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Determinação do perfil farmacocinético e da biodisponibilidade sistêmica do ácido caurenoico em ratosMatos, Dalyara Mendonça de 23 September 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-09-23 / O ácido caurenoico é um diterpeno caurânico encontrado em diversas espécies vegetais tais como Mikania glomerata (guaco), Copaifera langsdorffi (copaíba) e Smallanthus sonchifolia (yacon). Essa substância apresenta ação tripanocida, larvicida, antimicrobiana, analgésica, anti-inflamatória, relaxante da musculatura lisa, hipotensora, diurética, hipoglicêmica e citotóxica. Por tratar-se de uma molécula promissora para o desenvolvimento de novos fármacos, o objetivo de nosso estudo é determinar o perfil farmacocinético e a biodisponibilidade oral do ácido caurenoico em ratos. Foram utilizados Ratos Wistar (n=6), aos quais foram administrados 50 ou 100 mg/kg de ácido caurenóico por via IV ou oral. Os
animais foram canulados pela veia jugular, permitindo a administração intravenosa do ácido caurenoico e coletas seriadas de sangue do tempo zero até 10 horas. A extração do ácido caurenoico do plasma foi realizada após acidificação com ácido acético 1% (v/v), seguida de precipitação de proteínas com acetonitrila. A quantificação do analito foi realizada utilizandose cromatografia líquida de alta eficiência com detecção ultravioleta (CLAE-UV), empregando-se as seguintes condições analíticas: coluna C18 (150 x 4.6 mm, 5 μm) mantida a 40°C, eluição isocrática com fase móvel composta por acetonitrila:água acidificada com ácido ortofosfórico 0,1% (70:30 v/v), fluxo de 1 mL/min, detecção em 200 nm e volume de injeção de 80 μL. A metodologia proposta foi validada e mostrou-se precisa, exata, robusta, confiável
e linear entre 0,75 e 100 μg/mL. A partir do decaimento plasmático dos animais que receberam 50 mg/kg do ácido caurenoico por via intravenosa, foram determinados os seguintes parâmetros farmacocinéticos: Cmax = 22,2 ± 1,6 mg/L, Vd = 14,5 ± 1,5 L/kg, CL = 17,7 ± 1,5 mL/min/kg, ASC = 2859 ± 278 mg/L.h e T1/2 = 9,5 ± 0.6 h. Os resultados obtidos apontaram que o ácido caurenoico, administrado por via intravenosa, apresentou um comportamento cinético linear e bicompartimental na dose testada. Não foram encontrados níveis quantificáveis da substância nas amostras provenientes de ratos tratados com 50 ou 100 mg/kg de ácido caurenoico, por via oral, impossibilitando a definição de sua biodisponibilidade oral e sugerindo uma baixa absorção por esta via. Este é o primeiro estudo farmacocinético desta molécula e, esta avaliação, mesmo que pré-clínica, pode contribuir para o processo de desenvolvimento de novos medicamentos a partir desse diterpeno. / Kaurenoic acid is a kaurane-type diterpene found in several plant species such as Mikania glomerata (guaco), Copaifera langsdorffi (copaíba) and Smallanthus sonchifolia (yacon). Previous studies described several biological activities for this substance such as antitrypanosomal, antimicrobial, analgesic, anti-inflammatory, smooth muscle relaxant, hypotensive, diuretic, hypoglycemic and cytotoxic. As this molecule represents a lead compound for the development of new drugs, the aim of our study is to determine the
pharmacokinetics profile and oral bioavailability of kaurenoic acid in rats. Wistar rats (n = 6) received 50 or 100 mg/kg of kaurenoic acid by intravenous or oral routes. The insertion of a cannula into the right external jugular vein of Wistar rats allowed intravenous administration of kaurenoic acid and collection of blood samples within predetermined time intervals. Extraction procedures from plasma consisted of acidification with 1% acetic acid (v/v), followed by precipitation of proteins with acetonitrile. The supernatant was submitted to highperformance liquid chromatography with UV detection (HPLC-UV) for quantification of
kaurenoic acid. The established analytical conditions were: C18 column (150 x 4.6 mm, 5 μm)
maintained at 40 ° C, isocratic elution with a mobile phase consisting of acetonitrile: acidified
water with 0.1% orthophosphoric acid (70:30 v/v), a flow of 1 mL/min, UV detection at 200 nm and injection volume of 80 μL. The proposed methodology proved to be precise, accurate, robust and reliable. The linearity range is between 0.75 and 100 μg/mL. Plasma decay of animals receiving an intravenously dose of 50 mg/kg allowed the determination of the following pharmacokinetic parameters: Cmax = 22.2 ± 1.6 mg/L; Vd = 14.5 ± 1.5 L/kg; CL = 17.7 ± 1.5 mL/min/kg; AUC = 2859 ± 278 mg/L.h and T1/2 = 9.5 ± 0.6 h. Kaurenoic acid administered intravenously showed a linear and two-compartment kinetic behavior at the
tested dose. As no measurable levels of substance were found in the samples from mice treated orally with kaurenoic acid, the determination of oral bioavailability was not possible, suggesting poor absorption through this route. This is the first pharmacokinetic study of this molecule and this preclinical assessment can contribute to the process of development of new drugs with this diterpene.
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Desenvolvimento, validação e aplicação de metodologia analítica em CLAE-UV para monitoramento terapêutico de metabólitos da azatioprina em pacientes com doença de CrohnRibeiro, Aline Corrêa 29 August 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-08-29 / Devido à importância que o sistema imune desempenha na doença de Crohn (DC), as tiopurinas são os imunomoduladores mais indicados na terapia. Entretanto, as tiopurinas, como a Azatioprina (AZA) e seus metabólitos intraeritrocitários, levam a uma série de reações adversas ou falha terapêutica, podendo ocasionar em não adesão ou abandono da terapia. A conversão da AZA para os nucleotídeos ativos de 6-tioguanina (6-TGN) é necessária para a eficácia clínica, entretanto, outro metabólito, a 6-metilmercaptopurina (6-MMP), é formado através de uma via concorrente pela tiopurina metil transferase e está relacionado à hepatotoxicidade. Devido à ampla variabilidade interindividual da tiopurina metil transferase e a uma faixa terapêutica estreita, torna-se importante a realização do monitoramento terapêutico do metabólito ativo 6-TGN e da 6-MMP. Neste trabalho, um método cromatográfico (CLAE/HPLC-UV) foi desenvolvido e validado para a quantificação dos metabólitos nos eritrócitos, envolvendo um procedimento de tratamento simples baseado na desproteinização por ácido perclórico seguido de hidrólise ácida e aquecimento para a conversão dos metabólitos em suas respectivas bases livres. A cromatografia foi realizada em coluna C18 (250 x 4,6 mm, 5 μm). A fase móvel consistiu em mistura de solução tampão fosfato de potássio (0,02 mol/L, pH = 3), acetonitrila e metanol, eluição por gradiente, num fluxo de 1,0 mL/minuto, com detecção de UV em 291 ηm e 342 ηm. Os tempos de retenção foram de 6,2 min (6-TGN); 23,1 min (6-MMP) e 24,7 min (cafeína: padrão interno). A resposta do detector foi linear na concentração de 0,89-29,91 μmol/L (r=0,999) para 6-TGN e entre 0,90-30,08 μmol/L (r=0,999) para 6-MMP. Os limites de detecção foram de 0,29 μmol/L e 0,30 μmol/L e os limites de quantificação foram de 0,89 μmol/L e 0,90 μmol/L, para 6-TGN e 6-MMP respectivamente. As médias das recuperações de 87,9% para 6-TGN e 91,9% para 6-MMP. Os CV da repetibilidade, de 5,48 e 10,48% (intradia) e 9,23 e 10,48% (interdia), enquanto os EPR da reprodutibilidade de 11,36 e 9,85% (intradia) e 10,48 e 7,32% (interdia) para 6-TGN e 6-MMP, respectivamente. As concentrações de 6-TGN e 6-MMP foram determinadas para todos os pacientes do estudo e os resultados encontrados variaram de 4,51 a 1515,27 ρmol/8 x 10⁸ eritrócitos para a 6-TGN e de 169,98 a 53951,53 ρmol/8 x 10⁸ eritrócitos para a 6-MMP. Observou-se uma correlação entre os pacientes em terapia combinada AZA e alopurinol e a diminuição da dosagem de AZA, consequentemente a diminuição significativa dos níveis de 6-MMP (2030,71 ρmol/8 x 10⁸ eritrócitos) em comparação com o grupo de pacientes sob monoterapia (9098,43 ρmol/8 x 10⁸ eritrócitos). Um outro achado foi a diminuição estatisticamente significativa da transaminase TGO/AST
(25,03 + 18,62 U/L) no grupo de pacientes que apresentavam a doença em atividade, com os níveis de 6-TGN a 540,51 ρmol/8 x 10⁸ eritrócitos e de 6-MMP a 7952,32 ρmol/8 x 10⁸ eritrócitos, semelhante a relatos anteriores da literatura. O método proposto de quantificação por CLAE-UV mostrou-se preciso, exato e reprodutível, podendo ser utilizado como uma importante ferramenta na rotina de monitorização terapêutica de pacientes com DC, permitindo a individualização da dose, o acompanhamento dos efeitos adversos relacionados com a terapia farmacológica, o monitoramento da adesão ao tratamento e a avaliação da evolução clínica do paciente. / The conversion of azathioprine (AZA) to active nucleotides of 6-thioguanine (6-TGN) is essential for clinical efficacy in Crohn's disease. However, other metabolite, 6-methylmercaptopurine (6-MMP), which is formed through a competitive pathway for thiopurine methyltransferase (TPMT), is related to hepatotoxicity of this drug. Due to the wide interindividual variability of TPMT and a narrow therapeutic range it is important to accomplish the therapeutic monitoring of active metabolite 6-TGN and 6-MMP, which is an unusual procedure in Brazil. In this study, a HPLC-UV method for simultaneous quantification of these metabolites was developed, validated and applied in 37 Crohn's disease patients. The chromatographic process was performed on C18 column (250 x 4.6 mm, 5 μm i.d.), mobile phase consisted of potassium phosphate buffer (0.02 mol/L, pH = 3), acetonitrile and methanol, flow rate at 1.0 ml/min and UV detection at 291 ηm and 342 ηm. Retention times were 6.2 min (6-TGN); 23.1 min (6-MMP) and 24.7 min (caffeine: internal standard). The detector response was linear at 0.89-29.91 μmol/L (r=0.999) for 6-TGN and 0.90-30.08 μmol/L (r=0.999) for 6-MMP. Limits of detection were 0.29 μmol/L and 0.30 μmol/L, while the quantification limits were 0.89 μmol/L and 0.90 μmol/L, for 6-TGN and 6-MMP respectively. Precision, accuracy and recovery, were according FDA and ANVISA guidelines. The concentrations of 6-TGN and 6-MMP were determined in patients’ blood and the results found ranged from 4.51 to 1515 ρmol/8 x 10⁸ erythrocytes for 6-TGN and from 169.98 to 53.951 ρmol/8 x 10⁸ erythrocytes for 6-MMP. It was observed a reduction of levels of 6-MMP in patients using AZA + allopurinol therapy (2030.7 ρmol/8 x 10⁸ erythrocytes) when compared with patients undergoing monotherapy (9098.43 ρmol/8 x 10⁸ erythrocytes). Another finding was the correlation between the decrease in GOT transaminase in the group of patients who had the active disease with the increase in the 6-TGN levels, similar to previous reports in the literature. These results indicate that the method developed was reliable, accurate and reproducible, and can be used as an important tool in the routine monitoring of patients with Crohn's disease, allowing the individualization of the dose, the monitoring of the adverse effects related to the pharmacological therapy, monitoring the adherence to the treatment and the evaluation of the clinical evolution of these patients.
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Autenticidade do queijo de manteiga do Seridó por espectroscopia no infravermelhoLeite, Antônio Iranaldo Nunes 28 March 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-03-28 / O presente trabalho teve como objetivo a utilização da Espectroscopia de Infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR) e Reflectância Total Atenuada (ATR) como ferramenta para avaliação rápida da autenticidade do queijo de manteiga do Seridó, por meio da verificação da ausência de óleo de soja, a qual é a fraude mais comum neste tipo de queijo. Foram analisadas amostras de queijo de manteiga puro (sem fraude) e fraudado com óleo vegetal em percentuais de 10 a 100% de substituição da manteiga. Para cada amostra produzida, determinou-se os percentuais de proteína, gordura, gordura no extrato seco, umidade, pH, sólidos totais, análise
colorimétrica e do perfil de textura, além das análises espectroscópicas. Em cada queijo foram retiradas três amostras de diferentes pontos e feitas medições por meio do espectrômetro MIR (Mid-Infrared Spectroscopy) no intervalo de 400 a 4000 cmˉ¹. Os espectros obtidos em triplicata, caracterizaram-se por apresentar bandas de absorção nas regiões de 3650 a 650 cmˉ¹. Para avaliar as alterações ocorridas no queijo com a adição de óleo vegetal, foram estudados os picos característicos de lipídios (2922, 2852, 1743, 1464, 1160 cmˉ¹) juntamente com os picos referentes a ácidos graxos insaturados de cadeia longa (3007 e 721 cmˉ¹). Picos do grupamento
amida (1640 e 1545 cmˉ¹) também mostraram diferenciação quando as amostras foram submetidas a substituição da manteiga de garrafa por óleo vegetal, diminuindo a intensidade destes. A utilização de técnicas quimiométricas, o PCA (Principal Component Analisis), possibilitou a separação das amostras em grupamentos distintos de acordo com o percentual de fraude e a diferenciação dos queijos com e sem fraude. Pelos resultados obtidos na espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier (FTIR) associada a técnica do ATR, pode-se concluir que o método e a técnica utilizada, foram capazes de identificar a autenticidade do queijo de manteiga, quanto a presença de óleo vegetal. / The present work has as main purpose the use of Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) and Attenuated Total Reflectance (ATR) as a tool for rapid assessment of the authenticity of the butter cheese of Seridó, through the verification of the absence of vegetable oil, which is the most common fraud in this type of cheese. Samples of pure butter cheese (without fraud) were analyzed and chewed with vegetable oil in percentage of 10 to 100% of substitution of the bottle butter for soybean oil. The percentages of protein, fat, fat in the dry extract, moisture, pH, total solids, colorimetric analysis, texture profile and spectroscopic analyzes were determined for each sample produced. In each cheese three different points were
taken and measurements were made through the MIR (Mid-Infrared) spectrometer in the range of 400 to 4000 cmˉ¹. The spectra obtained in triplicate were characterized by the presence of absorption bands in the region 3650 to 650 cmˉ¹. In order to evaluate the changes in cheese with the addition of vegetable oil, we have studied the characteristic peaks of lipids (2922, 2852, 1743, 1464, 1160 cmˉ¹) together with the peaks referring to long chain unsaturated fatty acids (3007 e 721 cmˉ¹). Peaks of the amide group (1640 e 1545 cmˉ¹) also showed differentiation when the samples underwent replacement of the bottle butter with vegetable oil, reducing the
intensity of the former. Using chemometric techniques, PCA (Principal Component Analysis), it was possible to separate the samples in different groups according to the percentage of fraud and to differentiate cheeses with and without fraud. By the results obtained in the infrared spectroscopy with Fourier transform (FTIR) associated with the ATR technique, it can be concluded that the method and the technique used were able to identify the authenticity of butter cheese, as well as the presence of vegetable oil.
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Classificação de rebanhos bovinos leiteiros baseado em risco para presença de Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae na região da Zona da Mata de Minas GeraisOliveira, Naiara Aparecida Rodrigues de 28 February 2018 (has links)
Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-08-23T19:32:17Z
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Previous issue date: 2018-02-28 / A mastite está entre as doenças do gado leiteiro que mais causam prejuízos
em todo mundo. Entre os agentes causadores estão os patógenos de origem
contagiosa Staphylococcus aureus e Streptococcus agalactiae que mais contribuem
para o aumento da Contagem de Células Somáticas (CCS) em rebanhos
infectados.Desde a implantação da Instrução Normativa 51 ( IN 51/2002) do
Ministério da Agriculutura Pecuária e Abastecimento(MAPA) em 2005, pouco se
avançou em melhorias no parâmetro CCS dos rebanhos brasileiros, fazendo-se
necessário o levantamento da situação das regiões a fim de traçar estratégias
específicas para o controle da mastite e atendimento aos requisitos da legislação. O
objetivo do presente estudo foi estabelecer uma classificação baseada em risco
(dados probabilísticos) (risco) para presença de S. aureus e S. agalactiae em
rebanhos bovinos leiteiros localizados Zona da Mata do Estado de Minas Gerais e
vinculados a uma cooperativa. O trabalho foi realizado utilizando a população de
bovinos leiteiros vinculados à Cooperativa dos Produtores de Leite de Leopoldina de
Responsabilidade Ltda (LAC). A avaliação da dependência espacial entre as
coordenadas geográficas dos rebanhos e a média geométrica anual da contagem de
células somáticas foi realizada por meio de semivariogramas e os mapas de
isolinhas por meio do método de Krigagem. Amostras para análise de CCS foram
coletadas mensalmente.Para o estudo de prevalência foram selecionados
aleatoriamente 43 rebanhos dos quais foram coletadas 3 amostras consecutivas de
cada rebanho para análises microbiológicas durante o período de junho de 2016 a
novembro de 2017. A análise espacial apresentou grau de dependência espacial e
coeficiente de determinação fracos (GD<0,25; r2<0,13). A distribuição de frequência
da CCS mostrou que apenas 23,3% dos rebanhos atendem ao limite de 400.000
células/mL . A prevalência de S. aureus foi de 93% a de S. agalactiae de 81,4% não
diferindo estatisticamente entre si. Dos 43 rebanhos analisados, em tres (7%) não
houve isolamento de S.aureus e de S. agalactiae, cinco (11,6%) apresentaram
isolamento somente de S. aureus e 35 (81%) apresentaram isolamento de ambos
patógenos. Não houve rebanhos com isolamento somente de S. agalactiae. Dos
rebanhos sem isolamento destes agentes, a média de CCS foi de 224.000
células/mL, com isolamento somente de S. aureus a média de CCS foi de 447.000
células/mL, e para rebanhos com isolamento dos dois patógenos, S. aureus e S.
agalactiae, 794.000 células/mL. Os rebanhos sem isolamento ou somente com
isolamento de S. aureus estão associados a CCS inferior a 400.000 células/mL e
rebanhos com isolamento de ambos os patógenos estão associados a CCS superior
a 400.000 células/mL. A utilização da curva ROC para dados de CCS de rebanhos
associados ao estudo de prevalência de S. aureus e de S. agalactiae permitiu
classificar rebanhos em tres níveis de risco: baixo, médio e alto. A prevalência de S.
aureus e de S. agalactiae entre rebanhos foi considerada alta para ambos
patógenos, indicando que as medidas de controle para estes patógenos não estão
sendo realizadas de maneira eficiente. Não foi observada diferença entre as
prevalências de S. aureus e de S. agalactiae entre os rebanhos. Foi observada uma
associação entre a CCS dos rebanhos e a presença de ambos os patógenos,
permitindo desta forma uma classificação dos rebanhos. / Mastitis is among the most damaging diseases in dairy cattle worldwide. Among the
causative agents are the pathogens of contagious origin Staphylococcus aureus and
Streptococcus agalactiae that contribute most to the increase of Somatic Cell Count
(SCC) in infected herds. Since the implantation of IN 51 in 2005, little progress was
made in improving the SCC in the Brazilian dairy herds, therefore it is necessary to
survey the mastitis situation of the regions in order to devise specific control
strategies for mastitis control and compliance with the legislation requirements . The
objective of the present study was to establish a risk - based classification (risk) for
the presence of S. aureus and S. agalactiae in dairy herds located in the Zona da
Mata of the State of Minas Gerais associated to a cooperative. The work was carried
out using the population of dairy herds of Cooperativa dos Produtores de Leite de
Leopoldina de Responsabilidade Ltda. (LAC).The evaluation of the spatial
dependence between the geographical coordinates of the herds and the annual
geometric mean of the somatic cell count was performed using semi-variograms and
isoline maps using the Kriging method. Milk samples for SCC analyses were
collected monthly. For the prevalence study, 43 herds were randomly selected and
three milk samples from each herd were collected for microbiological analyzes during
the period of June 2016 to November 2017. The spatial analysis presented degree of
spatial dependence and weak determination coefficient (GD <0.25; r2 <0.13) The
frequency distribution of CCS showed that only 23.3% of the herds met the limit of
400,000 cells / mL. The prevalence of S. aureus (93%) and of S. agalactiae (81.4%)
did not differ statistically from one another. Of the 43 herds analyzed, three (7%) was
no isolation of S. aureus and S. agalactiae, five (11.6%) had isolation only of S.
aureus and 35 (81%) presented isolation of both pathogens. There were no herds
with isolation of S. agalactiae. The mean SCC was 224,000 cels / mL, for the herds
with absence of S. aureus and S. agalactiae, and 794.000 cels/ mL when the this
two pathogens were present. The mean SCC for the herds with isolation only of S.
aureus was 447,000 cells / mL,. The abcense or isolation only S. aureus herds are
associated with CCS less than 400,000 cells / mL and herds with isolation of both
pathogens associated with CCS greater than 400,000 cells / mL. The use of the ROC
curve for herd CCS data associated to the study of S. aureus and S. agalactiae
prevalence allowed the classification of the herds at three levels of risk: low, medium
and high. The prevalence of S. aureus and S. agalactiae among herds was
considered high for both pathogens, indicating that the control measures for these
pathogens are not being carried out efficiently. There was no difference between the
prevalences of S. aureus and S. agalactiae among the herds. An association was
observed between the SCC of the herds and the presence of both pathogens, thus
allowing a classification of the herds.
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Caracterização estrutural e avaliação da atividade anticoagulante de condroitim sulfato de lula Doryteuthis (Loligo) pleiCarvalho, Rafael Guzella de 23 July 2015 (has links)
Submitted by Geandra Rodrigues (geandrar@gmail.com) on 2018-10-11T14:26:18Z
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Previous issue date: 2015-07-23 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Glicosaminoglicanos (GAGs) são heteropolissacarídeos lineares ligados a um núcleo proteico dos proteoglicanos (PGs). Condroitim sulfato (CS) é GAG sulfatado composto por unidades dissacarídicas repetidas de ácido D-glucurônico e N-acetil-galactosamina, esse composto possui atividades biológicas associadas à interação com diferentes elementos da matriz. Estas ações têm sido relacionadas às suas características estruturais relativas ao elevado teor de grupos sulfato e carboxila que originam domínios estruturais que são conhecidos por participar de funções fisiológicas específicas. O presente trabalho teve por objetivo a identificação e caracterização estrutural dos GAGs extraídos de diferentes tecidos de lula (Doryteuthis plei) bem como a avaliação da atividade anticoagulante destes compostos. Para isso inicialmente determinamos a técnica de extração dos GAGs dos tecidos de manto, nadadeira, tentáculos e pele utilizando degradação com enzimas proteolíticas e purificação utilizando a técnica de cromatografia de troca iônica. Realizamos a identificação dos GAGs com degradações com liases específicas (chases AC e B de F. heparinum), em que ficou evidenciado que CS é o GAG majoritário dos tecidos de D. plei. Os CS encontrados tiveram peso molecular detectados na faixa de 30-50 kDa. A dosagem química de sulfato demonstrou que estes CS possuíam relação superior a 1,2 sulfato/hexosamina o que nos forneceu o indicativo que estas macromoléculas eram supersulfatadas. Este fato foi confirmado pela análise por FACE dos produtos da digestão de CS de manto e nadadeira com chase AC de A. aurescens em que a maior sulfatação foi relacionada à presença de alta proporção de resíduos di-sulfatados, ΔDi4,6S (≈55%). Técnicas espectroscópicas de Raman e RMN permitiram confirmar a maior substituição e sulfatação nas posições 4- e 6- da GalNAc, respectivamente. Os CS de manto e nadadeira ainda demonstraram atividade anticoagulante associada à inibição da via intrínseca da coagulação sendo detectada inibição dos fatores IIa e Xa. Desta forma concluímos que CS-E é o tipo de glicosaminoglicano constituinte nos tecidos de lula e que ele possui características tecido-específica, desempenhando sua atividade anticoagulante de acordo com o padrão de sulfatação. / Glycosaminoglycans (GAGs) are linear heteropolysaccharides attached to a core protein of proteoglycans (PGs). Chondroitin sulfate (CS) is sulfated GAG composed of repeating disaccharide units of D-glucuronic acid and N-acetyl-galactosamine, this compound has biological activities associated to their interaction with different components of the extracellular matrix. These activities have been related to their structural characteristics due to the high content of sulfate and carboxyl groups originating structural domains which are known to participate in specific physiological functions. This aim of this study was the identification and structural characterization of glycosaminoglycans extracted from squid different tissues (Doryteuthis plei) as well as evaluation of the anticoagulant activity of these compounds. Initially, we determined the procedures GAGs extraction in mantle tissue, fin, tentacles and skin using degradation with proteolytic enzymes and purification using ion exchange chromatography. We carried out the identification of GAG to degradation with specific lyases (chases AC and B from F. heparinum), wherein we evidenced that CS is the principal GAG of the D. plei tissues. Molecular weight of CS had a range of 30-50 kDa. Quantification of sulfate groups demonstrated that these CS had higher ratio of sulfate/hexosamine (1.2), a indicative that these macromolecules were oversulfated. This fact was confirmed by FACE analysis of CS from mantle and fin after digestion with chase AC from A. aurescens where most sulfation was related to the presence of high proportion of di-sulfated residues, ΔDi4,6S (≈55%). Raman spectroscopic and NMR techniques confirmed the increased substitution and sulfation in positions 4 and 6 of GalNAc, respectively. CS of the mantle and fin demonstrated anticoagulant activity associated with inhibition of the intrinsic coagulation pathway by inhibition of factors Xa and IIa. Thus, we conclude that CS-E is the kind of glycosaminoglycan constituent in squid tissues and it has tissue-specific characteristics, playing their anticoagulant activity according to the sulfation pattern.
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Síntese, caracterização e avaliação das propriedades antiepilépticas de Complexos de Paládio (II) derivados do Diazepam / Synthesis, characterization and evaluation of the antiepileptic properties of diazepam-palladium (II) complexesCorreia, Walleska Bismaida Zacarias Galvão Barros 15 August 2017 (has links)
Epilepsy is a neurological disease that affects approximately 50 million people worldwide and is related to oxidative stress, which plays an important role in the neuronal damage induced by seizures. The current drugs used in the treatment of this disease have their use often limited due to their adverse effects; moreover, approximately 30% of epileptic patients who are receiving drug treatment are not totally free of seizures. These facts motivated the development of this work that aims to synthesize, characterize and evaluate palladium(II) complexes derived from diazepam in order to obtain complexes that can be used to treat epilepsy. In this work were synthesized five complexes of diazepam-palladium(II): two in dimeric form (DIAZPdOAcD and DIAZPdClD) and three in monomeric form (DIAZPdOAcPPh3, DIAZPdClPPh3 and DIAZPdClPy). All these complexes were characterized by spectrometric techniques and elemental analysis; the monomer DIAZPdOAcD had your chemical structure elucidated by X-ray diffraction. In addition, all complexes were evaluated for anticonvulsant and antioxidante activities and for citotoxicity. Through the characterization techniques used in this work it was possible to confirm the formation of all the complexes; it is important to noted that the X-ray diffraction study of DIAZPdOAcD showed the distorted square-planar geometry of palladium(II), the occurrence of cyclopalladation and the open-book shape of this dimer. Regarding the anticonvulsant and antioxidante activities, it was observed that only the DIAZPdOAcD dimer presented significant results. With respect to cytotoxicity, all complexes showed more pronounced toxicity when compared to diazepam. However, the anticonvulsive effect and the potential neuroprotective effect performed by DIAZPdOAcD should be emphasized, since they are important characteristics of new drugs for the treatment of epilepsy. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A epilepsia é uma doença neurológica que afeta aproximadamente 50 milhões de pessoas em todo o mundo e está relacionada ao estresse oxidativo, que desempenha um importante papel no dano neuronal induzido por convulsões. Os fármacos atuais utilizados no tratamento desta doença apresentam seu uso frequentemente limitado devido aos seus efeitos adversos; além disso, aproximadamente 30% dos pacientes epiléticos que estão recebendo tratamento medicamentoso não ficam totalmente livres de convulsões. Tais fatos motivaram o desenvolvimento deste trabalho que apresenta como objetivo sintetizar, caracterizar e avaliar complexos de paládio(II) derivados do diazepam com a finalidade de obter complexos que possam ser utilizados para o tratamento da epilepsia. Neste trabalho foram sintetizados cinco complexos de paládio(II) derivados do diazepam: dois na forma dimérica (DIAZPdOAcD e DIAZPdClD) e três na forma monomérica (DIAZPdOAcPPh3, DIAZPdClPPh3, e DIAZPdClPy). Todos esses complexos foram caracterizados por técnicas espectrométricas e análise elementar; e o dímero DIAZPdOAcD teve sua estrutura química elucidada através de difração de raios X. Além disso, todos os complexos foram avaliados quanto às atividades anticonvulsivante e antioxidante e à citotoxicidade. Através das técnicas de caracterização utilizadas neste trabalho foi possível confirmar a formação de todos os complexos; cabe destacar que por meio do estudo de difração de raios X do DIAZPdOAcD observou-se a geometria quadrada plana distorcida do paládio(II), a ocorrência da ciclopaladação e a forma de livro aberto deste dímero. Com relação às atividades anticonvulsivante e antioxidante, observou-se que somente o dímero DIAZPdOAcD apresentou resultados significativos. No que se refere à citotoxicidade, todos os complexos apresentaram uma maior toxicidade quando comparados ao diazepam. No entanto, cabe salientar o efeito anticonvulsivante e o potencial efeito neuroprotetor desempenhados pelo DIAZPdOAcD, pois são características importantes de novos fármacos para o tratamento da epilepsia.
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Avaliação da atividade antiviral do extrato de Mikania glomerata Sprengel (guaco)Silva, Milene Evelyn da 31 July 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-07-31 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O herpes é uma doença infecciosa, transmitida pelo vírus herpes simplex tipo I (HSV-1) e tipo II (HSV-2). A doença é caracterizada pelo aparecimento de lesões labiais (HSV-1) e genitais (HSV-2). A espécie Mikania glomerata Sprengel (guaco) é uma planta pertencente à família Asteraceae e muito utilizada na medicina popular. A cumarina, presente nas folhas de guaco, apresentam atividades biológicas decritas, tais como broncodilatadora, antiedematogênica e efeitos espasmolíticos. Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito antiviral de extrato de M. glomerata contra o HSV-1 e HSV-2. Vale ressaltar o potencial promissor do uso do extrato seco de guaco e da cumarina 1,2-benzopirona no tratamento de infecções herpéticas, uma vez que não foi encontrado na literatura nenhum trabalho mostrando a atividade da Mikania glomerata Sprengel frente aos herpesvírus HSV-1 e HSV-2. As avaliações da citotoxicidade do extrato seco de guaco e do padrão cumarina (1,2-benzopirona) foram realizadas em culturas de células Vero (células de rim de macaco verde Africano) mediante a observação das alterações da morfologia e da viabilidade. A partir deste teste, determinou-se a concentração máxima não tóxica (CMNC). Foram utilizadas as concentrações subtóxicas do extrato seco de guaco e da cumarina 1,2-benzopirona para avaliar as atividades anti-HSV-1 e HSV-2 mediante observação da redução do título viral. Os resultados foram expressos em porcentagem de inibição (PI). O extrato seco de guaco apresentou atividade inibitória contra o vírus HSV- 1 (PI= 87,7%) e HSV-2 (PI= 92,7%). O padrão cumarina 1,2-benzopirona foi inativo contra o vírus HSV-2, mas apresentou atividade antiviral frente ao vírus HSV-1 (PI= 68,4%). Esses resultados evidenciaram a presença de outros metabólitos presentes no extrato seco de guaco que, isoladamente ou em sinergismo, contribuíram para a maior atividade antiviral. Sugere-se a incorporação deste extrato em formulações tópicas com a finalidade de proporcionar um tratamento alternativo para as infecções herpéticas. / Herpes is an infectious disease transmitted by type I (HSV-1) and type II (HSV-2) herpes simplex virus. The disease is characterized by the appearance of cold sores (HSV-1) and genital lesions (HSV-2). Mikania glomerata Sprengel (guaco) specie is a plant belonging to the Asteraceae family and is widely used in folk medicine. Coumarin, present in guaco leaves, have biological activity, such as decritas, antiedematogênica and bronchodilator effects spasmolytics. This study aimed to evaluate the antiviral effect of M. glomerata extract against the HSV-1 and HSV-2. It is noteworthy the promising potential of using guaco extract in the treatment of herpesvirus infections, since no published reports showing the activity of Mikania glomerata Sprengel against HSV-1 and HSV-2 herpesviruses were found. Cytotoxicity assessments of guaco dry extract and coumarin (2H-1-benzopyran-2-one) standard were performed in Vero cells culture (African green monkey‘s kidney cells) by observing morphology and viability. Based on this test, the maximum non-toxic concentration (MNTC) was determined. Subtoxic concentrations of guaco dry extract and 2H-1-benzopyran-2-one coumarin were employed to assess the anti-HSV-1 and HSV-2 activity by observing the reduction of viral titer. The results were expressed as percentage inhibition (PI). Guaco dry extract showed inhibitory activity against HSV-1 (PI=87.7%) and HSV-2 (PI=92.7%) viruses. The 2H-1-benzopyran-2-one coumarin standard was inactive against HSV-2 virus, but showed antiviral activity against HSV-1 virus (PI=68.4%). These results demonstrated the presence of other metabolites in the guaco dry extract that, either alone or in synergism, contributed to the higher antiviral activity. It is suggested to incorporate this extract in topical formulations for the purpose of provide an alternative treatment for herpetic infections.
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Avaliação da atividade antibacteriana dos óleos essenciais de Ocimum americanum, Ocimum gratissimum e Ocimum selloi frente a bactérias aeróbias prevalentes em úlceras de decúbitoMoraes, Flávia Costa de 24 July 2014 (has links)
Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-01-27T09:30:10Z
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Previous issue date: 2014-07-24 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Úlceras de decúbito são lesões que desenvolvem-se nas interfaces das proeminências ósseas de sustentação do corpo. As lesões favorecem a colonização microbiana, dificultando a cicatrização e podendo estabelecer uma infecção. Os óleos essenciais de plantas medicinais têm demonstrado ser uma importante fonte para obtenção de novos compostos antimicrobianos. Neste estudo, foi avaliado o potencial antimicrobiano dos óleos essenciais de O. americanum, O. gratissimum e O. selloi. A atividade antibacteriana foi determinada pelo método de difusão em ágar e microdiluição, frente a bactérias aeróbias Gram-positivas (Staphylococcus aureus e Staphylococcus epidermidis) e Gram-negativas (Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa) prevalentes nas lesões. As variações na concentração e presença de biocompostos nos óleos essenciais influenciaram diretamente na capacidade antibacteriana. As espécies foram identificadas através da análise das composições químicas dos óleos pelo método de Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massas CG-MS. Os quimiotipos identificados foram: O. americanum linalol-1,8cineol-cânfora; O. gratissimum eugenol e O. selloi metil-chavicol, tendo como referência os quimiotipos descritos em artigos científicos. O óleo essencial de O. selloi não apresentou atividade antibacteriana significativa; o óleo de O. americanum apresentou atividade contra S. aureus, com CIM de 625 μg/mL; o óleo de O. gratissimum exibiu atividade antibacteriana promissora – apresentando CIM 625 μg/mL – para S. aureus, S. epidermidis e E. coli podendo constituir um antisséptico para úlceras de decúbito. / Decubitus ulcers are lesions developed on interfaces of bony prominences of the body support, reaching bedridden or immobilized patients. Lesions favor microbial colonization, difficult healing, and may establish an infection. The essential oils of medicinal plants have been shown to be an important source for obtaining new antimicrobial compounds. In this study, we evaluated the antimicrobial activity of essential oils of O. americanum, O. gratissimum, and O. selloi. The antibacterial activity was determined by the method of agar diffusion and microdilution against Gram-positive aerobic bacteria (Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis) and Gram-negative (Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa) prevailing in lesions. The variations in concentration and presence of biocompounds in essential oils have directly influenced the antibacterial capacity. Species were identified by analyzing the chemical composition of the oils by the method of Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry GC-MS. There were identified the chemotypes: O. americanum linalool-1, 8cineol-camphor; O. gratissimum eugenol and O. selloi methyl-chavicol, with reference in chemotypes described in scientific articles. The essential oil of O. selloi did not show significant antibacterial activity; the oil of O. americanum showed activity against S. aureus with MIC of 625 μg/mL; the oil of O. gratissimum exhibited promising antibacterial activity, with MIC 625 μg/mL for S. aureus, S. epidermidis and E. coli. which may constitute an antiseptic for decubitus ulcers.
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Estudo do potencial clastogênico e genotóxico do extrato de Piper cubeba em células de roedores in vivo / Clastogenicity and genotoxicity of Piper cubeba (Piperaceae) extract in mammalian cell system in vivoJunqueira, Adriana Pereira Freire 09 June 2006 (has links)
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Previous issue date: 2006-06-09 / Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nïvel Superior / Piper cubeba widely distributed in the tropical and subtropical regions of the world is used medicinally in various manners without genetic toxicity evaluation In this study we investigated the clastogenic and genotoxic potential of the crude extract of the fruits of P cubeba in rodents cells using the micronucleus and single cell gel electrophoresis (SCGE) test systems The animals were treated by gavage with 3 concentrations of the extract 25 50 and 75 per cent of the LD50 (2 g/kg) From Swiss mice peripheral blood was collected at 24 h after the treatment for SCGE assay and at 48 and 72 h for micronucleus test when the animals were sacrificed From Wistar rats peripheral blood and hepatic cells were collected for SCGE assay and bone marrow cells for micronucleus test 24 h after the treatment and then the animals were submitted to euthanasia At the 75% of the LD50 extract concentration a statistically significant increase in the mean number of cells with micronuclei and with DNA damage was observed in all rodents cell types analyzed and on three of the analyzed animal groups genetic toxicity was observed also at the 50% of the LD50 concentration Under our experimental conditions P cubeba extract showed moderate clastogenic and genotoxic effect in the rodents cells / A Piper cubeba é distribuída nas regiões tropicais e subtropicais do mundo e é usada de várias maneiras na medicina como nos ensaios de genética toxicológica Neste estudo foi investigado o potencial clastogênico e genotóxico do extrato cru dos frutos da P cubeba em células de roedores usando o teste do micronúcleo e o ensaio single cell gel electrophoresis SCGE (ensaio cometa) Os animais foram tratados por gavage com 3 concentrações do extrato 25 50 e 75% da LD50 (2 g/Kg). Dos ratos Swiss foi coletado sangue periférico 24h após o tratamento para o ensaio SCGE e 48 e 72h para o teste do micronúcleo, quando os animais foram sacrificados Para os camundongos Wistar coletou-se sangue periférico e células hepáticas para o ensaio SCGE e células de medula óssea para o teste do micronúcleo 24h após o tratamento quando os animais foram submetidos à eutanásia No extrato na concentração de 75% da LD50 foi observado um aumento estatisticamente significativo no número de células com micronúcleos e danos no DNA nas células de roedores analisadas e no terceiro grupo de animais analisados foi observada também toxicidade genética na concentração de 50% da DL50 Conforme nossa condição experimental o extrato de P cubeba mostrou efeito clastogênico e genotóxico moderado em células de roedores
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Composição química e efeitos antinociceptivo e antiinflamatório em roedores do óleo essencial de Peperomia serpens (Sw) LoudPINHEIRO, Bruno Gonçalves 20 June 2011 (has links)
Submitted by Cleide Dantas (cleidedantas@ufpa.br) on 2014-05-27T16:22:16Z
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Previous issue date: 2011 / A Peperomia serpens (Piperaceae) é uma liana herbácea e epifíta
popularmente chamada de “carrapatinho’’. Esta planta cresce na Floresta Amazônica de maneira selvagem em diferentes árvores. As folhas são usadas na medicina tradicional brasileira para dor, inflamação e asma. Neste estudo
investigaram-se os efeitos do óleo essencial de P.serpens (OEPs) em roedores
através de testes para dor e inflamação. A atividade antinociceptiva foi avaliada
usando-se modelos nociceptivos químicos (ácido acético e formalina) e
térmicos (placa quente) em camundongos, enquanto a atividade
antiinflamatória foi avaliada por testes de edema de pata induzidos por
carragenina (Cg) e dextrana em ratos, edema de orelha induzido por óleo de
cróton, bem como migração celular, rolamento, e adesão induzida por Cg em
camundongos. Além disso, a análise fitoquímica do OEPs foi realizada. A
composição química do OEPs foi analisada por cromatografia gasosa acoplada
a espectrometria de massa. 25 constituintes, representando 89,51% do total do
óleo, foram identificados. (E)-Nerolidol (38.0%), ledol (27.1%), α-humulene
(11.5%), (E)-caryophyllene (4.0%) and α-eudesmol (2.7%) foram encontrados
como principais constituintes. O pré-tratamento oral com o OEPs (62,5-
500mg/kg) reduziu de maneira significante o número de contorções, com um
valor de DE50 de 188,8mg/kg que foi ulitizado em todos os testes. Não houve
efeito no teste da placa quente mas reduziu o tempo de lambida em ambas as
fases do teste de formalina, efeito que não foi significativamente alterado pela
naloxona (0,4 mg/kg). OEPs impediu o desenvolvimento do edema induzido por
Cg e dextrana em ratos. Em camundongos, o OEPs inibiu o edema induzido
por óleo de cróton bem como a migração de leucócitos e neutrófilos, e
rolamento e adesão. Estes resultados sugerem que o OEPs possui atividade
antinociceptiva periférica sem interação com receptores opióides e atividade
antiinflamatória em diferentes modelos de inflamação aguda. / The Peperomia serpens (Piperaceae), popularly known as “carrapatinho”, is an epiphyte and herbaceous liana grown wild on different host trees in the Amazon rainforest. Its leaves are largely used in Brazilian folk medicine to treat
inflammation, pain and asthma. This study investigated the effects of essential oil of P. serpens (EOPs) in standard rodent models of pain and inflammation. The antinociceptive activity was evaluated using chemical (acetic acid and
formalin) and thermal (hot plate) models of nociception in mice whereas the anti-inflammatory activity was evaluated by carrageenan (Cg) - and dextraninduced
paw edema tests in rats croton oil-induced ear edema, as well as cell migration, rolling and adhesion induced by Cg in mice. Additionally,
phytochemical analysis of the EOPs has been also performed. Chemical composition of the EOPs was analyzed by gas chromatography and mass spectrometry (GC/MS). Twenty five compounds, representing 89.6% of total oil, were identified. (E)-Nerolidol (38.0%), ledol (27.1%), α-humulene (11.5%), (E)- caryophyllene (4.0%) and α-eudesmol (2.7%) were found to be the major
constituents of the oil. Oral pretreatment with EOPs (62.5-500 mg/kg) significantly reduced the writhing number, with an ED<sub>50</sub> value of 188.8 mg/kg
that was used thereafter in all tests. EOPs had no significant effect on hot plate
test but reduced the licking time in both phases of the formalin test, an effect
that was not significantly altered by naloxone (0.4 mg/kg, s.c.). EOPs inhibited
the edema formation induced by Cg and dextran in rats. In mice, EOPs inhibited
the edema formation by croton oil as well as the leukocyte and neutrophil
migration, the rolling and the adhesion of leukocytes. These data show for the
first time that EOPs has a peripheral antinociceptive effect that seems unrelated
to interaction with the opioid system and a significant anti-inflammatory effect in
acute inflammation models.
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