Orientadores: Márcia Regina Braga, Simone de Pádua Teixeira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T00:05:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Caccere_Rodrigo_M.pdf: 5287310 bytes, checksum: 7433584cc6dacc1485f7ed86dd51116e (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Inga vera Pennington produz sementes com alta sensibilidade à dessecação, o que dificulta seu armazenamento. Diversos mecanismos estão relacionados tolerância à dessecação, dentre eles o acúmulo de reservas insolúveis e de moléculas protetoras, redução do metabolismo e dobramento da parede celular. Desse modo, o objetivo deste trabalho foi analisar o comportamento de eixos embrionários e cotilédones de I. vera com respeito a seus teores e composição de açúcares solúveis, de reserva e de parede celular e quanto à ultra-estrutura durante a maturação e após a secagem. Eixos embrionários e cotilédones de I. vera durante a maturação, acumulam altos níveis de amido e armazenam também outras substâncias como compostos fenólicos. O acúmulo de massa seca e o processo de vacuolização durante todo o desenvolvimentos dos embriões desta espécie indicam alta atividade metabólica até o momento da dispersão. Além disso, as paredes celulares de eixos embrionários e cotilédones acumulam galactanos que podem lhe conferir maior rigidez. Embriões de I. vera secos até 35% de teor de água apresentaram redução da capacidade germinativa. Esta desidratação parcial provocou um estímulo metabólico, evidenciado pela mobilização de reservas e deposição de material nas paredes celulares, além de intensa atividade do retículo endoplasmático rigoso, observada nos eixos embrionários. A secagem severa (17% de teor de água) provocou rompimento das membranas resultando no aparecimento de células completamente colapsadas. Dessa forma, pode-se concluir que embriões I. vera mantém o metabolismo ativo durante a desidratação até que os processos de injúria comecem a ocorrer. / Abstract: Inga vera Pennington produces recalcitrant seeds, characterized by desiccation sensibility and short post-harvest life span, no longer than one mouth. Mechanisms proposed to explain the ability of organisms to survive desiccation include accumulation of insoluble reserves and protective molecules, metabolic "switch off" and cell wall folding, among others. The aim of the present study was to analyze the behavior of I.vera embryos (axes and cotyledons) with respect to sugar content, cell wall composition and ultrastructure during different stages of development and after desiccation. Axes and cotyledons accumulate starch and phenolic compounds and also showed vacuolization all over development, suggesting high metabolic activity up to the end of the maturation period. Moreover, cell walls of axes and cotyledons cantain polysaccharides, like galactans, that can provide more rigidity to the cell wall. Mature I.vera seeds were dried 35% or 17% and seed variability was skilghtly reduced due to drying to 35% of water content, but no seeds survived to severe desiccation (17% water content). Starch mobilization, increase in the cell wall thickness in axes and cotyledons, and high degree of development of the rough endoplasmic reticulum in axes suggest that drying to 35% of water content enhanced metabolic activity. Severe desiccation resulted in membrane breaking leading to collapsed protoplasm. Therefore we can conclude that I.vera embryos keep high metabolic activity during desiccation until damage processes start. / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

A nêspera (Eriobotrya japonica Lindl.) é uma fruta do tipo pomo, que tem sido cultivada principalmente no estado de São Paulo. Cinco cultivares de nêspera foram selecionadas por se destacarem no sabor e na capacidade produtiva. Foi realizado o estudo das mudanças fisiológicas e físico-químicas dos frutos durante o desenvolvimento e o período pós-colheita. Amostras das cultivares (Centenária, Mizuho, Mizumo, Néctar de Cristal e Mizauto) foram colhidas semanalmente conforme o avanço do estádio de desenvolvimento (na planta), desde a fase verde dos frutos até se tornarem maduros. Os frutos maduros para estudo do período pós-colheita foram colhidos seguindo critérios adotados por produtores, através da cor dos frutos. As determinações físico-químicas realizadas nas nêsperas maduras foram umidade, fibra, ácido ascórbico, açúcares solúveis (glicose, frutose, sacarose e sorbitol), ácidos orgânicos e carotenóides. Durante o período de desenvolvimento das nêsperas, as curvas de respiração decresceram progressivamente, e houve um considerável aumento na produção de etileno, precedendo o aumento na concentração de açúcares e as mudanças de coloração dos frutos (verde a amarela ou alaranjada). A composição de açúcares e ácidos dos frutos maduros foi semelhante a encontrada nos frutos precocemente maduros durante o desenvolvimento na planta. Portanto, a observação visual da cor não foi apropriada para a definição do ponto ideal de colheita. Durante o período póscolheita, as curvas de respiração e de produção de etileno das cultivares tenderam a queda, mostrando comportamento típico de frutos não-climatéricos. O estudo fisiológico e físico-químico das cinco cultivares de nêspera permitiu conhecer melhor o padrão de amadurecimento de cada cultivar, e assim obter informações que auxiliem na definição do ponto ideal de colheita, e que permitam obter frutos de boa qualidade e apropriados para distribuição comercial. / Loquat (Eriobotrya japonica Lindl.) fruit is a pome fruit cultivated mainly in the state of São Paulo. Five loquat fruit cultivars were selected to analysis mainly by their high productivity and taste. Physiological and physico-chemical changes were analised during development and ripening fruit. Samples were harvest weekly according to progress in development stage (in the tree), since imature stage (green) until mature stage. Mature stage to harvest was defined by fruit color, like methods\' producer. The physico-chemical parameters analysed were moist value, fiber, ascorbic acid, soluble sugars (glucose, fructose, sucrose and sorbitol), organic acids and carotenoids. During development of loquat fruits, the respiration levels decreased, and show a increase in ethylene levels, which was associed with increase of sugar concentration in the pulp and the changes of fruit color (green to yellow or orange color). According to sugars and acids levels during development (in the tree) and in ripe stage, the composition in ripe fruits was similar to that early mature fruits analyzed during development in the tree. The visual determination of color was not appropriate to define the harvest point of fruits. During postharvest period of the cultivars, the levels in respiration and ethylene production decreased, which is a typical pattern of non-climacteric fruits. The study of physiological and physico-chemical characteristics of loquat cutivars contribute to know the ripening pattern of each cultivar and to auxiliary in the definition of best mature point to harvest and to comercial distribution.

As funções metabólicas dos bubalinos ainda não estão bem descritas, como em outros ruminantes e há carência de informação sobre o comportamento digestivo. A sincronização da degradação ruminal de proteína e amido propõe incrementar a produção de proteína microbiana no rúmen e a eficiência de utilização de energia, uma vez que as bactérias ruminais necessitam destes dois elementos disponíveis simultaneamente. Quatro búfalos fistulados no rúmen foram utilizados com objetivo avaliar os efeitos de dietas com diferentes níveis de milho em grãos moídos (0, 22, 37 e 49% na MS) em substituição ao feno de coast-cross, com ênfase na relação proteína:carboidratos não estruturais (1,02; 0,39; 0,30; 0,26), sobre o metabolismo ruminal. Os seguintes parâmetros foram avaliados: ingestão de matéria seca (IMS); degradabilidade da matéria seca e fibra em detergente neutro do feno de coast-cross e da matéria seca e proteína bruta do milho em grãos moído; concentração de amônia; produção de ácidos graxos voláteis (acético, propiônico e butírico); taxa de passagem de líquido; volume ruminal e pH no rúmen. Os animais foram delineados em Quadrado Latino (4x4). Houve aumento linear na IMS com aumento de milho em grãos na dieta. Foram observadas diferenças no metabolismo ruminal envolvendo a produção de ácidos graxos voláteis, pH, taxa de passagem do líquido ruminal e volume do rúmen entre os tratamentos e pouca influência dos tratamentos na produção de amônia e na cinética de degradabilidade ruminal. Os resultados permitiram concluir que, no geral, os bubalinos apresentam boa capacidade tamponante no rúmen com ligeira queda do pH com aumento da ingestão de milho em grãos moídos e que provavelmente os microrganismos ruminais dos búfalos têm boa capacidade em se adaptar a ambientes ruminais com diferentes relações PB:CNE. / The metabolic functions of the buffaloes not yet are well described, as in other ruminants and have information lack on the digestive behavior. The synchronization of the ruminal degradation of protein and starch considers to increase the rumen microbial protein production and the efficiency of energy use, since the rumen bacteria needs of these two available elements simultaneously. Four rumen fistulated buffalos were used with objective to evaluate the effect of diets with different levels of ground grain corn (0, 22, 37 and 49% in the DM) in substitution to the coast-cross hay, with emphasis in the relation protein:no structural carbohydrates (1,02; 0,39; 0,30; 0,26) on the ruminal metabolism. The following parameters had been evaluated: dry matter intake (DMI); DM and NDF degradability of DM and NDF of the coast-cross hay and DM and CP of the ground grain corn; ammonia concentration; production of volatile fatty acids (acetic, propionic and butyric); outflow rate; ruminal volume and rumen pH. The animals were delineated in Latin Square (4x4) experiment. There was linear increase in the DMI with increasing level ground grain corn in the diet. Differences in the ruminal metabolism were observed involving the production of acid VFA, pH, liquid outflow rate and rumen volume among the treatments and small influence of the treatments in the ammonia production and the kinetic of ruminal degradability were observed. The results had allowed to conclude that, in the general, the buffaloes present good rumen buffering capacity with light fall of pH with increasing of the ingestion ground grain corn and that probably the microorganisms in the rumen of the buffalos have good capacity to adapt in the environments with different relations CP:NSC.

Esse estudo objetivou determinar as exigências dietéticas e a relação carboidratos:lipídios ideal para juvenis de dourado em ensaios de desempenho e digestibilidade. Os ensaios foram realizados em sistema de recirculação com controle de temperatura (25,5 ± 0,5 °C), oxigênio dissolvido (6,2 ± 0,4 mg L-1), pH (7,68 ± 0,12) e amônia total (< 0,25 mg L-1). Para determinação da curva glicêmica, 700 juvenis de dourado (57,37 ± 11,57 g) foram distribuídos em 14 tanques de polietileno (330 L) em um delineamento inteiramente casualizado (n=5) e alimentados com dietas extrudadas ou peletizadas contendo 85% de uma ração basal (43% de proteína bruta - PB; 4440 kcal kg-1 energia bruta - EB) e 15% das fontes de carboidrato: glicose, dextrina, amido de milho, quirera de arroz, milho moído, fécula de mandioca ou celulose. Para determinar a variação na concentração de glicose sanguínea, cinco peixes por tratamento foram coletados aleatoriamente e anestesiados nos seguintes intervalos após alimentação: 30 minutos, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h, 12 h, 15 h e 24 h. As amostras de sangue foram coletadas por punção caudal e a leitura da glicose sanguínea realizada imediatamente. Para o ensaio de digestibilidade foram formuladas quatorze rações experimentais, extrudadas ou peletizadas, contendo 69,9% da ração basal, 30% da fonte de carboidrato testada (milho moído, farinha de mandioca torrada, farinha de trigo, quirera de arroz, fécula de mandioca e amido de milho) e 0,1% de óxido de crômio. Juvenis de dourado foram alojados em gaiolas (80 L; 40 peixes; 73,97 ± 12,00 g) e alimentados até saciedade aparente em duas refeições diárias em um ensaio em delineamento inteiramente ao acaso (n=3). Após a segunda alimentação, as gaiolas eram transferidas para tanques cilíndrico-cônicos (250 L) e as fezes coletadas por sedimentação em intervalos de 6 h e 12 h. Estas foram congeladas e liofilizadas para conservação até análise e consequente cálculo dos coeficientes de digestibilidade da matéria seca, amido e energia dos ingredientes. No ensaio de desempenho, foram formuladas oito rações extrudadas com diferentes relações amido:lipídios (C:L): 0:1, 0,3:1, 0,7:1, 1,0:1, 1,4:1, 2,0:1, 2,3:1 e 3,3:1. Juvenis de dourado (3,34 ± 0,16 g) foram distribuídos em 32 tanques de polietileno (330 L; 30 peixes por tanque) em um delineamento inteiramente casualizado (n=3) e alimentados duas vezes ao dia (10h00min e 15h30min) até a saciedade aparente, por 95 dias. O processo de extrusão aumentou a digestibilidade das fontes de carboidrato testadas, ao mesmo tempo melhorando o aproveitamento da energia da dieta na forma de carboidrato, mas elevando os valores de glicemia do dourado, o que pode ser prejudicial ao ritmo de crescimento da espécie em longo prazo. A relação carboidrato:lipídio de 0,7:1 foi a que propiciou melhores índices de desempenho e utilização dos nutrientes pela espécie. O perfil enzimático dos peixes foi afetado pelas dietas. O dourado não utiliza bem carboidratos da dieta e, consequentemente, o uso de menores quantidades ou fontes menos digestíveis de carboidratos pode resultar em melhor crescimento durante a produção comercial dessa espécie. / This study aimed at determining dietary requirements and the ideal dietary carbohydrates to lipids ratio for juvenile dourado based on performance and digestibility trials. All assays were performed in a recirculation system under controled temperature (25.5 ± 0.5 ° C), dissolved oxygen (6.2 ± 0.4 mg L-1), pH (7.68 ± 0.12 ) and total ammonia (<0.25 mg L-1). To determine the glycemic curve, 700 juvenile dourado (57.37 ± 11.57 g) were housed into 14 polyethylene tanks (330 L) in a completely randomized design (n = 5), and fed pelleted or extruded diets containing 85% of a basal diet (43% crude protein - CP, 4,440 kcal a gross energy kg - EB) and 15% of the carbohydrate souces - glucose, dextrin, maize starch, rice, corn, cassava starch or cellulose. To determine the change in blood glucose concentration, five fish from each treatment were randomly collected immediately and anesthetized at the following intervals after feeding: 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h, 12 h, 15 h and 24 h. Blood samples were drawn by puncture of the caudal vein and glycemic levels measured immediately. For the digestibility trial, fourteen experimental diets were formulated, pelleted or extruded, containing 69.9% of the basal diet, 30% of the carbohydrate source to be tested (corn, toasted cassava meal, wheat flour, rice, cassava starch and corn starch) and 0.1% chromic oxide. The trial was set up in a completely randomized design (n=3). Juvenile dourado were housed in cages (80 L, 40 fish per cage, 73.97 ± 12.00 g) and fed ad libitum twice a day the experimental diets. After the last daily meal, cages were transferred to conical-cylinder tanks (250 L) and faeces collected by sedimentation period of 6 h and 12 h after feeding. Feces were collected, frozen and lyophilized and storage until analysis and subsequent calculation of digestibility coefficients of dry matter, starch and energy ingredients. For the performance, eight extruded diets with different ratios of carbohydrate lipids (C: L): 0:1, 0.3:1, 0.7:1, 1.0:1, 1.4:1 , 2.0:1, 2.3:1 and 3.3:1 were formulated and fed to juvenile dourado (3.34 ± 0.16 g) housed in 32 polyethylene tanks (330 L, 30 fish per tank) in a completely randomized design (n=3) and fed twice a day (10:00 and 15:30) to apparent satiation for 95 days. The extrusion processing increased digestibility of the tested dietary carbohydrate sources, improving the utilization of dietary energy in the form of carbohydrate, but increasing blood glucose levels as well; this can impair the species growth rate in the long run. The dietary carbohydrate to lipid ratio 0.7:1 led to the best levels of performance and nutrient utilization by the species The enzimatic profile of fish was affected by diets. Dourado does not utilize efficiently dietary carbohydrates so using lesser amounts or less digestible sources of dietary carbohydrates can lead to better growth in the commercial production of the species.

A importância do Eucalyptus na conjuntura atual da silvicultura brasileira tem incitado significativos investimentos em pesquisa, o que tem proporcionado o desenvolvimento da propagação vegetativa. A propagação vegetativa de Eucalyptus spp permite a rápida multiplicação de genótipos selecionados, alcançar altos ganhos mesmo com características de baixa herdabilidade (como por exemplo: crescimento e conteúdo de celulose), aumento imediato de produtividade, além de apresentar sucesso com a aplicação de técnicas de estaquia. Existem evidências da existência da correlação entre a concentração de carboidratos, enraizamento de estacas e sobrevivência das mudas. Apesar de não possuírem função reguladora no enraizamento, os carboidratos são fontes de energia e de carbono para a síntese de substâncias essenciais para formação do corpo da planta. O manejo silvicultural e ambiental do minijardim podem alterar as concentrações de carboidratos na planta, portanto, o manejo possibilita alterações no teor endógeno dos açúcares, resultando em ganhos na sobrevivência das mudas jovens. A pesquisa foi desenvolvida no viveiro da Aracruz Celulose S. A., que é a maior produtora de mudas de clones de eucalipto, localizada no município de Aracruz, Estado do Espírito Santo, Sudeste do Brasil. A empresa é também a maior produtora de celulose branqueada de fibra curta de eucalipto. Foram avaliados diversos parâmetros biométricos e bioquímicos de miniestacas de dois clones da empresa, em duas épocas sazonais (inverno e verão), coletados em três periodicidades de coleta. Os parâmetros biométricos avaliados foram: percentual médio de sobrevivência, biomassa seca e produtividade. Bioquimicamente, foram caracterizados e quantificados os teores de carboidratos através do método de hidrólise ácida e cromatografia (HPAE-PAD e GC-MS). Através do Teste t de comparação de médias a 95% de confiança, não foram encontradas diferenças estatísticas significativas entre as condições testadas. Entretanto, pela análise por componentes principais (PCA), comprovou-se que, biologicamente essas diferenças ocorrem e que existem uma época sazonal e periodicidade de coleta ótimas para cada clone, estando também relacionadas ao teor endógeno de carboidratos. Avaliando-se o feito da sazonalidade nos teores de açúcares para os dois clones, observou-se um aumento de 9.10% no verão em relação ao inverno. O ganho em açúcares propiciou um incremento de 138.00% e 143.00% em biomassa; em termos de sobrevivência ocorreram ganhos de 2.60% e 1.69% e, em termos de número de estacas produzidas/cepa os ganhos foram de 212.80% e 145.48%, para os clones A e B, respectivamente. De forma geral, para todos os parâmetros avaliados, a estação verão é a mais indicada para coleta de estacas, uma vez que se trata da estação mais produtiva. Em termos de periodicidade de coleta, para todos os parâmetros avaliados, a coleta a cada 9 dias mostrou-se a mais indicada. / The importance of the Eucalyptus in the current conjuncture of Brazilian forestry has stirred up significant investments in research, which has leaded to the development of the improved methods of vegetative propagation. The clonal propagation of Eucalyptus spp. allows the fast multiplication of selected genotypes, allowing high gains even with characteristics of low heritability (i.e., growth and cellulose content), immediate increase in productivity, in addition to success with the application of cutting techniques. There are evidences on the existence of correlation between carbohydrate concentration, rooting of cuttings and steckling survival. Although carbohydrates do not have regulatory role in the rooting process, they are an important source of carbon and energy for the synthesis of essential substances in the formation of plant body. The silvicultural and environmental management of the miniclonal garden can alter carbohydrate concentrations in the plant, thus, this management makes it possible the alteration of the endogenous content of sugars, resulting in increases of the survival of young plants. This research was carried out at the nursery of Aracruz Celulose S.A., which has the largest prodution of clonal eucalypt stecklings, located in Aracruz, Espírito Santo State, Brazil. The company is also the worldwide leader in the production of bleached eucalypt cellulose fiber. Two clones were evaluated in two seasons (winter and summer). Plants from stem cuttings were evaluated by several biometrical and biochemical parameteres. The biometrical parameters were survival rate, dry biomass and productivity. The biochemical parameteres were separation, characterization and quantification of several structural carbohydrates and their seasonal variation. It was not found significant statistical differences between the tested conditions through the t-Test for comparison of averages with 95% confidence. However, using another method of principal components analysis (PCA), it was demonstrated that are biological differences among treatments, evidencing an optimum season and periodicity of hedging of cuttings for each clone, which could be related to the endogenous content of carbohydrates. Among the main results obtained, it was observed a 9.10% increase in carbohydrates during summer in relation to winter. The gain in sugar content in the summer was 138.00% and 143.00%, respectively, for clones A and B, compared to winter. The increment in survival rate of stecklings was increased 2.60% and 1.69%, respectively, for clone A and B; also, productivity of harvested cuttings from stock plants increased 212.80% and 145.48%, respectively, clone A and B. In general, the summer is the most indicated season for collection of cuttings, for all the evaluated parameters, because it is the most productive season. In terms of periodicity of hedging of cuttings, the collection at each 9 days was shown to be the more indicated for all the evaluated parameters.

Os objetivos deste estudo foram avaliar o equilíbrio iônico dos meios de cultura, o crescimento, aspectos nutricionais e bioquímicos em brotações de Eucalyptus grandis cultivadas em meio líquido suplementado com nitrogênio (17,3; 26,0; 39,0 e 58,5 mmol L-1), fósforo (2,0; 3,0; 4,5 e 6,75 mmol L-1), potássio (7,5; 11,0; 16,5 e 24,75 mmol L-1), cálcio (3,3; 5,0; 7,5 e 11,25 mmol L-1); magnésio (2,0; 3,0; 4,5 e 6,75 mmol L-1) e enxofre (2,29; 3,29; 4,79 e 7,04 mmol L-1). O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente aleatorizado com 19 tratamentos. As massas fresca e seca, porcentagem de massa seca, taxa de crescimento relativo, pH dos meios de cultura foram avaliadas semanalmente durante 21 dias de cultivo e teores de nutrientes minerais, carboidratos não-estruturais solúveis totais, proteínas solúveis totais e prolina foram avaliados aos 21 dias de cultivos. O equilíbrio iônico dos meios de cultura mostrou alterações em função do macronutriente e concentração utilizada. Fósforo e cálcio foram os que mais influenciaram as estimativas da especiação iônica. A morfogênese das brotações foi afetada pelo macronutriente e concentração utilizada. Concentrações a partir de 39 mmol L-1 de nitrogênio, 4,5 mmol L-1 de fósforo, 16,5 mmol L-1 de potássio, 7,5 mmol L-1 de cálcio, 6,75 mmol L-1 de magnésio e 4,79 mmol L-1 de enxofre mostraram-se excessivas. O meio de cultura JADS (CORREIA et al., 1995) contendo, em mmol L-1, 26,0 (N), 3,0 (P), 11,0 (K), 5,0 (Ca), 3,0 (Mg) e 3,0 (S) apresentou crescimento ótimo das brotações, mas não o crescimento máximo. As massas frescas e secas apresentaram incrementos ao longo do período de cultivo e maiores taxas de crescimento relativo durante os primeiros 7 dias de cultivo. Variações das concentrações dos macronutrientes em meios de cultura promoveram respostas diferenciadas para teores de macronutrientes e de micronutrientes na massa seca de brotações. Teores de carboidratos nãoestruturais solúveis totais, proteínas solúveis totais e prolina da massa fresca das brotações variaram em função do macronutriente e concentração utilizada aos 21 dias de cultivo. / The aim of this work were to evaluate the ionic equilibrium of the culture media, biochemical and nutritional aspects of Eucalyptus grandis shoot growth in liquid media suplemented with nitrogen (17,3; 26,0; 39,0 and 58,5 mmol L-1), phosphate (2,0; 3,0; 4,5 and 6,75 mmol L-1), potassium (7,5; 11,0; 16,5 and 24,75 mmol L-1), calcium (3,3; 5,0; 7,5 and 11,25 mmol L-1); magnesium (2,0; 3,0; 4,5 e 6,75 mmol L-1) and sulphate (2,29; 3,29; 4,79 and 7,04 mmol L-1). The experiment was carried out on a completely randomized statistical design with 19 treatments. The fresh weight, the oven dry weight, the dry weight percentage, the relative growth rate and the pH value were weekly evaluated for 21 days culture period. Mineral nutrients contents, total soluble non-structural carbohydrate, total soluble protein and proline were determined at the 21rst day of culture. The ionic equilibrium of the culture media showed alterations in functions of the macronutrient and concentration utilized. Concentration from nitrogen 39 mmol L-1, phosphate 4,5 mmol L-1, potassium 16,5 mmol L-1, calcium 7,5 mmol L-1, magnesium 6,75 mmol L-1 and sulphate 4,79 mmol L-1 showed to be excessives. The culture medium JADS (CORREIA et al., 1995) composition (N 26,0; P 3,0; K 11,0; Ca 5,0; Mg 3,0, and S 3,0 mmol L-1) showed the optimum shoot growth, but not the maximum growth rate. The fresh and oven dry weight production showed increament along the culture period and the relative growth rates were higher at the first week of culture. Variations on the macronutrient concentrations in the culture media showed diferentiated response to the mineral nutrient content in the shoot dry mass. Fresh mass content of total soluble non-structural carbohydrate, total soluble protein and proline showed variations in function of the macronutrients and of the concentration utilized at the 21rst day of culture.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:48:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Camila_Andrine_Hunoff.pdf: 2006508 bytes, checksum: a3e8f500b1cd79a42581254e91a7ba6d (MD5) Previous issue date: 2015-03-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Two experiments were conducted in order to evaluate the storage conditions of the Bermuda grass for hay production. In the first experiment was evaluated the storage period on the nutritional composition in the internal and external portions of Bermuda grass bales for 64 days. The experimental design was a randomized complete block in a split-plot arrangement so that in the main plots were allocated the four storage environments on field under clear plastic canvas, double-sided canvas and without canvas and covered shed with side walls and in the split-plots the four periods 20, 30, 34 and 64 days with 5 replications. There was a significant difference, in the storage conditions in the inner portion of the Bermuda grass bale, for CP, NDIP, NDF, hemicellulose and soluble carbohydrates content presenting higher values for closed shed and double-sided canvas. On the external portion of the bale, there was a significant difference, only to soluble carbohydrates content in closed shed conditions and double-sided canvas, with concentrations of 33.31 dag/Kg of DM to 27.05 dag/Kg of DM respectively. Regarding the storage time, there was a linear and quadratic effect on DM, MM, CP, ADIP, NDIP, NDF, cellulose, and soluble carbohydrates, decreasing after 34 days of storage and extending throughout the experimental period. In turn there was a linear increase to the levels of lignin and hemicellulose, rising throughout the experimental period. In a second experiment was evaluated the occurrence of mold in Bermuda grass hay in the inner and outer portion of the bales in four storage conditions: on field under clear plastic canvas, double-sided canvas and without canvas and covered shed with side walls, using a randomized block design with split-plots, in the main plots the four storage environments were assigned and in the split-plots the four periods: before baling, 20, 34 and 64 days with five replications. It was observed mold growth in Bermuda grass in all environment studied, with marked population of Aspergillus and Penicillium throughout the experimental period. In all storage conditions assessed the bale temperature was always greater than or equal to the room temperature. However the hay stored on field without canvas, showed higher moisture 22% with high temperatures above 45°C, causing heating of the stored hay and thus showing not be the best choice to producers when storing hay / Realizou-se dois experimentos com o objetivo de avaliar as condições de armazenamento do capim-vaquero, destinado à produção de feno. No primeiro experimento, avaliou-se o período de armazenamento sobre a composição bromatológica nas porções interna e externa de fardos de capim vaquero por 64 dias. O delineamento, utilizado, foi em blocos casualizados em esquema de parcelas subdivididas no tempo, de forma que nas parcelas foram alocados os quatro ambientes de armazenamento a campo sob lona plástica transparente, lona dupla face e sem lona a galpão fechado, coberto com paredes laterais e nas sub parcelas os quatro períodos 20, 30, 34 e 64 dias com 5 repetições. Verificou-se diferença significativa nas condições de armazenamento na porção interna do fardo de capim-vaquero, para os teores de PB, PIDN, FDN, hemicelulose e carboidratos solúveis, apresentando valores superiores para galpão fechado e lona dupla face. Na porção externa do fardo, houve diferença significativa, apenas para teor de carboidratos solúveis, nas condições de galpão fechado e lona dupla face, com concentrações de 33,31 dag/Kg de MS a 27,05 dag/kg de MS respectivamente. Em relação ao tempo de armazenamento, houve efeito linear descrescente e efeito quadrático com ponto de máxima e mínima redução sobre os teores de MS, MM, PB, PIDA, PIDN, FDN, celulose, e CHOʼS, apresentando decréscimo após 34 dias de armazenamento e estendo-se ao longo do período experimental. Por sua vez, houve efeito linear crescente para os teores de lignina e hemicelulose, elevando-se ao longo do período experimental. Num segundo experimento, avaliou-se a ocorrência de fungos em feno de capim-vaquero na porção interna e externa dos fardos sob quatro condições de armazenamento a campo, sob lona plástica transparente, lona dupla face e sem lona, a galpão fechado coberto com paredes laterais, utilizando o delineamento experimental em blocos casualizados com parcelas subdivididas no tempo de forma que nas parcelas foram alocados os quatro ambientes de armazenamento e nas sub-parcelas os quatro períodos: antes de enfardar, 20, 34 e 64 dias com cinco repetições. Observou se desenvolvimento de fungos no feno de capim-vaquero em todos os ambientes estudados, com acentuada população dos gêneros Aspergillus e Penicillium ao longo de todo o período experimental. Em todas as condições de armazenamento, avaliadas, a temperatura do fardo sempre foi maior ou igual a temperatura ambiente. Porém, o feno armazenado a campo sem lona, apresentou maior umidade 22% com elevadas temperaturas superiores a 45°C, acarretando aquecimento do feno, armazenado e, assim, mostrando não ser a melhor escolha para o produtor quando for armazenar feno

A doença de Chagas, também conhecida como tripanossomíase americana, é uma das doenças tropicais mais devastadoras e é causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi. O parasita expressa uma enzima de superfície, Trypanosoma cruzi trans-sialidase (TcTS), responsável pela transferência de ácidos siálicos de células do hospedeiro para moléculas de -galactose terminais presentes em glicoproteínas de sua superfície. As moléculas de glicoproteína sialiladas estão envolvidas na adesão e subsequente penetração do parasita em células hospedeiras. Logo, TcTS desempenha papel fundamental no reconhecimento e na invasão de células do hospedeiro. Além disso, a ausência de trans-sialidase em seres humanos faz de TcTS um alvo potencial a ser explorado, no entanto nenhum inibidor desta enzima (em concentração nanomolar) é conhecido até o momento. Considerando a importância da unidade de galactose e da função carboxila do ácido siálico para interações no sítio activo de TcTS, focamos na síntese de derivados de galactose com ácido succínico em diferentes posições do anel de açúcar e sua avaliação biológica em TcTS. Além disso, foi proposta uma busca por novos inibidores de TcTS através de técnicas de modelagem molecular, como triagem virtual baseada no sítio ativo da enzima. -D-galactose e -Dgalactopiranosídeo de metila, disponíveis comercialmente, foram tratados com reagentes adequados para fornecer alguns intermediários com apenas uma hidroxila livre em poucas etapas. O tratamento destes compostos com anidrido succínico em piridina levou à formação dos respectivos derivados com ácido succínico em todas as posições do anel galactosídico. Após etapa de desproteção foi obtido apenas o derivado com ácido succínico na posição 4 (85), que foi testado em TcTS por ensaio fluorimétrico in vitro para avaliação de sua atividade inibitória. Adicionalmente, 85 foi testado em ensaios in vitro para avaliação de sua atividade tripanocida e citotóxica. De acordo com os ensaios biológicos, o composto 85 apresentou atividade inibitória promissora (56%) na concentração de 1,0 mM. Esse resultado preliminar foi importante para mostrar que esse tipo de derivado pode atuar como inibidor de TcTS e para orientar a síntese de novos derivados de galactose. O valor da atividade tripanocida foi inferior a 40% (0,5 mM) e não foi observada citotoxicidade na concentração de 0,5 mM. Os estudos de triagem virtual realizados neste trabalho através de simulações de \"docking\" resultaram na seleção das 50 melhores moléculas, baseada na orientação de maior pontuação, dentre 50.000 encontradas na base de dados diverset. O próximo passo envolve novos estudos para filtrar as moléculas mais promissoras para serem testadas em TcTS. / Chagas\' disease, also known as American trypanosomiasis, is one of the most devastating tropical diseases and it is caused by the protozoan Trypanosoma cruzi. The parasite expresses a cell surface enzyme, Trypanosoma cruzi trans-sialidase (TcTS), responsible for the transference of sialic acids from host cells to terminal -galactose molecules present on its glycoprotein surface. The sialylated glycoprotein molecules are involved in the attachment and subsequent penetration of the parasite into host cells. As a result, TcTS plays a key role in the recognition and invasion of host cells. Moreover, the lack of trans-sialidase in humans makes TcTS a potential drug target to be explored, however no strong inhibitors (at nanomolar range) of this enzyme are known to date. Considering the importance of galactose unit and the carboxyl function in sialic acid for interactions in the active site of TcTS, we have focused on the synthesis of galactose derivatives containing succinic acid in different positions of the sugar ring and on their biological evaluation against TcTS. In addition, we have proposed the search for new TcTS inhibitors applying molecular modeling techniques, like virtual screening based on the enzyme´s active site. Commercially available ,-D-galactose and methyl--D-galactopyranoside were treated with suitable reagents to afford some intermediates with just one free hydroxyl group in few steps. Treatment of these compounds with succinic anhydride in pyridine afforded derivatives thereof with succinic acid in all galactosidic ring positions. After deprotection step it was only obtained the derivative containing succinic acid at position 4 (85), which was tested in in vitro TcTS fluorimetric assay for evaluation of its inhibitory activity. In Addition, 85 was tested in in vitro assays for assessment of their trypanocidal activity and cytotoxic. According to the biological assays, compound 85 showed promising inhibitory activity (56%) at 1.0 mM concentration. This preliminary result was important both to show that this type of derivative can act as an inhibitor of TcTS and to guide the synthesis of new derivatives of galactose. The trypanocidal activity value was lower than 40% (0.5 mM) and there was no cytotoxicity at 0.5 mM concentration. The virtual screening studies performed in this work through docking simulations resulted in the selection of the 50 top-ranked molecules, based in the highest score orientation, among 50.000 found at diverset data base. The next step involves new studies to filter the most promising molecules to be tested against TcTS.

Os carboidratos apresentam-se envolvidos em diversos eventos celulares, tais como geração de energia, sustentação celular, reconhecimento celular, processos de sinalização, etc. A OGlcNAcilação, uma das alterações proteicas pós-traducionais relacionada à adição de Nacetilglicosamina a resíduos de serina ou treonina em proteínas citoplasmáticas ou nucleares, vem demonstrando ser uma das alterações recíproca a O-fosforilação de proteínas e pode estar envolvida no desencadeamento de patologias como câncer, diabetes tipo II, e doenças neurodegenerativas. Tendo em vista à relevância da O-GlcNAcilação e a necessidade de ferramentas para seu estudo, temos como objetivo, desenvolver uma rota sintética para a obtenção de moléculas modificadas derivadas de N-acetilglicosamina, contendo o átomo de flúor ligado ao grupo N-acetil. As moléculas correspondem aos derivados glicopiranosídeo de metila 1 e glicoaminoácidos de serina 2 e treonina 3. Uma vez padronizada, os intermediários finais da rota serão utilizados para futura marcação com o 18F, o qual poderá ser empregado em estudos do processo de sinalização celular por O-GlcNAcilação, e no diagnóstico de câncer por PET. Assim, foram propostas, inicialmente, duas rotas sintéticas, uma para a síntese do derivado glicopiranosídeo de metila 1 e outra para os glicoaminoácidos 2 e 3, ambas utilizando o reagente cloridrato de 2-amino-2-desoxi-D-glicose (4) como percursor. A síntese do derivado 1 foi conduzida por meio da proteção do grupo amino do composto 4 pela formação de carbamato 5, e sequencial reação de glicosilação de Fischer (6 e 7), per-Oacetilação 8 e remoção do grupo protetor do amino 9. As etapas sequenciais relacionadas à condensação com o ácido bromoacético 10, e finalmente halogenação e desproteção do carboidrato 11 estão em andamento. A rota sintética proposta para a obtenção dos glicoaminoácidos 2 e 3 foi fundamentada na obtenção de um doador glicosídico contendo o grupo tricloroacetimidato e as hidroxilas protegidas com grupos benzílicos 16, e na utilização do aceptor glicosídico serina 17 e treonina 18, contendo os grupos amino e carboxila protegidos com 9-fluorenilmetóxicarbonil (Fmoc) e benzil (Bn), respectivamente. Até o momento não foi possível a síntese dos glicoaminoácidos 2 e 3 empregando o doador glicosídico inicialmente proposto (tricloroacetimidato), e mesmo após a variação do doador glicosídico, empregando tioaçucares per-O-benzilado 28, ou per-O-acetilado 26, não foi possível a obtenção do produto desejado. As dificuldades observadas na obtenção dos compostos, conduziram a elaboração de novas estratégias sintéticas que possuem o átomo de cloro como grupo abandonador na posição anomérica e a) uma amida {[(4- metilfenil)sulfonil]oxi}acético (33) em C-2, a qual exerce assistência anquimérica em C-1, e permite a funcionalização com o flúor e b) um azido em C-2, preparado a partir de glicais per- O-acetilados, desprovido de participação em C-1. Ambas as rotas sintéticas estão em andamento. / Carbohydrates are involved in many cellular events, such as energy source, sustenance, recognition, signaling processes, etc. O- GlcNAcylation is a post- translational proteins\' alteration related to the addition of N-acetylglucosamine to residues of serine or threonine in cytoplasmic or nuclear protein which has proven to be one of the reciprocal changes to Ophosphorylation of proteins and may be involved in the onset of pathologies such as cancer, type II diabetes, and neurodegenerative diseases. Given the relevance of O- GlcNAcylation and the importance of tools required for the study of this event, we aim to develop a synthetic route to obtain modified molecules derived from N-acetylglucosamine containing fluorine atom attached to the N -acetyl group. The molecules correspond to methyl glucopyranoside derivatives 1 and gluco-amino acids derived from serine 2 and threonine 3. Once the synthetic route is established, the final intermediates of the route will be used for further labeling with 18F, which may be employed in studies of cell signaling processes, involving OGlcNAcylation, and cancer diagnosis by PET. Thus, two synthetic routes were initially proposed: one for the preparation of the methyl glucopyranoside derivative 1 and another one for the gluco-amino acids 2 and 3, both using glucosamine hydrochloride (4) as a precursor. The synthesis of derivative 1 was conducted by protecting the amine group of compound 4 to form the carbamate 5, and sequential Fischer glycosylation (6, 7), per-O-acetylation (8) and removal of the protecting group from the amine (9). The sequential steps related to condensation with bromoacetic acid (10), halogenation and deprotection of the carbohydrate 11 are in progress. The proposed synthetic route for the preparation of 2 and 3 was based on a glycosidic donor containing trichloroacetimidate group, the protection of the hydroxyl groups with benzyl group (16) and glycoside acceptors serine 17 and threonine 18 containing amine and carboxyl groups protected with 9- fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) and benzyl (Bn), respectively. Hitherto, the synthesis of gluco-amino acids 2 and 3 was not achieved using the glycosidic donor initially proposed (trichloroacetimidate), even after the change of the glycosidic donor using per-O-benzylated (28) or per-O-acetylated (26) thiosugars. The difficulties encountered for the synthesis of the target compounds led the design of new synthetic strategies which comprise a chlorine atom as leaving group in the anomeric position and either: a) an amide acetic acid (33) at C-2, which exerts anchimeric assistance at C-1, and allows functionalization with fluorine and b) an azide group at C- 2, prepared from per-O-acetylated glucal, with no participation at C-1. Both synthetic routes are in progress.

O déficit hídrico decorrente da seca se estabelece quando a absorção de água pelas raízes não consegue atender as demandas da planta, entre as quais estão a fotossíntese e transpiração, essenciais ao crescimento vegetal. Para avaliar a influência de déficits hídricos de diferentes intensidades nas relações hídricas, trocas gasosas, crescimento e acúmulo de carboidratos de Bauhinia forficata Link, plantas foram cultivadas em casa de vegetação durante três meses em vasos de 20 L e submetidas aos seguintes regimes: regas diária (controle) e regas a cada 7 (7D) e 15 dias (15D) retornando as regas diárias nos regimes 7D e 15D aos 75 dias de experimento. Em intervalos quinzenais (15, 30, 45, 60, 75, 90 dias) foram avaliados a umidade do solo (Usolo), potencial hídrico foliar (wf), a fotossíntese em resposta a radiação fotossinteticamente ativa (AxPAR) para obtenção da assimilação liquida máxima (Amax) e do ponto de saturação luminoso (PARsat), área foliar total (AFT) e massas secas (MS) de folhas (MSf), caules (MSc) e raízes (MSr). Foi também coletado material vegetal para as análises bioquímicas quantitativas dos teores de açúcares solúveis totais (AST), redutores (AR), amido (S) e prolina (Pro) por métodos colorimétricos e qualitativos da composição de carboidratos solúveis neutros por HPAEC/PAD e análise de açúcares alcoóis por GC/MS. O déficit hídrico afetou as relações hídricas, fotossíntese e crescimento das plantas, sendo que os menores valores de Usolo observados nos tratamentos 7D e 15D respectivamente, coincidiram com os menores wf, Amax e acúmulo de MS. Alterações nos PARsat em resposta ao déficit hídrico foram observadas apresentando valores médios de 665, 275 e 254 mol fótons m-2 s-1 no Controle, 7D e 15D respectivamente. O retorno das regas diárias após 75 dias de experimento, promoveu a recuperação de Amax (7,8 e 9,6 mol CO2 m-2 s-1) e dos PARsat (588 e 643 mol fótons m-2 s-1) das plantas 7D e 15D respectivamente aos 90 dias, com valores maiores daqueles observados nas plantas controle (4,7 mol CO2 m-2 s-1 e 631 mol fótons m- 2 s-1), sugerindo forte dependência da fotossíntese de B. forficata à disponibilidade hídrica no solo. Os baixos teores de amido em folhas nos tratamentos 7D e 15D podem explicar a manutenção dos teores de AST semelhante ao controle, bem como, o aumento dos ASTs após o retorno das regas diárias, os quais poderiam ser prontamente utilizados na osmorregulação e concomitante retomada do crescimento das plantas. A alta detecção de mio-inositol nas análises de HPAEC/PAD sugerem que os açúcares alcoóis podem constituir grande parte dos ASTs não redutores em folhas e raízes de B. forficata. Nas raízes, os aumentos na concentração de glicerol, galactinol e galactosilglicerol detectados por GC/MS seguem o gradiente de disponibilidade hídrica dos tratamentos, indicando uma função osmorreguladora destes açúcares em B. forficata. / The water deficit caused by drought occurs when root water uptake cannot attend plant demands to maintain photosynthesis and transpiration, two essential processes for plant growth. Aiming to evaluate the influence of water deficits of different intensities on water relations, gas exchange, growth, and carbohydrate accumulation, potted plants of Bauhinia forficata Link were grown under greenhouse conditions during three months and submitted to the following water regimes: daily irrigated (control) and irrigated every 7 (7D) or 15 days (15D), recovering the daily irrigations after 75 days of the beginning of the experiment. At fortnightly intervals (15, 30, 45, 60, 75, 90 days) we evaluated soil moisture (Usolo), leaf water potential (wf), photosynthesis in response to photosynthetically active radiation (AxPAR) to obtain the maximum net assimilation (Amax) and light saturation point (PARsat), total leaf area (AFT) and dry mass (MS) of leaves (MSf), stems (MSc) and roots (MSr). Leaves and roots were also sampled for analyses of total soluble sugars (AST), reducing sugars (AR), starch (S), and free proline (Pro) by colorimetric methods. The analyses of the soluble sugar composition were carried out by HPAEC/PAD and GC/MS. The imposed water stress affected the water relations, photosynthesis, and plant growth. Decreases in Usolo values observed in the treatments 7D and 15D, respectively, coincided with the lowest wf, Amax and accumulation of MS. Changes in PARsat in response to water deficit showed mean values of 665, 275, and 254 mol photons m-2 s-1 in control, 7D, and 15D, respectively. The re-watering after 75 days led to the recovery of Amax (7.8 and 9.6 mol CO2 m-2 s-1) and PARsat (588 and 643 mol photons m-2 s-1) of plants 7D and 15D, respectively, at 90 days, with higher values than those observed in the control plants (4.7 mol CO2 m-2 s-1 e 631 mol photons m-2 s-1), suggesting a strong dependence of the photosynthesis of B. forficata of the soil water availability. The low leaf starch contents in the 7D and 15D treatments could explain the maintenance of the concentration of AST similar to control, as well as the increase in AST contents after re-watering. These sugars could be promptly used for osmoregulation and concomitant re-start of plant growth. The presence of high amounts of of myo-inositol detected by HPAEC/PAD analysis suggests that sugar alcohols can constitute the major part of non-reducing ASTs in leaves and roots of B. forficata. In roots, increases in the contents of glycerol, galactinol, and galactoglycerol detected by GC/MS indicating that these sugars can play a role in the osmoregulation of B. forficata.