Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The quality of plant-derived drugs must be ensured through tests of authenticity (organoleptic features, macro and microscopic identification), purity and integrity (foreign matter, total ash, acid insoluble ash, loss on drying, microbiological contaminants and heavy metals) and also by qualitative and quantitative determinations of active (s) principle (s) and / or chemical (s) marker (s) characteristic (s) of the species. Many plant species are used in traditional medicine without scientific evidence of its pharmacological properties. The purpose of this work lies in the botanical characterization, physico-chemical and anti-inflammatory activity of Glechon spathulata. Among the macroscopic features of G. spathulata leaves stand out the spatulate form and subrevolute margin, finely crenulate in the middle-upper. Microscopically, the uniseriate epidermis shows straight to slightly sinuous cells, diacytic stomata, and non-glandular and glandular trichomes, dorsiventral mesophyll. Vascular bundles are collateral closed, and no crystals were identified. These features help to the botanical quality control of G. spathulata, and when analyzed in conjunction with its organoleptic properties, allow to ensure the authenticity of the sample. Furthermore, the procedures which measure the extractives content, particle size, volatile oil content, swelling index, bitterness and foaming index, and the chromatographic profile of crude ethanolic extract (CEE), its fractions and essential oil by thin layer chromatography (TLC), allow to verify the authenticity besides to reveal information about purity and integrity of this species. The chromatographic fingerprinting of CEE of G. spathulata by high performance liquid chromatography (HPLC) was carried out in order to determine the nature of the main compounds, and the presumptive identification of the flavonoids rutin and luteolin, also it allowed the verification of the major compound rutin. Besides the authenticity of the extract obtained from aerial parts, the chromatographic fingerprinting of G. spathulata enabled to monitor its quality and to characterize its phenolic compounds. Therefore, the significant anti-inflammatory activity observed by the oral treatment with CEE of G. spathulata in chronic inflammation in rats is probably exerted by polyphenolic compounds. The performed analyses were based on techniques described in literature, official textbooks and Brazilian legislation and were useful in establishing some parameters for the quality control of aerial parts of G. spathulata as raw material for the pharmaceutical and / or food industries. / A qualidade dos derivados de drogas vegetais deve ser assegurada através de testes de autenticidade (caracterização organoléptica, identificação macro e microscópica), pureza e integridade (matéria estranha, cinzas totais, cinzas insolúveis em ácido, perda por dessecação, contaminantes microbiológicos e metais pesados), e ainda por determinações qualitativa e quantitativa do (s) princípio (s) ativo (s) e/ou marcador (es) químico (s) característico (s) da espécie. Muitas espécies vegetais são utilizadas na medicina tradicional sem comprovação científica das suas propriedades farmacológicas. O objetivo deste trabalho reside na caracterização botânica, físico-química e atividade anti-inflamatória de Glechon spathulata. Entre as características macroscópicas das folhas de G. spathulata destacam-se a forma espatulada e a margem subrevoluta, crenada no meio-superior. Microscopicamente, destacam-se a epiderme uniestratificada com células retas a pouco sinuosas, estômatos diacíticos, tricomas tectores e glandulares, mesofilo dorsiventral, feixes vasculares do tipo colateral fechado com bainha parenquimática, que na nervura central é incompleta e constituída por esclerênquima, bem como a ausência de cristais. Estas características contribuem no controle botânico de qualidade de G. spathulata, quando analisadas em conjunto com suas propriedades organolépticas, permitem a autenticidade da amostra. Por outro lado, os teores extrativos, a granulometria, conteúdo de óleos voláteis, índices de intumescência, amargor e espuma, bem como o perfil cromatográfico do extrato bruto (EB), suas frações e do óleo essencial através da cromatografia em camada delgada (CCD), além de permitir a autenticidade revelam informações sobre a pureza e integridade desta espécie. O perfil cromatográfico do EB de G. spathulata estabelecido através da cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) permitiu determinar a natureza dos principais compostos presentes, bem como a identificação presuntiva dos compostos flavonóides rutina e luteolina, evidenciando como composto majoritário a rutina. Além da autenticidade do extrato obtido a partir das partes aéreas, o perfil cromatográfico de G. spathulata permite monitorar a sua qualidade e caracterizar os compostos fenólicos presentes, cujas ações farmacológicas são bem descritas na literatura. Desta forma, a significativa atividade anti-inflamatória verificada pelo tratamento via oral com o EB de G. spathulata na inflamação crônica em ratos, é provavelmente exercida pelos compostos polifenólicos presentes. As análises realizadas basearam-se em técnicas descritas na literatura, em compêndios oficiais e na legislação brasileira, e permitiram estabeler parâmetros úteis para o controle de qualidade das partes aéreas de G. spathulata como matéria-prima para a indústria farmacêutica e/ou de alimentos.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Human parathyroid hormone (hPTH) is a polypeptide with 84 amino acids and it is the most important peptide regulator for calcium and phosphate ion homeostasis, maintaining bone structure. Recombinant human parathyroid hormone, rhPTH (1-34), produced by DNA technology in Escherichia coli contain the active amino-terminal fragment of the full length hPTH and is currently being used worldwide for the treatment of osteoporosis at high risk of fractures in postmenopausal women and men with osteoporosis primary or hypogonadal. Reversed-phase liquid chromatography (RP-LC) and size exclusion liquid chromatography (SE-LC) methods were developed and validated for the assessment of recombinant human parathyroid hormone (rhPTH 1-34) in biopharmaceutical formulations. A gradient RP-LC method was carried out on a Zorbax 300 SB C18 column (150 mm x 4.6 mm i.d.), maintained at 40 ºC. The mobile phase A consisted of 0.1 M sodium sulphate buffer, pH 2.3, and the mobile phase B was acetonitrile. The SE-LC method was carried out on a BioSep-SEC-S 2000 column (300 mm x 7.8 mm i.d.), maintained at 25 ºC. The mobile phase consisted of 0.1 M phosphoric acid buffer, pH 2.5, run isocratically at a flow rate of 0.7 mL/min. Cromatographic separation was obtained with retention times of 12.2 min, and 13.2 min, and was linear over the concentration range of 1-250 μg/mL (r 2 = 0.9997) and 2-300 μg/mL (r 2 = 0.9993), respectively, for RP-LC and SE-LC, with photodiode array (PDA) detection at 214 nm. The limits of detection and quantitation were 0.44 and 1.47 μg/mL, respectively, for the RP-LC and 0.79 and 2.63 μg/mL, for the SE-LC. Specificity was established in degradation studies, which also showed that there was no interference of the excipients. Equally, the accuracy was 100.49% and 100.22%, with bias lower than 1.12% and than 0.81%. Moreover, the in vitro cytotoxicity test of related proteins and higher molecular weight forms showed significant differences (p< 0.05) compared to intact molecule. The validated methods were applied for the determination of rhPTH and related proteins in biotechnology-derived products, giving lower mean differences of the estimated content/potencies of 0.64% and 1.31% for the RP-LC and SE-LC related to the in vivo bioassay, and of 0.98% and 0.31% higher, compared to the in vitro cell culture assay, respectively. It is concluded that represents a contribution to establish new alternatives to monitor stability, quality control and thereby assure therapeutic efficacy of the biotechnology-derived medicine. / O hormônio da paratireóide humano (hPTH) é um polipeptídio constituído de 84 aminoácidos e tem função essencial como regulador da homeostase dos íons cálcio e fosfato, e manutenção da estrutura óssea. O hormônio da paratireóide humano recombinante, rhPTH (1-34), é produzido pela tecnologia do DNA em Escherichia coli, apresenta a sequência de aminoácidos responsável pela porção biologicamente ativa do paratormônio natural e é usado clinicamente para o tratamento da osteoporose de alto risco de fraturas em mulheres pósmenopausa e de homens com osteoporose primária ou hipogonadal. No presente trabalho foram desenvolvidos e validados métodos por cromatografia líquida em fase reversa (CL-FR) e por exclusão molecular (CL-EM) para a avaliação de rhPTH (1-34) em formulações de produtos biofarmacêuticos. No método por CL-FR, foi utilizada coluna Zorbax 300 SB C18 (150 mm x 4,6 mm d.i.), mantida a 40 ºC. A fase móvel A foi constituída por tampão sulfato de sódio 0,1 M, pH 2,3, e a fase móvel B por acetonitrila, eluídas em gradiente. No método por CL-EM foi utilizada coluna BioSep-SEC-S 2000 (300 mm x 7.8 mm d.i.), mantida a 25 ºC. A fase móvel foi contituída de tampão ácido fosfórico 0,1 M, pH 2,5, eluída em vazão isocrática de 0,7 mL/min. Para ambos os métodos utilizou-se detector de arranjo de diodos (DAD) a 214 nm. A separação cromatográfica foi obtida nos tempos de 12,2 e 13,2 min, sendo linear na faixa de concentração de 1-250 μg/mL (r2 = 0,9997) e 1-300 μg/mL (r2 = 0,9993), respectivamente, para os métodos por CL-FR e CL-EM. Os limites de detecção e quantificação foram 0,44 e 1,47 μg/mL, respectivamente, para o método por CL-FR e 0,79 e 2,63 por CL-EM. A especificidade foi avaliada em estudos de degradação, que também demonstraram que não houve interferência dos excipientes. A exatidão foi 100,49 e 100,22, com bias inferior a 1,12 e 0,81, respectivamente, para os métodos por CL-FR e CL-EM. Além disso, realizou-se o teste de citotoxicidade in vitro das formas degradadas, as quais apresentaram diferença significativa em relação a forma intacta (p<0,05). O métodos propostos foram aplicados para avaliação da potência de rhPTH (1-34) e de proteínas relacionadas em formulações biofarmacêuticas, e os resultados foram comparados com os bioensaios, observando-se diferenças das médias de teor/potência 0,64% e 1,31% inferiores para os métodos por CL-FR e CL-EM, em relação ao bioensaio in vivo, e 0,98% e 0,31% superiores, respectivamente, em relação ao in vitro. Contribuíu-se assim para estabelecer procedimentos que aprimoram o controle da qualidade, garantindo a segurança e eficácia terapêutica do produto biotecnológico.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work investigated the effect of intermittent hypoxic training (IHT) sessions under bodyweight, food intake and biochemical parameters in Wistar rats fed normo fat (NF) and high fat (HF) diets. Forty rats were divided in two groups, which were fed a NF or a HF diet. Afterwards the rats were subdivided in four groups and submitted to intermittent hypoxia (IH) or normoxia (N) sessions for 30 days. Groups formed: NF/N, NF/IH, HF/N and HF/IH. The groups submitted to IHT followed this protocol: 15 minutes hypoxia, 10-15% inspired O2 and 5 minutes for reoxigenation). Sham group was exposed to the same conditions but with normal O2 concentrations (21%). Bodyweight and food intake were measured every two days. The rats were anesthetized on day 31 and the blood was sampled by cardiac punction for analyses. The biochemical parameters analyzed were: total cholesterol (TC), triglycerides (TG), high density cholesterol (HDL), glucose, lactate dehidrogenase (LDH), alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), and muscle and hepatic glycogen. In regard to diets, the HF group promoted the biggest weight gain just in normoxia groups.The food intake decrease significantly in HF/IH subgroup compared to HF/N. Although the average of the corporal weight did not decrease significantly, the differences in percentages had shown a reduction in HF/IH subgroup. In the profile biochemist, the IHT only modified the LDH, increasing it in NF subgroup and the AST, diminishing it in HF subgroup. Our findings allow to suggest that the IHT can have a promising role in the prevention of the obesity and more studies are needed to evaluate its effect in the prevention/treatment of other diseases. / Este trabalho investigou o efeito de sessões de treinamento hipóxico intermitente (THI) sobre o peso corporal, consumo calórico e variáveis bioquímicas em ratos Wistar alimentados com dieta padrão (DP) ou dieta hipercalórica (DH). Quarenta ratos foram divididos em dois grupos e alimentados com DP ou DH. Na seqüência foram subdivididos em quatro grupos e submetidos às sessões de hipóxia intermitente (HI) ou normóxia (N) por 30 dias. Os grupos formados foram: DP/N, DP/HI, DH/N e DH/IH. Os grupos submetidos ao THI seguiram o seguinte protocolo: 15 minutos de hipóxia com a concentração de O2 inspirado variando entre 10 a 15% e 5 minutos para reoxigenação. Os grupos normóxia foram expostos às mesmas condições, porém com concentrações normais de O2 (21%). O peso corporal e o consumo de ração foram avaliados a cada dois dias. No dia 31, os animais foram anestesiados e o sangue foi coletado por punção cardíaca. As variáveis bioquímicas analisadas foram: colesterol total (CT), triglicerídeos (TG), lipoproteína de alta densidade (HDL), glicose, lactato desidrogenase (LDH), alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), glicogênio muscular e hepático. Com relação às dietas, a DH promoveu maior ganho de peso somente nos grupos em normoxia. A ingesta calórica diminuiu significativamente no subgrupo DH/HI. Embora a média do peso corporal não tenha diminuído significativamente, as diferenças em percentagens mostraram uma redução no subgrupo DH/HI. No perfil bioquímico, o THI alterou somente a LDH, aumentando-a no subgrupo DP e a AST, diminuindo-a no subgrupo DH. Nossos achados permitem sugerir que o THI pode ter um papel promissor na prevenção da obesidade e mais estudos são necessários para avaliar seus efeitos na prevenção/tratamento de outras patologias.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This work presents the development and validation of analytical methods to assay daptomycin injection. Daptomycin is a drug of a new class of antibiotics, known as cyclic lipopeptides. It was approved in USA in 2003 and in Brazil in 2009. Up to now, there are no reports about methods to assay the drug in pharmaceutical products, both in scientific literature or in official compendia. Methods to identify daptomycin in raw material were realized as solubility, melting point, infrared spectrophotometry (IR), ultraviolet spectrophotometry (UV) and differential scanning calorimetry (DSC) and they showed appropriate results. The following methods to assay daptomycin injection were developed and validated: high performance liquid chromatography (HPLC), microbiological assay (turbidimetric) and UV-spectrophotometry. All of them were validated according current guidelines, by the following parameters: specificity, linearity, precision, accuracy and robustness, being all the requirements met. The mean values of daptomycin assay by the three methods were: 100,23 ± 0,59% (HPLC); 100,96 ± 2,58% (turbidimetric assay) and 98,98 ± 1,35% (UV-spectrophotometry). They were compared by ANOVA, which indicated that HPLC and turbidimetric assay are interchangeable. The stress testing showed that daptomycin is very susceptible to alkaline medium and that the degradation follows first order kinetic, in the conditions adopted. It was found that the degradation product(s) of daptomycin do not have antimicrobial activity. Considering their characteristics, HPLC and turbidimetric assays can be used in routine quality control and in stability studies of daptomycin injection. / Este trabalho apresenta o desenvolvimento e validação de métodos analíticos para o doseamento da daptomicina injetável. A daptomicina é um antibiótico pertencente a uma nova classe de antimicrobianos, conhecidos como lipopeptídeos cíclicos. Foi aprovada para comercialização nos Estado Unidos em 2003 e no Brasil em 2009. Até o momento, não foram relatados métodos de quantificação para o fármaco em produtos farmacêuticos, tanto na literatura científica quanto em compêndios oficiais. Foram realizados métodos para a caracterização da matéria-prima como solubilidade, ponto de fusão, espectrofotometria no infravermelho (IV) e na região do ultravioleta (UV) e calorimetria exploratória diferencial (DSC), sendo que os mesmos permitiram a identificação do fármaco na matéria-prima. Os seguintes métodos para análise quantitativa da daptomicina injetável foram desenvolvidos e validados: cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), ensaio microbiológico (método turbidimétrico) e espectrofotometria na região do UV. Todos os métodos foram validados de acordo com as guias vigentes, frente aos parâmetros de especificidade, linearidade, precisão, exatidão e robustez, tendo sido atendidos os requisitos estabelecidos. Os teores médios de daptomicina na formulação em estudo, pelos métodos desenvolvidos (n=12/método) foram: 100,23 ± 0,59% (CLAE); 100,96 ± 2,58% (ensaio microbiológico) e 98,98 ± 1,35% (espectrofotometria no UV). Esses resultados foram comparados pelo teste de ANOVA, que indicou que os métodos de CLAE e microbiológico são intercambiáveis. Pelo estudo de degradação forçada verificou-se que a condição que induz à maior degradação do fármaco é o meio alcalino, sendo que a reação segue cinética de primeira ordem nas condições usadas. Constatou-se ainda que a amostra degradada da daptomicina não tem ação antimicrobiana. Pelas suas características, os métodos de CLAE e microbiológico podem sem usados no controle de qualidade de rotina e em estudos de estabilidade da formulação injetável de daptomicina.

The epilepsy is a neurological disorder manifested by recurrent unprovoked seizures, resulting in harmful effects on the patients. Epileptic seizures are generated from hypersincronic abnormal discharges of neurons, eventually resulting in irreversible damage. The consequences involve damages in the neurobiological, neurochemical, cognitive and psychological scopes. As a result, the objective of this study was to investigate the cognitive function (NEUPSILIN test), depression score (Hamilton Rating Scale) and inflammatory markers (TNF, IL1β, AChE), cell death (caspase 3) and DNA damage (PicoGreen) in epileptic patients, compared to individuals without the disease. The results showed significant memory damages in patients with epilepsy, as well as a high depression score. The inflammatory markers, cell death and DNA damage also were showed high. In addition, there was not observed significant correlation when were compared the seizures duration with memory impairment and depression score. There was also no significant correlation when comparing the depression scores and the enzyme acetylcholinesterase activity with memory impairment. In this way, the results of this study suggest that the neurophysiological changes caused by the epilepsy may be responsible for the memory damages and higher rates of depression in patients. Furthermore, it can be suggested that the seizures contribute to the development of neuroinflammation, releasing inflammatory mediators and, by this way, initiating a apoptotic cascade that culminates in the DNA damage. / A epilepsia é um distúrbio neurológico manifestado por recorrência de crises não provocadas, resultando em efeitos prejudiciais sobre os pacientes. As crises epilépticas são geradas a partir de descargas hipersincrônicas anormais dos neurônios, eventualmente resultando em danos irreversíveis. As consequências envolvem prejuízo no âmbito neurobiológico, neuroquímico, cognitivo e psicológico. Em virtude disso, o objetivo do presente estudo foi investigar a função cognitiva (teste NEUPSILIN), escore de depressão (Escala de Hamilton) e marcadores inflamatórios (TNFα, IL1β, AChE), de morte celular (caspase 3) e dano ao DNA (picogreen), em pacientes epilépticos, comparando com indivíduos sem a doença. Os resultados mostraram um prejuízo de memória significativo nos pacientes com epilepsia, bem como um elevado escore de depressão. Os marcadores inflamatórios, de morte celular e dano ao DNA também se apresentaram elevados. Além disso, não foi observada uma correlação significativa quando comparado o tempo de duração das crises epilépticas com o prejuízo da memória e o escore de depressão. Também não houve correlação significativa quando se comparou o escore de depressão e a atividade da enzima acetilcolinesterase com o prejuízo da memória. Desta maneira, os resultados deste estudo sugerem que as alterações neurofisiológicas provocadas pela epilepsia possam ser as responsáveis pelo prejuízo da memória e índices mais elevados de depressão nos pacientes. Além disso, pôde-se sugerir que as crises epilépticas contribuem para o desenvolvimento da neuroinflamação, liberando os mediadores inflamatórios e, desta forma, iniciando uma cascata apoptótica que culmina no dano ao DNA.

The increasing expansion of aquaculture, the stress on the animals in farming systems and the adverse effects caused by conventional anesthetics has encouraged the search for natural anesthetics, safer, more effective, with lower side effects and less residual waste. In this context, this work aimed to evaluate the anesthetic potential of the essential oil (EO) from leaves of Nectandra megapotamica in fat snook (Centropomus parallelus) and its chemical composition. For extraction of the EO, the leaves were separated in young (EO-Y) or old (EO-O) and chemical composition analysis was performed by GC/MS. The major constituents of the Y and O-EOs were: bicyclogermacrene (46.5/34.6%), α-pinene (26.8/26.2%), β-pinene (7.9/12.3%), and germacrene D (9.6/9.1%). In the first experiment, four different concentrations of each EO were tested in fat snook acclimated to two salinities (zero and 33 ppt) to evaluate anesthesia induction and recovery time. In the second experiment, two concentrations of EO-O were tested in fish acclimated to both salinities for the evaluation of stress parameters (glucose, lactate, Na+ and K+ plasma levels) caused by handling. In the third experiment, the fish were transported in plastic bags, supplied with both water salinities and two concentrations of EO-O for evaluation of water quality and mortality after transport. Mild sedation was achieved at 30 μL L-1 and deep anesthesia at 150 μL L-1 with both EO. The EO-O was not able to avoid the stress of handling, as evidenced by elevated glucose and lactate plasma levels observed in all treatments and controls. The treatments did not change significantly the plasma Na+ and K+ levels in the fish kept at both salinities. During transportation, the use of EO-O did not improve the water quality and post-transport mortality. On the contrary, the fish transported with the highest concentration of EO-O in seawater had significantly higher mortality than the other groups. In conclusion, the EO of N. megapotamica at the tested concentrations was efficient to induce sedation and anesthesia in fat snook, but was not effective in preventing the stress generated by handling and transport of this species. / A crescente expansão da aquicultura, o estresse imposto aos animais nos sistemas de cultivo e os efeitos adversos causados pelos anestésicos de uso convencional têm levado ao incentivo da pesquisa por anestésicos de origem natural, eficazes e mais seguros, com menos efeitos colaterais e menores efeitos residuais. Neste contexto, esta dissertação objetivou a avaliação do potencial anestésico do óleo essencial (OE) das folhas de Nectandra megapotamica em robalos-peva (Centropomus parallelus) e sua caracterização química. Para a extração do OE, as folhas foram classificadas em jovens (OE-J) e velhas (OE-V) e a análise de sua composição química foi realizada por CG/EM. Os constituintes majoritários foram: biciclogermacreno (46.5/34.6%), α-pineno (26.8/26.2%), β-pineno (7.9/12.3%) e germacreno D (9.6/9.1%). O potencial anestésico do OE foi avaliado através dos tempos de indução e recuperação da anestesia e as respostas bioquímicas geradas pelo manuseio e transporte dos peixes. No primeiro experimento, quatro concentrações de cada OE foram testadas em robalos-peva aclimatados a duas salinidades (0 e 33 ) para avaliar os tempos de indução e recuperação da anestesia. No segundo experimento, duas concentrações do OE-V foram testadas em robalos-peva aclimatados às duas salinidades para avaliar os parâmetros bioquímicos relacionados ao estresse (níveis plasmáticos de glicose, lactato, Na+ e K+) causado pelo manuseio. No terceiro experimento, os peixes foram transportados em sacos plásticos nos dois tipos de água e com duas concentrações do OE-V, com a finalidade de avaliar a qualidade da água e a mortalidade pós-transporte. Ambos OEs produziram sedação leve na concentração de 30 μL L-1 e anestesia profunda com 150 μL L-1. O OE-V não foi eficaz em evitar o estresse do manuseio, pois os elevados níveis plasmáticos de glicose e lactato observados nos controles também foram detectados nos grupos tratados. Os tratamentos não modificaram significativamente os níveis séricos de Na+ e K+ nos peixes em ambas as salinidades. Durante o experimento de transporte, o uso do OE-V não preveniu a deterioração da qualidade da água nem a mortalidade pós-transporte. Ao contrário, o grupo transportado com a concentração mais elevada do OE-V em água salgada apresentou uma mortalidade significativamente maior em relação aos demais grupos. Concluindo, o OE de N. megapotamica mostrou-se eficiente para indução de sedação e anestesia em robalos-peva nas concentrações testadas, mas não foi eficaz em prevenir o estresse gerado pelo manuseio e transporte nessa espécie.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / With advances in techniques of cell culture, stem cells (SCs) have to be used as an alternative therapy, firming the called regenerative medicine. An type of SC that has been studied is the Adipose-derived stem cell (ASCs) having identical characteristics of Mesenchymal Stem Cells (MSCs). To realize a transplanting of SCs, is necessary a large amount of cells, which makes such cultures are maintained in vitro for long periods of time, consequently these cells, with the repeated passages, enter cellular senescence, which prevents their use. Thus, some studies showed that the hydrogen peroxide (H2O2) can act to potentiate the proliferation of these cells. However, it is know that the oxidative metabolism can be associated with the senescence process. From this, the aim of this study was available the cito-genomic effect of the exposition of ASCs to H2O2 and to guaraná extract. Was realized isolation and cultivation of ASCs, that were, in forth passage, exposed to concentrations of 1-1000 μM of H2O2 and realized assays to available the cell viability, oxidative stress parameters, DNA damage and the apoptotic way of caspases. Moreover, senecents ASCs were treated with concentrations of 1-20 mg/mL of guaraná extract, being tested to the senescence reversion, cell viability, oxidative parameters, DNA damage and activity and expression of antioxidants enzymes. The results showed that the H2O2 cause cito-genomic damages to ASCs, with decrease in the cell viability mainly at the concentration of 200 μM, as well as increase the total reactive oxygen species (ROS) rate and lipidic peroxidation effect. The H2O2 also decreased the catalase activity in dose-dependent form e acted in the SOD activity. The treatments also conducted to a progressive increase of DNA damage. Moreover, in the eighth passage was observed the senescence of ASCs and the treatment with guaraná showed capacity to revert this phenotype in the concentration of 5 mg/mL, with reduction in the total ROS rate, lipoperoxidation, protein carbonyl and DNA damage, when compared with senescent ASCs untreated. The guaraná also was able to modulate the activity and expression of antioxidants enzymes, increasing the catalase, decreasing the total SOD and a light decrease in the glutathione peroxidase was observed. Therefore, it can be said that the acute exposition of no senescent ASCs to H2O2 was highly cytotoxic, demonstrating the high sensibility of these cells to this stressor agent. However, senescent ASCs treated with guaraná showed the potential effect of this extract in the reversion of the cellular senescence. / Com os avanços das técnicas de cultivo celular, as células tronco (CTs) passaram a ser utilizadas como forma de terapia alternativa, firmando a chamada medicina regenerativa. Um tipo de CT que vem sendo estudada são as Células Tronco derivada do tecido adiposo (ASCs) que possuem características idênticas as Células Tronco Mesenquimais (CTMs). Para realizar um transplante de CTs, se faz necessária uma grande quantidade de células, o que faz com que tais cultivos sejam mantidos in vitro por longos períodos de tempo, consequentemente tais células, com as repetidas passagens, entram em senescência celular, o que inviabiliza a sua utilização. Sendo assim, algumas pesquisas demonstraram que o peróxido de hidrogênio (H2O2) pode atuar potencializando a proliferação destas células. Contudo, sabe-se que o metabolismo oxidativo está intimamente associado ao processo de senescência celular. A partir disto, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito cito-genômico da exposição de ASCs ao H2O2 e ao extrato de guaraná. Foi realizado isolamento e cultivo de ASCs, as quais em quarta passagem foram expostas as concentrações de 1-1000 μM de H2O2 e realizados ensaios para a avaliação da viabilidade celular, parâmetros de estresse oxidativo, danos ao DNA e rota apoptótica das caspases. Além disso, ASCs senescentes foram tratadas com concentrações de 1-20mg/mL de extrato de guaraná, sendo testadas para a reversão da senescência, viabilidade celular, parâmetros oxidativos, de danos ao DNA e atividade e expressão de enzimas antioxidantes. Os resultados mostraram que o H2O2 causa danos cito-genômicos as ASCs, havendo redução da viabilidade celular principalmente a partir da concentração de 200 μM, assim como aumento da taxa total de espécies reativas de oxigênio (EROs) e peroxidação lipídica. O H2O2 também diminuiu a atividade da catalase de forma dose-dependente e atuou sobre a atividade da SOD. Os tratamentos também conduziram a um aumento progressivo dos danos ao DNA. Além disso, na oitava passagem foi observada a senescência das ASCs e o tratamento com guaraná mostrou capacidade de reversão deste fenótipo na concentração de 5 mg/mL, de forma a reduzir a taxa total de EROS, a lipoperoxidação, a carbonilação de proteínas e os danos ao DNA, quando comparado às ASCs não tratadas. O guaraná também foi capaz de modular a atividade e expressão de enzimas antioxidantes, aumentando a catalase, reduzindo a SOD total e uma leve redução na expressão da glutationa peroxidase. Logo, pode-se dizer que a exposição aguda de ASCs não senescentes ao H2O2 foi altamente citotóxica, demonstrando a alta sensibilidade destas células a este agente estressor. Todavia, ASCs senescentes tratadas com guaraná demonstraram o potencial efeito deste extrato na reversão da senescência celular.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Atherosclerosis is a chronic inflammatory disease that is characterized by the accumulation of lipids and fibrous elements in the intima layer of arteries of medium and large caliber. The cardiovascular diseases resulting from atherosclerosis, among them acute myocardial infarction and stroke are the leading cause of mortality and morbidity worldwide. Oxidative stress and oxidative modification of low density lipoprotein (LDL) have an important role in the development of this disease and so the inclusion of antioxidants in the diet may prevent the progression of atherosclerosis. The carotenoid norbixin (NBX), which is found in annatto seeds, have excellent antioxidant activity as demonstrated in several models of oxidative damage. In this context, the objective of this study was to evaluate the antioxidant, anti-inflammatory and antiatherogenic potential of NBX in a model of atherosclerosis in rabbits. Male New Zealand rabbits received regular chow (control) or an atherogenic diet (0.5% cholesterol) alone or supplemented with NBX (10, 30 or 100 mg/kg) for 60 days. The antioxidant enzyme activities, lipid profiles, oxidative stress and inflammatory markers and histopathological status were evaluated in the serum or aortic tissue. The atherogenic diet increased serum lipids, oxidized low-density lipoprotein (LDLox) levels and oxidized low-density lipoprotein antibody (LDLoxAB) levels, in addition to inducing lipid and protein oxidation in the aortic tissue. Supplementation with NBX caused 35% reduction in the levels of LDLoxAB, 69% in the levels of LDLox, 27% in the levels of TBARS and 46% in the levels of protein carbonyl induced by the atherogenic diet, besides increasing up to 88% the HDL levels. In atherosclerotic rabbits, the non-protein thiol group content and enzymatic activity of the antioxidants superoxide dismutase, catalase, glutathione reductase and thioredoxin reductase were increased in aortic tissue, whereas paraoxonase activity was reduced in serum. Supplementation with NBX restored up to 41% the increased levels of NPSH, 37% SOD activity, 45% CAT activity, 66% GR activity, 50% TrxR-1 activity induced by the atherogenic diet. NBX also restored 15% of PON1 activity inhibited by the atherogenic diet. The atherogenic diet also increased the serum levels of inflammatory markers and the ratio of the intima area to the media area in the aortic arch; these changes were not prevented by NBX. Thus, NBX supplementation improved the lipid profile, decreased oxidative stress and prevented changes in paraoxonase activity and in the antioxidant system in hypercholesterolemic rabbits, but did not prevent the formation of atherosclerotic plaques. These results support a beneficial role of NBX in the treatment of atherosclerosis by preventing oxidative events and by restoring antioxidant enzyme activity and paraoxonase activity. / A aterosclerose é uma doença inflamatória crônica caracterizada pelo acúmulo de lipídeos e elementos fibrosos na túnica intima das artérias de médio e grande calibre. As doenças cardiovasculares decorrentes da aterosclerose, dentre elas o infarto agudo do miocárdio e o acidente vascular cerebral são a principal causa de mortalidade e morbidade mundial. O estresse oxidativo e a modificação oxidativa da lipoproteína de baixa densidade (LDL) possuem um papel importante no desenvolvimento dessa doença. Por este motivo a inclusão de antioxidantes na dieta poderia impedir a progressão da aterosclerose. O carotenóide norbixina (NBX), presente nas sementes de urucum, possui excelente atividade antioxidante já demonstrada em diversos modelos de dano oxidativo. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antioxidante, anti-inflamatório e antiaterogênico da NBX em um modelo de aterosclerose em coelhos. Coelhos Nova Zelândia machos receberam ração regular (controle) ou uma dieta aterogênica (0,5% de colesterol) sozinha ou suplementada com NBX (10, 30 ou 100 mg/kg) por 60 dias. A atividade das enzimas antioxidantes, o perfil lipídico, os marcadores de estresse oxidativo e inflamação e as alterações histopatológicas foram avaliados no soro ou tecido aórtico dos coelhos hipercolesterolêmicos. A dieta aterogênica aumentou os níveis séricos de lipídios, de lipoproteína de baixa densidade oxidada (LDLox) e de anticorpos contra lipoproteína de baixa densidade oxidada (LDLoxAB), além de induzir a oxidação de lipídios e proteína no tecido aórtico. A suplementação com NBX reduziu em até 35% o aumento dos níveis de LDLoxAB, 69% dos níveis de LDLox, 27% dos níveis de TBARS e 46% dos níveis de proteínas carboniladas induzidos pela dieta aterogênica, além de aumentar em até 88% os níveis de HDL. Nos coelhos ateroscleróticos ocorreu uma elevação no conteúdo de grupos tiólicos não-protéicos (NPSH) e na atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa redutase (GR) e tioredoxina redutase (TrxR-1) no tecido aórtico, enquanto a atividade da enzima paraoxonase (PON1) foi reduzida no soro. A suplementação com NBX reduziu em até 41% o aumento dos níveis de NPSH, 37% da atividade da SOD, 45% da atividade da CAT, 66% da atividade da GR e 50% da atividade da TrxR-1 induzidos pela dieta aterogênica. A NBX também restaurou em 15% a atividade da PON1 inibida pela dieta aterogênica. A dieta aterogênica também aumentou os níveis séricos de marcadores inflamatórios e a relação entre a área da íntima e da média no arco aórtico e essas mudanças não foram prevenidas pela NBX. Assim, a suplementação com NBX melhorou o perfil lipídico, diminuiu o estresse oxidativo e impediu mudanças na atividade da paraoxonase e no sistema antioxidante em coelhos hipercolesterolêmicos, mas não impediu a formação de placas ateroscleróticas. Esses resultados indicam um papel benéfico da NBX no tratamento de aterosclerose, impedindo eventos oxidativo e restaurando a atividade das enzimas antioxidantes e da enzima paraoxonase.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Jatropha isabellei Müll Arg. belongs to the Euphorbiaceae family and is popularly known as yaguá-rova, turubiti and mamoneiro do campo. The decoction from the underground parts of this plant is popularly used to treat arthritis, gout, back pain and induce abortion. This work aims to determine the antioxidant capacity and antimicrobial activity of J. isabellei as well as to isolate the chemical constituents and to evaluate the popular use for gouty arthritis in an animal model. The underground parts of J. isabellei were collected in May 2008, in Cacequi, RS. The material is deposited in the herbarium of Department of Biology at Federal University of Santa Maria under register number SMDB 11.816. The plant material was dried, milled and macerated with the solvent ethanol:water (70:30, v/v). The fractions were obtained by fractionation of the crude extract with organic solvents of increase polarity (dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol). The ethyl acetate fraction showed the best antioxidant activity against the DPPH free radical with IC50 de 14.78 ± 1.10 Sg/mL and inhibition profile similar to ascorbic acid. This fraction also showed the best values in the determination of phenolic compounds, flavonoids and condensed tannins. The crude extract and butanolic fractions showed antioxidant activity proportional to the dosage of phenolics. The dichloromethane fraction did not showed good antioxidant capacity, but allowed the isolation of a mixture of triterpenes in first time reported for this species, sitosterol 3-O-β-D glucoside and stigmasterol. The lipid peroxidation induced by Fe (II) showed that all the fractions at concentrations of 50 and 100 Sg/mL were able to inhibit significantly the production of TBARS, reaching the baseline levels when compared to control. In the antimicrobial activity the dichloromethane fraction showed the best results against the fungi S. schenckii e F. proliferatum and against bacteria of the Micrococcus genus. The crude extract of J. isabellei and its alkaloid purified fraction showed antinociceptive and antiedematogenic effects in an animal gouty arthritis model, scientifically proving the popular use of this plant. / A espécie Jatropha isabellei Müll Arg pertence à família Euphorbiaceae e é conhecida popularmente como yaguá-rova, turubiti e mamoneiro do campo. A decocção das partes subterrâneas da planta é utilizada popularmente para tratar artrite, gota, dores nas costas e induzir o aborto. Este trabalho tem como objetivo determinar a capacidade antioxidante e a atividade antimicrobiana de J. isabellei, bem como, isolar consituintes químicos e avaliar o uso popular para atrite gotosa em modelo animal. As partes subterrâneas de J. isabellei foram coletadas em maio de 2008 em Cacequi, RS. O material testemunho está depositado no Herbário do Departamento de Biologia da UFSM catalogado sob número de registro 11.816. O material vegetal foi seco, moído e macerado com solvente etanol:água (70:30, v/v). As frações foram obtidas por fracionamento do extrato bruto com solventes orgânicos de polaridades crescentes (diclorometano, acetato de etila, n-butanol). A fração acetato de etila apresentou a melhor atividade antioxidante frente ao radical DPPH, com IC50 de 14,78 ± 1,10 Sg/mL e perfil de inibição semelhante ao ácido ascórbico. Esta fração também apresentou os melhores valores no doseamento de polifenóis, flavonóides e taninos condensados. O extrato bruto e a fração butanólica apresentaram atividade antioxidante proporcional ao doseamento dos ativos fenólicos. A fração diclorometano não apresentou boa capacidade antioxidante, mas proporcionou o isolamento de uma mistura de triterpenos relatados pela primeira vez na literatura para esta espécie, o sitosterol 3-O-β-D glicosídeo e estigmasterol. A indução da peroxidação lipídica por Fe(II) mostrou que todas as frações nas concentrações de 50 e 100 Sg/mL foram capazes de inibir significativamente a produção de TBARS alcançando os níveis basais, quando comparadas ao controle. Na atividade antimicrobiana, a fração diclorometano apresentou os melhores resultados frente aos fungos S. schenckii e F. proliferatum e frente a bactérias do gênero Micrococcus. O extrato bruto de J. isabellei e sua fração rica em alcalóides apresentaram efeitos antinociceptivos e antiedematogênicos em modelo animal de artrite gotosa, comprovando cientificamente o uso popular desta planta.

The Fabaceae family is comprised of approximately 18 000 species in 650 genera, with wide geographic distribution. The species Glycyrrhiza glabra (licorice) and Periandra dulcis (licorice-of-the-earth) belong to the family Fabaceae. Licorice displays a variety of pharmacological activities, such as antiulcer, antiinflammatory, antioxidant, antimicrobial, among others. In ethnomedicine Brazilian, P. dulcis is used as a substitute/adulterant G. glabra. This study aimed to differentiate plants for antioxidant activity, the HPLC chromatographic profile and the antimicrobial activity. Plants roots were ground and macerated using as solvent ethanol: water (70:30, v/v). Became fractionation of crude extracts with organic solvents of increasing polarity (CH2Cl2, EtOAc, n-BuOH). The crude extract and the fractions were investigated for the content of total polyphenols, the antioxidant activity by DPPH and the inhibition of lipid peroxidation by TBARS method. The content of total phenolics ranged from 70.29 ± 2.98 to 85.78 ± 1.08 mg/g for P. dulcis and 137.7 ± 1.37 to 83.26 ± 2.71 mg/g to G. glabra. In the DPPH assay, the dichloromethane fraction was most effective in capturing free radicals in both plants. The butanol fraction of P. dulcis showed the greatest inhibition of TBARS, with IC50 of 1.38 ± 1.22 μg/mL and better chart the decay. In G. glabra, the dichloromethane fraction showed the best IC50 of 1.91 ± 0.73 μg/mL, but the best graphic decay was observed in the crude extract. Using the method proposed by the Brazilian Pharmacopoeia Fourth Edition, it was possible to differentiate the plants through the HPLC profiles. The absence of glycyrrhizin acid is evidence of falsification. However, the method does not allow the identification of the plant adulterant. The antimicrobial activity of the species was similar, varying only for Saccharomyces cerevisiae and Fusarium proliferatum. The sub-fractionation of P. dulcis improved activity against Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa and Salmonella pullorum. / A família Fabaceae é constituída por aproximadamente 18000 espécies em 650 gêneros, com ampla distribuição geográfica. As espécies Glycyrrhiza glabra (alcaçuz) e Periandra dulcis (alcaçuz-da-terra) pertencem à família Fabaceae. Alcaçuz exibe uma variedade de atividades farmacológicas, como antiúlcera, antiinflamatória, antioxidante, antimicrobiana, entre outras. Na etnomedicina brasileira, P. dulcis é utilizado como substituto/adulterante de G. glabra. O presente trabalho objetivou a diferenciação das plantas quanto à atividade antioxidante, o perfil cromatográfico por CLAE e à atividade antimicrobiana. As raízes das plantas foram moídas e maceradas utilizando como solvente etanol:água (70:30, v/v). Fez-se fracionamento dos extratos brutos com solventes orgânicos de polaridades crescentes (CH2Cl2, AcOEt, n-BuOH). O extrato bruto e as frações foram investigados quanto ao conteúdo de polifenóis totais, atividade antioxidante pelo método do DPPH e inibição da peroxidação lipídica pelo método do TBARS. O conteúdo de fenóis totais variou de 70,29 ± 2,98 a 85,78 ± 1,08 mg/g para P. dulcis e 137,7 ± 1,37 a 83,26 ± 2,71 mg/g para G. glabra. No ensaio do DPPH, a fração diclorometano foi mais eficiente na captação de radicais livres em ambas as plantas. A fração butanólica de P. dulcis demonstrou a maior inibição dos níveis de TBARS, com IC50 de 1,38 ± 1,22 μg/mL e melhor decaimento gráfico. Em G. glabra, a fração diclorometano demonstrou o melhor IC50 de 1,91 ± 0,73 μg/mL, mas o melhor decaimento gráfico foi observado no extrato bruto. Utilizando o método proposto pela IV Edição da Farmacopéia Brasileira, foi possível diferenciar as plantas através dos perfis cromatográficos obtidos por CLAE. A ausência do ácido glicirrizínico é indício de adulteração. Contudo, o método não permite a identificação da planta adulterante. A atividade antimicrobiana das espécies foi semelhante, variando apenas para Saccharomyces cerevisiae e Fusarium proliferatum. O sub-fracionamento de P. dulcis melhorou a atividade frente à Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e Salmonella pullorum.