Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fish become more susceptible to stress and, consequently, to the onset of disease with the intensification of rearing. In an attempt to minimize this problem, farmers use agrochemicals that, besides harming the environment, can also affect producers and consumers health. The essential oil (EO) of Lippia alba may be a natural alternative since it has several effects that can reduce the physiological changes resulting from stress inherent in aquaculture. The influence of five diets containing L. alba EO (0, 0.25, 0.5, 1.0 and 2.0 mL of EO per kg of diet) on growth and antioxidant response in juvenile silver catfish was evaluated. After a feeding period of 60 days, the silver catfish were weighed and measured individually, and euthanized for sampling of brain, gill, liver, kidney and muscle. The oxidative stress biomarkers, thiobarbituric acid reactive substances (TBARS), lipid hydroperoxides (LOOH), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione peroxidase (GPx), glutathione reductase (GR), glutathione-S-transferase (GST) and non-protein thiols groups (NPSH), were determined. Growth parameters were not affected by the diet containing L. alba EO. As for biomarkers of oxidative stress, lipoperoxidation (LPO) evaluated through TBARS and LOOH was reduced by the EO in the gills, liver, kidney and muscle of silver catfish; no effect was observed in the brain. The diet with the EO improved the activity of antioxidant enzymes: SOD, CAT, GPx, GST and NPSH levels in the brain; SOD, GR and GST in the gills; CAT, GR and NPSH levels in the liver; CAT, GR and NPSH levels in the kidney; and SOD, GPx and NPSH levels in the muscle. These results indicate that L. alba EO does not interfere with growth, decreases LPO levels and increases antioxidant enzymes activities in most tissues evaluated, and thus may be added to silver catfish diet to increase the antioxidant response. / Com a intensificação do cultivo, os peixes se tornam mais susceptíveis ao estresse e, por consequência, ao aparecimento de doenças. Para tentar minimizar este problema, os produtores utilizam agroquímicos que, além de prejudicarem o meio ambiente, podem também prejudicar a saúde dos produtores e consumidores. O óleo essencial (EO, do inglês essential oil) da Lippia alba pode ser uma alternativa natural, pois apresenta diversos efeitos que podem reduzir as alterações fisiológicas decorrentes do estresse inerente à aquicultura. Neste estudo foi avaliada a influência de cinco dietas contendo o EO de L. alba (0, 0.25, 0.5, 1.0 e 2.0 mL de EO por kg de dieta) sobre o crescimento e a resposta antioxidante em juvenis de jundiás. Após um período de 60 dias de alimentação, os jundiás foram pesados e medidos individualmente e eutanasiados para amostragem do encéfalo, brânquias, fígado, rim e músculo. Os biomarcadores de estresse oxidativo, substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), hidroperóxidos lipídicos (LOOH), superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx), glutationa redutase (GR), glutationa-S-transferase (GST) e o conteúdo dos grupos tióis não proteicos (NPSH) foram determinados. A dieta contendo o EO de L. alba não influenciou o crescimento. Quanto aos biomarcadores de estresse oxidativo, o EO diminuiu a lipoperoxidação (LPO) avaliada através do TBARS e dos LOOH nas brânquias, fígado, rim e músculo do jundiá, não mostrando nenhum efeito sobre a LPO no encéfalo. A dieta com o EO aumentou a atividade das enzimas antioxidantes, SOD, CAT, GPx, GST e o conteúdo de NPSH no encéfalo; SOD, GR e GST nas brânquias; CAT, GR e o conteúdo de NPSH no fígado; CAT, GR e o conteúdo de NPSH no rim e SOD, GPx e o conteúdo de NPSH no músculo, em comparação ao grupo controle. Estes resultados indicam que o EO de L. alba não interfere no crescimento, diminui a LPO e aumenta a atividade das enzimas antioxidantes na maioria dos tecidos avaliados, podendo ser adicionado à dieta de jundiás para aumentar a resposta antioxidante.

Methylmercury (MeHg) is a potent neuro and nephrotoxicant in several animal species including humans, particularly during their development. The purpose of this study was to investigate the effects of aqueous seed extract of Syzygium cumini (L.) Skeels (Scc) on the acute MeHg treatment in neonatal rats. Neonatal rats (P2) received orally a single dose of MeHg (10 mg/kg) and also two doses of Scc. After two days, the effects of this treatment were investigated in the cerebral cortex, hippocampus, kidney, liver and urine samples of rats. We observed that N-Acetyl-β-d-glucosaminidase (NAG) activity in the kidney and urine was higher in MeHg-group when compared with the control group. Similarly, the lipid peroxidation levels were higher in the liver and kidney as well as the Adenosine deaminase (ADA) activity increased in the hippocampus, kidney and liver. These results indicate that increased NAG and ADA activities, as well as thiobarbituric acid reactive species (TBARS) levels may play a critical role in MeHg nephrotoxicity. The most relevant finding in our investigation was that acute MeHg treatment in neonatal rats caused liver and renal impairment and Scc was able to prevent such effects. It appears that mechanisms related to scavenging activity of Scc could be involved with its protection effect. Key words: Methylmercury; Syzygium cumini; N-Acetyl-β-d-glucosaminidase; rat; adenosine deaminase / O metilmercúrio (MeHg) é um agente tóxico potente tanto para o sistema nervoso central como para o renal. Provoca danos nos seres humanos e em ratos, particularmente durante o estágio de desenvolvimento. Neste estudo, ratos em desenvolvimento (P2) receberam uma dose única de MeHg (10 mg/kg), por via oral e/ou duas doses do extrato aquoso de sementes de Syzygium cumini (L.) Skeels (Scc). Após dois dias (P4), foram investigados os efeitos deste tratamento no córtex cerebral, hipocampo, rim, fígado e urina. Observamos que a atividade da N-acetil-β-d-glicosaminidase (NAG) nos rins e na urina foi maior no grupo que recebeu MeHg, quando comparado com o grupo controle. Da mesma forma, os níveis de peroxidação lipídica foram maiores no fígado e rim e a atividade da adenosina deaminase (ADA) encontrou-se elevada no hipocampo, rins e fígado, nos ratos tratados com MeHg. Estes resultados indicam que o aumento da atividade da NAG e da ADA, bem como os níveis das espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), desempenham um papel importante como marcadores de nefrotoxicidade causada pelo MeHg. Assim, o achado mais relevante na nossa investigação foi a de que o tratamento agudo com MeHg em ratos neonatos pode provocar nefrotoxicidade e a administração do Scc pode reverter estes efeitos provavelmente devido as propriedades antioxidantes de Scc.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The main groups of secondary metabolites of Glechon spathulata Benth. were evaluated by a phytochemical screening and the volatile oil obtained by hydrodistillation was analyzed by GC-MS. Volatile oil, ethanolic crude extract and hexanic, chloroformic, ethyl acetate and butanolic fractions of G. spathulata were submitted to the lethality test against Artemia salina Leach., to the antimicrobial activity by bioauthographic assay and broth microdilution. Antioxidant activity by DPPH in thin-layer chromatography (TLC) and spectrophotometric assay were also evaluated. Flavonoids, tannins, sterols and/or triterpenoids, saponins, anthocyanic pigments, volatile and fixed acids were found in G. spathulata. The GC of the oil revealed the presence of 9 constituents. All samples presented Artemia salina toxicity (LC50<1000 μg/ml). The volatile oil showed antimicrobial activity evaluated by bioauthographic assay against Gram-positive and Gram-negative bacteria and against Candida albicans, the crude extract didn t show activity against the tested microorganisms in same conditions of assay with volatile oil. Volatile oil, hexanic and ethyl acetate fractions showed good inhibitory activity against Gram-positive and Gram-negative bacterial cultures. Through DPPH method all the samples showed antioxidant activity by TLC, by spectrophotometric method, ethyl acetate, butanolic fractions and volatile oil showed excellent antioxidant activity with IC50 7,99 μg/ml; 11,75 μg/ml and 20,59 μg/ml respectively. / Os principais grupos de substâncias de Glechon spathulata Benth. foram avaliados por uma análise fitoquímica e o óleo volátil obtido por hidrodestilação foi analisado por CG-EM. O óleo volátil, o extrato bruto etanólico e as frações hexânica, clorofórmica, acetato de etila e butanólica de G. spathulata foram submetidos ao teste de letalidade frente a Artemia salina Leach., à atividade antimicrobiana por bioautografia e microdiluição em caldo. A atividade antioxidante pelo DPPH em cromatografia em camada delgada (CCD) e pelo ensaio espectrofotométrico também foi avaliada. Flavonóides, taninos, esteróis e/ou triterpenos, saponinas, pigmentos antociânicos, ácidos voláteis e fixos foram encontrados em G. spathulata. A CG do óleo revelou a presença de 9 constituintes. Todas as amostras apresentaram toxicidade frente à Artemia salina (CL50<1000 μg/ml). O óleo volátil apresentou atividade antimicrobiana avaliada por bioautografia contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas e contra Candida albicans, o extrato bruto não apresentou atividade contra os microrganismos testados nas mesmas condições do ensaio com o óleo volátil. O óleo volátil, as frações hexânica e acetato de etila mostraram boa atividade inibitória contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Através do método do DPPH, todas as amostras mostraram atividade antioxidante por CCD e pelo método espectrofotométrico, as frações acetato de etila, butanólica e o óleo volátil demonstraram excelente atividade antioxidante com CI50 de 7,99 μg/ml; 11,75 μg/ml e 20,59 μg/ml respectivamente.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Diet fatty acids (FA) are fundamental to the phospholipids structure and function of cell membranes, in which long chain polyunsaturated FA (PUFA) increase its fluidity, while the trans FA (TFA) to make it more rigid. Also, the barrier function and hydration are highly dependent on the skin composition and structure, as well as the organization of lipids in the cell matrix. In recent years, the ozone layer depletion has increased human exposure to ultraviolet radiation (UVR), inducing deleterious effects on skin homeostasis. Moreover, lifestyle habits and eating patterns, especially in Western countries, has shown an increasing consumption of processed foods rich in AGT, whose cutaneous consequences do not present scientific validation. Whereas the skin health is partially related to the lipids that compose it, this study was designed to evaluate the effect of supplementation of different oils or fat in distinctlife periods of rodents on oxidative damage acute and chronic exposure to UVR-induced. Male Swiss mice weanling were supplemented daily (3g/kg, po) with soybean oil (C-SO; rich in n-6 PUFA), fish oil (FO; rich in n-3 PUFA) or hydrogenated vegetable fat (HVF; rich in TFA) until 90 days old and the dorsal skin was acutely exposed to UVR. The FO supplementation showed n-3 PUFA incorporation in mice skin, while the groups supplemented with soybean oil and HVF showed incorporation of n-6 PUFA and TFA, respectively. Such skin incorporations exerted influences on the development of UVR -induced oxidative damage in the mice skin and HVF group showed the highest protein carbonylation (PC) levels and lipid peroxidation, accompanied by larger skin thickening (edema), lower catalase (CAT) activity and cell survival. While soybean oil was associated with a partial prevention of damage observed in HVF group, FO supplementation prevented cutaneous oxidative damage UVR-induced. Sequentially, second and third experimental protocols were developed with the first and second generations offsprings born adult rats under daily supplementation of the same oils used in experiment 1 (SO, FO and HVF) and at 90 days old, each experimental group were exposed to UVR 3x/ week for 12 weeks. Animals first generation offspring (experiment 2) FO supplemented treated showed higher incorporation of n-3 FA and lower n-6/n-3 ratio in the dorsal skin, while the HVF group showed greater incorporation of TFA. Biochemical analyzes showed higher PC levels, per se, and smaller functionality of mitochondrial enzymes and decrease of some antioxidant defenses ((reduced glutathione (GSH) and vitamin C (VIT C)) in the dorsal skin HVF supplemented group. After UVR exposure, the same experimental group showed higher wrinkles scores, increased reactive species (RS) generation and PC levels, which were accompanied by decrease in GSH and VIT C skin levels. In contrast, FO group showed lower wrinkles scores and skin thickening after UVR exposure, besides lower PC levels and increased of the functionality of mitochondrial enzymes. Additionally, we observed a positive correlation between the RS generation-UVR induced and skin thickness, wrinkles and PC levels, while a negative correlation between the RS generation-UVR induced and functionality of mitochondrial enzymes, and between PC levels and GSH, SOD and VIT C.Animals of the second generation offspring (experiment 3) supplemented with FO showed higher n-3 FA incorporation and lower n-6/n-3 ratio in the dorsal skin, while TFA were incorporated only in HVF group. The latter experimental group showed biochemical changes per se: high RS generation, lower functionality of mitochondrial enzymes and increased Na+K+-ATPase activity. UVR exposure increased skin wrinkling andRS generation, besides reduced functionality of mitochondrial enzymes and GSH levels in HFV group. FO groupUVR exposure showed reduced skin thickness and PC levels, besides increase CAT activity and the preservation of Na+K+-ATPase activity. Whereas the n-3 PUFA compete with n-6 PUFA for desaturases and elongases activities, which originate from long chain n-3 or n-6 PUFA, respectively, which are incorporated into the cell membranesphospholipids.Such incorporation allows the cyclooxygenase-2 (COX-2) activity over them, originating active metabolites of the series 3 (prostaglandins (PG) and thromboxanes (TX)) or series 2 (PG and TX series 2), respectively. Series 3 metabolites are less pro-inflammatory than those of series 2, which may partly explain our findings. Moreover, to date, no study has shown the metabolites generation of AGT, even their influence on inflammation and pro-oxidant in cell membranes. How TFA have been reported to inhibit the desaturases activity, we suggest that the presence of AGT in the membranes may be inhibiting the n-3 PUFA incorporation and, thus, reduce the metabolites generation, which are known to be beneficial. Taken together, the data presented in this thesis suggest that healthy eating habits that include reduced intake of foods rich in AGT and the inclusion of n-3 PUFA, accompanied by care front sun exposure can contribute to the prevention of skin diseases and skin diseases associated with UV exposure. / Os ácidos graxos (AG) provenientes da dieta são fundamentais para a estrutura e função dos fosfolipídeos das membranas celulares, nas quais os AG poliinsaturados (AGPI) de cadeia longa aumentam a sua fluidez, enquanto os AG trans (AGT) a tornam mais rígida. Nos últimos anos, a diminuição da camada de ozônio tem aumentado a exposição humana à radiação ultravioleta (RUV), causando consequências deletérias sobre a homeostase cutânea. Por outro lado, os hábitos de vida e os padrões alimentares, especialmente em países ocidentais, tem apresentado um consumo crescente de alimentos processados ricos em AGT, cujas consequências cutâneas ainda não apresentam validação científica. Considerando que a saúde da pele está parcialmente relacionada aos lipídios que a compõem, este estudo foi desenvolvido para avaliar a influência da suplementação de diferentes óleos ou gordura em diferentes períodos da vida de roedores sobre os danos oxidativos induzidos pela exposição aguda e crônica à RUV. Camundongos Swiss machos recém desmamados foram diariamente suplementados (3g/kg; p.o.) com óleo de soja (rico em AGPI n-6) (grupo controle), óleo de peixe (rico em AGPI n-3) ou gordura vegetal hidrogenada (GVH; rica em AGT) até 90 dias de idade, quando a pele da região dorsal foi agudamente exposta à RUV. A suplementação com óleo de peixe foi relacionada à incorporação de AGPI n-3 no tecido cutâneo dos camundongos, enquanto os grupos suplementados com óleo de soja e GVH apresentaram incorporação de AGPI n-6 e AGT, respectivamente. Tais incorporações exerceram influências sobre o desenvolvimento de danos oxidativos induzidos pela RUV na pele dos camundongos, de modo que o grupo GVH mostrou maiores níveis de peroxidação lipídica e carbonilação protéica, acompanhados de maior espessamento da pele (edema), menor atividade da catalase (CAT) e viabilidade celular. Enquanto o óleo de soja foi associado a uma prevenção parcial dos danos observados no grupo GVH, a suplementação com óleo de peixe preveniu os danos oxidativos cutâneos. Sequencialmente, o segundo e terceiro protocolos experimentais foram desenvolvidos com a 1ª e a 2ª gerações de ratas adultas nascidas sob a suplementação diária dos mesmos óleos utilizados no experimento 1 (óleo de soja, óleo de peixe e GVH) e, aos 90 dias de idade, parte de cada grupo experimental foi exposto à RUV 3x/ semana, durante 12 semanas. Animais de 1ª geração (experimento 2) tratados com óleo de peixe apresentaram maior incorporação de n-3 FA e menor razão n-6/n-3 na pele dorsal, enquanto o grupo GVH mostrou maior incorporação de AGT. Análises bioquímicas mostraram um aumento dos níveis de proteína carbonil (PC), per se, menor funcionalidade das enzimas mitocondriais e diminuição de algumas defesas antioxidantes (glutationa reduzida (GSH) e vitamina C (VIT C)) na pele dorsal do grupo suplementado com GVH. Após exposição à RUV, este mesmo grupo experimental apresentou maior escore de rugas, maior geração de espécies reativas (ER) e níveis de PC, os quais foram acompanhados de uma diminuição dos níveis de GSH e de VIT C na pele dorsal. Contrariamente, o grupo óleo de peixe mostrou menor escore de rugas e espessamento da pele após exposição à RUV, além de apresentar menores níveis de PC e maior funcionalidade das enzimas mitocondriais. Adicionalmente, observou-se uma correlação positiva entre a geração de ER induzida pela RUV e a espessura da pele, rugas e PC, enquanto uma correlação negativa entre a geração de ER induzidas pela RUV e a funcionalidade das enzimas mitocondriais, e entre os níveis de PC e GSH, SOD e VIT C. Animais de 2ª geração (experimento 3) tratados com óleo de peixe apresentaram maior incorporação AG n-3 e menor razão n-6/n-3 na pele dorsal, enquanto que os AGT foram incorporados apenas no grupo GVH. Este último grupo experimental apresentou alterações bioquímicas per se: maior geração de ER, menor funcionalidade das enzimas mitocondriais e maior atividade da Na+K+ATPase. A exposição do grupo GVH à RUV aumentou a rugosidade da pele, aumentou a geração de ER e reduziu a funcionalidade das enzimas mitocondriais, além de diminuir os níveis de GSH. No grupo óleo de peixe, a exposição à RUV foi associada à menor espessura da pele e à redução dos níveis de PC, além do aumento da atividade da CAT e da preservação da atividade da Na+K+ATPase. Os AGPI n-3 competem com AGPI n-6 pela atividade das elongases e dessaturases, as quais originam AGPI de cadeia longa n-3 ou n-6, respectivamente, que são incorporados aos fosfolipídeos das membranas celulares. Tal incorporação permite a atividade da ciclooxigenase-2 (COX-2) sobre os mesmos, originando metabólitos ativos da série 3 (prostaglandinas (PG) e tromboxanos (TX) da série 3) ou da série 6 (PG e TX da série 2), respectivamente. Os metabólitos da série 3 são menos pró-inflamatórios que aqueles da série 2, o que pode em parte explicar nossos achados. Além disto, até o momento, nenhum estudo mostrou a geração de metabólitos de AGT, nem mesmo sua influência sobre o processo inflamatório e pró-oxidante nas membranas celulares. Como os AGT têm sido descritos por inibir a atividade das dessaturases, nós sugerimos que a presença de AGT nas membranas pode estar inibindo a incorporação de AGPI n-3 e, dessa maneira, reduzir a geração de seus metabólitos, os quais são reconhecidamente benéficos. Tomados em conjunto, os dados apresentados nesta tese sugerem que hábitos alimentares saudáveis, que inclui uma ingesta reduzida de alimentos ricos em AGT e a inclusão de AGPI n-3, acompanhado de cuidados frente à exposição solar, podem contribuir para a prevenção de afecções cutâneas e doenças de pele associadas à exposição UV.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Sitagliptin Phosphate is an oral anti-hyperglycemic belonging to a new class of medicine used in type 2 diabetes treatment, the dipeptidyl dipetidase -4 (DPP-4) enzyme inhibitors. This drug besides being safe and tolerated, stimulates the insulin secretion, lowers the glucagon release, delays the gastric emptiness and increases beta cells life. It is commercially available as covered pills. So far, there is not any monograph to analyze sitagliptin phosphate in its pharmaceutical form. In this work some methods were developed and validated to evaluate and quantify the drug. The methods used to quantify it were high pressure efficiency liquid chromatography (HPLC) and spectrophotometry. The system through HPLC was carried out in room temperature and in an isocratic way with Phenomenex C 18 (15 cm x 4.6mm) reverse phase column and the mobile phase composed by 0.025M pH 6.8 phosphate buffer: acetronytril (60:40, v/v) with 0.8 mL /min. flow. The detection was accomplished in PDA in 267nm. With the spectrophotometric method the solvent used was HCI 0.01N and its detection was accomplished in 267nm wave length. The methods show a good linearity, precision and accuracy and having no significant difference between them. Later, some dissolution tests were carried out with different bacthes of drug and with similar results. / O Fosfato de sitagliptina é um anti-hiperglicemico oral pertencente a uma nova classe de medicamentos utilizados para o tratamento da diabete tipo 2, os inibidores da enzima dipeptidil dipetidase-4 (DPP-4). Este medicamento além de ser seguro e bem tolerado estimula a secreção de insulina, diminuí a liberação de glucagon, retarda o esvaziamento gástrico e prolonga a vida das células beta. Encontra-se comercialmente disponível na forma de comprimidos revestidos. Não existem monografias até o presente momento para a análise do fosfato de sitagliptina em sua forma farmacêutica. Neste trabalho foram desenvolvidos e validados métodos para a avaliação e quantificação do fármaco. Os métodos utilizados para a quantificação do fármaco foram à cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE) e a espectrofotometria. O sistema por CLAE foi realizado em temperatura ambiente e de maneira isocrática com coluna de fase reversa Phenomenex C18 (15cm x 4.6mm) e fase móvel composta por tampão fosfato 0.025M pH 6.8 : acetonitrila (60:40, v/v) com vazão de 0.8mL/min. A detecção foi realizada no PDA em 267nm. No método espectrofotométrico o solvente utilizado foi o HCl 0.01N e sua detecção foi realizada no comprimento de onda de 267nm. Os métodos mostram boa linearidade, precisão e exatidão e não demonstraram diferença significativa entre eles. Posteriormente foram realizados testes de dissolução com resultados semelhantes com medicamentos de diferentes lotes.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The essential oils obtained from plants used as condiments are an important source of compounds with pharmacologic activity. In the present study, the antiviral activity of the essential oil of Ocimum basilicum L. (basil) and from the monoterpens camphor, 1,8-cineol and timol was tested against the bovine viral diarrhea virus (BVDV), while the essential oil of Rosmarinus officinalis L. (rosemary), Lippia graveolens HBK. (mexican oregano) and Thymus vulgaris L. (thyme) were tested against the feline calicivirus (FCV). The colorimetric test MTT ([3- (4.5-dimetilazol-2-il)-2.5-brometo of difeniltetrazolium]) was applied for the measurement of cytotoxicity, and the antiviral tests were performed by the plaque reduction assay. Three different protocols were applied: a) the virus was incubated with the essential oils or compounds before the inoculation into cells (virucidal assay); b) the cells were treated with the essential oils or compounds prior to virus inoculation; or, c) essential oils and compounds were added to the cells after virus inoculation and maintained for 72 hours. The results were expressed as CC50 (cytotoxic concentration to 50% of the cell culture), IC50 (inhibitory concentration to 50%) and SI (selectivity index = CC50/IC50). The best results were evidenced for the monoterpens camphor (SI=13.88) and the 1,8-cineol (IS=9.05) against BVDV. These results were obtained from the virucidal protocol and these compounds showed also the lower toxicicity towards the bovine kidney cells culture (Madin-Darby bovine kidney cells = MDBK) (CC50 = 4420.12 μg/mL and 2996.10 μg/mL, respectively). Regarding to the tests with FCV, the thyme essential oil showed the best results with SI=8.57 for c treatment. The basil essential oil had a moderate action in the a protocol (SI=6.54) and also for the c protocol (SI=6.86). In addition, the basil essential oil exhibited low levels of cytotoxicity towards the Crandel-Reese feline kidney cells (CRFK), with CC50 of 1300.21 μg/mL. In conclusion, the essential oils and monoterpens examined showed different levels of inhibitory activity on diverse moments of the viral infection. The antiviral activity demonstrated by the essential oils and compounds on BVDV and FCV may suggest a possible action on the hepatitis C virus (HCV) and norovirus (NoVs), respectively; since BVDV ande FCV shows several structural and replicative similarities to HCV and NoVs. / Óleos essenciais obtidos de plantas utilizadas como condimentos constituem uma fonte de compostos com promissoras atividades farmacológicas. No presente estudo, a atividade antiviral do óleo essencial de Ocimum basilicum L. (manjericão) e dos monoterpenos cânfora, 1,8-cineol e timol foi testada frente ao vírus da diarréia viral bovina (BVDV), enquanto que os óleos essenciais de Rosmarinus officinalis L. (alecrim), Lippia graveolens HBK. (orégano mexicano) e Thymus vulgaris L. (tomilho) foram testados frente ao calicivírus felino (FCV). O teste colorimétrico com MTT ([3- (4,5-dimetilazol-2-il)-2,5-brometo de difeniltetrazolium]) foi aplicado para a detecção de citotoxicidade, já os testes de atividade antiviral foram realizados através da metodologia de ensaio de redução de placas. Para este, três diferentes protocolos foram aplicados: o vírus foi incubado com os óleos essenciais ou compostos antes da infecção viral (ensaio virucida); as células foram pré tratadas com os óleos essenciais ou compostos antes da inoculação do vírus; ou as células infectadas foram incubadas com esses após as 2 horas de adsorção viral. Os resultados foram expressos como CC50 (concentração citotóxica para 50% do cultivo celular), CI50 (concentração inibitória para 50%) e IS (índice de seletividade = CC50/CI50). Os resultados de atividade frente ao BVDV evidenciaram, no geral, uma boa ação antiviral exercida pelos monoterpenos, sendo que a cânfora (IS=13,88) seguida do 1,8-cineol (IS=9,05) foram os compostos que apresentaram os mais elevados índices de seletividade obtidos no ensaio virucida, bem como a menor toxicidade frente às células de linhagem de rim bovino (Madin-Darby bovine kidney cells = MDBK) (CC50 = 4420,12 μg/ml e 2996,10 μg/ml, respectivamente). Em relação aos testes com FCV, o óleo essencial de tomilho mostrou os melhores resultados, com índice de 8,57 para o tratamento no qual os óleos essenciais foram adicionados às células antes da inoculação viral. Já o óleo essencial de alecrim, além de apresentar uma moderada ação nos ensaios virucida (IS=6,54) e de pós-tratamento (IS=6,86), exibiu baixos níveis de toxicidade em relação às células de linhagem de rim felino (Crandell-Reese feline kidney = CRFK), com CC50 de 1300,21 μg/ml. Dessa forma, conclui-se que os óleos essenciais e monoterpenos em estudo apresentaram algum nível de atividade inibitória em diferentes momentos da infecção viral.

Verbena litoralis Kunth belongs to the family Verbenaceae is native to South America and can be found in tropical and subtropical regions, mainly in temperate regions of the southern hemisphere and some temperate regions of the northern hemisphere. It is popularly known as gervãozinho of field or herb-of-father-caetano and used in traditional medicine against diarrhea, against fever and gastrointestinal disorders. It is a herbaceous perennial has erect stems, ovate leaves and quadrangular, ovate-lanceolate, lanceolate, spatulate or linear, its inflorescences are long and sparcely lilac. The aim of this study was to control physical and chemical quality of the aerial parts of the plant drug, perform the assay of polyphenols, flavonoids and tannins from the four seasons, extract essential oil, as well as submit these extracts together with the oil of V. litoralis to test antimicrobial activity. In quality control physicochemical conducted in four seasons found that the loss on drying and the percentage of foreign matter are in agreement with the values established for herbal drugs. The collection realized in the autumn had the highest content of total ash, insoluble ash and sulphated ash. The swelling index was higher in autumn and bitter index was higher in the winter. Dosages of polyphenols and tannins showed higher values in winter, while the flavonoid content was higher in the fall. In determination the in vitro antimicrobial activity of hydroethanolic extracts and essential oil of V. litoralis front of Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Providencia rettgeri, Streptococcus agalactiae, Micrococcus luteus, Staphylococcus intermedius, Proteus mirabilis, Klebisiella pneumoniae, Salmonella pullorum, Listeria monocytogenes, Enterococcus faecalis, Candida albicans, Cryptococcus neoformans and Aspergillus fumigatus were found that all bacteria showed sensitivity to the extracts of the four seasons, with the exception of Aspergillus fumigatus. The greater sensitivity of micro-organisms to the extracts was collection in the winter. The oil of V. litoralis showed antimicrobial activity against the Providence rettgeri, Streptococcus agalactiae, Micrococcus luteus, Staphylococcus intermedius and Klebisiella pneumonia and cis-chrysanthenol, neo-verbanol, isobornyl propanate, myrac aldehyde, ternine, isophyllocladene, phenyl ethyl anthranilate are the major compounds of the oil. / Verbena litoralis Kunth pertence à família Verbenaceae é nativa da América do Sul, podendo ser encontrada nas regiões tropicais e subtropicais, principalmente nas regiões temperadas do hemisfério sul e pouco nas regiões temperadas do hemisfério norte. É conhecida popularmente como gervãozinho-do-campo ou erva-de-pai-caetano e utilizada na medicina tradicional como antidiarréico, antifebrífugo e em desordens gastrintestinais. É uma planta herbácea perene, possui caule ereto, quadrangular e folhas ovadas, ovado-lanceoladas, lanceoladas, espatuladas ou lineares, suas inflorescências são longas e pouco densas de cor lilás. O objetivo deste trabalho foi realizar o controle de qualidade físico-químico das partes aéreas da droga vegetal, realizar o doseamento de polifenóis, flavonóides e taninos provenientes das quatro estações do ano, extrair o óleo essencial, assim como submeter esses extratos juntamente com o óleo de V. litoralis ao ensaio de atividade antimicrobiana. No controle de qualidade físico-químico realizado nas quatro estações do ano verificou-se que a perda por dessecação e a porcentagem de matéria estranha estão de acordo com os valores estabelecidos para drogas vegetais. A coleta realizada no outono apresentou o maior teor de cinzas totais, cinzas insolúveis e cinzas sulfatadas. O índice de intumescência foi mais elevado no outono e o índice de amargor foi maior no inverno. As dosagens de polifenóis e taninos apresentaram valores mais elevados no inverno, enquanto que o teor de flavonóides foi maior no outono. Na determinação da atividade antimicrobiana in vitro dos extratos hidroetanólicos e do óleo essencial de V. litoralis frente à Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Providência rettgeri, Streptococcus agalactiae, Micrococcus luteus, Staphylococcus intermedius, Proteus mirabilis, Klebisiella pneumoniae, Salmonella pullorum, Listeria monocytogenes, Enterococcus faecalis, Candida albicans, Cryptococcus neoformans e Aspergillus fumigatus foram verificadas que todas as bactérias apresentaram sensibilidade frente aos extratos das quatro estações do ano, com exceção de Aspergillus fumigatus. A maior sensibilidade dos micro-organismos para os extratos foi na coleta de inverno. O óleo de V. litoralis apresentou atividade antimicrobiana frente à Providência rettgeri, Streptococcus agalactiae, Micrococcus luteus, Staphylococcus intermedius e Klebisiella pneumoniae, sendo cis-crisantenol, neo-verbanol, isobornil propanato, mirac aldeído, ternine, isofilocladeno e fenil etil antranilato os compostos majoritários do óleo.

Fundação de Amparo a Pesquisa no Estado do Rio Grande do Sul / Gout attack is characterized severe joint pain and inflammation with concomitant accumulation of monosodium urate (MSU) crystals. However, gout and the mechanisms responsible for the acute attacks are poorly understood, leading to improper treatment of the patient and reducing the quality of life. Polyamines (putrescine, spermidine and spermine) are involved in inflammatory nociceptive processes and have not been investigated to date. Therefore, the aim of the present study was to investigate the involvement of polyamines in the development of acute gout attack. Arthritis score, a compound measure of joint compromise that considers edema formation, erythema and paw position, mechanical hyperalgesia and inflammatory parameters were measured in an acute gout attack model in male mice induced by intra-articular (i.a.) injection of MSU, H2O2, phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA), L-ornithine or polyamines (putrescine, spermidine, spermine). All these algogenic agents increased arthritis score in a dose-dependent manner with ED50 of 0.73 (0.4-1.1) mg/site for MSU, 2.3 (1.5-3.5) μmol/site for H2O2, 3.5 (2.1-5.6) nmol/site for PMA, 0.6 (0.3-1.1) μmol/site for L-ornithine, 0.8 (0.4-1.7) μmol/site for putrescine, 3.6 (2.6-5.1) μmol/site for spermidine and 0.1 (0.06-0.2) μmol/site for spermine. All tested algogenic agents caused joint edema and nociception, except putrescine, which increased only arthritis score. α-Difluoromethylornithine (DFMO; ornithine decarboxylase ODC - inhibitor, i.a.) prevented MSU-, H2O2-, PMA-, L-ornithine-induced nociception, but not edema. On the other hand, DFMO did not prevent spermine-induced edema and nociception. DFMO prevented MSU-induced increase of ODC activity. Our results indicate that polyamines contribute to acute gout attacks, suggesting that inhibitors of polyamine synthesis may be potential therapeutic agents for the treatment and prophylaxis of gout. / O ataque agudo de gota é caracterizado por dor intensa e inflamação combinados com o acúmulo de cristais de urato monossódico (MSU). No entanto, a gota e os mecanismos responsáveis pelos ataques agudos ainda estão mal compreendidos, levando ao tratamento inadequado dos pacientes e reduzindo a qualidade de vida. As poliaminas (putrescina, espermidina e espermina) estão envolvidas em processos nociceptivos inflamatórios, e não foram investigadas até o momento, por conseguinte, o objetivo do presente estudo foi investigar o envolvimento das poliaminas no desenvolvimento do ataque de gota aguda em camundongos. Para isso, o escore de artrite (conjunto de somatórios de medidas que considera a formação de edema, eritema e posição da pata tratada do animal), hiperalgesia mecânica e parâmetros inflamatórios foram medidos em um modelo de ataque agudo de gota em camundongos machos, induzidos por uma injeção intra-articular de (i.a.) MSU, H2O2, forbol 12-miristato 13-acetato (PMA), L-ornitina ou poliaminas (putrescina, espermidina, espermina). Todos os agentes algogênicos aumentaram o escore de artrite de um modo dose dependente com um DE50 de 0,73 (0,4-1,1) mg/sitio de MSU, 2,3 (1,5-3,5) μmol/sitio de H2O2, 3,5 (2,1-5,6) nmol/sitio para PMA, 0,6 (0,3-1,1) μmol/sitio para a L-ornitina, 0,8 (0,4-1,7) μmol/sitio para a putrescina, 3,6 (2,6-5,1) μmol/sitio para a espermidina e 0,1 (0,06-0,2) μmol/sitio para espermina. Todos os agentes algogênicos testados causaram edema articular e nocicepção, exceto a putrescina, que aumentou apenas o escore de artrite. α-Difluorometilornitina (DFMO; inibidor da ornitina descarboxilase - ODC) preveniu a nocicepção induzida por: MSU, H2O2, PMA, L-ornitina, mas não o edema. Por outro lado, DFMO não preveniu a nocicepção e o edema induzido por espermina. DFMO preveniu o aumento da atividade da ODC induzido por MSU. Os nossos resultados indicam que as poliaminas estão envolvidas no ataque agudo de gota, sugerindo que os inibidores da síntese de poliaminas podem ser potenciais agentes terapêuticos para o tratamento e profilaxia da gota.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Fluticasone propionate (FP) is a synthetic glucocorticoid with potent anti-inflammatory activity that has been effectively used for the treatment of seasonal and allergic perennial rhinitis, minimizing systemic activity. In the present study, the methods were developed and validaded for assessment of FP in pharmaceutical products. The analysis by reversed-phase liquid chromatography were performed using Shim-pack CLC-ODS column (150 x 4.6 mm), maintained at 35 °C. The mobile phase was consisted of acetonitrile/ methanol/ 0.01M phosphate buffer pH 4 (35:35:30), run at flow rate of 1 mL/min and using photodiode array detection at 240 nm. The chromatographic separation was obtained within 8 minutes and it was linear in the concentration range of 0.05-150 μg/mL (r2 = 0,9999). The method was successfully applied for the determination of FP in creams and nasal sprays pharmaceutical formulations. The micellar electrokinetic chromatography was also developed and validaded. The analyses were performed on a fused-silica capillary (50 μm i.d.; effective length, 40 cm) and background electrolyte consisted of 25 mM borate and 25mM SDS solution at pH 9. The capillary temperature was maintained at 35 °C and the applied voltage was 20 kV. The injection was performed using the hydrodynamic mode at 50 mbar for 6 s, with detection at 238 nm. The electrophoretic separation was obtained with migration time of 5.6 and 5.1 minutes for the FP and prednisolone acetate (internal standard), respectively, and with run time of 7 minutes. The method was linear in the concentration range of 2-80 μg/mL (r2 = 0.9956). The procedures were validated evaluating parameters such as the specificity, linearity, precision, accuracy, and robustness, limit of detection and limit of quantitation, whose results have met the requirements recommended. The proposed methods were used for the analysis of pharmaceutical products, demonstrating nonsignificative difference of the results (P > 0.05). Then, the procedures contribute to improve the quality control, assuring the safety and therapeutic efficacy of pharmaceutical formulations. / O propionato de fluticasona (PF) é um glicocorticóide sintético com potente atividade antiinflamatória utilizado efetivamente no tratamento de rinites alérgicas sazonais e perenes, minimizando a atividade sistêmica. No presente trabalho foram desenvolvidos e validados métodos para avaliação de PF em produtos farmacêuticos. As análises por cromatografia líquida em fase reversa foram realizadas utilizando coluna Shim-pack CLC-ODS (150 x 4,6 mm), mantida à 35ºC. A fase móvel foi composta de acetonitrila/ metanol/ tampão fosfato 0,01M pH 4 (35:35:30), eluída na vazão de 1 mL/min e detecção no ultravioleta a 240 nm. A separação cromatográfica foi obtida no tempo de 8 minutos, sendo linear na faixa de concentração de 0,05-150 μg/mL (r2 = 0,9999). O método foi aplicado para análise de PF em cremes e sprays nasais. Paralelamente, desenvolveu-se e validou-se método por cromatografia eletrocinética micelar. Executaram-se as análises utilizando capilar de sílica (comprimento efetivo de 40 cm e diâmetro de 50 μm) e solução eletrolítica composta de borato 25 mM e SDS 25 mM, pH 9. O capilar foi mantido a temperatura de 35ºC, e aplicada voltagem de 20 kV. O tempo de injeção foi de 6 s com pressão de 50 mbar e detecção no UV a 238 nm. Realizou-se a separação eletroforética com tempo de migração de 5,6 e 5,1 minutos para o PF e acetato de prednisolona (padrão interno), respectivamente, com tempo de corrida de 7 minutos. O método foi linear na faixa de 2-80 μg/mL (r2 = 0,9956). Os procedimentos foram validados, avaliando-se os parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão, robustez, limite de detecção e quantificação, cujos resultados cumpriram os requisitos preconizados. Os métodos propostos foram utilizados para análise de produtos farmacêuticos, demonstrando que não há diferenças significativas dos resultados (P > 0,05). Assim, os procedimentos pesquisados contribuem para aprimorar o controle da qualidade, garantindo a segurança e eficácia terapêutica das formulações farmacêuticas.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Oxidative stress is a process characterized by the antioxidant defense system decrease and/or an excessive reactive species (RS) production. RS are substances capable of attacking proteins, lipids and DNA. The oxidative damage caused to lipids is known as lipid peroxidation, which leads to the increase of malondialdehyde (MDA) levels. Oxidative stress is involved in the pathogenesis of many chronic diseases, including diabetes, cancer, Parkinson s disease and damaged tissue in exposed to chemical agents, such as neurotoxicity, hematotoxicity and nefrotoxicity. It is known that there is a close relation between organic solvents, present in paints, and oxidative stress. Thus, the body has an elaborate antioxidant defense system, the exogenous antioxidants, such as lipid soluble vitamins, and the endogenous system, such as antioxidant enzymes. In this study a method has been validated and optimized for simultaneous quantification of retinol, α-tocopherol, lycopene and β- carotene using high performance liquid chromatography (HPLC-UV/fluorescence). The analytical parameters of validation analyzed were linearity, precision, accuracy, recovery and limits of detection (LOD) and quantification (LOQ). For all the vitamins analyzed, the linear regression coefficients were > 0.99, CV% < 5%;% bias < ± 6% recovery > 92% and the LOD and LOQ values obtained were satisfactory for routine clinical application for all analytes. The validated method was applied to a group of occupationally exposed to paints (n = 45) and a non-exposed group (control group, n = 30). The results indicated that all vitamins, except vitamin E, were significantly lower in the exposed group. Moreover, the possible correlation between endogenous and exogenous antioxidants and lipid damage was evaluated. Quantifications were done to assess endogenous antioxidants, reduced glutathione (GSH) in erythrocytes, the enzymes superoxide dismutase (SOD) and catalase (CAT) in whole blood through spectroscopic methods, and malondialdehyde (MDA) levels in plasma through HPLC-VIS in both study groups, exposed (n=42) and controls (n=28). The biological monitoring was performed by measurement of blood toluene, since in previous studies, it was suggested that this solvent would be the major inducer of lipid peroxidation. Despite the low levels of toluene found, exposed workers presented higher levels of MDA and the antioxidant enzymes (SOD and CAT) activities were significantly elevated when compared with the control group; and this increase was accompanied by depletion of GSH levels. Also, several correlations were observed between MDA and the enzymatic (SOD and CAT) and non-enzymatic antioxidants (GSH), and with lipid-soluble vitamins as well, except vitamin E. Through statistical tests the antioxidants which have a greater influence on the levels of MDA were evaluated. Among the antioxidants tested, GSH and carotenoids (mainly β- carotene) were suggested as main responsible for the reduction of lipid peroxidation. Thus, it can be suggested that high intakes of exogenous antioxidants, such as carotenoids,, tend to decrease lipid damage in occupationally exposed individuals to solvents constituent of paints. / O estresse oxidativo é um processo caracterizado pela diminuição do sistema de defesa antioxidante e/ou por uma produção excessiva de espécies reativas (ERs). As ERs são substâncias capazes de lesar proteínas, lipídios e DNA. Quando os lipídios são atingidos ocorre um processo chamado de peroxidação lipídica que leva ao aumento nos níveis de malondialdeído (MDA). O estresse oxidativo está envolvido com a patogênese de muitas doenças crônicas, como diabetes, câncer, doença de Parkinson e em danos teciduais em expostos a agentes químicos, como neurotoxicidade, hematotoxicidade e nefrotoxicidade. Sabe-se que existe uma estreita relação entre os solventes orgânicos, presentes em tintas, e o estresse oxidativo. Diante disso, o organismo dispõe de um elaborado sistema de defesa antioxidante, os antioxidantes exógenos, como as vitaminas lipossolúveis e o sistema endógeno como enzimas antioxidantes. Dessa forma, nesse estudo foi primeiramente otimizada e validada metodologia para simultânea quantificação de antioxidantes exógenos: retinol, α-tocoferol, licopeno e β-caroteno, utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-VIS/fluorescência). Os parâmetros analíticos de validação analisados foram linearidade, precisão, exatidão, recuperação e limites de detecção (LD) e quantificação (LQ). Para todas as vitaminas analisadas, os coeficientes de regressão linear foram > 0,99; CV% < 5%; bias% < ± 6%; recuperação > 92% e os valores de LD e LQ obtidos foram satisfatórios para aplicação na rotina clínica. O método validado foi aplicado em um grupo de expostos ocupacionalmente a tintas (n=45) e um grupo de não expostos (controle, n=30). Os resultados indicaram que todas as vitaminas, exceto a vitamina E, foram significativamente menores no grupo exposto. Além disso, avaliou-se o possível efeito protetivo de antioxidantes exógenos e endógenos sobre o dano lipídico. Foram realizadas as dosagens dos antioxidantes endógenos, glutationa reduzida (GSH) em eritrócitos, das enzimas superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT) em sangue total por métodos espectrofotométricos e os níveis de malondialdeído (MDA) em plasma por CLAE-VIS nos dois grupos de estudo, expostos (n=42) e controles (n=28). A monitorização biológica foi realizada através da dosagem de tolueno sanguíneo, uma vez que, em trabalhos prévios, foi sugerido que este solvente seria o principal indutor de peroxidação lipídica. Apesar dos baixos níveis de tolueno sanguíneo encontrados, os trabalhadores expostos apresentaram níveis de MDA e atividade das enzimas antioxidantes (SOD e CAT) significativamente elevados, quando comparados com o grupo controle e esse aumento foi acompanhado de depleção nos níveis de GSH. Ainda, foram observadas várias correlações entre os níveis de MDA e os antioxidantes endógenos enzimáticos (SOD e CAT) e não enzimático (GSH) e ainda com as vitaminas lipossolúveis, exceto vitamina E. Através de testes estatísticos foram avaliados quais antioxidantes teriam uma maior influência nos níveis de MDA. Dentre os antioxidantes analisados, a GSH e os carotenóides (principalmente o β- caroteno) foram sugeridos como principais responsáveis pela redução da peroxidação lipídica. Com isso, pode-se sugerir que aumento nos níveis de carotenóides, via dieta, tendem a diminuir o dano lipídico em indivíduos ocupacionalmente expostos a solventes constituintes de tintas.