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Clonagem, expressão e purificação da proteína ligadora de alcano sulfonatos do sistema de transporte ABC de Xanthomonas axonopodis pv.citri. / Cloning, expression and purification of the Xanthomonas axonopodis pv citri ABC transport alkanosulphonate-binding protein.Araújo, Fabiano Tófoli de 13 August 2008 (has links)
O genoma de Xanthomonas citri (Xac) possui mais de 20 tipos de transportadores do tipo ABC incluindo o operon ssuABC associado ao transporte de alcano sulfonatos. Deste operon, escolhemos a proteína periplasmática ligadora de alcano sulfonatos SsuA2, para caracterização e análises espectroscópicas e estruturais. A rSsuA2 foi expressa no citoplasma de células de Escherichia coli e utilizada para a preparação de anticorpos em camundongos, que foram capazes de reconhecer a proteína recombinante, mas não a nativa no extrato de células de Xac. A rSssuA2 apresenta estrutura característica de proteínas alfa-beta, maior estabilidade em pH neutro (7.0), como também foi evidenciado pela obtenção de cristais somente nesta faixa, e pouca flexibilidade ao desenovelamento térmico. Os cristais difratam com resolução de 1.8 Å e pertencem ao grupo espacial de simetria P21. Além do o operon ssu (ssu2) altamente conservado, Xac apresenta o operon tau (ssu1) para captação de taurina. O papel do operon para Xac é discutido. / Xanthomonas citri (Xac) genome has more than 20 different ABC transporters, including the ssuABC operon. In this work, the alkanosulphonate-periplasmic binding protein SsuA2 was chosen for spectroscopic and structural analysis. The rSsuA2 protein was expressed as a soluble form and purified by immobilized metal affinity chromatography. Antibodies produced from the recombinant protein were able to recognize the rSsuA2, but not the native protein in the Xac extract samples. The protein presents secondary structure defined by alfa helices and beta-sheets, high stability in neutral pH and low flexibility to the thermal denaturation. The determination of the optimal pH range was important to produce crystals of high quality diffracting at 1.8 Å with symmetry of the P21 spatial group. Besides the highly conserved operon ssu (ssu2), Xac has the tau operon (ssu1) for taurine uptake.
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Perfil químico de amostras de própolis brasileiras / Chemical Profile of Brazilians Propolis SamplesRighi, Adne Abbud 24 November 2008 (has links)
A própolis é uma substância resinosa, formada por produtos coletados de plantas e substâncias produzidas pelas abelhas, cuja textura e coloração varia dependendo da fonte de coleta e respectiva fenologia. É utilizada na colméia para diversas finalidades: vedar aberturas, forrar a entrada da colméia e envolver invasores. O interesse por própolis tem crescido muito, devido à comprovação experimental de suas atividades biológicas, tais como citotóxica, anti-herpes, anti-HIV, antitumoral, antimicrobiana e antioxidante. A composição química da própolis é complexa, compreendendo, além de cera de abelha, flavonóides, ácidos fenólicos, terpenóides, substâncias voláteis, entre outros constituintes. A composição depende de vários fatores, principalmente da região onde é produzida. Neste trabalho, estabeleceu-se o perfil químico de amostras de própolis brasileiras, baseando-se nos teores de substâncias fenólicas totais, flavonóides totais e ceras de amostras de distintas regiões do território brasileiro: Ponta Grossa (PR), Bauru e Pariquera-Açu (SP), Lavras e Mira Bela (MG), Pirenópolis (GO), Cabo Verde (BA), Maceió (AL) e Picos (PI). Os teores de fenóis totais foram determinados pelo no método de Folin Ciocalteau, utilizando-se ácido p-cumárico como referência. A dosagem de flavonóides totais baseou-se em dois métodos espectrofotométricos complementares: cloreto de alumínio e dinitrofenil-hidrazina, usando-se quercetina e pinocembrina, respectivamente, como referências. Os teores de ceras foram obtidos por extração com clorofórmio, tratamento com metanol e pesagem do resíduo. Os resultados demonstraram grande diversidade química entre as amostras estudadas, inclusive entre amostras do mesmo estado. Tal é o caso das amostras de Lavras e Mira Bela, e Bauru e Pariquera-Açu. Os teores de fenóis totais variaram de 0,91% a 41,63%, sendo o maior percentual referente à amostra de própolis vermelha (Maceió). Esses resultados são superiores aos obtidos com própolis do Uruguai, Argentina, Paraguai, China e países da Europa, e também de própolis verde brasileira. Os valores obtidos para flavonóides totais variaram entre 0,31% e 4,43%, valores próximos aos encontrados por outros pesquisadores de própolis brasileiras, porém inferiores aos relatados para própolis européia, que variam entre 1,1% e 22,3%. Os teores de ceras determinados, variando entre 5,37% e 45,88%, são superiores aos relatados para outras amostras de própolis brasileiras, sendo comparáveis apenas às própolis chinesas, cujo teor é de aproximadamente 30%. Com base nos teores dosados, foi feita análise de componentes principais (PCA). As amostras de Maceió, Cabo Verde, Pirenópolis e Bauru emergiram isoladamente das demais. Pariquera-Açu e Mira Bela sobressaíram-se no outro extremo do gráfico, devido a baixos teores de compostos fenólicos e altos índices de ceras. As amostras de Picos, Lavras e Ponta Grossa agruparam-se em função de teores de fenóis totais expressivos e de ceras relativamente altos. Foram analisadas as frações clorofórmicas e metanólicas de todas as amostras por HPLC-MS e CG-EM. Essas análises revelaram que as amostras de Bauru, Lavras e Cabo Verde têm composição típica de própolis verde, com muitos fenilpropanóides prenilados e derivados de ácido cafeoilquínico. A composição da própolis de Maceió diferiu muito das demais, incluindo a presença de chalconas. Tais substâncias nunca foram relatadas em própolis anteriormente. As própolis de Pirenópolis e Picos assemelham-se pela presença de muitos flavonóides glicosilados, substâncias nunca reportadas anteriormente para própolis. As amostras de Ponta Grossa, Pariquera-Açu e Mira Bela têm perfil químico intermediário entre a própolis verde e própolis com flavonóides glicosilados. Essas afinidades químicas ficaram bem evidenciadas por meio de análise de agrupamento, usando-se as substâncias identificadas como variáveis e o método de agrupamento UPGMA. Os resultados evidenciam que os tipos de própolis brasileiras não se restringem a doze, como proposto anteriormente. As análises químicas revelaram três tipos adicionais: Maceió, Pirenópolis / Picos e Ponta Grossa / Pariquera-Açu / Mira Bela. A enorme diversidade da composição da própolis produzida no Brasil realça a importância da realização de estudos para a determinação de perfis químicos e fontes botânicas de resinas. Esses conhecimentos são essenciais para o uso adequado de produtos da própolis no mercado nacional e internacional. / Propolis is a resinous substance comprising exsudates collected from plants and substances produced by bees, with texture and colour varying according to the plant source of resin and respective phenology. This product is used in the hive with various purposes: to seal holes and line the hive entrance and to embalm the bodies of killed invaders. The interest in propolis has increased recently, mainly due to experimental evidences of its biological activities, such as cytotoxic, anti-herpes, anti-HIV, antitumoral, anti-microbial and antioxidant. The chemical composition of propolis is complex, including, in addition to beeswax, flavonoids, phenolic acids, terpenoids and volatile substances, among other constituents. The composition depends on many factors, mainly the region, where it was produced. In the present work the chemical profile of the Brazilian propolis was established based on the content of total phenolic substances, total flavonoids and waxes of samples from distinct regions of the Brazilian territory: Ponta Grossa (PR), Bauru and Pariquera-Açu (SP), Lavras and Mira Bela (MG), Pirenópolis (GO), Cabo Verde (BA), Maceio (AL) and Picos (PI). The contents of total phenols were obtained by the Folin-Ciocalteau method, using p-coumaric acid as reference. Determination of total flavonoids was based on two spectrophotometric complementary methods: alluminum chloride and dinitrophenyl-hydrazine, using quercetin and pinocembrin, respectively, as references. Determination of wax contents was carried out by extraction with chloroform, treatment with methanol and weight of the residue. The results revealed a wide chemical variety among the samples, even between samples from the same state, as are the cases of samples from Lavras and Mira Bela and from Bauru and Pariquera-Açu. Total phenol contents varied in the range 0,91%-41,63%, highest figures corresponding to red propolis from Maceio. The contents determined are higher than those obtained with propolis from Uruguai, Argentina, Paraguai, China and Europe, and also with Brazilian green propolis. Regarding values of total flavonoids, they ranged from 0,31% to 4,43%, similar to results reported by other researchers with Brazilian propolis, but lower than contents of European propolis, which has varied in the range 1,1%-22,3%. Wax contents varied from 5,37% to 45,88%, such figures being higher than values of Brazilian propolis reported by other authors, but comparable with Chinese propolis, which content is close to 30%. Based on the results obtained a Principal Components Analysis (PCA) was carried out. Samples from Maceio, Cabo Verde, Pirenópolis and Bauru emerged isolated. Pariquera-Açu and Mira Bela standed out as a group in the other end of the graphic, due to low contents of phenolic compounds and high levels of waxes. The samples from Picos, Lavras and Ponta Grossa comprised another group, based on salient contents of total phenols and relatively high contents of waxes. Chloroform and methanolic fractions from each sample were analyzed by HPLC-MS and GC-MS. These analyses showed that samples from Bauru, Lavras and Cabo Verde have composition typical of green propolis, with many prenylated phenylpropanoids and cafeoylquinic acid derivatives. The composition of the Maceio propolis differed very much, standing out by having exclusive constituents, such as chalcones, a class of flavonoids never reported for propolis. Propolis from Pirenopolis and Picos are alike due to many glycosilated flavonoids, substances also never reported for propolis. Samples from Ponta Grossa, Pariquera-Açu and Mira Bela have chemical profiles intermediate between green propolis and those with glycosilated flavonoids. The commented chemical affinities were evident in clustering analysis carried out with the identified substances as variables and UPGMA method. These results constitute evidence that Brazilian propolis cannot be grouped in only twelve types, as has been suggested. The present chemical analyses revealed three additional types: Maceió, Pirenópolis/Picos e Ponta Grossa/Pariquera-Açu/Mira Bela. The huge diversity of the composition of propolis produced in Brazil highlight the importance of studies for determination of chemical profiles and resin botanical sources. Such findings are essential for adequate use of propolis products both in the national and international market.
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Uma abordagem neurofisiológica da acetilcolina em plantas de milho hidratadas e sob condições de estresse hídrico / A neurophysiological approach to acetylcholine in maize plants hydrated and under water stress conditionsDaneluzzi, Gabriel Silva 18 April 2012 (has links)
A ocorrência de potenciais de ação e neurotransmissores, componentes principais do sistema nervoso animal, em plantas, bactérias e fungos mostra a universalidade dos princípios de sinalização e transmissão de informações na forma de sinais químicos e elétricos em todos os organismos. Esses tópicos de estudo, juntamente com inteligência em plantas e transporte vesicular de auxina, constituem as linhas de pesquisa principais da recém-criada Neurobiologia Vegetal. Entre os neurotransmissores encontrados em plantas, a acetilcolina atua, entre outras situações, no crescimento e desenvolvimento controlado pelo fitocromo e na permeabilidade iônica de membranas. Nesse contexto, foi sugerido que a acetilcolina pode desempenhar um papel importante na regulação do movimento estomático, tendo efeito estimulatório na abertura dos estômatos além de poder atuar na sinalização entre raiz e parte aérea. Dessa forma, foi proposto identificar a presença deste neurotransmissor em plantas de milho hidratadas e submetidas a estresse hídrico, com o objetivo de correlacionar a presença de acetilcolina com as respostas estomáticas de tais plantas. Além disso, foi objetivo do trabalho avaliar parâmetros fisiológicos como potencial hídrico, condutância estomática, transpiração e fotossíntese líquida e suas possíveis relações com a acetilcolina em três folhas das plantas hidratadas e estressadas. Para tanto, foi montado um experimento em blocos casualizados em esquema fatorial (2x3). Os fatores foram: água, nos níveis de hidratação e estresse, e idade das folhas nos níveis folha 4 (mais velha), folha 5 (idade intermediária) e folha 7 (mais jovem). As plantas foram divididas em 20 blocos, contendo uma planta hidratada e uma sob estresse cada e as análises fisiológicas feitas nas três folhas. As plantas foram colocadas em câmara de crescimento tipo BOD com controle de iluminação e temperatura. Após análises fisiológicas, as folhas foram utilizadas para extração e determinação de acetilcolina. Os extratos purificados e secos foram submetidos à pirólise e cromatografia gasosa e as substâncias identificadas por espectrometria de massas. Não foi detectada acetilcolina nas plantas, apesar de estudos anteriores demonstrarem sua ocorrência em folhas e sementes de milho. Hipóteses foram levantadas para explicar tal fato. Quanto as variáveis fisiológicas, o déficit hídrico reduziu em aproximadamente 59% a transpiração, em 65% a condutância estomática e em 59% a fotossíntese das plantas. Condutância estomática e transpiração, condutância e fotossíntese, e transpiração e fotossíntese apresentaram intensa correlação. Já o potencial hídrico teve baixa correlação com essas variáveis. Quanto ao fator idade, folhas 7 apresentaram maiores valores de fotossíntese, condutância e transpiração que as folhas 4 e 5. / The occurrence of action potential and neurotransmitters, the major components of animal nervous system, in plants, bacteria and fungi, shows the universality of signaling principles and information transmission in the way of chemical and electrical signals in all organisms. These study topics, along with plant intelligence and vesicular-based auxin transport, constitute the major research lines of the newly created Plant Neurobiology. Among the neurotransmitters found in plants, the acetylcholine plays a role in phytochromecontrolled growth and development and in membrane ion permeability. In this context, it was suggested that acetylcholine can play an important role in the regulation of stomatal movements, having stimulatory effect in the stomatal opening. In addition it can play a role in root-to-shoot signaling process. Therefore, it was proposed to identify the presence of this neurotransmitter in maize plants hydrated and under water stress, with the aim of correlating the presence of acetylcholine with the stomatal responses of such plants. Moreover, another aim of the study was to evaluate physiological parameters like water potential, stomatal conductance, transpiration rate and net photosynthetic rate and their possible relationship with the acetylcholine in three leaves of hydrated and stressed plants. Therefore, an experiment was set up in randomized block design in 2x3 factorial. The factors were: water, in the levels of hydration and stress, and leaves age in the levels leaf 4 (older), leaf 5 (intermediary age) and leaf 7 (younger). The plants were divided in 20 blocks, and each one has had one hydrated plant and one stressed plant and the physiological analysis was made in three leaves. The plants were placed in B.O.D. growth chamber under controlled conditions of light and temperature. After the physiological analysis, the leaves were used to extraction and determination of acetylcholine. The dried and purified extracts were subjected to pyrolysis and gas chromatography and the substances identified by mass spectrometry. The acetylcholine was not detected in plants, although earlier studies have had demonstrated its occurrence in maize leaves and seeds. Hypotheses were elaborated to explain such fact. Regarding the physiological variables, water stress reduced the plants transpiration rate in 59%, stomatal conductance in 65% and net photosynthesis in 59%. Stomatal conductance, transpiration and photosynthesis were strongly related. On the other hand, the water potential showed weak correlation with that variable. As for the age factor, leaves 7 had higher photosynthetic rates, conductance and transpiration than the leaves 4 and 5.
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Atividade fitotóxica de extratos foliares de Piptocarpha rotundifolia (candeia) (Less.) Baker – AsteraceaeAccarini, Raissa Barcha 08 August 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-08-08 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / The Brazillian savanna is one of the largest vegetation with 2,036,448 km2, about 22% of
the national territory. This bioma is considered a global hotspot (Mittermeier et al., 2004)
and consists of three biomes: tropical fields, grasslands and dry forests (Batalha, 2011;
Brasil, 2015). Cerrado flora has a high species richness with herbs, shrubs, tree and vines,
totaling 12,356 species occurring spontaneously, as well as a native vascular flora (ferns
and phanerogams) totaling 11,627 species (Mendonça et al., 2008) .However, the
chemical potential of its plant species is still underutilized. Research plants with
allelopathic activity comes against the need to introduce new alternatives in the
management of agricultural pests. Studies on the biological effects of these chemical
compounds represent an important tool for the development of more specific
agrochemicals natural and less harmful to the environment. Piptocarpha rotundifolia
(Less.) - Baker belongs to the Asteraceae family, considered the most representative of
the brazilian cerrado eudicotyledons, but there are few published works that deal with
potential investigations phytotoxic of this species and its secondary metabolites. Thus,
the main objective of this study was to analyze the phytotoxic potential of P. rotundifolia
extracts, fractions and subfractions on target species of vegetables and weeds and the
mode of action of the same. In the first step of this work, an extraction in order of
increasing polarity was done and the phytotoxic potential of crude extracts was evaluated
on the growth of wheat coleoptile, germination and seedling growth of mono and
eudicotyledons invasive and vegetable species: wild poinsettia (Euphorbia heterophylla
L.), guinea grass (Megathyrsus maximus J.), onion (Allium cepa L.) and sesame
(Sesamum indicum L.), respectively, as well as the evaluation of the root sesame
metaxylem cell growth. The acetone extract (D) was selected for the fractionation, due
the mass (2370 mg) and and the inhibitory activity on the growth of wheat coleoptile good
as on the germination growth indicator target species (onion and sesame) and invasive
(wild poinsettia and guinea grass). This fractions and subfractions were also tested on the
growth of wheat coleoptile and those who had higher incomes and inhibitory activity (D1
and D1A) were selected for the following bioguided fractioning. After, a liquid-liquid
extraction was performed using the extracts 1 (hexane), 2 (ethyl acetate) and 3 (aqueous)
and, among these, the extract 2 showed inhibitory activity on the growth of wheat
coleoptile and also on the germination and growth of the target species, as well as
significantly reduced metaxylem cell root growth of sesame seedlings. Therefore, this extract was refractionated by a countertop chromatography column, and the fraction with
the highest income was denominated (2L), then refractioned. The resulting subfractions
were tested only growing wheat coleoptile. To complete the survey, a chemical profile
analysis was conducted using the extracts, fractions and subfractions of P. rotundifolia
from both extraction methodologies, performing the ultra efficiency liquid
chromatography technique, which has found a compound identified as glaucolide b and
two other compounds known to the genre. Thus, the species Piptocarpha rotundifolia
shown as promissing in the search of phytotoxic compounds due to their phytotoxic
activity presented by their compounds. / O cerrado é uma das mais extensas formações vegetais brasileiras com 2.036.448 km2,
representando 22% do território nacional. O cerrado é considerado um hotspot mundial
(Mittermeier et al., 2004) formado por três biomas: campos tropicais, savanas e florestas
estacionais (Batalha, 2011; Brasil, 2015). A flora do cerrado apresenta uma elevada
riqueza de espécies, com plantas herbáceas, arbustivas, arbóreas e cipós, totalizando
12.356 espécies que ocorrem espontaneamente, além de uma flora vascular nativa
(pteridófitas e fanerógamas) somando 11.627 espécies (Mendonça et al., 2008). No
entanto, o potencial químico de suas espécies vegetais ainda é subutilizado. A
investigação de plantas com atividade alelopática vem de encontro com a necessidade de
se apresentar novas alternativas no manejo integrado de pragas agrícolas. Estudos
realizados sobre os efeitos biológicos destes compostos químicos representam uma
importante ferramenta para o desenvolvimento de agroquímicos naturais mais específicos
e menos prejudiciais ao ambiente. Piptocarpha rotundifolia (candeia) (Less.) – Baker,
planta pertencente à família Asteraceae, embora seja considerada a maior representante
das eudicotiledôneas do cerrado brasileiro, existem poucos os trabalhos publicados que
tratam de investigações do potencial fitotóxico de seus metabólitos secundários. Sendo
assim, o principal objetivo deste trabalho foi analisar o potencial fitotóxico dos extratos,
frações e subfrações de P. rotundifolia sobre espécies-alvo de hortaliças e invasoras e o
modo de ação dos mesmos. Na primeira etapa deste trabalho, foi realizada uma extração
em ordem crescente de polaridade, onde o potencial fitotóxico dos extratos brutos foi
avaliado sobre o crescimento de coleóptilos de trigo, germinação e crescimento de
plântulas de espécies invasoras e de hortaliças mono e eudicotiledôneas: amendoim-bravo
(Euphorbia heterophylla L.), capim-colonião (Megathyrsus maximus J.), cebola (Allium
cepa L.) e gergelim (Sesamum indicum L.), respectivamente, bem como a avaliação do
crescimento de células do metaxilema radicular de gergelim (Sesamum indicum L.). O
extrato acetônico (D) foi selecionado para o fracionamento devido ao bom rendimento
(2,370g), e apresenta uma atividade inibitória sobre o crescimento de coleóptilos de trigo
(Triticum aestivum L.) bem como sobre a germinação crescimento de espécies-alvo
indicadoras (cebola e gergelim) e invasoras amendoim-bravo e capim-colonião. Suas
frações e subfrações foram também ensaiadas sobre o crescimento de coleóptilos de trigo
e as que apresentaram maiores rendimentos e atividade inibitória (D1 e D1A) foram
selecionadas para os fracionamentos bioguiado subsequentes. Dando sequência aos estudos, foi realizada uma extração líquido-líquido, que originou os extratos 1 (hexânico),
2 (acetato etílico) e 3 (aquoso) e, dentre estes, o extrato acetato etílico apresentou maior
atividade inibitória sobre o crescimento de coleóptilos de trigo e também sobre a
germinação e crescimento das espécies-alvo, bem como reduziu significativamente o
crescimento de células do metaxilema de raízes de plântulas de gergelim. Sendo assim,
este extrato foi refracionado em coluna cromatográfica de bancada, sendo a fração com
maior rendimento denominada (2L), submetida a novos subfracionamentos. As
subfrações resultantes foram testadas apenas em crescimento com coleóptilos de trigo.
Para a complementação da pesquisa foi realizada uma análise do perfil quimico dos
compostos presentes nos extratos, frações e subfrações de P. rotundifolia provenientes de
ambas metodologias de extração, utilizando a técnica de cromatografia líquida de ultra
eficiência, onde foi encontrado um composto identificado como glaucolide b, e outros
dois compostos já conhecidos para o gênero. Sendo assim, a espécie Piptocarpha
rotundifolia mostra-se como promissora na busca de compostos fitotóxicos, devido à
atividade inibitória apresentada pelos compostos presentes nos extratos ou frações.
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Constituintes micromoleculares de Aristolochia melastoma Manso : compostos nitrados /Nogueira, Cláudio Rodrigo. January 2010 (has links)
Orientador: Lucia Maria Xavier Lopes / Banca: André Luiz Meleiro Porto / Banca: Lidilhone Hamerski Carbonezi / Resumo: O presente trabalho descreve o isolamento e identificação dos constituintes químicos de Aristolochia melastoma Manso. O extrato acetônico de caules e raízes foi fracionado por cromatografia em coluna de sílica gel, e as frações obtidas foram submetidas a outros fracionamentos cromatográficos (CCDP, Sephadex LH-20, CC de C-18 e CLAE) e/ou lavagens com solventes orgânicos, resultando no isolamento de vinte compostos conhecidos: aristolactama AII, 9,9'-diacetato-secoisolariciresinol dimetil éter, tirosol, ácido p-hidroxibenzóico, ácido vanilínico, ácidos aristolóquicos I e II, aristolocatos de sódio IIIa e IVa, 4,5-dioxodeidroasimilobíneo, aristolocato de sódio I, sitosterol 3-O-β-D-glucopiranosídeo, glicerol, talictosídeo, uridina, talictricosídeo, icarisídeo D2, adenosina, kaempferol 3-O-β-robinobiosídeo e isorhamnetina 3-O-β-robinobiosídeo. A lignana 9,9'-diacetato-secoisolariciresinol dimetil éter e talictricosídeo são relatados pela primeira vez na família Aristolochiaceae. As identificações desses compostos foram baseadas nas análises dos seus dados espectrométricos (RMN 1D e 2D, UV e EM). Além disso, a análise dos dados obtidos a partir de literatura especializada acerca da ocorrência e biogênese de derivados nitrofeniletílicos sugere que a família Aristolochiaceae pode ter evoluído no sentido de formação de compostos nitrados / Abstract: This work describes the isolation and identification of the chemical constituents of A. melastoma Manso. The acetone extract from stems and roots was fractionated by CC over silica gel and the resultant fractions were subjected to other chromatographic methods (PTLC, Sephadex LH-20, CC RP-18, and HPLC) and/or washed with organic solvents to give twenty known compounds: aristolactam AII, secoisolariciresinol dimethyl ether diacetate, tyrosol, p-hydroxybenzoic acid, vanillic acid, sodium aristolochates I, IIIa, and IVa, 4,5-dioxodehydroasimilobine, aristolochic acids I and II, sitosterol-3-O-β-D-glucopyranoside, glycerol, uridine, thalictoside, icariside D2, adenosine, thalictricoside, kaempferol 3-O-β-robinobioside, and isorhamnetin 3-O-β-robinobioside. Among these, secoisolariciresinol dimethyl ether diacetate and thalictricoside have being reported for the first time in the Aristolochiaceae family. The identifications of these compounds were based on analyses of their spectroscopic data (1D- and 2D-NMR, UV, and MS). Furthermore, an analysis of data obtained from specialized literature on the occurrence and biogenesis of nitrophenylethyl derivatives suggests that the Aristolochiaceae family may have evolved towards nitro compounds / Mestre
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Desenvolvimento de metodologia analitica para determinação de codeina em plasma humano utilizando extração solido-liquido "on-line" acoplado ao HPLC-MS/MS / Analytical method development for determination of codeine in human plasma by on-line SPE-HPLC-MS/MSCruz, Alessandro de Carvalho 15 August 2018 (has links)
Orientador: Jose Pedrazzolli Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T08:01:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2010 / Resumo: Neste trabalho, a codeína foi determinada em plasma humano, através de metodologia analítica baseada no acoplamento da extração sólido-líquido "online" HPLC-MS/MS por electrospray positivo. O método foi desenvolvido visando a injeção direta de amostras plasmáticas sem prévio tratamento. O padrão interno utilizado foi o tramadol. O tempo total de análise foi de 3 min./amostra e devido ao sincronismo entre a corrida cromatográfica e a extração "on-line" automatizada o método possibilita a análise de mais de 400 amostras por dia. O uso de coluna monolítica (Chromolith Performance RP-18e, 100 mm x 4.6 mm) e extração em fase sólida automatizada (sistema Prospekt 2) demonstrou ser altamente eficiente em relação à resolução dos picos cromatográficos, tempo de retenção e pressão no interior da coluna cromatográfica. A curva de calibração foi definida com o intervalo de concentração de 5 à 200 ng/mL, atingindo boa linearidade. Excelentes resultados foram alcançados em relação à precisão e exatidão intra e inter-dia apresentando uma variação de 2.33 à 7.25% (CV%) e 2.35 à 9.97% (RE%), respectivamente. A metodologia analítica desenvolvida neste trabalho, baseada no acoplamento "on-line" SPE-HPLC-MS/MS apresentou boa seletividade, robustez, exatidão e precisão, bem como uma alta produtividade nas análises para determinação de codeína em plasma humano / Abstract: A specific LC-MS/MS method was developed and validated for automated determination of codeine in human plasma, using on-line solid-phase extraction (SPE) system coupled with positive ion electrospray ionization tandem mass spectrometry. Method allowed plasma direct injection onto cartridge without sample pre-treatment. Total analysis time per run was 3 min, allowing high-throughput for codeine determination. SPE on-line along monolithic column (Chromolith Performance RP-18e, 100 mm x 4.6 mm) demonstrated to be highly effective in terms of backpressure, separation speed and peak asymmetry. Calibration curves range was linear 5.0-200 ng/mL. Method showed an excellent intra-assay and inter-assay precision ranged from 2.33 to 7.25% (CV%) as well as great intra-assay and inter-assay accuracy, ranging from -2.35 to 9.97% (RE%). SPE-LC-MS/MS method provided selectivity, robustness, accuracy, precision and high-throughput to assess codeine pharmacokinetics in human plasma samples / Mestrado / Mestre em Farmacologia
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Uma abordagem neurofisiológica da acetilcolina em plantas de milho hidratadas e sob condições de estresse hídrico / A neurophysiological approach to acetylcholine in maize plants hydrated and under water stress conditionsGabriel Silva Daneluzzi 18 April 2012 (has links)
A ocorrência de potenciais de ação e neurotransmissores, componentes principais do sistema nervoso animal, em plantas, bactérias e fungos mostra a universalidade dos princípios de sinalização e transmissão de informações na forma de sinais químicos e elétricos em todos os organismos. Esses tópicos de estudo, juntamente com inteligência em plantas e transporte vesicular de auxina, constituem as linhas de pesquisa principais da recém-criada Neurobiologia Vegetal. Entre os neurotransmissores encontrados em plantas, a acetilcolina atua, entre outras situações, no crescimento e desenvolvimento controlado pelo fitocromo e na permeabilidade iônica de membranas. Nesse contexto, foi sugerido que a acetilcolina pode desempenhar um papel importante na regulação do movimento estomático, tendo efeito estimulatório na abertura dos estômatos além de poder atuar na sinalização entre raiz e parte aérea. Dessa forma, foi proposto identificar a presença deste neurotransmissor em plantas de milho hidratadas e submetidas a estresse hídrico, com o objetivo de correlacionar a presença de acetilcolina com as respostas estomáticas de tais plantas. Além disso, foi objetivo do trabalho avaliar parâmetros fisiológicos como potencial hídrico, condutância estomática, transpiração e fotossíntese líquida e suas possíveis relações com a acetilcolina em três folhas das plantas hidratadas e estressadas. Para tanto, foi montado um experimento em blocos casualizados em esquema fatorial (2x3). Os fatores foram: água, nos níveis de hidratação e estresse, e idade das folhas nos níveis folha 4 (mais velha), folha 5 (idade intermediária) e folha 7 (mais jovem). As plantas foram divididas em 20 blocos, contendo uma planta hidratada e uma sob estresse cada e as análises fisiológicas feitas nas três folhas. As plantas foram colocadas em câmara de crescimento tipo BOD com controle de iluminação e temperatura. Após análises fisiológicas, as folhas foram utilizadas para extração e determinação de acetilcolina. Os extratos purificados e secos foram submetidos à pirólise e cromatografia gasosa e as substâncias identificadas por espectrometria de massas. Não foi detectada acetilcolina nas plantas, apesar de estudos anteriores demonstrarem sua ocorrência em folhas e sementes de milho. Hipóteses foram levantadas para explicar tal fato. Quanto as variáveis fisiológicas, o déficit hídrico reduziu em aproximadamente 59% a transpiração, em 65% a condutância estomática e em 59% a fotossíntese das plantas. Condutância estomática e transpiração, condutância e fotossíntese, e transpiração e fotossíntese apresentaram intensa correlação. Já o potencial hídrico teve baixa correlação com essas variáveis. Quanto ao fator idade, folhas 7 apresentaram maiores valores de fotossíntese, condutância e transpiração que as folhas 4 e 5. / The occurrence of action potential and neurotransmitters, the major components of animal nervous system, in plants, bacteria and fungi, shows the universality of signaling principles and information transmission in the way of chemical and electrical signals in all organisms. These study topics, along with plant intelligence and vesicular-based auxin transport, constitute the major research lines of the newly created Plant Neurobiology. Among the neurotransmitters found in plants, the acetylcholine plays a role in phytochromecontrolled growth and development and in membrane ion permeability. In this context, it was suggested that acetylcholine can play an important role in the regulation of stomatal movements, having stimulatory effect in the stomatal opening. In addition it can play a role in root-to-shoot signaling process. Therefore, it was proposed to identify the presence of this neurotransmitter in maize plants hydrated and under water stress, with the aim of correlating the presence of acetylcholine with the stomatal responses of such plants. Moreover, another aim of the study was to evaluate physiological parameters like water potential, stomatal conductance, transpiration rate and net photosynthetic rate and their possible relationship with the acetylcholine in three leaves of hydrated and stressed plants. Therefore, an experiment was set up in randomized block design in 2x3 factorial. The factors were: water, in the levels of hydration and stress, and leaves age in the levels leaf 4 (older), leaf 5 (intermediary age) and leaf 7 (younger). The plants were divided in 20 blocks, and each one has had one hydrated plant and one stressed plant and the physiological analysis was made in three leaves. The plants were placed in B.O.D. growth chamber under controlled conditions of light and temperature. After the physiological analysis, the leaves were used to extraction and determination of acetylcholine. The dried and purified extracts were subjected to pyrolysis and gas chromatography and the substances identified by mass spectrometry. The acetylcholine was not detected in plants, although earlier studies have had demonstrated its occurrence in maize leaves and seeds. Hypotheses were elaborated to explain such fact. Regarding the physiological variables, water stress reduced the plants transpiration rate in 59%, stomatal conductance in 65% and net photosynthesis in 59%. Stomatal conductance, transpiration and photosynthesis were strongly related. On the other hand, the water potential showed weak correlation with that variable. As for the age factor, leaves 7 had higher photosynthetic rates, conductance and transpiration than the leaves 4 and 5.
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Compostos fenólicos transferidos da erva-mate para os extratos aquosos durante o preparo do chimarrão e do chá mate / Phenolic compounds transfered from yerba mate to the aqueous extracts during preparation of chimarrao and mate tea beverageSilveira, Tayse Ferreira Ferreira da, 1988- 21 August 2018 (has links)
Orientadores: Helena Teixeira Godoy, Adriana Dillenburg Meinhart / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-21T21:32:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2013 / Resumo: As folhas e talos da erva-mate (Ilex paraguariensis St. Hillaire) são empregadas no preparo do chimarrão e do chá mate. Estas bebidas apresentam elevada importância biológica devido à alta concentração de compostos fenólicos presente na erva-mate. No entanto, nota-se que dados acerca da composição química de extratos obtidos simulando a forma como essas bebidas são comumente preparadas pelo consumidor ainda são escassos. Assim, neste trabalho foi investigado o efeito da temperatura da água (65°C, 75°C, 85°C e 95°C) sobre os teores de rutina e dos ácidos gálico, siríngico, cafeico, ferrúlico, p-cumárico, 5-cafeoilquínico, 3,4-dicafeoilquínico, 3,5-dicafeoilquínico e 4,5-dicafeolquínico, transferidos da erva-mate (moída grossa e tradicional) para os extratos aquosos de chimarrão, os quais foram preparados da mesma forma como a bebida é tradicionalmente consumida. Além disso, foi realizado um estudo multivariado, utilizando-se um planejamento composto central e a técnica de otimização simultânea de respostas descrita por Derringer e Suich, para determinar as condições ótimas de preparo da bebida de chá mate (otimizando o tempo de infusão, temperatura e volume de água), com a finalidade de obter os níveis máximos de transferência dos ácidos 5-cafeoilquínico, 3,4-dicafeoilquínico, 3,5-dicafeoilquínico, 4,5-dicafeolquínico do chá para a bebida pronta para consumo. As condições ótimas foram utilizadas no preparo de bebidas a partir de amostras comerciais de chá mate. As análises foram realizadas por cromatografia líquida de alta eficiência. Para viabilizar a determinação dos compostos nos extratos aquosos das bebidas, um método cromatográfico foi desenvolvido e otimizado utilizando-se um planejamento composto central e a função de desejabilidade de Derringer e Suich. As variáveis otimizadas foram a concentração inicial e final de metanol e tempo de gradiente. As respostas estudadas foram a resolução e a simetria dos picos. O método otimizado resultou em um gradiente de 39,4 minutos que variou de 13,9% a 40% de metanol. Os resultados dos parâmetros de validação do método indicaram que este foi adequado para a determinação e quantificação de compostos fenólicos nos extratos aquosos de erva-mate. De acordo com os dados obtidos, a temperatura da água de preparo do chimarrão não afetou significativamente os níveis de compostos fenólicos presentes nos extratos aquosos obtidos a partir da erva-mate tradicional. Comportamento oposto foi verificado para os extratos preparados com erva-mate moída grossa, onde o aumento da temperatura favoreceu a obtenção de extratos com níveis mais elevados de compostos fenólicos. Quanto ao preparo do chá mate todas as variáveis estudadas apresentaram efeito positivo significativo. As condições ótimas de preparo a partir de 2 g de chá foram 16 minutos de infusão, em 300 mL de água a 95°C. As bebidas de chá mate obtidas nestas condições, a partir de amostras comerciais de chá, apresentaram teores dos ácidos 5-cafeoilquínico, 3,4-dicafeoilquínico, 3,5-dicafeoilquínico, 4,5-dicafeolquínico que variaram entre 3,72±0,17 mg e 31,06±8,75 mg, 0,52±0,01 mg e 6,17±0,99 mg, 0,33±0,043 mg e 26, 18±9,96 e 0,80±0,02 mg e 15,84±5,69 mg, respectivamente. Os extratos aquosos do chimarrão e do chá mate preparados apresentaram níveis elevados de compostos fenólicos e podem ser considerados como fontes potenciais destes compostos para a dieta / Abstract: Yerba mate (Ilex paraguariensis), a plant originated from South America, is employed for preparing "chimarrao¿ and the mate tea beverage. Many biological assays have postulated the beneficial consequences from the consumption of these beverages, which are rich in phenolic compounds and other phytochemicals, for the human health. However, it could be noted that there is a lack of data concerning to chemical composition of the extracts obtained by simulating the way as the beverages are popularly prepared, considering the possible variations that could exist due to the homemade preparation, as temperature and time of contact of the leaves with water. Thus, in this research it was investigated the impact of the water temperature (65°C, 75°C, 85°C and 95°C) upon the levels of gallic acid, syringic acid, caffeic acid, ferulic acid, p-coumaric acid, 5-caffeoyilquinic acid, 3,4-dicaffeoyilquinic acid, 3,5- dicaffeoyilquinic acid, 4,5- dicaffeoyilquinc acid and rutin transferred from yerba mate (course ground and traditional) to the aqueous extracts of "chimarrao¿, obtained by reproducing in the laboratory the homemade preparation. Moreover, a multivariate study was conducted, employing a central composite design and the Derringer and Suich¿s desirability function, to determine the optimal conditions of preparing the mate tea beverage, aiming to reach the maximum transference of 5-caffeoyilquinic, 3,4-dicaffeoyilquinic, 3,5-dicaffeoyilquinic and 4,5-dicaffeoyilquinc acids, from the tea to the ready to drink beverages. The parameters evaluated were time of infusion, temperature and volume of water. The optimal conditions found were applied for preparing mate tea beverages from commercial tea samples. The extracts were analyzed by reversed phase high performance liquid chromatography. To make viable the analysis of the aqueous extracts, a chromatographic method was developed and optimized, using multivariate statistical techniques, as central composite design and the desirability¿s function of Derringer and Suich. The optimized method was: initial concentration of methanol 13.9%, final concentration of 40% in a gradient time of 39.4 minutes The results of the method validation indicated that it has fitted well to the phenolic compounds determination and quantification in the aqueous extracts of yerba mate. According to data, the temperature of water used to prepare "chimarrao¿ did not affect significantly the levels of the phenolic compounds obtained from traditional yerba mate. An opposite behavior was verified for the extracts prepared from course-ground yerba mate, being possible to conclude that the increase of the temperature favored the obtention of extracts with higher levels of phenolic compounds. Concerning the mate tea all the variables presented statistically significant effect upon the studied system. The optimal preparing conditions from 2 g of tea were 16 minutes of infusion, in 300 mL of water at 95°C. The beverages obtained in these conditions from commercial samples of tea presented concentrations of 5-caffeoyilquinic, 3,4-dicaffeoyilquinic, 3,5-dicaffeoyilquinic and 4,5- dicaffeoyilquinc acids varying between 3.72±0.17 mg e 31.06±8.75 mg, 0.52±0.01 mg and 6.17±0.99 mg, 0.33±0.043 mg and 26.18±9.96 and 0.80±0.02 mg and 15.84±5.69 mg, respectively. It was showed that the mate beverages extracts obtained as they are homemade prepared are excellent sources of phenolic compounds, mostly of chlorogenic acid / Mestrado / Ciência de Alimentos / Mestra em Ciência de Alimentos
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Clonagem, expressão e purificação da proteína ligadora de alcano sulfonatos do sistema de transporte ABC de Xanthomonas axonopodis pv.citri. / Cloning, expression and purification of the Xanthomonas axonopodis pv citri ABC transport alkanosulphonate-binding protein.Fabiano Tófoli de Araújo 13 August 2008 (has links)
O genoma de Xanthomonas citri (Xac) possui mais de 20 tipos de transportadores do tipo ABC incluindo o operon ssuABC associado ao transporte de alcano sulfonatos. Deste operon, escolhemos a proteína periplasmática ligadora de alcano sulfonatos SsuA2, para caracterização e análises espectroscópicas e estruturais. A rSsuA2 foi expressa no citoplasma de células de Escherichia coli e utilizada para a preparação de anticorpos em camundongos, que foram capazes de reconhecer a proteína recombinante, mas não a nativa no extrato de células de Xac. A rSssuA2 apresenta estrutura característica de proteínas alfa-beta, maior estabilidade em pH neutro (7.0), como também foi evidenciado pela obtenção de cristais somente nesta faixa, e pouca flexibilidade ao desenovelamento térmico. Os cristais difratam com resolução de 1.8 Å e pertencem ao grupo espacial de simetria P21. Além do o operon ssu (ssu2) altamente conservado, Xac apresenta o operon tau (ssu1) para captação de taurina. O papel do operon para Xac é discutido. / Xanthomonas citri (Xac) genome has more than 20 different ABC transporters, including the ssuABC operon. In this work, the alkanosulphonate-periplasmic binding protein SsuA2 was chosen for spectroscopic and structural analysis. The rSsuA2 protein was expressed as a soluble form and purified by immobilized metal affinity chromatography. Antibodies produced from the recombinant protein were able to recognize the rSsuA2, but not the native protein in the Xac extract samples. The protein presents secondary structure defined by alfa helices and beta-sheets, high stability in neutral pH and low flexibility to the thermal denaturation. The determination of the optimal pH range was important to produce crystals of high quality diffracting at 1.8 Å with symmetry of the P21 spatial group. Besides the highly conserved operon ssu (ssu2), Xac has the tau operon (ssu1) for taurine uptake.
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Perfil químico de amostras de própolis brasileiras / Chemical Profile of Brazilians Propolis SamplesAdne Abbud Righi 24 November 2008 (has links)
A própolis é uma substância resinosa, formada por produtos coletados de plantas e substâncias produzidas pelas abelhas, cuja textura e coloração varia dependendo da fonte de coleta e respectiva fenologia. É utilizada na colméia para diversas finalidades: vedar aberturas, forrar a entrada da colméia e envolver invasores. O interesse por própolis tem crescido muito, devido à comprovação experimental de suas atividades biológicas, tais como citotóxica, anti-herpes, anti-HIV, antitumoral, antimicrobiana e antioxidante. A composição química da própolis é complexa, compreendendo, além de cera de abelha, flavonóides, ácidos fenólicos, terpenóides, substâncias voláteis, entre outros constituintes. A composição depende de vários fatores, principalmente da região onde é produzida. Neste trabalho, estabeleceu-se o perfil químico de amostras de própolis brasileiras, baseando-se nos teores de substâncias fenólicas totais, flavonóides totais e ceras de amostras de distintas regiões do território brasileiro: Ponta Grossa (PR), Bauru e Pariquera-Açu (SP), Lavras e Mira Bela (MG), Pirenópolis (GO), Cabo Verde (BA), Maceió (AL) e Picos (PI). Os teores de fenóis totais foram determinados pelo no método de Folin Ciocalteau, utilizando-se ácido p-cumárico como referência. A dosagem de flavonóides totais baseou-se em dois métodos espectrofotométricos complementares: cloreto de alumínio e dinitrofenil-hidrazina, usando-se quercetina e pinocembrina, respectivamente, como referências. Os teores de ceras foram obtidos por extração com clorofórmio, tratamento com metanol e pesagem do resíduo. Os resultados demonstraram grande diversidade química entre as amostras estudadas, inclusive entre amostras do mesmo estado. Tal é o caso das amostras de Lavras e Mira Bela, e Bauru e Pariquera-Açu. Os teores de fenóis totais variaram de 0,91% a 41,63%, sendo o maior percentual referente à amostra de própolis vermelha (Maceió). Esses resultados são superiores aos obtidos com própolis do Uruguai, Argentina, Paraguai, China e países da Europa, e também de própolis verde brasileira. Os valores obtidos para flavonóides totais variaram entre 0,31% e 4,43%, valores próximos aos encontrados por outros pesquisadores de própolis brasileiras, porém inferiores aos relatados para própolis européia, que variam entre 1,1% e 22,3%. Os teores de ceras determinados, variando entre 5,37% e 45,88%, são superiores aos relatados para outras amostras de própolis brasileiras, sendo comparáveis apenas às própolis chinesas, cujo teor é de aproximadamente 30%. Com base nos teores dosados, foi feita análise de componentes principais (PCA). As amostras de Maceió, Cabo Verde, Pirenópolis e Bauru emergiram isoladamente das demais. Pariquera-Açu e Mira Bela sobressaíram-se no outro extremo do gráfico, devido a baixos teores de compostos fenólicos e altos índices de ceras. As amostras de Picos, Lavras e Ponta Grossa agruparam-se em função de teores de fenóis totais expressivos e de ceras relativamente altos. Foram analisadas as frações clorofórmicas e metanólicas de todas as amostras por HPLC-MS e CG-EM. Essas análises revelaram que as amostras de Bauru, Lavras e Cabo Verde têm composição típica de própolis verde, com muitos fenilpropanóides prenilados e derivados de ácido cafeoilquínico. A composição da própolis de Maceió diferiu muito das demais, incluindo a presença de chalconas. Tais substâncias nunca foram relatadas em própolis anteriormente. As própolis de Pirenópolis e Picos assemelham-se pela presença de muitos flavonóides glicosilados, substâncias nunca reportadas anteriormente para própolis. As amostras de Ponta Grossa, Pariquera-Açu e Mira Bela têm perfil químico intermediário entre a própolis verde e própolis com flavonóides glicosilados. Essas afinidades químicas ficaram bem evidenciadas por meio de análise de agrupamento, usando-se as substâncias identificadas como variáveis e o método de agrupamento UPGMA. Os resultados evidenciam que os tipos de própolis brasileiras não se restringem a doze, como proposto anteriormente. As análises químicas revelaram três tipos adicionais: Maceió, Pirenópolis / Picos e Ponta Grossa / Pariquera-Açu / Mira Bela. A enorme diversidade da composição da própolis produzida no Brasil realça a importância da realização de estudos para a determinação de perfis químicos e fontes botânicas de resinas. Esses conhecimentos são essenciais para o uso adequado de produtos da própolis no mercado nacional e internacional. / Propolis is a resinous substance comprising exsudates collected from plants and substances produced by bees, with texture and colour varying according to the plant source of resin and respective phenology. This product is used in the hive with various purposes: to seal holes and line the hive entrance and to embalm the bodies of killed invaders. The interest in propolis has increased recently, mainly due to experimental evidences of its biological activities, such as cytotoxic, anti-herpes, anti-HIV, antitumoral, anti-microbial and antioxidant. The chemical composition of propolis is complex, including, in addition to beeswax, flavonoids, phenolic acids, terpenoids and volatile substances, among other constituents. The composition depends on many factors, mainly the region, where it was produced. In the present work the chemical profile of the Brazilian propolis was established based on the content of total phenolic substances, total flavonoids and waxes of samples from distinct regions of the Brazilian territory: Ponta Grossa (PR), Bauru and Pariquera-Açu (SP), Lavras and Mira Bela (MG), Pirenópolis (GO), Cabo Verde (BA), Maceio (AL) and Picos (PI). The contents of total phenols were obtained by the Folin-Ciocalteau method, using p-coumaric acid as reference. Determination of total flavonoids was based on two spectrophotometric complementary methods: alluminum chloride and dinitrophenyl-hydrazine, using quercetin and pinocembrin, respectively, as references. Determination of wax contents was carried out by extraction with chloroform, treatment with methanol and weight of the residue. The results revealed a wide chemical variety among the samples, even between samples from the same state, as are the cases of samples from Lavras and Mira Bela and from Bauru and Pariquera-Açu. Total phenol contents varied in the range 0,91%-41,63%, highest figures corresponding to red propolis from Maceio. The contents determined are higher than those obtained with propolis from Uruguai, Argentina, Paraguai, China and Europe, and also with Brazilian green propolis. Regarding values of total flavonoids, they ranged from 0,31% to 4,43%, similar to results reported by other researchers with Brazilian propolis, but lower than contents of European propolis, which has varied in the range 1,1%-22,3%. Wax contents varied from 5,37% to 45,88%, such figures being higher than values of Brazilian propolis reported by other authors, but comparable with Chinese propolis, which content is close to 30%. Based on the results obtained a Principal Components Analysis (PCA) was carried out. Samples from Maceio, Cabo Verde, Pirenópolis and Bauru emerged isolated. Pariquera-Açu and Mira Bela standed out as a group in the other end of the graphic, due to low contents of phenolic compounds and high levels of waxes. The samples from Picos, Lavras and Ponta Grossa comprised another group, based on salient contents of total phenols and relatively high contents of waxes. Chloroform and methanolic fractions from each sample were analyzed by HPLC-MS and GC-MS. These analyses showed that samples from Bauru, Lavras and Cabo Verde have composition typical of green propolis, with many prenylated phenylpropanoids and cafeoylquinic acid derivatives. The composition of the Maceio propolis differed very much, standing out by having exclusive constituents, such as chalcones, a class of flavonoids never reported for propolis. Propolis from Pirenopolis and Picos are alike due to many glycosilated flavonoids, substances also never reported for propolis. Samples from Ponta Grossa, Pariquera-Açu and Mira Bela have chemical profiles intermediate between green propolis and those with glycosilated flavonoids. The commented chemical affinities were evident in clustering analysis carried out with the identified substances as variables and UPGMA method. These results constitute evidence that Brazilian propolis cannot be grouped in only twelve types, as has been suggested. The present chemical analyses revealed three additional types: Maceió, Pirenópolis/Picos e Ponta Grossa/Pariquera-Açu/Mira Bela. The huge diversity of the composition of propolis produced in Brazil highlight the importance of studies for determination of chemical profiles and resin botanical sources. Such findings are essential for adequate use of propolis products both in the national and international market.
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