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DESENVOLVIMENTO E VALIDAÇÃO DE UM MÉTODO POR CROMATOGRAFIA LÍQUIDA PARA A AVALIAÇÃO QUALITATIVA, QUANTITATIVA E QUIMIOMÉTRICA DE EXTRATOS DE Ilex paraguariensis / DEVELOPMENT AND VALIDATION OF A LIQUID CHROMATOGRAPHY METHOD FOR THE QUALITATIVE, QUANTITATIVE AND CHEMOMETRIC EVALUATION OF Ilex paraguariensis EXTRACTSPinto, Rodrigo Moreira Caetano 24 February 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-02-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The use of natural products with therapeutic or nutraceutical purposes is growing in the brazilian society, due the easily access to this. However, the indiscriminate use or use of wrongly identified species represent a risk of the user. Thus, phytochemical and pharmacological studies, and the development of analytical methods to the quality control of these products are important actions to ensure the reliability of them. Thus, it is necessary a consistent quality evaluation of vegetal raw materials, that endorse its identity and quality. The erva-mate (Ilex paraguariensis A.St.-Hil. - Aquifoliaceae) is a south brazilian native specie, heavily consumed as stimulant drink. This plant have presented a great economic value as raw material, due the growing interest of the cosmetic and pharmaceutical industries, mainly arising the stimulant, antioxidant and lipolytic potential. The high performance liquid chromatography (HPLC) is a fast and efficient method to the qualitative and quantitative evaluation of medicinal plants and its extracts. The development of analytical methods to quality control of these materials is a necessary action for the pharmaceutical, cosmetic and food industries. To the industries, the Quality by Design approach – that proposes the creation of a design of experiments (DOE) that evaluate simultaneously many relevant factors to the separation efficiency – is an alternative to the classic optimization of HPLC methods, because allows the efficient evaluation of more variables in a short time. In this sense, the aim of this work was realize a factorial study (QbD-DOE) of the main variables that may affect the optimization of a chromatographic method to vegetal extracts, and proposes the development of an analytical method. Were analyzed many relevant factors to the resolution of the chromatographic bands. In a first step, were evaluated the stationary phase, pH range, organic modifier type and the gradient time. In a second stage, was evaluated de pH value, final % of organic modifier, temperature and flow rate. The developed method was used to the evaluation of chemical characteristics of seven commercial samples of erva-mate obtained in the market of Ponta Grossa. The fingerprint was employed in a chemometric study, that allowed classify the samples according the chemical profiles, arising of plantation place, processment and extractor solvent. Yet, the obtained chromatographic run enabled the quantitative analysis of three chemical markers (chlorogenic acid, caffeine and theobromine). The contents of the markers founded by the validated method in the evaluated samples were different between aqueous (A) and hydroethanolic (H) extracts, due the differences on extraction potential of these solvents/procedures. The biggest content of caffeine were founded in the sample 5 (92.7 mg/100 g of dry leaves (A) and 349.19 mg/100g (H)). The same sample presented the least content of theobromine, in hydroethanolic extract (45.88 mg/100g), probably because the both xanthines are sourced of the same biosynthetic route. The chlorogenic acid were founded in highest proportion in the sample 2 (388.15 mg/100g (H) and 110.42 mg/100g (H)). The findings of this study reinforce the use of liquid chromatography as an analytical method, that associated to statistical tools may increase the strategies of erva-mate quality control, as vegetal raw material. / A utilização de produtos naturais com fins terapêuticos ou nutracêuticos é crescente na sociedade brasileira devido à facilidade de acesso a estes. Entretanto o uso indiscriminado ou sem uma correta identificação da espécie vegetal que se está utilizando pode se apresentar como um risco ao usuário. Desta forma estudos fitoquímicos, farmacológicos e principalmente o desenvolvimento de métodos analíticos de controle da qualidade destes produtos e seus extratos se constituem em ações importantes para se garantir a confiabilidade dos mesmos. Desta forma, é necessário que a avaliação da qualidade de matérias-primas vegetais seja consistente e respalde sua identidade e qualidade. A erva-mate (Ilex paraguariensis A.St.-Hil. - Aquifoliaceae) é uma espécie vegetal nativa do sul do Brasil, muito consumida como bebida estimulante e vem se apresentando como uma matéria prima de grande valor econômico devido ao crescente interesse das indústrias de medicamentos, cosméticos e alimentos em decorrência principalmente do seu potencial antioxidante, estimulante e lipolítico. A Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) é um método rápido e eficiente para a avaliação qualitativa e quantitativa de plantas medicinais e seus extratos e o desenvolvimento de métodos analíticos para avaliação da sua qualidade se constitui em uma ação necessária a ser empregada no controle de qualidade de indústrias farmacêuticas, cosméticas e alimentícias. Para as indústrias, a abordagem Quality by Design – que propõe a criação de um desenho experimental que avalia simultaneamente múltiplos fatores relevantes para a eficiência da separação – se constituí em uma alternativa de estudo à otimização clássica de métodos por CLAE, pois permite que mais variáveis sejam avaliadas em um menor tempo e com maior eficiência. Desta forma, foi objetivo deste trabalho realizar um estudo fatorial das principais variáveis que podem interferir na otimização de um método cromatográfico para extratos vegetais e assim propor o desenvolvimento de um método analítico. Num primeiro momento, foram avaliadas a fase estacionária, faixa de pH, tipo de modificador orgânico e o tempo de corrida. Numa segunda etapa, foram avaliados o valor exato de pH, a concentração final do modificador orgânico, a temperatura e o fluxo. O método desenvolvido foi utilizado para avaliação das características químicas de sete amostras comerciais de erva mate obtidas no comércio da cidade de Ponta Grossa. O cromatograma fingerprint foi utilizado para a realização de um estudo quimiométrico que permitiu classificar as amostras quanto a semelhanças e diferenças químicas decorrentes da região de plantio, procedimento de processamento empregado e solvente extrator usado. Ainda, a corrida cromatográfica obtida possibilitou avaliação quantitativa de três marcadores químicos (ácido clorogênico, cafeína e teobromina). Os teores dos marcadores encontrados nas amostras avaliadas, através do método cromatográfico validado variaram entre as amostras de extrato aquoso (A) e hidroalcoólico (H), devido à diferença de potencial extrativo entre esses solventes/procedimentos. O maior teor de cafeína foi encontrado na amostra 5 (92, 7 mg/100 g de folhas secas (A) e 349,19 mg/100g (H)). A mesma amostra apresentou o menor teor de teobromina no extrato hidroalcoólico (45,88 mg/100g), provavelmente porque as duas xantinas dividem a mesma rota de biossíntese. O ácido clorogênico foi encontrado em maior proporção na amostra 2 (388,15 mg/100g (H) e 110,42 mg/100g (A)). Os achados deste estudo reforçam o uso da cromatografia líquida, como um método analítico que associado a ferramentas estatísticas possibilitam incrementar as estratégias de controle de qualidade da erva-mate enquanto matéria-prima vegetal.
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Obtenção e caracterização de formulação fitoterápica contendo extrato e tintura padronizados de arnica montana l e aesculus hippocastanum lARNILLAS, Elyan Andrade Pueyo 18 December 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-12-18 / Devido a grande difusão e utilização de plantas medicinais, as indústrias vêm
fabricando produtos a base de espécies vegetais, como extratos e tinturas, que são
utilizados principalmente por farmácia com manipulação. No entanto, são
questionáveis a garantia para a grande maioria destes produtos, quanto à sua
eficácia, segurança e qualidade, podendo trazer riscos à saúde do usuário. Assim,
torna-se importante a realização do controle de qualidade para produtos
fitoterápicos, de acordo com a legislação vigente. A formulação que deu origem à
pesquisa é um gel de carbopol contendo tintura de Arnica montana L e extrato de
Aesculus hippocastanum L. O presente estudo objetivou a obtenção e
caracterização da formulação citada e validar o emprego de metodologias da
tecnologia farmacêutica por meio da realização da padronização do extrato de
Aesculus hippocastanum L e da tintura de Arnica montana L, Para a avaliação
físioquímica foram realizados: O controle microbiológico, a caracterização
organolépticas, determinação de pH, densidade, resíduo seco, perda por
dessecação, determinação do teor de sólidos, comportamento reológico,
concentração, liofilização e prospecção química dos insumos vegetais . Para a
análise fitoquímica foi realizada Cromatografia em Camada Delgada da tintura de
Arnica (CCD) e Cromatografia Em Camada Delgada Comparativa (CCDC) do extrato
de Aesculus, Infravermelho e Análise Térmica tanto dos extratos como da
formulação. Para as caracterizações físico-química e validação dos Laudos de Análise dos
fornecedores das duas espécies vegetais os resultados encontram-se dentro dos
parâmetros estabelecidos pela Farmacopéia Brasileira Vª Ed. O controle
micróbiológico foi para comprovar a ausência de microorganismos patogênicos, os
resultados indicaram ausência de mico-organismos, pois a contaminação microbiana
dos insumos pode alterar a estabilidade do produto final e ainda caracterizar risco de
infecção ao usuário. A prospecção química das espécies vegetais, foi para identificar
metabólitos secundários relevantes, no caso do A. hippocastanum indicou a
presença de saponinas, representada pela escina que é a responsável pela
atividade farmacológica, foi um indício importante para a certificação da autenticidade da matéria prima em estudo. A viscosidade dos insumos vegetais e da
formulação foram determinadas através do Reômetro de Brookfield, os extratos
apresentaram comportamento de fluído Newtoniano e a formulação apresentou um
comportamento pseudo plástico. O resultado da Cromatografia em Camada Delgada
(CCD), auxiliou na identificação da amostra e possíveis adulterações que poderiam
ter ocorrido, assim como a CCDC serviu para demonstrar a seletividade do método,
pois identificou a presença da escina, substância responsável pela ação
farmacológica da Castanha da índia. Na validação da tintura de Arnica montana L.,
por CLAE foi detectado a presença da rutina na amostra in natura com o tempo de
retenção 10,84 min. As análises de infravermelho realizadas nas espécies vegetais,
foram obserdas bandas que podem indicar a presença dos principais marcadores
químicos, no caso da arnica indicou à presença da rutina, e a presença da escina no
extrato de castanha da índia. Na análise térmica TG/DTA, podemos dizer que o
primeiro evento de decomposição para as amostras ocorreu até 150º C, que
corresponde a perda de massa, os valores obtidos foram 6,5 e 8 % para à castanha
da índia e arnica respectivamente. Todos os resultados foram de relevância para a
caracterização e controle de qualidade, servindo de parâmetro para à padronização
do extrato e da tintura, as informações obtidas serviu também para a certificação de
um dos fornecedores de extratos e tinturas para as farmácias de manipulação em
Belém. / Because of the wide dissemination and use of medicinal plants, industries are
producing products based on plant species, such as extracts and tinctures, which are
mainly used by pharmacy with handling. However, it is questionable collateral for the
vast majority of these products as to their efficacy, safety and quality, and may bring
risks to the user's health. So, it is important to perform quality control for herbal
products, according to current legislation. The formulation that gave rise to the
research is a carbopol gel containing Arnica montana L dye and Aesculus
hippocastanum L extract. The present study aimed at obtaining and characterization
of said formulation and validate the use of methods of pharmaceutical technology by
performing the standardization of Aesculus hippocastanum L extract and Arnica
montana L dye, to the physio-chemical evaluation were performed: microbiological
control, organo-leptical characterization, determination of pH, density, dry, loss on
drying, determine the level solids, rheological behavior, concentration, lyophilization
and chemical prospecting of plant inputs. For the phytochemical analysis was
performed Thin Layer Chromatography of Arnica tincture (TLC) and Thin Layer
Chromatography In Comparative (TLCC) Aesculus extract, Infrared and Thermal
Analysis of both extracts as the formulation. For physicochemical characterization and validation of analysis Reports of the two plant species suppliers the results are within the parameters established by the Brazilian Pharmacopoeia Fifth Ed. The microbiologic control was to prove the absence of pathogenic microorganisms, the results indicated microorganisms absence of, for microbial contamination of the inputs can change the stability of the final product and further characterize risk of infection to the user. The chemical prospecting of plant species, was to identify relevant secondary metabolites, in the case of A. hippocastanum indicated the presence of saponins, represented by escin which is responsible for the pharmacological activity, was an important clue to the certification of the authenticity of the raw material in study. The viscosity of vegetable raw materials and formulation were determined by the rheometer of Brookfield, the extracts showed fluid behavior and Newtonian formulation showed a pseudo plastic
behavior. The result of the Thin Layer Chromatography (TLC), assisted in the identification of the sample and possible tampering that could have occurred as well as the TLCC served to demonstrate the selectivity of the method as identified the presence of aescin, substance responsible for pharmacological activity Chestnut from India. In the validation of Arnica montana L. dye, it was detected by HPLC the
presence of the rutin in the sample in nature with retention time 10.84 min. The infrared analyzes the plant species were observerd bands that may indicate the presence of the major chemical markers in the case Arnica indicated the presence of the rutin and escin in the presence of horse chestnut extract. In the thermal analysis TG / DTA, we can say that the first decomposition event occurred for the samples to
150 ° C, corresponding to weight loss, the values were 6.5 and 8% for the chestnut and arnica respectively. All results were significant for the characterization and quality control, used as benchmark for the standardization of the extract and tincture, the information obtained was also used for the certification of suppliers of extracts and tinctures for drugstores in Belém.
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Avaliação da adesão ao tratamento com alfadornase em pacientes com fibrose císticaFEITOSA, Keith Brabo Tavares January 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017 / A Fibrose Cística (FC) é uma doença hereditária, que se manifesta clinicamente por
sintomas digestivos e respiratórios. O diagnóstico precoce oferece a possibilidade de
um melhor controle terapêutico do paciente favorecendo o prognóstico e
contribuindo para uma melhor qualidade de vida. O objetivo do estudo foi
demonstrar o comportamento dos pacientes frente à doença e avaliar a adesão ao
tratamento com a enzima alfadornase. Foi feito um estudo prospectivo, transversal e
observacional por meio de dados epidemiológicos coletados através de entrevistas
com pacientes e/ou responsáveis e por análise de prontuários. Para a avaliação da
adesão ao tratamento e conhecimento da doença foram aplicados os testes Morisky-
Green e Batalla Martinez. Para avaliar o perfil clínico foi utilizado o escore de
Shwachman-Kulczyki. Foram recrutados 51 pacientes com fibrose cística atendidos
no ambulatório do Hospital Universitário João de Barros Barreto em uso de
alfadornase. Participaram do estudo 47 pacientes no período de julho de 2015 a
junho de 2016. A maioria dos pacientes (53,2%) tinha idade inferior a 18 anos,
56,6% eram do sexo masculino e 40,4% provenientes do interior. Pacientes em
tratamento com alfadornase por mais de 5 anos, apresentaram maior adesão do que
os demais com menor período de tratamento e o sexo masculino esteve associado a
maior adesão, assim como a maior escolaridade e renda familiar. Após a aplicação
do teste de Batalla Martinez, apenas 40,42% demonstraram conhecimento sobre a
doença. Deste modo foram observados como fatores associados à baixa adesão:
uso de mais de cinco medicamentos, baixa escolaridade e sexo. Por outro lado, os
resultados mostram que a adesão à medicação esteve associada ao melhor escore
clínico. / Cystic Fibrosis is an inherited disease, clinically manifested by digestive and
respiratory symptoms. The early diagnosis offers the possibility of a better
therapeutic control of the disease’s symptoms in favor of the prognosis and
contributing to increasing quality of life. The aim of this study was to demonstrate the
patient's behavior towards the disease and to evaluate the adherence to the
treatment with the alfadornase enzyme. A cross-sectional study was carried out
using epidemiological data collected through direct interviews with patients and/or
their caregivers and by medical records analysis. Morisky-Green and Batalla
Martinez tests were employed in order to evaluate the patient’s adhesion and
knowledge of the disease, respectively. In addition, the clinical profile was assayed
by Shwachman-Kulczyki score. Fifty-one (51) patients with cystic fibrosis in treatment
with alfadornase were recruited at the outpatient clinic of the Hospital Universitário
João de Barros Barreto. At final, forty-seven (47) patients participated in the study.
Most of the patients (53.2%) were under 18 years of age, male (56.6%) and were
from countryside (40.4%). Patients with long term use of alfadornase (> 5 years)
show possess greater adherence than the others with a shorter treatment period.
The male sex was associated with higher adherence, as well as greater education
level and family income. The Batalla Martinez test demonstrates that only 40.42% of
patients had some knowledgement about their disease. Thus, the factors associated
with low adherence were: use of more than five medications, low education and
gender. On the other way, these results shows that adherence to the medication was
associated with the best clinical score.
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Investigação fitoquímica e atividade biológica das cascas de Luehea speciosa willdNASCIMENTO, Maisa Carmen Batista do 21 December 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-12-21 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / As cascas de Luehea speciosa, família Malvaceae, são utilizadas na medicina tradicional para o tratamento de disenteria, reumatismo, tumores, bronquites, feridas de pele, emagrecimento entre outros. Porém, existem poucas informações sobre a espécie na literatura. Dessa forma, faz-se de grande interesse investigar a sua constituição química e suas possíveis atividades biológicas, visto que a comprovação cientifica promove uma alternativa de tratamento de forma segura aos usuários. Neste sentido, o presente estudo buscou a constituição química do extrato bruto seco (EBS) e das frações hexânica (FHX), diclorometano (FDM), acetato de etila (FAE) e metanólica (FME), da espécie, através de analises por cromatografia liquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas - LC/MS, bem como suas atividades antioxidante, por bioautografia, e citotóxica, in vitro, frente as linhagens de células tumorais, HELA e HEP-2 e VERO. As amostras apresentaram atividade antioxidante, sendo as frações FDM e FAE com perfil mais relevante. O EBS e as frações demonstraram citotoxidade sobre todas as linhas em estudo, porém a fração FDM apresentou maior atividade citotóxica contra células tumorais. Nas análises por LC/MS, foram detectados compostos fenólicos, com características sugestivas da presença do ácido chicórico, através do m/z = 148, além do espectro de UV semelhante. Esses resultados demonstram que a espécie em estudo possui atividade antioxidante e sugerem que a amostra exerce citotoxidade contra células tumorais, apresentando-se promissora para futuros estudos. / The barks of Luehea speciosa, family Malvaceae, are used in traditional medicine to treat dysentery, rheumatism, tumors, bronchitis, skin wounds, weight loss and others diseases. However, studies give little information about the species in the literature. Thus, it is of great interest to investigate its chemical constitution and biological activities, since the scientific proof of its activity can promote, in the future, a therapeutic alternative. The present study analyzed the chemical constitution of the dry crude extract (EBS) and hexane (FHX), dichloromethane (FDM), ethyl acetate (AED) and methanolic (FME) fractions of the species by high-performance liquid chromatography (HPLC) with tandem mass spectrometric - LC/MS, as well as its antioxidant activities by bioautography and cytotoxic assays, in vitro, against HELA, HEP-2 and VERO tumor cell lines. The samples showed antioxidant activity, being the fractions FDM and AED results more relevant. The EBS and fractions demonstrated cytotoxicity on all cell lines, however the FDM fraction had greater cytotoxic activity against tumor cells. In the LC/MS analyzes, were detected phenolic compounds and suggestive characteristics of chicoric acid presence through m/z = 148, as in the UV spectrum. These results demonstrate that this species has antioxidant activity and suggest its cytotoxicity against tumor cells, being a promising species for future studies.
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Fitoquímica e atividade antiplasmódica de Siparuna poeppigii (Tul.) A. DC. (Siparunaceae)PINA, Nayla Di Paula Vieira 10 November 2016 (has links)
Submitted by Rosana Moreira (rosanapsm@outlook.com) on 2018-11-20T17:50:08Z
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Previous issue date: 2016-11-10 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Na América Latina, o uso de plantas do gênero Siparuna é indicado no tratamento de febres e malária, a atividade antiplasmódica de algumas espécies já foi comprovada, o que motivou o estudo S. poeppigii, nativa da Amazônia. Este trabalho visa analisar a fitoquímica, a atividade antiplasmódica e a citotoxicidade de extratos e frações de S. poeppigii. De folhas e cascas do caule de um exemplar coletado em Belém, Pará, foram preparados extratos em etanol (EESPC e EESPF) e a separação de alcaloides foi realizada por extrações ácido-base (SPC-B e SPF-B; SPC-C e SPF-C). Os extratos etanólicos foram submetidos a re-extrações por refluxo com solventes de polaridades crescentes resultando nas frações hexano-diclorometano (HEX-DCM), diclorometano (DCM), acetato de etila (AcOEt) e metanol (MeOH). Análises fitoquímicas por UPLC-DAD e cromatografia em camada delgada (CCD) foram efetuadas com os extratos e frações. As frações Hex-DCM, AcOEt e MeOH foram submetidas a fracionamentos cromatográficos em colunas de sílica gel (CCS). A atividade antiplasmódica dos extratos e frações foi avaliada frente à cepa W2 de P. falciparum cloroquina-resistente pelo método de quantificação da lactato desidrogenase (ρLDH), nas concentrações de 50 μg/mL e 25 μg/mL. Para as frações mais ativas determinou-se a concentração Inibitória de 50% (CI50) e a concentração citotóxica de 50% (CC50) em células HepG2 pelo método do MTT, nas concentrações de 50; 25; 12,5; 6,25; 3,12 e 1,6 μg/mL para CI50 e 1, 10, 100 e 1000μg/mL para CC50. Os dados permitiram calcular o índice de seletividade (IS) de cada fração. A prospecção por CCD foi positiva para geninas e heterosídeos flavônicos, saponinas, alcaloides, triterpenos e esteroides. A CCS de SPC-B permitiu a obtenção das frações 5-8, 43-44, 61, 67-68, 95-97 e 84-88, consideradas ativas com CI50 de 5,95; 12,44; 14,32; 22,58; 22,67 μg/mL, respectivamente. Todas as frações ativas foram não citotóxicas, sendo os melhores IS das frações 5-8 (43,32) e 95-97 (>44,11). Estas frações ativas e a Fr 16 AcOEt (obtida da CCS da Fr AcOEt), foram caracterizadas por UPLC-ESI-MS sendo identificados os alcaloides reticulina e anonaina na Fr 16 AcOEt. As frações 84-88 e 111 foram re-cromatografadas em colunas de alumina e sephadex LH20, respectivamente obtendo-se substâncias SP-1 e SP-2. A análise por UPLC-DAD das amostras EESPC, EESPF, SPC-B e SPF-B revelou predomínio de um pico no tempo de retenção (TR) 6,5 min, com max 267 e 346 nm, sugestivo de cromóforos de flavonoides. A substância SP-1 exibiu pico (74% de área) no TR 3,6 min e UV com max 255 e 276 nm, compatível com UV online da liriodenina autêntica. SP-2 exibiu pico majoritário (90%) no TR 2,6 min e max 282 nm. As frações de alcaloides SPF-B e SPC-C foram ativas, com CI50 12,41 e 6,99μg/mL. Este trabalho relata dados inéditos de fitoquímica e atividade antiplasmódica da espécie S. poeppigii bem como a identificação da liriodenina, responsável, em parte, pela atividade antiplasmódica da espécie.
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Atividade imunomoduladora e antioxidante da saliva do Aedes aegypti em modelo de sepse / Evaluation of immunomodulary activity of Aedes aegypti’s saliva in a sepsis modelGOMES, Rafaelli de Souza 04 July 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-07-04 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A sepse e uma disfuncao organica causada por uma resposta imune desregulada a
uma infeccao. A mesma tem em sua abordagem terapeutica inicial a utilizacao de
antimicrobianos de amplo espectro, os quais nao sao suficientes para o controle da
infeccao, sendo necessario a busca por novas terapias focadas na interrupcao da
resposta inflamatoria em cascata produzida pela invasao e disseminacao de agentes
patogenicos. Dessa forma, a saliva do Aedes aegypti apresenta caracteristicas
imunomoduladoras, com potencial de inibicao de citocinas pro-inflamatorias, bem
como a presenca de peptideos ativadores de oxido nitrico. Com isso, seria de grande
interesse investigar o efeito imunomodulador da saliva em modelo animal de sepse.
Neste sentido, camundongos foram pre-tratados com a saliva do Aedes aegypti sendo
a sepse induzida pelo modelo de transfixacao do coto-cecal. Apos 12 e 24 horas as
amostras foram coletadas, e avaliado a sobrevida, carga bacteriana, migracao
leucocitaria e parametros oxidativo (NO, EROs, MDA, TEAC, DPPH e GSH). A saliva
melhorou o prognostico dos animais, aumentando a sobrevida e o peso. Alem disso,
reduziu a carga bacteriana e aumentou o influxo de monocitos no sangue. A saliva,
tambem, mostrou efeito antioxidante por reduzir a producao de especies reativas e
aumentar a capacidade antioxidante, alem de diminuir a peroxidacao lipidica. Assim,
a saliva foi capaz de inibir os danos causados pela sepse em animais in vivo
melhorando seu prognostico. / Sepsis is an organ dysfunction caused by a dysregulated immune response to an
infection, the initial therapeutic approach to sepsis are broad spectrum antimicrobials,
which is not sufficient for control of infection, requiring association with other therapies
focused in the interruption of the inflammatory response chain, provided by the
pathogens. In this way, the Aedes Aegypti’s saliva presents immunomodulary features,
with a potential pro inflammatory cytokine inhibition, as well as the presence of nitric
oxide peptides activators. Therefore, it would be a great interest to search the saliva’s
immunomodulator effect in animal model sepses. In this regards, mices were pre
treated with Aedes aegypti saliva, and sepsis was induced by the cecal ligation and
puncture. After 12 and 24 hours, the samples were collected, and evaluated the
survival rate, bacteria level, leukocyte migration, and oxidative parameters (NO, EROs,
MDA e TEAC). The saliva improved the animal prognostic, increasing the survival rate
and weight. Furthermore, decreased the bacterial levels and increased the influx of
monocytes. The saliva, in addition, presented antioxidant effects by reducing
production of the reatives species, and increasing the antioxidant capacity, other than
decrease the lipid peroxidation. Thus, the saliva was capable to inhibit damages
caused by sepsis in animals in vivo, improving its prognostic.
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Obtenção de extratos padronizados em antioxidantes naturais: aproveitamento dos resíduos da ucuúba (Virola surinamensis)OLIVEIRA, Kalene de Almeida 21 March 2018 (has links)
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Previous issue date: 2018-03-21 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A ucuúba (Virola surinamensis) é uma fruta de origem amazônica, que tem ação anti-inflamatória e antifúngica. O resíduo gerado pelo seu processamento ainda apresenta potencial de aproveitamento, uma vez que são ricos em substâncias nutritivas e metabólitos secundários. Esse estudo tem como objetivo obter extrato hidrofílico e lipofílico padronizados em antioxidantes a partir do resíduo agroindustrial de ucuúba. Foram utilizadas as técnicas caracterização do pó como: Caracterização físico-química, Análise Térmica, Espectroscopia na Região do Infravermelho. Para obtenção e caracterização do extrato hidroetanólico e oleoso foram utilizadas técnicas como: percolação e maceração dinâmica respectivamente, caracterização físico-química, Análise Térmica, Espectroscopia na Região do Infravermelho (FTIR). Foram determinados o teor de Polifenóis totais, Flavonoides, Carotenoides totais e a atividade antioxidante foi determinada pelo método DPPH e ABTS. Os parâmetros fisíco-químicos do pó, extrato hidrofílico e lipofílico estão em comformidade com a literatura. Foi observado na curva termogravimétrica d3 eventos e perda de massa para os dois extratos. O extrato hidrofílico concentrado e o lipofílico apresentaram conteúdo de Polifenóis totais de 114,04 ± 0,01 e 806,45 ± 1,9 (mg EAG/100g) e Flavonóides de 49 ± 4,6 e 62 ± 1,27 (mg ERT/100g) respectivamente. O extrato lipofílico apresentou teor de Carotenóides de 5,37 ± 0,26 (µg de β-caroteno/mL). A atividade antioxidante pelo método DPPH para o extrato hidrofílico concentrado (286,07± 31 µM Trolox/g), liofilizado (374,33 ± 25 µM Trolox/g) e oleoso (138,09±17,03 µM Trolox/L). Para o método ABTS os resultados obtidos para os extratos: hidrofílico concentrado (107,34± 9,3 µM Trolox/g), liofilizado (258,15 ± 1,8) e lipofílico (1856,57±3,7 µM Trolox/L). O resíduo de ucuúba apresenta potencial de aproveitamento para o desenvolvimento de produtos pela indústria de alimentos, cosmética e farmacêutica.
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PERFIL DE PACIENTES COM DIABETES MELLITUS TIPO 1 EM TRATAMENTO COM INSULINAS CONVENCIONAIS E AVALIAÇÃO DA QUALIDADE DE VIDAFreitas, Paula Souza de 26 February 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-02-26 / Introdução: O Diabetes mellitus é considerado uma epidemia mundial. Atualmente
415 milhões de pessoas tem diabetes no mundo e no Brasil este número é superior
a 14 milhões. Estimado como um dos principais problemas de saúde pública no
país, conhecer a população quem convive com o diabetes é de grande importância
para que se possam introduzir orientações que contribuam para um adequado
controle glicêmico melhorando assim a sua qualidade de vida. Objetivos: Avaliar a
qualidade de vida dos pacientes com diabetes tipo 1 em tratamento com insulinas
convencionais NPH e Regular. Metodologia: Trata-se de estudo observacional,
retrospectivo e transversal. Foram entrevistados 44 pacientes com DM1, maiores de
18 anos, que faziam uso de insulina convencional. Os dados sociodemográficos,
clínicos e do tratamento foram coletados a partir de três fontes, (1) prontuários do
Centro Municipal de Especialidades, (2) prontuários do Hospital Santa Casa de
Misericórdia e (3) ficha individual por meio da entrevista. Avaliou-se a qualidade de
vida por meio do instrumento DQOL-Brasil. Resultados: Dos 44 pacientes
entrevistados, 40,9% eram mulheres e 59,1% homens; 56,9% tinham idade entre 26
e 46 anos; 81,7% residiam em Ponta Grossa – PR; 43,2% solteiros, 36,3% casados,
13,6% moram juntos e 6,9 divorciados. Considerando a formação escolar 36,3%
tinham o ensino médio completo; a renda média foi de R$1826,72 reais; 40,9%
conviviam com o diabetes há 16 e 25 anos. Entre eles, 61,3% apresentavam alguma
complicação, como retinopatia, pé diabético, hipercolesterolemia, problemas
vasculares e nefropatia. A hemoglobina glicada de até 7% foi observada em apenas
6,9% do total dos entrevistados. A média da qualidade de vida observada nos
pacientes com insulinas convencionais foi de 3,0. Conclusão: O mau controle
glicêmico pode afetar a percepção de qualidade de vida de pacientes com diabetes
mellitus tipo 1. Devido à inexistência de um sistema que contemplem tanto dados
sociodemográficos quanto clínicos, se faz cada vez mais necessário, conhecer essa
população na busca de estratégias para melhorar a saúde dos pacientes e melhorar
a sua qualidade de vida. / Introduction: Diabetes mellitus is considered and epidemic worldwide. Currently 415
million people have diabetes worldwide and in Brazil this number is over 14 million.
Estimated as a major public health problems in the country, meet the people who live
with diabetes is of great importance so that they can introduce guidelines that
contribute to an adequate glycemic control thus improving their quality of life. Aims:
To assess the quality of life of patients with type 1 diabetes treated with conventional
insulin NPH and Regular. Methodology: This is an observational, retrospective and
cross-sectional study. Interviewed 44 patients with DM1, older than18 years, who
used conventional insulin. The socio-demographic, clinical and treatment data were
collected from three sources, (1) records of the Municipal Center of specialties, (2)
Hospital records Santa Casa de Misericordia and (3) individual records through the
interview. We evaluated the quality of life through DQOL-Brazil instrument. Results:
Of the 44 patients interviewed, 40.9% were women and 59.1% men; 56.9% were
aged between 26 and 46 years; 81.7% lived in Ponta Grossa - PR; 43.2% single,
36.3% married, 36.3% were married, 13.6% and 6.9 cohabiting divorced.
Considering school education 36.3% had completed high school; the average income
was R $ 1,826.72 reais; 40.9% lived with diabetes for 16 to 25 years. Among them,
61.3% had some complications, such as retinopathy, diabetic foot,
hypercholesterolemia, vascular disease and nephropathy. The glycated hemoglobin
up to 7% was observed in only 6.9% of total respondents. The average quality of life
in the patients with conventional insulins was 3.0. Conclusion: The poor glycemic
control can affect the perception of quality of life of patients with diabetes mellitus
type 1. In the absence of a system that address both demographic as clinical data, it
is increasingly necessary to meet this population in search strategies to improve the
health of patients and improve their quality of life.
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Potencial das toxinas recombinantes Potencial das toxinas recombinantes do veneno de aranha marrom como ferramentas na indução de tolerância oral e imunomodulaçãodo veneno de aranha marrom como ferramentas na indução de tolerância oral e imunomodulaçãoFerreira, Tamara Nascimento 25 February 2015 (has links)
Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2018-02-15T16:51:53Z
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Previous issue date: 2015-02-25 / A tolerância oral é definida como uma supressão a respostas imunológicas específicas após imunização com um antígeno que foi previamente administrado por via oral. Esse método tem sido estudado, nas últimas décadas, como uma ferramenta na redução de respostas imunes humorais e celulares envolvidas em doenças autoimunes e alergias e parece ser uma alternativa para reduzir ou retardar a rejeição de transplantes. Neste estudo investigamos o potencial das toxinas dermonecróticas recombinantes do veneno da aranha marrom Loxosceles intermedia em induzir estado de tolerância de mucosas em modelo animal, avaliando os mecanismos celulares envolvidos e a resposta imune do animal tolerante frente a estímulos imunológicos específicos e inespecíficos. As toxinas recombinantes utilizadas para indução da tolerância oral foram a LiRecDT1 (com atividade dermonecrótica) e sua forma mutada, LiRecDT1H12A, (com atividade dermonecrótica residual). Para indução de tolerância oral foi utilizado protocolo com baixas doses de antígeno, onde foram tolerizados camundongos adultos Swiss, tratados oralmente com as toxinas recombinantes durante 21 dias, num total de 90g por animal. Para investigar possíveis mecanismos envolvidos na tolerância oral, foi avaliada a expressão fator de transcrição Foxp3 e da citocina TGF-β. Após o protocolo de tolerização os linfonodos mesentéricos foram processados para ensaio de western blotting e a expressão do fator de transcrição Foxp3 e da citocina TGF-β foram avaliados. Os grupos tolerizados com ambas as toxinas mostraram um aumento na expressão dos dois componentes, demonstrando que um dos mecanismos de tolerância oral no nosso modelo pode envolver aumento na população de linfócitos T regulatórios. Esse resultado pode ser reforçado pela dimimuição de edema de pata em camundongos naive que receberam, via intravenosa, esplenócitos de animais tolerizados com a toxina LiRecDT1 H12A (transferência adotiva). Além disso, pudemos observar que a tolerância induzida pela toxina LiRecDT1 H12A se estendeu a antígenos não relacionados (tolerância cruzada) com diminuição na produção de anticorpos IgG específicos e edema de pata em animais desafiados com veneno da vespa Polybia paulista. A tolerância oral induzida pela toxina LiRecDT1 H12A também permitiu aparente redução da resposta imunológica do animal tolerante frente ao enxerto alogênico de camundongos C57BL/6. Considerando os resultados obtidos é possível concluir que a tolerância oral induzida pelas toxinas LiRecDT1 e LiRecDT1 H12A pode envolver aumento na população de linfóticos T regulatórios cuja produção de citocinas anti-inflamatórias, pelo menos na tolerância induzida pela toxina LiRecDT1 H12A, pode reduzir a resposta imune a antígenos específicos e inespecíficos na tolerância cruzada e na redução de rejeição a transplantes. / Oral tolerance refers to physiologic induction of immunosuppression that occurs in mucosal induced by oral administration of an antigen. This method has been used to induce reduction of humoral and cellular responses involved in autoimmune diseases, allergies and may be an alternative to reduce transplant rejection. We investigated potential of dermonecrotic recombinant toxins of brown spider Loxosceles intermedia specie to induce a state of mucosal tolerance in a animal model. We did this by assessing the cellular mechanisms involved and the immune response of tolerant animals against specific and nonspecific immune stimulation. Dermonecrotic toxin LiRecDT1 and its mutated form, LiRecDT1 H12A (with residual dermonecrotic activity), has been used. Mice were treated with recombinant toxins, orally, for 21 days, with a total of 90g per animal. After oral tolerance protocol, mesenteric lymph nodes were processed for western blotting and the expression of nuclear transcription factor Foxp3 and cytokine Tgf-β were analyzed. LiRecDT1 and LiRecDT1 H12A tolerant groups showed an increase in expression of both proteins, which could be related to a increase in regulatory T-cells population. Adoptive transfer of splenocytes to naive mice from LiRecDT1 H12A tolerated group induced paw edema reduction, with supports this theory (adoptive transfer). Our results also demonstrated a bystander tolerance when LiRecDT1 H12A tolerated mice showed a decrease in IgG production and paw edema induction by Polybia paulista wasp venom. LiRecDT1 H12A tolerance also showed an apparent reduction in skin allograft rejection using C57BL/6 mice as donor and tolerated Swiss mice as receptor. Considering the results we concluded that oral tolerance induced by LiRecDT1 and LiRecDT1 H12A toxins could be involve increase in Tregs and non-inflammatory cytokines, and LiRecDT1 H12A tolerance can reduce specific and non specific immunology responses and allografts transplants rejection.
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Avaliação da atividade citotóxica de subfrações do látex de Euphorbia umbellata (Pax) Bruyns e eufolCruz, Luiza Stolz 03 March 2017 (has links)
Submitted by Eunice Novais (enovais@uepg.br) on 2018-03-12T18:21:00Z
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Previous issue date: 2017-03-03 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Euphorbia umbellata (Pax) Bruyns tem seu látex utilizado, etnofarmacologicamente,
para tratamento de câncer, incluindo leucemias. Uma doença
maligna que atinge os leucócitos, com alta incidência, sendo o tipo de câncer
mais comum na infância. O tratamento quimioterápico é, na maioria dos casos,
o mais recomendado, mas apresenta-se como terapia muito agressiva e com
diversos efeitos colaterais. Por conseguinte, o objetivo deste trabalho foi o de
avaliar o potencial citotóxico da fração hexano do látex de Euphorbia umbellata
suas subfrações e da substância isolada, eufol, frente a linhagens modelo de
leucemia. Para tanto as células, Jurkat e HL-60, foram tratadas por 72 horas
com a fração hexano (1,25-75 μg/mL), subfrações éter de petróleo,
diclorometano, etanol e metanol (1,25-75 μg/mL) e com o eufol (10-50 μg/mL),
sendo sua viabilidade celular avaliada pelo ensaio de redução do MTT ao final
deste período. Para a subfração diclorometano (mais ativa) foi avaliada a
viabilidade celular no período de 24 e 48 horas, além de ter sido determinado o
índice de seletividade. Cabe ressaltar que a fração hexano e as subfrações
foram obtidas por fracionamento em extrator de Soxhlet, enquanto o eufol, por
precipitação ácida, seguida de cromatografia em coluna, e sendo identificado
por ressonância magnética nuclear e espectrometria de massas. A fração
hexano e as subfrações resultantes foram analisadas por cromatografia gasosa
acoplada ao espectrômetro de massas. A avaliação cromatográfica das
subfrações permitiu sugerir 10 substâncias, os triterpenos: eufol; lanosterol;
cicloartenol; tirucalol; taraxasterol e lupeol, os diterpenos: forbol-12,13,20-
triacetato; 4-β forbol e 3-desoxo-3- 16-dihidroxi-12-desoxiforbol-3-13-16-20-
tetracetato, e o esteroide sitosterol. Como resultado do ensaio citotóxico
obteve-se, para a fração hexano uma CI50 de 0,061 ± 1,226 μg/mL para as
células HL-60 e 4,624 ± 1,088 μg/mL para células Jurkat; para o eufol uma CI50
de 21,031 ± 1,778 μg/mL (HL-60) e 35,925 ± 5,011 μg/mL (Jurkat). Dentre as
subfrações a diclorometano apresentou o melhor perfil de resposta com valores
de 0,005±0,098 μg/mL (HL-60) e 0,200±0,957 μg/mL (Jurkat), revelando que o
tratamento é tempo dependente. Ademais a subfração diclorometano mostrouse
seletiva para o tratamento de leucemia com índices de seletividade superior
a 2. Portanto, conclui-se que a subfração diclorometano é a promissora para o
tratamento de leucemia, possivelmente por ação sinérgica dos terpenos nela
presente. / Euphorbia umbellata (Pax) Bruyns has its latex used, ethno-pharmacologically,
for the treatment of cancer, including leukemias. A malignant disease that
affects leukocytes, with high incidence, being the most common type of cancer
in childhood. Chemotherapy treatment is, normally, the most recommended, but
it presents as very aggressive therapy and with several side effects. Therefore,
the objective of this work was to evaluate the cytotoxic potential of the hexane
fraction of Euphorbia umbellata latex, the subfraction of that and the isolated
substance, euphol, against leukemia model lines. For this, the cells, Jurkat and
HL-60, were treated for 72 hours with the hexane fraction (1.25-75 μg/mL),
subfractions petroleum ether, dichloromethane, ethanol and methanol (1.25-75
μg/mL), and euphol (10-50 μg/mL), and their cell viability was evaluated by the
assay of MTT reduction at the end of this period. For the dichloromethane
subfraction (the most active), the cell viability was evaluated in the period of 24
and 48 hours, in addition, the selectivity index was determined. It should be
noted that the hexane fraction and subfractions were obtained by fractionation
in Soxhlet extractor, while euphol by acid precipitation, followed by column
chromatography, and being identified by nuclear magnetic resonance and mass
spectrometry. The hexane fraction was partitioned and the resulting
subfractions were analyzed by gas chromatography coupled to the mass
spectrometer. The chromatographic evaluation of the subfractions allowed to
suggest 10 substances, the triterpenes: euphol; lanosterol; cycloartenol;
tirucallol; taraxasterol and lupeol, the diterpenes: phorbol-12,13,20-triacetate; 4-
β-phorbol and 3-deoxo-3-16-dihydroxy-12-deoxyphorbol-3-13-16-20-tetracetate,
and the steroid sitosterol. As a result of the cytotoxic assay, an IC50 of 0.061 ±
1.226 μg/mL was obtained for HL-60 cells and 4.624 ± 1.088 μg/mL for Jurkat
cells; and for euphol an IC50 of 21.031 ± 1.778 μg/ml (HL-60) and 35.925 ±
5.011 μg/ml (Jurkat). Among the subfractions, the dichloromethane presented
the best response profile with values of 0,005±0,098 μg/mL (HL-60) and
0,200±0,957 μg/mL (Jurkat), revealing that the treatment is time dependent. In
addition, the dichloromethane subfraction was selective for the treatment of
leukemia with indexes of selectivity superior to 2.Therefore, it is concluded that
the subfraction dichloromethane is promising for the treatment of leukemia,
possibly by synergistic action of the terpenes in it.
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