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Atividade anti-inflamatória de rizomas de Echinodorus grandiflorus (Cham. & Schltdl.) Micheli (“Chapéu de Couro”)Ribeiro, Cristiane Junqueira 27 July 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012-07-27 / Echinodorus grandiflorus (Cham. & Schltdl.) Micheli é uma planta reconhecida
popularmente por seus efeitos medicinais e teve sua monografia descrita em
2010 na 5ª edição da Farmacopeia Brasileira. Entretanto, apesar do uso de
rizomas pela população, poucos são os estudos envolvendo esse órgão da
planta. O objetivo desse trabalho foi avaliar a atividade farmacológica de
frações semi-purificadas do extrato bruto metanólico de rizomas de E.
grandiflorus. Em princípio foi realizado o estudo de 8 cromatogramas em
CLAE-UV obtidos de extratos brutos etanólicos de rizomas frescos e secos nas
diferentes estações do ano. Após este estudo, foi obtido o extrato bruto
metanólico de rizomas que, posteriormente, foi fracionado por partição líquidolíquido
(v/v) obtendo-se três frações distintas: fração em hexano/acetato de
etila 9:1, fração em acetato de etila 100% e fração residual aquosa. O extrato
bruto metanólico de rizomas assim como as frações, foram estudados através
de análises por CLAE-UV e análise na literatura acerca dos constituintes
químicos e comparação com os já observados em folhas. A fração em acetato
de etila 100% foi utilizada para a avaliação da atividade antinociceptiva e antiinflamatória
in vivo. Foram realizados os testes de contorções abdominais,
formalina e placa quente frente à ação antinociceptiva e os testes de edema de
pata e pleurisia, ambos induzidos por carragenina, para avaliar a ação antiinflamatória.
Foi realizado ainda, o teste de produção de óxido nítrico por
células J774.A1, teste relacionado à ação anti-inflamatória das três frações
semi-purificadas. A citoxidade das três frações testadas foi verificada no teste
de MTT. Os resultados demonstraram que os extratos brutos etanólicos e o
extrato bruto metanólico são constituídos principalmente por uma mistura de
ácidos fenólicos derivados do ácido hidroxicinâmico, com maior produção de
constituintes na primavera e no verão. As frações semi-purificadas
apresentaram constituições químicas diferentes, com destaque para a fração
em acetato de etila 100% que concentrou a mistura de ácidos fenólicos
derivados do ácido hidroxicinâmico. A fração em acetato de etila 100% não
apresentou ação analgésica central, uma vez que não agiu na primeira fase do
teste de formalina e também não aumentou o tempo de latência ao estímulo
térmico no teste da placa quente. Entretanto, apresentou ação anti-inflamatória,
uma vez que foi capaz de inibir a formação de edema de pata e diminuiu o
volume do exsudato e o número total de leucócitos no teste de pleurisia.
Quanto à avaliação da produção de óxido nítrico, a fração em hexano 9:1
acetato de etila inibiu de forma mais significativa a produção desse mediador
inflamatório, porém as demais frações também demonstraram possuir essa
atividade. As três frações não apresentaram ação citotóxica nas concentrações
testadas. / Echinodorus grandiflorus (Cham. & Schltdl.) Micheli it is a plant popularly known
by its effects medicinals and had described his monograph in 2010 in the 5th
edition of the Brazilian Pharmacopoeia. However, despite the use the rhizomes
the population there are few studies involving this plant organ. The purpose of
this study was to evaluate the activity of pharmacological semi-purified fractions
of the methanolic crude extract of the rhizomes of E. grandiflorus. The principle
was carried out a study of eight chromatograms in HPLC-UV obtained from
crude ethanol extracts of fresh and dried rhizomes in different seasons. After
this study was obtained the methanolic crude extract of rhizomes which was
subsequently fractionated by liquid-liquid partition (v/v) to obtain three different
fractions: fraction in 9:1 hexane ethyl acetate, ethyl acetate fraction in 100%
and residual aqueous. The methanolic crude extract of rhizomes and three
semi-purified fractions were studied by HPLC-UV analysis and review the
literatue on the chemical constituents and comparison with literature reports
with those observed in leaves. The fraction in ethyl acetate 100% was used to
measure the antinociceptive and anti-inflammatory effect in vivo. Tests were
performed abdominal writhing, formalin and hot plate before antinociceptive
testing and paw edema and pleurisy induced by carrageenan both to evaluate
the anti-inflammatory action. It was conducted further testing production nitric
oxide by J774. A1 cells, test-related anti-inflammatory action of the three semipurified
fractions. The cytotoxicity of the three fractions was found in the MTT
assay. The results showed that the crude ethanolic and methanolic extract are
mainly a mixture of phenolic acid derivative from the hidroxicicinâmic acid, with
greater production of constituents in the spring and summer. The semi-purified
fractions showed different chemical constitutions with emphasis on the fraction
of ethyl acetate 100% to a concentrated mixture of phenolic acid derivative from
the hidroxicicinâmic acid. The fraction in ethyl acetate 100% showed no central
analgesic action, since it did not act in the first phase of the formalin test and did
not increase the latency time to the thermal stimulus in the hot plate test.
However active-inflammatory action showed, since it was able to inhibit paw
edema formation and decreased exudate volume and the total number of
leukocytes in the pleurisy test. The assessment of NO production, the fraction in
9:1 hexane ethyl acetate inhibited more significantly the production of
inflammatory mediators, but the other fractions also showed have this activity.
The three fractions showed no cytotoxic action at different concentrations.
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Mikania glomerata Sprengel (Guaco): obtenção de extrato seco e determinação do nível de cumarina por espectrofotometriaSilva, Luciana Soares e 11 May 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012-05-11 / Para o desenvolvimento do fitoterápico na forma sólida da planta medicinal Mikania glomerata Sprengel, popularmente conhecida como “guaco”, seguindo a RDC n º14 de Março de 2010, várias etapas precisam ser desenvolvidas, sob o ponto de vista tecnológico/farmacotécnico. O estudo dos processos de obtenção do extrato seco de guaco, para a produção de cápsulas de gelatina dura, com teor de cumarina condizente à dose terapêutica estabelece meios para atender ao Elenco de Referência de Medicamentos e Insumos Complementares para a Assistência Farmacêutica na Atenção Básica de Saúde (Portaria 2.982/GM/MS, 2009), necessário à complementação da saúde popular.
Partiu-se do extrato hidroalcoólico de guaco produzido com as folhas desidratadas, cultivadas no Horto Medicinal da FF/UFJF. Pesquisaram-se técnicas de evaporação para o extrato fluído de guaco em estufa, em banho de água quente e em rotaevaporador e de concentração do extrato por liofilização e atomização em spray-dryer.
As técnicas de evaporação do extrato fluído de guaco utilizadas pelos métodos de secagem em estufa, em banho de água quente e em rotaevaporador não foram apropriadas, resultando como produto final o extrato mole de guaco. Os métodos tecnológicos de concentração utilizados mediante aplicação dos processos de liofilização e de aspersão em spray-dryer foram satisfatórios. Os produtos finais apresentaram-se com aparência de um pó seco, homogêneo, de cor marrom claro, considerado de bom aspecto farmacotécnico para a produção de cápsulas de gelatina dura. Registrou-se uma maior massa de extrato seco de guaco através do processo de liofilização em relação à atomização. Também os teores de cumarina, observados em doseamento, foram superiores nessa mesma técnica quando comparados à secagem em Spray-dryer. A vantagem observada no processo de atomização por Spray-dryer foi em relação ao tempo, bem menor, em relação à liofilização.
Com esse estudo foi possível estabelecer um conhecimento técnico/científico para a obtenção de Extrato Seco de Guaco, necessário à fabricação de cápsulas duras contendo Mikania glomerata Sprengel, seguindo os critérios de qualidade presentes na RDC 14 de 31 de Março de 2010 e atendendo ao Programa Nacional de Plantas Medicinais e Fitoterápicos (PNPMF) aprovado pelo governo federal por meio do Decreto Presidencial no. 5813 de 22 de junho de 2006. / For the development of herbal medicine in the solid form of the medicinal plant Mikania glomerata Sprengel, popularly known as "guaco", following the RDC March 14, 2010, several steps need to be developed under the technological and pharmacotecnical point of view. To study the processes of obtaining dry extract guaco, for the production of hard gelatin capsules, containing coumarin consistent therapeutic concentration provides the means to meet the cast and Drug Reference Inputs Complementary to the Pharmaceutical Care in Primary Health Care (2.982/GM/MS Ordinance, 2009), necessary to complement the popular health.
We started from hydroalcoholic guaco produced from the dried leaves, grown in the Garden of Medicinal FF / UFJF. The study was carried evaporation techniques to extract fluid guaco in an oven in the hot water bath and rotaevaporator and concentration of the extract by lyophilization and spray-dryer atomization.
The techniques of evaporation of fluid extract of guaco methods used by kiln drying, in a hot water bath and rotaevaporator were not appropriate, as the final product resulting soft guaco extract. The technological methods used concentration by applying the processes of freeze-drying and spray-dryer were satisfactory. The final products presented with appearance of a dry powder, homogeneous, light brown, considered good looking pharmacotechnical for the production of hard gelatine capsules. Reported a greater mass of dry extract guaco by freeze-drying process in relation to the spray-dryer. Also the concentration of coumarin observed in assay, were superior in the same technique as compared to spray-dryer. The advantage observed in the atomization process by spray-dryer was over time, lower, compared to freeze-drying.
This study was possible to establish a technical / scientific to obtain Dry Guaco Extract necessary to the manufacture of hard capsules containing Mikania glomerata Sprengel, following the quality criteria in the DRC 14 March 31, 2010 and given the National Program for Medicinal Plants and Herbal Medicines (PNPMF) approved by the federal government through the Presidential Decree. 5813 to June 22, 2006.
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Avaliação do potencial anti-inflamatório tópico do extrato metanólico da Cecropia pachystachya Trécul (Cecropiaceae)Pacheco, Natália Ramos 18 July 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-07-18 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Cecropia pachystachya, também conhecida como embaúba, umbaúba, imbaúba, embaúva é utilizada na medicina popular para o tratamento de asma, tosse, hipertensão, bem como inflamação. Assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito anti-inflamatório tópico do extrato metanólico de C. pachystachya (EMCP) e investigar os possíveis mecanismos envolvidos nessa atividade. Para isso, o edema de orelha provocado pela aplicação de óleo de cróton (aplicação simples e múltipla), ácido araquidônico, fenol, EPP e capsaicina em camundongos foi utilizado. As aplicações tópicas desses agentes irritantes foram feitas nas orelhas direitas dos animais que foram pré-tratados com uma mistura de acetona (controle), dexametasona ou indometacina (controle positivo) e EMCP. Os resultados indicaram que EMCP apresentou atividade anti-inflamatória tópica significativa reduzindo o edema causado pelo óleo de cróton (aplicação única e múltipla), ácido araquidônico, fenol e EPP. Porém o edema causado pela capsaicina não foi reduzido por EMCP. A análise histológica mostrou que EMCP também tem atividade anti-inflamatória na inflamação crônica. Os resultados obtidos sugerem que o EMCP possui atividade anti-inflamatória tópica e indicam que um dos seus mecanismos de ação envolve a inibição na via do AA. Outro fator importante é que EMCP atua provavelmente por mais de um mecanismo, visto que foi tão efetivo contra a resposta desencadeada pelo fenol, quanto contra a resposta desencadeada pelo TPA. E também pode estar exercendo sua ação por atuar sobre mediadores, como eficientemente demonstrado no modelo do EPP e pela sua ação antioxidante. Além disso, a ação demonstrada no processo crônico torna a C. pachystachya uma planta com potencial para ser utilizada no desenvolvimento de formulações dermocosméticas destinadas ao tratamento de diversas condições dermatológicas. No entanto, estudos adicionais são necessários para confirmar o mecanismo de ação pelo qual essa planta exerce seus efeitos, bem como estudos que comprovem a segurança do seu uso tópico em humanos / Cecropia pachystachya, also known as embaúba, umbaúba, imbaúba, embaúva is used in folk medicine for the treatment of asthma, cough, high blood pressure, as well as inflammation. Thus, the present study aimed to evaluate the topical anti-inflammatory effect of the methanol extract of C. pachystachya (EMCP) and to investigate the possible mechanisms involved in this activity. Ear edema provoked by the application of croton oil (single and multiple application), arachidonic acid, phenol, EPP and capsaicin to mice was used to evaluate the potential anti-inflammatory value of the topical use of EMCP. Topical applications of these irritants were made to the right ears of animals that were pre-treated with acetone (control), dexamethasone or indomethacin (positive control), and EMCP. Our results indicated that EMCP demonstrated significant topical anti-inflammatory activity reducing inflammation related to ear edema caused by croton oil (single and multiple application), arachidonic acid, phenol and EPP. However, EMCP did not significantly reduce the edema caused by capsaicin. Histological analysis showed that EMCP also has chronic anti-inflammatory activity. The results suggest that the EMCP has topical anti-inflammatory activity and indicate that one of its mechanisms of action involves the inhibition via the AA. Another important factor is that EMCP probably acts by more than one mechanism, since it was so effective against the response triggered by phenol, and against the response triggered by TPA. And can also be exerting its action by acting on mediators, as effectively demonstrated the EPP model and its antioxidant action. In addition, the demonstrated action in the process becomes chronic C. pachystachya a plant with potential to be used in the development of dermocosmetic formulations intended for the treatment of various dermatological conditions. However, additional studies are needed to confirm the mechanism of action by which this plant exerts its effects, as well as studies to prove the safety of its topical use in humans.
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Isolamento e identificacao da arctigenina a partir dos frutos da Arctium lappa L. e avaliacao de atividade citotoxica in vitro e hepatoprotetora em ratosTeixeira, Renan Salgado 29 July 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-07-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Arctigenina é uma lignana isolada da Arctium lappa L., planta esta, pertencente a
família Asteraceae que é amplamente utilizada na Medicina Tradicional Chinesa.
Publicações citam inúmeras atividades farmacológicas do extrato bruto dessa planta
e também da substância arctigenina, como a atividade anti-inflamatória,
hepatoprotetora, hipoglicemiante, antitumoral, antimicrobiana, mas, estudos
detalhados da atividade hepatoprotetora ainda não foram amplamente
desenvolvidos. Portanto, o objetivo deste estudo foi o isolamento, a obtenção e
identificação da arctigenina a partir dos frutos da Arctium lappa L., para avaliar a
atividade citotóxica in vitro frente à cultura de células de carcinoma hepático (HepG-
2) e tambén avaliar os efeitos dessa substância isolada em lesão hepática por
Ligação do Ducto Biliar (BDL). O extrato clorofórmico bruto da Arctium lappa L. foi
obtido por soxhlet. Para isolar as substâncias, foi realizada coluna a vácuo e
observou grande quantidade de arctiina, uma precursora da arctigenina. Para obter
a arctigenina, foi necessário realizar uma hidrólise para retirada da molécula de
glicose presente na arctiina. A mesma foi identificada por RMN de 1H e 13C obtendo
excelente grau de pureza e adicionalmente também foi realizado um perfil
cromatográfico por CLAE. Nos experimentos in vitro, a arctigenina diminuiu a
viabilidade celular no teste por MTT e azul de Tripan sobre células HepG-2 e não
causou citotoxicidade sobre células NIH/3T3. O teste de adesão por fornecimento de
colágeno tipo I sobre HepG-2 também foi realizado para observar os mecanismos
que envolvem a atividade antitumoral da arctigenina. Nos experimentos in vivo foram
realizadas cirurgias de BDL em ratos Wistar, com n= 6 e grupos divididos em: sham
controle, sham arctigenina, BDL controle, BDL arctigenina e BDL silimarina. O
tratamento dos animais foi feitos por 48 horas e após esse período, eutanasiados e
o sangue e fígado foram coletados para realizar avaliações bioquímicas séricas
(AST, ALT, FA e TNF-α) e também avaliação tissular (MPO). A metodologia de
extração, isolamento e obtenção da arctigenina desenvolvida foi eficaz, diminuiu
gastos com solventes e com o tempo para se obter as susbstâncias. Os parâmetros
de confiança analisados por CLAE demonstraram que o método analítico
desenvolvido foi específico e reprodutível, o que contribui para estudos em controle
de qualidade e ensaios bioanalíticos. A arctigenina demonstrou atividade citotóxica e
antiadesão, sendo a atividade dose dependente para células HepG-2, com IC 50 de
90,8 μM. Nenhuma atividade sobre células NIH/3T3, o que demonstrou ação
específica sobre a células HepG-2. Resultados do estudo in vivo de 48 horas não
apresentaram resultados significantes quando comprados aos grupos controle e
controle positivo, entretanto, levantamentos bibliográficos mostram que a arctigenina
é uma substância promissora e estudos de hepatoproteção por períodos maiores
complementariam a elucidação de sua atividade. / Arctigenin is a lignan isolated from Arctium lappa L., this plant, belonging to family
Asteraceae is widely used in traditional chinese medicine. Publications suggest
numerous pharmacological activities of crude extracts of this plant and arctigenin as
anti-inflammatory activity, hepatoprotective, hypoglycemic, anticancer and
antimicrobial, however detailed studies of hepatoprotective activity have not yet been
widely developed. The aim of this study was the isolation and identification of
arctigenin obtained from the fruits of Arctium lappa L., to evaluate the cytotoxic in
vitro of arctigenin in cell culture of liver carcinoma (HepG-2) and assess the effects of
this isolated compound on liver injury by ligation bile duct (BDL). The crude
chloroform extract of Arctium lappa L. was obtained by soxhlet. To isolate the
compounds was held vacuum column and observed high concentration of arctiin, a
precursor of arctigenin. To obtain arctigenin, it was necessary to carry out a
hydrolysis to remove the glucose molecule present in arctiin. After, the molecule was
identified by 1H NMR and 13C, attaining excellent purity, and additionally, was
carried out his chromatographic profile by HPLC.. In vitro experiments show that the
arctigenin decreased cell viability by MTT assay and the Trypan blue on HepG-2
cells and did not cause cytotoxicity on NIH/3T3 cells. Adhesion testing by providing
collagen type I on HepG-2 was also carried out to observe the mechanisms involving
the antitumor activity of arctigenin. In vivo experiments were performed by surgery in
BDL rats, with n = 6 and divided into groups: sham control, sham arctigenin, control
BDL, arctigenin BDL and silymarin BDL. The treatment of animals was made for 48
hours and after this period, euthanized and blood and liver were collected for serum
biochemical assessments (AST, ALT, FA and TNF-α) and also tissue rating (MPO).
The methodology of extraction, isolation and obtaining arctigenin developed was
effective, decreased spending solvents and the time to get compounds. The trust
parameters analyzed by HPLC showed that the analytical method was specific and
reproducible, which contributes to quality control studies and bioanalytical assays.
The arctigenin demonstrated cytotoxic activity and anti-adhesion, and dependent
dose activity in HepG-2 cells, with IC 50 of 90.8 μM. No activity on NIH/3T3 cells,
demonstrating the specific action on HepG-2 cells. Results of BDL done in 48 hours
showed no significant results when comparing with control groups and positive
control, however, literature reports show that the arctigenin is a promising compound
and hepatoprotection studies for longer periods would complement the elucidation of
its activity.
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Levantamento etnofarmacológico nos bairros do entorno da Reserva Biológica Municipal Poço D’anta cobertos por unidades de atenção primária à saúdeBorcard, Guiomar Godinho 16 July 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-07-16 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O presente trabalho teve como objetivo realizar um estudo etnofarmacológico nas comunidades localizadas no entorno da Reserva Biológica Poço D’ Anta, buscando fornecer subsídios para a implantação da Fitoterapia em Juiz de Foram, MG. Para tal, foram realizados entrevistas nas referidas comunidades entre 3 amostras: profissionais de saúde que trabalham na Unidade de Atenção Primária à Saúde (UAPS)(Agente Comunitário de Saúde, Técnico de Enfermagem, Enfermeiro, Dentista, Médico e Assistente Social), usuários das UAPS (domiciliares), e entrevistados referenciais (pessoas conhecedoras de Plantas Medicinais). Para análise estatística e confirmação bibliográfica de finalidade para ações farmacológicas preconizadas selecionou-se um total de 20 espécies botânicas ao se entrevistar os domiciliares e entrevistados referenciais (ER). Calculou-se a importância relativa de tais espécies para a população e o fator de consenso entre os informantes. Em relação aos profissionais de saúde pôde-se constatar que nenhum entrevistado soube conceituar o termo Fitoterápico segundo a ANVISA e que não conheciam suas políticas. A maior fonte de conhecimento sobre as plantas medicinais (PM) advêm do conhecimento autodidata (53,5%), sendo que 83% conhecem usuários da UAPS que utilizam PM por conta própria. Quanto ao retorno clínico do uso de PM 86,6% dos entrevistados consideram o tratamento mais barato, 75% acreditam ser um tratamento seguro e eficaz e 51% ressalta o benefício de menor reação adversa. Portanto existe a aceitabilidade da implantação de fitoterapia nas UAPS envolvidas, porém o conhecimento do tema ainda é limitado. Ao se entrevistar os domiciliares e ER levantou-se um total de 84 espécies botânicas. Constatou-se que 78,2% dos entrevistados utilizam PM e que esse conhecimento tem sido repassado a familiares e vizinhos principalmente. As espécies que apresentaram maior freqüência de citação foram: Plectrantus barbatus Andrews, Lippia alba (Mill.)N.E.Br., Foeniculum vulgare Mill. e Phyllanthus tenellus L. e as espécies consideradas mais versáteis foram: Rosmarinus officinalis L., Leonurus sibiricus L., Plantago major L. e Lippia alba (Mill.)N.E.Br.; por esta razão poderiam ser cultivadas no Horto da Prefeitura (localizado dentro da reserva) considerando a sua relevância e aplicabilidade para as comunidades do entorno desta Reserva. A partir das plantas elencadas a confirmação farmacológica possibilitou aproximar o conhecimento cultural em relação ao científico de 14 espécies. Este trabalho subsidia a aproximação da sabedoria popular do conhecimento científico o que poderá servir de base não só para manutenção deste conhecimento na comunidade, mas também como fomento para a implantação da Fitoterapia no município de Juiz de Fora. / The present study aimed to undertake an ethnopharmacological study in the communities located near the ReBio Poço D'Anta, seeking to provide grants for the deployment of Phytotherapy in the city of Juiz de Fora, MG. For such purpose, interviews were performed in these communities within three samples: health professionals of UAPS (Community Health Agents, Nursing Technichians, Nurses, Dentists, Physicians and Social workers), UAPS users (home patients), and referent respondents (with knowledge of medicinal plants - PM). To perform the statistic analysis and bibliography confirmation for the preconized pharmacological effects, a number of 20 botanical species were selected when interviewing the home patients and the referent respondents (ER). The importance of these species to the population ans the agreement factor was calculated. Regarding the health professionals it could be verified that no interviewed were able to explain the term phytotherapy and they didn't know about its policies. The largest source of knowledge about the PM come from autodidact knowledge 53.5%,of whitch 83% know UAPS users that use PM on their own. As for the clinical return of the use of MP 86.6% consider the cheaper treatment, about 75% believe to be a safe and effective treatment and 51% highlights the benefit of lower adverse reaction. Therefore there is acceptability for the implantation of phytotherapy in the UAPS involved, but knowledge of the subject is still limited. By interviewing the community and ER rose a total of 84 botanical species. It was found that 79% of the respondents use medicinal plants and that this kind of knowledge has been passed on, mostly to relatives and neighbors. The most mentioned species were: Plectrantus barbatus Andrews, Lippia alba (Mill.) N.E.Br, Foeniculum vulgare Mill., Phyllanthus tenellus L., the most versatile species considered are: Rosmarinus officinalis L., Leonurus sibiricus L., Plantago major L. and Lippia alba., therefore could be grown in the Garden of the City, considering their versatility and relevancy to the communities near this Garden City. From the listed plants the pharmacological confirmation made possible to approach the cultural and the scientific knowledge for 14 species. This study support the approach of common knowledge and scientific knowledge, which can serve as a basis not only for maintenance of this knowledge in the community, but also as an encouragement for the establishment of Phytotherapy in the city of Juiz de Fora.
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Abordagem organocatalítica, utilizando o (+/-)-ácido canforsulfônico, para a síntese de dipeptídeos através de azalactonasCastro, Pedro Pôssa de 22 July 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-07-22 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A síntese de aminoácidos biologicamente funcionais e pequenos peptídeos tem se mostrado uma área promissora da química orgânica. As azalactonas podem atuar como aminoácidos protegidos e serem utilizadas na síntese de derivados de aminoácidos e heterociclos complexos. Neste trabalho são descritas reações de abertura de azalactonas por aminoácidos catalisadas por um ácido de Brønsted, o (+/)-ácido canforsulfônico (ACS), resultando na formação de dipeptídeos. Os heterociclos azalactônicos foram preparados em duas etapas: uma acilação dos aminoácidos com cloreto de benzoíla em meio alcalino, levando aos N-benzoil aminoácidos com até 75% de rendimento, e uma reação de ciclização intramolecular mediada pelo EDC, um ativador de ácido carboxílico, culminando nas azalactonas desejadas em rendimentos que variaram de 8298%. As condições otimizadas para a reação para a formação dos dipeptídeos consistiram na utilização de 5 mol % de ácido canforsulfônico como catalisador, diclorometano como solvente, agitação e temperatura ambiente. Avaliou-se o escopo de reação variando as azalactonas utilizadas e também os aminoácidos empregados como nucleófilos. Os rendimentos foram de bons a excelentes (entre 66 e 99%) e mesmo o uso de aminoácidos e azalactonas mais impedidos do ponto de vista estéreo, como nos derivados de valina e leucina, forneceu os respectivos dipeptídeos em bons rendimentos. Os produtos foram caracterizados por RMN de 1H, 13C, DEPT135, IV e de EMAR. Foi demonstrada a possibilidade de ciclização intramolecular dos dipeptídeos obtidos utilizando-se EDC, resultando em uma nova azalactona de estrutura mais complexa. Finalmente, a substituição do grupo N-benzoil por terc-butil carbamato tornou possível a síntese de uma azalactona sem que houvesse epimerização do centro estereogênico alfa à carbonila, sendo realizada ainda a posterior abertura deste heterociclo pela octilamina. / The synthesis of biologically functional amino acids and small peptides has been a promising area of organic chemistry. The azlactones can act as protected amino acids and are used in the synthesis of amino acid derivatives and complex heterocycles. This work describes azlactones ring opening by amino acids catalyzed by a Brønsted acid, the (+/-)-camphorsulfonic acid (CSA), resulting in the formation of dipeptides. The azlactone heterocycles were prepared in two steps: an acylation of the amino acid with benzoyl chloride under alkaline conditions leading to N-benzoyl amino acids with up to 75% yield, and an intramolecular cyclization reaction mediated by EDC, a carboxylic acid activator, affording the desired azlactones in yields ranging from 82-98%. The optimized conditions for the dipeptide formation reaction consisted of 5 mol % of camphorsulfonic acid as a catalyst, dichloromethane as solvent, stirring and at room temperature. The scope was evaluated varying the azlactones and the amino acids. Yields were satisfactory (ranging from 66 to 99%). Even the use of more sterically hindered amino acids and azlactones, such as valine and leucine derivatives, the dipeptides were obtained in good yields. The products were characterized by 1H NMR, 13C, DEPT135, IR and HRMS. The possibility of an intramolecular cyclization of the dipeptides using EDC has been demonstrated, resulting in a more complex azlactone. Finally, the substitution of the N-benzoyl group by tert-butyl carbamate allowed the synthesis of an azalactone without epimerization of the stereogenic center alpha to the carbonyl, a subsequent opening of the heterocycle by octylamine was also performed.
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Atividades antifúngica e antiocratoxigênica dos óleos essenciais de Rosmarinus officinallis L. e Piper aduncum L. sobre Aspergillus carbonariusMendes, Ana Cristina Capelupi 31 July 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015-07-31 / A contaminação de produtos alimentícios e medicinais pode ocorrer desde o cultivo até a estocagem, principalmente quando não existe controle das condições que favorecem o crescimento fúngico. O fungo Aspergillus carbonarius causa a deterioração dos produtos, além de produzir ocratoxina A, potencialmente carcinogênica e nefrotóxica. O aumento de cepas resistentes aos antifúngicos sintéticos além da diversidade de ações biológicas relacionadas às espécies vegetais Rosmarinus officinallis L. e Piper aduncum L. estimula as pesquisas científicas por novos antimicrobianos. Considerando o aumento da exposição aos agentes fúngicos, devido ao crescimento do consumo de produtos in natura, e a alta incidência de ocratoxina A, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a ação antifúngica e antiocratoxigênica dos óleos essenciais de R. officinallis L. e P.aduncum L. sobre o fungo Aspergillus carbonarius CDCA 0126. Os óleos essenciais foram obtidos por hidrodestilação e o perfil químico determinado por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas. O efeito inibitório dos óleos essenciais sobre os isolados fúngicos foi determinado pela associação dos métodos da difusão em disco e diluição em ágar e quantificação de ocratoxina por cromatografia líquida de alta eficiência. Foram identificados como compostos majoritários verbenona (24,61%), geraniol (17,55%) e 1,8 cineol (11,26%) e no óleo de P.aduncum L., piperitona (28,17%) e limoneno (10,42%). Os ensaios in vitro demonstraram a efetividade dos óleos na inibição do crescimento fúngico. O óleo essencial de R.officinallis L. reduziu em 94,36% a produção da ocratoxina A, sendo que o óleo de P.aduncum L. inibiu totalmente a produção. Os resultados deste trabalho indicam que os óleos essenciais avaliados representam uma alternativa promissora no controle do crescimento A. carbonarius e na produção de ocratoxina A. / The contamination of food and medicinal products plants, can occur from cultivation to storage, especially when there is no control of the conditions that favor fungal growth. The fungus Aspergillus carbonarius causes deterioration of products, in addition to producing ochratoxin A, a potentially carcinogenic and nephrotoxic. The increase of synthetic antifungal resistant strains beyond the diversity of biological actions related to Rosmarinus officinalis L. plant species and Piper aduncum L. encourages scientific research for new antimicrobials. Considering the increased exposure to fungal agents, due to elevation consumption of fresh products and the high incidence of ochratoxin A, this study aimed to evaluate the antifungal action and antiochratoxigenic property of essential oils R.officinallis L. and P. aduncum L. on the fungus Aspergillus carbonarius CDCA 0126. The essential oils were obtained by hydrodistillation and the chemical profile determined by gas chromatography-mass spectrometry. The inhibitory effect of essential oils on the fungal isolate was determined by the association of disk diffusion and agar dilution methods and the quantification of ochratoxin A released by high-performance liquid chromatography. They were identified as major compounds verbenone (24.61%), geraniol (17.55%) and 1,8 cineole (11.26%) in R.officinallis L. essential oil and piperitone (28.17%) and (10.42%) P.aduncum L.. In vitro assays demonstrated the effectiveness of oil in the inhibition of fungal growth. The essential oil R.officinallis L. reduced the 94.36% the production of ochratoxin A, whereas the oil P.aduncum L. completely inhibited production. These results indicate that the evaluated essential oils represent a promising alternative for the control of A. carbonarius growth and production of ochratoxin A.
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Aplicação da apirase de batata e de polipeptídeo recombinante derivado no estudo da ATPDase 2 de Schistosoma mansoni e da esquistossomose mansoniSoares, Thais Vieira 18 July 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012-07-18 / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Um polipeptídio originado do domínio B conservado da apirase de batata (r78-117), homólogo ao domínio B da isoforma ATPDase 2 de Schistosoma mansoni (r156-195), foi obtido como um polipeptídio com cauda de hexahistidina (r-potDomínio B). Anticorpos policlonais anti-r-potDomínio B, quando imobilizados em Proteína A-Sepharose, imunoprecipitaram 67-91% das atividades ATPásica e ADPásica de preparação de vermes adultos. Por “Western blots”, o soro imune reconheceu bandas de 63 e 55 kDa na preparação do parasito e no complexo imunoprecipitado, confirmando a identidade da isoforma ATPDase 2. Adicionalmente, anticorpos policlonais anti-r-potDomínio B inibiram 38-58% das atividades ATPásica e ADPásica, sugerindo que o domínio B da ATPDase 2 de S.mansoni é um novo alvo para o desenho de inibidores. Amostras de soros de pacientes com esquistossomose foram testados em ELISA usando r-potDomínio B como antígeno. A soropositividade da subclasse IgG1 (27%, 8/30), IgG2 (27%, 8/30), IgG3 (50%, 15/30) ou IgG4 (17%, 5/30) sugeriu que o domínio B da ATPDase 2 está potencialmente envolvido na resposta imune do hospedeiro. A apirase de batata ou r-potDomínio B, emulsificado em adjuvantes Completo e Incompleto de Freund, foi inoculado em camundongos Suíços, aumentando a produção de anticorpos IgG, os quais foram também reativos com antígenos solúveis de ovos (SEA). Imunidade protetora induzida por cada biomolécula foi avaliada 60 dias após o desafio com cercárias. Nenhuma redução de vermes ou do número de ovos foi observada. Camundongos imunizados com apirase de batata desenvolveram altos níveis de anticorpos IgG1 reativos com as biomoléculas e SEA, enquanto anticorpos IgG2a foram produzidos em menor proporção, sugerindo uma tendência de resposta imune do tipo Th2. O r-potDomínio B foi capaz de induzir maior produção de anticorpos IgG2a reativos com as biomoléculas e SEA, uma resposta imune possivelmente associada ao tipo Th1. Análises histológicas de cortes de fígado corados por hematoxilina-eosina, obtidos de camundongos imunizados com apirase de batata, mas não com r-potDomínio B, mostraram uma redução significativa na área do granuloma, como evidenciado pela redução do número de células e substituição por fibras de colágeno. Estudos futuros destas biomoléculas poderão contribuir para um melhor entendimento da interação parasito e hospedeiro, e poderão ser exploradas como novas ferramentas de estudo da esquistossomose. / A polypeptide belonging to the conserved domain B (r78-117) from the potato apyrase, homologue to the domain B (r156-195) from the S. mansoni ATPDase 2 isoform, was obtained as a 6xHis tag polypeptide (r-potDomain B). Polyclonal anti-r-potDomain B antibodies, when immobilized on Protein A-Sepharose, immunoprecipitated 67-91% of the ATPase and ADPase activities from the adult worm preparation. By Western blots, the immune serum recognized band of 63 and 55 kDa in both parasite preparation and immunoprecipitated complex, confirming the ATPDase 2 identity. Additionally, polyclonal anti-r-potDomain B antibodies inhibited 38-58% of the ATPase and ADPase activities, suggesting that the domain B from the S.mansoni ATPDase 2 is a new target for inhibitor design. Serum samples from patients with schistosomiasis were tested in ELISA using r-potDomain B as coating antigen. The seropositivity of the subclass IgG1 (27%, 8/30), IgG2 (27%, 8/30), IgG3 (50%, 15/30) or IgG4 (17%, 5/30) suggested that the domain B from the ATPDase 2 is potentially involved in the host immune response. The potato apyrase or r-potDomain B, emulsified in Freund Complete and Incomplete adjuvants, was inoculated in Swiss mice, increasing the IgG antibodies production, which were also reactive with soluble egg antigens (SEA). Protective immunity induced by each biomolecule was evaluated 60 days after challenge infection. No worm burden or egg number reduction was observed. Mice immunized with potato apyrase developed high IgG1 antibody levels, reactive with either biomolecules or SEA, while IgG2a antibody levels were produced in lower proportion, suggesting a tendency of a Th2 type immune response. The r-potDomain B was able to induce higher IgG2a antibody production, an immune response possibly associated to the Th1 type. Histological analyses of haematoxylin-eosin-sections obtained from mice immunized with potato apyrase, but not with r-potDomain B, showed a significant reduction in liver granuloma area as evidenced by the cells number reduction and substitution by collagen fibbers. Further studies of these biomolecules could contribute to a better understanding of host-parasite interactions, and may to be explored as new tools in schistosomiasis research.
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Estudo fitoquímico e atividades biológicas das folhas de Pereskia aculeata Miller (Cactaceae)Pinto, Nícolas de Castro Campos 06 July 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012-07-06 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Pereskia aculeata Miller, popularmente conhecida como ora-pro-nobis, é uma trepadeira arbustiva cujas folhas são empregadas na culinária tradicional de algumas regiões do Brasil. Na medicina popular, são utilizadas como cicatrizantes e no abrandamento de processos inflamatórios. Para contribuir com os estudos sobre P. aculeata, a caracterização fitoquímica de seu extrato bruto metanólico e partições, além do doseamento de fenóis e flavonoides e da pesquisa por compostos indólicos. In vitro, foi avaliada a atividades citotóxica para macrófagos normais, células HL60 e MCF-7 e parasitos do gênero Leishmania pelo método do MTT e a atividade antimicrobiana pelo método de microdiluição em caldo. Além disso, avaliou-se, in vivo, a atividade anti-inflamatória do extrato bruto pelo modelo de edema de orelha induzido pelo óleo de cróton e a atividade antinociceptiva do
extrato bruto e partições pelo método de contorções abdominais induzidas pelo ácido acético. Uma vez que a partição hidrometanólica demonstrou maior potencial antinociceptivo, esta também foi estudada pelos testes da formalina, tail-flick e contorções abdominais induzidas pelo ácido acético em animais pré-tratados com pclorofenilalanina (PCPA). O perfil cromatográfico da partição hidrometanólica foi
determinado por CLAE. Todas as classes de constituintes químicos pesquisados foram encontrados, à exceção de triterpenos e saponinas. Alcaloides, flavonoides e compostos indólicos foram encontrados em todas as amostras estudadas. A partição em diclorometano apresentou maiores concentrações de fenóis e flavonoides. O extrato bruto e algumas partições demonstraram toxicidade diante de células HL60 e MCF-7. Nenhuma das amostras apresentou toxicidade para macrófagos normais, parasitos do gênero Leishmania e para as estirpes de bactérias testadas. No ensaio do edema de orelha, o extrato bruto apresentou atividade edematogênica via oral, e a análise histológica dos fragmentos de orelha sugeriu que o edema não deve ter sido causado por um aumento do processo inflamatório. O estudo mais aprofundado da partição hidrometanólica revelou que seu mecanismo de ação antinociceptivo se
dá a nível periférico e central, não associado à ativação de receptores opióides ou à liberação e síntese de serotonina. A análise por CLAE revelou a presença de substâncias cujo espectro UV é típico de compostos indólicos. Segundo a literatura, as folhas de P. aculeata são ricas em triptofano, aminoácido precursor da serotonina, um dos mediadores inflamatórios vasodilatores e um dos neurotransmissores que atuam inibindo a nocicepção a nível central. Nas plantas, o triptofano dá origem aos alcalóides indólicos, compostos estruturalmente semelhantes à serotonina. Assim, levanta-se a hipótese de que alcalóides indólicos estejam contribuindo para os efeitos observados in vivo para o extrato bruto e a
partição hidrometanólica. / Pereskia aculeata Miller, known as ora-pro-nobis, is a climbing shrub which leaves are used in tradicional cuisine in Brazil. The leaves are used in folk medicine in skin wound healing and to treat inflammation. To contribute to the studies on P. aculeata, the phytochemical characterization of its crude methanol extract and partitions, the quantification of phenols and flavonoids and the search for indoles compounds were carried out. In vitro, we tested the cytotoxic activity to normal macrophages, HL60
and MCF-7 cells and parasites of the genus Leishmania by MTT method and also antimicrobial activity by microdilution method. Furthermore, we evaluated the in vivo anti-inflammatory activity of the crude extract by the model of ear edema induced by croton oil and antinociceptive activity of crude extract and partitions by acetic acidinduced writhing test. Since hydromethanolic partition showed the greatest
antinociceptive potential, it was also studied by acetic acid-induced writhing test in animals pretreated with p-chlorophenylalanine (PCPA), formalin and tail-flick tests. The chromatographic profile of the hydromethanolic partition was determined by HPLC. All classes of chemical constituents investigated were found, with the exception of triterpenes and saponins. Alkaloids, flavonoids and indoles were found in all samples. Dichloromethane partition showed higher phenols and flavonoids contents. Crude extract and some partitions showed cytotoxicity against HL60 and MCF-7 cells. None of the samples showed cytoxicity against normal macrophages, Leishmania parasites or bacteria strains. Crude extract showed edematogenic activity in croton oil test when administered orally, but the histological analysis of the ears suggested that the edema should not have been caused by an increase in inflammatory process. The study further revealed that the antinociceptive mechanism of hydromethanolic partition was peripheral and central, but not related to opioid receptors or serotonin synthesis and release. HPLC analysis revealed the presence of indoles in this partition. The leaves of P. aculeata are rich in tryptophan, a serotonin precursor. Serotonin is a vasodilator and a neurotransmitter which inhibits
central nociception. In plants, tryptophan leads to indole alkaloids, structurally similar to serotonin. Thus, we hypothesize that indole alkaloids are involved in the in vivo activities observed for crude extract and hydrometanolic partition.
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Aplicação de FACE (fluorophore assisted carbohydrate electrophoresis) na análise de condroitim sulfato de usoCunha, André Luiz da 31 July 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012-07-31 / Condroitim sulfato é um glicosaminoglicano sulfatado composto por unidades dissacarídicas formadas por ácido D-glucurônico e N-acetil-galactosamina. Este polissacarídeo é utilizado no Brasil em combinação com outros fármacos para tratamento de osteoartrite. Este trabalho teve como objetivo avaliar a qualidade do insumo farmacêutico condroitim sulfato de sódio utilizado em farmácias de
manipulação. Para isso foi necessário estabelecer uma técnica de eletroforese em gel de poliacrilamida para análise de açúcares (FACE), bem como produzir enzimas específicas para a digestão de condroitim sulfato. Diferentes dissacarídeos insaturados, monossacarídeos sulfatados e açúcares neutros derivatizados com 2-aminoacridona foram separados por FACE, usando dois sistemas tampão distintos. Fracionamos por cromatografia de interação hidrofóbica três condroitinases de F. heparinum – condroitinase AC, C e B. Por FACE caracterizamos a atividade dessas enzimas e identificamos contaminação de condroitinase AC por sulfatase específica para hexosamina sulfatada na posição 4, que foi inibida por fluoreto de sódio (10 mM). Glucuronidase com atividade específica para dissacarídeo não sulfatado e 6-sulfatado foi detectada em condroitinase C, e sacarolactona (10 mM) foi capaz de
impedir somente a degradação de ΔDi0S. Dosagem de condroitim sulfato em amostras farmacêuticas foi realizada por eletroforese em gel de agarose e por titulação fotométrica. Teor superior a 80% foi encontrado em apenas cinco matériasprimas. O peso molecular médio do condroitim sulfato nessas amostras variou entre 16 e 26 kDa, e análise dissacarídica por FACE revelou proporções próximas entre dissacarídeo 4-sulfatado e 6-sulfatado. Onze amostras apresentaram teor inferior a 20%, e análise por FACE demonstrou presença de contaminação por lactose ou polímeros de glicose com diferentes pesos moleculares. Concluímos neste estudo que há grande distorção entre os resultados reportados no certificado de análise de onze insumos analisados e os resultados obtidos nesse trabalho. Torna-se necessário, portanto, maior fiscalização e regulação do comércio deste produto. / Chondroitin sulfate is a sulfated glycosaminoglycan composed of alternate sequences of D-glucuronic acid and N-acetyl-D-galactosamine. This polysaccharide is widely recommended for treatment of osteoarthritis in Brazil, in association with other drugs. The objective of the present study was to evaluate the quality of chondroitim sulfate raw material used for pharmaceutical recipes. A polyacrylamide gel electrophoresis method for carbohydrate analysis (FACE) was established, so as
the production of specific enzymes able to digest chondroitin sulfate. Different unsaturated disaccharides, sulfated monosaccharides and neutral sugars derivatized with 2-aminoacridona were resolved by FACE, using two distinct buffer systems. F. heparinum chondroitinase AC, C and B were fractioned by hydrophobic interaction chromatography, and the activity of these enzymes was characterized by FACE. Chondroitinase AC demonstrated contamination by a sulfatase specific for sulfation at position 4 of hexosamine, which was inhibited by 10 mM sodium fluoride. Glucuronidase contamination with specific activity against non sulfated and 6-sulfated disaccharide was detected in chondroitinase C, and 10 mM D-saccharic acid-1,4-lactone inhibited the degradation of only non sulfated disaccharide. Chondroitin sulfate content in pharmaceutical raw materials was determined by
agarose gel electrophoresis and by photometric titration. Only five samples showed content greater than 80%. Chondroitin sulfate average molecular weight in these samples varied from 16 to 26 kDa, and disaccharide analysis by FACE revealed similar proportions between 4-sulfated and 6-sulfated disaccharide. Eleven samples showed less than 20% of chondroitin sulfate, and contaminant analysis by FACE detected the presence of lactose or different polymers of glucose. We concluded that
there is a large distortion between the data reported at the certificate of analysis of eleven products and the results obtained in this work. Stricter regulation of this raw material should be enforced.
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