O ácido lactobiônico e seus sais (lactobionatos), compostos que apresentam aplicações na área farmacêutica, foram obtidos via ação do complexo enzimático glicose-frutose oxidorredutase (GFOR)/gliconolactonase (GL) - presente no periplasma de células da bactéria Zymomonas mobilis - imobilizado em alginato de cálcio. Nas reações catalisadas por este sistema enzimático, o pH do meio deve ser controlado em valores ligeiramente ácidos. Para este fim, foram empregados NaOH, KOH ou Ca(OH)2 e, como consequência, os respectivos sais foram formados. O estudo da cinética de formação dos lactobionatos de sódio, potássio e cálcio e do próprio ácido lactobiônico foi seguido das etapas de purificação, caracterização e avaliação da estabilidade físico-química, visando à potencial utilização destes compostos na área farmacêutica. Em ensaios de bioprodução dos lactobionatos de sódio, potássio e cálcio, foram obtidos rendimentos de 74, 77 e 84%, respectivamente. Em bateladas sucessivas de bioconversão, totalizando 96 h de uso do biocatalisador, rendimentos de 80 e 56 % em lactobionatos de cálcio e de potássio foram atingidos. Na etapa de purificação dos sais, foram alcançados teores de pureza de aproximadamente 95%, sendo então procedida a caracterização dos compostos por cromatografia líquida de alta eficiência, espectrometria de massas e RMN de 13C. Nos estudos de estabilidade acelerada, de longa duração e degradação forçada, os lactobionatos de sódio, potássio e cálcio obtidos nos ensaios de bioconversão conduzidos em maior volume reacional, foram inicialmente purificados e, então, comparados frente ao ácido lactobiônico, obtido por troca iônica a partir do lactobionato de sódio, e com o ácido lactobiônico comercial (Sigma-Aldrich). Nos testes de estabilidade acelerada e de longa duração, foi constatada a estabilidade de todos os compostos por até seis meses quando expostos a 30 e 40oC e 75% de umidade relativa. Por outro lado, a presença da lactobionolactona foi identificada nas amostras dos compostos na forma ácida. Com relação aos testes de degradação forçada, os lactobionatos de sódio, potássio, e cálcio e o ácido lactobiônico se mostraram estáveis frente à exposição a soluções ácidas e alcalinas e às temperaturas avaliadas. Contudo, observou-se degradação no tratamento com solução oxidativa, com cinética de degradação de ordem zero para os sais e de segunda ordem para o ácido lactobiônico. Elevadas concentrações de produtos - lactobionatos de sódio, potássio e cálcio - foram atingidas com a utilização do sistema GFOR/GL imobilizado em alginato de cálcio. Considerando o conjunto de informações obtido, quanto à caracterização físico-química dos compostos produzidos, foi demonstrada a estabilidade frente aos diferentes parâmetros avaliados atendendo aos requisitos mínimos legais para sua aplicação na área farmacêutica. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior, CAPES. / Lactobionic acid and its salts (lactobionate) are substances that have several applications in pharmaceutical area. These products were obtained by enzymatic complex glucose-fructose-oxidoreductase (GFOR)/gluconolactonase (GL) present in the periplasm of Zymomonas mobilis cells that were immobilized in calcium alginate. In the reactions catalyzed by this enzyme system, the medium pH must be controlled at slightly acid values. For this purpose, NaOH, KOH, or Ca(OH)2 were used and as a result the respective salts were formed. The kinetic study on the formation of sodium, potassium and calcium lactobionate and lactobionic acid itself was followed by the steps of purification, characterization and evaluation of the physicochemical stability, aiming the potential use of these compounds in the pharmaceutical area. In the assays for the bioproduction of sodium, potassium or calcium lactobionates, yields of 74, 77 and 84% were obtained, respectively. In repeated bioconversion batches, totalizing 96 hours of use of the biocatalyst, yields of 80 and 56% were attained for calcium and potassium lactobionate. In the salts purification step, purity levels of approximately 95% were achieved, and subsequently these compounds were characterized by high performance liquid chromatography, mass spectrometry, and C13 NMR. In the studies of accelerated, long term and forced degradation stability, the production of sodium, potassium and calcium lactobionate was carried out at higher reaction volume. The products were purified and then evaluated together with lactobionic acid that was obtained by ion-exchange from sodium lactobionate, and with a commercial lactobionic acid (Sigma-Aldrich). In the accelerated and long term stability tests, it was demonstrated the stability of all compounds when exposed to 30 and 40oC and of 75%of relative humidity for up to six months. On the other hand, the presence of lactobionolactone was identified in samples of compounds in the acid form. With respect to the forced degradation tests, sodium, potassium and calcium lactobionates and lactobionic acid have shown to be stable after exposing to both acidic and alkaline solutions and the temperatures evaluated. However, degradation was observed in the treatment with oxidative solution, with a zero-order degradation kinetics for the salts forms and second-order for lactobionic acid. High concentrations of products - sodium, potassium and calcium lactobionate - were achieved by using the Ca-alginate immobilized GFOR/GL complex. Considering the set of information obtained in regarding to physicochemical characterization, it was demonstrated the high stability of these compounds in front of different parameters evaluated, endorsing the legal minimum requirements for their application in the pharmaceutical area.

Araucarea angustifolia (Bert.) O. Kuntze é uma espécie dioica, isto é, flores masculinas e femininas originam-se em árvores separadas. As flores femininas apresentam-se como estróbilo, mais conhecido como pinha. A pinha é constituída por sementes (pinhões) e brácteas (sementes não desenvolvidas), as quais apresentam elevada concentração de compostos fenólicos. Esses compostos são conhecidos por reduzir danos oxidativos a lípidos, proteínas e ácidos nucleicos, contribuindo para minimizar a incidência de doenças relacionadas com o estresse oxidativo, tais como doenças cardiovasculares, neurológicas e câncer. O objetivo deste estudo foi caracterizar quimicamente, avaliar a atividade antioxidante e antigenotóxica do extrato aquoso de brácteas de A. angustifolia. Neste trabalho, os polifenóis totais do extrato de A. angustifolia foram determinados pelo método de Folin- Ciocalteu e sua composição química foi confirmada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). O potencial do extrato para neutralizar espécies reativas foi avaliado através do ensaio com 2,2-difenil 1-picrilhidrazil (DPPH●) e pelas atividades like das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT). Em linhagem celular de fibroblasto de pulmão humano (MRC5), avaliou-se o efeito protetor do extrato na viabilidade celular através da redução de 3-(4,5-dimetiltiazol 2-il)-2,5difenil brometo de tetrazolina (MTT), na atividade das enzimas SOD e CAT, nos danos oxidativos a lípidos, proteínas e ácido desoxirribonucléico (DNA) (ensaio cometa alcalino e enzimático) induzidos pelo peróxido de hidrogênio (H2O2). O teor de fenólicos totais do extrato de A. angustifolia foi de 670,93 ± 17,79 mg catequina /100 g de brácteas, sendo a catequina, epicatequina, quercetina e apigenina os principais polifenóis encontrados. O extrato de A. angustifolia foi capaz de reduzir o radical DPPH● e apresentou atividade SOD e CAT-like. Além disso, o extrato de A. angustifolia nas concentrações estudadas (25 e 50 μg/mL) reduziu a mortalidade celular, danos oxidativos a lipídios, proteínas e DNA, e diminuiu a depleção das enzimas antioxidantes SOD e CAT induzida pelo H2O2 em células MRC5. Apesar de não ter sido observado correlação entre os polifenois e marcadores de danos oxidativos, verificou-se uma correlação negativa entre danos a lipídos, proteínas e ácidos nucleicos e a atividade das enzimas SOD e CAT, sugerindo que essas enzimas desempenham um importante papel na prevenção de danos ás biomoléculas. Esses resultados mostram que a A. angustifolia apresenta potencial como fonte de compostos fitoquímicos com atividade biológica relevante. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Araucaria angustifolia (Bert.) O. Kuntze is a dioecious species, with male and female flowers found on separate trees. The A. angustifolia female cone consists of fully developed edible seeds and non-developed seeds called bracts. These bracts have high concentration of phenolic compounds, which have the potential to prevent oxidative damage to lipids, proteins and nucleic acids, and decreasing the incidence of diseases related to oxidative stress, such as cardiovascular and neurological diseases, and cancer. The aim of the present study was to evaluate the chemical characterization and antioxidant and antigenotoxic activities of the extract of A. angustifolia bracts. In this work the polyphenols total of A. angustifolia extract was determinate by Folin-Ciocalteu reagent and its chemical composition was confirmed by high performance liquid chromatography (HPLC). The extract potential to neutralize reactive species was evaluated by 2,2- diphenyl 1-picrylhydrazyl (DPPH●) method and by the ability to mimic the activities of superoxide antioxidants like dismutase (SOD) and catalase (CAT). In human cell line of lung fibroblast (MRC5), we evaluated the protective effect of the extract on cell viability by reduction of 3 - (4,5 dimethylthiazol - 2 - yl ) -2,5 diphenyl tetrazolina bromide (MTT), in the activity of SOD and CAT enzymes in oxidative damage to lipids, proteins and the deoxyribonucleic acid (DNA) (enzymatic and alkaline comet assay) induced by hydrogen peroxide (H2O2). The total phenolic content of the A. angustifolia extract was 670.93 ± 17.79 mg catechin / 100 g bracts, and catechin, epicatechin, quercetin and apigenin the main polyphenol found. The A. angustifolia extract was able to reduce DPPH● and presented like activity of SOD and CAT enzymes. Furthermore, the A. angustifolia extract at the concentrations studied (25 and 50 mg/mL) reduced cell death , oxidative damage to lipids, proteins and DNA, and decreased depletion of antioxidant enzymes SOD and CAT induced by H2O2 in MRC5 cells . Although, no correlation between polyphenols and bookmarks of oxidative injury have been observed. There was a negative correlation between damage to lipids, proteins and DNA with enzymes SOD and CAT, suggesting that these enzymes play a role in the regulation of cellular redox metabolism. These results showed that the A. angustifolia has potential as a source of phytochemical compounds with relevant bioactivities.

Protozoários do gênero Acanthamoeba estão entre os organismos de vida-livre mais abundantes sendo encontrados em uma ampla gama de ambientes naturais como água, solo, poeira, vegetais, hospitais, sistemas de ventilação e esgotos. Algumas espécies de Acanthamoeba são consideradas patógenos oportunistas e têm sido associadas a infecções cutâneas, queratite, encefalite granulomatosa amebiana (EGA) e a outras afecções em menor frequência. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a presença de Acanthamoeba em áreas comunitárias de unidades acadêmicas e hospitalares, assim como determinar o risco potencial dos isolados. Amostras foram coletadas em dois hospitais e duas universidades do Rio Grande do Sul, Brasil. As amebas foram isoladas e caracterizadas utilizando métodos morfológicos, fisiológicos e genéticos. Além disso, a variação e a especificidade de proteases extracelulares foram determinadas por análise de zimogramas. A detecção e isolamento de amebas em amostras clínicas e ambientais envolve a amostragem e cultura em meio ágar não nutriente. Apesar de eficiente, este sistema requer diversas passagens visando eliminar contaminantes e não é apropriado para o isolamento de amebas individuais de amostras biodiversas. Para solucionar este problema foi desenvolvido um método alternativo que envolve amostragem, enriquecimento, indução de encistamento e micromanipulação de cistos e cultura direta em placas de ágar não nutriente. Utilizando os métodos convencional e alternativo, 429 amostras de áreas comunitárias de hospitais e universidades foram avaliadas mostrando alta prevalência de Acanthamoeba tanto em ambientes secos (13,77%) como úmidos (19,29%). A maior parte dos isolados (77,4%) foram classificados dentro do grupo II, o qual inclui a maioria das espécies patogênicas. Os isolados apresentaram tolerância à temperatura e pH, assim como resistência a desinfetantes, características que devem contribuir para a sobrevivência e proliferação de Acanthamoeba em ambientes fechados, aumentado o risco de contaminação das pessoas. Como as proteases extracelulares são consideradas um dos mais importantes fatores de patogenicidade das amebas de vida-livre, dez isolados foram avaliados quanto à atividade, padrão e especificidade de proteases. Análise com azocaseina mostrou variação significativa na atividade proteolítica volumétrica e específica dos distintos isolados, independente do “status” patogênico e não patogênico das espécies. Zimogramas em géis copolimerizados com gelatina mostraram três padrões de bandas em isolados de A. castellanii, e perfis particulares para as outras espécies. Todas as proteases secretadas por A. castellanii, A. pearcei e A. healyi foram caracterizadas como serino proteases, enquanto apenas cisteino e metaloproteases foram identificadas em A. astronyxis. Algumas proteases extracelulares apresentaram importante atividade sobre gelatina, fibrinogênio e γ-globulina, e podem estar implicadas na patogenicidade de Acanthamoeba e na resposta do hospedeiro. / Protozoa of the genera Acanthamoeba are one of the most abundant free-living organisms. This microrganisms are found in a wide variety of natural habitats including water, soil, dust, vegetables, hospital units, ventilation areas and sewage. Some species of Acanthamoeba are considered opportunistic pathogens, and have been associated with cutaneous infections, keratitis, granulomatous amoebic encephalitis (GAE), among other less frequent diseases. The aim of this study was to evaluate the presence of Acanthamoeba in community areas of academic and hospital units, and to determine their potential risk. Samples were collected from two hospitals and two universities of Rio Grande do Sul, Brazil. Amoebas were isolated and characterized using morphological, physiological and genetic methods. Additionally, extracellular proteases variation and specificity was determined by zymogram analysis. The conventional detection and isolation of amoeba from clinical and environmental samples involves sampling and culture on non-nutrient Agar medium. Although efficient, this system requires several transfers in order to eliminate contaminants, and is not appropriate for the isolation of individual amoeba from samples with a biodiverse community. To solve this problem we developed an alternative method that involves sampling, enrichment, encystment induction, and direct cysts micromanipulation and culture on Agar plates. Using the conventional and alternative method, 429 samples from community areas of hospitals and universities were evaluated showing high prevalence of Acanthamoeba in both dry (13.77%) and humid (19.29%) environments. Most of this isolates (77.4%) were classified within group II, which includes the great majority of pathogenic species. Isolates exhibited temperature and pH tolerance, as well as resistance to disinfectants. These characteristics may contribute for the maintenance and proliferation of Acanthamoeba in the indoor environments, increasing the risk of people contamination. As extracellular proteases are considered one of the most important pathogenic factors of free-living amoeba, ten isolates were evaluated to determined proteases activity, patterns and specificity. Azocasein assays showed significant variation on the overall and specific protease activity in Acanthamoeba-conditioned media, independently of the pathogenic or nonpathogenic status of the species. The zymographic assays on gelatin co-polymerized gels showed three banding patterns for A. castellanii isolates, and specific profiles for other species. All the proteases secreted by A. castellanii, A. pearcei, and A. healyi were characterized as serine proteases, but only cisteine and metalloproteases were identified in A. astronyxis. Some extracellular proteases exhibited important activity on gelatin, fibrinogen and γ-globulin, and may be implicated in Acanthamoeba pathogenicity and host response.

Orientador: Francisco Maugeri Filho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-18T02:03:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Carvalho_AndreaLimoeiro_D.pdf: 2076758 bytes, checksum: 0190971971b90ab3f96544e50f0d9933 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A nanofiltração é um processo com membrana por diferença de pressão, enolvendo também mecanismos de sorção e difusão, que pode ser aplicado na etapa de concentração do caldo clarificado na produção de ácido clavulânico. No presente trabalho, o ácido clavulânico foi concentrado, avaliou-se a eficiência do processo e estudaram-se os parâmetros envolvidos na transferência de massa e aplicados ao modelo matemático SEDE-VCh, assim como avaliou-se a ampliação de escala do processo. Esse estudo foi dividido nas seguintes etapas: seleção e caracterização das membranas; aplicação do modelo matemático, nos quais foram realizados experimentos para avaliar o desempenho das membranas NF e NF90 (ambas da FilmtecTM), e NP010 e NP030 (ambas da Microdyn Nadir®); ampliação de escala do processo, na qual a membrana que apresentou os melhores resultados nas etapas anteriores foi utilizada. Quanto à seleção da membrana, as respostas avaliadas foram o coeficiente de retenção, a produtividade e o fator de purificação. Na etapa de caracterização da membrana, foi avaliada a morfologia de superfície das quatro membranas, obtendo-se o tamanho e a distribuição de poros, a rugosidade, a dimensão fractal e a permeabilidade das mesmas, além de estudos que forneceram dados referentes aos efeitos estéricos e elétricos sobre o transporte através das membranas, como suas densidades superficiais e volumétricas de carga, a concentração do soluto nas suas superfícies externas e o coeficiente de transferência de massa do processo. A partir desses dados foi gerado um modelo para explicar o transporte através das membranas. Por fim foram feitos experimentos para verificar o comportamento do processo em uma escala piloto. Os resultados obtidos demonstram que a membrana NF é a melhor para o processo de concentração de ácido clavulânico com coeficiente de retenção médio de 0,988 em escala de bancada e aproximadamente 1,0 em escala piloto. As quatro membranas apresentaram raios de poro inferiores a 1 nm e ponto isoelétrico em pH entre 5 e 6. A membrana NP010 apresentou maior permeabilidade à água, e as demais na seguinte ordem: NP010 > NP030 > NF > NF90. Esse parâmetro se relaciona de forma linear com o diâmetro médio de poros e sua redução aumenta com a diferença entre a dimensão fractal antes e depois do uso das membranas. Foi possível verificar também que em altas adsorções a rugosidade das membranas tendem a ser similares. A membrana NF90 apresentou um maior coeficiente de transferência de massa, seguido da NF, NP010 e NP030, nessa ordem, sendo que a rejeição variou com o pH para as membranas NF e NF90. A constante dielétrica dentro dos poros aumenta inversamente ao tamanho médio dos poros das membranas até quando a mesma atinge o valor da água livre. A seletividade da membrana ao KCl e ácido clavulânico apresenta a mesma tendência da densidade volumétrica de cargas: NF > NF90 > NP030 _ NP010. Com os estudos de ampliação de escala foi possível determinar que o sistema convencional que simula o processo de fluxo tangencial pode ser usado em outros estudos de avaliação de processos e de seleção de membranas visando à aplicação industrial, e que peptídeos e aminoácidos podem atuar melhorando o processo de concentração de ácido clavulânico por nanofiltração. A produtividade final obtida foi de até 6.4 [CA]RET/[CA]0.L.h. / Abstract: Nanofiltration is a pressure driven membrane process, with desorption and diffusion, which is also applied to the concentration of clavulanic acid from a clarified juice. In this study, clavulanic acid was concentrated, and the process had its efficiency evaluated and its mass transfer parameters studied and applied to the mathematical model SEDE-VCh, and in addition scale up was also evaluated. This study was divided into the following stages: selection and characterization of the membranes, and the application of the model, in which experiments were performed to evaluate the performance of the NF and NF90 membranes (both FilmtecTM), and NP010 and NP030 (both Microdyne Nadir®), and the scale up of the process, in which the membrane that showed the best results in the previous steps was used. Concerning the selection of the membrane, the evaluated responses were the retention coefficient, productivity and purification factor. In the characterization of the membrane step, we evaluated the surface morphology of the four membranes, targeting the pore size and pore size distribution, roughness, fractal dimension and permeability, in addition to studies that provided data on the electrical and steric effects over the transport through the membranes, as their surface and volumetric density charges, the concentration of solute in its external surfaces and the mass transfer coefficient of the process. From these data a model was created to explain the transport through the membranes. Finally experiments were carried out to verify the behavior of the process in a pilot scale. The results showed that the NF membrane is best for the process of concentration of clavulanic acid with retention coefficient average of 0.988 in bench scale and almost 1.0 in the pilot plant. All the four membranes had pore radii below 1 nm and an isoelectric point between pH 5 and 6. The NP010 membrane showed the higher water permeability, in the following order: NP010 > NP030 > NF > NF90. This parameter is related linearly with the average pore size and its reduction increases with the difference between the fractal dimension before and after the use of the membranes. It was also verified that at high adsorption the roughness of the membranes tends to be similar. The NF90 membrane showed a higher mass transfer coefficient, followed by NF, NP010 and NP030, in that order and the rejection varied with the pH for the NF and NF90 membranes. The dielectric constant inside the pores increases inversely with pore size of the membranes even when it reaches the value of free water. The selectivity of the membrane to KCl and clavulanic acid shows the same trend as the volumetric density charge: NF > NF90 > NP030 _ NP010. By means of the studies of scale up it was determined that the conventional system with a stirrer that promotes the convection movement in the process can be used in other studies of process evaluation and selection of membranes in view of industrial application, and also that peptide and mino acid substances improve the process concentration of clavulanic acid by nanofiltration. The final productivity was about 6.4 [CA]RET/[CA]0.L.h. / Doutorado / Engenharia de Alimentos / Doutor em Engenharia de Alimentos

Orientador: Gil Eduardo Serra / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-21T09:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CesareVidaurre_TeresaJacoba_D.pdf: 4896751 bytes, checksum: 36b2186bfac3b85207eac90811a5d618 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: O presente trabalho teve como objetivo o desenvolvimento e a otimização da produção de bioinseticida bacteriano a partir do isolamento e seleção de uma linhagem de Bacillus thuringiensis que apresentasse uma diferenciada e alta atividade inseticida contra larvas de mosquitos de importância na saúde pública. A partir de amostras de solo, isolou-se uma bactéria entomopatogênica, denominada SP-36. Este isolado apresentou uma atividade de 30.767 ITU/mg, contra larvas de Aedes aegypti quase duas vezes mais alta que a linhagem padrão B. thuringiensis israelensis IPS-82, e foi classificado taxonomicamente como sendo um Bacillus thuringiensis. Na sorotipagem do isolado, este foi classificado como uma cepa autoglutinante de B.t.. O perfil electroforético das proteínas que compõem os cristais do isolado (110, 68, 38 e 25 kDa) apresentou significativa diferenças com os polipeptídios produzidos pela linhagem padrão. A otimização das condições fermentativas foram planejadas através da Metodologia por Superfícies de Resposta (MSR) com um delineamento experimental 34. Os resultados experimentais demonstraram uma resposta de 1,37 x 108 para contagem de esporos, completa lise celular e atividade de 35.000 ITU/mg, utilizando-se meio basal em condições de 30°C, 350 rpm, 5 % de inóculo e 7,2 de pH inicial. Para seleção dos componentes de meio de cultura à base de sub-produtos agro-industriais, foram utilizados fatoriais fraccionários, permitindo a seleção das fontes de carbono, nitrogênio e suplementos minerais, assim como o ajuste preliminar das concentrações dos componentes. foram selecionados os seguintes componentes: melaço, água de maceração de milho, água de levedura e fosfato de potássio. Para a otimização da concentração dos componentes selecionados utilizou.:se de delineamento central composto 54 da metodologia por superfícies de resposta, obtendo-se contagem de 1,28 x 108 esporos/ml, em 24 horas com um meio otimizado: 3,5g/l de melaço, 7,O g/l de água de maceração de milho, 16g/l de água de levedura e 6,O g/l de fosfato de potássio. Foram realizados testes de escalamento, com 30 e 50 % de oxigênio dissolvido, obtendo-se velocidades específicas de crescimento de 0,25 e.0,51 h-1, e contagem de esporos de 1,76 e 1,96 x 109 esp/ml respectivamente, em 24 e 18 horas / Abstract: The purpose of this work was to develop and improve the production of bacterial bioinsecticide from a microbiological screening and selection of a Bacillus thuringiensis strain which presents a high and differentiated insecticide activity against mosquitoes larvae of public heath importance. The entomopathogenic bacteria B.t. strain SP-36, has been isolated from soil samples, according to serotyping it as an auto-agglutinated B.t. strain. This isolate presented an activity of 30.767 ITU/mg against Aedes aegypti larvae, almost twice as high as the B. thuringiensis israelensis IPS-82 standard strain. The electrophoretic pattern of the proteins, which constitute the isolate crystals (110, 68, 38 and 25 kDa), has presented significant differences as to the polypeptides produced by the standard strain. The improvement of the fermentative conditions has been planned through the Response Surfaces Methodology (MSR) with an experimental design 34. The experimental results have shown a response of 1,37 x 108 for the spore count, complete cellular lysis and an activity of 35.000 ITU/mg, using a basal medium at 30°C, 350 rpm, 5% inoculum and initial pH 7,2. In order to select the culture medium based on agroindustrial by-products, fractional fatorials have been used, so that the sources of carbon, nitrogen and mineral suplements could be selected, as well as the preliminary setting of the components concentration. The following components have been selected: sugarcane molasses, com-steep liquor, yeast liquor and potassium phosphate. In order to improve the selected components concentration a central composite design 54 of the response surfaces methodology was used, obtaining a count, of 1,28 x 108 spores/ml, in 24 hours, in an optimized medium: 3,5g/l of molasses, 7,0g/l of com-steep liquor, 16g/l of yeast liquor and 6,0g/l of potassium phosphate. Scale-up tests have been performed, with 30 and 50% dissolved oxygen, obtaining specific growth rate of 0,25 and 0,51 h-1 and spores count of 1,76 and 1,96 x 109 spores/ml, in 24 hours, respectively / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

Orientador: Nora Marcela Haun Quiros / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-21T21:19:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Massai_LelioRonaldo_M.pdf: 8207256 bytes, checksum: d47d72af0dfbae4a6c775ac49bcded7d (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Muitos métodos - físicos, químicos e biológicos - têm sido testados na redução da poluição dos efluentes Kraft. E mesmo a tecnologia da reciclagem das águas de processo, que reduz consideravelmente o volume do efluente produzido está sendo muito estudado, contudo a reciclagem parcial utilizada na indústria não reduz necessariamente a emissão de resíduos tóxicos, a menos que se consiga zero de descartes de efluente. Muitos dos compostos formados durante o branqueamento da polpa, não são removidos no tratamento secundário causando sérios danos ao meio ambiente. Neste estudo, análises químicas comparativas e um teste de toxicidade, foram realizados nos efluentes Kraft-E1 (primeira extração) e Final-E3 (tratamento secundário). As amostras com o pH ajustados para 5,0 com H2SO4 1M foram estocadas à 4°C em frascos de 500mL de polietileno. Após serem tratadas com o fungo Lentinus edodes UEC-2021 e após filtração (Millipore 0.22mm) as amostras foram analisadas. Foram obtidos, entre outros resultados, 51 % de redução de cor e 65% de redução na concentração de fenol / Abstract: Kraft Effluents with main purposes: the reuse of water tap and reduce volumes to be discharged. Despite their low toxicity, pulp and paper discharges have a toxic impact on receiving waters because of tremendous volumes discharged with color persisting and organic pollutants even in treated and partially treated effluents. Many compounds formed during pulp bleaching are not removed in the secondary treatment leading to a pulp mill effluent content of hundred different compounds. In this study a comparative chemical analysis was made with samples of Kraft Effluent-E1 (first extraction) a main type of chlorine bleach plant wastewater and with the Final Effluent-E3 after treatment in aerated lagoon with hydraulic dectention time of 3 days. The samples were pH adjusted to 5.0 with H2SO4 1M and stored at 4°C in polyethylene bottles in volumes of 500mL to ensure that all assays would be done with same effluent samples. After incubation with Lentinus edodes UEC-2021 and filtration (Millipore 0.22mm) samples were conveniently prepared for analysis. It was obtained a 51 % color removal and a 65% reduction value for phenol / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Lucia Regina Durrant / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-22T05:16:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bavutti_HamiltonRobertoFortes_M.pdf: 4890184 bytes, checksum: 5b289acfb301ae9dff71c70601f0807d (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: No presente trabalho 37 fungos isolados das margens do rio Una do Prelado, na Estação Ecológica Juréia-Itatins foram estudados quanto a sua capacidade de sintetizar vanilina a partir do ácido ferúlico e do eugenol. Alguns testes foram realizados variando-se os substratos, e utilizando-se agitação ou culturas estáticas. Após a seleção baseada no perfil de crescimento dos fungos frente a substratos diversos e nos cromatogramas obtidos dos caldos de crescimento, as linhagens que apresentaram melhores resultados de produção de vanilina foram 755 (55,2 mg/L - teste 7) e 1051 (27,1 mg/L - teste 2). O método utilizado para a quantificação da vanilina foi a cromatografia líquida de alta eficiência utilizando-se uma coluna ZORBAX ODS (fase reversa) e detecção a 279 nm. O espectro de absorção UV foi utilizado para a confirmação da identidade do composto de interesse. Dos dez testes realizados, sete utilizaram ácido ferúlico e três utilizaram eugenol como substrato. Os testes envolvendo o eugenol não apresentaram resultados satisfatórios, embora condizentes com a literatura afim. A atividade de enzimas ligninolíticas foi estudada. As enzimas lignina-peroxidase, manganês­peroxidase e álcool veratrílico-oxidase afetaram negativamente a síntese de vanilina. / Abstract: In the present work, 37 fungal strains isolated from the Una do Prelado river, at the Ecological Station Jureia-Itatins, were studied for their ability to synthesize vanillin from ferulic acid and eugenol. Some tests were done varying the substrates and using shaken or unshaken cultures. After selection based on the growth profile in medium containing several compounds and on the chromatograms obtained from the growth cultures, the strains that presented high values of vanillin production were numbers 755 (55,2 mg/L - test 7) and 1051 (27,1 mg/L - test 2). Vanillin production was quantified using HPLC employing a ZORBAX ODS column, reverse phase, and detection at 279 nm. The absorption spectrum UV was used to confirm the identity of the compounds. In 10 tests, 7 utilized ferulic acid and 3 utilized eugenol as the substrate. The tests involving eugenol did not show good results, although agreeing with results reported in recent I iterature. The activities of the ligninolytic enzymes were studied. The enzymes Lignin-peroxidase, Manganese-peroxidase and Veratryl alcool-oxidase affected negatively vanillin synthesis. / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Leila da Costa Ferreira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Filosofia e Ciencias Humanas / Made available in DSpace on 2018-07-22T16:19:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Velho_PauloEduardo_D.pdf: 13227122 bytes, checksum: 2495a0d9d5655e45044699a9b08e02d5 (MD5) Previous issue date: 1995 / Doutorado

Orientador: Everson Alves Miranda / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-23T13:40:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Azzoni_AdrianoRodrigues_M.pdf: 3586687 bytes, checksum: c237f07c98d63bb8fea1e7e5a22bb2b4 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: A aprotinina é um inibidor de proteases presente em alguns órgãos bovinos como pâncreas, fígado e pulmão. Neste trabalho, as enzimas tripsina e quimotripsina (suínas e bovinas) foram utilizadas como ligantes imobilizados em matriz de agarose visando a recuperação de aprotinina presente em efluente de processamento industrial de insulina através de adsorção por afInidade. As quatro enzimas foram imobilizadas em agarose ativada com bisoxirana e avaliadas quanto a capacidade de adsorção de aprotinina pura, o que permitiu a seleção da tripsina suína e quimotripsina bovina como os ligantes de maior efIciência. Estas proteases foram ainda imobilizadas com sucesso em gel de agarose previamente ativado com brometo de cianogênio, o que permitiu a comparação entre dois métodos distintos de ativação e imobilização de enzimas. O gel de agarose ativado com brometo de cianogênio com tripsina suína imobilizada foi o que apresentou maior capacidade de adsorção de aprotinina pura (12,6 mg!g). Estudo-se, para ambas as enzimas, a influência do pH e força iônica na adsorção e dessorção da aprotinina, em faixas próximas aos valores encontrados na literatura, através de planejamento estatístico experimental. A influência do pH mostrou ser menor para o processo de adsorção e maior para a dessorção, ocorrendo o inverso para a influência da força iônica, principalmente quando o ligante utilizado foi a tripsina. Estudos de adsorção em coluna de leito fIxo para recuperação do inibidor presente em efluente do processamento industrial da insulina produzida a partir de pâncreas bovino constataram a presença de inibição que pôde ser recuperada utilizando ambas as enzimas como ligantes. A análise do poder de inibição de tripsina e quimotripsina, bem como os ensaios de eletroforese das frações dessorvidas das colunas indicam fortemente que o inibidor recuperado é aprotinina / Abstract: Aprotinin is a protease inhibitor found in bovine organs like pancreas, lung and liver. In this work, trypsin and chymotrypsin (bovine and swine) were immobilized in agarose and used as ligands for aprotinin recovery from industrial insulin process wastewater via affinity adsorption. The enzymes were immobilized on bisoxirane activated agarose and evaluated by their aprotinin adsorption capacity. Swine trypsin and bovine chymotrypsin were chosen as the most efficient ligands. These proteases were also immobilized on cianogen bromide activated agarose allowing the comparison of the two activation methods. Swine trypsin immobilized on cianogen bromide activated agarose had the highest aprotinin adsorption capacity (12,6 mglg). The effects of pH and ionic strength on aprotinin adsorption and desorption for immobilized swine trypsin and bovine chymotrypsin were studied using a experimental design method. The effect of the ionic strength was higher than that of the pH on aprotinin adsorption. The effect of pH was the most significant on the aprotinin desorption. Fixed bed adsorption studies with insulin process wastewater showed that inhibition could be recovered using both enzymes as ligands. Analysis of trypsin and chymotrypsin inhibition and electrophoresis assay of chromatographic fractions strongly suggested that the inhibitor recovered is aprotinin / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Submitted by Gabriela Lopes (gmachadolopesufpel@gmail.com) on 2018-10-23T14:00:16Z No. of bitstreams: 1 TESE Mariana Peil VERSÃO CORRIGIDA.pdf: 2685533 bytes, checksum: 792fb6d377fb546168a4c6e1f05c79c9 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2018-11-13T15:54:17Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TESE Mariana Peil VERSÃO CORRIGIDA.pdf: 2685533 bytes, checksum: 792fb6d377fb546168a4c6e1f05c79c9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-13T15:54:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE Mariana Peil VERSÃO CORRIGIDA.pdf: 2685533 bytes, checksum: 792fb6d377fb546168a4c6e1f05c79c9 (MD5) Previous issue date: 2018-08-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O aumento da produção no Brasil, assim como no mundo, é uma estratégia para segurança alimentar. No entanto, uma estagnação nos aumentos de produtividade devido, entre outros fatores, a redução da variabilidade genética através da seleção ao passar dos anos. Triticum timopheevii Zhuk. (2n = 28, composição genômica AtAtGG) é um trigo tetraploide e possui alelos desejáveis, principalmente para resistência a doenças, e ele pode ser usado para ampliar variabilidade genética no trigo. Este estudo propôs realizar a introgressão de segmentos de DNA de T. timopheevii. em uma cultivar elite de trigo brasileira. Linhas de T. aestivum/T. timopheevii na geração RC2 foram polinizadas com TBIO Sinuelo (TBIO) e um arranjo de genotipagem Affymetrix Axiom Array juntamente com hibridização genômica in situ (GISH) foram utilizados para detectar e caracterizar as introgressões. No total, 548 cruzamentos foram realizados, e 4.579 sementes foram produzidas possibilitando a geração de um mapa de ligação do T. timopheevii. Este mapa foi usado para identificar 316 introgressões putativas nos híbridos trigo/T. Timopheevii. Foram encontradas introgressões dos grupos de ligação. A análise comparativa confirmou as translocações 4AtL/5AtL herdadas do T. urartu e já reportadas no T. timopheevii e as translocações específicas da espécie 6AtS/1GS 3AtL/4AtL presentes no T. timopheevii. Os dados obtidos aqui mostram que T. timopheevii tem um grande potencial para ser usado em programas de melhoramento porque suas linhas de introgressão apresentam altas taxas de germinação alta fertilidade e boa produção de sementes. / Increasing wheat yield in Brazil, as well as in the world, is a strategy for food security. However, a stagnation has been observed, due to, among other things, the reduction of genetic variability through selection over the decades. Triticum timopheevii Zhuk. (2n = 28, genome composition AtAtGG) is a tetraploid wheat which has desirable alleles, mainly for disease resistance, and it can be used to increase genetic variability in wheat. This study proposed performing the introgression of DNA segments from T. timopheevii lines into a Brazilian elite cultivar. Wheat/T. timopheevii lines in BC2 generation were pollinated with TBIO Sinuelo (TBIO) and Affymetrix Axiom Array along with genomic in situ hybridisation (GISH) were used to detect and characterize introgressions. In total, 548 crosses were performed, and 4,579 seeds were produced enabling the generation of a linkage map of T. timopheevii. This was used to identify 316 T. aestivum/T. timopheevii putative introgressions. Introgressions of all 14 groups of T. timopheevii were found. Comparative analysis showed that T. timopheevii has the 4AtL/5AtL translocations inherited from T. urartu and the species-specific 6AtS/1GS, 3AtL/4AtL already reported in T. timopheevii. From the data obtained T. timopheevii has good potential to be used in introgression programs because its introgression lines present high germination rates, fertility level and good seed production.