Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2017-11-07T11:43:17Z No. of bitstreams: 1 2011 - Luciana de Lima Bezerra.pdf: 823571 bytes, checksum: aeff9177e7ee978c9b6138f66f82aacc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-11-07T11:43:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011 - Luciana de Lima Bezerra.pdf: 823571 bytes, checksum: aeff9177e7ee978c9b6138f66f82aacc (MD5) Previous issue date: 2011-02-10 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior, CAPES, Brasil. / This study aimed to evaluate the influence of babesiosis in embryo recovery rates, early pregnancy and embryonic loss. The project was carried out in a Central Commercial Embryo Transfer, located in the city of Itaguai, and two farms in the county of Serop?dica-RJ, using animals from the same breed (Mangalarga Marchador). The 13 donors and 40 recipients used in this experiment were positive for Theileria equi confirmed by nested-PCR method . Two embryo collections were performed in donor mares in two consecutive estrous cycles (GID), in sequence these same animals were treated with imidocarb dipropionate (1.2 mg / kg IM.) in order to conduct two more embryo collections in two estrous cycles (GIId). The embryo recipients were divided into two groups of 20 animals each, where one was the control group (IRG), and the other group was treated (GIIr) with 1.2 mg / kg IM imidocarb dipropionate, with the aim of evaluating pregnancy rate at 15, 30, 45 and 60 days. The embryo donors mares had normal erythrocyte before and after treatment with imidocarb dipropionate. ConcerningWBC, the embryo donors showed a decrease in the count of total leukocytes and neutrophils after treatment and a slight increase of lymphocytes and monocytes after treatment. The embryo recipients showed normal erythrocyte and leukocyte counts before and after the treatment with imidocarb dipropionate. After 52 embryo collections performed, embryo recovery rate was 53.84% (14/26) and 65.38% (17/26) ( p> 0,05) for GID and GIId respectively. The pregnancy rate was 70% (14/20) ( p> 0,05) at 15, 30, 45 and 60 days in the Gir and the GIIr was 85% (17/20) ( p> 0,05) at 15 days, 80% (16/20) ( p> 0,05) at 30 , 45 and 60 days. Treatment with imidocarb dipropionate did not improve significantly the reproductive efficiency in an ET program. / Este estudo teve por objetivo avaliar a influ?ncia da babesiose nas taxas de recupera??o embrion?ria, gesta??o e perda embrion?ria precoce. O projeto foi realizado em uma Central Comercial de Transfer?ncia de Embri?o, situado no Munic?pio de Itagua?, e em dois haras no munic?pio de Serop?dica- RJ. Foram utilizadas 13 doadoras e 40 receptoras de embri?o da ra?a Mangalarga Marchador, positivas para Theileria equi atrav?s do m?todo de nested-PCR. Nas ?guas doadoras foram realizados duas coletas de embri?es em dois ciclo estrais consecutivos (GId), em sequ?ncia, esses mesmos animais foram tratados com dipropionato de imidocarb (1,2 mg/kg IM.) para realiza??o de mais duas coletas de embri?es em dois ciclos estrais (GIId). As receptoras de embri?o foram divididas em dois grupos de 20 animais cada, onde um grupo foi o controle (GIr) e, o outro grupo, foi tratado (GIIr) com 1,2 mg/ Kg IM de dipropionato de imidocarb, com intuito de avaliar a taxa de gesta??o aos 15, 30, 45 e 60 dias. As ?guas doadoras apresentaram eritrograma normal antes e ap?s o tratamento com dipropionato de imidocarb, e em rela??o ao leucograma, apresentaram diminui??o na contagem de leuc?citos e neutr?filos totais e discreto aumento de linf?citos e mon?citos somente ap?s o tratamento. As receptoras apresentaram eritrograma e leucograma normal antes e ap?s o tratamento com dipropionato de imidocarb. Ap?s a realiza??o de 52 coletas de embri?o, a taxa de recupera??o embrion?ria foi 53,84% (14/26) e 65,38% (17/26) (p> 0,05) para GId e GIId respectivamente. A taxa de gesta??o foi de 70% (14/20) (p> 0,05) aos 15, 30, 45 e 60 dias no grupo GIr e para o GIIr foi 85% (17/20) (p> 0,05) aos 15 dias, 80% (16/20) (p>0,05) aos 30, 45 e 60 dias. O tratamento com dipropionato de imidocarb na forma como foi realizado n?o promoveu melhora significativa na efici?ncia reprodutiva em um programa de TE.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2015-05-25T18:19:42Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_DeteccaoPotenciaisCorticais.pdf: 95024201 bytes, checksum: e561c4ba3fbac99bfb2a9c5a135b2131 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2015-05-26T16:32:55Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_DeteccaoPotenciaisCorticais.pdf: 95024201 bytes, checksum: e561c4ba3fbac99bfb2a9c5a135b2131 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-26T16:32:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_DeteccaoPotenciaisCorticais.pdf: 95024201 bytes, checksum: e561c4ba3fbac99bfb2a9c5a135b2131 (MD5) Previous issue date: 2015-03 / O reconhecimento da intenção do condutor a partir de sinais de eletroencefalografia (EEG) pode ser útil no desenvolvimento de interfaces cérebro computador (BCI) para serem usadas em sinergia com veículos inteligentes. Isso pode ser benéfico para melhorar a qualidade de interação entre o motorista e o carro, por exemplo, fornecendo uma resposta do carro inteligente alinhada com a intenção do motorista. Neste estudo, considera-se a antecipação como sendo o estado cognitivo que leva a ações especificas durante a condução de um automóvel. Portanto, propomos investigar a presença de padrões antecipatórios em sinais EEG durante a condução de veículos para determinar duas ações especifícas (1) virar à esquerda e (2) virar à direita, alguns milissegundos antes que tais ações aconteçam. Um protocolo experimental foi proposto para gravar sinais EEG de 5 indivíduos enquanto eles operam um simulador de realidade virtual não invasiva - que foi projetado para tal experimento - que simula a condução de um carro virtual. O protocolo experimental é uma variante do paradigma da variação negativa contingente (CNV) com condições Go e No-go no sistema de condução de realidade virtual. Os resultados apresentados neste estudo indicam a presença de padrões antecipatórios em potenciais corticais lentos observados no domínio do tempo (medias dos sinais EEG) e da frequência (Power Spectra e coerência de fase). Isso abre um leque de possibilidades no desenvolvimento de sistemas BCI - baseados em sinais antecipatórios - que conectem o motorista ao veiculo inteligente favorecendo uma tomada de decisão que analise as intenções dos condutores podendo eventualmente evitar acidentes durante a condução. / The recognition of the driver’s intention from electroencephalographic signals (EEG) may be useful in the development of brain computer interface (BCI) to be used in synergy with intelligent vehicles. This can be beneficial to improve the quality of interaction between the driver and the car, for example, providing a response from the smart car aligned with the intention of the driver. In this study, the anticipation is considered as the cognitive state that leads to specific actions while driving a car. Therefore, we propose to investigate the presence of anticipatory patterns in EEG signals while driving vehicles to determine two specific actions (1) left and (2) turn right, a few milliseconds before such actions take place. An experimental protocol was proposed to record EEG signals of 5 individuals as they operate a virtual reality simulator non-invasive - it was designed for this experiment - which simulates driving a virtual car. The experimental protocol is a variant of the paradigm of contingent negative variation (CNV) with Go and Nogo conditions in virtual reality training system. The results of this study indicate the presence of anticipatory patterns observed in slow cortical potentials in the time domain (medium EEG signal) and the frequency (Power Spectra and phase coherence). This opens a range of possibilities in the development of BCI systems - based on anticipatory signals - that connect the driver to the intelligent vehicle favoring a decision-making to assess the intentions of drivers may eventually prevent accidents while driving.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-26T13:42:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoCombinacaoPreparacoes.pdf: 1912383 bytes, checksum: c587e8688360de0620b5c0fa43389759 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-27T13:29:42Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoCombinacaoPreparacoes.pdf: 1912383 bytes, checksum: c587e8688360de0620b5c0fa43389759 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T13:29:42Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_EstudoCombinacaoPreparacoes.pdf: 1912383 bytes, checksum: c587e8688360de0620b5c0fa43389759 (MD5) Previous issue date: 2016-03-23 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O óleo dos frutos do açaizeiro (Euterpe oleracea) possui um perfil lipídico benéfico para a saúde com um alto teor de ácidos graxos mono e poli-insaturados, além de substâncias antioxidantes, o que propicia sua valorização na indústria. A extração aquosa de óleos vegetais com o auxílio de enzimas vem sendo amplamente utilizada devido aos benefícios frente aos processos tradicionais. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi identificar a melhor combinação de preparações enzimáticas que permitisse maximizar o rendimento de extração aquosa do óleo de frutos de açaizeiro a partir da polpa. A polpa de açaí foi obtida a partir de frutos coletados em Abaetetuba na safra de 2015. Quatro preparações enzimáticas comerciais (Novozymes) foram utilizadas: Celluclast 1,5L (celulase); Viscozyme L (endo 1,3(4) β-glucanase, xilanase, celulase e hemicelulase); Ultrazym AFP (pectino liase, celulase e poligalacturonase); e Shearzyme 500L (endo 1,4-xilanase). Os ensaios de extração do óleo de açaí foram realizados através de um processo desenvolvido neste trabalho com os seguintes parâmetros: granulometria média da polpa de açaí de 0,75 cm; matéria-seca global da mistura aquosa da polpa de 15%; concentração enzimática individual de 1% (w:w) em base da polpa; agitação orbital constante de 100 rpm e manual vigorosa a cada 30 minutos; tempo e temperatura de incubação de 4 horas e 50ºC, respectivamente. As preparações enzimáticas foram testadas individualmente (1x1) em quadruplicata, ou combinadas (2x2; 3x3 e 4x4) em triplicata, totalizando 89 ensaios. O controle negativo apresentou um rendimento médio de extração de 34,91±11,81%, sendo o mais baixo de todos os ensaios. Os ensaios realizados com as preparações enzimáticas isoladas permitiram um incremento do rendimento de extração em até 36,66% em relação ao controle negativo, confirmando o papel importante das enzimas no processo de extração aquosa. Os ensaios realizados com as preparações enzimáticas combinadas 3x3 e 4x4 aumentaram o rendimento de extração em até 99,05% em relação ao controle negativo, demostrando a importância de utilizar combinações de preparações enzimáticas. Entre os diferentes ensaios realizados, a combinação de preparações enzimáticas que teve destaque foi Celluclast 1,5 L, Viscozyme L e Ultrazym AFP por facilitar a recuperação do óleo com um desvio padrão reduzido (±3,01%). Além disso, o rendimento de extração com o uso desta combinação de três preparações enzimáticas é estatisticamente igual ao rendimento de extração usando as quatro preparações enzimáticas, o que se torna interessante para a indústria, pois há redução de custo no processo. / The oil of the açai palm tree (Euterpe oleracea) fruits has a beneficial lipid profile for health with a high content of mono and polyunsaturated fatty acids, besides antioxidant substances, which provides its appreciation on the industry. The aqueous extraction of vegetable oils supported by enzymes has been widely used because of its benefits compared to the traditional processes. In this context, this work aims to identify the best combination of enzymatic preparations, which would maximize the aqueous extraction yield of the oil of the açai palm tree fruits from the pulp. The açai pulp was obtained from fruits collected in Abaetetuba during the 2015 crop. Four commercial enzymatic preparations (Novozymes) were used: Celluclast 1,5L (cellulase); Viscozyme L (endo 1,3(4) β-glucanase, xylanase, cellulase and hemicellulase); Ultrazym AFP (pectin lyase, cellulase and polygalacturonase); and Shearzyme 500L (endo 1,4-xylanase). The tests of açai oil extraction were performed by a process developed in this work with the following parameters: mean granulometry of the açai pulp of 0,75 cm; global dry matter of the aqueous mixtures of the pulp of 15%; individual enzymatic concentration of 1% (w:w) on pulp basis; constant orbital agitation of 100 rpm and vigorous agitation by hand every 30 minutes; incubation time and temperature of 4 hours and 50°C, respectively. The enzymatic preparations were tested individually (1x1) in quadruplicate, or combined (2x2; 3x3 and 4x4) in triplicate, totaling 89 tests. The negative control presented a mean yield of extraction of 34,91±11,81%, the lowest of all the tests. The tests performed with the isolated enzymatic preparations have enabled an increase of the extraction yield up to 36,66% compared to the negative control, confirming the important role of the enzymes in the aqueous extraction process. The tests performed with the enzymatic preparations combined 3x3 and 4x4 have increased the extraction yield up to 99,05% compared to the negative control, demonstrating the importance of using the combinations of enzymatic preparations. Among the different tests performed, the enzymatic preparations that stood out are Celluclast 1,5 L, Viscozyme L and Ultrazym AFP by facilitating the oil recovery with a reduce standard deviation (±3,01%). Furthermore, the extraction yield using this combination of three enzymatic preparations is statistically equal to the extraction yield using the four enzymatic preparations, which becomes interesting to the industry due to the cost reduction in the process.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-26T13:59:31Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseMorfologicaMolecular.pdf: 1631378 bytes, checksum: 5757c5c8705000ab31e5fe11f2a6a2d0 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-27T13:33:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseMorfologicaMolecular.pdf: 1631378 bytes, checksum: 5757c5c8705000ab31e5fe11f2a6a2d0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T13:33:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_AnaliseMorfologicaMolecular.pdf: 1631378 bytes, checksum: 5757c5c8705000ab31e5fe11f2a6a2d0 (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A espécie Lepidosiren paradoxa pertence à ordem Dipnoi, juntamente com mais dois gêneros, sendo considerados os peixes pulmonados verdadeiros. Os machos adultos de L. paradoxa diferenciam-se das fêmeas através da presença de filamentos nas nadadeiras pélvicas. Estes filamentos assemelham-se àqueles encontrados em brânquias de peixes e de salamandras neotênicas. Estes filamentos desenvolvem-se e tornam-se vascularizados durante o período de reprodução. Neste trabalho, propomos testar a hipótese de que os filamentos pélvicos de L. paradoxa compartilham características morfológicas e moleculares com filamentos brânquiais. Para tanto, realizamos análise morfológica e molecular dos filamentos das nadadeiras pélvicas entre as estações de estiagem e chuvosa. A análise morfológica ocorreu através de coloração de hematoxilina e eosina (HE) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). Por fim, foi feita a quantificação de expressão gênica de marcadores enriquecidos em brânquias de peixes, através de PCR em Tempo Real (RT-PCR), utilizando a nadadeira peitoral como referência. O comprimento dos filamentos da estação chuvosa e de estiagem apresentaram os valores de média e desvio padrão de, 4,31 mm±0,186 e 1,63 mm±0,104, respectivamente. Nas imagens de MEV foram observadas algumas células com microvilosidades e/ou microciliadas e algumas células menores. Nas análises de HE os filamentos apresentaram uniformidade no seu epitélio formada com 4 camadas de células, sendo preenchido por tecido conjuntivo e por fim tornam-se mais vascularizados na estação chuvosa. Na analise molecular de RT-PCR os marcadores selecionados não apresentaram variação quando comparados com a nadadeira peitoral e entre as estações. Em conclusão, apesar de existirem semelhanças morfológicas entre filamentos pélvicos de L. paradoxa e filamentos brânquiais de peixes e anfíbios, os dados moleculares aqui obtidos não suportam a hipótese de que estes filamentos realizem trocas gasosas. / The Lepidosiren paradoxa species belongs to Dipnoi order, along with two genre and are considered true lungfishes. Adult males of L. paradoxa differ from females by the presence of filaments in the pelvic fin. These filaments resemble those found in gills of fish and neotenic salamanders. These filaments are grow and become vascularized during the reproduction period. In this work we tested the hypothesis that the pelvic filament of L. paradoxa share morphological and molecular characteristics with gill filaments. Thus, we performed morphological and molecular analyses of the filaments of the pelvic fins between the dry and rainy seasons. Morphological analysis was perfomed through hematoxylin and eosin (HE) and scanning electron microscopy (SEM). Finally, we quantified gene expression of gill markers by RT-PCR using pectoral fin as reference. The mean length and standard deviation of the filaments during rainy and dry season were 4,31mm of ± 0.186 and 1,63mm ± 0.104, respectively. In the SEM images, we observed with a few cell microvilli and/or microplicae and some smaller cells. In the HE analyzes we found that the filaments have uniform epithelium formed with four layers of cells being filled by connective tissue and finally become more vascularized the rainy season. Molecular analysis through RT-PCR did not show any change when compared to the pectoral fin and between the stations. In conclusion, despite morphological and molecular similarities between gill filaments and pelvic fin filaments, our findings do not support a role for L. paradoxa pelvic filaments in gas exchange.

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-01-26T14:01:14Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PotencialProducaoAntimicrobianos.pdf: 1176650 bytes, checksum: 183b0682fd4e9a13c6f00ba2602ab401 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-01-27T13:34:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PotencialProducaoAntimicrobianos.pdf: 1176650 bytes, checksum: 183b0682fd4e9a13c6f00ba2602ab401 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-27T13:34:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PotencialProducaoAntimicrobianos.pdf: 1176650 bytes, checksum: 183b0682fd4e9a13c6f00ba2602ab401 (MD5) Previous issue date: 2015-08-17 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas / O açaí é o fruto de uma palmeira amplamente distribuída na região amazônica e possui uma alta carga microbiana que favorece o processo de fermentação do fruto. Desconhecem-se estudos específicos que investiguem a produção de substâncias antimicrobianas de interesse biotecnológico a partir de micro-organismos presentes no fruto açaí, o que pode resultar no aumento do valor agregado ao fruto. Desde que a segurança alimentar se tornou cada vez mais uma preocupação internacional, a aplicação de bacteriocinas, que visam patógenos alimentares sem efeitos adversos tóxicos, tem recebido grande atenção. O objetivo deste trabalho é isolar as bactérias do açaí, identificar a atividade antimicrobiana das bactérias isoladas, e caracterizar os extratos destas bactérias quanto à estabilidade e ao espectro de ação. Os frutos selecionados foram coletados na Ilha do Combú e em Abaetetuba, no estado do Pará, Brasil. Estes seguiram para assepsia e despolpamento, e as diluições foram inoculadas em ágar MRS e isoladas para análise. O antagonismo in vitro foi realizado com as técnicas de spot-on-the lawn e de difusão em poços contra três bactérias reveladoras: Corinebacterium sp, Listeria monocytogenes e Bacillus cereus. Estes extratos foram caracterizados de acordo com estabilidade térmica (121°C/15 minutos), sensibilidade à enzima tripsina e neutralização do pH. Das trinta e nove bactérias isoladas, foi possível observar atividade antagonista em dezenove delas. Destas, foi possível observar que doze apresentaram atividade antagonista extracelular. Quatro extratos apresentaram sensibilidade à tripsina, indicando que estas podem ser bacteriocinas. Os extratos neutralizados não apresentaram nenhuma atividade, o que indica uma melhor atividade dos extratos em pH ácido. A maioria dos extratos apresentou atividade depois de autoclavagem, o que pode ser um indicativo de que os extratos possuem bacteriocinas que pertencem às classes I e II. Este trabalho mostra que bactérias isoladas de açaí possuem potencial para a produção de substâncias antimicrobianas. / Açaí is the fruit of a palm tree widely distributed in the Amazon region and has a high microbial load that favors the fruit fermentation process. It is unknown specific studies to investigate the production of antimicrobial substances of biotechnological interest from microorganisms present in acai fruit, which can result in increased value to the fruit. Since food safety has become an increasingly international concern the application of bacteriocins that target food pathogens without adverse toxic effects, have received great attention. The objective of this work is to isolate bacteria from acai, identify the antimicrobial activity of the isolated bacteria, and characterize the extracts of these bacteria as pH, temperature, stability and action spectrum. The selected fruits were collected in Combu Island and Abaetetuba, State of Para, Brazil. These followed for asepsis and pulp removal and dilutions were inoculated in MRS agar and isolated for analysis The antagonism in vitro was performed with the technique of spot-on-the lawn revealing against three bacteria: Corynebacterium sp, Listeria monocytogenes and Bacillus cereus; and with the well diffusion technique. These extracts were characterized for thermal stability (121 ° C / 15 minutes), enzyme sensitivity to trypsin and pH neutralization. Of the thirty-nine bacterial isolates, it was observed antagonistic activity in nineteen of them. Of thesecould be observed twelve showed extracellular antagonist activity. Four extracts showed sensitivity to trypsin, indicating that these may be bacteriocins. Neutralized extracts showed no activity, which indicates better activity at pH acid extracts. Most of the extracts showed activity after being autoclaved, which may be an indication that the extracts have bacteriocins in Classes I and II. This work shows that bacteria isolated from acai have potential for the production of antimicrobial substances.

Submitted by Nathalya Silva (nathyjf033@gmail.com) on 2017-04-07T17:30:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_BiodiversidadeBacterianasFermentação.pdf: 6853574 bytes, checksum: 5de6a4fbf13df35b52431b1ad2a200f7 (MD5) / Approved for entry into archive by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2017-04-10T12:02:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_BiodiversidadeBacterianasFermentação.pdf: 6853574 bytes, checksum: 5de6a4fbf13df35b52431b1ad2a200f7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-10T12:02:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Tese_BiodiversidadeBacterianasFermentação.pdf: 6853574 bytes, checksum: 5de6a4fbf13df35b52431b1ad2a200f7 (MD5) Previous issue date: 2015-06-22 / Frutos de açai (Euterpe oleracea) (FA) e uma gama de produtos derivados desse fruto são um exemplo de sucesso comercial de um produto regional genuinamente brasileiro no mercado global. Os FA sofrem fermentação espontânea durante o pós-colheita devido, principalmente, sua elevada carga microbiana e aos fatores intrínsecos e extrínsecos favoráveis. A biodiversidade da comunidade microbiana em FA e sua evolução em três origens geográficas e duas condições de fermentação foram estudadas. Métodos independente de cultivo baseados no gene 16S rRNA de quinze amostras revelaram que os filos Proteobacteria, Firmicutes, Actinobacteria, Bacteroidetes e Acidobacteria foram os mais abundantes. Ao nível do gênero, foram identificados a Massilia (taxon com mais de 50% das sequências e constante durante as 30h de fermentação), Pantoea (taxon com o maior aumento durante a fermentação), Naxibacter, Enterobacter, Klebsiella e Raoultella, formando a microbiota bacteriana dos FA. Atributos relacionados à promoção de crescimento vegetal (sideróforos) e outros compostos como, por exemplo, o poli-3-hidroxibutirato (PHB) e a violaceína podem promover a preponderância de Massilia em resposta a condições de estresse do fruto. Análises de beta diversidade demonstraram que os parâmetros de qualidade dos FA (pH, sólidos solúveis, acidez titulável e lípidos) e de análise elementar (C, N, H e razão C/N) não foram capazes de correlacionar padrões de grupos taxonômicos em FA. Este trabalho oferece novos conhecimentos e perspectivas sobre a composição da comunidade bacteriana nativa nos FA em função de sua fermentação espontânea durante o período do pós-colheita. / Açai (Euterpe oleracea) fruits (AF) and a wide variety of products derived from this fruit are an example of success of a local and typically Brazilian product on the global market. The AF suffer spontaneous fermentation during postharvest due mainly to its high microbial load and the favourable intrinsic and extrinsic parameters. The biodiversity of microbial community in AF and their evolution between three geographical origins and two fermentation conditions were examined. Culture-independent methods based on 16S rRNA from fifteen samples revealed that Proteobacteria, Firmicutes, Actinobacteria, Bacteroidetes and Acidobacteria were the most abundant phyla. At genus level, were identified Massilia (taxon with more than 50 % of sequences remaining constant during the 30 h of fermentation), Pantoea (taxon with the highest increase during fermentation), Naxibacter, Enterobacter, Raoultella and Klebsiella, forming the carposphere bacterial microbiota of AF. Attributes related to plant growth promotion (siderophores) and others compounds e.g. poly-3-hydroxybutyrate (PHB) and violacein in response to stress conditions could improve the Massilia preponderance. Beta diversity showed that quality parameters of AF (pH, soluble solids, titratable acididy and lipids) and elemental analysis (C, N, H and C/N ratio) were unable to establish microbial patterns in AF. This research offers new insights and perspectives of the indigenous bacterial community composition on AF as a function of spontaneous fermentation during postharvest.

A produção de compostos biologicamente ativos por micro-organismos marinhos tem atraído crescente interesse de biotecnólogos e microbiologistas nas últimas décadas. No presente trabalho 162 isolados de fungos filamentosos recuperados de amostras de água do mar e de dez diferentes macro-organismos marinhos foram avaliados quanto a produção de lipases pelo método de High Throughput Screening (HTS). Destes, 45 isolados tiveram a produção de lipases confirmada individualmente. A atividade lipolítica foi quantificada, e os resultados sugerem que fungos filamentosos oriundos de ambientes marinhos tem maior potencial para produção de lipases estáveis em pH alcalino. Entre estes, Fusarium sp. CBMAI 1227, Aspergillus parasiticus CBMAI 1228 e Trichoderma sp. CBMAI 1229 apresentaram atividade expressiva e de interesse biotecnológico em pH 8,0 (23,1, 12,7 e 12,2 U respectivamente). Os resultados deste trabalho demonstram o potencial dos fungos provenientes de ambiente marinho para aplicações biotecnológicas, e estimulam novos estudos envolvendo lipases. / The production of biologically active compounds by marine microorganisms has been drawing increasing interest of biotechnologists and microbiologists in the last decades. In the present work 162 filamentous fungi isolates recovered from water samples and ten different marine macroorganisms were evaluated for the production of lipases by the method of High Throughput Screening (HTS). Out of those, 45 had the lipase production individually confirmed. The lipolytic activity was quantified, and the results suggest that marine-derived filamentous fungi have a greater potential for the production of lipases stable under alkaline pH. Among these, Fusarium sp. CBMAI 1227, Aspergillus parasiticus CBMAI 1228 and Trichoderma sp. CBMAI 1229 showed expressive and biologically interesting activity in pH 8,0 (23,1, 12,7 and 12,2 U/min respectively). The results of the present work show the potential of marine-derived fungi in biotechnological applications, and stimulate new studies involving lipases.

A contaminação da água e do solo por hidrocarbonetos aromáticos tem aumentado ao longo dos anos, devido ao seu uso nos mais diversos segmentos industriais. Hidrocarbonetos, tais como tolueno, são descritos como extremamente poluentes, tóxicos e potencialmente mutagénicos e carcinogénicos para os seres humanos. Os hidrocarbonetos são compostos lipófilicos difíceis de serem eliminados, contudo, estes aromáticos podem ser removidos de ambientes contaminados por meio de biorremediação utilizando bactérias produtoras de surfactante. Biossurfatantes são surfactantes principalmente produzidos por microrganismos, as quais promovem a quebra das moléculas de hidrocarbonetos, através da formação de micelas, aumentando a sua mobilidade, a biodisponibilidade e sua exposição à bactérias favorecendo a biodegradação do hidrocarboneto. A produção deste tensoativo exige meios de fermentação e oxigênio para o metabolismo microbiano. Por tanto, aeração e agitação são variáveis operacionais importantes para garantir um coeficiente de transferência de massa de oxigénio eficaz (kLa). Para esta finalidade, o kLa foi determinado experimentalmente em diferentes meios de fermentação, especificamente meio salino básico, meio de baixa salinidade, meio Bushnell-Haas e água do mar, por diversas variáveis operacionais. Ensaios foram realizados em agitador rotativo para selecionar, dentre os diferentes tipos de bactérias, nomeadamente Bacillus subtilis, Bacillus licheniformis e Bacillus megatherium, o melhor produtor de biossurfactante na presença de tolueno, nos meios de fermentação descritos acima, formulados com diferentes salinidades. A presença de tolueno inibiu o crescimento de microrganismo deslocando seu metabolismo para a produção de biossurfactante. Assim, B. subtilis foi capaz de reduzir a tensão superficial (TS) em 29,49 ± 0,55 unidades, produzindo cerca de 3,52 ± 0,06 mg/L de biossurfactante. Ao elevar o processo para um fermentador de bancada, a quantidade de tolueno no meio de baixa salinidade foi reduzido drasticamente após 12 horas de crescimento (de 45 ml para 7,43 ml), quando B. subtilis foi utilizado, reduzindo o TS em 22,6 unidades (com concentração de biossurfactante de 3,02 mg/L). Os resultados obtidos mostraram que o B. subtilis pode ser considerado um microrganismo promissor para ser utilizado na biorremediação de locais contaminados por tolueno / Contamination of water and soil by aromatic hydrocarbons has been increasing along the years, due to its use in various industrial segments. Hydrocarbons, such as toluene, are described as extremely polluting, toxic, potentially carcinogenic and mutagenic to humans. Hydrocarbons are lipophilic compounds difficult to be disposed of; however, the aromatic ones can be removed from contaminated environments via bioremediation using surfactant-producing bacteria. Biosurfactants are surfactants produced mainly by microorganisms, which promote the breaking of hydrocarbons molecules, by means of the formation of micelles, increasing their mobility, bioavailability and exposure to bacteria favoring hydrocarbon biodegradation. This tensoactive production requires oxygen and fermentation media for the microorganism metabolism. Thus, aeration and agitation are important operating variables to ensure an effective oxygen mass transfer coefficient (kLa). To this purpose, such a response was experimentally determined in this study in different fermentation media, specifically basal saline medium, low saline medium, Bushnell-Haas medium and sea water, and correlated with the above operating variables. Rotary shaker essays were performed to select, among different bacteria, namely Bacillus subtilis, Bacillus megatherium and Bacillus licheniformis, the best biosurfactant producer in the presence of toluene, in fermentative broths described above, formulated with different salinities. The presence of toluene inhibited the growth of microorganism shifting the metabolism to the production of biosurfactant. Thus, B. subtilis was able to reduce the surface tension (ST) in 29.49 ± 0.55 units producing up to 3.52 ± 0.06 mg/L of biosurfactant. Scaling up the process to a bench fermentor, the quantity of toluene in the low salinity medium was reduced drastically after 12 h of growth (from 45 mL to 7.43 mL), when B. subtilis was used, reducing the ST in 22.6 units (biosurfactant concentration of 3.02 mg/L). The results obtained showed that B. subtilis can be considered a promising microorganism to be used for the bioremediation of sites contaminated by toluene.

Nisina é extensamente utilizada como conservante natural em alimentos por conter características antimicrobianas contra germinação de esporos e bactérias Gram-positivas; potencialmente utilizada para produtos odontológicos e farmacêuticos, e como um agente terapêutico. Este estudo teve por objetivo melhorar a produção da nisina em diferentes meios de cultivo incluindo o leite desnatado. Com a expressão de nisina relacionada às condições de crescimento do Lactococcus lactis subsp. lactis ATCC 11454, a interferência dos componentes dos meios de cultivo, os parâmetros de crescimento e o tempo de incubação foram estudados para a obtenção desta bacteriocina. O cultivo do L. lactis foi realizado (36h/100rpm/30 oC) em caldo M17 e MRS em sua composição básica (pH = 6-7) e também suplementado com sacarose (1,0-12,5 g.L-1); fosfato de potássio (0,13 g.L- 1), asparagina (0,5 g.L-1) e sacarose (0,24 g.L-1); e diluído 1:1 com leite desnatado. O leite desnatado foi também utilizado como meio de cultivo mantendo sua composição básica (9–10 % sólidos totais, pH = 6,5). Alíquotas do cultivo em caldo (OD660 = 0,7; 3,20 mg DCW/L ou 102 CFU/mL) de cada grupo de ensaio foram transferidas para um novo meio de cultivo e incubado (36h/100rpm/30 oC). A produção de nisina foi detectada através da difusão em ágar utilizando Lactobacillus sake ATCC 15521 (30 0C/24h) como microrganismo sensível. A atividade detectada foi expressa em AU (arbitrary units – unidades arbitrárias), correspondendo aos halos de inibição de crescimento de L. sake. As unidades arbitrárias foram convertidas para concentração de nisina padrão (Nisaplinâ contêm 25 mg nisina / g produto, correspondem a 106 AU). A detecção da atividade da nisina foi menor do que 0,1 AU.mL-1 em caldo M17e MRS, aumentando significantemente para 142527,94 AU.mL-1 em M17 ou MRS diluído com leite desnatado (1:1). A atividade da nisina detectada foi altamente influenciada pela incorporação de leite desnatado em ambos o caldo, MRS e M17, com a máxima quantidade expressa em 36 horas de incubação. Os resultados mostram que o leite desnatado com meio de cultivo desenvolve ambiente propício e ideal para a produção de nisina, pois reduz os custos e aumenta a produção, por se tratar de um produto de fácil acesso e trivial. / Nisin is a bacteriocin produced by Lactococcus lactis that inhibits the germination and growth of Gram-positive bacteria. As Nisin expression is related to the growth conditions of Lactococcus lactis subsp. lactis, the effects of growth parameters, media components and incubation time, were studied to optimize the expression of Nisin. L. lactis ATCC 11454 was grown (36h/100rpm/30oC) in both M17 and MRS basic broth media (pH = 6-7) supplemented with sucrose (1.0-12.5 g L-1); potassium phosphate (0.13 g L-1), asparagine (0.5 g L-1) and sucrose (0.24 g L-1); and diluted 1:1 with liquid non-fat milk. Liquid non-fat milk, undiluted, was also used as another basic medium (9–10 % total solids, pH = 6.5). Aliquots of cultured broth (OD660 = 0.7; 3.20 mg DCW/L or 102 CFU/ml) from each group were transferred into fresh broth and incubated further (36h/100/rpm30oC). Nisin production was assayed by agar diffusion using Lactobacillus sake ATCC 15521 (24h/300C) as the sensitive organism. Comparing diameters of growth inhibition of L. sake from wells of Nisin of known concentration (“standard Nisin"; Nisaplin, Sigma) to diameters of inhibition from defined volumes of L. lactis sp. lactis broth cultures, the amount of Nisin in broth cultures was measured as arbitrary units (AU ml-1) converted to Nisin mg/ml, with 25 mg of standard Nisin/g corresponding to 106 AU/g. The detection of Nisin activity was less than 0.1 AU.mL-1 in M17 or MRS broth, and increased to a maximum of 142527.94 AU.mL-1 in M17 or MRS diluted with liquid non-fat milk (1:1). The amount of Nisin expressed was strongly influenced by the incorporation of non-fat milk to both M17 and MRS broths (1:1), with the maximum amount expressed after 36 h of incubation. Nisin is widely used as a natural additive for preserving foods, pharmaceutical and dental products, and as a therapeutic agent. This study was performed to improve large scale Nisin production to meet the demand of its beneficial use in health-care products.

Contém anexos / Dissertação apresentada para obtenção do grau de Mestre em Engenharia do Ambiente (Ramo De Gestão e Tratamento de Resíduos Industriais), na Faculdade de Engenharia da Universidade do Porto, sob a orientação do Professor Paulo Monteiro