the lowest concentration for a effective result (78,13 μg/mL). The experiments reported tha both extracts play a role as an antioxidant, an antibacterial and a cytotoxic agent. However, further studies are required for a better understanding about their biological activities.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-01-19T17:23:35Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1894388 bytes, checksum: 96cebeeeab77fe854ae9bf556f51131f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-19T17:23:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1894388 bytes, checksum: 96cebeeeab77fe854ae9bf556f51131f (MD5) Previous issue date: 2016-11-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Nas últimas décadas, tem-se observado um crescente interesse nas biomassas residuais de composição lignocelulósica para produção de energia, destacando-se o etanol de segunda geração. Entre a biomassa lignocelulósica disponível se encontra os resíduos provenientes da bananicultura, cultura importante nas regiões tropicais e subtropicais. Nesse contexto, o presente trabalho objetivou estudar o potencial do pseudocaule de bananeira (Prata Anã) para a produção do etanol de segunda geração. No primeiro capítulo do trabalho foram realizados pré-tratamentos hidrotérmico e alcalino utilizando micro-ondas. O pré-tratamento hidrotérmico foi realizado sob diferentes temperaturas (130 ° a 210 ° O pré-tratamento alcalino C C). foi realizado de acordo com um delineamento composto central, cujas variáveis estudadas foram: temperatura (190 ° - 210 ° e concentração de hidróxido de C C) sódio (0,5 % - 1,5 %, m/v). A eficiência dos pré-tratamentos foi verificada através da comparação de análises químicas dos materiais in natura e pré-tratados e da conversão de celulose em glicose por hidrólise enzimática, além de sacarificação e fermentação simultânea de alguns pré-tratados. As variáveis temperatura e concentração de NaOH apresentaram efeitos lineares significativos. Como melhores resultados dessa etapa, foram obtidos 77 % de conversão enzimática para o pré- tratado hidrotérmico (210 ° 40 minutos), 78,3 % para o alcalino (190 ° 0,5 % C, C, NaOH) e 56 % para material não tratado. Em relação aos resultados de SSF, foram obtidos rendimentos de etanol de 86,5 % para pré-tratado hidrotérmico, 85,3 % para alcalino e 70,5 % para o material não tratado. Esses ensaios de hidrólise enzimática e SSF foram realizadas em tubos de 20 mL, utilizando 2,5 % (p/v) de concentração de sólidos, 50 FPU/g de Cellic Ctec 2, Saccharomyces cerevisiae NCYC 2826, por 120 dias sob 120 rpm de agitação, sendo que a hidrólise foi realizada a 25 ° e SSF C à 37 ° No segundo capítulo foi realizado um pré-tratamento hidrotérmico utilizando C. reator Parr de 18 litros, sendo as condições determinadas por delineamento composto central: temperatura (170 ° - 210 ° tempo de reação (10 min - 20 min) C C), e razão sólido/líquido (1/10 - 1/15). Os efeitos lineares das variáveis foram significativas, além do efeito quadrático da variável razão sólido/líquido. A hidrólise enzimática foi realizada à 50 ° por 72 horas, utilizando enzima Cellic Ctec (5,4 %, C, p/p) com 8 % (p/v) de sólidos. O pré-tratamento hidrotérmico em reator Parr mostrou-se eficiente no aumento do rendimento de glicose após hidrólise enzimática, alcançando rendimento máximo de glicose de 98 % na condição do ensaio 6 (210 ° 10 minutos, S/L de 1/15). / In recent decades, there has been a growing interest in the residual biomass of lignocellulosic material for energy production, especially second-generation ethanol. Among the available lignocellulosic biomass are residues from banana cultivation, an important crop in tropical and subtropical regions. In this context, the present work aimed to study the production of second-generation ethanol using banana pseudostem as raw material. In the first chapter of this work, hydrothermal and alkaline pretreatments were carried out for 10 minutes of reaction time using a microwave. The hydrothermal pretreatment was performed under different temperatures (130 ° to 210 ° C C). The alkaline pre-treatment was performed according to a central composite design, of which the studied variables were: temperature (190 ° - 210 ° and sodium hydroxide concentration (0.5 % - 1.5 %, C C) m/v). The efficiency of the pretreatments was verified by comparing chemical analyzes of the in natura and pretreated materials and their conversion of cellulose to glucose after enzymatic hydrolysis and their ethanol yield after simultaneous saccharification and fermentation. The variables NaOH concentration and temperature showed significant linear effects. As best results of this step, were obtained 77 % of enzymatic conversion using hydrothermal pretreated (210 ° 40 C, minutes), 78.3 % using alkaline pretreated (190 ° 0.5 % NaOH) and 56 % using the C, untreated material. Regarding SSF results, 86.5 % of ethanol yields were obtained using hydrothermal pretreated, 85.3 % using alkaline and 70.5 % using untreated material. These enzyme hydrolysis and SSF assays were performed in 20 mL tubes using 2.5 % (w/v) solid concentration, 50 FPU/g Cellic Ctec 2 and Saccharomyces cerevisiae NCYC 2826 at 25 ° for 120 days under 120 rpm of stirring. The C enzymatic hydrolysis was performed at 25 ° and SSF at 37 °C. In the second C chapter, hydrothermal pretreatment was performed using 18 liters Parr reactor with the conditions determined by central composite design: temperature (170 ° - 210 C ° C), reaction time (10 min - 20 min) and solid/liquid ratio (1/10 - 1/15). The linear effects of the variables were significant, in addition to the quadratic effect of the variable solid/liquid ratio. The enzymatic hydrolysis was performed at 50 °C for 72 hours using Cellic Ctec enzyme (5.4 %, w/w) and 8 % (w/v) solid. Hydrothermal pre- treatment in Parr reactor proved to be efficient in increasing glucose yield after enzymatic hydrolysis, achieving maximum glucose yield of 98 % under assay 6 condition (210 ° 10 minutes, 1/15 S/L).

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-01-25T16:17:58Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3788715 bytes, checksum: e898bc002bd78560aca9d5754065157a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-25T16:17:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3788715 bytes, checksum: e898bc002bd78560aca9d5754065157a (MD5) Previous issue date: 2016-06-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A Lecythis pisonis Cambess conhecida popularmente como castanha de sapucaia, tem origem brasileira e é proveniente da Floresta Pluvial Atlântica. Estudos prévios realizados com a sapucaia em nosso laboratório demonstraram a presença de importantes compostos quimicos da sapucaia e revelaram que o uso contínuo na dieta poderá contribuir para efeitos benéficos à saúde. Os principais resultados mostraram que a sapucaia é fonte expressiva de ácidos graxos insaturados, proteínas e minerais como manganês, magnésio zinco e que, em conjunto, podem configurar como potenciais agentes protetores em diferentes desordens metabólicas. Tem-se verificado na literatura que o consumo de castanhas pode trazer importantes benefícios a saúde humana. Alguns trabalhos atribuem às castanhas e nozes efeitos na prevenção de doenças crônicas não transmissiveis ligadas ao estresse oxidativo. Diante de tais informações objetivamos avaliar a capacidade antioxidante e anti-inflamatória da castanha de sapucaia inserida em diferentes tipos de dieta, a AIN93G e a Dieta de Cafeteria em tecidos hepático e cerebral de 48 ratos da linhagem Wistar. Os animais foram divididos em quatro grupos e o estudo foi conduzido por 28 dias e realizada eutanásia no 14o e no 28o de todos od grupos para que fosse avaliado o impacto em relação ao tempo no metabolismo animal. A Expressão gênica dos marcadores inflamatórios TNF-α e NFkB, bem como dos marcadores antioxidantes ZnSOD e HSP-72 foi determinada pela reação em cadeia da polimerase quantitativa pós-transcrição reversa (qPCR). A atividade antioxidante também foi verificada pela determinação das espécies reativas do ácido tiobarbitúrico (TBARS) e por mensuração da atividade da enzima superóxido dismutase. A expressão gênica dos marcadores inflamatórios NFkB (p65) e TNF-α foi menor para os grupos de ratos que consumiram as dietas enriquecidas com sapucaia com diferença significativa pelo teste de Tukey (p<0,05). A proteína de choque térmico HSP- 72 e a enzima ZnSOD apresentaram aumento da expressão gênica com diferença estatística significativa (p<0,05) para ambos os grupos que consumiram sapucaia em suas dietas. As propriedades nutricionais da castanha de sapucaia exerceram importante atividade protetora por modular a atividade antioxidante e o processo inflamatório nos tecidos hepático e cerebral dos animais avaliados. / Popularly known as “sapucaia nut”, Lecythis Pisonis Cambess is a brazilian native tree found in the Atlantic Pluvial Forest. The sapucaia nuts have a marvelous taste and can be eaten raw, boiled or baked. Chemical compostion data from our laboratory studies shows that these nuts have great nutritional value the bioactive compoudns founded among its contituents. Literature as well indicates that nuts consumption can improve health by preventing chronic diseases related to oxidative stress. Thus, the present work aimed to investigate the potential of two sapucaia nuts enriched diets in Wistar rats tissues (liver and brain), AIN-93G and Cafeteria Diet. The animals were divided in four groups and fed during four weeks in order to evaluate the acute and chronic effects of the sapucaia nuts consumption. The gene expression of the antinflamatory markers TNF-α and NFkB and the antioxidant markers ZnSOD and HSP-72 Transcription were determinated Polymerase Chain by Real-Time Reaction quantitative (Real-Time Reverse qRT-PCR). The antioxidant activity was also evaluated in the tissues (liver and brain) by quantificatoin of tiobarbituric acid reactive species (TBARS) and determination of the superoxide dismutase (SOD) enzyme activity. Results evince that the sapucaia nuts enriched diets presented antioxidant and antinflamatory effects in rat’s liver and brain tissues with statistical significance. The two and four week periods of the sapucaia nut enriched Cafeteria diet intake were able to avoid liver and brain oxidative damages caused by the Cafeteria diet stress. Such health benefits are due to the SOD activity’s increase and the lipid peroxidation decrease in rat’s tissues, witch in turn reduced the inflamatory markers gene expression. Accordingly, the gene expression of the inflammatory markers NFkB (p65) and TNF-α was lower in rats fed on diets supplemented with “sapucaia”, and they presented significant difference in the Tukey test (p<0.05). The heat-shock HSP-72 protein and the ZnSOD enzyme raised the gene expression and showed significant statistical difference (p<0.05) in both groups fed on Sapucaia nut-based diet. Thus, the nutritional properties of the Sapucaia nuts perform important protective activities because they modulated the anti- oxidant activity and the brain tissue inflammatory process in the assessed animals. According to the results found in this work the sapucaia nut becomes an important and protective dietary component against tissue oxidant and inflamatory agents.

A ribonucleoproteína heterogênea nuclear K (hnRNP K) é uma proteína envolvida em processos de expressão gênica e tem sido proposta como ligante de RNAs mensageiros mitocondriais. Apesar de ser considerada um marcador de pior prognóstico no câncer de cabeça e pescoço, o papel da hnRNP K nesta doença ainda é pouco conhecido. O objetivo deste trabalho foi estudar o envolvimento da hnRNP K na mitocôndria com ênfase na bioenergética e na identificação de novos potenciais ligantes de hnRNP K. As linhagens celulares utilizadas foram de carcinoma de cabeça e pescoço (HN13 e CAL 27) com silenciamento de RNA para hnRNP K e células HEK293 com super-expressão de hnRNP K. O efeito do acúmulo celular da hnRNP K na cadeia transportadora de elétrons mitocondrial foi avaliado por meio da atividade dos complexos mitocondriais I, II e V em células HN13. A redução do nível de hnRNP K usando RNA de interferência promoveu uma diminuição da atividade dos complexos nas células HN13, indicando o envolvimento da proteína na eficiência do transporte de elétrons na cadeia respiratória mitocondrial. Células HEK293 com super-expressão da hnRNP K (HEK293/hnRNP K) e as linhagens HN13 e CAL 27 com silenciamento e redução estável de hnRNP K foram utilizadas para determinar o papel de hnRNP K no potencial de membrana mitocondrial, níveis de ATP, produção de lactato e consumo de oxigênio. Células HEK293/hnRNP K comparadas ao controle apresentaram maior nível de ATP, menor potencial de membrana mitocondrial, menor consumo de oxigênio e maior produção de lactato. As células HN13 com redução da hnRNP K apresentaram níveis mais baixos de ATP, com menor liberação de lactato para o meio extracelular e maior consumo de oxigênio. Esses resultados sugerem que o acúmulo da proteína hnRNP K tem ação importante na mitocôndria por alterar o metabolismo bioenergético celular de fosforilação oxidativa para glicólise anaeróbica. A estratégia de co-imunoprecipitação usando anticorpos para hnRNP K, digestão de proteínas com tripsina e cromatografia líquida acoplada a espectrômetria de massa foi usada para encontrar novos potenciais ligantes de hnRNP K. A análise dos dados com o software SEPro identificou 57 proteínas candidatas a ligantes da hnRNP K. Três proteínas foram validadas por co-IP e Western blotting: o fator de transcrição mitocondrial PTCD3, YB1 e PSF. Propomos que a hnRNP K apresenta função na energética mitocondrial, e provavelmente, a sua interação com PTCD3 participa desta função. / Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K (hnRNP K) is a protein involved in gene expression processes, which has been proposed to bind mitochondrial mRNAs. Despite it to be considered a prognostic marker in cancer, the hnRNPK role in this disease is unknown. We addressed the involvement of hnRNP K in mitochondria with emphasis on bioenergetics and identification of new potential ligands of hnRNP K. The cell lines used were from head and neck squamous cell carcinoma (HN13 and CAL 27) with RNA silencing for hnRNP K , and HEK293 cells with overexpression of hnRNP K. The effects of cellular accumulation of hnRNP K in mitochondrial electron chain carriers were assessed by the activity of mitochondrial complexes I, II and V in HN13 cells. Reduced levels of hnRNP K using RNA interference promoted a decrease in the activity of the complexes in HN13 cells, indicating the involvement of the protein in the efficiency of the electron transport in mitochondrial respiratory chain. HEK293 cells with overexpression of hnRNP K (HEK293/hnRNP K) and HN13 and CAL 27 cells with silencing and stable reduction of hnRNP K were used to determine the role of hnRNP K in mitochondrial membrane potential, ATP levels, lactate production and oxygen consumption. HEK293/hnRNP K, compared to control cells, showed higher levels of ATP, reduced mitochondrial membrane potential, lower oxygen consumption and higher production of lactate. HN13 cells with reduced hnRNP K had lower ATP levels, with lower release of lactate to the extracellular medium and higher oxygen consumption. These results suggest that accumulation of hnRNP K protein plays a role in mitochondria by changing the cellular energetic metabolism from oxidative phosphorylation to glycolysis. The strategy of co-immunoprecipitation using antibodies for hnRNP K, protein digestion with trypsin, and liquid chromatography, coupled to mass spectrometer, were used to search for new potential ligands of hnRNP K. Data analysis with software SEPro identified 57 candidate proteins binding to hnRNP K. Three proteins were validated by co-IP and Western blotting: the mitochondrial transcription factor PTCD3, YB1, and PSF. We propose that hnRNP K plays a role in the mitochondrial energetics, and probably its interaction with PTCD3 participates in this function.

Energetic efficiency is important for health (e.g. genesis of obesity in humans), socio-economically important for meat production systems (e.g. feed cost to produce high quality protein) and important for the environment (e.g. use of natural resources and production of green house gases for meat production). Mitochondria are organelles that play an essential role in cellular metabolism and homeostasis related to energy utilization. These processes involve several proteins to ensure continuous availability of energy to the cells. The Shc proteins play a key role in substrate oxidation and energy metabolism. Additionally, the mitochondrial uncoupling proteins (UCPs) participate in physiological processes that may account for variation in energy expenditures in tissues. However, the mechanisms behind energy expenditure in animals are largely unknown. Thus, in order to study the energy metabolism and mitochondria function, studies using a nutritional, biochemical and molecular approaches were conducted with mice and cattle. The purpose of the first study was to determine if Shc proteins influence the metabolic response to acute (5-7 days) feeding of a high fat diet (HFD). To this end, whole animal energy expenditure and substrate oxidation were measured in the Shc knockout (ShcKO) and wild-type (WT) male mice consuming either a control or HFD diet. The activities of enzymes of glycolysis, the citric acid cycle, electron transport chain (ETC), and &beta;-oxidation were investigated in liver and skeletal muscle. The study showed that ShcKO increases (P < 0.05) energy expenditure (EE) adjusted for either total body weight or lean mass. This change in EE could explain the decrease in weight gain observed in ShcKO versus WT mice fed an HFD. Thus, our results indicate that Shc proteins should be considered as potential targets for developing interventions to mitigate weight gain on HFD by stimulating EE. Although decreased levels of Shc proteins influenced the activity of some enzymes in response to high fat feeding, such as increasing the activity of acyl-CoA dehydrogenase, it did not produce concerted changes in enzymes of glycolysis, citric acid cycle or the ETC. However, the physiological significance of these changes in enzyme activities remains to be determined. The purpose of experiment 2 was to study the association among heat production, blood parameters and mitochondrial DNA (mtDNA) copy number in Nellore bulls with high and low residual feed intake (RFI). The RFI values were obtained by regression of dry mater intake (DMI) in relation to average daily gain and mid-test metabolic body weight. Thus, 18 animals (9 in each group) were individually fed in a feedlot for 98 days. The heart rate (HR) of bulls was monitored for 4 consecutive days and used to calculate the estimated heat production (EHP). Electrodes were fitted to bulls with stretch belts and oxygen consumption was obtained using a facemask connected to the gas analyzer and HR was simultaneously measured for 15 minutes period. Daily EHP was calculated multiplying oxygen pulse (O2P) by the average HR, assuming 4.89 kcal/L of O2. Blood parameters such as hematocrit, hemoglobin, and glucose were assayed between 45 and 90 days. Immediately after slaughter, liver, muscle and adipose tissues (subcutaneous and visceral fat) were collected and, subsequently, mtDNA copy number per cell was quantified in tissues by quantitative real-time PCR. The proteome of hepatic tissue and levels of mitochondrial UCPs were also investigated. We found similar EHP and O2 consumption between RFI groups, while low RFI bulls (more efficient in feed conversion) shown lower HR, hemoglobin and hematocrit percentage (P < 0.05), confirming previous data from our group. In addition, 71 protein spots in liver were differentially expressed (P < 0.05) and no differences were detected for UCPs levels between RFI groups. Finally, there was no association between amounts of mtDNA and the RFI phenotypes, suggesting that mitochondrial abundance in liver, muscle, and adipose tissue was similar between efficient and inefficient groups. However, additional studies to confirm this hypothesis are needed. / A eficiência energética é importante para a saúde humana (gênese da obesidade), sistemas de produção de carne (custo dos alimentos para produzir proteínas de alta qualidade) e para o meio ambiente (uso de recursos naturais e mitigação de gases de efeito estufa). As mitocôndrias são organelas que desempenham papel central no metabolismo e homeostase relacionada a utilização da energia. Nas células, diversas proteínas são importantes para melhorar a eficiência energética. Como exemplos, as proteínas de sinalização Shc são fundamentais na oxidação de substratos e metabolismo energético e, nas mitocôndrias, existem as proteínas desacopladoras (UCPs), que participam do gasto energético e produção de calor. Entretanto, os mecanismos que controlam o gasto energético nos animais ainda é bastante desconhecido. Assim, para estudar o metabolismo energético e a função das mitocôndrias foram conduzidos dois estudos utilizando-se estratégias nutricionais, bioquímicas e moleculares com camundongos (1) e bovinos (2). Objetivou-se, no estudo 1, determinar se as proteínas Shc influenciam a resposta metabólica à alimentação contendo dieta rica em gordura (HFD) por 7 dias. Enzimas da via glicolítica, ciclo de Krebs, cadeia transportadora de elétron (CTE) e &beta;-oxidação foram analisadas no fígado e músculo de camundongos com baixa expressão de Shc (knockout ou ShcKO) e comuns (wild-type ou WT) submetidos à uma dieta controle ou à HFD. O gasto energético foi medido por câmara calorimétrica de respiração nos animais. O genótipo ShcKO apresentou maior gasto energético (P < 0.05) ajustado para o peso corporal total ou massa magra. Essa mudança poderia explicar o menor ganho de peso observado no genótipo ShcKO comparado ao WT quando consumindo a HFD. Esses resultados sugerem que as proteínas Shc podem contribuir no desenvolvimento de estratégias para mitigar o ganho de peso. Embora a redução dos níveis de Shc (ShcKO) tenha modificado a atividade de enzimas da &beta;-oxidação em resposta a HFD, tal condição não produziu mudanças semelhantes na via glicolítica, ciclo de Krebs ou CTE. Por isso, mais estudos são necessários para compreender a significância fisiológica dessas alterações. No experimento 2, objetivou-se estudar a associação entre produção de calor, variáveis sanguíneas e número de cópias de DNA mitocondrial (mtDNA) em bovinos Nelore agrupados pelo consumo alimentar residual (CAR). O CAR foi obtido por regressão do consumo de matéria seca em relação ao ganho de peso diário e peso metabólico do teste de desempenho (fase de crescimento). Assim, 18 bovinos (9 alto CAR versus 9 baixo CAR) foram confinados em baias individuais por 98 dias (fase de terminação). Os batimentos cardíacos (BC) dos bovinos foram monitorados por quatro dias consecutivos e, então, utilizados para o cálculo da produção de calor estimada (PCe). O consumo e pulso de oxigênio (O2) foram obtidos por meio de analisador de gás conectado à uma máscara facial, com medição simultânea dos BC por 15 minutos. A PCe diária foi calculada por multiplicação do pulso de O2 pela média dos BC, assumindo-se a constante 4.89 kcal/L de O2. Foram analisadas variáveis sanguíneas como hematócrito, hemoglobina e glicose (alto vs. baixo CAR). Imediatamente após o abate dos animais, amostras de fígado, músculo e tecido adiposo foram coletadas para determinação do mtDNA por PCR em tempo real. Adicionalmente, o proteoma do tecido hepático e os níveis de UCPs nos tecidos foram também investigados. Não houve diferença para PCe e consumo de O2 (P > 0.05) entre os grupos experimentais, entretanto, os animais baixo CAR (mais eficientes em conversão alimentar) demonstraram menor BC, concentração de hemoglobina e percentagem de hematócrito (P < 0.05), confirmando resultados previamente observados em nossos estudos. No fígado, 71 spots proteicos foram diferentes (P < 0.05) entre os grupos alto e baixo CAR, mas nenhuma diferença foi observada para os níveis de UCPs no músculo, fígado ou tecido adiposo. Por fim, não existiu diferença (P > 0.05) entre o número de cópias do mtDNA por célula entre os fenótipos estudados, sugerindo que o número de mitocôndrias e possivelmente a fosforilação oxidativa foi semelhante entre os grupos de animais eficientes e ineficientes. Contudo, são necessários estudos adicionais para confirmar essa hipótese.

Tamarindus indica L. é um componente natural amplamente consumido por humanos, apresentando propriedade antiinflamatória, antidiabética e antihepatotóxica. Além disso, como nós demonstramos previamente, o extrato apresenta atividade hipolipêmica e antioxidante. Neste trabalho, nós demonstramos o efeito do extrato de T. indica sobre mitocôndrias isoladas de fígado de rato. Na presença de Ca2+, o extrato causou um inchamento osmótico mitocondrial concentração-dependente, associado ao aumento da velocidade basal (V4), dissipação do potencial de membrana e liberação do Ca2+ pré-acumulado, os quais foram inibidos por ciclosporina A (CsA) e assim atribuídos a transição de permeabilidade da membrana mitocondrial (TPMM). A indução do inchamento osmótico mitocondrial foi prevenida por EGTA e vermelho de rutênio, indicando a dependência da TPMM de Ca2+. A oxidação de proteínas tiol mitocondrial, um mecanismo bem estabelecido como causador da TPMM, foi detectado. Entretanto, nenhuma alteração significante foi observada no estado redox de GSH. A oxidação de NAD(P)H e o acúmulo de espécies reativas de oxigênio produzidas pela mitocôndria foram observadas, em ambos os casos, foram prevenidas por CsA e/ou EGTA, indicando que são conseqüências da TPMM induzida pelo extrato de T. indica. Portanto, sem aparente envolvimento do estresse oxidativo no processo, sugerindo uma interação direta de compostos do extrato com grupos tiólicos de proteínas da membrana. O extrato de T. indica induziu uma depleção de ATP associada à TPMM, mostrando assim potencial para causar a morte celular por apoptose ou necrose, resultante da indução da TPMM por si ou pela depleção do ATP via TPMM. In vitro, o extrato apresentou capacidade scavenger de radicais livres, verificado pelo ensaio do DPPH, radical superóxido e radical hidroxil; e ainda foi capaz de diminuir a lipoperoxidação mitocondrial. Além disso, em baixas concentrações, o extrato mostrou uma propriedade quelante de Fe2+. / Tamarindus indica L. is a natural dietary component widely consumed by humans, presenting well established anti-inflammatory, anti-diabetic and anti-hepatotoxic properties. In addition, as we have previously demonstrated, extract presents hypolipemic and antioxidant activities. We show here the effects of T. indica extract on isolated rat liver mitochondria. In the presence of Ca2+, the extract caused mitochondrial concentration-dependent swelling, associated to, resting respiration increase (V4), membrane potential dissipation and release of pre-accumulated Ca2+, inhibited by cyclosporine A (CsA) and thus ascribable to mitochondrial permeability transition (MPT). This swelling induction was prevented by EGTA and ruthenium red, indicating strict dependence of MPT on Ca2+. Oxidation of mitochondrial membrane protein thiols, a well established mechanism causing MPT was detected. However, no significant change was observed in the GSH redox state, and the NADPH oxidation and accumulation of mitochondria-generated reactive oxygen species that was observed, were prevented by CsA and/or EGTA, indicating that they are consequence of the MPT induced by T. indica extract. Therefore, no apparent oxidative stress condition is involved as cause of this process suggesting that direct interaction with membrane protein thiol groups of the compounds responsible for MPT induction occurs. T. indica extract led to MPTassociated ATP depletion, thus showing the potential to cause cell death by apoptosis or necrosis resulting from MPT induction per se or from ATP depletion by MPT. In vitro, the extract presented free radical scavenging ability, as assessed by the 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl (DPPH), superoxide radicals and radical hydroxyl assays, and led to decreased lipid peroxidation in mitochondria, as assessed by the thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) assay. In addition, the extract showed an iron chelanting property in low concentrations.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:38:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Perisson Dantas do Nascimento.pdf: 1613318 bytes, checksum: dc98bc4ee2d10b844964f573706401e4 (MD5) Previous issue date: 2012-05-11 / This work aims to verify that the contributions of verbal and bodily therapeutic interventions of Bioenergetic Analysis in the treatment of patients with primary and secondary complaints of organic pain. This intention is consistent with international efforts in researching the therapeutic efficacy of body psychotherapy. We start from the hypothesis that the diagnosis and intervention in the body with neo-Reichian techniques can serve as catalysts in the process of patient care traditionally regarded as psychosomatic. We focused on a qualitative method to clinical research, in which eight patients with various somatic complaints were submitted to twelve sessions of psychotherapy in bioenergetics and evaluated by instruments measuring psychological stress and general health conditions before and after intervention therapy. Data are presented through a characterization of the social profile of the patients, as well as through case studies, linking with the results obtained in the tests. Some issues raised by patients confirm the working hypotheses discussed in the literature, such as development history of trauma and family violence, abandonment experiences, coldness and detachment from the mother figure and a bond ambivalent love / heartbreak with the father figure; difficulties to experience pleasure in life and sexuality; emerging symptom associated with a particular crisis of life, due to a chronic disease process. Tests have shown mixed results, which are discussed in accordance with the circumstances in each case as indicative apparent adverse findings show that obtained in the process of intervention can increase the psychic stress, resulting in a crisis condition required for significant changes. Despite this, patients report improvements in relation to the disease and how to regulate their emotions, emphasizing the importance of bioenergetic exercises in the care and procedures. We conclude with the belief that a specific listening to body in the therapeutic process serves as a communication channel that facilitates empathy in the integrated health and the need to broaden the scope of this research, with additional experimental procedures / Esse trabalho busca verificar quais as contribuições terapêuticas das intervenções verbais e corporais da Análise Bioenergética no tratamento de pacientes com queixas primárias e secundárias de sofrimento orgânico, coadunando com os esforços internacionais em pesquisar a eficácia da psicoterapia corporal. Partimos da hipótese que o diagnóstico e intervenção corporais na vertente neorreichiana podem servir como catalisadores no processo de cuidado de pacientes tradicionalmente considerados como psicossomáticos. Privilegiou-se um método qualitativo clínico de pesquisa, no qual oito pacientes, com queixas somáticas variadas, foram submetidas a doze sessões de psicoterapia bioenergética, sendo avaliadas por instrumentos psicológicos de medição do estresse e de condições de saúde geral, antes e depois da intervenção. Os dados são apresentados através de uma caracterização do perfil social das pacientes, bem como através de estudos de caso, articulando com os resultados obtidos nos testes. Alguns temas levantados pelas pacientes confirmam hipóteses de trabalho discutidas na literatura, tais como: histórico de traumas de desenvolvimento e violência intrafamiliar; experiências de abandono, frieza e distanciamento da figura materna e um vínculo ambivalente de amor/mágoa com a figura paterna; dificuldades de experimentar prazer na vida e na sexualidade; o sintoma surgindo associado a uma crise específica de vida, decorrente de um processo de adoecimento crônico. Os testes demonstraram resultados variados, que são discutidos de acordo com o contexto de cada caso, pois aparentes indicativos desfavoráveis revelam que as descobertas obtidas no processo de intervenção podem aumentar a tensão psíquica, resultando num estado de crise necessária para mudanças importantes. Apesar disso, as pacientes relatam melhoras na relação com a doença e na forma de regular suas emoções, enfatizando a importância dos exercícios e procedimentos nos atendimentos. Concluímos o trabalho com a convicção de que a escuta diferenciada do corpo no processo terapêutico serve como canal de comunicação que facilita a empatia no cuidado integrado em saúde, bem como a necessidade de ampliar o escopo dessa pesquisa, com procedimentos experimentais complementares