A expressão dos receptores AT1 e AT2 da Angiotensina II (Ang II) em astrocitomas humanos está associada a um pior prognóstico. Para investigar os mecanismos moleculares da ação da Ang II em gliomas, foi analisado por DNA microarray o transcriptoma da linhagem celular C6 tratada com Ang II e antagonistas de AT1 e AT2 nos intervalos de 3 e 6 horas. Os genes diferencialmente expressos obtidos foram submetidos a análises de enriquecimento funcional, diagramas de Venn e interatomas. As alterações observadas no transcriptoma a partir do tratamento com Ang II revelaram genes envolvidos em funções biológicas e vias de sinalização pró-tumorais tais como ciclo celular, migração, ErbB, MAPK e mTOR. Além disso, a identificação das proteínas centrais nos interatomas avaliados forneceu evidências para estudos futuros com foco nesses alvos. Embora a transdução de sinal de AT2 seja distinta da observada em AT1, ambas apresentaram categorias funcionais em comum que podem estar relacionadas ao pior prognóstico observado em pacientes cujos gliomas expressam esses receptores. / The expression of AT1 and AT2 receptors of Angiotensin II (Ang II) in human astrocytomas was associated with a worse prognosis. To investigate the molecular mechanisms of Ang II actions in gliomas, the transcriptomic profile of C6 cells treated with Ang II and antagonists of AT1 and AT2 was evaluated. The differentially expressed genes obtained were submitted to functional enrichment, Venn diagram and transcriptome network analyzes. Ang II treatment caused gene expression changes involved in pro-tumor functions and signaling pathways such as cell cycle, migration, ErbB, mTOR and MAPK. Furthermore, the identification of central proteins in the interactomes provided evidences for future studies focused on these targets. Taken together, these results provided insights into how the transcriptome of glioma cells is affected by Ang II. Moreover, although the signal transduction of AT2 is distinct from the observed for AT1, they present functional categories in common that may be underlying the worst prognosis observed in gliomas expressing Ang II receptors.

A proteólise de componentes do plasma e da matriz extracelular é um fator importante no quadro hemorrágico desencadeado pela ação de venenos de serpentes. Neste estudo, avaliamos o papel dos domínios estruturais de metaloproteinases na interação com seus alvos. Ensaios de hidrólise in vitro mostraram que as metaloproteinases HF3 e bothropasina (classe P-III), e BJ-PI (classe P-I) do veneno da Bothrops jararaca, degradaram proteínas plasmáticas (fibrinogênio, fibronectina e vitronectina), além de colágeno VI e Matrigel, mostrando diferentes perfis de hidrólise. Experimentos de N-deglicosilação das proteinases mostraram que suas porções glicosídicas são importantes para a manutenção da integridade de suas estruturas e da atividade proteolítica. E ensaios para avaliar a interação das proteinases e da proteína DC (domínios tipo disintegrina/rico em cisteínas) com alguns substratos protéicos mostraram que além de seus domínios estruturais (catalítico/tipo disintegrina/rico em cisteínas) suas cadeias de carboidratos também são importantes no reconhecimento dos mesmos. / Proteolysis of plasma and extracellular matrix proteins is a key factor in the local hemorrhage induced by snake venom metalloproteinases (SVMPs). In this work we evaluated the role of the structural domains of SVMPs in the interaction with their targets. In vitro hydrolysis assays showed that the SVMPs HF3 and bothropasin (P-III class) and BJ-PI (P-I class) from Bothrops jararaca venom degraded plasma proteins (fibrinogen, fibronectin and vitronectin), collagen VI and Matrigel resulting in different hydrolysis profiles. N-deglycosylation of these proteinases showed that their carbohydrate moieties are important for keeping their structural integrity and proteolytic activity. The assays to analyze the interaction of the proteinases and of the DC protein (composed of the disintegrin-like and cysteine-rich domains) with some proteins confirmed that not only the structural domains (catalytic, disintegrin-like and cysteine-rich) but also the sugar moieties are important in the recognition of plasma and extracellular matrix proteins.

A procura por tecnologias que minimizem o consumo de água e o potencial poluidor da indústria do couro tem aumentado. O uso de enzimas em diversas etapas produtivas deste processo é uma alternativa cada vez mais comum, pois além de ser considerada tecnologia limpa, acelera o processo produtivo. O objetivo deste trabalho foi analisar o desempenho de oito enzimas comerciais (A1, B1, B2, B3, C1, C2, C3 e C4) fornecidas por três empresas do setor (A, B e C) em processos chamados coenzimáticos, com teores reduzidos de produtos químicos, nas etapas de remolho, depilação/caleiro e purga, por meio da comparação com processos tradicionais puramente químicos. Na etapa de remolho foi verificada a influência do tempo de processamento, tipo e concentração de enzima, sendo a pele analisada quanto ao teor de gorduras e matéria volátil e o banho analisado com relação à concentração de cloretos, sólidos totais, fixos e voláteis. Na etapa de depilação/caleiro foi estudada a influência do tempo, tipo e concentração de enzima, em comparação com dois processos químicos (tradicional e reduzido), sendo analisada a pele em diferentes tempos de processo (via análise de MEV). Na etapa de purga, o processo foi avaliado com relação ao tipo de enzima aplicada e ao tempo de processamento. Ao todo foram realizados 24 testes (12 de remolho, 6 de depilação/caleiro e 6 de purga) e em todos eles, além das análises citadas anteriormente, foram feitas análises de Carbono Orgânico Total (COT) e Proteína Solúvel (método de Lowry) nos banhos. Adicionalmente, foi determinada a atividade das enzimas A1, B3 e C3 frente ao colágeno e das enzimas A1, B3, C3 e B1 frente a lipídeos. Em geral, os resultados apontam que os processos coenzimáticos alcançam um maior potencial de remoção de matéria orgânica, quando comparado aos processos puramente químicos, destacando-se as enzimas C1 no remolho e B1 e B2 na depilação/caleiro. Na purga as enzimas apresentaram desempenho semelhante, destacando-se as enzimas B3 e C3. Os testes de determinação da atividade enzimática demonstraram que a enzima B3 não apresenta atividade frente ao colágeno, enquanto que as enzimas A1 e C3 possuem atividade frente a este substrato. Já para a atividade lipolítica, o maior desempenho foi verificado para a enzima A1. A utilização de enzimas em curtumes tem sua eficácia comprovada na etapa de purga, recentemente na depilação/caleiro e remolho também apresentou resultados positivos. / The search for technologies that minimize water consumption and pollution potential of the leather industry has increased. The use of enzymes in various productive stages of this process is a common alternative, since it is a clean technology and accelerates the process. The aim of this study was to analyze the performance of eight commercial enzyme (A1, B1, B2, B3, C1, C2, C3 and C4) provided by three companies in the sector (A, B and C) in processes appointed co-enzymatic, with reduced levels chemicals on the steps of soaking, dehairing/liming and bating, by comparison with the traditional purely chemical. In the stage of soaking was seen from the influence of processing time, type and enzyme’s concentration, being the skin analyzed for fat content and volatile matter and bath analyzed with respect to the concentration of chloride, total solids, fixed and volatile. In step dehairing/liming was studied the influence of time, type and enzyme’s concentration, compared with two chemical processes (traditional and reduced) and the skin was treated at different process times (by SEM analysis). In the bating step, the process was evaluated for the type of enzyme used and the processing time. Altogether 24 tests were performed (12 of soaking, 6 of dehairing/liming and 6 of bating) and all of them, besides the previously mentioned tests were analyzed for Total Organic Carbon (TOC) and Soluble Protein (Lowry method) in baths. Additionally, it was determined the activity of enzymes A1, B3 and C3 against the collagen and enzymes A1, B3, C3 and B1 front of lipids. In general, the results indicate that the co-enzymatic processes reach a greater potential for removal of organic matter when compared to purely chemical processes, especially the enzymes in the soaking C1, B1 and B2 in dehairing/liming. In bating, the enzymes showed similar performance, especially enzymes B3 and C3. Tests for determination of enzyme activity showed that the enzyme has no activity against B3 to collagen, while the A1 and C3 enzymes have activity against this substrate. As for the lipase activity, the greatest effects were observed for the enzyme A1. The use of enzymes in leather processing has proven effective in purging step recently in soaking and dehairing/liming also had positive results.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-07-26T14:25:23Z No. of bitstreams: 1 DIS_MARCOS_VINICIUS_FORTES_ALBA_COMPLETO.pdf: 1333852 bytes, checksum: c687fbcabc052faa5ed3567c986640e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-26T14:25:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_MARCOS_VINICIUS_FORTES_ALBA_COMPLETO.pdf: 1333852 bytes, checksum: c687fbcabc052faa5ed3567c986640e9 (MD5) Previous issue date: 2016-02-15 / Nuclear Medicine enables, among other things, the visualization, characterization and quantification of biochemical processes, metabolism, biomarkers and receptors in vivo by molecular imaging. One of the methods of functional imaging available in this area is Positron Emission Tomography (PET), which depends on the administration of a radiopharmaceutical in the studied organism. One disease that can be studied by PET scan is multiple sclerosis (MS) through the access to the TSPO (Translocator protein) receptors density. The radiopharmaceutical [11C]-(R) -PK11195 has high affinity and selectivity for these receptors, which are increased in activated microglia cells in the case of MS. Therefore, the objective of this study was to develop and to validate the production process (synthesis, purification and quality control) of the radiotracer [11C]-(R)-PK11195 in the Radiopharmaceutical Production Center of the Brain Institute of Rio Grande do Sul (BraIns), allowing performing PET scans for the study of MS. The radioisotope was produced in the 16 MeV PETrace cyclotron (GE Healthcare) as [11C]CO2 via the nuclear reaction 14N (p, ?)11C after the bombardment of a gaseous target containing N2 and 0.5% of O2 with protons. The production was performed in the equipment TRACERlab FX-C Pro (GE Healthcare) to meet the requirements of Good Manufacturing Practices (GMP). The radiopharmaceutical quality control was carried out at the BraIns Quality Control Laboratory and the final product was tested for Identity and Radionuclidic Purity, Radiochemical Purity, Specific Activity, Residual Solvents, pH, Sterility, the Filtration Membrane Integrity and Bacterial Endotoxins. The synthesis was performed through the methylation of the precursor (R)-[N-desmethyl]PK11195 using [11C]CH3I (methyl iodide labeled with carbon-11) under the defined optimal conditions: 400 uL of dimethyl sulfoxide (DMSO), approximately 1 mg of precursor, approximately 10 mg of potassium hydroxide (KOH) at 40 ?C for 1 minute. The reaction mixture was then neutralized with 1 mol.L-1 hydrochloric acid and diluted with mobile phase (76% acetonitrile and 24% Milli-Q water). The diluted mixture was injected into a semi-preparative HPLC system for purification. Solid phase extraction (through Sep-Pak C18 cartridges - Waters) was used to remove the solvent. Product elution and formulation was conducted with 0.7 mL of ethanol and 6.3 ml of 0.9% saline (sterile and pyrogen free). Sterilization was performed by filtration on a 0.22 ?m pore membrane and, as well as the filling process, was carried out under laminar flow. The process steps could be optimized and fitted to the equipments and laboratories structure. Radiochemical yield of the process in relation to the [11C ]CH3I start activity was 15.5 ? 2.4 % ( 7471.5 ? 1283.8 MBq ; n = 39 ) . All batches were approved according to the specifications defined and tested in the quality control, reaching Radiochemical Purity levels greater than 99% and a Specific Activity of 39.7 ? 11.1 GBq / micromol , 10 minutes before the injection. All analytical methods were validated and met the requirements established by current regulations. Three consecutive batches were produced and approved by the quality control, so the process could be considered validated. The developed process was suitable for production of adequate doses of the radiopharmaceutical [11C]-(R)-PK11195 for clinical use at BraIns. The production of the radiopharmaceutical labeled with carbon-11 at the institute provides an additional tool for improving health services in the country and to improve the life quality of the patients. / A medicina nuclear possibilita, dentre outras coisas, a visualiza??o, caracteriza??o e quantifica??o de processos bioqu?micos, metab?licos, biomarcadores e receptores, in vivo, atrav?s da imagem molecular. Dentre as modalidades de imagem funcional dispon?veis nesta ?rea est? a Tomografia por Emiss?o de P?sitrons (PET), que depende da administra??o de um radiof?rmaco no organismo estudado. Uma das doen?as pass?veis de estudo atrav?s do exame PET ? a esclerose m?ltipla (EM), atrav?s do acesso ? densidade de receptores TSPO (Prote?na Translocadora). O radiof?rmaco [11C]-(R)-PK11195 possui alta afinidade e seletividade por estes receptores, aumentados nas c?lulas ativadas da micr?glia nos casos de EM. Portanto, o objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar o processo produtivo (s?ntese, purifica??o e controle de qualidade) do radiof?rmaco [11C]-(R)-PK11195 no Centro de Produ??o de Radiof?rmacos do Instituto do C?rebro do RS (InsCer), possibilitando a realiza??o de exames PET para o estudo da EM. O radiois?topo foi produzido no C?clotron PETrace 16 MeV (GE Healthcare) na forma de [11C]CO2 atrav?s da rea??o nuclear 14N(p,?)11C, por meio do bombardeamento com pr?tons do alvo gasoso contento N2 e 0,5 % de O2. A produ??o foi realizada no equipamento TRACERlab FX-C pro (GE Healthcare) atendendo ?s exig?ncias de Boas Pr?ticas de Fabrica??o (BPF). O controle de qualidade do radiof?rmaco foi realizado no Laborat?rio de Controle de Qualidade do InsCer e o produto acabado foi submetido ?s an?lises de Identidade e Pureza Radionucl?dica, Pureza Radioqu?mica, Atividade Espec?fica, Solventes Residuais, pH, Esterilidade, Integridade da Membrana Filtrante e Teor de Endotoxinas. A s?ntese foi realizada atrav?s da metila??o do precursor (R)-[N-desmetil]PK11195 utilizando o [11C]CH3I (iodeto de metila marcado com carbono-11) sob as condi??es ?timas definidas: 400 ?L de dimetilsulf?xido (DMSO), aproximadamente 1 mg de precursor, aproximadamente 10 mg de hidr?xido de pot?ssio (KOH), a 40 ?C durante 1 minuto. A mistura de rea??o foi posteriormente neutralizada com ?cido clor?drico 1 mol.L-1 e dilu?da com fase m?vel (acetonitrila 76 % e ?gua Milli-Q 24 %). A mistura dilu?da foi injetada em sistema CLAE semi-preparativo para purifica??o. Extra??o de fase s?lida (atrav?s de cartuchos SepPak C18 ? Waters) foi utilizada para remo??o do solvente. A elui??o e formula??o do produto foi realizada com 0,7 mL de etanol e 6,3 mL de solu??o salina 0,9 % (est?ril e livre de pirog?nios). A esteriliza??o foi realizada atrav?s de filtra??o em membrana de poro de 0,22 ?m e, assim como o envase, ocorreu em fluxo laminar. As etapas do processo foram otimizadas e adequadas aos equipamentos e estrutura dos laborat?rios. O rendimento radioqu?mico do processo em rela??o ? atividade de [11C]CH3I de partida foi de 15,5?2,4 % (7471,5?1283,8 MBq; n=39). Todos os lotes produzidos foram aprovados quanto ?s especifica??es definidas e testadas no controle de qualidade, atingindo Pureza Radioqu?mica maior que 99 % e uma Atividade Espec?fica de 39,7?11,1 GBq/?mol, 10 minutos antes da inje??o. Todas as metodologias anal?ticas foram validadas e atenderam os crit?rios estabelecidos pela norma vigente. Tr?s lotes consecutivos foram produzidos e aprovados no controle de qualidade e o processo p?de ser considerado validado. O processo desenvolvido se mostrou adequado para produ??o do radiof?rmaco [11C]-(R)-PK11195 em doses suficientes para realiza??o de exames em pacientes no InsCer. A produ??o do radiof?rmaco marcado com carbono-11 no instituto disponibiliza mais uma ferramenta para melhoria dos servi?os de sa?de no pa?s e para melhoria da qualidade de vida dos pacientes.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2016-08-03T18:19:52Z No. of bitstreams: 1 DIS_GUSTAVO_BELLANI_MIGOTT_COMPLETO.pdf: 6201853 bytes, checksum: 70237f84b98539735536877e1ffbc4e7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-03T18:19:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DIS_GUSTAVO_BELLANI_MIGOTT_COMPLETO.pdf: 6201853 bytes, checksum: 70237f84b98539735536877e1ffbc4e7 (MD5) Previous issue date: 2016-02-29 / Tuberculosis is an infectious disease responsible for about 1.3 million deaths annually worldwide. Despite the appearance of multi-resistant strains of Mycobacterium tuberculosis (Mtb), since the 80?s there is a gap in the development of new antimicrobials. With the advent of bioinformatics and computational molecular biophysics, became possible to test, from a established molecular target, numerous molecules, especially associated with the prediction of binding free energy. In the current dissertation, were selected 14 compounds with recognized activity against the enzyme 2-trans-enoil-ACP redutase (InhA, EC 1.3.1.9) of Mtb. These molecules were divided into three groups. Set 1: 5 compounds with distant values of binding free energy. Set 2: 9 compounds with close binding free energy values and similar molecular structures (derived from Genz 10850). Set 3: 14 ligands, corresponding to the sum of the set?s 1 and 2. Sampling obtained from molecular dynamics and 2 ns of simulations, in explicit solvent, allowed to estimate the free energy of bind associated with the methods MM/GBSA, MM/PBSA, (QM)MM/GBSA, LigScore, DrugScore, AutoDock and SQM. The ranking of the compounds were based in the correlation (R2) between the predicted and experimental values. Results showed similar values of R2 in all tested methods. More accurate methods, such as SQM and (QM)/MM/GBSA, not obtained better correlations in comparison with simplified methods, as LigScore and DrugScore. In general, Set 1 obtained a moderate correlation (R2 of 0.00-0.80). Set?s 2 and 3, showed weak correlation (R2 < 0.40). Despite the satisfactory results of Set 1, the tested methods presented limitations in the ranking of compounds with close values of experimental binding free energy and similar molecular structures, as Set 2. / A tuberculose ? uma doen?a infectocontagiosa respons?vel por cerca de 1,3 milh?o de mortes anualmente a n?vel mundial. Apesar do aparecimento de cepas multirresistentes de Mycobacterium tuberculosis (Mtb), desde a d?cada de 80 se observa uma lacuna no desenvolvimento de novos antimicrobianos. Com o advento da bioinform?tica e biof?sica molecular computacional, tornou-se poss?vel, a partir de um alvo molecular preestabelecido, testar in?meros candidatos a f?rmacos, com destaque para a predi??o da energia livre de liga??o. Nesta disserta??o, foram selecionados 14 compostos com conhecida atividade frente a enzima 2-trans-enoil-ACP redutase (InhA, EC 1.3.1.9) de Mtb. Estas mol?culas foram divididas em 3 grupos. Grupo 1: 5 compostos com valores esparsos de energia livre. Grupo 2: 9 compostos com valores similares de energia livre e derivadas do composto Genz-10850. Grupo 3: 14 compostos correspondendo ? uni?o dos Grupos 1 e 2. Amostragens por simula??es de din?mica molecular de 2 ns, em solvente expl?cito, permitiram estimar os valores da energia livre de liga??o destes compostos com os m?todos MM/GBSA, MM/PBSA, (QM)MM/GBSA, LigScore, DrugScore, AutoDock e SQM. O ranqueamento dos compostos foi baseado na correla??o (R2) entre valores experimentais e estimados de energia livre. Os resultados apontaram valores de R2 similares entre os m?todos testados. T?cnicas mais robustas, como SQM e (QM)MM/GBSA, n?o obtiveram resultados mais acurados em compara??o ?quelas mais simples, como LigScore e DrugScore. No geral, foram obtidos valores moderados de correla??o (R2 de 0,00-0,80) para o Grupo 1. Os Grupos 2 e 3 exibiram correla??es fracas (R2 <0,40). Apesar dos resultados satisfat?rios para o Grupo 1, os m?todos utilizados apresentaram limita??es e n?o foram capazes de predizer e ranquear corretamente compostos com valores pr?ximos de energia livre e estruturas moleculares similares, como os do Grupo 2.

Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-08-25T16:00:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_karen_silva_leal.pdf: 538927 bytes, checksum: 188167bf7d281218897286c3f36f6a7f (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-28T20:58:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_karen_silva_leal.pdf: 538927 bytes, checksum: 188167bf7d281218897286c3f36f6a7f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-28T20:58:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_karen_silva_leal.pdf: 538927 bytes, checksum: 188167bf7d281218897286c3f36f6a7f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-28T20:58:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertacao_karen_silva_leal.pdf: 538927 bytes, checksum: 188167bf7d281218897286c3f36f6a7f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O Mycobacterium bovis BCG é utilizado mundialmente como vacina contra tuberculose há mais de meio século, com altos níveis de segurança. O BCG possui características que o tornam um promissor vetor para a produção de vacinas recombinantes multivalentes. Modificações genéticas podem aprimorar as propriedades imunogênicas e adjuvantes do BCG. Uma dessas modificações permite que o BCG escape do endossoma de células apresentadoras de antígenos. Desta maneira, os imunógenos de BCG acessam vias de apresentação cruzada de antígenos, ampliando a sua imunogenicidade. Este trabalho teve como objetivo desenvolver uma cepa de BCG ΔleuD expressando listeriolisina (Hly) de Listeria monocytogenes e avaliar seu potencial citotóxico na linhagem celular 5637 de câncer de bexiga. Para isso, o BCG ΔleuD foi transformado com o plasmídeo recombinante pUP410 contendo o gene hly. A cepa obtida demonstrou um nível de citotoxicidade similar à cepa BCG Pasteur parental, quando avaliada na linhagem celular de câncer de bexiga. Esta cepa necessita ser avaliada em outras linhagens de câncer para comprovar seu possível efeito citotóxico potencializado. / Mycobacterium bovis BCG has been used worldwide as a vaccine against tuberculosis for over fifty years with an outstanding safety record. BCG has features that make it a promising vector for production of recombinant multivalent vaccines. Genetic modification can enhance the adjuvant and immunogenic properties of BCG. One of these modifications would allow BCG to escape the endosome of antigen presenting cells. Therefore, theimmunogens of BCG can access antigens cross priming routes, increasing their immunogenicity. The aim of this work was to develop a strain of BCG ΔleuD expressing listeriolysin (Hly) of Listeria monocytogenes and evaluate its cytotoxic potential on cell line 5637 of bladder cancer. Thus, BCG ΔleuD was transformed with recombinant plasmid pUP410 containing the hly coding sequence. The recombinant BCG strain expressing listeriolysin showed a similar level of cytotoxicity when compared to the parental BCG Pasteur. This strain needs to be evaluated in other cancer lines in order to confirm its possible potentiated cytotoxic effect.

Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-08-25T16:39:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_marcelo_moreira_antunes.pdf: 492507 bytes, checksum: 41f643876649cd9c16f704b84a4e0fae (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-28T20:59:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_marcelo_moreira_antunes.pdf: 492507 bytes, checksum: 41f643876649cd9c16f704b84a4e0fae (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-28T20:59:16Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_marcelo_moreira_antunes.pdf: 492507 bytes, checksum: 41f643876649cd9c16f704b84a4e0fae (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-28T20:59:24Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertacao_marcelo_moreira_antunes.pdf: 492507 bytes, checksum: 41f643876649cd9c16f704b84a4e0fae (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-03-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da aplicação de fósforo orgânico (butafosfan) e vitamina B12 (cianocobalamina) sobre marcadores do metabolismo energético, mineral e inflamatório, produção de leite e sobre o índice de funcionalidade hepática de vacas leiteiras primíparas. Vinte e três vacas da raça Holandês foram aleatoriamente separadas em três grupos experimentais: Catosal (CAT, n = 8), que receberam total de 100 mL de Catosal®; Butafosfan (BUT, n = 8), que receberam total de 100 mL de solução aquosa de Butafosfan; e Controle (CTL, n = 7), que receberam total de 100 mL de solução fisiológica 0,9%. Todos os animais receberam os 100 mL divididos em 5 aplicações de 20 mL, em intervalos de 24 horas, por via subcutânea, iniciando logo após o parto. Os animais do grupo BUT apresentaram menores concentrações (P<0,05) de beta hidroxibutirato que os animais do grupo CTL. Os demais parâmetros metabólicos, o escore de condição corporal e a produção de leite não foram influenciados pelos tratamentos (P>0,05). O índice de funcionalidade hepática não foi influenciado pelos tratamentos (P>0,05). Após a separação dos animais em grupos de alto e baixo índice de função hepática, os animais do grupo com melhor função hepática (alto) apresentaram menores concentrações de beta hidroxibutirato (P<0,05) e tendência de menores concentrações de ácidos graxos não esterificados (P<0,10), enquanto que os animais com pior função hepática (baixo) apresentaram tendência de menores concentrações de albumina (P<0,10). Em conclusão, neste estudo o índice de funcionalidade hepática não foi influenciado pelos tratamentos. / The objective of this study was to evaluate the effects of organic phosphorus (butafosfan) and vitamin B12 (cyanocobalamin) on markers of energy, mineral and inflammatory metabolism, milk production and the liver functionality index of primiparous dairy cows. Twenty-three Holstein dairy cows were randomly allocated into three groups: Catosal (CAT, n = 8), receiving total of 100 mL of Catosal®; Butafosfan (BUT, n = 8) that received a total of 100 mL of aqueous Butafosfan; and Control (CTL, n = 7), receiving total of 100 mL of 0.9% saline. All the animals received the 100 mL divided in five 20 mL applications at 24-hour intervals, subcutaneously, beginning soon after birth. The animals in the group BUT showed lower beta-hydroxybutyrate concentrations (P<0.05) than animals in the CTL group. The other metabolic parameters, body condition score and milk production were not affected by treatments (P>0.05). The liver functionality index was not affected by treatments (P> 0.05). After the separation of the animals in groups of high and low index of liver function, the animals of the group with better liver function (high) had lower concentrations of beta-hydroxybutyrate (P<0.05) and a trend of lower concentrations of non-esterified fatty acids (P<0.10), whereas the animals with poor liver function (low) showed a tendency to have lower concentrations of albumin (P <0.10). In conclusion, in this study the liver functionality index was not affected by treatments.

Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-08-25T16:15:33Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_karine_laste_macagnan.pdf: 989328 bytes, checksum: a2029037b34e4625051db4296d4fad83 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-28T20:59:34Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_karine_laste_macagnan.pdf: 989328 bytes, checksum: a2029037b34e4625051db4296d4fad83 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-28T20:59:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_karine_laste_macagnan.pdf: 989328 bytes, checksum: a2029037b34e4625051db4296d4fad83 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-28T20:59:48Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertacao_karine_laste_macagnan.pdf: 989328 bytes, checksum: a2029037b34e4625051db4296d4fad83 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2014-12-04 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul - FAPERGS / O poli(3-hidroxibutirato) [P(3HB)] é o biopolímero mais estudado e caracterizado dentre a família dos polihidroxialcanoatos (PHAs), termoplásticos que têm como principais características a rápida biodegradabilidade e a biocompatibilidade. O processo de recuperação do bioplástico consiste em uma etapa importante no processo de produção. O desenvolvimento de metodologias mais seguras, econômicas e ambientalmente corretas, e que permitam um alto rendimento desse biopolímero, torna-se necessário para uma produção de P(3HB) economicamente e ecologicamente atrativa. Portanto, o objetivo do trabalho foi otimizar a metodologia clássica de recuperação de poli(3-hidroxibutirato) utilizando clorofórmio como solvente. O bioprocesso foi realizado em duas etapas, utilizando linhagem de Ralstonia solanacearum. O inoculo foi produzido em Erlenmeyers aletados de 500 mL, contendo 160 mL de meio YM e 40 mL de suspensão bacteriana, mantidos em incubador agitador orbital por 24 h, 150 rpm e 28 °C. A segunda etapa, produção de P(3HB), foi realizada utilizando Erlenmeyers aletados de 500 mL, contendo 160 mL de meio F4 e 20 % de inóculo, mantidos em 28 °C, 200 rpm e 72 h em incubador agitador orbital. Após a fermentação, as células foram separadas por centrifugação a 10.000 x g, lavadas com solução salina 0,89 % e secas a 56 °C. O acúmulo de P(3HB) na célula foi quantificado por cromatografia gasosa. A metodologia de extração foi otimizada em relação aos parâmetros: tempo de extração (2 h a 15 min), separação da biomassa/solução extrativa (papel filtro ou funil de separação), estado de célula (seca ou fresca) e proporção de solvente (10:1, 20:1 e 40:1 v/m). Por evaporação da solução extrativa foram obtidos filmes poliméricos. Os filmes recuperados foram analisados física e quimicamente por Espectroscopia de Infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR), Calorimetria Diferencial de Varredura (DSC), Análise Termogravimétrica (TGA) e Cromatografia de Permeação em Gel (GPC). O acúmulo de P(3HB) foi de 51,15 %. Os maiores rendimentos de filme foram obtidos após 30 min de aquecimento, utilizando funil de decantação para separar a solução extrativa da biomassa, célula seca, e proporção de solvente 40:1 v/m, alcançando-se recuperação de 98 % do polímero acumulado. A análise dos filmes através de FTIR resultou em bandas características de P(3HB). Os filmes oriundos de células secas tiveram temperaturas inicial e final de degradação e grau de cristalinidade superiores aos filmes de célula fresca. Todavia, os últimos apresentaram massa molar maior do que os primeiros. A metodologia clássica de extração química de poli(3-hidroxibutirato) por clorofórmio com aquecimento pode ser otimizada, resultando em redução de 75 % do tempo de aquecimento e separação da biomassa/solução extrativa mais rápida e econômica. Porém, não foi possível substituir a utilização de massa celular seca por fresca nem reduzir a proporção inicial de solvente de 40:1 (v/m). / Poly (3-hydroxybutyrate) [P(3HB)] is the most important biopolymer from the polyhydroalcanoates (PHAs) families, and they are thermoplastics with rapid biodegradability and biocompatibility. The recovery process of bioplastics is an important stage in the production process. Development of safe, economic and environmentally friendly methodologies, that result in high yield biopolymer, is necessary for the attractive P(3HB) production. Therefore, the objective was to optimize the classical methodology for poly (3-hydroxybutyrate) recovery using chloroform as solvent. The bioprocess was performed in two phases, with Ralstonia solanacearum strain. In the first phase, inoculum production, was performed in Erlenmeyer 500 mL flasks, containing 160 mL medium YM and 40 mL bacterial suspension. The flasks were incubated in shaker for 24 h, 150 rpm and 28 °C. The second phase, P(3HB) production, was performed using Erlenmeyer 500 mL flask, containing 160 mL medium F4 and 20 % (v/v) inoculum, maintained in 28 °C, 200 rpm and 72 h. After fermentation cells were separated by centrifugation at 10,000 x g, washed with saline (0,89 % w/v) and dried at 56 °C. P(3HB), accumulation was quantified by gas chromatography. The extraction methodology was optimized according to: extraction time (2 h - 15 min), extractive solution/biomass separation (paper filter or separation funnel), state of cell (dry or fresh), and solvent ratio (10:1, 20:1 and 40:1 v/m). Polymeric films were obtained by evaporation from extractive solutions and they were analysed by Fourier Transform Infrared (FTIR), Differential Scanning Calorimetry (DSC), Thermogravimetric Analysis (TGA) and Gel Permeation Chromatography (GPC). The P(3HB) accumulation was 51,15 %. Highest yields of film were obtained after 30 min heating, by funnel for extractive solution recovery, dry cell and solvent ratio 40:1 v/m; and highest recovery was 98 % of cumulated polymer in the cell. Characteristic bands of P(3HB) were obtained to produced films by FTIR analysis. Films from dried cells showed initial and final degradation temperature and crystallinity degree higher than and films these from fresh cell, however, they showed higher molar weight than the first ones. The classical chemical extraction of P(3HB) by chloroform with heating can be optimized, resulting in a 75 % reduction as well heating time extraction solution most fastest and economical. However, wasn’t possible replace the dry cell mass use by fresh cell mass or reduce the initial solvent proportion [40:1 (v/m)].

Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-08-29T11:52:09Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_thais_larre_oliveira.pdf: 616408 bytes, checksum: 404ac55ee19b90246334aac10658a361 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-29T19:49:36Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_thais_larre_oliveira.pdf: 616408 bytes, checksum: 404ac55ee19b90246334aac10658a361 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-29T19:49:43Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_thais_larre_oliveira.pdf: 616408 bytes, checksum: 404ac55ee19b90246334aac10658a361 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T19:49:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_thais_larre_oliveira.pdf: 616408 bytes, checksum: 404ac55ee19b90246334aac10658a361 (MD5) Previous issue date: 2014-08-07 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / A leptospirose é uma doença infecciosa emergente causada por espiroquetas patogênicas do gênero Leptospira, com complicações humana e veterinária. Essa doença é transmitida através do contato direto com um animal reservatório ou com o ambiente contaminado com a urina destes animais. O desenvolvimento de vacinas seguras e multivalentes contra leptospirose, que substituam as bacterinas existentes, permanece um desafio. Bacterinas são reatogênicas e conferem imunidade sorovar-específica e de curta duração. Esforços para o desenvolvimento de vacinas recombinantes tem focado em proteínas de membrana externa (OMPs). A proteína de membrana externa OmpL37 é conservada entre diferentes sorovares de Leptospira e atua na adesão aos tecidos do hospedeiro. Neste estudo, nós relatamos pela primeira vez, a avaliação do potencial imunoprotetor de OmpL37 como antígeno vacinal em hamsters, sob diferentes estratégias: vacina de subunidade, vacina de DNA e prime-boost. A caracterização da resposta imune através de ELISA indireto e qRT-PCR demonstrou que os maiores níveis de IgG foram estimulados pela vacina de subunidade, a qual também induziu resposta inflamatória. A vacina de DNA falhou em induzir imunidade humoral, porém também estimulou TNF-α. Apesar da resposta induzida, nenhuma formulação protegeu significativamente os animais contra a doença. / Leptospirosis is an emerging infectious disease caused by pathogenic spirochetes of Leptospira genus, of human and veterinary concern. This infectious disease is transmitted through direct contact with an animal reservoir or an environmental contaminated with their urine. The development of safe and multivalent vaccines against leptospirosis, which replace existing bacterins, remains a challenge. Bacterins are reactogenic and afford serovar specific and short-term immunity. Efforts to develop recombinant vaccines against leptospirosis have focused on outer membrane proteins (OMPs). The outer membrane protein OmpL37 is conserved among different Leptospira serovars and plays a role in adherence to host tissues. In this study we report for the first time, the evaluation of OmpL37 immunoprotective potential as a vaccine antigen in hamsters, under different strategies: subunit vaccine, DNA vaccine and prime-boost. The characterization of the immune response by indirect ELISA and qRT-PCR showed that higher levels of IgG were stimulated by the vaccine subunit, which also induced an inflammatory response. The DNA vaccine failed to induce humoral immunity, but also stimulated TNF-α. Despite the induced response, no formulation significantly protected the animals against the disease.

Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-08-29T13:03:02Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_karina_colonetti.pdf: 1293824 bytes, checksum: 7b2f2dd5717e841df6224f67290648ff (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-29T19:50:07Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_karina_colonetti.pdf: 1293824 bytes, checksum: 7b2f2dd5717e841df6224f67290648ff (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-29T19:50:15Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_karina_colonetti.pdf: 1293824 bytes, checksum: 7b2f2dd5717e841df6224f67290648ff (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-29T19:50:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_karina_colonetti.pdf: 1293824 bytes, checksum: 7b2f2dd5717e841df6224f67290648ff (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / A leptospirose humana e animal é uma doença de ocorrência mundial. Várias tentativas tem sido realizadas visando o desenvolvimento de novas abordagens para a prevenção, diagnóstico e tratamento da doença.... / The human and animal leptospirosis diseases are both worldwide spread......