Dentro da perspectiva de integrar a criança com câncer à escola para a manutenção de seu desenvolvimento psicossocial, este estudo se propõe a ouvir crianças sobre sua vivência de voltar à escola durante seu tratamento oncológico, após um trabalho informativo realizado com seus colegas e professores. Seguindo todas as normas éticas atuais recomendadas, foram identificadas, no Setor de Pediatria e Puericultura do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo (HCFMRP-USP), oito crianças, de cinco a onze anos, participantes do estudo. Foi proposto a elas e a suas mães o desenvolvimento desta pesquisa, que se deu através da realização de um trabalho informativo sobre o câncer infantil a partir da apresentação do desenho animado pela Turma do Snoopy “Não tem choro", a fim de proporcionar esclarecimentos sobre a doença e tratamento aos colegas e professores. Aproximadamente trinta dias após sua volta às aulas, em um de seus retornos hospitalares, foi feita uma entrevista com as crianças no HCFMRP-USP, a partir da seguinte questão: “Gostaria que você me contasse como está sendo voltar para a escola depois deste tempo que você passou afastado para se tratar". As entrevistas foram gravadas, transcritas e analisadas qualitativamente de acordo com os referenciais da psicologia fenomenológica. Esta análise revelou que a reinserção escolar é estressante para as crianças com câncer por envolver aspectos emocionais e questões relativas à aceitação social. Antes do trabalho informativo a falta de esclarecimento sobre o câncer propiciou o estabelecimento do “mistério" em torno da aparência física das crianças doentes na escola, configurando um clima hostil e agressivo para elas. Todavia, mantiveram sua posição em continuar freqüentando a escola, esforçando-se para apresentarem bom desempenho acadêmico e comportamental, além de criarem alternativas para “burlarem" a rejeição dos colegas. Segundo as crianças, o trabalho informativo constituiu-se em um importante apoio no momento da reinserção escolar, contribuindo para a compreensão dos colegas a respeito do câncer, dando-lhes, assim, a tranqüilidade necessária para o desempenho das atividades acadêmicas e sociais pertinentes à sua faixa etária. As limitações físicas impostas pela doença e/ou pelo tratamento foram sentidas na escola, possibilitando às crianças o contato com a realidade de serem-alunos-em-tratamento de câncer. Apesar das dificuldades encontradas, foram unânimes em revelar simpatia para com o ambiente escolar e desejo pelo aprendizado e convívio social próprios dele. Este estudo vem corroborar os resultados de outros estudos na área e vem confirmar a importância de atividades informativas e de comunicação entre hospital e escola na facilitação da reinserção escolar da criança com câncer. / In the perspective of integrating the child with cancer to the school for the maintenance of her psycho-social development , this study proposes to listen to the children about their experience of returning to school during oncological treatment, after an informative work performed with their colleagues and teachers. Following all the current ethical norms recommended, eight children of this study, from five to eleven years old, were identified by the Pediatric and Puericulture Sector of the Clinical Hospital at the Medicine School of Ribeirão Preto, University of São Paulo (HCFMRP-USP). The development of this research was proposed to them and their mothers through the accomplishment of an informative work about the childhood cancer presented by the Snoopy cartoon "Why Charlie Brown, Why?", in order to clearly inform about disease and treatment to the colleagues and teachers. About 30 days after the children’s return to classes, in one of their hospital returns, after the informative work, an interview was made with the children at HCFMRP-USP, from the following question: “I would like that you tell me how you feel about returning to school after the time you were absent for treatment". The interviews were recorded, transcribed and analyzed qualitatively according to the phenomenological psychology references. This analysis revealed that the school reinsertion is stressful for the children with cancer for involving emotional aspects and social acceptance matters. Before the informative work the lack of information about cancer established the "mystery" around the physical appearance of the sick children in the school, providing a hostile and aggressive climate for them. However, they kept their position to continue attending the school, making efforts to introduce a good academical and behavioral performance, besides creating options to “fake" colleagues' rejection. According to the children, the informative work constituted an important support at the school reinsertion moment, contributing to the colleagues' comprehension about the cancer, giving them the necessary tranquillity to perform academic and social activities pertinent to their age group. The physical limitations imposed by the disease and/or by the treatment were felt at school, enabling the children to have contact with the reality of being-students-in-cancer treatment. Although the difficulties found, they were unanimous in revealing sympathy to the school environment and showed the wish of learning and proper social living. This study comes to corroborate the results of other studies in this field and comes to confirm the importance of the informative activities and communication between hospital and school in order to make the school reinsertion easier for the child with cancer.

O câncer de mama caracteriza-se globalmente como a neoplasia de maior incidência e mortalidade na população feminina. Antocianinas e elagitaninos presentes em frutas como as berries destacam-se por seu promissor efeito protetor em diferentes estágios do desenvolvimento do câncer de mama. Grumixama (G; Eugenia brasiliensis Lam) é uma espécie de cereja nativa do Brasil que assim como as amora-preta (AP; Rubus spp) e silvestre (AS; Morus nigra L.) contém alto teor de antocianinas e elagitaninos. Poucos estudos focaram na ação anticâncer destas berries no câncer de mama. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos de extratos ricos em antocianinas ou elagitaninos de G, AP e AS no crescimento e na expressão de genes e miRNAs das linhagens de células humanas de câncer de mama MCF-7 (receptor de hormônio positiva) e MDA-MB 231 (receptor de hormônio negativa). Não se observou citotoxicidade após 72 e 96 horas de tratamento com os extratos (25-200&#181g/mL) ricos em antocianinas (ASANT, APANT e GANT) ou elagitaninos (APELA e GELA), em ambas as linhagens celulares. Após 72 horas de tratamento, GANT e APANT induziram parada de ciclo celular em G0/G1 (12,5 e 50&#181g/mL, p<0,05) em células MCF-7. Após 96h, ASANT, APANT e GANT induziram parada de ciclo celular em G0/G1 (12,5 e 50&#181g/mL; p<0,05) nessas mesmas células. Entretanto, na concentração de 200&#181g/mL apenas GANT induziu parada em G0/G1 (72 e 96h; p<0,05). Em células MDA-MB 231, após 96h APANT e GANT induziram parada de ciclo celular em G0/G1 nas concentrações testadas (12,5, 50 e 200&#181g/mL, p<0,05), assim como ASANT nas concentrações de 12,5 e 50&#181g/mL (p<0,05). Em células MCF-7, após 72h APELA e GELA induziram aumento da proporção de células em subG0 (200&#181g/mL, p<0,05). Em MDA-MB 231, após 72 e 96h, APELA e GELA (200&#181g/mL) induziram aumento da proporção de células em subG0 (p<0,05) e parada em G0/G1 (p<0,05). Em células MCF-7, GANT induziu morte celular por apoptose (p<0,05) após 72 e 96h de tratamento. Entretanto, em MDA-MB 231 os extratos ricos em antocianinas não induziram morte celular. Em células MCF-7, após 96h GELA e APELA induziram principalmente necrose (p<0,05). Em MDA-MB 231, APELA e GELA induziram apoptose (p<0,05) após 72 e 96h. Em células MDA-MB 231, após 72h de tratamento foi observada inibição da proliferação celular por GELA, GANT e APELA (200&#181g/mL; p<0,05). Em células MDA-MB 231, 48h de tratamento com GELA; GANT e APELA (200&#181g/mL) aumentaram a expressão 5 genes (ESR2, FOXA1, JUN, PTGS2,VEGFA) e inibiram a expressão de 10 genes (ADAM23, ATM, BCL2, CDH1, EGF, GLI1, ID1, MKI67, SNAI2 e THBS1) correlacionados ao câncer de mama. Adicionalmente, GELA; GANT e APELA (200&#181g/mL) induziram aumento da expressão de miR- 210(p<0,05) e APELA (200&#181g/mL) reduziu a expressão de miRNA 19a/b (p<0,05) em células MDAMB 231. Coletivamente estes resultados sugerem que antocianinas de grumixama e elagitaninos de amora preta e grumixama apresentam potencial efeito protetor contra o câncer de mama. Adicionalmente, essa ação anticarcinogênica pode ser mediada por indução de morte celular, mais especificamente apoptose, redução de proliferação celular e modulação da expressão de genes e miRNAs relacionados ao câncer de mama. / Breast cancer is characterized as the neoplasia with the highest incidence and mortality rates in women worldwide. Anthocyanins and ellagitannins present in certain fruits, such as berries, stand out for their promising protective effect at different stages of breast cancer development. Grumixama (G; Eugenia brasiliensis Lam), a cherry species from Brazil, as well as blackberry (AP; Rubus spp) and mulberry (AS; Morus nigra L.) contain elevated concentrations of anthocyanins and ellagitannins. Few studies focused on the anticarcinogenic action of these berries in breast cancer development. Therefore, the aim of the present study was to evaluate the effects of extracts rich in anthocyanins or ellagitannins from G, AP and AS on cellular growth and genes and miRNAs expression in human MCF-7 (hormone receptor positive) and MDA-MB 231 (hormone receptor negative) cell lines. No cytotoxicity was observed after 72 and 96 hours of treatment with extracts rich in anthocyanin (25-200 &#181g/mL) (ASANT, APANT and GANT) or ellagitannins (APELA and GELA) in both cell lines. After 72 hours of treatment, GANT and APANT induced cell cycle arrest at G0/G1 (12.5&#181g/mL and 50&#181g/mL, p<0.05) in MCF-7 cells. After 96h, ASANT, APANT and GANT induced cycle arrest at G0/G1 (12.5 and 50&#181g/mL; p<0.05) in MCF-7 cells. However, at 200&#181g/mL, only GANT induced G0/G1 (72 and 96h; p<0.05). In MDA-MB 231 cells, after 96h APANT and GANT induced cell cycle arrest at G0/G1 with the three tested concentrations (12.5, 50 and 200&#181g/mL, p<0.05), as well as ASANT at concentrations 12,5 and 50&#181g/mL (p <0.05). In MCF-7 cells, after 72h APELA and GELA induced an increase in the proportion of cells in subG0 (200&#181g/mL, p<0.05). In MDA-MB 231, after 72 and 96h, APELA and GELA (200&#181g/mL) induced an increase in the proportion of cells in subG0 (p<0.05) and cell cycle arrest in G0/G1 (p<0.05). In MCF-7 cells, GANT induced apoptosis (p<0.05) after 72 and 96h of treatment. However, in MDA-MB 231, extracts rich in anthocyanins did not induce cell death. In MCF-7 cells, after 96h GELA and APELA induced mainly necrosis (p<0.05). In MDA-MB 231, APELA and GELA induced apoptosis (p<0.05) after 72 and 96h. In MDA-MB 231 cells, inhibition of cell proliferation by GELA, GANT and APELA (200?g/mL; p<0.05) was observed after 72h of treatment. In MDA-MB 231 cells, treatment for 48h with GELA, GANT and APELA (200&#181g) increased expression of 5 genes (ESR2, FOXA1, JUN, PTGS2, VEGFA) and inhibited expression of 10 genes (ADAM23, ATM, BCL2, CDH1, EGF, GLI1, ID1, MKI67, SNAI2 and THBS1) correlated with breast cancer. In addition, GELA; GANT and APELA (200&#181g/mL) induced increased expression of miR-210 (p<0.05) and APELA (200&#181g/mL) reduced the expression of miRNA 19a/b (p<0.05) in MDA-MB cells 231. Collectively these results suggest that anthocyanins of grumixama and ellagitannins of blackberry and grumixama have potential protective effect against breast cancer. Additionally, this anticarcinogenic action can be mediated by induction of cell death, more specifically apoptosis, reduction of cell proliferation and modulation of the expression of genes and miRNAs related to breast cancer.

Neoplasias são proliferações anormais do tecido. O melanoma é uma neoplasia maligna de grande pleomorfismo e apresenta baixa taxa de resposta à quimioterapia. A aplicação de pulsos elétricos aumenta a permeabilidade da membrana celular, facilitando a passagem de drogas quimioterápicas. O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta do melanoma murino ao tratamento com uma e duas aplicações de eletroquimioterapia. Utilizou-se células de melanoma B16F10 em camundongos e realizou-se acompanhamento diário. Avaliou-se a histologia tumoral, o número de mitoses, a contagem de microvasos e o número de mastócitos. Nos animais tratados a sobrevida foi 2,3 vezes maior. Nos animais tratados com duas aplicações de eletroquimioterapia ocorreu remissão total do tumor em 60% dos casos e parcial nos demais, e apresentaram sobrevida 4,5 vezes maior. O número de mitoses nos grupos tratados com uma e duas aplicações de eletroquimioterapia e do número de mastócitos nos grupos tratados com duas aplicações de eletroporação e eletroquimioterapia foi menor que os controles. / Neoplasms are abnormal growths of tissue. Melanoma is a malignant neoplasm of large pleomorphic and has a low response rate to chemotherapy. The application of electrical pulses increases cell membrane permeability and facilitate passage of chemotherapeutic drugs. The aim of this study was to evaluate the response to treatment of murine melanoma with one and two applications of Electrochemotherapy. We used them B16F10 melanoma cells and mice held monitoring diary. We evaluated the histology of the tumor, the number of mitoses, microvessel count and the number of mast cells. In animals treated, the survival was 2.3 times higher. In animals treated with two applications of Electrochemotherapy complete tumor remission occurred in 60% of cases and partial in the other. This group had a survival 4.5 times higher. The number of mitoses in the groups treated with one or two applications of Electrochemotherapy and the number of mast cells in the groups treated with two applications of electroporation and Electrochemotherapy was lower than controls.

O câncer cervical representa a terceira causa de morte por câncer em mulheres e está associado a infecções persistentes pelo Vírus do Papiloma Humano (HPV) em mais de 99% dos casos. Evidências sólidas mostram que a expansão de Células Mielóides Supressoras (MDSC) e fatores solúveis como a interleucina IL-10 são importantes mediadores da evasão tumoral à resposta imunológica contra tumores, que limita a eficácia de imunoterapias. Dada a importância epidemiológica dos tumores induzidos por HPV e a necessidade eminente do desenvolvimento de imunoterapias ativas contra essas lesões, desenvolvemos durante os últimos 12 anos, uma estratégia vacinal terapêutica baseada em DNA. Esta vacina codifica a proteína E7 do HPV-16 fusionada à glicoproteína D (gD) do Vírus Herpes Simplex do tipo 1 (HSV-1), denominada pgDE7h. O presente trabalho propôs a investigação de estratégias que restringem a imunossupressão, baseadas em um plasmídeo que codifica o receptor solúvel da citocina IL-10 (pIL10R) e da quimioterapia com gencitabina, na potencialização da vacina pgDE7h para controlar o crescimento de tumores que expressam as proteínas E6 e E7 do HPV-16 em modelo murino (células TC-1). Foi possível observar um atraso no crescimento do tumoral a partir da combinação da vacina com o pIL-10R. Adicionalmente, a utilização da eletroporação como método de entrega dos plasmídeos aumentou a proteção terapêutica para 90% e 60% quando os animais foram imunizados 5 ou 14 dias após o desafio, respectivamente. A combinação dos plasmídeos foi ainda capaz de elevar o número de linfócitos T CD8+ E7-específicos ativados, encontrados sistemicamente e no sítio tumoral. No consócio da imunização com a pgDE7h à gencitabina, foi possível observar um efeito sinérgico dessa associação, que aumentou a proteção antitumoral de 20% para 100% de animais livres de tumor, concomitante ao controle da expansão de populações imunossupressoras no baço. Além disso, a quimioimunoterapia administrada até 14 dias após o desafio com as células tumorais mostrou-se protetora em modelo de recidivas, simuladas por meio de transplantes subsequentes de células tumorais. Na busca de um protocolo vacinal com maior viabilidade clínica, combinamos a coadministração dos plasmídeos pgDE7h e pIL- 10R com o tratamento com gencitabina. Esta combinação terapêutica mostrou-se mais eficiente, onde se observou um aumento robusto da ativação de linfócitos T CD8+ E7-espefíficos, com regressão completa de tumores pré-estabelecidos. Em suma, esses resultados evidenciam que a associação de abordagens terapêuticas pode superar barreiras imunológicas presentes no ambiente tumoral e aumentar as chances de sucesso clínico do tratamento proposto. / Cervical cancer represents the third cause of cancer death among women, which is associated with persistent Human Papilloma Virus (HPV) infection in more than 99% of cases. Solid evidences show that the expansion of Myeloid-derived Suppressor Cells (MDSC) and soluble factors, such as IL-10, are important mediators of immune evasion mechanisms expressed by tumor cells, that limits the efficacy of immunotherapeutic approaches. Given the epidemiological importance of HPVinduced tumors and the crucial importance of developing active immunotherapies against neoplasias, during the past 12 years, we have been developing a DNA-based therapeutic vaccine strategy encoding the HPV-16 E7 protein fused to the Herpes Simplex Virus type 1 (HSV-1) glycoprotein D (gD), named pgDE7h. This work aimed to investigate the potential role of immunossupression restriction using a plasmid encoding the soluble IL-10 receptor (pIL10R) and the chemotherapeutic drug gemcitabine to enhance in enhancing the pgDE7h vaccine potency in the control of tumors expressing HPV-16 E6 and E7 proteins in a murine model (TC-1 cells). It was possible to observe a tumor growth delay after combining the vaccine with pIL-10R. Additionally, the use of electroporation as a plasmid delivery method provided a therapeutic protection of 90% and 60% when the animals were immunized 5 or 14 days after challenge, respectively. The combination of plasmids was also capable to increase substantially the numbers of activatedE7-specific CD8+ T lymphocytes both systemically and at the tumor site. When pgDE7h immunization was combined to chemotherapy, we observed a synergistic effect, which increased the antitumor protection from 20% to 100% and promoted the control of immunosuppressive cell populations in the spleen. It was possible to maintain the high antitumour protective effects of the chemo-immunotherapy when the animals were immunized 14 days after tumor cell challenge and tumor relapses after subsequent challenges with tumor cells. To search a vaccine protocol with greater applicability in a clinical setting, we combined co-administration of pgDE7h and pIL-10R and gemcitabine treatment. Our data showed that the combined treatment induced a robust increase in the activation of CD8+ T lymphocytes and a complete regression of pre-established tumors. All together, these results show that the combination of therapeutic approaches can overcome immunological barriers present in the tumor environment and increase the chances of clinical success of the propose therapeutic treatment.

A Terapia por Captura de Nêutrons, NCT (Neutron Capture Therapy) é uma técnica radioterápica em que a energia útil do tratamento vem da energia liberada em uma reação nuclear e não do feixe primário, como comumente utilizado em outros procedimentos radioterápicos. O Boro, por constituir-se em um elemento de baixa toxicidade e por apresentar um isótopo (10B) com alta seção de choque para a reação 10B(n,&alpha;)7Li tem sido o elemento mais utilizado nas pesquisas que visam o aprimoramento e a promoção desta técnica, derivando daí o termo BNCT (Boron Neutron Capture Therapy). Para fins de pesquisa em BNCT foi construída ao longo de um dos extratores de feixes (BH - Beam Hole) do reator IEA-R1 uma instalação, onde filtros e moderadores são posicionados entre o núcleo do reator e a posição de irradiação com o objetivo de modular o feixe de irradiação, otimizando a componente útil do feixe, os nêutrons térmicos, e reduzindo os contaminantes, raios gama e nêutrons em outras faixas energéticas. Tem-se realizado estudos visando a implementação de melhorias na caracterização e otimização do feixe obtido nesse arranjo instalado no BH-3. Atualmente a monitoração dos nêutrons é feita através de folhas de ativação, e a componente gama pelo TLD-400. Uma nova metodologia de monitoração tem sido estudada pelo grupo. A referida técnica consiste em usar TLDs de tipos diferentes, ou seja, que possuam sensibilidades distintas aos nêutrons térmicos, em virtude de diferenças na concentração dos isótopos de Lítio. No estudo dessa nova metodologia têm sido usados os TLD-600 e TLD-700. Este trabalho propõe uma metodologia usando o par TLD-100 e TLD-700. Inicialmente foi verificada a reprodutibilidade das respostas dos TLDs 700, 400 e 100 frente a campos gama puro e campos mistos, gama e nêutron. Campos estes obtidos em arranjos usando fontes de 60Co e 241AmBe. A partir de simulações usando o VI MCNP5 foi projetado e construído um Irradiador de campos mistos, que permitiu expor os dosímetros em campos mistos com diferentes espectros energéticos. As condições criadas no irradiador permitiram verificar, como a resposta do TLD é modificada pelas mudanças no espectro energético de um campo misto gama e nêutrons de baixo fluxo. O irradiador de campo misto permitiu condições para estabelecer uma relação entre o formato da curva termoluminescente e a composição do campo misto. A relação estabelecida relaciona o fluxo relativo e a razão entre a resposta das duas regiões de interesse dos TLDs 700 e 100. A partir de campos mistos com condições controladas, esse trabalho permitiu verificar a viabilidade do uso do par de TLD-100 e TLD-700 para monitoração de nêutrons térmicos na instalação de BNCT. / Neutron Capture Therapy (NCT), is a radiotherapy technique in which the useful treatment energy comes from the energy released in a nuclear reaction and not from the primary beam, as commonly used in other radiotherapc procedures. Boron, an element of low toxicity presents an isotope (10B) with high cross-section for the (n, &alpha;) reaction and therefore has been the element mostly used in research aimed at the improvement and promotion of this technique, deriving hence the term BNCT (Boron Neutron Capture Therapy). For BNCT research purposes, a facility was built along one of radiation extractors of the IEA-R1 reactor. In this facility filters and moderators are positioned between the reactor core and the irradiation position aiming to modulate the irradiation beam by optimizing the useful component of the beam, thermal neutrons, and reducing its contaminants, gamma rays and neutrons in higher energy bands. We have conducted studies aimed at implementing improvements in the characterization of and optimization of the beam. Currently, neutron flux monitorion is done through activation foils, and the gamma component by TLD-400. A new methodology has been studied by the group. The technique consists in using different types of TLD, having different sensitivities to thermal neutrons due to differences in the concentration of lithium isotopes. In the study of this new methodology TLD 600 and TLD-700 have been used. This work presents a series of studies in order to apply a methodology using the TLD-100 and TLD-700 pair. TLDs 700, 400 and 100 responses pure gamma and mixed irradiation fields, obtained in arrangements using a 60Co and AmBe sources, were evaluaterd. MCNP simulations were run in order to both discriminating the radiation components and designing one mixed fields irradiator, which allowed exposing dosimeters in mixed fields with different energy spectra. The conditions created in the irradiator allowed to verify, as the TLD response is modified by changes in the energy spectrum of a mixed gamma neutron fields. VIII This irradiator provided irradiation conditions so to establish a relationship between the shape of the LiF glow curves and the composition of the mixed field. This work has shown the feasibility of using the TLD-100 and TLD-700 pair for gamma and thermal neutrons monitoration in the BNCT facility.

O câncer colorretal é um dos tipos de tumores mais frequentes no mundo. A atual dificuldade na avaliação correta da resposta ao tratamento torna necessário o desenvolvimento de novas abordagens de detecção tumoral. Atualmente, o sequenciamento genômico em larga escala permite um estudo mais compreensivo das alterações estruturais e de sequência presentes no tumor. A aplicação destas abordagens de maneira personalizada permite o desenvolvimento de biomarcadores tumor específicos que podem facilitar a avaliação de resposta ao tratamento e a presença de doença residual, bem como revelar alterações de sequência em genes capazes de servir de novos alvos terapêuticos. Neste estudo foi desenvolvida uma metodologia eficiente para a identificação de biomarcadores baseados na existência de variações estruturais em genomas de tumores de reto, eliminando a necessidade de sequenciamento do genoma normal do mesmo paciente e diminuindo portanto o custo da abordagem. Os biomarcadores encontrados para cada um dos seis pacientes foram utilizados para avaliar a presença de doença residual após o tratamento através da detecção de DNA tumoral circulante nas amostras de plasma coletadas em momentos diferentes do tratamento. O sequenciamento em baixa cobertura personalizado é portanto uma alternativa viável e promissora para avaliar a resposta ao tratamento em pacientes com tumores de reto. Na segunda parte do estudo, a análise de linhagens celulares de tumores colorretais revelou uma grande quantidade de mutações pontuais somáticas (SNVs e InDels) em genes codificadores para proteínas de superfície celular (surfaceoma). Estas alterações no surfaceoma indicam potenciais novos alvos para drogas e vias regulatórias alteradas neste tipo de tumor. Além disso, estas mutações pontuais também são responsáveis pela geração de epítopos com potencial imunogênico e estes novos epítopos podem ser aplicados como vacinas antitumorais personalizadas e já haviam sido propostos como uma alternativa terapêutica. A presença de novos epítopos, principalmente nas linhagens com elevadas taxas de mutação (resultante da instabilidade de microssatélites e mutações em genes de reparo de DNA tipo mismatch ou POLE), sugerem também um potencial uso de drogas moduladoras do sistema imune em pacientes com tumores que apresentam estas mesmas características. Portanto, o estudo de alterações genômicas em tumores primários e linhagens de câncer colorretal permitiu a detecção de variações estruturais que foram utilizadas como biomarcadores personalizados em pacientes com tumores de reto assim como a identificação de genes contendo mutações pontuais em linhagens celulares de câncer colorretal, que revelam potenciais novos alvos terapêuticos a serem explorados na clínica / Colorectal cancer is one of the more frequent tumor types in the world. To select the appropriate treatment course, it is necessary to develop more precise diagnostic approaches. The current availability of high throughput genome sequencing methods allows for a comprehensive characterization of the structural and sequence alterations present in each tumor. The use of tumor genome sequencing in a personalized setting can result in tumor specific biomarkers that help evaluate response to treatment and the presence of residual disease, improving the clinical management of these patients, and also reveal sequence alterations in genes capable of serving as new therapeutic targets. In this study we developed an efficient bioinformatics pipeline to identify biomarkers based on the existing structural alterations in rectal tumor genomes, eliminating the need to sequence the matched normal genome and therefore reducing the cost for this approach. The biomarkers found for each of the six patients were used to evaluate the presence of residual disease after treatment through the detection of circulating tumor DNA in plasma samples collected at different points during the treatment. Sequencing tumor genomes with low coverage is therefore a viable and promising alternative to follow up rectal cancer patient\'s response to treatment. In the second part of this study, the analysis of colorectal cancer cell lines revealed a large quantity of point mutations (SNVs and InDels) in genes coding for proteins located in the cell surface (surfaceome). These alterations in the surfaceome indicate potential new drug targets and altered pathways in this type of tumor. Furthermore, these point mutations are also responsible for the generation of new epitopes with immunogenic potential and these new epitopes can be applied as personalized tumor vaccines and had previously been proposed as a therapeutic alternative. The presence of new epitopes, especially in the cell lines with elevated mutation rates (resulting from MSI and mutations in DNA mismatch-repair genes or POLE), suggests a potential use of immune checkpoint target drugs in patients with tumors that share these genetic characteristics. With a large-scale bioinformatics approach, we detected new tumor epitopes resulting from point mutations, present in most of the cell lines used. The analysis of gene expression data puts into perspective both the somatic mutations found and which targets are promising as well as the development of therapies based on vaccines derived from tumor epitopes. In conclusion, the study of genomic alterations in primary tumors and colorectal cancer cell lines allowed the detection of structural variations that were used as personalized biomarkers in patients with rectal tumors as well as the identification of genes containing point mutations in colorectal cancer cell lines, that reveal potential new therapeutic targets to be explored in the clinical setting.

Introdução: Com o aumento dos casos de câncer no mundo, instrumentos validados e confiáveis para avaliação das necessidades de cuidados de suporte a pacientes oncológicos são fundamentais para o oferecimento de serviços adequados a pessoas com câncer. Objetivo: Analisar evidências de validade da versão brasileira do Supportive care needs survey - short form 34 (SCNS-SF34) para avaliar necessidades de cuidados de pacientes oncológicos atendidos em Manaus. Método: Estudo psicométrico, com amostra de conveniência composta por 691 pacientes adultos com câncer, atendidos na Fundação Centro de Controle de Oncologia do Estado do Amazonas (FCECON), no período de Abril a Julho de 2016. A fonte de informação para a coleta dos dados foi um formulário com dados sociodemográficos e clínicos e a versão brasileira do Instrumento SCNS-SF34. A amostra foi composta por 691 pacientes, divididos em duas subamostras (Amostra A=350 e Amostra B=341) para as análises psicométricas, de modo a garantir pelo menos 10 pacientes para cada item do SCNS-SF 34 nas análises de constructo. O teste t Student foi usado para a comparação de médias das variáveis sociodemográficas e clínicas (sexo, grupo etário, tempo de tratamento) com a pontuação total da escala SCNS-SF34. Análises fatoriais, exploratória (AFE) e confirmatória (AFC), foram realizadas para a validade de constructo. Para o cálculo da consistência interna foi realizado o alfa de Cronbach. Foi feita análise de invariância do modelo fatorial em função do gênero (masculino vs feminino), do grupo etário (adultos vs idosos) e tempo de tratamento ( 6 vs 6 meses). A análise da validade convergente do SCNS-SF34 foi realizada com o índice Katz para atividade de vida diária. As análises foram realizadas por meio dos softwares Factor 10.3, MPLUS 7.3 e SPSS v22. Resultados: Do total de 691 pacientes, 92.6% eram provenientes do Estado do Amazonas, dos quais 68,2% da cidade de Manaus. A maioria era do sexo feminino (72.6%), com idade < 60 anos, (64.4%), média de 53.7 + 13.28 anos, viviam com companheiro (54.5%) e não necessitavam de cuidadores (55.3%). O tumor mais frequente foi localizado no sistema reprodutor masculino e feminino (55.6%), com predomínio do câncer de mama feminino (33.9%), seguido pelo sistema digestório (17,7%), com os tumores de estômago (6.3%). Quanto ao tratamento, a maioria dos pacientes foi submetida à cirurgia (56.1%) e à Quimioterapia (60.8%); o tempo de diagnóstico e de tratamento seis meses foi de, respectivamente, 74.4% e 54.4% pacientes. A média da pontuação total da escala foi de 76,06 + 23,50, mínimo de 35 e máximo de 170, sendo que pacientes adultos apresentaram maior necessidade de cuidados do que idosos, respectivamente, 77.7 + 23.9 e 72.97 + 22.74 pontos (p=0,010). Segundo SCNS-SF34, os pacientes apresentaram baixa necessidades de cuidados de suporte. Após as AFE e AFC a escala ficou formada por 34 itens e quatro domínios: Físico e vida diária (itens 1-5), Psicológico (6-14 e 17) e Sexualidade (15, 16 e 31); os itens 18 e 19 foram agrupados no domínio denominado Cuidado e Suporte (21-30 e 32- 33). Os índices de ajustamento obtidos por meio da AFC para o novo modelo (X2 = 1828,981; df = 520; X2/df = 3,51, p<0,001; CFI = 0,926; TLI= 0,918; RMSEA = 0,084 (I.C. 90%= 0,082 - 0,090) foram classificados como bons. A análise da invariância entre os diferentes grupos (sexo, grupo etário e tempo de tratamento) mostrou-se invariante para todos os grupos, sem prejuízo nos índices em nenhum dos níveis da invariância. A validade convergente entre os domínios do SCNS-SF34 e Índice de Katz para atividade de vida diária foi estatisticamente significante. Conclusão: O SCNS-SF34, composto por quatro domínios e 34 itens, mostrou-se um instrumento com boas evidências de validade e precisão para medir as necessidades de cuidados de pacientes com câncer atendidos na cidade de Manaus, Amazonas, independente do sexo, grupo etário e tempo de tratamento. No entanto, a estrutura fatorial encontrada ainda é passível de aprimoramentos para o melhor ajustamento do modelo. / Introduction: With the increase of cancer cases worldwide, validated and reliable instruments to assess care needs of oncologic patients are fundamental in offering proper services to people with cancer. Objective: To analyze evidence of validity of the Brazilian version of the Supportive Care Needs Survey - Short Form 34 (SCNS-SF34) in assessing the oncological healthcare needs of patients assisted in Manaus. Methods: A methodological study with a convenience sample composed of 691 adult cancer patients, assisted at Fundação Centro de Controle de Oncologia do Estado do Amazonas (FCECON), from April to July 2016. The source of information for the data collection was a form with sociodemographic and clinical data, as well as, the SCNS-SF34 survey approved for Brazilian Portuguese. For the sample, 20 patients were considered for each item of SCNS-SF34. A total of 691 patients were divided into two sub-samples (Sample A=350 and Sample B=341) for the psychometric analysis. The t student test was used to compare sociodemographic and clinical variables (sex, age group, treatment time) and SCNS-SF34 total score. Exploratory factor analysis (EFA) and Confirmatory factor analysis (CFA) were performed by using statistical software FACTOR 10.3. In order to calculate internal consistency, the Cronbach\'s alpha was performed and the statistical software Mplus 7.3 was used to evaluate the invariance of the factorial model across gender (male vs female), age group (adult vs elderly) and length of treatment ( 6 vs 6 months). The convergent validity analysis of SCNS-SF34 was performed with the Katz index for daily life activity. Results: Out of 691 patients, the majority (92.6%) were from the state of Amazonas, of which 68.2% were from the city of Manaus. The patients were female (72.6%), with an age < 60 (64.4%), a mean age 53.7 ± 13.28, lived with companion (54.5%) and did not need caregivers (55.3%). The most frequent tumor was located in the male and female reproductive systems (55.6%), with the predominance of female breast cancer (33.9%), followed by the digestive system (17.7%) with tumors of the stomach (6.3%). Regarding treatment, the majority of patients underwent surgery (56.1%) and chemotherapy (60.8%), and the diagnostic and treatment time six months was, respectively, 74.4% and 54.4%. The total mean score of the scale was 76.06 ± 23.50, with a minimum of 35 and a maximum of 170, given that adult patients had a higher need for care than the elderly, respectively, 77.7 ± 23.79 and 72.97 + 22.74 points (p = 0.010). According to the SCNS SF-34 the patients presented low level of supportive care needs. After EFA and CFA, the scale consisted of 34 items and four domains: Physical and daily life (items 1-5), Psychological (6-14 and 17) and Sexuality (15, 16 and 31). The items 18 and 19 were grouped into the domain called Care and Support (21-30 and 32-33). The adjustment indexes obtained through the AFC for the new model (X2 = 1828,981; df = 520; X2/df = 3,51, p<0,001; CFI = 0,926; TLI= 0,918; RMSEA = 0,084 (I.C. 90%= 0,082 - 0,090) were classified as good. The invariance analysis across the different groups (sex, age group and treatment time) was invariant for all groups, without affecting the indices at any of the levels of invariance. The convergent validity between the domains of SCNS-SF34 and Katz Index for daily life activity was statistically significant. Conclusion: The SCNS SF-34, composed by four domains and thirty-four 34 items, has proved to be a valid and reliable instrument to measure the healthcare needs of cancer patients assisted in the city of Manaus, Amazonas, regardless of sex, age group and treatment time. However, the factor structure found is still capable of improvements to the best fit of the model. The use of the SCNS-SF-34 in the clinical settings can contribute to improve the quality of care for this group of patients.

Os cânceres ou neoplasias malignas vêm assumindo um lugar cada vez mais importante entre as doenças que acometem a população feminina, representando no Brasil e no mundo, importante causa de morte. O câncer de mama é o segundo tipo de câncer mais freqüente no mundo e o primeiro entre as mulheres. Os avanços da medicina, possibilitando tratamentos mais eficientes e técnicas que viabilizam a detecção precoce, têm contribuído para o aumento da sobrevida das mulheres com câncer de mama.Tendo em vista a alta incidência do câncer de mama eo aumento da sobrevida, faz-se cada vez mais necessário compreender a realidade destas mulheres que experienciam o adoecimento e a sobrevivência a ele. Este trabalho teve como objetivo compreender a experiência de sobreviver ao câncer de mama a partir de elementos presentes nas histórias de mulheres sobreviventes. O estudo é de natureza qualitativa, realizado com 15 mulheres sobreviventes de câncer de mama, que haviam concluído o tratamento há no mínimo cinco anos. A técnica utilizada para coleta de dados foi a entrevista narrativa e a análise foi feita com base nos estudos de Little et al. (2002) e Frank (2012). Os dados foram organizados em torno de três momentos principais: o início da história - o diagnóstico; o enfrentamento - tratamento; e o desfecho - retomando a vida, buscando compreender o sentido que cada participante atribuía a sua história enquanto uma pessoa que passou pelo tratamento do câncer e sobreviveu. Foi percebido que muitas mulheres tiveram sua identidade mudada após a experiência do adoecimento e a maioria delas conseguiu retomar sua vida a uma condição semelhante à anterior à doença. Assim os resultados revelam a singularidade e diversidade no modo de experienciar o adoecimento e a sobrevivência e as repercussões desta experiência na identidade da mulher. / Cancers or malignant neoplasias have been reported as important diseases among women, representing causes of death not only in Brazil but in the whole world. Breast cancer is the second most frequent type of cancer worldwide and the first among women. Medical advancements have improved the survival rates for women with breast cancer through more efficient treatments and techniques. Considering the high incidence of breast cancer and the increase of survival rates, the understanding of these women\'s realities - being sick and recovering from it - has become extremely important. The objective of this study was to understand the experiences of surviving breast cancer from elements present in the stories of women survivors. The study is qualitative - 15 surviving breast cancer women were studied and their treatments had been finished 5 years earlier at least. The technique used to collect data was through interviews and the analysis was done based in the studies of Little et al. (2002) and Frank (2012). The data was organised considering 3 main moments: the beginning of the disease (medical diagnosis); the confrontation (treatment); and the end (regaining life). The main objective was to understand the meaning each woman gave to her experience after having survived. Many women have had their identities changed after the disease and most of them have managed to regain their lives. Thus, the results show the singularity and the diversity in experiencing getting sick and surviving and the effects of these experiences in women\'s identities.

O gene humano KIAA0090 mapeia uma região cromossômica (1p36.13) com freqüentes aberrações em cânceres humanos e é superexpresso em muitos tipos de tumores. É um gene altamente complexo cujas seqüências de cDNA oriundas de bases de dados públicas apóiam a existência de mais de 20 transcritos alternativos. Sua RefSeq prediz a codificação de uma proteína altamente conservada com 993aa, cujo ortólogo em S. cerevisae (ECM1) foi proposto recentemente atuar no enovelamento de proteínas transmembrana no retículo endoplasmático (RE). O objetivo deste trabalho foi adquirir conhecimento sobre a localização e função da proteína KIAA0090, em células e tecidos normais e tumorais, bem como em células expostas a estresse. Geramos anticorpos policlonais (anti-K2) contra a metade C-terminal da proteína e comparamos seu padrão ao tratamento obtido com o anticorpo (anti-K1), previamente gerado contra a metade N-terminal. A proteína endógena foi localizada primariamente no Golgi e na mitocôndria, dependendo se o anticorpo utilizado foi contra a região N- ou C-terminal, respectivamente. Observamos também, embora menos notável, uma marcação sobreposta com a rede do RE e na margem celular, e variáveis graus de marcação dentro do núcleo e associada a pequenas partículas citoplasmáticas. A análise imunohistoquímica forneceu evidências que a KIAA0090 é ubiquamente epressa. O anti-K2 marcou estruturas semelhantes a Golgi em todo tipo celular, predominando assim naquelas com Golgi mais visíveis, como células secretórias. Observamos para a maioria dos tecidos uma marcação leve a moderada para o anti-K1, mas uma forte marcação foi encontrada em grupos restritos de células, como as células reticulares do timo, epitélio ductal das glândulas da língua e na lâmina basal do epitélio escamoso na zona de transição esôfago-gástrica. Em cortes histológicos de melanoma primário, observamos uma forte marcação para o anti-K1, principalmente em vasos e em células invasoras na margem do tumor, enquanto o anti-K2 mostrou um padrão sugestivo de infiltrado inflamatório e/ou células mesenquimais. Em tecidos de câncer de mama, vimos uma forte marcação nas células de carcinoma ductal em comparação ao epitélio ductal normal para o anti-K2, ao passo que o anti-K1, marcou fortemente vasos e células basais no epitélio de revestimento glandular, tanto no tecido normal como no tumoral. Utilizando uma matriz com amostras teciduais de câncer de mama obtidas de 96 pacientes, observamos uma marcação forte a moderada para o anti-K1 em 84% dos casos, enquanto 16% dos casos não apresentaram marcação. Notamos que os casos positivos para o anti-K1 estavam 100, 85 e 71% entre os casos de grade 1, 2 e 3, respectivamente, sugerindo uma tendência de perda da KIAA0090 associada à progressão do câncer de mama. Foi interessante notar que a brefeldina A e MG132 alteraram os níveis de RNAm da KIAA0090 e levaram à redistribuição da proteína endógena. Outros tratamentos de estresse, incluindo tunicamicina, complexo de rutênio doador de óxido nítrico e etoposídeo, também alteraram o padrão de distribuição da proteína. Este estudo fornece evidências preliminares que corroboram os resultados obtidos de estudos de expressão gênica em larga escala, fortalecendo os indícios de que a KIAA0090 desenvolve um papel na homeostase celular e está envolvida no câncer. / Human KIAA0090 gene maps to a chromosomal region (1p36.13) with frequent aberrations in cancer and is overexpressed in many tumor types. It is a highly complex gene with cDNA sequences in databases supporting the occurrence of more than 20 alternative transcripts. The RefSeq transcript is predicted to encode a highly conserved 993 aa transmembrane protein whose S. cerevisiae ortolog (EMC1) was recently proposed to function on transmembrane protein folding in the endoplasmic reticulum (ER). The aim of this work was to gain insight into the localization and function of KIAA0090 protein, in normal and tumor cells and tissues, as well as in cells exposed to stress treatments. We raised a polyclonal antibody (anti-K2) to the C-terminal half of the protein and compared its pattern of staining with an antibody (anti-K1) previously generated in our laboratory to the N-terminal half. The endogenous protein was primarily localized either to mitochondria or Golgi, depending whether the antibody used was to the N- or C-terminal, respectively. Also, less conspicuous staining overlapped with the ER network and cell margin, and variable degrees of labeling was observed within the nucleus and associated to small cytoplasmic particles. Immunohistochemistry survey provided evidence that the KIAA0090 protein is ubiquitously expressed. Anti-K2 labeled in a Golgi-like pattern in every cell type, predominating in those with more conspicuous Golgi, such as secretory cells. Faint to moderate anti-K1 staining was found in most tissues, but very strong staining was seen in restricted groups of cells, such as thymus reticular cells, ductal epithelium of salivary lingual glands and the basal layer of the squamous epithelium in the esophagus-gastric transition zone. In histological sections of primary melanomas, we observed a strong staining for the anti-K1, mostly in vessels and at the invasive tumor margin, while the anti-K2 showed a staining pattern suggestive of infiltrating inflammatory and mesenchymal cells. In breast tissues, stronger staining was seen in ductal carcinoma cells in comparison to normal ductal epithelium for anti-K2 antibody, whereas anti-K1 strongly marked vessels and basal cells in epithelia lining glandular ducts both in normal and tumor tissues. Using a tissue array of breast cancer samples obtained from 96 patients, we observed strong to moderate staining for anti-K1 in 84% of the samples and lack of staining in 16%, interestingly anti-K1 positive cases were 100, 85 and 71% among cases of grades 1, 2 and 3, respectively, suggesting a tendency of KIAA0090 loss associated with breast cancer progression. A positive correlation was found with estrogen receptor expression and the opposite for HER2. Interestingly, Brefeldin A and MG132 altered KIAA0090 mRNA levels and caused endogenous KIAA0090 protein to redistribute. Other stress treatments, including tunicamycin, a ruthenium complex nitric oxide donor and etoposide, also altered KIAA0090 distribution. This study supports the notion that KIAA0090 play a role in cellular homeostasis and is involved in cancer.

O produto formado a partir da reação entre trans-[Ru(NH3)4P(OEt) 3H2O]2+ e íons nitrito é dependente da concentração hidrogeniônica do meio. Em pH acima de 10, o composto final formado é o trans-[Ru(NH3)4P(OEt) 3NO2]+ (1,1 x 103 M-1.s-1), o qual é convertido quantitativamente em pH 4 ao correspondente nitrosilo (2,2 x 10-3 s-1). Esta reação em meio alcalino ocorre em duas etapas com constantes de velocidades distintas, sendo a primeira etapa mais rápida que a segunda. Esta etapa foi atribuída à formação dos isômeros, trans-[Ru(NH3)4P(OEt) 3NO2]+ e trans-[Ru(NH3)4P(OEt) 3ONO] + (1,1 x 103 M-1 s-1; pH 11). A etapa mais lenta foi atribuída à isomerização do nitrito composto, nitrito ligado pelo oxigênio, para o nitro composto, ligado pelo nitrogênio e que apresenta maior estabilidade (6,9 x 102 M-1 s-1; pH 11). Através de estudos in vitro foi efetuada a avaliação da citotoxicidade de nitrosilos complexos de rutênio tipo trans-[Ru(NO)(NH3)4L] 3+ e trans-[Ru(NH3)4L(SO4)]+ em culturas de células de diferentes modelos de câncer. Verificou-se que estes compostos apresentaram resultados efetivos em células de leucemia Humana (Jurkat) e Melanoma Murino (B16F10-Nex2). Os compostos acima também se mostraram citotóxicos frente a células de câncer de Mama Humana (MCF-7). Estudos in vivo com células B16F10-Nex2 envolvendo nitrosilo complexos e seus análogos sulfatos indicaram que a aplicação intraperitoneal destes compostos retardou o desenvolvimento dos tumores e aumentou a sobrevida dos camundongos. Os resultados também indicam que a morte celular promovida pelos complexos provavelmente não é dependente de caspases. A aplicação dos nitrosilos, SNP e [Ru(NO)Hedta], em culturas celulares embriogênicas de Araucaria angustifolia induziram um aumento na massa fresca das culturas em relação ao controle, após 21 dias. Este efeito foi inibido quando PTIO, captador de NO, foi adicionado às amostras em conjunto com os doadores de NO. Observou-se também, que após 21 dias, as amostras preparadas com os compostos apresentaram maior concentração de óxido nítrico, tanto intra quanto extracelular. As morfologias das células também foram influenciadas pela adição dos nitrosilos, observando-se um acréscimo no número de células embriogênicas em relação ao controle, acréscimo este que ocorreu ocorre de forma desorganizada. / The product of the reaction of trans-[Ru(NH3)4P(OEt) 3H2O]2+ with nitrite ions depends on the hydrogenionic concentration of the medium. In solutions with pH &gt; 10, the final compound is the trans-[Ru(NH3)4P(OEt) 3NO2]+ (1,1 x 103 M-1.s-1), wich is quantitatively converted into the trans-[Ru(NH3)4P(OEt) 3NO]3+ in acid solutions (CH+ &gt; 10-5 mol.L-1; kobs = 2.2 x 10-3 s-1 at pH 4). This reaction presents two different steps with distinct rate constants, being the first step faster than the second. Then, the first process was attributed to the formation of both the isomers, trans-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO2]+ and trans-[Ru(NH3)4P(OEt)3ONO]+ (1.1 x 103 M-1s-1; pH 11). The slowest step was then attributed to the isomerization of the nitrito compound, O-bonded, to the nitro compound, Nbonded, which presents more stability (6.9 x 102 M-1s-1; pH 11). In vitro studies were used to evaluate the cytotoxicity of some nitrosyl ruthenium compounds type trans-[Ru(NO)(NH3)4L]3+ and trans-[Ru(NH3)4L(SO4)]+ against some cancer cells models. The compounds showed significant results against human leukemia (Jurkat) and murine melanoma (B16F10-Nex2). The compounds also showed citotoxicity against human breast adenocarcinoma cell line (MCF-7), however the compounds were less active in this culture. In vivo studies with B16F10-Nex2 and the ruthenium compounds suggests that intraperitoneally applications of the complexes delays tumor growth and prolongs animal survival rate. The results also indicates that the compounds should induce a caspase-independent death of the tumor cell. The application of the nitrosyls, SNP and [Ru(NO)Hedta], in embryogenic suspension cultures of Araucaria angustifolia promotes an increase at the fresh mass percent comparing with the control samples. This effect was inhibit when the compound PTIO, a NO scavenger, was added to the samples prepared with NO donors. After 21 days of cellular culture, fluorimetric methods for NO detection showed that the samples prepared with SNP and [Ru(NO)Hedta] presents higher intra and extracellular NO concentrations than control. Morphological organization of embryogenic suspension cultures of A. angustifolia were also influenced by the addition of NO, the cultures with the donors showed increased embriogenic cells numbers relating to the control.