Neste projeto, objetivou-se o diagnóstico de riquétsias, utilizando metodologia molecular, em material de humanos, carrapatos, pulgas, cães e equinos de áreas endêmicas dos estados de São Paulo (SP) e Rio de Janeiro (RJ). Diagnosticou-se Rickettsia rickettsii infectando Amblyomma cajennense e humanos no estado de SP, indicando ser esta a única espécie responsável pela doença. Rickettsia conorii foi diagnosticada em um paciente procedente de Portugal. No estado do RJ, Rickettsia felis foi detectada Ctenocephalides felis e em Am. cajennense enquanto que R. rickettsii em Amblyomma aureolatum, Am. cajennense, Anocentor nitens, Boophilus microplus, Ct. felis e Rhipicephalus sanguineus. As frequências mínimas de vetores infectados do estado do RJ apresentaram valores superiores àqueles registrados em outras regiões do país. Demonstrou-se, de forma inédita, o envolvimento de algumas destas espécies no ciclo da bactéria. R. rickettsii foi diagnosticada em cães e equinos indicando a importância dos animais domésticos na manutenção do ciclo da riquetsiose. / This project aimed to diagnose rickettsial diseases using molecular analysis methods on human, tick, flea, dog and horse samples from endemic areas in the States of São Paulo (SP) and Rio de Janeiro (RJ). A diagnosis of Rickettsia rickettsii infecting Amblyomma cajennense and humans in the State of SP was made, indicating that this is the only species responsible for the disease. Rickettsia conorii was diagnosed in a patient from Portugal. In RJ, Rickettsia felis was detected in Ctenocephalides felis and Am. cajennense, while R. rickettsii was detected in Amblyomma aureolatum, Am. cajennense, Anocentor nitens, Boophilus microplus, Ct. felis and Rhipicephalus sanguineus. In the State of RJ the minimum frequency of infected vectors presented higher values than those recorded in other regions of the country. The involvement of some of these species in the bacterium cycle has been demonstrated for the first time. R. rickettsii was diagnosed in dogs and horses indicating the importance of livestock in the maintenance cycle of rickettsial infection.

Carrapatos são parasitas hematófagos transmissores de doenças para humanos e animais, e responsáveis por prejuízos econômicos de bilhões de dólares para os sistemas pecuários mundiais. A emergência de carrapatos multirresistentes a acaricidas torna urgente o desenvolvimento de vacinas efetivas contra este parasita. Neste trabalho, nós utilizamos dados de sialotranscriptomas de carrapatos R. microplus para selecionar antígenos secretados pelo parasita para serem testados como uma vacina multicomponente. Os antígenos produzidos de forma recombinante em E. coli foram utilizados como imunógenos em animais suscetíveis à carrapatos para testes de proteção vacinal contra infestações por R. microplus em bovinos e por R. sanguineus em cães. No primeiro ensaio, bovinos imunizados com oito antígenos recombinantes adjuvantados com um polímero sintético apresentaram indução de IgG sérica específica para cinco antígenos, e redução de 22% na infestação por carrapatos R. microplus. No segundo ensaio, a imunização de bovinos com nove antígenos adjuvantados com sais de alumínio gerou IgG específica para todos os antígenos inoculados, e proteção vacinal crescente de 70% e 75% em duas infestações sucessivas com carrapatos R. microplus, sem revacinação, indicando boost natural pela infestação. No terceiro ensaio, a imunização de cães com nove antígenos recombinantes associados à hidróxido de alumínio induziu a soroconversão de IgG dos animais para todos os antígenos, e proteção vacinal de 36% contra a infestação por carrapatos R. sanguineus. Todas as formulações afetaram principalmente o número de fêmeas ingurgitadas após a infestação. O efeito protetor de antígenos derivados de carrapatos R. microplus sobre carrapatos R. sanguineus (proteção cruzada) indica ser possível o desenvolvimento de uma vacina multicomponente efetiva contra os dois parasitas. / Ticks are hematophagous parasites which transmit diseases to humans and animals, and are responsible for billions of dollars of damage to the world\'s livestock systems. The emergence of ticks resistant to multiple acaricides makes urgent the development of effective vaccines against this parasite. In this work, we used data from the R. microplus tick sialotranscriptome to select antigens secreted by the parasite to be tested as a multicomponent vaccine. Recombinant antigens expressed in E. coli were used as antigens in tick\'s susceptible hosts to evaluate it efficacy in protect animals against R. microplus and R. sanguineus infestations. In the first assay, bovines immunized with eight recombinant antigens adjuvanted with a synthetic polymer presented the induction of serum IgG reactive for five antigens, and reduction of R. microplus infestation in 22%. In the second trial, immunization of cattle with nine antigens adjuvanted with aluminum salts generated serum IgG against all antigens, and vaccine protection against R. microplus parasitism was calculated in 70% and 75% for each infestation. In the third trial, the immunization of dogs with recombinant antigens adjuvanted with aluminum hydroxide induced IgG seroconversion against all antigens, and a 36% of protection against infestation by R. sanguineus ticks in immunized animals. All formulations reduced mainly the number of engorged females recovered from infestation. The cross reactive protection induced by R. microplus derived antigens R. sanguineus tick infestation indicate that it is possible to develop a unique multicomponent vaccine against the two parasites.

Carrapatos são parasitas hematófagos transmissores de doenças para humanos e animais, e responsáveis por prejuízos econômicos de bilhões de dólares para os sistemas pecuários mundiais. A emergência de carrapatos multirresistentes a acaricidas torna urgente o desenvolvimento de vacinas efetivas contra este parasita. Neste trabalho, nós utilizamos dados de sialotranscriptomas de carrapatos R. microplus para selecionar antígenos secretados pelo parasita para serem testados como uma vacina multicomponente. Os antígenos produzidos de forma recombinante em E. coli foram utilizados como imunógenos em animais suscetíveis à carrapatos para testes de proteção vacinal contra infestações por R. microplus em bovinos e por R. sanguineus em cães. No primeiro ensaio, bovinos imunizados com oito antígenos recombinantes adjuvantados com um polímero sintético apresentaram indução de IgG sérica específica para cinco antígenos, e redução de 22% na infestação por carrapatos R. microplus. No segundo ensaio, a imunização de bovinos com nove antígenos adjuvantados com sais de alumínio gerou IgG específica para todos os antígenos inoculados, e proteção vacinal crescente de 70% e 75% em duas infestações sucessivas com carrapatos R. microplus, sem revacinação, indicando boost natural pela infestação. No terceiro ensaio, a imunização de cães com nove antígenos recombinantes associados à hidróxido de alumínio induziu a soroconversão de IgG dos animais para todos os antígenos, e proteção vacinal de 36% contra a infestação por carrapatos R. sanguineus. Todas as formulações afetaram principalmente o número de fêmeas ingurgitadas após a infestação. O efeito protetor de antígenos derivados de carrapatos R. microplus sobre carrapatos R. sanguineus (proteção cruzada) indica ser possível o desenvolvimento de uma vacina multicomponente efetiva contra os dois parasitas. / Ticks are hematophagous parasites which transmit diseases to humans and animals, and are responsible for billions of dollars of damage to the world\'s livestock systems. The emergence of ticks resistant to multiple acaricides makes urgent the development of effective vaccines against this parasite. In this work, we used data from the R. microplus tick sialotranscriptome to select antigens secreted by the parasite to be tested as a multicomponent vaccine. Recombinant antigens expressed in E. coli were used as antigens in tick\'s susceptible hosts to evaluate it efficacy in protect animals against R. microplus and R. sanguineus infestations. In the first assay, bovines immunized with eight recombinant antigens adjuvanted with a synthetic polymer presented the induction of serum IgG reactive for five antigens, and reduction of R. microplus infestation in 22%. In the second trial, immunization of cattle with nine antigens adjuvanted with aluminum salts generated serum IgG against all antigens, and vaccine protection against R. microplus parasitism was calculated in 70% and 75% for each infestation. In the third trial, the immunization of dogs with recombinant antigens adjuvanted with aluminum hydroxide induced IgG seroconversion against all antigens, and a 36% of protection against infestation by R. sanguineus ticks in immunized animals. All formulations reduced mainly the number of engorged females recovered from infestation. The cross reactive protection induced by R. microplus derived antigens R. sanguineus tick infestation indicate that it is possible to develop a unique multicomponent vaccine against the two parasites.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2014-02-03T21:22:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_ProspeccaoBiocidaPlantas.pdf: 388713 bytes, checksum: 5acdbc208e312e02f6935962693c2e34 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva(arosa@ufpa.br) on 2014-02-04T14:14:19Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_ProspeccaoBiocidaPlantas.pdf: 388713 bytes, checksum: 5acdbc208e312e02f6935962693c2e34 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-04T14:14:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_ProspeccaoBiocidaPlantas.pdf: 388713 bytes, checksum: 5acdbc208e312e02f6935962693c2e34 (MD5) Previous issue date: 2009 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / PPG7 - Programa Piloto para a Proteção das Florestas Tropicais do Brasil / O principal método de controle do carrapato bovino Boophilus microplus é o uso de carrapaticidas sintéticos. Entretanto, o rápido desenvolvimento de resistência ao princípio ativo, os riscos de resíduo nos produtos de origem animal e a contaminação ambiental tem incentivado a busca por fontes alternativas de controle desse parasita. Dentro desse contexto, o uso de fitoterápicos aponta como uma alternativa no controle do carrapato, podendo reduzir os impactos econômicos e ambientais ao uso de produtos químicos sintéticos. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar “in vitro” o efeito dos óleos essenciais de capim-salsar (Cymbopogon interanius Jowitt) e priprioca (Cyperus articulatus L.), substâncias químicas isoladas do timbó (Derris nicou; Derris urucu): rotenona, rotenolona e deguelina e óleos de andiroba (Carapa guianensis Aublet.) e nim (Azadirachta indica A. Juss.), no controle do carrapato. As pesquisas foram desenvolvidas nas instalações da Unidade de Pesquisa Animal “Sen. Álvaro Adolpho”, da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária – Embrapa Amazônia Oriental, no município de Belém, estado do Pará, no período de março a julho de 2008. As fêmeas ingurgitadas de Boophilus microplus foram colhidas manualmente, de bovinos naturalmente infestados, em propriedade particular localizada à uma hora de Belém. Após a coleta, foram transportadas para o laboratório em vasilhames plásticos, identificados, limpos e aerados. No laboratório, foram lavadas em água corrente, secas em papel absorvente e pesadas em balança analítica (precisão de 0,0001g). A metodologia utilizada foi a imersão de teleóginas por tempo de cinco minutos. Após a imersão, os carrapatos foram secos em papel absorvente, fixados em placas de Petri e mantidos em temperatura ambiente para realização da postura. Durante todo período experimental a temperatura e umidade relativa do ar em laboratório foi aferida com auxílio de um termohigrometro. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado. Os percentuais de mortalidade de fêmeas ingurgitadas de B. microplus ,no dia 5 e 15, variaram de: 45% a 90%; 37% a 90% e 60 a 90%; 60% a 90%, para capim-salsar e priprioca, respectivamente. Os resultados referentes a postura não evidenciaram diferença estatística entre as concentrações 2% e 10%, em relação ao controle (água + etanol). Entretanto, houve diferença na concentração 50%, tanto para capim-salsar quanto priprioca. Para capim-salsar, nesta concentração, foi observada postura de ovos inférteis. Com relação aos percentuais de eficiência do produto, os valores obtidos foram de: 100%; 95,63%; 98,77%; 100% e 99,30%; 96,97%; 99,85% e 100%, para os efeitos do óleo essencial de capim-salsar e priprioca nas concentrações 2%, 5%, 10%, 50%, respectivamente. As taxas de mortalidade, no dia 5, variaram de 37% a 41%, 49% a 64% e 52% a 41% para rotenona, rotenolona e deguelina, da menor para maior concentração, respectivamente. Todas as substâncias testadas apresentaram taxa de mortalidade significativamente maior do que as obtidas pelo grupo controle (água + etanol). Os melhores resultados de percentual da postura foram de 49% e 26% para rotenona e deguelina a 200ppm, respectivamente e 34% para rotenolona a 100ppm. Os percentuais de eficiência nos testes com rotenona foram de 95,24% e 98,68%, para rotenolona da ordem de 97,29%; 98,08%; 100% e deguelina 95,45%; 98,23% e 100%, em 100ppm, 200ppm e 300ppm, respectivamente. Para andiroba e nim, o percentual de mortalidade foi observado no dia 15 e demonstrou um comportamento natural do ciclo biológico dos carrapatos, pois não houve diferença estatística significativa entre o controle (água + etanol) e os tratamentos nas diferentes concentrações. Para andiroba e nim a maior eficiência obtida foi de 98,01% e 100%, na concentração de 50%, respectivamente. / The main method of controlling the cattle tick Boophilus microplus is the use of chemical acaricides during the parasite phase. However, the intense use of this method is causing economic damage and promoting the rapid selection of resistant ticks. Besides the risk of residues in milk, in meat and environmental contamination. Within this context, the use of herbal points out as an alternative to control the tick and can reduce the economic and environmental impacts of the use of synthetic chemicals. On this way, the purpose of this study was to evaluate "in vitro" the effect of essential oils of grass-salsa (Cymbopogon winteranius Jowitt) and priprioca (Cyperus articulatus L.), chemicals isolated substances from timbó (Derris nicou; Derris urucu): rotenone, rotenolone and degueline and Andiroba’s oil (Carapa guianensis Aublet.) and neem (Azadirachta indica A. Juss.) in the control of ticks. The searches were conducted on the premises of the Animal Research Unit "Sen. Álvaro Adolpho, of "the Brazilian Enterprise for Agricultural Research - Embrapa Eastern Amazon, in the city of Belém, state of Pará, in the period from March to July of 2008. The engorged females of Boophilus microplus were collected manually, from naturally infected cattle on private property located within an hour of Belém. After collection, they were transported to the laboratory in plastic containers, marked, cleaned and aerated. In the laboratory, they were rinsed in running water, dried on absorbent paper and weighed on analytical balance (accuracy of 0.0001 g). The methodology used was the immersion of teleogines by time of five minutes. After soaking, the ticks were dried on absorbent paper, set in petri dishes and kept at room temperature for completion of the posture. Throughout the trial period the temperature and relative humidity was measured in the laboratory using a termohigrometer. The experimental design used was completely randomized. The percentage of mortality of engorged females of B. microplus, on 5 and 15, varied: 45% to 90%, 37% to 90% and 60 to 90%, 60% to 90% for grass-salsa and priprioca respectively. The results for the stance showed no statistical difference between the concentrations 2% and 10% on the control (water + ethanol). However, there was a difference in the concentration 50% for both grass-salsa as priprioca. For grass-salsa, this concentration was observed egg laying infertile. Regarding the percentage of efficiency of the product, the values obtained were: 100%; 95.63%, 98.77%, 100% and 99,30%, 96,97%, 99,85% and 100% to the effects of essential oil of salsa and grass-priprioca concentrations 2%, 5%, 10%, 50%, respectively. Mortality rates, on the 5th , ranged from 37% to 41%, 49% to 64% and 52% to 41% for rotenone, rotenolone and degueline from low to high concentration, respectively. All substances tested showed significantly higher mortality rate than those obtained by the control group (water + ethanol). The best results were posture of percentage of 49% and 26% for the rotenone degueline and 200ppm, respectively and 34% for rotenolone at 100ppm. The percentage of efficiency in tests with rotenone were 95.24% and 98.68% for rotenolone the order of 97.29%, 98.08%, 100% and degueline 95.45%, 98.23% and 100 %, from 100ppm, 200ppm and 300ppm, respectively. To andiroba and neem, the percentage of mortality was observed on 15 and has a natural behavior of the life cycle of ticks because there was no statistical difference between the control (water + ethanol) and treatments in different concentrations. To andiroba and neem the higher efficiency obtained was 98,01% and 100%, at concentration 50%, respectively.

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2015-06-22T18:06:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InvestigacaoLeishmaniaCarrapatos.pdf: 960177 bytes, checksum: 4618296f4f7928d9f8cee467dc8fa42c (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2015-06-25T16:13:01Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InvestigacaoLeishmaniaCarrapatos.pdf: 960177 bytes, checksum: 4618296f4f7928d9f8cee467dc8fa42c (MD5) / Made available in DSpace on 2015-06-25T16:13:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_InvestigacaoLeishmaniaCarrapatos.pdf: 960177 bytes, checksum: 4618296f4f7928d9f8cee467dc8fa42c (MD5) Previous issue date: 2012 / A Leishmaniose é uma doença causada pelo protozoário Leishmania sp, podendo acometer homem e animais dependendo da espécie do parasita, São transmitidos pelos flebotomíneos fêmeas, insetos do gênero Lutzomyia, que ao exercer o hematofagismo inoculam as formas promastigota infectantes, mas recentemente, tem sido levantado hipóteses sobre a transmissão por carrapatos. Segundo a vigilância epidemiológica de Imperatriz-MA a cidade é endêmica tanto para Leishmaniose Tegumentar (LT) quanto para a Leishmaniose Visceral (LV). Este trabalho teve como objetivo principal investigar a presença de DNA de Leishmania sp em carrapatos coletados de cães atendidos em petshop e Centro de Controle de Zoonoses do município de Imperatriz utilizando a técnica de PCR. O DNA foi extraído a partir de 640 carrapatos fêmeas e testadas utilizando o primer que amplifica o gene de mini-exon de Leishmania sp. Os carrapatos foram coletados de 41 cães de diferentes bairros da cidade de Imperatriz. A maioria dos carrapatos foram identificados como Rhipicephalus sanguineus. Os seguintes sinais clínicos sugestivos de leishmaniose foram observados nos cães: onicogrifose em 53,65% (22/41); úlceras em 63,41% (26/41), a perda de cabelo e inapetência em 39,02% (16/41). Cento e setenta carrapatos (26,56%) coletados de 16 cães apresentaram DNA de Leishmania do subgênero Viannia, responsável pela forma cutânea da doença. Não foi detectado nenhum DNA de Leishmania infantum chagasi. Carrapatos infectados foram coletados de ambos os cães sintomáticos e assintomáticos. Embora ainda não tenha sido demonstrado que os carrapatos possam transmitir Leishmania aos cães sob condições naturais, o resultado deste estudo tem vários aspectos importantes, pois é um método não-invasivo de detecção, capaz de diferenciar os grupos de parasitas em circulação, em especial se os animais não têm lesões, pode ser um indicador biológico em locais onde não é feito uma investigação sorológica e nem entomológica, podendo dar suporte aos programas de vigilância de saúde local. / Leishmaniasis is a disease caused by the protozoan Leishmania, can affect humans and animals depending on the species of the parasite, transmitted by sandflies are female insects of the genus Lutzomyia, that in exercising hematophagism inoculated infective promastigote forms, but recently has been raised hypotheses about the transmission by ticks. According to the epidemiological surveillance of Imperatriz-MA is a city endemic for both Cutaneous Leishmaniasis (LT) and for Visceral Leishmaniasis (VL). This study aimed to investigate the presence of Leishmania spp in ticks collected from dogs presented to petshop and Zoonoses Control Centre of the Municipality of Imperatriz using the PCR technique. DNA was extracted from 640 female ticks and tested using the primer which amplifies the mini-exon gene of Leishmania sp. Ticks were collected from 41 dogs of different neighborhoods of Imperatriz. Most ticks were identified as Rhipicephalus sanguineus. The following clinical signs of leishmaniasis in dogs were observed: onychogryphosis in 53.65% (22/41); ulcers 63.41% (26/41), hair loss and loss of appetite in 39.02% (16 / 41). One hundred and seventy ticks (26.56%) of 16 dogs had collected DNA from Leishmania subgenus Viannia, responsible for the cutaneous form of the disease. DNA was not detected none of Leishmania infantum chagasi. Infected ticks were collected from both symptomatic and asymptomatic dogs. Although it has not been shown that ticks can transmit Leishmania to dogs under natural conditions, the outcome of this study has several important because it is a non-invasive method of detection, able to differentiate groups of parasites in circulation, particularly if animals do not have lesions, may be a biological indicator in places where there is an investigation done serological and entomological not and can support the programs of the local health surveillance.

Submitted by BRENO CAYEIRO CRUZ null (breno.c.cruz@hotmail.com) on 2017-12-04T11:58:38Z No. of bitstreams: 1 - TESE -.pdf: 3422888 bytes, checksum: a396717b2b2074de76c0871a37c4eebb (MD5) / Submitted by BRENO CAYEIRO CRUZ null (breno.c.cruz@hotmail.com) on 2017-12-04T14:43:23Z No. of bitstreams: 1 - TESE -.pdf: 3422888 bytes, checksum: a396717b2b2074de76c0871a37c4eebb (MD5) / Submitted by BRENO CAYEIRO CRUZ null (breno.c.cruz@hotmail.com) on 2017-12-05T14:11:14Z No. of bitstreams: 1 - TESE -.pdf: 3422888 bytes, checksum: a396717b2b2074de76c0871a37c4eebb (MD5) / Submitted by BRENO CAYEIRO CRUZ null (breno.c.cruz@hotmail.com) on 2017-12-11T18:47:11Z No. of bitstreams: 1 - TESE -.pdf: 3422888 bytes, checksum: a396717b2b2074de76c0871a37c4eebb (MD5) / Approved for entry into archive by Alexandra Maria Donadon Lusser Segali null (alexmar@fcav.unesp.br) on 2017-12-13T11:26:46Z (GMT) No. of bitstreams: 1 cruz_bc_dr_jabo.pdf.pdf: 3422888 bytes, checksum: a396717b2b2074de76c0871a37c4eebb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-12-13T11:26:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 cruz_bc_dr_jabo.pdf.pdf: 3422888 bytes, checksum: a396717b2b2074de76c0871a37c4eebb (MD5) Previous issue date: 2017-10-27 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini, 1888) é o mais importante ectoparasito da pecuária brasileira, cujo controle exige conhecimentos comportamentais de seu ciclo biológico para melhor sucesso na atuação sobre e fora do hospedeiro, combatendo-o em épocas do ano desfavoráveis ao mesmo. A maioria das informações sobre sua biologia e ecologia foi originada em outros países ou então há muito tempo. Baseado nas mudanças climáticas recentes e ausência de informações sobre ecologia e biologia deste ixodídeo na região, este estudo, conduzido em bioma de Cerrado e clima tropical com estação seca (Aw), obteve tais dados pela observação, ao longo de dois anos, dos fatores envolvidos nas suas fases de vida parasitária e não parasitária, além de avaliar o comportamento desta cepa quanto à evolução do perfil de resistência/susceptibilidade aos acaricidas. Observando a fase de vida parasitária deste carrapato, foi possível perceber sua adaptação às mudanças climáticas, com cinco gerações anuais registradas em dois anos consecutivos pela primeira vez na literatura. Constatou-se que não houve correlações significativas entre seu ciclo parasitando bovinos e os níveis de chuva, temperaturas ambiental e ao nível do solo e umidade relativa do ar. Já a fase de vida livre foi influenciada pelos fatores climáticos, com correlação positiva entre pluviosidade/pré-postura, correlações negativas entre temperatura/pré-postura, incubação e pré-eclosão, entre umidade relativa do ar/incubação e pré-eclosão. Os dados obtidos indicaram que o período de seca (outono e inverno) é mais favorável à manutenção do carrapato bovino no ambiente, além de albergar as maiores cargas parasitárias nos hospedeiros. A dinâmica populacional calculada reforça a adaptação deste ixodídeo às mudanças climáticas, culminando na existência de 5,212 gerações anuais mesmo em condições climáticas e ambientais distintas, oscilando entre 2,6 e 8,3 gerações/ano. Considerando estes dados, foi proposta uma metodologia de controle estratégico específica, tratando os animais entre a segunda metade da primavera e a primeira metade do verão (outubro a fevereiro). Estes tratamentos na estação chuvosa levariam a populações menores na estação seca, reduzindo também o “spring rise”. A análise da eficácia de diferentes compostos químicos por meio do Teste de Pacote de Larvas gerou resultados contraditórios, com alta eficácia registrada para piretróides e organofosforados, e oscilações na eficácia do amitraz. Estes valores levantaram questionamentos sobre a aplicabilidade desta técnica no monitoramento da resistência. Futuros estudos devem ser propostos, analisando a real eficácia dos Testes de Pacote de Larvas, confrontando diferentes metodologias in vivo e in vitro; comparando a dinâmica populacional deste ixodídeo em diferentes pastagens, formas de manejo, taxas de lotação, altitudes e biomas; atestando a eficácia da metodologia de controle estratégico proposta e, principalmente, confirmando a possibilidade de observarem-se mais de oito gerações de R. microplus por ano em condições climáticas ideais. / Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini, 1888) is the main ectoparasite in Brazilian cattle industry, and its control demands behavioral knowledge of its biologic cycle, for increased success in actions over and out of the hosts, with treatments in periods of the year less favorable to this tick. Most of the information about its biology and ecology was originated in other countries or a long time ago. Based in recent climate changes and absence of ecologic and biologic data on this region, the present study, conducted in the Brazilian “Cerrado” biome and tropical savanna climate (Aw), obtained such data through the observation, during two consecutive years, of factors involved on parasitic and free living phases of its cycle, also evaluating the behavior of this strain regarding evolution of its resistance/susceptibility profile against acaricides. Observing the parasitic phase of the Southern Cattle Tick, it was possible to detect adaptations of this ixodid to climate changes, with five annual generations in two consecutive years being registered for the first time in literature, without significant correlations between its period parasitizing bovines and rain levels, environmental and soil level temperatures and relative air humidity. The free living period of its cycle was affected by climatic variables, with positive correlation between rainfall and the period before oviposition, and negative correlations between temperatures and the period before oviposition, egg incubation and period before hatching, and between relative air humidity and egg incubation and the period before larval hatching. Obtained data indicate that the dry season (autumn and winter) is more favorable for maintenance of the Southern Cattle Tick on the environment, as well as presenting highest parasitic burdens in hosts. Population dynamics calculated reinforces the adaptations of such ixodid to climate changes, leading to the existence of 5.212 yearly generations even in distinct climatic and environmental conditions, varying between 2.6 and 8.3 generations per year. Considering such data, a specific strategic control methodology was proposed, treating animals between the second half of spring and the first half of summer (October to February). Such treatments in rainy seasons would lead to smaller populations on the dry season, also reducing the “spring rise”. Analysis of efficacy of different chemical compounds using the Larval Packet Test generated contrasting results, with high efficacy indexes registered for pyrethroids and organophosphates, with variations in amitraz efficiency. Such values lead to a questioning of the applicability of such technique in monitoring resistance. Future studies must be proposed, analyzing the real efficacy of Larval Packet Tests, confronting different in vivo and in vitro methodologies; comparing population dynamics of such ixodid in different pastures, husbandry methods, stocking rates, altitudes and biomes; confirming the efficacy of the proposed strategic control method and, above all, confirming the possibility of observing more than eight R. microplus yearly generations in ideal climatic conditions. / 2014/14820-2

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA14MA147.pdf: 1952248 bytes, checksum: 65c75c63c1e7587bc9ef0f1e1a53f8c6 (MD5) Previous issue date: 2014-07-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus is an ectoparasite, hematophagous and monoxenous, whose preferential host are the bovines, is one of the major obstacles for cattle raising production due to economic damages from its parasitism. Throughout Brazil, and in the wide area where pampa biome is, cattle raising plays a key role in economy development. The present project aimed to explore the potential of the pampa biome native flora by investigating the in vitro acaricide effect of Baccharis trimera, Vernonia nudiflora and Eupatorium buniifolium extracts for the control of R. (B.) microplus. Previous tests were needed to evaluate the sensitivity of the strain of R. (B.) microplus used in the study, in commercial basis, also the polysorbate 80 to use it as a solvent of the extracts and three techniques of immersion of larvae using syringes were simultaneously evaluated . It was found that polysorbate 80 at 5% and 10% did not cause mortality rates higher than 3.5% in larvae and engorged females so that it can be used in tests with different instar R. (B.) microplus. Experiment 1 was conducted to compare two new modifications of the Immersion Test Larvae in Syringes original technique (T1), the first modification using 100 larvae and a five-minute immersion (T2), the second consisted in the addition of 2 mL of acaricide solution, 30 seconds immersion in syringes without side hole (T3). There was no statistical difference between techniques, however, due to a better practicality of the technique described by (T3) and reviewers, we chose to use this methodology in essays with plant extracts. Experiment 2 was accomplished to evaluate the acaricidal activity of aqueous extracts, methanol and hexane of V. nudiflora, B. trimera and E. buniifolium in engorged females and larvae of R. (B.) microplus. The use of hexane and methanol extracts of B. trimera induced 38.96% and 52.02% mortality of larvae at the highest concentration tested 25600 μg.mL-1. In engorged females, we observed efficacy V. nudiflora field and B. trimera methanol extracts around 30% at concentrations of 12800 and 1600 μg.mL-1, respectively. The extracts of E. buniifolium and aqueous extracts did not show acaricidal activity. The results indicate acaricide potential of methanol and hexane extracts of gorse in R. (B.) microplus / O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é um ectoparasito, hematófago e monóxeno, cujo hospedeiro preferencial é o bovino, sendo um dos grandes entraves para a produção pecuária devido aos prejuízos econômicos decorrentes de seu parasitismo. Em todo o Brasil, e na vasta área onde se estabelece o Bioma Pampa, a pecuária desempenha um papel primordial no desenvolvimento da economia. A realização desse projeto teve como proposta explorar o potencial da flora nativa do Bioma Pampa, investigando o efeito acaricida in vitro de extratos de Baccharis trimera, Vernonia nudiflora e Eupatorium buniifolium em R. (B.) microplus. Ensaios preliminares foram necessários para avaliar a sensibilidade da cepa de R. (B.) microplus, usada no estudo, a bases comerciais, também ao polissorbato 80 para uso deste como solvente dos extratos e foi avaliado simultaneamente três técnicas de imersão de larvas utilizando seringas. Verificou-se que, o polissorbato 80 a 5% e a 10% não provocou mortalidade superior a 3,5% em larvas e teleóginas podendo ser utilizado em testes com diferentes ínstares de R. (B.) microplus. O experimento 1 foi realizado com objetivo de comparar duas novas modificações da técnica original (T1) do Teste de Imersão de Larvas em Seringas, sendo a primeira modificação a utilização de 100 larvas e o tempo de imersão para cinco minutos (T2), a segunda consistiu na adição de 2 mL de solução acaricida, tempo de imersão de 30 segundos em seringas sem orifício lateral (T3). Não houve diferença estatística entre as técnicas, porém, devido à maior praticidade de execução da técnica descrita por (T3), optou-se por usar esta metodologia nos ensaios com extratos de plantas. O experimento 2 foi realizado para avaliar a atividade acaricida dos extratos aquosos, metanólicos e hexânicos de B. trimera, V. nudiflora, e E. buniifolium em larvas e adultos de R. (B.) microplus. A utilização dos extratos metanólicos e hexânicos de B. trimera induziram 38,96% e 52,02% de mortalidade de larvas na maior concentração testada 25600 μg.mL-1. Em teleóginas, observou-se eficácia do extrato metanólico de V. nudiflora e de B. trimera próximo de 30%, nas concentrações de 12800 e 1600 μg.mL-1, respectivamente. Os extratos de E. buniifolium e os extratos aquosos não apresentaram atividade acaricida. Os resultados indicam potencial acaricida dos extratos metanólico e hexânico de B. trimera em R. (B.) microplus

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / No Brasil, a maioria das viroses transmitidas por artrópodes (arboviroses) pertence ao gênero Flavivirus, no entanto, aqueles transmitidos por carrapatos são menos estudados do que os transmitidos por insetos. Além dos vírus, outros microrganismos possuem grande relevância em saúde pública. Riquétsias são os principais agentes de zoonoses transmitidas por carrapatos no Brasil, especialmente as do Grupo da Febre Maculosa (GFM), que inclui diversas espécies patogênicas e que são transmitidas por carrapatos. Dentre os diversos biomas, dois foram particularmente degradados no Brasil, a Mata Atlântica e o Cerrado. Diante destes motivos, esta tese compõe-se de três capítulos, que tiveram como objetivo identificar carrapatos vetores em áreas do Cerrado e Mata Atlântica adjacentes a áreas com atividade humana, pesquisando por patógenos causadores de zoonoses, Rickettsia spp. e Flavivirus. No primeiro capítulo, a presença de riquétsias foi averiguada em carrapatos de cães e carnívoros da região de Cumari-GO. Pesquisou-se por esse microrganismo em oito espécies de carnívoros silvestres e em cães domésticos. Duas amostras amplificaram fragmentos do gene ompB, presente em riquétsias do GFM, e ao mesmo tempo amplificaram fragmentos específicos para Rickettsia bellii, que não pertence a esse grupo. Isso demonstra uma possível infecção cruzada, podendo o carrapato manter concomitantemente estas duas espécies divergentes. O segundo capítulo, dados de carrapatos de tamanduás (Myrmecophaga tridactyla e Tamandua tetradactyla) referentes a um período de 18 anos foram analisados, 169 amostras foram avaliadas quanto à presença de riquétsias. Quatro destas amostras exibiram sequência de ompA com 100% de identidade com outras sequências de carrapato Amblyomma nodosum, indicando que Rickettsia spp. do grupo da febre maculosa (SFG) em Amblyomma nodosum estava circulando no entorno da cidade de Uberlândia e estado de São Paulo, podendo outros carrapatos, tais como A. sculptum serem infectados, gerando risco para animais domésticos e seres humanos. No último capítulo, carrapatos de seis áreas, uma pertencente à Mata Atlântica e as outras do bioma Cerrado, foram avaliados quanto à presença de Flavivirus. Nestes locais foram pesquisados carrapatos de doze espécies diferentes, sendo onze da família Ixodidae e um da família Argasidae, estes pertenciam às espécies: Amblyomma sculptum, Rhipicephalus sanguineus, Rhipicephalus microplus, Dermacentor nitens, Amblyomma ovale, Amblyomma dubitatum, Amblyomma parvum, Amblyomma rotundatum, Amblyomma incisum, Amblyomma brasiliense, Amblyomma naponense e Ornithodoros sp. Detectou-se a presença de um flavivírus em carrapatos R. microplus coletados na região de Uberlândia. Estas amostras exibiram aproximadamente 98% de identidade com o Vírus do Carrapato Mogiana (MGTV). Todos os carrapatos que exibiram resultados positivos para flavivírus ou riquétsias, foram coletados em áreas antropizadas, confirmando a importância do estudo de vetores hematófagos na epidemiologia de agentes virais e bacterianos de animais domésticos e selvagens. / In Brazil, most arthropod-transmitted viruses (arboviruses) belong to Flavivirus genus, being tick-transmitted less studied than insect-transmitted ones. Other microorganisms have great public health relevance, such as Rickettsia, the main agent of tick-borne diseases in Brazil, specially the Macular Fever (MF) group, which includes several pathogenic species that are transmitted by ticks. Within different biomes, both the Atlantic Forest and the Cerrado were severely degraded in Brazil. This thesis consisted of three chapters, aiming to identify ticks in areas of Cerrado and Atlantic Forest with surrounding human activity, looking for both Rickettsia and Flavivirus infected ticks. In the first chapter, the presence of Rickettsia was investigated in ticks from dogs and other carnivores, being eight wild carnivores species and domestic dogs in Cumari, Goiás state, Brazil. Two samples were positive for ompB gene, common in the MF group, being also positive for specific genes found in Rickettsia bellii, which does not belong to the MF group. This result shows a possible cross-infection, being tick able to maintain these two different species simultaneously. The second chapter, an 18- year-study-data from anteater ticks (Myrmecophaga tridactyla and Tamandua tetradactyla) was analyzed, accounting 169 samples evaluated for the presence of Rickettsia. Four samples were positive for ompA gene, being 100% identical to other tick sequences present in Amblyomma nodosum, indicating that Rickettsia from the MF group in A. nodosum was circulating around the city of Uberlândia and state of São Paulo. Other ticks, such as A. sculptum, could become infected by the Rickettsia presence, generating risk for domestic animals and humans. In the last chapter, ticks from six areas, being one from the Atlantic Forest and the others from the Cerrado biome, were evaluated for the presence of Flavivirus. 12 different species were accounted, in which eleven were from the Ixodidae family and one was from the Argasidae family, having the following species identified: Amblyomma sculptum, Rhipicephalus sanguineus, Rhipicephalus microplus, Dermacentor nitens, Amblyomma ovale, Amblyomma dubitatum, Amblyomma parvum, Amblyomma rotundatum, Amblyomma incisum, Amblyomma brasiliense, Amblyomma naponense and Ornithodoros sp. The presence of a Flavivirus in R. microplus ticks collected in the Uberlândia region was detected. These samples exhibited approximately 98% identity with the Mogiana Tick Virus (MGTV). All ticks that were positive for Flavivirus or Rickettsia were collected in areas with human activities, stating the importance of studies on hematophagous vectors in the epidemiology of both viral and bacterial agents in domestic and wild animals. / Tese (Doutorado)

Uma população experimental F2 foi desenvolvida a partir do cruzamento de quatro machos da raça Holandesa com vinte e oito fêmeas Gir, produzindo uma geração F1 com cento e cinqüenta animais, da qual quatro machos foram escolhidos baseados na sua fertilidade para acasalar com sessenta e oito fêmeas e produzir a geração F2 com aproximadamente quatrocentos indivíduos. Foram coletados dados fenotípicos para características de contagem de carrapatos, peso ao nascimento e peso a desmama para os animais da geração F2. Cerca de duzentos e noventa animais tiveram seu fenótipo medido para as características com exceção da contagem de carrapatos, onde somente cento e sessenta e sete animais foram medidos. As gerações parentais e F1 foram genotipadas para cinco marcadores microssatélites posicionados no cromossomo 23. Após a determinação do grau de informação dos marcadores, todos os animais da geração F2 disponíveis foram genotipados para os cinco marcadores. Com o resultado da genotipagem foi construído o mapa de ligação específico dos marcadores no cromossomo 23 para a população desenvolvida. Após o ajuste da característica de contagem de carrapatos pelo logaritmo da contagem e pela transformação rank, ambos ajustes foram utilizados para mapeamento de QTL pelo método de regressão por mínimos quadrados ordinários, utilizando o programa QTL Express. Não foi encontrado nenhum QTL associado a nenhuma das características estudadas. O pequeno número de animais avaliados para a característica de contagem de carrapatos pode ter influenciado o resultado, bem como um melhor ajuste ou mais variáveis que complementem essa característica. Outras análises devem ser realizadas com essa população, tanto para complementar este estudo como para realização de outros estudos sobre características relativas a resistência a ecto e endoparasitas. / A F2 design population had been developed from the breeding between four male holstein with twenty eight female Gir, generating a F1 with one hundred and fifty animals, from these sample four male have been chosen based on their fertility for matching. They have been breed with sixty eight females, producing the F2 generation with about four hundred individuals. Phenotypic data has been collected for tick accounting, birth weight and weight after sixty days for individuals on F2. Over than two hundred and ninety animals had their phenotypic measured for those characteristics with the exception of the tick accounting. On this case, only one hundred sixty seven were measured. The parental and F1 generations were genotyped for five microsatellite markers positioned on chromosome 23. After the determination of the markers information degree, all the F2 animals available were genotyped for the five markers. Under the genotyping results was constructed the linkage map for this markers on chromosome 23. After the log transformation for tick accounting and the rank transformation both adjusts was used for QTL mapping by the regression method based on minimum ordinary least squares, using the QTL Express software, were not found any QTL associated for any studied characteristics. The small sample of animals used for tick accounting could have biased the results. Other analyses must be taken over this population; not only to complete the present study, but also to create new sort of studies on characteristics related on ecto and endo parasites.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Kennedy_2010.pdf: 1273886 bytes, checksum: d53179ca59a4af096e34e7c640527b2d (MD5) Previous issue date: 2010-08-13 / Amblyomma cajennense, commonly known as Cayenne tick, is a three-host tick widely distributed in Brazil and in the rest of Latin American countries. Owing to its low host specificity, it plays an important role in the transmission of pathogens in animals and man. Chemical communication is a vital component in tick biology whereby pheromones are largely responsible in the regulation of mating, recognition of sexual partner and copulation. By understanding the behaviour of A. cajennense and the pheromones involved, there exists practical possibility for the use of these substances as an additional method of control thereby reducing the use of acaricides. Based on this, the aims of this work were to quantify and elucidate behaviours induced by pheromones emitted by females A. cajennense as well as identify and characterize qualitatively and biologically the pheromone produced by males. Engorged females were collected from naturally-infested horses for the establishment of laboratory colonies for use in this study. The pheromones were obtained by extraction in hexane and sonication by ultra-sound of fed males and females. The female sex pheromone, 2,6-dichlorophenol (2,6-DCP), was quantified by GC/MS using internal standard and standard addition methods through construction of calibration curves using 5-bromine-4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde and 2,6-DCP, respectively. The male extract was analysed chemically by GC/MS in comparison with standards. As concerns biological tests, glass beads were treated with two femaleequivalents of the female pheromone and 2,6-DCP in an equivalent concentration and exposed to males to observe the induced behaviour(s). Attraction to the male pheromone was evaluated by release of individual unfed, virgin females to three concentrations (1, 5 and 10 male-equivalents) of the extract in olfactometer bioassays. Orientations towards the odour source were analysed by Kruskal-Wallis and displacement angles by Circular Statistics. Aggregation was evaluated by releasing the tick stages in Petri dish bioassays shortly followed by introduction of filter paper strips impregnated with 10 male-equivalents of the extract and recording tick responses on camera. Data analysis was by Chi-square test. Tests for attachment were carried out in vivo in rabbits, Oryctolagus cuniculus, and the released ticks observed in determined intervals between 20min and 24hrs. The data was analysed by Wilcoxon signed-ranked test and Friedman s repeated measures ANOVA. The results indicated that each female emits 2.15 ng ml-1 of pheromone on average. The male extract was positive for benzoic acid, nonanoic acid, salicylic acid, benzaldehyde, 2,6-DCP, limonene and methyl salicylate. The female extract and 2,6- DCP stimulated mounting in up to 80% and 73% of all cases, respectively, confirming that 2,6-DCP alone mediates mounting behaviour in A. cajennense. There was no statistically significant attraction or aggregation in males or females induced by the male pheromone. However, significantly faster and greater attachment was recorded in both. The behavioural responses corresponded with the pheromone s composition. It was concluded that the male pheromone promotes neither attraction nor aggregation but is responsible for faster fixation of A. cajennense adults. The pheromone also contains different proportions and differs from other Amblyomma species as far as the presence or absence of certain components is concerned. The results serve as a first step in advanced studies aimed at development of novel strategies for the management of this species using these pheromones. / Amblyomma cajennense, vulgarmente conhecido como carrapato-estrela, é um carrapato trioxeno que está amplamente difundido no território brasileiro e nos demais países da América Latina. Dada a sua baixa especificidade, assume um importante papel na transmissão de patógenos entre os animais e o homem. A comunicação química é um componente vital na biologia dos carrapatos, onde feromônios são majoritariamente responsáveis na regulação da busca pelo parceiro e a cópula. Compreendendo o comportamento de A. cajennense e os feromônios envolvidos, existem possibilidades práticas do uso destas substâncias como uma forma alternativa e satisfatória de controlálos minimizando o uso de acaricidas. Diante disso, procurou-se neste trabalho, quantificar e elucidar comportamentos instigados por feromônio produzido por fêmeas bem como identificar e caracterizar qualitativa e biologicamente feromônio de machos. Fêmeas ingurgitadas de A. cajennense foram colhidas de eqüinos naturalmente infestados para estabelecimento de colônias no laboratório. Os feromônios foram obtidos por extração e sonicação em hexano de machos ou fêmeas de carrapatos alimentados. Quantificou-se o feromônio sexual, o 2,6-diclorofenol (2,6-DCF), em fêmeas pelas técnicas de padrão interno, com 5-bromo-4-hidróxi-3-metóxi-benzaldeido como referência interna, e adição padrão por meio de cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG/EM) através de construção de curvas de calibração. O extrato dos machos foi analisado quimicamente por CG/EM diante de padrões sintéticos. No que concerne aos testes biológicos, pérolas de vidro foram tratadas com dois equivalentes-fêmea de amostra de feromônio extraído de fêmeas e com 2,6-DCF em uma dose equivalente e expostas aos machos para observar comportamento(s) provocado(s). A atração diante do feromônio de machos foi avaliada pela liberação individual de fêmeas, machos e ninfas virgens, não alimentadas, frente a três concentrações (1, 5 e 10 equivalentes-macho) do extrato de machos, em um olfatômetro. As orientações à fonte de odor foram analisadas por teste de Kruskal-Wallis e os ângulos por Estatística Circular. A agregação foi avaliada pela aplicação de 10 equivalentes-macho do extrato em arenas de placas de Petri e os dados analisados por Chi-quadrado. Testes de fixação foram feitos in vivo em coelhos, Oryctolagus cuniculus, onde os carrapatos foram liberados e observados em intervalos determinados entre 20min e 24hs e suas respostas analisadas por testes de Wilcoxon e ANOVA Friedman. Os resultados mostraram que uma fêmea libera em média 2,15 ng mL-1 de feromônio. O extrato de machos apresentou ácido benzóico, ácido nonanóico, ácido salicílico, benzaldeido, 2,6-DCF, limoneno e salicilato de metila. O extrato de fêmeas e o 2,6-DCF sintético estimularam a monta em até 73% de casos, respectivamente, confirmando que o composto é responsável por mediar à monta em A. cajennense. Não houve atração nem agregação estatisticamente maior dos machos e fêmeas diante do feromônio procedente de machos. Entretanto, uma fixação significativamente maior e mais rápida foi registrada dentro de 24 h em ambos os sexos. Os achados de respostas biológicas corresponderam com a composição química de feromônio de machos. Concluiu-se que o feromônio de machos não promove atração nem agregação, mas é responsável pela fixação de adultos de A. cajennense. O feromônio também possui diferenças na proporção e na presença de determinados compostos descritos em outras espécies do gênero Amblyomma. Os resultados estão discutidos como um ponto de partida para estudos avançados visando o desenvolvimento de novas estratégias de controle e de manejo desta espécie utilizando esses feromônios.