Resumo: A butirilcolinesterase (BChE; EC 3.1.1.8) é uma esterase sérica, sintetizada por células hepáticas e amplamente distribuída no organismo. Peptídeos ricos em poliprolina derivados da lamelipodina (Lpd) foram observados dirigindo a formação e fazendo parte da estrutura tetramérica da BChE. A Lpd é uma proteína que atua na formação de protrusões da membrana celular e, é codificada pelo gene RAPH1, localizado no mesmo sítio cromosssomico do loco CHE2 (2q33). A coincidente localização no cromossomo e a relação com o tetrâmero da BChE levou à hipótese do gene RAPH1 ser o loco CHE2. O presente trabalho estudou a variabilidade do gene RAPH1 em amostras de euro (N = 100) e afro-brasileiros (N = 66), buscando também encontrar a mutação responsável pelo fenótipo CHE2 C5+, avaliando em 34 indivíduos CHE2 C5+ e 92 CHE2 C5-, os SNPs encontrados encontrados no estudo da variabiliade do RAPH1. Nos exons estudados foram encontrados apenas 2SNPs (rs3813365 e rs2465520), ambos já descritos nos grupos etnicos estudados. A genotipagem de um tagSNPs selecionado (rs2246118, íntron 6) e os observados nos exons mostrou que apenas o rs3814365 apresentou frequência alélica diferente entre afro e euro-brasileiros. Quando as frequências dos SNPs nas populações de estudo foram comparadas com frequências européias e africanas (disponíveis no NCBI), os resultados indicaram, para os três SNPs, um gradiente de frequência entre as populações, que reflete, provavelmemente, as variantes alélicas presentes nas populações fundadoras. A avaliação da região codificadora do RAPH1entre diferentes espécies indicou um alto grau de homologia e conservação. A frequência dos três SNPs estudados foi avaliada entre os fenótipo CHE2 C5+ e CHE2 C5-. Foi observada associação apenas quando as combinações dos alelos em haplótipos foram avaliadas, sendo dois haplótipos observados associados ao fenótipo CHE2 C5+. Quando o fenótipo CHE2 C5+ foi separado em fenótipo fraco e forte, com relação à intensidade da banda C5, os mesmos haplótipos mostraram associação, um ao fenótipo forte e o outro ao fraco. A atividade da BChE também foi avaliada nesses fenótipos, e mostrou ser, em média, maior em CHE2 C5+ forte quando comparado com fraco e CHE2 C5-. Estes resultados corroboram a hipótese de que o gene RAPH1 seja o loco CHE2 e que a interação entre Lpd e BChE parece interferir na atividade enzimática apenas em CHE2 C5+ forte.

Orientadora : Profª Drª Lupe Furtado-Alle / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Genética. Defesa: Curitiba, 17/11/2016 / Inclui referências : f. 20-27 / Resumo: Demência ou Transtorno Neurocognitivo Maior, pode ser definido como uma síndrome caracterizada por declínio progressivo de uma ou mais funções cognitivas, de tal forma que possa interferir no desempenho social ou ocupacional diário do indivíduo. Um estágio pré demência denominado Comprometimento Cognitivo Leve não preenche os critérios para demência mas apresenta domínios cognitivos afetados não característicos do envelhecimento normal. A butirilcolinesterase (BChE), codificada pelo gene BCHE, é uma enzima que hidrolisa ésteres de colina, inclusive a acetilcolina. Dessa forma, variantes do gene BCHE, que podem afetar a atividade da BChE, são importantes na investigação de doenças com déficit colinérgico. O alelo e4 do gene APOE é considerado o maior fator de risco para a doença de Alzheimer (DA) esporádica e, considerando que 10-15% dos pacientes com Comprometimento Cognitivo Leve progridem para DA, torna-se importante a avaliação deste alelo em estados pré demência. O objetivo inicial desta tese foi avaliar a atividade da BChE, assim como as variantes BCHE K, BCHE -116A e APOE 4 em Demência com Corpos de Lewy, em Demência Frontotemporal e no Coprometimento Cognitivo Leve. Em virtude do reduzido número de pacientes com Demência Frontotemporal, estes foram excluídos das análises, sendo esta doença incluída no presente estudo por meio da publicação de uma revisão dos principais genes e proteínas associados a Demência Frontotemporal tau-positiva. Todos os pacientes e controles foram genotipados por ensaio de discriminação alélica Taq-Man e a atividade da BChE foi medida por espectrofotômetro de microplaca TECAN. Foi verificada uma atividade da BChE significativamente reduzida em pacientes com Demência com Corpos de Lewy quando comparados a Alzheimer e ao grupo Controle, independente das variantes K e -116A. Já para o Comprometimento Cognitivo Leve, verificamos uma atividade menor da BChE influenciada pela variante -116A em mulheres e uma frequência maior do alelo e4. Esses resultados reforçam a importância da Butirilcolinesterase em doenças que afetam a cognição, apontando um caminho para o uso da BChE e/ou suas variantes como marcadores de diagnóstico diferencial ou como marcadores prognósticos. Palavras-Chave: butirilcolinesterase, BCHE K, BCHE -116A, Comrometimento Cognitivo Leve, Demência com Corpos de Lewy. / Abstract: Dementia or Major Neurocognitive Disorder, can be defined as a syndrome characterized by progressive decline of one or more cognitive functions interfering with daily functioning. A pre-dementia stage called Mild Cognitive Impairment does not meet the criteria for dementia but has affected cognitive domains not characteristic of normal aging. Butyrylcholinesterase is an enzyme encoded by the BChE gene responsible for the hydrolysis of acetylcholine, thereby research of variants of this gene are important in diseases with cholinergic deficit. The APOE 4 alelle is considered the greatest risk factor for sporadic Alzheimer's disease (AD), considering that 10-15% of patients with mild cognitive impairment progress to AD, it is important to evaluation of this allele in states pre dementia. The aim of this study was to evaluate the Butyrylcholinesterase activity, as well as BCHE K, BCHE -116A and APOE4 variants in Dementia with Lewy Bodies, Frontotemporal dementia and Mild Cognitive Impairment. Because of small number of patients with Frontotemporal Dementia, these were excluded from the analysis, and this disease included in this study through the publication of a review of the mean genes and proteins associated with tau-positive frontotemporal dementia. All patients and controls were genotyped for allelic discrimination assay Taq-Man and the BChE activity was measured by spectrophotometer microplate TECAN. We found lower plasma BChE activity in patients with Dementia with Lewy Bodies compared to elderly controls and to Alzheimer's disease independent of the presence of K or -116A variants. For Mild Cognitive Impairment, there was less BChE activity influenced by variant -116A and a higher frequency APOE e4 allele, both in women with MCI. These results reinforce the importance of butyrylcholinesterase and its relation to diseases that affect cognition and instigates further study for possible use of BChE activity as a prognosis or differential marker. Keywords: Butyrylcholinesterase, BCHE K, -116A, Mild Cognitive Impairment, Dementia with Lewy Bodies.

Orientadora : Profª. Drª. Neiva Leite / Coorientador : Prof. Dr. Luciane Viater Tureck / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Educação Física. Defesa: Curitiba, 16/08/2017 / Inclui referências : f. 76-98 / Resumo: O comportamento sedentário acarreta no desenvolvimento de diversos fatores de risco cardiometabólicos, entre eles as dislipidemias e obesidade. Além disso, alterações na espessura médio intimal (EMI) da artéria carótida e a atividade aumentada da enzima butirilcolinesterase (BChE) também se relacionam aos riscos cardiovasculares, o que torna importante a avaliação destes parâmetros. Objetivo: Investigar a relação entre a aptidão cardiorrespiratória e os fatores de risco cardiometabólicos, bem como a atividade enzimática da butirilcolinesterase em adolescentes atletas e não atletas. Métodos: A amostra foi composta por 34 escolares eutróficos, de ambos os sexos, com idades entre 11 e 17 anos, provenientes de escola pública do Paraná. Os participantes foram divididos em dois grupos, conforme o histórico de prática de atividades físicas em: atletas (GA) com ?400 minutos/semana (n=20) e não atletas (GNA) com <300 minutos/semana (n=14). Todos foram avaliados quanto às medidas antropométricas, consumo máximo de oxigênio (VO2máx) em teste progressivo em esteira, composição corporal por Bioimpedância elétrica (BIA) e EMI por ultrassom. Foram analisadas as concentrações sanguíneas de glicose, insulina (Ins), perfil lipídico, atividade da BChE. Os grupos foram comparados com o Teste t de student para amostras independentes e aplicados os testes de correlação de Pearson e Spearman, além do teste de regressão múltipla, sendo considerado significativo p<0,05. Os grupos foram semelhantes em suas características gerais, contudo foram observadas maiores percentuais de gordura (%G), gordura em quilos (Gkg) e frequência cardíaca de repouso (FCrep), bem como menores valores no percentual de massa magra (%MM) e VO2max no GNA do que no GA, variáveis que são influenciadas pelo nível de treinamento. A EMI e as concentrações da BChE foram adequadas e semelhantes na comparação entre os dois grupos. As variáveis bioquímicas foram semelhantes entre os grupos, apenas o very low density lipoprotrein apresentou concentração média mais elevada no GNA (p<0,05). Em relação às frequências de dislipidemias, ambos os grupos apresentaram proporções elevadas de alterações no perfil lipídico, valores acima de 40% de escolares para aumento de colesterol e VLDL, além de alterações muito elevadas nos triglicerídeos (TG) com mais de 80% de frequência nos sujeitos. Na análise da classificação da aptidão cardiorrespiratória, o GNA apresentou menor proporção de aptidão boa e excelente do que o GA (Qui=14,55, p=0,0001). Quanto à classificação de adiposidade pelo percentual de gordura, não foi observada diferença entre os grupos quando divididos como excesso de peso ou adequados (Qui=0,30, p=0,5828), entretanto quando utilizado o ponto de corte para obesidade houve maior proporção no GNA (Qui= 4,37, p=0,03). No GA foram observadas correlações diretas e moderadas com índice de massa corporal e score z (r=-0,627; p=0,00; r=-0,469; p=0,03), Gkg (r=-0,496, p=0,02), e circunferência abdominal (r=-0,617; p=0,00), VLDL (r=-0,505; p=0,02), TG (r=-0,504; p=0,02) e Ins (r=0,470; p=0,03), enquanto que para o GNA não foi observada nenhuma correlação significativa. Esta pesquisa foi a primeira que analisou a aptidão cardiorrespiratória e a atividade enzimática da BChE em adolescentes eutróficos atletas e não atletas. Neste estudo, conclui-se que o comportamento sedentário em adolescentes eutróficos não revelou impacto negativo sobre os parâmetros bioquímicos, EMI e concentrações da BChE. Entretanto, os escolares não atletas apresentaram menor aptidão cardiorrespiratória e piores parâmetros da composição corporal, o que significa menor aptidão física, que pode, em médio prazo, desencadear o excesso de peso e fatores cardiometabólicos, que podem ocasionar prejuízos para a saúde em distintos momentos da vida. Palavras-chave: Adolescente. Atividade física. Perfil lipídico. Butirilcolinesterase. / Abstract: Sedentary behavior leads to the development of several cardiometabolic risk factors, including dyslipidemia and obesity. In addition, changes in intima-media thickness (IMT) of carotid artery and increased activity of butyrylcholinesterase enzyme (BChE) are also related to cardiovascular risks, which makes it important to evaluate these parameters. Objective: To investigate the relationship between cardiorespiratory fitness and cardiometabolic risk factors as well as the enzymatic activity of butyrylcholinesterase in athletes and non-athletes. Methods: The sample consisted of 34 eutrophic adolescents of both sexes, aged between 11 and 17 years old, students of a public school in Paraná. Participants were divided into two groups, according to their physical activities: Athletes (GA) with ?300 minutes / week (n = 20) and non-athletes (GNA) with <300 minutes / week (n = 14). All were evaluated for anthropometric measures, maximum oxygen intake (VO2max) in a treadmill progressive test, body composition by Electric Bioimpedance (BIA) and IMT. The blood concentrations of glucose, insulin (Ins), lipid profile, BChE activity. The groups were compared with the Student's t-test for independent samples and the Pearson and Spearman correlation tests were applied, in addition to the multiple regression test, being considered significant p <0.05. The groups were similar in their general characteristics, however, higher percentages of fat (% F), fat in kilograms (Fkg) and resting heart rate (HRR) were observed, as well as lower values in the percentage of lean mass (% LM) and VO2max in GNA than in GA, variables that are influenced by the level of training. The EMI and the concentrations of BChE were adequate and similar in the comparison between the two groups. The biochemical variables were similar between the groups, only the very low density lipoprotrein had the highest mean concentration in GNA (p <0.05). Regarding the frequencies of dyslipidemia, both groups presented proportions of 40% of students with alterations to cholesterol and VLDL, in addition to very high triglyceride (TG) changes with more than 80% frequency in subjects. In the analysis of the classification of cardiorespiratory fitness, GNA presented a lower proportion of good and excellent fitness than GA (Chi = 14.55, p = 0.0001). Regarding the classification of adiposity by fat percentage, no difference was observed between the groups when divided as overweight or adequate (Chi = 0.30, p = 0.5828), however, when the cutoff point for obesity was used, there was a higher proportion of GNA (Chi = 4.37, p = 0.03). In GA, direct and moderate correlations were observed with body mass index and z score (r = -0.627, p = 0.00, r = -0.469, p = 0.03), Fkg (r = -0.496, p = 0 (R = -0.504, p = 0.02), and waist circumference (WC) (r = -0.617, p = 0.00), VLDL (r = -0.505, p = 0.02), triglycerides And Ins (r = 0.470, p = 0.03), whereas for GNA no significant correlation was observed. This research was the first that analyzed the cardiorespiratory fitness and enzymatic activity of BChE in adolescents athletes and non-athletes. In this study, it was concluded that the sedentary behavior in eutrophic adolescents did not show negative impact on the biochemical parameters, EMI and concentrations of BChE. However, non-athlete schoolchildren presented lower cardiorespiratory fitness and worse body composition parameters, which means lower physical fitness, which in the medium term may trigger overweight and cardiometabolic factors. Such factors can cause health damage at different points in life. Key words: Adolescent, Physical exercise, Lipid Profile, Butyrylcholinesterase,

A descoberta de inibidores seletivos é extremamente importante para o desenvolvimento de novos fármacos que possam ser usados no tratamento de pacientes diagnosticados com a doença de Alzheimer (DA). Neste contexto, o desenvolvimento de métodos de triagem para a identificação de novos compostos biologicamente ativos se torna interessante. Butirilcolinesterase (BChE, EC 3.1.1.8) é uma serina hidroxilase que está classicamente associada à hidrólise do neurotransmissor acetilcolina (ACh) formando colina e ácido acético. Este trabalho descreve a imobilização covalente da BChE de soro humano nas paredes internas de capilares de sílica fundida utilizando o agente espaçador glutaraldeído, e sua aplicação na triagem de inibidores seletivos. O ICER-BChE resultante foi conectado a um sistema de cromatografia líquida de alta eficiência com monitoramento on line da atividade catalítica, envolvendo detecção UV. Após os estudos das melhores condições cromatográficas, variações de pH e vazão e a influência de solventes orgânicos na atividade enzimática o método foi validado com o uso de inibidores padrões. O maior valor obtido com o ICER-BChE no parâmetro cinético, constante de Michaelis KM = 33,6 ± 6,9 mM, comparado com a enzima em solução, KM = 0,12 ± 0,02 mM, evidencia o efeito da imobilização sobre a afinidade pelo substrato. No entanto, houve retenção da atividade catalítica e seletividade frente a inibidores padrão. O método foi aplicado na triagem de novos ligantes utilizando cinco coleções de diferentes classes de compostos, entre derivados cumarínicos, complexos metálicos com cobre (Cu), complexos metálicos com cobalto (Co) e zinco (Zn), glicosídeos, e derivados de fenilpropanóides e ácido barbitúrico. Desta triagem foram selecionados sete compostos promissores com os quais foram realizados os estudos sobre a potência mínima inibitória (IC50) e destes quatro foram escolhidos para estudos de mecanismos de ação utilizando o ICER-BChE. Dos complexos metálicos os melhores compostos foram o HPTBCu (IC50 = 8,74 ± 1,5 µM, Ki = 9,6 ± 0,5 M), o NarBCu (IC50 = 8,0 ± 1,4 µM, Ki = 2,0 ± 0,1 M) ambos com mecanismo competitivo o HesFCu (IC50 = 13,6 ± 2,9 µM), o NNINABCu (IC50 = 94,8 ± 16) e o NarFCu (IC50 = 81,7 ± 13). Dos derivados cumarínicos os compostos 17 (IC50 =109 ± 21 µM, Ki = 108 ± 10 M) e 19 (IC50 =128 ± 28 µM, Ki =36.0 ± 5.0 M) apresentaram mecanismo incompetitivo. Os resultados demonstraram que a abordagem proposta é útil na triagem on line de inibidores seletivos, pois fornece resultados rápidos, precisos e reprodutíveis. / The discovery of selective inhibitors is extremely important for the development of drugs that can be used in the treatment of patients diagnosed with the Alzheimer disease (AD). In this context, the development of screening methods for the identification of new, biologically active compounds is a challenging task. Butyrylcholinesterase (BChE, EC 3.1.1.8) is a serine hydroxylase that is classically associated with the hydrolysis of the neurotransmitter acetylcholine (ACh), which yields choline and acetic acid. This paper describes the development of capillary enzyme reactors (ICERs) containing BChE from the human serum, covalently immobilized onto silica fused capillaries, using glutaraldehyde as spacer, and its application in the screening of selective inhibitors. The resulting BChE-ICER was connected to a liquid chromatography system high efficiency where monitoring of activity was online involving UV detection. After studying the best chromatographic conditions, pH variations, flow-rate and the influence of organic solvents on enzyme activity method was validated using standard inhibitors. The higher value obtained with the BChE-ICER in kinetic parameter, constant Michaelis KM = 33.6 ± 6.9 mM, compared with the enzyme in solution, KM = 0.12 ± 0.02 mM, shows the effect of immobilized on the affinity substrate. However, there was retention of catalytic activity and selectivity towards standard inhibitors. The method was applied in the screening of new ligands using collections of five different compounds, among coumarin derivatives, metal complexes with copper (Cu) metal complexes with cobalt (Co) and zinc (Zn), glycosides, phenylpropanoids and derivatives, and barbituric acid. These screenings were selected seven promising compounds with which the studies were made on the minimum inhibitory potency (IC50) and these four were chosen for studies of mechanisms of action using the ICER-BChE. Of the compounds metal complexes best were HPTBCu (IC50 = 8,74 ± 1,5 µM, Ki = 9,6 ± 0,5 M), NarBCu (IC50 = 8,0 ± 1,4 µM, Ki = 2,0 ± 0,1 M) both competitive mechanism, the HesFCu (IC50 = 13.6 ± 2.9 µM), NNINABCu (IC50 = 94.8 ± 16 µM) and NarFCu (IC50 = 81.7 ± 13 µM). Of coumarin derivatives, 17 (IC50 =109 ± 21 µM, Ki = 108 ± 10 M) and 19 (IC50 =128 ± 28 µM, Ki =36.0 ± 5.0 M) showed mechanism uncompetitive. The results demonstrated that the proposed approach is useful in screening for selective inhibitors online because it provides quick results, accurate and reproducible.

Made available in DSpace on 2017-05-12T14:36:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EFEITO DA QUERCETINA OVARIECTOMIZADAS.pdf: 2103814 bytes, checksum: ae46af8ec18f6634ae18e23c19f6e393 (MD5) Previous issue date: 2015-12-07 / Tamoxifen was discovered in 1970 and classified as selective estrogen receptor modulator (SERM) being used as therapy in the treatment of breast cancer. Although benefits has been proven, side effects are intense, and are related to different mechanisms of toxic action, such as oxidative stress and changes in the glycolytic pathway that induce a hyperglycemia and liver damage. The administration of quercetin, a flavonoid with antioxidant potential, that has inhibitory effect on enzyme butyrylcholinesterase, an enzyme possibly associated with hepatotoxicity and hyperglycemia, has benefits on the adverse effects caused by tamoxifen. Thus, first to determine the effect of quercetin on the hyperglycemia caused by tamoxifen, ovariectomized rats were treated orally, with tamoxifen and quercetin; concluding that effects of quercetin are dependent on ratio quercetin/tamoxifen coadministered and the 4.5 ratio is more effective. After, trying to elucidate the mechanisms involved in changes in the glycolytic pathway, oxidative stress and liver damage perfusion was performed in rat liver, studying especially glycogenolysis and gluconeogenesis, using as an indicator of liver damage of butyrylcholinesterase activity and monitoring the oxidative stress. The results showed that quercetin has inhibitory effect on glucose production and enhances the effects generated by tamoxifen in gluconeogenesis, concluding that although quercetin is known for antioxidant activity, in certain concentrations (400 &#956;M) intensifies the damage initially caused by tamoxifen, this effect doesn't occur with lower concentrations of quercetin (200 &#956;M). Therefore, although quercetin has shown to be effective in reducing hyperglycemia caused by tamoxifen, the interaction of quercetin with tamoxifen should be viewed with caution since the effect of this interaction in carbohydrate metabolism is intense, can alter the intracellular redox environment, compromising its integrity and causing serious damage to liver tissue. / O tamoxifeno, descoberto em 1970 foi classificado como modulador seletivo de receptor de estrógeno (SERM) sendo utilizado no tramento e prevenção do câncer de mama e embora seja terapia de escolha no período pós-menopausa seus efeitos colaterais são intensos, e estão relacionados a diferentes mecanismos de ação tóxica, como o estresse oxidativo e alterações na via glicolítica que induzem a hiperglicemia e causam danos hepáticos. A coadministração de quercetina, um flavonoide com potencial antioxidante e que possui efeito inibitório na enzima butirilcolinesterase, enzima essa possivelmente associada a hepatotoxicidade e a hiperglicemia, traria benefícios diante dos efeitos adversos gerados pelo tamoxifeno. Sendo assim, primeiramente, para determinar o efeito da quercetina diante da hiperglicemia causada pelo tamoxifeno, ratas ovariectomizadas foram tratadas via oral com quercetina e tamoxifeno; concluindo que os efeitos da quercetina são dependentes da razão Quercetina/Tamoxifeno coadministrado, e na razão 4,5 a quercetina mostra-se altamentente eficaz. Após, buscando elucidar os mecanismos envolvidos nas alterações na via glicolítica, os danos hepáticos e o estresse oxidativo, foram realizados perfusão em fígado isolado de ratas, estudando em especial a glicogenólise e a gliconeogênese, utilizando como indicador dos danos hepáticos a atividade da butirilcolinesterase e monitorando o estresse oxidativo. Os resultados mostraram que a quercetina possui efeito inibitório (200 &#956;M) sobre a produção de glicose e intensifica os efeitos gerados pelo tamoxifeno na gliconeogênese, concluindo que embora a quercetina seja reconhecida pela sua atividade antioxidante, em determinadas concentrações (400 &#956;M) ela acentua os danos inicialmente causados pelo tamoxifeno, não ocorrendo esse efeito com concentrações mais baixas de quercetina (200 &#956;M). Sendo assim, embora a quercetina tenha se mostrado eficaz, reduzindo a hiperglicemia causada pelo tamoxifeno via oral, a interação da quercetina com tamoxifeno deve ser vista com cautela, pois os resultados mostram que o efeito dessa interação no metabolismo de carboidratos é intenso, podendo alterar o ambiente redox intracelular, comprometer a integridade celular e causar danos graves no tecido hepático.

Made available in DSpace on 2017-07-10T13:59:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 EFEITO DA QUERCETINA OVARIECTOMIZADAS.pdf: 2103814 bytes, checksum: ae46af8ec18f6634ae18e23c19f6e393 (MD5) Previous issue date: 2015-12-07 / Tamoxifen was discovered in 1970 and classified as selective estrogen receptor modulator (SERM) being used as therapy in the treatment of breast cancer. Although benefits has been proven, side effects are intense, and are related to different mechanisms of toxic action, such as oxidative stress and changes in the glycolytic pathway that induce a hyperglycemia and liver damage. The administration of quercetin, a flavonoid with antioxidant potential, that has inhibitory effect on enzyme butyrylcholinesterase, an enzyme possibly associated with hepatotoxicity and hyperglycemia, has benefits on the adverse effects caused by tamoxifen. Thus, first to determine the effect of quercetin on the hyperglycemia caused by tamoxifen, ovariectomized rats were treated orally, with tamoxifen and quercetin; concluding that effects of quercetin are dependent on ratio quercetin/tamoxifen coadministered and the 4.5 ratio is more effective. After, trying to elucidate the mechanisms involved in changes in the glycolytic pathway, oxidative stress and liver damage perfusion was performed in rat liver, studying especially glycogenolysis and gluconeogenesis, using as an indicator of liver damage of butyrylcholinesterase activity and monitoring the oxidative stress. The results showed that quercetin has inhibitory effect on glucose production and enhances the effects generated by tamoxifen in gluconeogenesis, concluding that although quercetin is known for antioxidant activity, in certain concentrations (400 μM) intensifies the damage initially caused by tamoxifen, this effect doesn't occur with lower concentrations of quercetin (200 μM). Therefore, although quercetin has shown to be effective in reducing hyperglycemia caused by tamoxifen, the interaction of quercetin with tamoxifen should be viewed with caution since the effect of this interaction in carbohydrate metabolism is intense, can alter the intracellular redox environment, compromising its integrity and causing serious damage to liver tissue. / O tamoxifeno, descoberto em 1970 foi classificado como modulador seletivo de receptor de estrógeno (SERM) sendo utilizado no tramento e prevenção do câncer de mama e embora seja terapia de escolha no período pós-menopausa seus efeitos colaterais são intensos, e estão relacionados a diferentes mecanismos de ação tóxica, como o estresse oxidativo e alterações na via glicolítica que induzem a hiperglicemia e causam danos hepáticos. A coadministração de quercetina, um flavonoide com potencial antioxidante e que possui efeito inibitório na enzima butirilcolinesterase, enzima essa possivelmente associada a hepatotoxicidade e a hiperglicemia, traria benefícios diante dos efeitos adversos gerados pelo tamoxifeno. Sendo assim, primeiramente, para determinar o efeito da quercetina diante da hiperglicemia causada pelo tamoxifeno, ratas ovariectomizadas foram tratadas via oral com quercetina e tamoxifeno; concluindo que os efeitos da quercetina são dependentes da razão Quercetina/Tamoxifeno coadministrado, e na razão 4,5 a quercetina mostra-se altamentente eficaz. Após, buscando elucidar os mecanismos envolvidos nas alterações na via glicolítica, os danos hepáticos e o estresse oxidativo, foram realizados perfusão em fígado isolado de ratas, estudando em especial a glicogenólise e a gliconeogênese, utilizando como indicador dos danos hepáticos a atividade da butirilcolinesterase e monitorando o estresse oxidativo. Os resultados mostraram que a quercetina possui efeito inibitório (200 μM) sobre a produção de glicose e intensifica os efeitos gerados pelo tamoxifeno na gliconeogênese, concluindo que embora a quercetina seja reconhecida pela sua atividade antioxidante, em determinadas concentrações (400 μM) ela acentua os danos inicialmente causados pelo tamoxifeno, não ocorrendo esse efeito com concentrações mais baixas de quercetina (200 μM). Sendo assim, embora a quercetina tenha se mostrado eficaz, reduzindo a hiperglicemia causada pelo tamoxifeno via oral, a interação da quercetina com tamoxifeno deve ser vista com cautela, pois os resultados mostram que o efeito dessa interação no metabolismo de carboidratos é intenso, podendo alterar o ambiente redox intracelular, comprometer a integridade celular e causar danos graves no tecido hepático.

A homocistinúria é uma desordem metabólica causada pela deficiência da enzima cistationina β-sintase, resultando no acúmulo tecidual de homocisteína e de metionina. Os pacientes afetados por essa doença apresentam principalmente retardo mental, isquemia cerebral, convulsões e aterosclerose. Entretanto, os mecanismos fisiopatológicos responsáveis por essas manifestações são pouco conhecidos. O sistema colinérgico apresenta papel importante na função cognitiva do qual as colinesterases, acetilcolinesterase e butirilcolinesterase, são constituintes ubíquos. Similarmente à acetilcolinesterase, a butirilcolinesterase hidrolisa a acetilcolina e está presente no soro, coração, endotélio vascular e no sistema nervoso. Estudos têm mostrado que as colinesterases estão inibidas no córtex cerebral de pacientes com a doença de Alzheimer. Adicionalmente, há evidências na literatura mostrando que as colinesterases são inibidas por radicais livres. A Na+,K+-ATPase é uma enzima fundamental responsável pela manutenção do gradiente iônico necessário para a excitabilidade neuronal e consome de 40 a 60% do ATP formado no cérebro. Recentes estudos têm demonstrado que essa enzima é inibida por radicais livres e também que sua atividade está diminuída na isquemia cerebral, epilepsia e em doenças neurodegenerativas como a doença de Alzheimer. Além disso, nosso grupo demonstrou que a homocisteína inibe a atividade da Na+,K+-ATPase cerebral. Considerando que: a) pouco se sabe sobre os mecanismos responsáveis pelas manifestações neurológicas que ocorrem na homocistinúria, b) a administração de homocisteína prejudica a memória, c) as colinesterases são importantes para as funções cognitivas, d) a atividade da Na+,K+-ATPase está diminuída na isquemia cerebral, e) a homocisteína inibe a atividade dessa enzima in vitro e f) as atividades da butirilcolinesterase e da Na+,K+-ATPase em tecidos periféricos podem ser consideradas marcadores de alterações que ocorram no sistema nervoso central, no presente estudo determinamos o efeito in vitro da homocisteína sobre as atividades da butirilcolinesterase e da Na+,K+-ATPase em soro e plaquetas de ratos, respectivamente. Também determinamos o efeito da administração aguda e crônica de homocisteína sobre a atividade da butirilcolinesterase sérica e a influência das vitaminas E e C sobre os efeitos inibitórios causados pela homocisteína. Os resultados mostraram que a homocisteína diminuiu significativamente a atividade da butirilcolinesterase em soro de ratos de 60 dias in vitro. A homocisteína inibiu essa enzima de forma competitiva com a acetilcolina como substrato. Também foi verificado que a homocisteína reduziu significativamente as atividades da butirilcolinesterase e da Na+,K+-ATPase em soro e plaquetas de ratos de 29 dias, respectivamente. Nossos resultados também mostraram que a administração aguda de homocisteína diminuiu significativamente a atividade da butirilcolinesterase em soro de ratos de 29 dias. Adicionalmente, verificou-se que o pré-tratamento com as vitaminas E e C não alterou per se a atividade da butirilcolinesterase, mas preveniu a redução da atividade dessa enzima causada pela administração aguda de homocisteína. Por fim, determinou-se que a administração crônica desse aminoácido diminuiu significativamente a atividade da butirilcolinesterase. Os resultados obtidos em nosso trabalho sugerem que a redução das atividades da butirilcolinesterase e da Na+,K+-ATPase pode estar associada à disfunção neurológica presente em pacientes homocistinúricos, uma vez que a determinação dessas enzimas em sistemas periféricos represente um marcador para a ação neurotóxica da homocisteína.

Todos os agrupamentos humanos que se organizam para o trabalho usam rios, lagos ou lagoas como depósitos para a decomposição de matéria indesejável. A contaminação do meio aquático por herbicidas e agrotóxicos derivados de práticas agrícolas se tornou, faz tempo, um problema de importância mundial. Precisamos de informações detalhadas sobre a bioquímica da intoxicação de peixes nativos para avaliarmos quais os efeitos de agrotóxicos sobre os processos bioquímicos que mantêm o ciclo de vida dos peixes em águas do Brasil. Organofosfatos, que são agrotóxicos de uso disseminado, podem interagir com as B-esterases butirilcolinesterase (EC 3.1.1.8) e carboxilesterase (EC 3.1.1.1) presentes no fígado e no plasma. Tanto a butirilcolinesterase (BChE) como a carboxilesterase (CarbE), se presentes em concentrações relativamente elevadas, agem como limpadores estequiométricos (scavengers moleculares) por ligarem o átomo de fósforo do grupo P=O com a hidroxila de uma serina presente nos seus sítios ativos. Em nossos resultados observamos que curimbatá possui a CarbE plasmática (IC50 74 &#951;M) mais sensível ao organofosfato metilparaoxon quando comparado ao pacu (IC50 691 &#951;M). Isolamos CarbE dos plasmas de curimbatá e pacu. Piavussu não possui uma atividade expressiva de CarbE no sangue, por isso não a isolamos. O tipo e a distribuição das esterases nos tecidos são particulares da espécie. Curimbatá tem alta atividade de CarbE no fígado (237,8 U.g-1) e no sangue (29,85 U.mL-1), pacu é dotado de alta atividade de BChE (134,0 U.g-1) e CarbE (149,6 U.g-1) no fígado, mas o piavussu conta apenas com a BChE do sangue (17,87 U.g-1). Este arsenal enzimático foi suficiente para proteger as AChE de cérebro, músculo e coração das três espécies e evitar a sua intoxicação leve por 0,2 mg metilparation/L. A abordagem cinético-bioquímica para conhecer a inibição das esterases presentes nos tecidos de diferentes espécies de peixes por / Every human group who organizes to work together uses rivers, lakes or ponds as places in which undesirable substances are deposited for decomposition. Contamination of the aquatic environment with herbicides and pesticides derived from agricultural practices has become a problem of global importance since a long ago. We need detailed information on the biochemistry of the poisoning of native fish to assess the effects of pesticides on the biochemical processes that maintain fishes life cycle in waters of Brazil. Organophosphates, which are widely used pesticides, can interact with the B-esterases butyrylcholinesterase (EC 3.1.1.8) and carboxylesterase (EC 3.1.1.1) in plasma and liver. Butyrylcholinesterase (BChE) and carboxylesterase (CarbE) in relatively high concentrations act as stoichiometric scavengers by linking the phosphorus atom of the P=O group with the serines hydroxyl they have in their active site. Our results show that the CarbE of curimbata plasma (IC50 74 &#951;m) is more sensitive to the organophosphate metilparaoxon than CarbE of pacu plasma (IC50 691 &#951;m). We isolated CarbE from curimbata and pacus plasma. Piavussu does not have an expressive activity of CarbE in plasma, so we did not isolate it. The type and distribution of esterases in tissues are peculiar to a species. Curimbata has high CarbE activity in the liver (237.8 U.g-1) and blood (29.85 U.mL-1), pacu is equipped with high activities of BChE (134.0 U.g-1) and CarbE (149.6 U.g-1) in the liver and piavussu relies only on BChE of blood (17.87 U.g-1). This enzymatic arsenal was sufficient to protect AChE from brain, muscle and heart of the three species and protect them against mild intoxication by methylparathion (0.2 mg / L). The biochemical kinetic approach that allows understanding of the inhibition of the esterases in tissues of different fish species is a good tool capable of anticipating the harmful consequences of these drugs.

A homocistinúria é uma desordem metabólica causada pela deficiência da enzima cistationina β-sintase, resultando no acúmulo tecidual de homocisteína e de metionina. Os pacientes afetados por essa doença apresentam principalmente retardo mental, isquemia cerebral, convulsões e aterosclerose. Entretanto, os mecanismos fisiopatológicos responsáveis por essas manifestações são pouco conhecidos. O sistema colinérgico apresenta papel importante na função cognitiva do qual as colinesterases, acetilcolinesterase e butirilcolinesterase, são constituintes ubíquos. Similarmente à acetilcolinesterase, a butirilcolinesterase hidrolisa a acetilcolina e está presente no soro, coração, endotélio vascular e no sistema nervoso. Estudos têm mostrado que as colinesterases estão inibidas no córtex cerebral de pacientes com a doença de Alzheimer. Adicionalmente, há evidências na literatura mostrando que as colinesterases são inibidas por radicais livres. A Na+,K+-ATPase é uma enzima fundamental responsável pela manutenção do gradiente iônico necessário para a excitabilidade neuronal e consome de 40 a 60% do ATP formado no cérebro. Recentes estudos têm demonstrado que essa enzima é inibida por radicais livres e também que sua atividade está diminuída na isquemia cerebral, epilepsia e em doenças neurodegenerativas como a doença de Alzheimer. Além disso, nosso grupo demonstrou que a homocisteína inibe a atividade da Na+,K+-ATPase cerebral. Considerando que: a) pouco se sabe sobre os mecanismos responsáveis pelas manifestações neurológicas que ocorrem na homocistinúria, b) a administração de homocisteína prejudica a memória, c) as colinesterases são importantes para as funções cognitivas, d) a atividade da Na+,K+-ATPase está diminuída na isquemia cerebral, e) a homocisteína inibe a atividade dessa enzima in vitro e f) as atividades da butirilcolinesterase e da Na+,K+-ATPase em tecidos periféricos podem ser consideradas marcadores de alterações que ocorram no sistema nervoso central, no presente estudo determinamos o efeito in vitro da homocisteína sobre as atividades da butirilcolinesterase e da Na+,K+-ATPase em soro e plaquetas de ratos, respectivamente. Também determinamos o efeito da administração aguda e crônica de homocisteína sobre a atividade da butirilcolinesterase sérica e a influência das vitaminas E e C sobre os efeitos inibitórios causados pela homocisteína. Os resultados mostraram que a homocisteína diminuiu significativamente a atividade da butirilcolinesterase em soro de ratos de 60 dias in vitro. A homocisteína inibiu essa enzima de forma competitiva com a acetilcolina como substrato. Também foi verificado que a homocisteína reduziu significativamente as atividades da butirilcolinesterase e da Na+,K+-ATPase em soro e plaquetas de ratos de 29 dias, respectivamente. Nossos resultados também mostraram que a administração aguda de homocisteína diminuiu significativamente a atividade da butirilcolinesterase em soro de ratos de 29 dias. Adicionalmente, verificou-se que o pré-tratamento com as vitaminas E e C não alterou per se a atividade da butirilcolinesterase, mas preveniu a redução da atividade dessa enzima causada pela administração aguda de homocisteína. Por fim, determinou-se que a administração crônica desse aminoácido diminuiu significativamente a atividade da butirilcolinesterase. Os resultados obtidos em nosso trabalho sugerem que a redução das atividades da butirilcolinesterase e da Na+,K+-ATPase pode estar associada à disfunção neurológica presente em pacientes homocistinúricos, uma vez que a determinação dessas enzimas em sistemas periféricos represente um marcador para a ação neurotóxica da homocisteína.

Todos os agrupamentos humanos que se organizam para o trabalho usam rios, lagos ou lagoas como depósitos para a decomposição de matéria indesejável. A contaminação do meio aquático por herbicidas e agrotóxicos derivados de práticas agrícolas se tornou, faz tempo, um problema de importância mundial. Precisamos de informações detalhadas sobre a bioquímica da intoxicação de peixes nativos para avaliarmos quais os efeitos de agrotóxicos sobre os processos bioquímicos que mantêm o ciclo de vida dos peixes em águas do Brasil. Organofosfatos, que são agrotóxicos de uso disseminado, podem interagir com as B-esterases butirilcolinesterase (EC 3.1.1.8) e carboxilesterase (EC 3.1.1.1) presentes no fígado e no plasma. Tanto a butirilcolinesterase (BChE) como a carboxilesterase (CarbE), se presentes em concentrações relativamente elevadas, agem como limpadores estequiométricos (scavengers moleculares) por ligarem o átomo de fósforo do grupo P=O com a hidroxila de uma serina presente nos seus sítios ativos. Em nossos resultados observamos que curimbatá possui a CarbE plasmática (IC50 74 &#951;M) mais sensível ao organofosfato metilparaoxon quando comparado ao pacu (IC50 691 &#951;M). Isolamos CarbE dos plasmas de curimbatá e pacu. Piavussu não possui uma atividade expressiva de CarbE no sangue, por isso não a isolamos. O tipo e a distribuição das esterases nos tecidos são particulares da espécie. Curimbatá tem alta atividade de CarbE no fígado (237,8 U.g-1) e no sangue (29,85 U.mL-1), pacu é dotado de alta atividade de BChE (134,0 U.g-1) e CarbE (149,6 U.g-1) no fígado, mas o piavussu conta apenas com a BChE do sangue (17,87 U.g-1). Este arsenal enzimático foi suficiente para proteger as AChE de cérebro, músculo e coração das três espécies e evitar a sua intoxicação leve por 0,2 mg metilparation/L. A abordagem cinético-bioquímica para conhecer a inibição das esterases presentes nos tecidos de diferentes espécies de peixes por / Every human group who organizes to work together uses rivers, lakes or ponds as places in which undesirable substances are deposited for decomposition. Contamination of the aquatic environment with herbicides and pesticides derived from agricultural practices has become a problem of global importance since a long ago. We need detailed information on the biochemistry of the poisoning of native fish to assess the effects of pesticides on the biochemical processes that maintain fishes life cycle in waters of Brazil. Organophosphates, which are widely used pesticides, can interact with the B-esterases butyrylcholinesterase (EC 3.1.1.8) and carboxylesterase (EC 3.1.1.1) in plasma and liver. Butyrylcholinesterase (BChE) and carboxylesterase (CarbE) in relatively high concentrations act as stoichiometric scavengers by linking the phosphorus atom of the P=O group with the serines hydroxyl they have in their active site. Our results show that the CarbE of curimbata plasma (IC50 74 &#951;m) is more sensitive to the organophosphate metilparaoxon than CarbE of pacu plasma (IC50 691 &#951;m). We isolated CarbE from curimbata and pacus plasma. Piavussu does not have an expressive activity of CarbE in plasma, so we did not isolate it. The type and distribution of esterases in tissues are peculiar to a species. Curimbata has high CarbE activity in the liver (237.8 U.g-1) and blood (29.85 U.mL-1), pacu is equipped with high activities of BChE (134.0 U.g-1) and CarbE (149.6 U.g-1) in the liver and piavussu relies only on BChE of blood (17.87 U.g-1). This enzymatic arsenal was sufficient to protect AChE from brain, muscle and heart of the three species and protect them against mild intoxication by methylparathion (0.2 mg / L). The biochemical kinetic approach that allows understanding of the inhibition of the esterases in tissues of different fish species is a good tool capable of anticipating the harmful consequences of these drugs.