El objetivo de este estudio fue analizar la peroxidación lipídica no enzimática ascorbato-Fe<SUP>++</SUP> dependiente y el efecto antioxidante de α-tocoferol, melatonina y N-acetil-serotonina sobre los principales ácidos grasos polinosaturados presentes en microsomas y mitocondrias de hígado y testículo de rata. 1. En los primeros experimentos se estudió el efecto de la administración intraperitoneal de α-tocoferol (100 mg/Kg/24 h) sobre la peroxidación lipídica no enzimática inducida por ascorbato-Fe<SUP>++</SUP> (0.4 mM) en mitocondrias y microsomas aislados a partir de hígado y testículo de rata. Se prestó especial importancia a los cambios producidos sobre los ácidos polinosaturados C20:4 n6 y C22: 6 n3 en hígado y C20:4 n6 y C22:5 n6 en testículo. La peroxidación lipídica de microsomas y mitocondrias de hígado produjo una disminución significativa de C20:4 n6 y C22: 6 n3 en el grupo control, mientras que no se observaron cambios en la composición de ácidos grasos en el grupo tratado con α-tocoferol. La emisión lumínica fue significativamente elevada en el grupo control con respecto al grupo tratado con α-tocoferol. La peroxidación lipídica de los microsomas de testículo aislados a partir del grupo tratado con α-tocoferol produjo una disminución significativa de C20:4 n6; C22:5 n6 y C22:6 n3, estos cambios no fueron observados en mitocondrias de testículo. La emisión lumínica de ambos grupos fue similar. El tratamiento con a-tocoferol en la dosis y tiempo indicados mostró un efecto protector sobre los ácidos grasos polinosaturados de mitocondrias y microsomas de hígado, y sobre mitocondrias de testículo de rata, mientras que aquellos ácidos grasos presentes en microsomas de testículo no fueron protegidos durante la peroxidación lipídica no enzimática ascorbato-Fe<SUP>++</SUP> dependiente. El efecto protector observado mediante el tratamiento con a-tocoferol en la composición de ácidos grasos en mitocondrias de testículo de rata pero no en microsomas podría explicarse si consideramos que la suma de C20:4n6 + C22:5 n6 en microsomas de testículo es dos veces mayor que la presente en mitocondrias. 2. La hormona pineal melatonina (N-acetil, 5-metoxitriptamina) fue recientemente aceptado que actúa como un antioxidante tanto en vivo como in vitro. En este estudio se examinaron los posibles efectos preventivos que ejerce sobre la peroxidación lipídica no enzimática ascorbato-Fe<SUP>++</SUP> dependiente de microsomas y mitocondrias de testículo de rata. Se prestó especial atención a los cambios producidos sobre los ácidos grasos polinosaturados C20:4 n6 y C22:5 n6 y a las variaciones en la emisión lumínica durante el proceso de lipoperoxidación. Se observó que ambos ácidos polinosaturados fueron protegidos cuando la melatonina se incorporó en ambas membranas. La concentración de melatonina requerida para inhibir en un 70% y 85 % el proceso de peroxidación lipídica, fue 10.0 y 1.0 mM en microsomas y mitocondrias de testículo de rata respectivamente. Los valores de IC50 calculados a partir de la curva de inhibición de la melatonina sobre el rango de quimioluminiscencia fue más elevado en microsomas (4.98 mM) que en mitocondrias (0.67 mM). El efecto protector observado por la melatonina en mitocondrias de testículo de rata fue más elevado que el observado en microsomas, lo cual puede explicarse si consideramos que la suma de C20:4 n6 + C22:5 n6 en microsomas de testículo es 2 veces más elevado que el presente en mitocondria. 3. En un trabajo posterior se examinó la eficacia de la actividad antioxidante in vitro de α-tocoferol sobre la peroxidación lipídica dependiente de ascorbato-Fe ++ en microsomas y mitocondrias de testículo de rata. Nuevamente aquí se prestó especial importancia a los cambios producidos sobre los dos principales ácidos grasos polinosaturados C20:4 n6 y C22:5 n6. La peroxidación lipídica de microsomas y mitocondrias de testículo produjo una disminución significativa de ambos ácidos grasos. La emisión lumínica total fue similar en ambos tipos de organelas cuando los grupos peroxidados sin ascorbato-Fe<SUP>++</SUP> (control) y con ascorbato-Fe<SUP>++</SUP> (peroxidados) fueron comparados. Se observó que cuando los microsomas y mitocondrias de testículo de rata fueron incubados con ascorbato-Fe<SUP>++</SUP>, el ácido araquidónico fue protegido de forma más eficiente que el ácido docosapentaenoico a todas las concentraciones de α-tocoferol ensayadas. El máximo porcentaje de inhibición alcanzado en ambas organelas fue aproximadamente de 70 %, correspondiente a una concentración de α-tocoferol comprendida entre 1 y 0.25 mM. Los valores de IC50 calculados a partir de la curva de inhibición de α- tocoferol sobre el rango de quimioluminiscencia fue más elevado en microsomas (0.144 mM) que en mitocondrias (0.078 mM). El efecto protector producido por α-tocoferol en mitocondrias de testículo de rata fue más elevado que el observado en microsomas, lo cual podemos explicar si consideramos que la suma de C20:4 n6 + C 22:5 n6 en microsomas de testículo es el doble que la observada en mitocondrias. Se propuso que la distinta vulnerabilidad a la peroxidación lipídica observada en microsomas y mitocondrias de testículo de rata es diferente debido a la diferente proporción de PUFAs presentes en dichas organelas. El índice de no saturación (UI) estuvo positivamente correlacionado con la proporción de dichos ácidos grasos de cadena larga. Estos resultados demuestran el efecto protector de α-tocoferol sobre la peroxidación lipídica en microsomas y mitocondrias de testículo de rata. 4. Finalmente, se evaluó el efecto protector in vitro de la N-acetil-serotonina sobre los PUFAs localizados en microsomas y mitocondrias de testículo de rata durante la peroxidación lipídica dependiente de ascorbato-Fe<SUP>++</SUP>. Se ensayaron concentraciones crecientes de N-acetil-serotonina (0 a 10 mM) y (0 a 1 mM) en microsomas y mitocondrias de testículo de rata, respectivamente.

Presentación en power point en la cual se reúne una serie de conceptos e imágenes relacionadas con el Sistema Sensorial El objetivo de esta presentación es estimular el estudio de los sentidos con un pensamiento mas amplio

33 h. / Existen diferentes tipos de células madre en la sangre del cordón umbilical: células hematopoyéticas, células mesenquimales y células progenitoras del tejido endotelial. Pero hay un cuestionamiento particular el cual es objeto de discusión y consiste en qué tipo de banco de células madre debe ser promovido; los bancos públicos o los bancos privados. La discusión es necesaria debido a que se presentan posiciones que sostienen criterios que se oponen uno a otro. La primera controversia bioética gira alrededor del cuestionamiento si es apropiado o no promover la creación de bancos para la conservación de sangre de cordón umbilical autóloga. En este sentido es necesario considerar antes que nada, qué probabilidades hay que las unidades de un cordón umbilical pueda ser usada en el futuro para el niño que donó dicha sangre. Para el análisis de la documentación se usaron fuentes primarias y secundarias. En el desarrollo de la investigación, se consideraron los principios éticos y de rigor científico y como una de las consideraciones finales, el fomento a través de medios y de organismos estatales, de una verdadera cultura de difusión de la necesidad de contribuir a la formación de bancos nacionales de sangre de cordón umbilical, tanto por parte de las autoridades, como para estimular la participación masiva de las parturientas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:03:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000412814-Texto+Completo-0.pdf: 570341 bytes, checksum: c9e6231d0926e5ded8d0c4095b48dedd (MD5) Previous issue date: 2009 / To gain a further insight into DNA repair mechanisms for oral squamous cell carcinoma (OSCC) in younger and older patients. Our main goal was to determine if young and older patients differ in their ability to repair doublestranded breaks (DSBs) by both Homologous Recombination (HR) and Nonhomologous End-Joining (NHEJ). We have functionally assessed doublestranded breaks using UT-SCC cell lines established from young (<40 yr. ) and older ( 40 yr) patients. We have examined global DNA damage using the Comet assay after cell exposure to ionizing radiation (IR). In the Comet assay, cells are embedded in agar, cell membranes are removed by lysis, the DNA is allowed to unwind, and electrophoresis is performed using an alkaline pH buffer. Loops of DNA around strand breaks are more relaxed, and they are pulled towards the anode, appearing to have a comet “tail”. Undamaged DNA remains tightly wound in the nucleoid, or comet “head”. Tail moments were used to measure the degree of DNA fragmentation. Cells were irradiated (20 Gy), and collected at different points in time. After electrophoresis, cells were stained with ethidium bromide, and observed under a fluorescent microscope. A total of 200 cells per sample were analyzed using the Komet image analysis system. HR and NHEJ analyses were performed using a plasmid-based repair assay, in order to measure the ability of the UT-SCC cell lines undergo DNA DSB repair. In order to assess global DNA DSB repair, three independent experiments were performed for all cell lines using the Comet assay, and no differences were found between lines derived from younger and older patients when comparing irradiated vs. nonirradiated cells. We have also observed that both young and old patients’ cell lines are able to repair DNA DSBs caused by ionizing radiation in about 24 hrs.To test whether there is a deficiency or compensation from one DSB mechanism, the analysis of homologous recombination and non-homologous end-joining was employed. We have observed that both young and old patients’ UT-SCC cell lines showed deficient double-stranded break repair with both mechanisms. However homologous recombination efficiency was largely compromised in UTSCC cell lines derived from older patients. / Com a finalidade de obter maiores conhecimentos sobre mecanismos de reparo de DNA no desenvolvimento do câncer bucal, foi avaliado o reparo da quebra da dupla fita de DNA (DSBs) em células de indivíduos com menos de 40 anos e com mais de 40 anos. O objetivo foi determinar se as células de carcinomas epidermóióides de boca de indivíduos com menos de 40 anos de idade e com mais de 40 anos diferem em relação à capacidade para reparar as DSBs por meio de ambos os mecanismos de reparo por recombinação, a recombinação homóloga (HR) e a junção de extremidades não homólogas (NHEJ). Foi acessada funcionalmente a quebra da dupla fita de DNA utilizando linhagens celulares UT-SCC desenvolvidas a partir de indivíduos com menos de 40 anos e com mais de 40 anos. Foi examinado o dano global de DNA pelo ensaio do cometa utilizando radiação ionizante (RI). Um total de 200 células por amostra foi analisado utilizando o sistema de análise de imagem, Komet software. Para a análise da capacidade das linhagens celulares UT-SCC repararem o dano ao DNA por HR e NHEJ, foi utilizado um ensaio com plasmídeo, descrito por Secretan et al. , 2004. No ensaio do cometa foram realizados três experimentos independentes para cada linhagem celular, e não foi observada diferença entre as linhas celulares provenientes de indivíduos com menos de 40 anos e com mais de 40 anos em relação ao reparo das DSBs de forma global. Quando foram comparadas células irradiadas versus células não-irradiadas, observou-se que ambas as linhagens de celulares foram capazes de reparar as DSBs causadas pela radiação ionizante em um período de 24 horas.Para testar se houve deficiência ou compensação de um mecanismo de reparo sobre o outro, foi realizada uma análise de HR e NHEJ, na qual se observou que tanto nas linhagens celulares de indivíduos com menos de 40 anos quanto nas dos com mais de 40 houve uma redução em ambos os mecanismos de reparo por recombinação, quando comparados à linhagem celular de ceratinócitos normais. Com base nos resultados, concluiu-se que as linhagens celulares de indivíduos com menos de 40 anos, bem como os com mais de 40 anos, têm seus mecanismos de reparo por recombinação reduzidos. Não há diferença estatisticamente significante na eficiência de recombinação NHEJ entre as linhagens celulares UT-SCC de indivíduos jovens e com mais de 40 anos. Há uma maior redução no reparo das DSBs por HR em linhagens celulares de indivíduos com mais de 40 anos.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:03:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000422803-Texto+Completo-0.pdf: 2994221 bytes, checksum: 7c29345e7e01926a972683bfed251f7d (MD5) Previous issue date: 2010 / The main aim of this study is to assess the potential therapeutic benefits of a mice bone marrow mononuclear cell (BMMC) transplant into an ataxia model in rats. To do so, we infused ibotenic acid bilaterally into the fastigial cerebellar nuclei of Wistar rats using a stereotaxic procedure. As control animals, we infused saline instead of ibotenic acid (sham group) or submitted some animals to the same procedures without intracerebellar infusions (naive group). Three days after surgery, we conducted the motor assessment using the rotarod test (using both fixed and accelerated speed protocols) and the wire suspension test. In comparison to the control groups, the rats that were given ibotenic acid had shorter latencies to fall in both protocols of the rotarod test, and also a shorter phase in which the fall occured in the accelerated one. In the fourth day, the lesioned animals were designated to receive one of the following transplants: saline infusion, BMMCs or inactivated BMMCs. Both control groups received a saline infusion. In new motor assessments carried on days 7 and 14 postsurgery, we observed that in the latter the transplant of both BMMCs and inactivated BMMCs increased the phase and latency to fall in the accelerated rotarod test, as well as the latency to fall in the fixed rotarod test, yelding a performance similar to the control groups. The lesioned group that received a saline infusion as a transplant remained with the hindered performance across the later tests. There was no difference in the wire suspension test regarding either the presence or the absence of fastigial lesions or the transplant type. In the end of the experiment, we couldn’t visualize any difference between any of the lesioned groups regarding the histological lesions at a histological level in the three lesioned groups. Hence, we demonstrated that a xenotransplant of mouse BMMCs can improve the motor performance in an ataxia model induced with the excitotoxic lesion of the fastigial nucleus of rats. However, it was not possible to assess if that effect involves neuronal repopulation and trophic action of the stem cells or is mediated by mechanisms related to the immunological response of the host. / O objetivo deste trabalho é avaliar o potencial do transplante de células mononucleares da medula óssea (CMMO) de camundongos reverter o déficit motor em um modelo de ataxia em ratos. Para isto, utilizou-se a cirurgia estereotáxica a fim de infundir ácido ibotênico bilateralmente no núcleo fastigial do cerebelo de ratos Wistar. Nos animais controle, infundiu-se salina ao invés de ácido ibotênico (sham) ou submeteu-se alguns animais aos mesmos procedimentos sem nenhuma infusão (naive). Três dias após a cirurgia, realizou-se o teste de marcha em cilindro giratório (rotarod, em uma versão com velocidade fixa e outra com aceleração progressiva) e o teste de suspensão em fio. Verificou-se que os animais que recebem ácido ibotênico apresentam menor latência de queda no teste do rotarod executado com ambos os protocolos, e menor fase de queda no protocolo acelerado, quando comparado aos controles. No quarto dia, os animais lesionados foram designados para um dos seguintes tratamentos, todos pela via venosa: salina, CMMO ou CMMO inativadas. Os animais controle receberam transplante de salina. Realizou-se nova avaliação do comprometimento motor 7 e 14 dias após a cirurgia estereotáxica. Verificou-se que o transplante de CMMO ou CMMO inativadas aumentou a latência e a fase de queda no teste do rotarod executado com o protocolo acelerado, bem como a latência de queda no teste executado com o protocolo fixo quando executados 14 dias após a cirurgia, havendo desempenho semelhante aos controles. O grupo com lesão que recebeu transplante de salina não apresentou melhora em nenhum parâmetro e momento dos testes. Não houve diferença no teste de suspensão em fio, em função da lesão ou do transplante. Ao final do experimento, em análise histológica, não se observou diferença no aspecto das lesões entre os grupos que tiveram o núcleo fastigial lesionado. Assim, demonstramos que um xenotransplante de CMMO de camundongos em ratos pode melhorar o desempenho motor em um modelo de ataxia induzido pela lesão excitotóxica bilateral do núcleo fastigial, sem ser possível, entretanto, identificar se tal efeito deve-se à repopulação neuronal e ação trófica das células tronco ou envolve outros mecanismos relacionados com a resposta imunológica do hospedeiro.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000440859-Texto+Completo-0.pdf: 1769440 bytes, checksum: 1b3b990746636f5c1f4b9a971b320293 (MD5) Previous issue date: 2012 / Introduction: As a chronic disease which is highly prevalent, epilepsy has an important impact on the affected person's psychic/cognitive functioning and their family and social relationships. Among refractory epilepsies, epilepsy of the temporal lobe (ETL) is the most frequent in adults. Studies about lesions on the hippocampus and their effects found that patients with ETL presented verbal and visual memory deficits, depending on the affected hemisphere. Refractoriness to clinical treatment leads to the recommendation of surgery when it is seen that up to that point there have not been any other therapeutic alternatives available. In this context, there is a glimpse of a new treatment possibility for refractory epilepsies, using stem cells. These present a large capacity for proliferation and auto-renovation and the capacity to respond to external stimuli and give rise to different, more specialized cell lines. Objectives: To evaluate the effect of autologous stem cell transplants of bone marrow on the memory functions of patients with refractory epilepsy of the mesial temporal lobe. Patients and Methods: The selection of patients was done at the Outpatient Center for Clinical Epilepsy Research at PUCRS São Lucas Hospital [Ambulatório de Pesquisa Clínica em Epilepsia do Hospital São Lucas da PUCRS]. The 13 patients submitted themselves to therapy, and they were evaluated before and after the stem cell treatment (3 and 6 months after). The tests utilized for neuropsychological evaluation (pre and post-therapy) include the Wechsler Memory Scale – revised (WMS-R), the Rey Auditory Verbal Learning Test (RAVLT) and the Taylor Complex Figure. Results and Conclusions: The results indicate a significant increase in the neuropsychological scores over time. In six out of seven utilized tests, the increase of average score obtained was significant. In only one test (visual reproduction I – WMS R), the increase showed limitrofe statistical significance (between 5% and 10%). Given the favorable evolution of those patients analyzed, the stem cell transplant showed itself to be feasible, safe and with important perspectives for rehabilitation as well as psychosocial and professional reinsertion. / Introdução: A epilepsia, enquanto condição crônica de alta prevalência tem impacto importante no funcionamento psíquico/cognitivo e nas relações familiares e sociais da pessoa acometida. Entre as epilepsias refratárias, a epilepsia do lobo temporal (ELT) é a mais freqüente em adultos. Estudos sobre lesões no hipocampo e seus efeitos, constataram que pacientes com ELT apresentam déficits de memória verbal e visual, dependendo do hemisfério acometido. A refratariedade ao tratamento clínico, leva à indicação cirúrgica, visto que até o momento, não estão disponíveis outras alternativas terapêuticas. Neste contexto, se vislumbra uma nova possibilidade de tratamento para as epilepsias refratárias, utilizando-se células-tronco (CT). Estas apresentam grande capacidade de proliferação e auto-renovação e capacidade de responder a estímulos externos dando origem a diferentes linhagens celulares mais especializadas. Objetivos: Avaliar o efeito do transplante autólogo de células-tronco da medula óssea (CTMO) nas funções de memória de pacientes com epilepsia refratária do lobo temporal mesial. Pacientes e Métodos: A seleção dos pacientes foi realizada no Ambulatório de Pesquisa Clínica em Epilepsia do Hospital São Lucas da PUCRS. Os 13 pacientes que se submeteram à terapia, foram avaliados antes e após o tratamento com células-tronco (3 meses e 6 meses depois). Os testes utilizados para avaliação neuropsicológica: Escala de Memória Wechsler-revisada (WMS-R), Teste de Aprendizado de Memória Verbal de Rey (RAVLT) e Figura Complexa de Taylor. Resultados e Conclusões: Os resultados indicam um aumento significativo nos escores neuropsicológicos ao longo do tempo. Em seis dos sete testes utilizados, o acréscimo no escore médio obtido foi significativo e, em apenas um teste (WMS R visual imediato), o acréscimo apresentou significância estatística limítrofe (entre 5% e 10%). Dada a evolução favorável dos pacientes analisados, o transplante de CTMO mostrou-se factível, seguro e com perspectivas importantes para a reabilitação e reinserção psicossocial e profissional.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:04:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000423613-Texto+Completo-0.pdf: 493712 bytes, checksum: f0aaf16c071b57eefd3ee2352c888ec8 (MD5) Previous issue date: 2009 / Cutaneous malignant melanoma(CMM) currently ranks among the neoplasms with the highest increasing annual incidence rates in the world. Several factors are under scrutiny to serve as prognostic markers of cmm such as Breslow thickness, Clark levels, presence of ulceration and cell proliferation rate. The former has received especial relevance in the last studies published as an useful factor to determine positivity of the sentinel lymph node. Nevertheless, its potencial as an isolated variable has not been thoroughly appreciated. The aim of this study was to explore possible relations between Cellular Proliferation Rate (CPR) and Sentinel Lymph Node (SLN) positivity. It was performed, for instance, a transversal study involving consecutive biopsies of 109 patients enrolled in the Melanoma Program of HSL- PUCRS between October 2006 and November 2008 .Chi- square test and Binary Logistic Regression (BLR) were used to assess potential predictive variables for patient outcome, that is positivity or negativity of SLN biopsy. Breslow thickness ( p= 0,004) and Clark levels (p= 0,047) showed independent value for outcome in patients under the age of 40 years with Breslow thickness between 1-2 mm. The Cellular Proliferation Rate showed a close relation with the expected outcome when BLR was performed with an association of 0,7%. CPR may eventually prove itself as an independent variable in a group of seleted patients with intermediate Breslow thickness and young age ( under 40 years). / O melanoma maligno cutâneo se encontra entre as neoplasias que mais aumentam em incidência anual no mundo. Vários fatores vêm sendo estudados na determinação de prognóstico, entre eles, a espessura de Breslow, os níveis de Clark, a presença de ulceração e a taxa de proliferação celular. Esta última vem ganhando importância nas últimas publicações, como um fator capaz de determinar a positividade de linfonodo sentinela, além do prognóstico. Pouco tem sido estudado, no entanto, seu papel enquanto variável isolada. Este trabalho tem por objetivo estudar a existência de relação preditora entre a Taxa de Proliferação Celular (TPC) e a Positividade do Linfonodo Sentinela ( PLS). Foi realizado, para tanto, estudo transversal envolvendo a avaliação dos exames anatomopatológicos de 109 pacientes atendidos pelo Programa Melanoma do HSL-PUCRS no período de Outubro de 2006 até Outubro de 2008.Foi realizado teste de Chi-Quadrado e Regressão Logística Binária visando identificação de variável com capacidade preditora de desfecho, ou seja, Positividade ou Negatividade de Linfonodo Sentinela. As variáveis que demonstraram valor independente em relação ao desfecho foram a Espessura de Breslow ( p = 0,001) e Níveis de Clark ( p = 0,047). A Taxa de proliferação celular apresentou relação inferior a 5%, com o valor de “ p ” mais próximo do desejado ( p = 0,07) em pacientes com Breslow 1-2 mm e idade inferior a 40 anos. Em conclusão, o taxa de proliferação celular dos melanomas malignos cutâneos não mostrou relação com o desfecho pretendido enquanto variável independente. Este fenômeno estatístico nos leva a crer que a TPC é o que chamamos de variável de grupo, ou seja, contribui junto com um grupo de variáveis para um determinado desfecho. É possível que, em um grupo selecionado de pacientes com espessura intermediária ( 1-2mm ) e idade jovem ( abaixo de 40 anos), se possa predizer a positividade ou não de um gânglio previamente a realização de pesquisa de linfonodo sentinela.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:05:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000431052-Texto+Completo-0.pdf: 2074520 bytes, checksum: 2dae42f616032d577c099f0636f82081 (MD5) Previous issue date: 2010 / Objectives: evaluation of retinal function after transplantation of bone marrow mononuclear cells (BMMCs) in sodium iodate model of retinal degeneration. Methods: the BMMCs were obtained from GFP+ transgenic mice. The retinal degeneration was induced with intravenous administration of 25 mg/kg in C57Bl/6 mice (n=18). Three days after injury animals received transplants via intracarotideal infusion of bone marrow mononuclear cells, or bone marrow mononuclear cells lysed with liquid nitrogen. Animals that received saline served for control. For assessing retinal function, electroretinography was performed in 7 and 16 days after transplantation. Histological analysis of retinal injury was performed on the day 16. The migration and incorporation of transplanted cells was evaluated with PCR 1 hour and 16 days after transplantation. Results: the amplitude and implicit time of b-wave and a-wave were significantly different when comparing the pre-injury and 2 days after sodium iodate. The averages after treatment showed no significant difference between groups or in different time points in each treatment. The PCR were positive in both right and left eyes for 1 hour and 16 days after transplantation. Retinal histology analysis showed severe damage in the central retina. Conclusions: the model of retinal degeneration used was capable of inducing large retinal lesion size and severity. No potential electroretinogram recovery was detected after transplantation of BMMCs. However, the presence of BMMCs in the injuries sites after carotid infusion encourages further studies to investigate the possibility of retinal regeneration of these cells and their therapeutic potential. / Objetivos: avaliar a funcionalidade da retina após o transplante de células mononucleares da medula óssea (CMMOs) em um modelo experimental de degeneração retiniana induzida com iodato de sódio (NaIO3).Métodos: as células para o transplante foram obtidas de camundongos transgênicos GFP+. A degeneração retiniana foi induzida com a administração intravenosa de 25 mg/kg de NaIO3 em camundongos C57Bl/6. Três dias após a indução da lesão os grupos de animais (n=6 para cada grupo) receberam, via infusão intracarotídea, transplante de 1x106 CMMOs ou 1x106 CMMOs lisadas com nitrogênio líquido. Animais que receberam solução salina serviram como controle. No 7° e no 16° dia após a infusão, a funcionalidade da retina dos animais foi avaliada com eletrorretinografia (eletrorretinograma - ERG). Foram realizados processamento histológico e PCR para análise. Resultados: a amplitude e o tempo implícito das componentes a e b do ERG mostraram alteração significativa quando comparados os períodos pré-lesão e 2 dias pós-lesão. Os ERGs obtidos no 7° e 16° dia após o transplante não apresentaram diferença significativa nos parâmetros avaliados quando comparados os tratamentos entre si, e cada tratamento ao longo do tempo. O resultado da PCR foi positivo para 1 hora e 16 dias após a infusão de células mononucleares. A análise histológica da retina mostrou lesões severas na retina central. Conclusões: o modelo de lesão retiniana com o NaIO3 se mostrou capaz de induzir lesão de grande extensão e gravidade. Não houve recuperação dos potenciais do ERG após o transplante de CMMOs. No entanto, a presença das CMMOs na retina, após infusão carotídea, incentiva novos estudos para investigação da possibilidade de regeneração retiniana com estas células e do seu potencial terapêutico.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000447381-Texto+Completo-0.pdf: 1128253 bytes, checksum: d5ebf0da0d18404190c4e67763e48457 (MD5) Previous issue date: 2013 / Sepsis, a medical condition that affects 18 million people per year worldwide, is characterized by a generalized inflammatory state caused by infection. The widespread activation of coagulation pathways and inflammation progresses to multiple organ failure, the collapse of the circulatory system (septic shock) and death. Despite decades of research and numerous clinical trials, little progress has been made in developing new treatments and mortality rates are virtually the same in the last 20 to 30 years. As such, sepsis remains a difficult opponent for surgeons and their patients, so the search for new therapeutic alternatives becomes strictly essential. Recently stem cells have emerged as a promising therapy for a variety of diseases, including cardiovascular diseases, neurodegenerative disorders, peripheral vascular disease, renal disease, and several others. Its beneficial effects are due mainly to their ability to connect to injury and inflammation, to attenuate the inflammatory response, and accelerate tissue healing and neoangiogenesis due to noxious stimuli. Considering this therapeutic potential, this study aimed to evaluate whether these cells could lead to immune response back into balance, reducing the pathophysiology of sepsis and thereby increase the survival time in mice using an experimental model of sepsis. Our results demonstrated that treatment with mesenchymal stem cells was able to increase survival time of the animals that were tested. This effect is due to the ability of these cells to modulate the immune response providing a smaller reduction in tissue injury and apoptotic cells. These findings demonstrate that mesenchymal stem cells have therapeutic potential and can function as a possible future treatment for sepsis. / Sepse, uma condição médica que afeta 18 milhões de pessoas por ano no mundo, é caracterizada por um estado inflamatório generalizado causado por uma infecção. A ativação generalizada de vias de coagulação e inflamação evolui para disfunção de múltiplos órgãos, o colapso do sistema circulatório (choque séptico) e morte. Apesar de décadas de pesquisas e numerosas experimentações clínicas, pouco progresso tem sido observado no desenvolvimento de novos tratamentos e as taxas de mortalidade são praticamente as mesmas nos últimos 20 a 30 anos. Como tal, a sepse continua sendo um difícil adversário para cirurgiões e seus pacientes, logo, a busca por novas alternativas terapêuticas torna-se estritamente essencial. Recentemente as células-tronco têm emergido como uma terapia promissora para uma variedade de patologias, incluindo doenças cardiovasculares, neurodegenerativas, doença vascular periférica, doença renal, e várias outras. Seus efeitos benéficos estão relacionados principalmente às suas capacidades de se conectarem a lesões e inflamações, para atenuar a resposta inflamatória e acelerar a cicatrização de tecidos e de neoangiogênese devido a estímulos nocivos. Considerando esse potencial terapêutico, o presente estudo teve por objetivo avaliar se essas células poderiam conduzir a resposta imune de volta ao equilíbrio, atenuando a fisiopatologia da sepse e dessa forma aumentando o tempo de sobrevida em camundongos, utilizando um modelo de sepse experimental. Os resultados demonstraram que o tratamento com as células-tronco mesenquimais foi capaz de aumentar o tempo de sobrevida dos animais em estudo. Esse efeito observado deve-se à capacidade destas células de modularem a resposta imune, proporcionando uma menor lesão tecidual e a diminuição de células apoptóticas. Essas descobertas demonstram que as células-tronco mesenquimais têm potencial terapêutico e podem funcionar futuramente como um possível tratamento para a sepse.

Orientador : Profª. Drª. Silvia Maria Suter Correia Cadena / Coorientador : Prof. Dr. Attilio di Pietro / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências : Bioquímica. Defesa: Curitiba, 16/10/2015 / Inclui referências: fls.138-150 / Resumo: O carcinoma hepatocelular (CHC) possui uma alta taxa de mortalidade e apenas um quimioterápico, com eficiência limitada, está disponível para seu tratamento. Buscando potenciais drogas para o tratamento do CHC, neste estudo foram avaliados os efeitos de derivados 1,3,4-tiadiazóis mesoiônicos (MI-D, MI-J, MI-F e MI-2,4diF) em células de hepatocarcinoma humano (HepG2) e em hepatócitos de rato em cultura. A viabilidade das células HepG2, avaliada pelo método do MTT, foi reduzida em ~50% pelos derivados (25 ?M para MI-J, MI-F, MI-2,4diF e 50 ?M para MI-D - 24h). Esta citotoxicidade foi confirmada pelo aumento da atividade da enzima lactato desidrogenase (LDH) no meio extracelular, em ? 55, 24 e 16% após incubação com MI-D, MI-J e MI-F (25 ?M - 24 h), respectivamente. Nestas condições, análises por citometria de fluxo mostraram um aumento no número de células marcadas com anexina V e iodeto de propídio, de ?11, 76, 25 e 25 para MI-D, MI-J, MI-F e MI-2,4diF, respectivamente. O aumento na fragmentação do DNA também foi observado, em ?12, 9 e 8% para MI-J, MI-F e MI-2,4diF, respectivamente. Alterações morfológicas características de indução de apoptose foram observadas após incubação com todos os derivados (3h - 5 ?M). Nenhuma citotoxicidade foi observada quando células não-tumorais (hepatócitos de ratos) foram tratadas com os compostos na concentração de 25 ?M por 24 h. Neste estudo também se investigou a interação destes derivados com os principais transportadores responsáveis pela resistência aos tratamentos quimioterápicos: Pgp, ABCG2 e MRP1. MI-D, MI-4F e MI-2,4diF foram substratos de Pgp (RR= 2,4; 2,8 e 5,2), cuja atividade transportadora foi inibida por MI-J (? 13% - 30min). Todos os derivados inibiram tanto a atividade de ABCG2 (? 37, 21, 12 e 18 % para MI-D, MI-J, MI-4F e MI-2,4diF - 30min) quanto de MRP1 (? 8, 36, 10 e 20% para MI-D, MI-J, MI-4F e MI-2,4diF -30min). Ainda neste estudo, novos inibidores de ABCG2 foram desenvolvidos através de substituições apropriadas nos anéis do núcleo indeno[1,2-b]indol. Foram obtidos potentes inibidores de ABCG2 (4c, 4h, 4i, 4j, 4k - IC50= 0,21-0,49 ?M - N5 = fenetila) ou da caseína quinase II (CK2) (4a, 4p, 4e - IC50= 0,0025-0,36 ?M N5 = isopropila) quando o núcleo cetônico indeno[1,2-b]indol foi utilizado. Os derivados 4h, 4j, 4l e 4d apresentaram baixa citotoxicidade intrínseca (IG50 28-100 ?M), o que resultou em índices terapêuticos (IT) aceitáveis para utilização em modelos in vivo (IT= 98-430), entretanto, 4h, 4j, 4k não foram seletivos em relação à atividade inibitória em MRP1 (44, 87 e 86% - 10 ?M). A utilização de um núcleo fenólico indeno[1,2-b]indol resultou em inibidores com maior potência (5c, 5f, 5h- IC50= 0,15-0,16 ?M) e seletividade em CK2, Pgp e MRP1. Baixa citotoxicidade intrínseca (5c, 5f, 5h- IG50= 42-54 ?M) e alto IT (267-360) também foram encontrados. A partir dos resultados obtidos, conclui-se que derivados 1,3,4-tiadiazóis mesoiônicos e indeno[1,2-b]indóis fenólicos são candidatos promissores para futuras investigações in vivo visando o tratamento do CHC e a quimiosensibilização de tumores superexpressando ABCG2, respectivamente. Palavras-chave: Carcinoma hepatocelular. Células HepG2. Cultura primária de hepatócitos. Derivados 1,3,4-tiadiazóis mesoiônicos. Derivados indeno[1,2-b]indóis. Inibidores de ABCG2. / Abstract: Hepatocellular carcinoma (HCC) has a high mortality rate and only one chemotherapy drug is available for its treatment, which has limited efficacy. Aiming to find potential drugs for HCC treatment, in this study the effects of 1,3,4-thiadiazolium mesoionic derivatives (MI-D, MI-J, MI-F and MI-2,4diF) were evaluated on human hepatocellular carcinoma cells (HepG2) and primary rat hepatocytes. The viability of HepG2 was reduced by ~ 50% after treatment with derivatives (25 ?M for MI-J, MI-F and MI-2,4diF and 50 ?M for MI-D- 24h), as shown by MTT assay. The cytotoxicity was confirmed by the increase of lactate dehydrogenase (LDH) in cells supernatant at 55, 24 and 16% for MI-J, MI-4F and MI-2,4diF, respectively (at 25 ?M after 24 h). Under same conditions, all compounds increased the number of cell doubly-stained with annexin V and PI (76% for MI-J, 25% for MI-4F and MI-2,4diF, and 11% for MI-D), as demonstrated by flow cytometry. DNA fragmentation was also observed upon MI-J, MI-4F and MI-2,4diF treatment (by 12%, 9% and 8%, respectively). Morphological features of apoptosis induction were observed after incubation with all derivatives (3h - 5 ?M). It was not observed cytotoxicity when non-tumor hepatocytes were treated with derivatives (25 ?M - 24h). This study also investigated the interaction of these derivatives with the main transporters related to chemotherapy resistance: Pgp, ABCG2 and MRP1. MI-D, MI-4F e MI-2,4diF were Pgp substrates (RR = 2.4; 2.8 and 5.2), and MI-J inhibited the transporter activity of Pgp by 13% (30 min). All derivatives inhibited both ABCG2 (by ? 37, 21, 12 and 18 % for MI-D, MI-J, MI-4F e MI-2,4diF - 30min) and MRP1(? 8, 36, 10 and 20% for MI-D, MI-J, MI-4F e MI-2,4diF - 30min) transporter activity. New ABCG2 inhibitors were developed through substitutions in indeno[1,2-b]indoles scaffold. Potent ABCG2 (4c, 4h, 4i, 4j, 4k - IC50= 0.21-0.49 ?M - N5 = phenethyl) or casein kinase II (CK2) (4a, 4p, 4e - IC50= 0.0025-0.36 ?M N5 = isopropyl) inhibitors were obtained with a cetonic indeno[1,2-b]indoles scaffold. The derivatives 4j, 4l and 4d showed low intrinsic cytotoxicity (IG50 28-100 ?M), resulting in therapeutic ratio (TR) suitable for use on in vivo models (TR = 98-430). However, the derivatives 4h, 4j, 4k were not selective to ABCG2, also inhibiting MRP1 activity (44, 87 e 86% - 10 ?M). The derivatives of phenolic indeno[1,2-b]indoles were more potent (5c, 5f, 5h- IC50= 0.15-0.16 ?M) and selective to ABCG2 than cetonic derivatives. Low intrinsic cytotoxicity (5c, 5f, 5h- IG50= 42-54 ?M) and high TR (267-360) were also observed. These results suggest that 1,3,4-thiadiazolium mesoionic derivatives and indeno[1,2-b]indoles are promising candidates for future investigations on in vivo, targeting HCC treatment and chemosensitization of tumors overexpressing ABCG2, respectively. Keywords: Hepatocellular carcinoma. HepG2 cells. Primary rat hepatocytes. 1,3,4-thiadiazolium mesoionic derivatives. Indeno[1,2-b]indoles derivatives. ABCG2 inhibitors.