Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:12:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 213797.pdf: 598123 bytes, checksum: f46ae31532c19ffd0175779743125ce0 (MD5) / Os produtos de origem natural são utilizados como fonte de medicamentos para tratar enfermidades que acometem o ser humano desde tempos imemoriais. A terapêutica moderna provavelmente não teria se desenvolvido sem o suporte desses produtos. Os organismos vivos, vegetais, microrganismos, animais, são capazes de produzir, transformar e acumular uma série de substâncias não essenciais para o seu crescimento e metabolismo reprodutivo. Estes compostos são denominados de metabólitos secundários, sendo umas das maiores classes de produtos naturais. Com o aparecimento de novas doenças infecciosas e o aumento da resistência bacteriana, surge a necessidade de pesquisas direcionadas ao desenvolvimento de novos antimicrobianos. A Chromobacterium violaceum, é uma bactéria Gram-negativa, de vida livre, que popula solos e águas das regiões tropicais e sub-tropicais. Esta bactéria é responsável pela produção de uma diversidade de metabólitos secundários com grande potencial biotecnológico. Este trabalho teve como objetivo definir estratégias de cultivo, que promovessem o aumento na produção de violaceína e outros metabólitos secundários sintetizados por C. violaceum, bem como avaliar a atividade antibiótica dos principais pigmentos. Sendo assim, estudou a produção de violaceína e pigmentos relacionados, em meios sólidos e líquidos com diferentes fontes de carbono. Foram avaliadas as produções de massa celulares secas, bem como a produção dos pigmentos. Os maiores rendimentos foram em meio LB sólido com glicerol 1%. Os pigmentos foram extraídos em Soxhlet, utilizou-se éter etílico, clorofórmio e metanol como solventes. No extrato etéreo observou-se a predominância de desoxiviolaceína e um pigmento não identificado. Nos extratos metanólicos, violaceína foi o pigmento majoritário. Os pigmentos isolados foram testados para atividade antibiótica contra três espécies bacterianas: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e Klebsiella pneumoniae. Os resultados mostraram que o extrato metanólico foi mais efetivo sobre P. aeruginosa, na concentração de 125 mg/mL. No entanto, o extrato metanólico nas concentrações analisadas, teve o efeito reduzido sobre as demais bactérias testadas. O extrato etéreo exibiu alta atividade sobre P. aeruginosa. Este extrato mostrou-se o mais efetivo dos extratos sobre as outras linhagens bacterianas testadas. Embora, não obtido o isolamento completo dos pigmentos produzidos por C. violaceum, o extrato etéreo contendo desoxiviolaceína e o pigmento não identificado, sem violaceína, exibiu uma atividade antibiótica promissora.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:40:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 213571.pdf: 3165886 bytes, checksum: 023dbff8900bec900d8d6b2eea6e15b6 (MD5) / O Trypanosoma vivax é um hemoparasita causador de tripanosomose em

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia / Made available in DSpace on 2013-07-15T23:50:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 230479.pdf: 574815 bytes, checksum: 8e1a9fa1c238bab38b3f1f87c7f0e283 (MD5) / Este trabalho identifica uma rede informacional de biotecnologia no estado de Santa Catarina, através da teoria da análise de redes sociais. A avaliação da mesma é centrada na identificação dos atores que nela desempenham papel relevante quanto à dinâmica do fluxo transacional. O grupo pesquisado (atores) constou de 18 instituições atuantes em biotecnologia no Estado. A pesquisa foi realizada através de questionários enviados por e-mail. Após recebimento dos questionários respondidos, os dados foram avaliados e codificados para a manipulação das matrizes no software e apresentação dos resultados. Com o uso do software UCINET foram elaborados mapas que permitem o reconhecimento de um conjunto de características estruturais. Considerando-se as possibilidades de avaliação das redes sociais, este trabalho se direcionou para a análise das características estruturais da rede. Foi realizado um levantamento de critérios estruturais significativos como o tamanho, a densidade, a distância geodésica e o diâmetro da rede estudada. Outra corrente de análise estudada foi a coesão da rede, onde identifica-se sub-grupos coesos, em que há grande grau de afinidade entre os atores, na linguagem da análise de rede social, identifica-se um clique. Outra medida determinada na rede foi a centralidade, que identifica o quanto um ator está acessível para os demais atores da rede. Esta medida indica a expansividade, o prestígio ou popularidade de um ator na rede. Os resultados detectam que apenas 14 dos 18 pesquisados, estão em rede, os quais estão fracamente conectados entre si. Destes, 1 ator é considerado primordial na rede. Assim, fica evidenciada a importância que terá no futuro o aprofundamento das parcerias entre as instituições públicas e privadas atuantes em biotecnologia no Estado. A percepção da rede pode sugerir também um aproveitamento maior do potencial existente, o qual deve ter como pressuposto que a interdisciplinariedade e a interinstitucionalidade são inerentes à biotecnologia e, o aprimoramento desta requer, portanto, a disponibilidade de interação e o desenvolvimento de projetos de cooperação.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T00:52:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 213393.pdf: 956920 bytes, checksum: a810d760f276b24af6058e83ddf60604 (MD5) / O receptor pregnano X (PXR) é um receptor nuclear envolvido na regulação transcricional de enzimas envolvidas no metabolismo de fármacos e também de proteínas transportadoras. Em mamíferos, vários xenobióticos induzem a expressão dos genes do citocromo P4503A (CYP3A) e de resistência a multidrogas 1 (MDR1) através da via de sinalização do receptor PXR. Pouca atenção tem sido dada aos estudos sobre a identificação da função biológica dos homólogos do PXR em espécies de não-mamíferos. O peixe-zebra tem se tornado amplamente utilizado e aceito como espécie modelo em estudos toxicológicos e farmacológicos no entendimento dos mecanismos de doenças humanas e na identificação de vias de sinalização conservadas. O objetivo desse estudo foi avaliar a expressão in vivo dos genes PXR, CYP3A e MDR1 no fígado de peixes-zebra tratados com o esteróide sintético pregnenolona 16a-carboninitrilo (PCN), o antimicótico sintético clotrimazol (CTZ) e o composto fármaco nifedipina (NIF). Peixes (n=15 por grupo) foram expostos à PCN, CTZ e NIF (20 mg.Kg-1) por 48 horas. Os fígados foram retirados e utilizados para a extração do RNA total (n=5 por grupo). A partir do cDNA obtido foi realizada a reação de PCR, utilizando diferentes iniciadores para a amplificação de PXR, CYP3A, MDR1 e ß-ACTINA. Fígados de peixes tratados com PCN mostraram uma indução de 1,9 vezes na indução do PXR seguida de 1,8 vezes na indução do CYP3A e de 1,6 vezes na indução do MDR1 nos níveis de mRNA. CTZ e NIF não afetaram estatisticamente a expressão dos genes PXR, CYP3A e MDR1. O padrão similar na expressão do mRNA dos genes PXR, CYP3A e MDR1 encontrado em peixes tratados com diferentes indutores de PXR sugere que a associação intrínseca entre esses três genes é conservada no peixe-zebra.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-12-05T21:42:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 247671.pdf: 27894847 bytes, checksum: a479548bb1f33c89d9a879a1747171c7 (MD5) Previous issue date: 2008 / A proteína G do virus rábico contém 505 aminoácidos em sua forma nativa, sendo exposta na superfície da partícula viral. Esta proteína é importante para a infectividade viral e imunidade protetora, sendo o antígeno que induz anticorpos neutralizantes contra o vírus. Diversos epítopos lineares, identificados por anticorpos monoclonais, foram identificados na região central da proteína. Nesse estudo, uma região compreendendo esses epítopos (resíduos 179-281, cepa ERA), denominada rGERA179-281, foi clonada e expressa em Escherichia coli cepa Rosetta, ligada a uma cauda de histidina na região N-terminal. A expressão resultou na formação de agregados insolúveis da proteína em corpos de inclusão. Os corpos de inclusão foram solubilizados com cloreto de guanidina 6M e a proteína foi purificada por cromatrografia de afinidade por íons metálicos imobilizados, em condições desnaturantes, sendo sua identidade confirmada por espectrometria de massa. A proteína purificada (13,8 kDa) foi reconhecida por anticorpos presentes na preparação comercial de imunoglobulina antirábica humana (HRIG), por meio de immunoblotting. Além disso, por um método de inibição de neutralização, a rGERA179-281 levou a uma redução mensurável na atividade neutralizante da HRIG. Para analisar a imunogenicidade da proteína, camundongos foram imunizados com a rGERA179-281. Observou-se, pela técnica de imunofluorescência indireta, que amostras de soro destes animais foram capazes de reconhecer o vírus rábico na forma nativa em células infectadas, embora não tenha sido observada uma indução de títulos neutralizantes acima de 0,5 UI/ml. Esses resultados, juntamente com o bom rendimento obtido, geram perspectivas de estudos posteriores mais detalhados das propriedades imunológicas da rGERA179-281, além da sua possível aplicação no desenvolvimento de novos métodos de diagnóstico. The G protein, which coats the outer surface of the rabies virus, contains 505 amino acids in its native form and it is important for virus infectivity and induction of the protective immunity. In this study, the region comprising linear epitopes (residues 179 to 281, ERA strain), named rGERA179-281, was cloned in frame with a hexahistidine tag coding sequence at its N-terminal end and overexpressed in Escherichia coli Rosetta strain. The expression yielded insoluble protein aggregates in the form of inclusion bodies. The inclusion bodies were solubilized with 6M guanidine HCl and the protein was purified by immobilized metal affinity chromatography under denaturing conditions. Mass spectrometry data confirmed the identity of the protein. The purified protein (13.8 kDa) showed significant reactivity with antibodies present in a therapeutic human rabies immune globulin (HRIG), as demonstrated by immunoblotting analysis. In addition, by an in vitro inhibition neutralization assay, rGERA179-281 led to a measurable reduction in the ability of HRIG to neutralize rabies virus. For analyzing the immunogenic property of the protein, mice were immunized with rGERA179-281. The antibodies elicited in the mouse serum samples recognized the native form of rabies virus in the virus-infected cells by immunofluorescence assay. However, significant titers of virus neutralizing antibodies were not detected. These results, along with the good yield obtained, encourage further studies on the more detailed immunological properties of rGERA179-281 and the production of anti-G monoclonal antibodies, which together, might be useful for the development of new diagnostic methods.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-12-05T21:55:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 262741.pdf: 1184454 bytes, checksum: 939b931b41d5ee40fadbf278847994a6 (MD5) Previous issue date: 2009 / A alta incidência de patógenos virais no lodo de esgoto é devido a sua adsorção preferencial aos sólidos do lodo. Dependendo do método de tratamento utilizado para a esterilização do esgoto doméstico, entre 50% e 99,9% dos vírus podem ser inativados. O lodo tratado pode ser útil para fins agrícolas porque pode melhorar as propriedades físicas do solo e aumentar o teor de matéria orgânica. Entretanto, as desvantagens de sua utilização são a possível transferência de microorganismos patogênicos para o solo. O potencial de partículas virais infecciosas remanescentes após o tratamento do lodo não pode ser descartado. Assim, métodos confiáveis são necessários para determinar o nível de contaminação viral em resíduos de lodo espalhados no solo para finalidades agrícolas. O objetivo deste estudo foi padronizar e avaliar uma metodologia simplificada para a detecção de vírus entéricos humanos em lodo de esgoto. Para a etapa de padronização, o lodo coletado foi esterilizado em autoclave e semeado com diluições seriadas de base 10 de Adenovírus (AdV5) ou Rotavírus (RV). As amostras foram posteriormente processadas por um método de adsorção-eluição-precipitação utilizando floculação orgânica e precipitação com polietileno glicol. Durante a etapa de eluição-precipitação, AdV5 foi utilizado como modelo e diferentes parâmetros foram avaliados, incluindo a quantidade de eluente viral e o período de incubação utilizado para a concentração viral. Dois diferentes métodos para a extração dos ácidos nucléicos foram utilizados: isotiocianato de guanidina-sílica e fenol-clorofórmio. O método padronizado (utilizando fenol-clorofórmio como método de extração dos ácidos nucléicos) foi o mais sensível e foi capaz de detectar até 6,3x10-1 (amostra semeada antes da eluição viral) e 1,26x10-1 (amostra semeada após o processo de clarificação) PFU de AdV5 e 2,4x10-1 (amostra semeada antes da eluição) e 2,16x101 (amostra semeada após a clarificação) FFU de RV. Este método foi posteriormente aplicado à detecção de AdV, vírus da Hepatite A (HAV), poliovírus (PV) e RV em amostras de lodo de esgoto coletadas durante 12 meses numa Estação de tratamento de esgoto de Florianópolis (ETE/CASAN/Florianópolis, Brasil). PCR, nested PCR, RT PCR, RT nested PCR e quantificação por PCR/RT-PCR em tempo real foram usados para a detecção e quantificação do genoma viral. PCR integrado a cultura celular (ICC-PCR) e a Imunofluorescência indireta (IFI) foram utilizados para os ensaios de viabilidade e quantificação viral. Das 12 amostras de campo analisadas tanto para a presença do genoma viral (PCR/nested PCR ou RT-PCR/RT nested PCR) e viabilidade viral, foram obtidos os seguintes resultados: AdV: 100% das amostras positivas para genoma e viáveis (todas cepas não entéricas como determinado pela análise PCR-RFLP); HAV: 25% positivas para genoma e 16,7% viáveis; PV: 66,7% positivas para genoma e 91,7% viáveis; RV: 33,3% positivas para genoma e 25% viáveis. A quantificação por PCR/RT-PCR em tempo real foi utilizada para quantificar cópias de genoma de AdV e HAV em amostras de campo positivas. AdV e HAV variaram de 4,6x104 a 1,2x106 e de 3,1x102 a 5,4x102 cópias de genoma/ml, respectivamente, em amostras de lodo de esgoto. IFI foi utilizada para quantificar as partículas de AdV nas amostras de campo e os resultados variaram de 70 a 300 FFU/ml. Os resultados obtidos no presente trabalho mostram que a contaminação viral é um problema mesmo em amostras de esgoto tratadas e que o tratamento usual aplicado para o tratamento do lodo de esgoto não é capaz de eliminar a contaminação viral.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2013-12-05T22:41:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317847.pdf: 108629463 bytes, checksum: 55e6d96e9fdf83641c9a74d98bb356b0 (MD5) Previous issue date: 2013 / A pesquisa racional de novos candidatos a antígenos vacinais ou imunodiagnóstico destinados ao controle da tuberculose bovina (bTB) requer o conhecimento básico da imunopatogênese da doença. No entanto, ainda há escassez de informações sobre os aspectos imunopatológicos da interação Mycobacterium bovis-hospedeiro durante a infecção natural de bovinos. Na análise de uma coorte de 349 bovinos positivos no teste tuberculínico (PPD), em 247 bovinos foi confirmada a infectação natural pelo M. bovis. Dos animais positivos para M. bovis, 92% (228/247) não apresentavam sinais sugestivos da doença, entretanto, apresentavam lesões de bTB graves e disseminadas. Além disso, a disseminação das lesões de bTB estava correlacionada positivamente com a gravidade da patologia da doença e carga bacteriana viável no tecido. Adicionalmente, o encapsulamento do granuloma foi correlacionado negativamente com o crescimento do M. bovis nos tecidos, bem como com a gravidade da patologia, sugerindo que o encapsulamento é um mecanismo dinâmico e pode ser eficaz para controlar a proliferação/disseminação micobacteriana intragranuloma durante a infecção natural. Além disso, a avaliação detalhada da resposta granulomatosa nos pulmões demonstrou que o número de células gigantes multinucleadas tipo Langhans correlaciona negativamente com a contagem micobacteriana. Em contraste, a população de neutrófilos na resposta granulomatosa tuberculosa foi associado com o aumento na proliferação do M. bovis intragranuloma. Os achados aqui apresentados sugerem que o encapsulamento e as células gigantes multinucleadas estão associados ao controle da infecção pelo M. bovis, enquanto que os neutrófilos podem servir como um biomarcador celular de proliferação bacteriana durante a infecção natural. Como prova de conceito de que a dinâmica celular incitada durante a infecção por M. bovis influencia o controle do crescimento micobacteriano, analisamos parâmetros imunopatológicos durante a co-infecção natural com o vírus da leucose enzoótica bovina (BLV), um patógeno que modula a resposta imune adaptativa. Bovinos coinfectados com M. bovis e BLV apresentaram maior carga micobacteriana intragranuloma e uma doença mais grave. Na análise histomorfológica das lesões granulomatosas, observamos uma diminuição significativa na população de linfócitos, seguido por um aumento no número de neutrófilos e menor deposição de tecido conjuntivo. Estes dados sugerem uma alteração no fluxo de células para o ambiente intragranuloma devido a defeitos linfocitários. Consistente com essa hipótese, observamos uma menor resposta de hipersensibilidade do tipo tardia (DTH) em animais com linfocitose persistente (LP-BLV+). Estas evidências indicam que a infecção pelo BLV está associada à perda da homeostase da resposta imune celular do hospedeiro e possivelmente ao aumento da suscetibilidade do hospedeiro a bTB. Em conjunto, nossos dados integram a resposta granulomatosa do hospedeiro com a carga infecciosa micobacteriana e revelam novos elementos para o entendimento da imunopatogênese da bTB que poderiam ser empregados na implementação de estratégias racionais de controle da tuberculose bovina.<br. / Abstract : Rational discovery of novel immunodiagnostic and vaccine candidateantigens to control bovine tuberculosis (bTB) requires knowledge ofdisease immunopathogenesis. However, there remains a paucity ofinformation on the Mycobacterium bovis-host immune interactionsduring the natural infection. Analysis of 247 naturally tuberculinic testpositive (PPD) M. bovis-infected cattle revealed that 92% of theseanimals were found to display no clinical signs, but presenteddisseminated bTB-lesions positively correlated with both pathologyseverity score and viable tissue bacterial loads. Additionally, granulomaencapsulation negatively correlated with M. bovis growth as well aspathology severity, suggesting that encapsulation is an effectivemechanism to control bacterial proliferation during natural infection.Moreover, multinucleated giant cell numbers were found to negativelycorrelate with bacterial counts in lung granulomas. In contrast,neutrophil numbers in the granuloma were associated with increased M.bovis proliferation. To better understand the role of the granulomatousresponse for the control of mycobacterial growth during infection by M.bovis, immunopathological parameters during co-infection with naturalbovine leukemia virus (BLV), a pathogen that modulates the adaptiveimmune response, were analyzed. Cattle co-infected with M. bovis andBLV had higher mycobacterial intragranuloma load and more severedisease. In the histomorphological analysis of granulomatous lesions,we observed a significant decrease in the lymphocyte populationfollowed by an increase in neutrophils and a reduction in connectivetissue deposition. These data suggest an alteration in the cell flow for theintragranuloma environment due to defective lymphocytes. Consistentwith this hypothesis, we observed a lower delayed-type hypersensitivity(DTH) response in animals with persistent lymphocytosis (LP-BLV+).This evidence indicate that BLV infection is associated with a loss ofhomeostasis of the host cellular immune response and possiblyincreased susceptibility of the host to bTB. Together, our data integratethe host granulomatous response with the mycobacterial infectious loadand reveal new elements for understanding the immunopathogenesis ofbTB which can be used in the implementation of rational strategies tocontrol bovine tuberculosis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-05T22:43:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 317582.pdf: 21016108 bytes, checksum: 05a8be42a7a75469c9f561ddf788658f (MD5) Previous issue date: 2013 / Estudos vêm sendo realizados visando correlacionar a composição química e a atividade biológica de diversos alimentos inseridos na dieta humana, entre eles o café e o cacau. O Brasil é o maior produtor e exportador mundial de café, caracterizando-se também como um grande consumidor (70% da população consomem esta bebida). Com relação ao cacau, o Brasil ocupa o 5º lugar como produtor e consumidor mundial, sendo o estado da Bahia seu maior produtor (95%). São os compostos biologicamente ativos produzidos por estas espécies, usualmente oriundos do metabolismo secundário, que têm despertado o interesse das indústrias alimentícia, química e farmacêutica. Entre estes compostos destacam-se os (poli)fenóis e os alcalóides, sendo que diversos ensaios in vitro e in vivo vêm comprovando uma ampla variedade de efeitos biológicos associados aqueles metabólitos, com destaque para suas atividades antioxidante, antiinflamatória e antitumoral. A busca por compostos biologicamente ativos benéficos à saúde e que estejam inseridos em biomassas presentes na dieta humana como o café e o cacau, por exemplo, é uma estratégia que corrobora na prevenção de certas enfermidades que acometem o homem, notadamente aquelas relacionadas ao sistema cardiovascular e de natureza neoplásica. No presente trabalho, observou-se a capacidade dos extratos de café in natura (cru) e cacau em pó no seqüestro dos íons superóxido e hidroxil, com maior efeito sobre este último radical livre. Também constatou-se a atividade pró-vasculogênica do extrato aquoso de café in natura, enquanto o cacau apresentou ação antivasculogênica em modelos de embriões de galinha. Sugere-se uma continuidade destes estudos para que estas biomassas possam ser utilizadas como alternativas na prevenção de determinados distúrbios da saúde humana.<br> / Abstract: Unlike other well studied crop species such as corn, wheat, and oat, for example, cassava (Manihot esculenta Crantz) has been a neglected specie over the last decades. Further, despite it has been out of the scope of public policies for research and technological development for a long time, many farmers still cultivate it, guaranting the production of cassava-derived foods and raw materials of high economic interest, i.e. flour and starch, respectively. However, some cassava mills in Santa Catarina state (southern Brazil), are still quite rustic, using equipments quite obsolete that coupled to a lack of articulation of public policies and low profitability have discouraged the production of flour. In this context EPAGRI, which has the largest cassava germplasm active bank (GAB) in Brazil has an ongoing joined-project with national and international partners to modify this framework, contributing to technological advances in the industry. This work takes part of that effort as a strategy to add value to M. esculenta derived products. In this context, the present study aimed at to characterize physicochemically the flours and starches of genotypes of cassava (GC) and investigate the effect of the genotype Torta da Penha on the lipidic and glycemic profiles in Wistar rats, as a parameter of its potential of biological activity. The starches and flours of GC studied were very similar chemically and showed suitable traits for their industrial application such as starch density, regularity in the size of the starch granules and resistant starch content, for example. Regarding the content of secondary metabolites, the studied flours are not rich sources of carotenoids, flavonoids, and phenolic compounds, but this information is important for genetic breeding purposes of that germplasm. Biological assays revealed that the flours efficiently reduced the retroperitoneal fat, hepatic concentration of triglycerides and in the levels of potentially atherogenic lipoprotein (non-HDL-cholesterol), total cholesterol and triglyceride in rat plasma, confirming the potential of cassava flour as a functional food. Taking together the results subsidize in any extension the process to obtain the functional and nutritional stamp afforded by Brazilian Cardiology Society, an approach of interest as one aims at to add value to cassava flour. Further clinical studies regarding the effect of cassava flour feeding on lipidic and glycemic profile are claimed as relevant, as well as a better physicochemical characterization of the resistant starch fraction in order to elucidate functional and nutritional profiles of the GC belonging to EPAGRI´s GAB.

Tese(doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2013 / Made available in DSpace on 2013-12-06T00:29:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 319288.pdf: 2480441 bytes, checksum: 0e6312c8dd815f386ee3ee05e8b31b8a (MD5) Previous issue date: 2013 / Embora conhecida como uma doença de alta endemicidade na região Amazônica do Brasil, a presença de Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) na parte subtropical do Sul do país tem recebido pouca atenção dos órgãos oficiais de saúde pública brasileira. Este estudo foi realizado para demonstrar que a LTA é uma zoonose emergente e endêmica no estado de Santa Catarina. Além de caracterizar o perfil epidemiológico, o presente estudo incorporou métodos moleculares para a identificação das espécies de Leishmania e a tipagem das cepas de Leishmania (Viannia) braziliensis do Estado. Para este estudo transversal retrospectivo, foram avaliados os dados de todos os casos de LTA em Santa Catarina notificados ao Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN), no período entre 2001 e 2009, e o perfil epidemiologico foi comparado entre as duas regiões do Estado. Os resultados mostram que a LTA é recentemente endêmica na região Nordeste do estado de Santa Catarina, com o perfil epidemiológico variado entre as distintas regiões do Estado. A LTA do Estado é predominantemente uma doença de transmissão urbana. A PCR-RFLP de kDNA identificou 98,8% das amostras como sendo L. (V.) braziliensis (248/251), e 1,2% somente como sendo L. (Leishmania) amazonensis. A análise de sequências multilocus (MLSA) de seis loci gênicos de 33 isolados de Santa Catarina e 53 isolados de onze outros estados brasileiros de L. (V.) braziliensis, agrupou as cepas em três principais complexos clonais (CC). A maioria (84,8%, 28/33) das cepas de Santa Catarina pertencem ao CC1, mostrando elevada homogeneidade genética. O mesmo foi observado na análise da estrutura populacional, que identificou três populações com a maioria das cepas de Santa Catarina pertencentes a uma população principal. A MLSA foi capaz de distinguir padrões epidemiológicos entre as cepas, demonstrando o potencial da técnica como ferramenta epidemiológica. Esses dados sugerem que a emergência da LTA causada pela L. (V.) braziliensis na população humana em Santa Catarina é um fenômeno recente que requer o desenvolvimento urgente de medidas de controle. <br> / Abstract: Although known to be highly endemic in the Amazon regions of Brazil, the presence of American tegumentary leishmaniasis (ATL) in the s subtropical southern part of the country has received little attention by public health officials. This study was conducted to demonstrate ATL is an emerging zoonosis in the state of Santa Catarina. In addition to characterizing the epidemiological profile, the present study incorporated molecular methods for the identification of Leishmania species and evaluation of the genetic variability of isolates from the state. For this retrospective cross-sectional study, data from all cases of ATL in Santa Catarina notified to the Information System for Notifiable Diseases (SINAN) during the period from 2001 to 2009 were evaluated, and the epidemiological profile was compared between the two main geographical regions of the state. Results demonstrated ATL has become endemic recently in northeastern region of the state of Santa Catarina, with the epidemiological profile varying significantly by region of the state. The LTA of the state is predominantly a disease of urban transmission. Species characterization by kDNA PCR-RFLP identified 98.8% of the samples as L. (V.) braziliensis (248/251) and only 1.2% as L. (Leishmania) amazonensis (3/251). Among the 33 Santa Catarina L. (V.) braziliensis isolates and 53 L. (V.) braziliensis isolates from eleven other states which were subjected to multilocus sequence analysis (MLSA) of six loci, the strains were found to cluster into three clonal complexes (CC). The majority (84.8%, 28/33) of the Santa Catarina strains belonged to CC1, representing high genetic homogeneity. The same was observed in the analysis of population structure, in which three populations were identified with most of the Santa Catarina strains belonging to one main population. MLSA was able to distinguish epidemiological patterns among the strains, demonstrating the potential of the technique as an epidemiological tool. Data presented here suggests the emergence of LTA caused by L. (V.) braziliensis in the human population of Santa Catarina is a recent phenomena that urgently requires the development of control methods.

Dissertação (mestrado) - - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2012. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:02:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 325878.pdf: 841448 bytes, checksum: c4f1c8f0719b25265813f0be9e07d96d (MD5) Previous issue date: 2012 / O crescimento desenfreado da urbanização e industrialização nas últimas décadas tem sido um dos principais responsáveis pela contaminação dos ecossistemas marinhos. As atividades antrópicas, industriais e agrícolas são responsáveis pelo consumo de mais de um terço da água doce acessível no mundo, e consequentemente por sua contaminação. Diversas substâncias potencialmente danosas são liberadas constantemente no ambiente, sejam elas de origem antropogênica ou natural. A mistura complexa de contaminantes presentes no ambiente acaba por causar efeitos interativos na biota. Dentre os contaminantes mais comuns, encontra-se o esgoto sanitário que é composto por uma variedade de substâncias em concentrações de difícil caracterização e que é considerado como a principal fonte de contaminantes de ambientes costeiros. Sabendo-se que os efeitos dos poluentes não podem ser avaliados por análises químicas, torna-se necessária a utilização de meios mais sensíveis e confiáveis para a avaliação ambiental. No capítulo I, peixes Poecilia vivipara foram exposto ao esgoto sanitário na concentração de 33% (v/v) em condições de laboratório para a identificação e análise de biomarcadores moleculares pela técnica de Hibridização Subtrativa Supressiva (SSH). Genes de biotransformação como GST, UDPGT e MET também foram testados por qPCR. Neste estudo foram encontrados 22 genes diferencialmente transcritos, sendo 10 induzidos e 12 reprimidos. Os resultados de qPCR confirmaram a indução de CYP1A, GST, UDPGT, e a repressão de C3, FIB, TF e DMRT1. No capítulo II os genes que obtiveram respostas no experimento de laboratório, foram testados em exposição de campo no Mangue de Ratones (local Referência) e no Mangue do Itacorubi, em dois locais considerados contaminados por esgoto sanitário, um a jusante e outro a montante da saída do mangue. As transcrições dos genes DMRT1, MET, GST e UDPGT foram induzidas no local contaminado situado a jusante, em relação ao grupo referência. CYP1A apresentou uma maior transcrição no local situado mais a montante do Mangue do Itacorubi e nenhum gene foi reprimido. Em ambos os estudos os genes que obtiveram respostas significativas, estão associados a funções biológicas como biotransformação, sistema imune e diferenciação sexual. Os resultados fornecem boas medidas que os caracterizam como possíveis e promissores biomarcadores de contaminação ambiental por esgoto sanitário.<br> / Abstract : The uncontrolled growth of urbanization and industrialization in recent decades has been a major contributor to the contamination of marine ecosystems. Human activities, industrial and agricultural are responsible for the consumption of more than a third of the accessible freshwater in the world, and consequently by their contamination. Several potentially harmful substances are released into the environment constantly, whether they are natural or anthropogenic origin. The complex mixture of contaminants in the environment ultimately causes interactive effects on biota. Among the most common contaminants, lies the sewage which is composed by a variety of substances and concentrations difficult to characterize and is regarded as the main source of contaminants in coastal areas. It is known that the effects of pollutants can not only be measured by chemical analysis, it becomes necessary to use more sensitive and reliable means for environmental assessment. In the Chapter I, fishes Poecilia vivipara were exposed to sanitary sewage in the concentration of 33% (v/v) in the laboratory for the identification and analysis of molecular biomarkers by using the technique Suppressive Subtractive Hybridization (SSH). Genes of Biotransformation such as GST, UDPGT and MET were also tested by qPCR. In this study were found 22 differentially transcribed genes, 10 were induced and 12 repressed. The qPCR results confirmed the induction of CYP1A, GST, UDPGT, and repression of C3, FIB, TF and DMRT1. In Chapter II the responsive genes in the laboratory experiments, were tested in field exposure in the Ratones Mangrove (Reference site) and in the Itacorubi Mangrove at two sites considered contaminated by sanitary sewage, one upstream and one downstream sites. Transcription of DMRT1, MET, GST and UDPGT were induced in the liver of fish kept at the downstream site. CYP1A transcription was induced in the fish from the upstream site and no gene was repressed. In both studies, the genes that had significant responses are associated with biological functions such as biotramsformation, immune system, and sexual differentiation. The associated results provide good measurements that characterize them as possible and promising biomarkers of environmental contamination by sanitary sewage in coastal region.