Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-10-18T12:27:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_livia_budziarek_eslabao.pdf: 1788001 bytes, checksum: c14f927ac7e6babdc2bd66cf80275556 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-10-23T11:12:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_livia_budziarek_eslabao.pdf: 1788001 bytes, checksum: c14f927ac7e6babdc2bd66cf80275556 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-10-23T11:12:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_livia_budziarek_eslabao.pdf: 1788001 bytes, checksum: c14f927ac7e6babdc2bd66cf80275556 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-23T11:12:30Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertacao_livia_budziarek_eslabao.pdf: 1788001 bytes, checksum: c14f927ac7e6babdc2bd66cf80275556 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-03-21 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / A imunocontracepção é reconhecida como um dos principais novos métodos contraceptivos para o controle e o manejo da fertilidade em diferentes espécies animais. Dentre os potenciais alvos utilizados em vacinas contraceptivas, o hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH) é considerado um dos mais atrativos. O GnRH é um decapeptídeo hipotalâmico que apresenta um papel central na reprodução de mamíferos. Entretanto, devido à sua baixa imunogenicidade, é necessário associar o GnRH com uma molécula carreadora capaz de estimular o sistema imune como, por exemplo, a subunidade B da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (LTB). O presente estudo visou avaliar o potencial imunocontraceptivo de duas quimeras LTB/GnRH em camundongos machos da linhagem BALB/c. Os camundongos foram divididos aleatoriamente em oito grupos experimentais. O grupo LTB/GnRH-P recebeu a quimera expressa em P. pastoris. O grupo LTB/GnRH-P/A recebeu a quimera expressa em P. pastoris adsorvida em adjuvante oleoso. O grupo LTB/GnRH-E recebeu a quimera expressa em E. coli. O grupo LTB/GnRH-E/A recebeu a quimera expressa em E. coli adsorvida em adjuvante oleoso. O grupo LTB recebeu a proteína LTB expressa em E. coli. Os grupos Controle e Controle/A não receberam nenhum antígeno vacinal. O grupo Vacina comercial recebeu vacina comercial anti-GnRH utilizada em bovinos. A resposta imune humoral foi avaliada pela técnica de ELISA indireto e o potencial imunocontraceptivo foi avaliado por meio da quantificação de testosterona sérica e das análises histológicas das gônadas dos animais. Os grupos que receberam os antígenos LTB/GnRH (25 μg por vacina) apresentaram níveis de IgG total significativamente superiores quando comparados aos grupos controle, mostrando que ambos os antígenos são imunogênicos. Os grupos LTB/GnRH-P e LTB/GnRH-P/A apresentaram as maiores absorbâncias nos dias 28 (1,11 ± 0,09) e 42 (1,44 ± 0,04), respectivamente. Além disso, o grupo LTB/GnRH-P/A apresentou níveis de testosterona significativamente menores ao controle a partir do dia 28 (192 ng/dl ± 254,55). Os grupos LTB/GnRH-E e LTB/GnRH-E/A também obtiveram os maiores níveis de anticorpos nos dias 28 (0,33 ± 0,005) e 42 (1,44 ± 0,08), respectivamente. O grupo LTB/GnRH-E/A apresentou níveis de testosterona significativamente menores ao controle a partir do dia 28 (<12 ng/dl ± 0). Os resultados da histologia mostraram que ambos os antígenos causam alterações na espermatogênese, sendo que o antígeno expresso em E. coli foi relacionado com as maiores alterações nas gônadas. O presente estudo mostrou quimeras produzidas através da fusão da LTB com uma única molécula de GnRH é capaz de induzir a geração de resposta imune humoral, bloqueio das funções endócrinas relacionadas com a reprodução e alterações teciduais nas gônadas de camundongos machos. / Immunocontraception is recognized as one of the major new contraceptive methods for the control and management of fertility in different animal species. Among the potential targets used in contraceptive vaccines, gonadotropin-releasing hormone (GnRH) is considered one of the most attractive. GnRH is a hypothalamic decapeptide that presents a central role in mammalian reproduction. However, due to its low immunogenicity, it is necessary to associate the GnRH with a carrier molecule capable of stimulating the immune system such as, for example, the B subunit of Escherichia coli heat-labile enterotoxin (LTB). The present study aimed to evaluate the immunocontraceptive potential of two LTB/GnRH chimeras in male BALB/c mice. Mice were randomly divided into eight experimental groups. The LTB/GnRH-P group received the chimera expressed in P. pastoris. The LTB/GnRH-P/A group received the chimera expressed in P. pastoris adsorbed in oil adjuvant. The LTB/GnRH-E group received the chimera expressed in E. coli. The LTB/GnRH-E/A group received the chimera expressed in E. coli adsorbed in oil adjuvant. The Control and Control/A groups did not receive vaccine antigen. The Commercial vaccine group received an anti-GnRH commercial vaccine used in cattle. The humoral immune response was evaluated by indirect ELISA and the immunocontraceptive potential was assessed through the quantification of serum testosterone and the histological analysis of animal’s gonads. The groups that received LTB/GnRH antigens (25 μg per vaccine) presented total IgG levels significantly higher when compared to the control groups, showing that both antigens are immunogenic. The LTB/GnRH-P and LTB/GnRH-P/A groups showed higher absorbances at days 28 (1,11 ± 0,09) and 42 (1,44 ± 0,04), respectively. Furthermore, the LTB/GnRH-P/A group presented testosterone levels significantly lower to the control from day 28 (192 ng/dl ± 254,55). The LTB/GnRH-E and LTB/GnRH-E/A groups also obtained the highest antibody levels at days 28 (0,33 ± 0,005) and 42 (1,44 ± 0,08), respectively. The LTB/GnRH-E/A group presented testosterone levels significantly lower to the control from day 28 (<12 ng/dl ± 0). The results from histology showed that both antigens cause changes in spermatogenesis, wherein the antigen expressed in E. coli was associated with major changes in gonads. The present study showed that chimeras produced through the merge of LTB with a single GnRH molecule is capable to induce the generation of humoral immune response, block of the endocrine functions related to reproduction, and tissue alterations in the gonads of male mice.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-03-08Bitstream added on 2014-06-13T21:01:42Z : No. of bitstreams: 1 zanelli_cf_dr_araiq.pdf: 5712697 bytes, checksum: 1977a3ae4700587d216d3af5de0d62a1 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O fator de início de tradução de eucariotos 5A (eIF5A) é uma proteína altamente conservada desde arquebactérias a mamíferos e sofre uma modificação póstraducional única, necessária para sua maturação funcional, chamada de hipusinação. Apesar do grau de conservação de eIF5A, e da essencialidade de sua função nos organismos estudados, seu papel no metabolismo celular ainda se encontra indeterminado. Vários mutantes condicionais de eIF5A, sensíveis ao aumento de temperatura, têm sido isolados e caracterizados na levedura Saccharomyces cerevisiae. Utilizando um desses mutantes de eIF5A, o alelo tif51A-1, foi isolado o gene PKC1 como um supressor em alto número de cópias do fenótipo de sensibilidade a temperatura deste mutante. O entendimento de como se dá esta interação genética foi um dos enfoques deste trabalho. Foi mostrado que a via de MAP quinases que atua abaixo de Pkc1 não é responsável pela supressão deste mutante e a identificação dos novos supressores do mutante tif51A-1, GIC1 e ZDS1, levou à sugestão de uma nova via de sinalização a partir de Pkc1. Com a realização de experimentos subsequentes, foi confirmado que a nova via Pkc1-Zds1-Gic1 é responsável pela supressão do mutante tif51A-1 promovida por PKC1. Além disso, estes três supressores são importantes para a polaridade celular em S. cerevisiae, um processo essencial para a progressão no ciclo celular deste organismo, e, interessantemente, os mutantes tif51A-1 e tif51A-3 de eIF5A evidenciaram defeitos na polarização do citoesqueleto de actina na temperatura não permissiva. Esses dados evidenciam uma correlação de eIF5A com progressão no ciclo celular de S. cerevisiae. / The eukaryotic translation initiation factor 5A (eIF5A) is a highly conserved protein from archaebacteria to mammals and undergoes hypusination, an essential unique post-translational modification. Despite the high degree of conservation of eIF5A and its essential function in the studied organisms, its cellular role remains unclear. Several temperature-sensitive eIF5A mutants have been isolated and characterized in the yeast Saccharomyces cerevisiae. Using one of these mutants, the tif51A-1 allele, PKC1 was identified as a high-copy suppressor of the temperature-sensitive phenotype shown by this mutant. The understanding of this genetic interaction was one of the aims of this work. It was shown that the MAP kinase cascade downstream Pkc1 is not responsible for this phenotypic suppression and the identification of the new tif51A-1 suppressors, GIC1 and ZDS1, suggested a new signaling pathway branching from Pkc1. Further analysis confirmed that Pkc1-Zds1-Gic1 constitute a new pathway that is responsible for tif51A-1 mutant suppression promoted by PKC1. Moreover, these three suppressors are important for cell polarity in S. cerevisiae, an essential process for cell cycle progression in yeast, and, interestingly, the eIF5A mutants tif51A-1 and tif51A-3 showed defects in actin cytoskeleton polarization at the restrictive temperature. These data supported a connection between eIF5A and cell cycle progression in S. cerevisiae. As eIF5A was originally implicated in the process of translation, in order to better investigate the specific function of this factor, polysomal profiling analysis was performed and it was demonstrated that eIF5A interacts with monosomes in a tranlation dependent manner and, besides that, eIF5A mutants show altered polysomal distribution suggesting a possible defect in the elongation step of translation.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-04-28Bitstream added on 2014-06-13T20:21:38Z : No. of bitstreams: 1 teixeira_ec_dr_araiq.pdf: 2441746 bytes, checksum: 6a8b98becf92d1426314457c9b30825c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho teve como principal objetivo realizar estudos funcionais na bactéria Xac, estudando o possível envolvimento dos genes copA, copB e cutC no mecanismo de resistência a cobre nesta bactéria. Estes estudos funcionais envolveram: análise da expressão dos genes durante o crescimento na presença de cobre por Northern e Western blots e por eletroforese bi-dimensional, produção e purificação das proteínas recombinantes e produção de anticorpos, inativação de um dos genes (copA) para avaliar a participação da proteína CopA no mecanismo de resistência a cobre e análise da interação das proteínas de resistência a cobre com outras proteínas de Xac através do ensaio de duplo híbrido de leveduras. Os resultados obtidos mostraram que a linhagem mutante infecta a planta, mas os sintomas são mais retardados na presença do metal, quando comparada à linhagem selvagem. O crescimento das células mutantes na ausência e presença de cobre in planta indicou maior sensibilidade ao cobre pelas células mutantes. Na tentativa de verificar se as proteínas CopA, CopB e CutC interagem com outras proteínas de Xac, um ensaio de duplo híbrido de leveduras foi realizado. Através deste ensaio, algumas proteínas foram identificadas, as quais necessitam de estudos de caracterização adicionais. / Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) is the causal agent of the citrus canker, a serious disease that affects the most commercial citrus cultivars causing serious economic impacts. Symptoms include canker lesions, leading to abscission of fruit and leaves and general tree decline. By sequencing the genome of this bacterium (ONSA Network, FAPESP, Brazil), a better knowledge of this microorganism and its molecular interactions with the host might be elucidated. For this, we analyzed the gene expression during growth in the presence of copper by Northern and Western blots, 2D-electrophoresis, production and purification of the CopA, CopB, and CutC recombinant proteins, inactivation of the copA gene to evaluate the participation of CopA protein in the copper resistance mechanism, and protein-protein interactions assays by the yeast two-hybrid assay. Results showed that the mutant strain infects the plant, but the lesions formation was retarded in the presence of copper. The mutant strain showed more sensitivity to copper than the wild type strain during growth in planta. In order to verify whether the CopA, CopB, and CutC proteins interact with other proteins of Xac, a yeast two-hybrid assay was performed. By this assay, some proteins were identified, which need further characterizations.

Orientador: Marco Antonio Alvarenga / Coorientador: Katia Roberta A. Belaz / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Mateus José Sudano / Resumo: A congelação e refrigeração são biotecnologias muito utilizadas na reprodução equina, entretanto um significativo número de garanhões possuem baixa qualidade seminal após a criopreservação. Diversos autores descreveram a importância da composição e lipídica das membranas espermáticas sobre a resistência à criopreservação. Desta forma, este estudo teve como objetivo analisar a relação do perfil lipídico das membranas espermáticas com a raça e a resistência espermática à congelação e refrigeração. No experimento 1 foram verificadas as diferenças do perfil de fosfolipídios das membranas espermáticas de garanhões das raças Mangalarga Marchador e Quarto de Milhaa e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 728,6; 741,5 e 744,5 nos Mangalarga Marchador. No experimento 2 foram avaliados os fosfolipídios das membranas espermáticas entre garanhões com espermatozoides sensíveis ou resistentes à danos decorrentes da congelação e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 703,5; 728,6; 781,5; 808,5 e 836,6 nos animais sensíveis à congelação. No experimento 3 comparou-se os fosfolipídios das membranas espermáticas dos garanhões com a resistencia à refrigeração e observou-se maior abundância relativa dos íons m/z 772,5 e 774,6 nos animais resistentes à refrigeração. No experimento 4 observou-se não serem os mesmo lipídios que conferem resistência espermática à congelação e à refrigeração. Como os resultados do presente estudo, pode-se concluir que existe diferença no perfil lipídico das membranas espermáticas entre animais Quarto de Milha e Mangalarga Marchado, entre animais sensíveis e resistentes à congelação, entre animais sensíveis e resistentes à refrigeração. Além disso não há relação do perfil lipídicos que confere resistência espermática à congelação e à refrigeração / Abstract: The freezing and refrigeration are biotechnology very used in equine reprodution, although a significant number of stallion have low seminal quality after cryopreservation. Many authors described the importance of lipid composition of spermatic membrane in crypreservation resistance.The aim of this study is to analisy the lipid profile with MALDI-MS of plasmatic membrane of stallion sperm, checking its relation with breed and with spermatic resistance to freezing and refrigeration. Four experiments were done. The experiment 1 verified the diference of phospholipid spermatic membrane in stallions of Mangalarga Marchador and Quarter horse breeds, which was observed bigger relative abundance of ions m/z 728,6; 741,5 e 744,5 in Mangalarga Marchador. The experiment 2 evaluated the spermatic phospholipid membrane between stallions with weak and resistant to the damage of freezing and was observed bigger relative abundance of ions m/z 703,5; 728,6; 782,5; 808,5 and 836, 6 in the animals weaks to freezing. The experiment 3 compared the phospholipids of stallions spermatic membranes with sperm weaks or resistant to the damage of refrigeration and was observed bigger relative abundance of ions m/z 772,5 e 774,6 in animals resistants to refrigeration. The experiment 4 showed that not the same lipids offer spermatic resistance to freezing and refrigeration.The results of this study demonstrate tha there is a diference in lipid profile of spermatic membrane between Quarter Horse and Mangalarga Marchador breeds, between animals weak and resistant to freezing and between animals weak and resistant to refrigeration. Besides there is no relation of lipid profile that offer spermatic resistance to freezing and refrigeration / Mestre

Orientador: Maurício Boscolo / Coorientador: Roberto da Silva / Banca: Vanildo Del Bianchi / Banca: Milla Alves Baffi / Resumo: A aceitação de bebidas destiladas deriva principalmente de pequenas concentrações de numerosos compostos flavorizantes incluindo alcoóis superiores (óleo fúsel), ésteres, aldeídos, acetais, ácidos, cetonas, lactonas, fenóis voláteis, monoterpenos e norisoprenóides. Dentro deste contexto, para a melhora da qualidade da aguardente de cana-de-açúcar faz-se necessário pesquisas em aplicações tecnológicas e biotecnológicas que visem acentuar o sabor e o aroma, além do desenvolvimento de metodologias de analítica. Assim, neste trabalho foi analisado 21 variedades de cana-de-açúcar, sendo que na variedade SP813250 foi encontrado alta concentração do aldeído 2,6-decadienal, composto de aroma desagradável na produção de bebidas destiladas, e as variedades RB855536, RB987935 e RB975952 produziu grande diversidade e quantidade de voláteis favoráveis ao aroma de bebidas alcóolicas o que leva a inferir que estas variedades possam ser melhor indicadas para a produção de aguardente de cana e além disto, foi possível constatar que maior quantidade de voláteis foram obtidos na casca e nos nódulos da planta. Após a etapa de seleção variáveis para catálise enzimática foram indicadas pelo delineamento fatorial fracionado as seguintes condições: (i) o extrato do fungo Thermoascus aurantiacus, (ii) aplicação pós-fermentação alcoólica, (iii) Brix 16°, (iv) agitação de 200 rpm. Para a fase de otimização foram variados a concentração de extrato enzimático e tempo de aplicação assim, verificou-se aumento da concentração de terpenóides e norisoprenóides como limoneno, terpineol, isoeugenol, 4-alildimetoxibenzeno, α-ionona e linalol em função do tempo de hidrólise e da concentração de β-glicosidase. Nerolidol, 2,6,10,10-tetrametil-1-oxa-espiro-(4,5)-dec-6-eno e β-damascenona tiveram aumento... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The acceptance of liquor derives primarily numerous small concentrations of flavor compounds including higher alcohols (fuel oil), esters, aldehydes, acetals, acids, ketones, lactones, phenols volatile monoterpenes and norisoprenóides. Within this context, to improve the quality of sugar cane-sugar is necessary technological research and biotechnological applications aimed accentuate the flavor and aroma, and the development of analytical methodologies. Thus, this study was analyzed 21 varieties of cane sugar, and the variety SP813250 found high concentration of aldehyde 2,6-decadienal, unpleasant aroma compound in the production of distilled spirits, and the varieties RB855536, RB987935 and RB975952 produced great diversity and quantity of volatile friendly aroma of alcohol which leads to the inference that these varieties may be better suited for the production of sugar cane and in addition, it was found that greater amounts of volatiles were obtained from the bark and nodules of the plant. After the selection stage variables for enzymatic catalysis are indicated by fractional factorial design with the following conditions: (i) the extract of the fungus Thermoascus aurantiacus, (ii) applying post-alcoholic fermentation, (iii) 16° Brix, (iv) stirring 200 rpm. For the optimization phase were varied concentration of enzyme extract and application time thus found to increase the concentration of norisoprenóides as limonene and terpenoid, terpineol, isoeugenol, 4-alildimetoxibenzeno, α-ionone and linalool as a function of hydrolysis time and the concentration of β-glucosidase. Nerolidol, 2,6,10,10-tetramethyl-1-oxa-spiro-(4,5)-dec-6-ene and β-damascenone concentration had increased proportionately enzymatic activity leading... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Os plásticos, polímeros geralmente derivados de petróleo com características bastante atraentes e valor baixo estão presentes em quase todos os objetos produzidos pelos homens, desde consumo doméstico até produtos de alta tecnologia. Em 2015, aproximadamente 320 milhões de toneladas de plásticos foram produzidas e a estimativa é que este consumo continue aumentando até 2020. No entanto, cerca de 60% do que é produzido, são plásticos não biodegradáveis, os quais são persistentes ambientalmente, afetando negativamente diversos seres vivos, inclusive os seres humanos. Diante deste cenário, e como alternativa ambientalmente correta, podemos fazer uso de biopolímeros, em especial o polihidroxibutirato (PHB). O PHB é um homopolímero biodegradável, biocompatível e possui características similares às do polipropileno, podendo servir como potencial substituto a esse polímero derivado de petróleo. No entanto, o PHB ainda não está difundido no nosso cotidiano, porque apresenta alto custo de produção e purificação, principalmente devido aos substratos utilizados, que na maioria das vezes são açúcares e chegam a representar 30% do preço final do produto. Visando diminuir o preço de produção, o objetivo deste trabalho é produzir o PHB utilizando bactérias metilotróficas, isoladas de ambiente estuarino e capazes de consumir metanol. Após isolamento seletivo, duas bactérias do gênero Methylobacterium sp. foram isoladas e identificadas por biologia molecular e espectrometria de massas (MALDI-TOF). A produção de PHB foi estudada em frascos agitados sem quaisquer ajustes de condições físico-químicas por um período de 168 horas sob 28 ºC e 180 RPM em agitador orbital de bancada e também em biorreator sob 28 °C, 180 RPM e pH 7,0 durante 96 horas. Os melhores resultados foram obtidos por M. extorquens sem ajuste de condições físico-químicas, tendo atingido produtividade do produto de 125 mg.L-1 e acúmulo de 30% de PHB em biomassa. M. rhodesianum obteve produtividade do produto de 38 mg.L-1 em seu melhor resultado, porém é uma produtora em potencial de polietileno glicol a partir de metanol. / Plastics, usually petroleum-derived polymers that have attractive characteristics and low price, are present in literally almost all products produced by humans. They are present since from home consuming to high technology products. In the year of 2015 approximately 320 million tons of plastics were produced and is estimate this consumption will continue to increase until 2020. However, about 60% of this production is non-biodegradable plastics, which makes them environmentally persistent, affecting negatively several living beings including humans. Considering this scenario, and as an environmentally correct alternative, we can make use of biopolymers, especially polyhydroxybutyrate (PHB). PHB is a biodegradable, biocompatible homopolymer and has characteristics similar to those of polypropylene, which may serve as a potential substitute for this petro derivative polymer. However, PHB is still not widespread in our daily lives, once has a high cost of production and purification, mainly due to the substrates used, which in most cases are sugars, and they can represent 30% of the final price of the product. In order to decrease the price of production, this work aims to produce PHB using methylotrophic bacteria, isolated from an estuarine environment and capable of consuming methanol. After a selective isolation, two bacteria of the genus Methylobacterium sp. were isolated and identified by molecular biology and mass spectrometry (MALDI-TOF). PHB production was studied in shake flasks without any physical-chemical adjustments for a 168 hour period under 28 ºC and 180 RPM in a rotary shaker and also in bioreactor under 28 °C, 180 RPM and pH 7.0 for 96 hours. The best results were obtained by M. extorquens without adjustment of physical-chemical conditions, reaching a product productivity of 125 mg.L-1 and accumulation of 30% of PHB in biomass. M. rhodesianum obtained product productivity of 38 mg.L-1 at its best result, but is a potential producer of polyethylene glycol from methanol.

Nisina é extensamente utilizada como conservante natural em alimentos por conter características antimicrobianas contra germinação de esporos e bactérias Gram-positivas; potencialmente utilizada para produtos odontológicos e farmacêuticos, e como um agente terapêutico. Este estudo teve por objetivo melhorar a produção da nisina em diferentes meios de cultivo incluindo o leite desnatado. Com a expressão de nisina relacionada às condições de crescimento do Lactococcus lactis subsp. lactis ATCC 11454, a interferência dos componentes dos meios de cultivo, os parâmetros de crescimento e o tempo de incubação foram estudados para a obtenção desta bacteriocina. O cultivo do L. lactis foi realizado (36h/100rpm/30 oC) em caldo M17 e MRS em sua composição básica (pH = 6-7) e também suplementado com sacarose (1,0-12,5 g.L-1); fosfato de potássio (0,13 g.L- 1), asparagina (0,5 g.L-1) e sacarose (0,24 g.L-1); e diluído 1:1 com leite desnatado. O leite desnatado foi também utilizado como meio de cultivo mantendo sua composição básica (9–10 % sólidos totais, pH = 6,5). Alíquotas do cultivo em caldo (OD660 = 0,7; 3,20 mg DCW/L ou 102 CFU/mL) de cada grupo de ensaio foram transferidas para um novo meio de cultivo e incubado (36h/100rpm/30 oC). A produção de nisina foi detectada através da difusão em ágar utilizando Lactobacillus sake ATCC 15521 (30 0C/24h) como microrganismo sensível. A atividade detectada foi expressa em AU (arbitrary units – unidades arbitrárias), correspondendo aos halos de inibição de crescimento de L. sake. As unidades arbitrárias foram convertidas para concentração de nisina padrão (Nisaplinâ contêm 25 mg nisina / g produto, correspondem a 106 AU). A detecção da atividade da nisina foi menor do que 0,1 AU.mL-1 em caldo M17e MRS, aumentando significantemente para 142527,94 AU.mL-1 em M17 ou MRS diluído com leite desnatado (1:1). A atividade da nisina detectada foi altamente influenciada pela incorporação de leite desnatado em ambos o caldo, MRS e M17, com a máxima quantidade expressa em 36 horas de incubação. Os resultados mostram que o leite desnatado com meio de cultivo desenvolve ambiente propício e ideal para a produção de nisina, pois reduz os custos e aumenta a produção, por se tratar de um produto de fácil acesso e trivial. / Nisin is a bacteriocin produced by Lactococcus lactis that inhibits the germination and growth of Gram-positive bacteria. As Nisin expression is related to the growth conditions of Lactococcus lactis subsp. lactis, the effects of growth parameters, media components and incubation time, were studied to optimize the expression of Nisin. L. lactis ATCC 11454 was grown (36h/100rpm/30oC) in both M17 and MRS basic broth media (pH = 6-7) supplemented with sucrose (1.0-12.5 g L-1); potassium phosphate (0.13 g L-1), asparagine (0.5 g L-1) and sucrose (0.24 g L-1); and diluted 1:1 with liquid non-fat milk. Liquid non-fat milk, undiluted, was also used as another basic medium (9–10 % total solids, pH = 6.5). Aliquots of cultured broth (OD660 = 0.7; 3.20 mg DCW/L or 102 CFU/ml) from each group were transferred into fresh broth and incubated further (36h/100/rpm30oC). Nisin production was assayed by agar diffusion using Lactobacillus sake ATCC 15521 (24h/300C) as the sensitive organism. Comparing diameters of growth inhibition of L. sake from wells of Nisin of known concentration (“standard Nisin”; Nisaplin, Sigma) to diameters of inhibition from defined volumes of L. lactis sp. lactis broth cultures, the amount of Nisin in broth cultures was measured as arbitrary units (AU ml-1) converted to Nisin mg/ml, with 25 mg of standard Nisin/g corresponding to 106 AU/g. The detection of Nisin activity was less than 0.1 AU.mL-1 in M17 or MRS broth, and increased to a maximum of 142527.94 AU.mL-1 in M17 or MRS diluted with liquid non-fat milk (1:1). The amount of Nisin expressed was strongly influenced by the incorporation of non-fat milk to both M17 and MRS broths (1:1), with the maximum amount expressed after 36 h of incubation. Nisin is widely used as a natural additive for preserving foods, pharmaceutical and dental products, and as a therapeutic agent. This study was performed to improve large scale Nisin production to meet the demand of its beneficial use in health-care products.

Submitted by Geyciane Santos (geyciane_thamires@hotmail.com) on 2015-06-03T14:35:04Z No. of bitstreams: 1 Dissertação - Susane Patrícia Melo de Lima.pdf: 9286211 bytes, checksum: 48da9d54695f3bfbe966e2e97b40bc66 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-06-03T18:21:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Susane Patrícia Melo de Lima.pdf: 9286211 bytes, checksum: 48da9d54695f3bfbe966e2e97b40bc66 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2015-06-03T18:21:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação - Susane Patrícia Melo de Lima.pdf: 9286211 bytes, checksum: 48da9d54695f3bfbe966e2e97b40bc66 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-03T18:21:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação - Susane Patrícia Melo de Lima.pdf: 9286211 bytes, checksum: 48da9d54695f3bfbe966e2e97b40bc66 (MD5) Previous issue date: 2011-12-19 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work aims to analyze the productive chain of the biodiversity of the Amazon biocosmetics from the case study of three bioindustries located in the state of Amazonas, Amazongreen, the Pharmakos of Amazon and Gotas of Amazon. Permeates by a problem that is sought to answer in terms of historical-geographical (regarding space and time) the commercial importance of the forest is the same inputs from the collection of "inner drugs" in the state of Amazonas; how to develop the productive chain of each bioindustries, and finally if the point of view that promotes biotechnology in the Amazon, the bioindustries analyzed can join the network of actors that is articulated to the promotion of science, technology and innovation in the area the biocosmetics. To address this issue was used as a short time frame for resumption of the seventeenth century colonial history with the cycle backwoods drugs until nineteenth century when there is a strong discourse of the forest as a resource to bioindustrialization. The spatial area is the city of Manaus, it is home to the analyzed bioindustries and as analytical approach it was listed two oil products Amazon: andiroba [Carapa guianensis] and copaiba [Copaifera langsdorfii], and focused on a theoretical basis geographical category of analysis, the territory. In this context, the objective of the research was to analyze the biocosmetics sector in Amazonas through the case study companies Amazongreen, Pharmakos of Amazon and Gotas of Amazon, and the specific objectives were to analyze through relation space / time, in economy of the Amazon, the importance of the extraction from the collect of backwoods in Amazonas, describe the productive chain of andiroba and copaiba biodiversity to meet the demands of bioindustry three case study; and analyze the network of actors that consolidate biotechnology in the state of Amazonas to give input to biocosmetics industries in Manaus. It has been that the commercial importance of inputs in the Amazon forest still exists, but rather is now enriched by scientific and technological contributions of biotechnology. The productive chain of biodiversity should not exist without consideration of the communities living in the territories of extraction of oil and the biotechnology, especially that mediated by the Amazon Biotechnology Center, does not occur as originally planned, but it is not nonexistent, and the promoting science, technology and innovation in the sector biocosmetics the public sphere is the driving force through the network of actors that allows for the consolidation, financing and participation of public federal, state and local governments / Este trabalho se propõe a analisar a cadeia produtiva da biodiversidade dos biocosméticos no Amazonas a partir do estudo de caso de três bioindústrias localizadas no estado do Amazonas, a Amazongreen, a Pharmakos da Amazônia e a Gotas da Amazônia. Permeia-se por uma problemática que buscou responder se do ponto de vista histórico-geográfico (relação espaço e tempo) a importância comercial dos insumos florestais é a mesma desde a coleta das “drogas do sertão” no estado do Amazonas; como se desenvolve a cadeia produtiva de cada uma das bioindústrias e, por fim; se do ponto de vista da biotecnologia que se promove no Amazonas, as bioindústrias analisadas conseguem participar da rede de atores que se articula para a promoção da ciência, da tecnologia e da inovação na área da biocosmética. Para responder a tal problemática usou-se como recorte temporal uma breve retomada à história colonial do século XVII com o ciclo das drogas do sertão até o século XXI quando se verifica um forte discurso da floresta como recurso para a bioindustrialização. O recorte espacial é a cidade de Manaus, pois é onde se localizam as bioindústrias analisadas e como recorte analítico elencou-se como produtos duas oleaginosas amazônicas: a andiroba [Carapa guianensis] e copaíba [Copaifera langsdorfii], além de um aporte teórico centrado na categoria geográfica de análise, o território. Nesse contexto, o objetivo geral da pesquisa foi analisar o setor de biocosméticos no Amazonas por meio do estudo de caso das empresas Amazongreen, Pharmakos D’ Amazônia e Gotas da Amazônia e, os objetivos específicos foram, analisar por meio da relação espaço/tempo, na economia do Amazonas, a importância do extrativismo desde a coleta das drogas do sertão na Amazônia; descrever a cadeia produtiva da biodiversidade da andiroba e da copaíba para atender a demanda das três bioindústrias do estudo de caso e; analisar a rede de atores que consolidam a biotecnologia no estado do Amazonas para dar aporte às indústrias de biocosméticos em Manaus. Tem-se que a importância comercial dos insumos florestais no Amazonas não deixou de existir, mas ao contrário, agora é incrementada pelos aportes científicos e tecnológicos da biotecnologia. A cadeia produtiva da biodiversidade não deve subsistir sem a consideração das comunidades que vivem nos territórios de extração das oleaginosas e quanto à biotecnologia, sobretudo aquela mediada pelo Centro de Biotecnologia da Amazônia, não ocorre como planejado inicialmente, porém não é inexistente, e para a promoção da ciência, tecnologia e inovação no setor de biocosméticos a esfera pública é a força motriz através da rede de atores que permite consolidar, dos financiamentos e na participação de organismos públicos federais, estaduais e municipais.

Estudou-se a influência da concentração inicial de substrato no cultivo em fermentador para produção de biomassa de Candida utilis IZ-1840 em meio sintético tamponado contendo glicerol (1,2,3-propanotriol) como fonte exclusiva de carbono nas seguintes concentrações: 15, 25, 35, 45, 55, 65 e 75 g/L com ensaios em duplicata. Observou-se um comportamento cinético característico de fenômeno de inibição por substrato, tendo-se então ajustada uma equação de modelo de inibição baseada na literatura para os dados de velocidade específica máxima de crescimento celular em função da concentração inicial de substrato. A partir de tal equação determinou-se o valor da concentração inicial de substrato onde não ocorre inibição, definido como S* ( S*=17,511 g/L) e o valor teórico acima do qual a inibição é máxima definido como Sm, (Sm=175,4 g/L). O valor teórico de velocidade específica máxima de crescimento celular, definido como &#181;* correspondente ao valor S* como concentração de substrato inicial foi calculada em 0,225 1/h. / The influence of initial substrate concentration in the growth of Candida utilis IZ-1840 in a buffered synthetic mediurn was studied utilizing glycerol (1,2,3-propanetriol) as an exc1usive carbon source, in the following concentrations: 15, 25, 35, 45, 55, 65 and 75 of in double assays. Characteristic kinetic behavior of substrate inhibition was detected, then one model equation of inhibition based on literature was adjusted for the maximum specific growth rate in function of the initial substrate concentration. From this equation it was possible to determine the value of the initial substrate concentration that do not occur growth inhibition, defined as S* (S* = 17,511 g/L).and the theoretical value of limit concentration where above this the growth inhibition becomes maximum which was defined as Sm (Sm = 175,4 g/L). The theoretical value for maximum specific growth rate, defmed as &#181;* corresponding to determined S* as initial substrate concentration was calculated in 0,225 1/h.

Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-06-12T18:19:02Z No. of bitstreams: 1 BismarckAscarSauaia.pdf: 1915965 bytes, checksum: 720a005798d94ec0d82a2ba0cf2b225e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-12T18:19:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BismarckAscarSauaia.pdf: 1915965 bytes, checksum: 720a005798d94ec0d82a2ba0cf2b225e (MD5) Previous issue date: 2016-03-31 / Estimation of blood glucose levels using invasive methods currently is a routine in emergency and ambulatory attendance of public health services, as well as in residential glucose monitoring, in order to prevent glucose levels variation, which may evolve to ophthalmic, renal, vascular and neurological complications. In order to develop a low-cost, socially accessible and non-invasive method to establish blood glucose levels, it was created a linear conversion mathematical model from salivary hidrogenionic potential (pH) values to blood glucose level. After signing the informed consent form and filling out the survey questionnaire to gather personal, clinical and family history data, it was collected a drop of blood from the tip of the right index finger, which was submitted to the glucometer for blood glucose level determination and after that, it was also collected 2 mL of saliva in a 5ml glass Beacker to salivary pH definition with a digital pH meter. Data collection was performed between May and November, 2014, with a sample of 333 cappilary blood glucose (CG) and salivary ph tests from non - diabetic adult volunteers, in fasting state from 2 to 4 hours after last meal, who were randomly selected from medicine and physiotherapy clinics of UNICEUMA. After entering data in EPINFO 2000 program, results were analyzed with Pearson’s correlation coefficient (r) in Bioestat 5.3 Software and presented a value of – 0,7522, showing the existence of a correlation between capillary blood glucose and salivary pH. Then, we defined that variables were related in a mathematical form of a straight line. Thus, we found the coefficient of determination between capillary blood glucose and salivary pH using simple linear regression test: R2 = 0,5658. Regarding alpha level = 0.05, we established a mathematical model: y = a + bx, where a = 9.3286 and b = - 0.0278. So, after calculating blood glucose level from pH (pH = F (Glycemia); we have: CG = (9.3286 - pH)/ 0.0278. The results demonstrated the relation among CG values (mg/dl), corresponding salivary ph and the diagnosis respectively: CG < 70  pH > 7,94 with (Variation (Δ) = 7,784 to 8,096) = Hypoglycemic Risk; CG between 70 and 100  pH 7,94 to 6,69 = Security Gap or normality; CG > 100  pH < 6,69 with (Δ = 6,536 to 6,848) = Hyperglycemic Risk. The proposed mathematical model may allow the definition of a diagnostic kit to estimate blood glucose levels from salivary pH through a non-invasive, low-cost, socially accessible and less traumatic method either in healthy patients or at risk for developing diabetes. / A estimativa dos níveis de açúcar no sangue, por método invasivo, atualmente é rotina no atendimento de emergência e ambulatorial das unidades públicas de saúde, assim como, no controle e monitoramento glicêmico domiciliar, para prevenir variações, que podem evoluir em complicações oftalmológicas, renais, vasculares, neurológicas, entre outras. Com a finalidade de minimizar gastos e disponibilizar um kit de baixo custo, acessível e não invasivo para a determinação de níveis glicêmicos capilares, foi criado um modelo matemático linear de conversão dos valores do potencial Hidrogeniônico (pH) salivar em glicêmico capilar. Após assinatura do Termo de Consentimento livre e Esclarecido (TCLE) e preenchimento do questionário de avaliação contendo dados pessoais, clínico e de histórico familiar do paciente, coletou-se uma gota de sangue da extremidade do indicador direito, a qual foi submetida à glicosímetro para a definição do nível de glicemia, e a seguir, em um recipiente de 5 ml, coletou-se 2 ml de saliva para leitura do pH em phgâmetro digital. A coleta foi realizada entre os meses de maio a novembro de 2014, sendo a amostragem constituída por 333 exames de Glicemia Capilar (GC) e pH do fluido, de voluntários, adultos, não diabéticos, em jejum alimentar de 2 a 4 horas, os quais foram selecionados aleatoriamente, provenientes da demanda da clínica médica e de fisioterapia do UNICEUMA. Os resultados após tabulados no banco do programa EPINFO 2000 e, analisados com auxílio do Software Bioestat 5.3 a partir da aplicação do teste de correlação de Pearson apresentaram o valor de r (coeficiente de correlação) igual a – 0,7522, admitindo-se a existência de correlação entre GC e o pH salivar. Em seguida, definiu-se a forma matemática em que as variáveis estão relacionadas, nesse caso, uma reta. Desta forma, a partir da aplicação do teste de regressão linear simples obteve-se o coeficiente de determinação ou explicação da correlação entre GC e pH da saliva: R2 = 0,5658. Considerando-se o nível de decisão alfa = 0.05, estabeleceu-se um modelo matemático: y = a + bx, sendo a = 9,3286 e b = - 0,0278. Logo, calculando glicemia a partir do pH (pH = F(Glicemia); temos: GC = (pH - 9,3286)/ - 0,0278. Os resultados demonstraram a relação entre valores de GC (mg/dl), seu correspondente no pH da saliva e o diagnóstico, respectivamente: GC < 70  pH > 7,94 com (Variação (Δ) = 7,784 a 8,096) = Risco Hipoglicêmico; GC Entre 70 e 100  pH 7,94 a 6,69 = Faixa de Segurança ou normalidade; GC > 100  pH < 6,69 com (Δ = 6,536 a 6,848) = Risco Hiperglicêmico. O modelo matemático proposto pode ser utilizado para a definição de um kit de diagnóstico na estimativa dos níveis glicêmicos, a partir do pH salivar por método não invasivo, de baixo custo, socialmente acessível, com menos trauma em pacientes adultos hígidos ou com risco de desenvolver a diabetes