Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-08-29T17:40:15Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_InfluênciaReinfecçãoDiferentes.pdf: 2091635 bytes, checksum: 69f0c3e3e0a81e034878f8f2c832ddf1 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-09-29T23:49:41Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_InfluênciaReinfecçãoDiferentes.pdf: 2091635 bytes, checksum: 69f0c3e3e0a81e034878f8f2c832ddf1 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-29T23:49:41Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 20592 bytes, checksum: 0c9b9c579af4cbbcf785ca803bd18d4b (MD5) DISSERTAÇÃO_InfluênciaReinfecçãoDiferentes.pdf: 2091635 bytes, checksum: 69f0c3e3e0a81e034878f8f2c832ddf1 (MD5) Previous issue date: 2013 / A diversidade e severidade dos sintomas observados na doença de Chagas estão relacionados a inúmeros fatores, dentre eles: cepa do parasito, imunidade do hospedeiro, tempo de infecção e reinfecções. Considerando que a reinfecção está presente no ciclo natural da doença de Chagas e que a diversidade genética de populações do Trypanosoma cruzi apresenta influência no desenvolvimento da infecção, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a influência de reinfecções por dois clones em camundongos experimentalmente infectados e/ou reinfectados, por meio de análises parasitológicas, fenotipagem de células mononucleares do sangue periférico e histopatologia dos músculos cardíaco e esquelético. Os animais foram agrupados conforme as características a seguir: 1) não infectados (NI); 2) infectados pelo clone P209 (AP1); 3) infectados pelo clone IVV (AP2); 4) primoinfectados pelo clone P209 e posteriormente reinfectados (RE1); 5) primoinfectados pelo clone IVV e posteriormente reinfectados (RE2). O nível de parasitemia foi estimado diariamente e 155 dias após o inóculo inicial os animais foram eutanasiados. Foi observada mortalidade apenas entre os animais primoinfectados com o clone P209 (AP1 e RE1). Houve prolongamento da parasitemia entre os animais reinfectados, não sendo os níveis parasitêmicos característicos da fase aguda, sugerindo o desenvolvimento de uma resistência após a primoinfecção. A imunofenotipagem do sangue periférico mostrou aumento no percentual de monócitos entre os animais primoinfectados com o clone P209 (AP1 e RE1) e redução no percentual de linfócitos TCD4+ entre os primoinfectados com o IVV (AP2 e RE2). Animais dos grupos primoinfectados pelo clone IVV (AP2 e RE2), apresentaram infiltrado inflamatório (músculos cardíaco e esquelético), em comparação com o grupo controle (NI), o que pode estar relacionado ao recrutamento dos linfócitos TCD4+ para o foco inflamatório. Os camundongos do grupo RE2 também apresentaram maior deposição de colágeno em ambos os tecidos, processo que indica a reparação do tecido lesionado pela inflamação. Em conjunto estes dados sugerem que a sequência de inoculações, bem como a genética do parasito, possuem grande importância, influenciando diretamente o curso da infecção. ____________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The diversity and severity of symptoms observed in Chagas disease are related to different factors, including: parasite strain, host immunity, time of infection and reinfections. Considering the role of reinfection and genetic diversity of populations of Trypanosoma cruzi as factors that influence the disease development, the aim of this study was to evaluate the influence of reinfections by two clones of T. cruzi (P209 and IVV) in experimentally infected/reinfected mice through parasitological, phenotyping of peripheral blood mononuclear cells and histopathology of cardiac and skeletal muscles. The animals were grouped in five groups: 1) uninfected (NI), 2) infected with P209 (AP1), 3) infected with IVV (AP2), 4) primoinfected by P209 and subsequently reinfected (RE1), 5) primoinfected by IVV and then reinfected (RE2). The level of parasitemia was evaluated daily and after 155 days after first inoculum the animals were euthanized. Mortality occurred only among animals primoinfected with P209 (AP1 and RE1). There was a prolongation of parasitemia among reinfected animals, being the parasitemia levels smaller than the acute stage levels, suggesting the development of resistance after the first infection. Immunophenotyping of peripheral blood showed an increase in the percentage of monocytes among animals primoinfected with P209 (AP1 and RE1) and reduction in the percentage of CD4+ T cells among primoinfected with IVV (AP2 and RE2). Animal groups primoinfected by IVV (AP2 and RE2), presented inflammatory infiltrate (cardiac and skeletal muscles) compared with the control group (NI), which may be related to the recruitment of CD4+ T cells to the inflammatory site. The mice RE2 group also presented collagen deposition in both tissues, a process that indicates the repair of injured tissue by inflammation. Based on these data we suggest that the sequence of inoculations as well as the genetic of parasite have great importance directly influence the course of infection.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2015-03-24T18:46:57Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_AvaliaçãoEfeitoTratamento.pdf: 1895948 bytes, checksum: 850a1ef1d8d7ea3c49179c8548ee9282 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2015-03-25T16:00:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_AvaliaçãoEfeitoTratamento.pdf: 1895948 bytes, checksum: 850a1ef1d8d7ea3c49179c8548ee9282 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-25T16:00:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22190 bytes, checksum: 19e8a2b57ef43c09f4d7071d2153c97d (MD5) TESE_AvaliaçãoEfeitoTratamento.pdf: 1895948 bytes, checksum: 850a1ef1d8d7ea3c49179c8548ee9282 (MD5) Previous issue date: 2013 / A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, é um importante problema de saúde pública e o tratamento dessa parasitose apresenta limitações relacionadas à eficácia e toxicidade dos fármacos disponíveis. Nesse sentido, a terapia de combinação de fármacos parece ser uma abordagem ideal na busca de novos tratamentos, pois pode possibilitar aumento da eficácia, redução da toxicidade e da probabilidade de desenvolvimento de resistência. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do tratamento com benznidazol (Bz) quando combinado com os inibidores da enzima esterol C14α-demetilase (CYP51), os derivados azólicos posaconazol (Ps) e ravuconazol (Rv) (ou a pró- droga do Rv, o E1224), na infecção por T. cruzi in vitro e in vivo. Inicialmente foi avaliada a eficácia do Ps em combinação com Bz durante a infecção aguda de camundongos pela cepa Y de T. cruzi. O tratamento combinado, utilizando doses subótimas, foi mais eficaz em induzir cura parasitológica quando comparado com a utilização de cada fármaco isoladamente, indicando uma interação positiva entre Bz e Ps. Quando avaliada a eficácia do tratamento sequencial com Bz ou Ps administrados em doses ótimas durante um curto intervalo de tempo (10 dias cada), verificou-se que a ordem de administração dos fármacos interfere no resultado do tratamento, sendo a sequência Bz seguido de Ps mais eficaz. Além disso, a terapia combinada induziu uma redução significativa da carga parasitária em camundongos infectados pela cepa VL-10 de T. cruzi, altamente resistente ao Bz, quando comparada às drogas administradas em monoterapia. Considerando esses resultados promissores, foi a seguir investigada a atividade da combinação do Bz com o Rv. Inicialmente foram realizados experimentos in vitro para definir a natureza da interação entre esses fármacos. A princípio, foram determinados os valores de IC-50 do Bz e do Rv sobre formas epimastigotas e amastigotas das cepas Y e Colombiana de T. cruzi. A seguir, o efeito de combinações de Rv e Bz, preparadas de acordo com o método de proporções fixas, foi avaliado nesses modelos. A análise dos resultados foi feita por meio do cálculo das concentrações inibitórias fracionárias (FICs) e do somatório das FICs (ΣFICs) para cada combinação. A natureza da interação foi classificada em função do ΣFICs: sinergismo se ΣFIC≤0,5; indiferença (aditividade) se 0,5<ΣFIC<4 e antagonismo se ΣFIC>4. As combinações de Rv e Bz mostraram-se aditivas, com valores de ΣFIC próximo a 1 para ambas as cepas e diferentes formas evolutivas do parasito estudadas. Dessa forma, o próximo passo foi avaliar o efeito do Rv (em forma de pró-fármaco, o E1224) em combinação com o Bz na infecção por T. cruzi in vivo. Inicialmente foi realizado um experimento para definição das doses de E1224 a serem utilizadas em monoterapia. O pró-fármaco foi efetivo em curar camundongos infectados pela cepa Y de T. cruzi de forma mais eficiente do que o composto precursor, o ravuconazol. Não foi observado efeito dose-dependente; os tratamentos com doses de 10 a 50mg/kg de peso induziram 71 % a 100 % de cura. De forma diferente, o tratamento dos animais infectados pelas cepas Colombiana e VL -10 foi eficaz em induzir uma intensa redução da carga parasitária, mas não em induzir cura. Finalmente, o tratamento com combinações de Bz e E1224 administrado a camundongos infectados pela cepa Colombiana resultou em maior taxa de cura, em relação às monoterapias, quando a terapêutica foi iniciada aos 4 dias após a infecção. Entretanto, quando usado um protocolo mais estringente, no qual o tratamento foi iniciado aos 10 dias após a infecção, houve redução significativa da carga parasitária, mas ausência de cura parasitológica. Os resultados obtidos nesse estudo demonstram o benefício da terapia da combinação usando derivados azólicos e benznidazol no tratamento da infecção experimental por T. cruzi e ampliam os dados pré-clínicos relacionados ao uso de combinações de fármacos no tratamento de protozooses. ____________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: Chagas disease, caused by the protozoan pathogen Trypanosoma cruzi, remains a challenging infection due to the unavailability of safe and efficacious drugs. Combined therapy is envisioned as an ideal approach since it may improve treatment efficacy whilst decreasing toxicity and the likelihood of resistance development. The objective of this study was to evaluate the effect of treatment with Bz when combined with sterol 14α-Demethylase (CYP51) inhibitors posaconazole (Ps) and E1224 (pro-drug of ravuconazole - Rv) in experimental infection with T. cruzi. Initially, we evaluated the efficacy of Ps in combination with Bz during acute infection of mice with T. cruzi Y strain. The drugs were administered individually or in combination for 20 consecutive days. Bz/Ps combined treatments were found to be significantly more efficacious in inducing higher parasitological cure rates than those observed when the drugs were used alone, indicating a positive interaction between Bz and Ps. In addition, the combined therapy induced a significant reduction of parasite load in mice infected with VL-10, a benznidazole-resistant T. cruzi strain, compared to single administration of drugs. Subsequently, sequential therapy experiments were carried out with Bz or Ps over a short interval (10 days), followed by the second drug administered for the same period of time. It was found that the sequence of Bz followed by Ps provided cure rates comparable with those obtained with the full treatments with either drug alone, with no cures observed for the short treatments with drugs given alone. Considering these promising results, the next step was to investigated the activity of Bz and Rv combinations. First, we performed in vitro experiments to define the nature of interaction between Bz and Rv. IC-50 values for Bz and Rv were determined upon epimastigotas and amastigotes of Y and Colombian strains of T. cruzi. The drug combinations were evaluated on the same models. Drug susceptibility was assessed with a modified fixed ratio isobologram method. Fractional inhibitory concentrations (FICs), sum FICs (ΣFICs) and an overall mean ΣFIC were calculated for each combination. The nature of interaction was classified on the basis of the mean ΣFIC as follows: synergy as mean ΣFIC<0.5, indifference as mean between 0.5 and 4.0 and antagonism as mean ΣFIC>4. The interaction between Bz and Rv was indifferent with ΣFIC near to 1 for both strains. In this way, it was evaluated the effect of Rv (pro-drug, E1224) in combination with Bz upon in vivo infection. First, an experiment to define the optimal dose of E1224 in monotherapy was performed. The pro-drug of Rv, showed activity higher than demonstrated previously for the parent compound in the model of acute murine infection by strain Y. There was no dose-dependent effect, the treatments with 10 up to 50mg/kg weight for 20 consecutive days induced 71% to 100% of cure. Differently, the treatment of animals infected with Colombian or VL-10 strains was very effective in reducing the parasitemia, but led to nil cure rates. Finally, the effect of the E1224 and Bz combination against epimastigote and amastigote of Y and Colombian strains was evaluated. Additionally, the treatment of mice with E1224 in combination with Bz induced higher cure rate in mice infected with Colombian strain when the treatment started 4 days after infection or a significant reduction of parasite load in treatments started 10 days after infection, compared to single administration of drugs. This study expands the preclinical data on drug combinations and provides the basis for further studies as anti-T. cruzi chemotherapy is moving towards multidrug treatment regimens.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by giuliana silveira (giulianagphoto@gmail.com) on 2016-04-13T19:45:12Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_CorrelaçãoCargaParasitária.pdf: 2238904 bytes, checksum: 5bbd8329c06ea9f3f9f1153062eabd04 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2016-04-15T13:22:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Dissertação_CorrelaçãoCargaParasitária.pdf: 2238904 bytes, checksum: 5bbd8329c06ea9f3f9f1153062eabd04 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-15T13:22:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_CorrelaçãoCargaParasitária.pdf: 2238904 bytes, checksum: 5bbd8329c06ea9f3f9f1153062eabd04 (MD5) Previous issue date: 2015 / Na cardiomiopatia Chagásica Crônica a presença do parasito parece ser essencial para a perpetuação da inflamação, entretanto devido à intensidade das lesões com escassos parasitos, o fenômeno de autoimunidade é apontado como importante na indução da miocardite. Dessa forma, o uso de drogas tripanocidas pode alterar a patogênese ao diminuir o parasitismo. No Brasil a droga indicada, o Benznidazol (Bz), gera cura parasitológica somente no tratamento realizado na fase aguda da infecção.O objetivo deste estudo foi quantificar o parasitismo no tecido cardíaco e avaliar a presença de autoanticorpos no soro de cães inoculados com diferentes cepas do T. cruzi e correlacionar a carga parasitária e a autoimunidade com a intensidade das lesões cardíacas. Sessenta cães sem raça definida, nascidos e mantidos no canil da UFOP foram infectados com 2,0x103 tripomastigotas metacíclicos/Kg das cepas Berenice-78, AAS e VL-10 do T.cruzi, e após a confirmação da infecção, metade dos cães foi tratada com Bz e a outra metade mantida sem tratamento. Noventa dias após a infecção, 30 animais foram eutanasiados na fase aguda, sendo os outros 30 na fase crônica da infecção. O átrio direito foi seccionado para análise da intensidade do infiltrado inflamatório por H&E, e utilizado para a quantificação do T.cruzi por qPCR. Além da detecção de autoanticorpos por immunoblotting no soro. Todos os grupos experimentais apresentaram miocardite intensa tanto na fase aguda, quanto na fase crônica. A quantificação do DNA do parasito nos animais infectados e não tratados variou de 5,0x102 a 2,6x106cópias/μL na fase aguda e na fase crônica o pico de quantificação foi de 4,9x105 cópias/μL. O tratamento com Bz reduziu significativamente o parasitismo cardíaco entre os animais infectados com a cepa VL-10 e Berenice-78(p<0.05) durante a fase aguda da infecção. Entretanto,na fase crônica não foi houve redução da carga parasitária entre os cães infectados pela cepa VL-10, não sendo possível avaliar a redução entre as outras duas cepas. A análise entre inflamação cardíaca e o parasitismo revelou uma correlação positiva entre o aumento da quantidade de DNA do parasito com o aumento da inflamação. Em relação à autoimunidade, foi observada maior produção de autoanticorpos durante a fase aguda em relação à fase crônica sem correlação com a miocardite. ___________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT : Chagas disease cardiomyopathy in presence of a parasite seems to be essential paragraph perpetuating inflammation, however due to the intensity of the lesions with few parasites, the phenomenon of autoimmunity and pointed how important in the induction of myocarditis. Thus, the use of trypanocidal drugs can change one pathogenesis when decrease parasitism. In Brazil an indicated drug, benznidazole (Bz), generates parasitological cure only unrealized treatment in the acute phase of infection. The aim was to quantify parasitism in tissue heart and evaluate the presence of autoantibodies in dogs serum inoculated with different strains to T. cruzi and correlate the parasite load and autoimmunity with an intensity of cardiac injury. Sixty mongrel dogs, born and kept in the kennel UFOP were infected with metacyclics 2,0x103 / kg of Berenice-78 strains, AAS and VL-10 T. cruzi, and after confirmation of infection, half of the dogs was treated with Bz and another half maintained without treatment. Ninety days after the infection, 30 animals were euthanized in the acute phase, being another 30 Infection in chronic phase. The right atrium was cut for analysis of the intensity of the inflammatory infiltrate by H & E, and a paragraph used quantification of T. cruzi in qPCR. Besides the detection of serum autoantibodies by immunoblotting. All of the experimental groups showed intense myocarditis both in the acute phase, The Chronic phase. The DNA quantification at the parasite infected animals and not treaties ranged from 5,0x102 one 2,6x106 copies / mL in acute and chronic phase peak of the quantification was 4,9x105 copies / mL. Treatment with Bz significantly reduced cardiac parasitism between animals infected with a VL-10 strain and Bernice-78 (p <0.05) during the acute phase of the infection. However, in chronic phase was not there reduction of parasite load between dogs infected for the VL-10 strain, not being possible to assess the reduction between how other two strains. The analysis of cardiac inflammation and parasitism revealed a positive correlation between increasing the amount of DNA of the parasite with increased inflammation. In relation to autoimmunity, it was observed increased autoantibody production during the acute phase in relation to chronic phase without correlation with myocarditis.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Programa de Pós-Graduação em Química. / Made available in DSpace on 2012-10-26T09:59:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 301133.pdf: 1777110 bytes, checksum: 291d7b15e7e7b8db5c5f8cc54caa6708 (MD5) / Uma série de N-{[(5-substituído)-furan-2-il]-metilideno}-piridina-2-carboidrazidas funcionalizadas na posição 5 da estrutura com grupos hidroxi-, cloro-, 3,4,5-trimetoxibenzoato- e aminas terciárias procedidas de pirrolidina, dietilamina, morfolina, piperidina, dibenzilamina e diisopropilamina foi preparada em bons rendimentos. Todos os compostos foram caracterizados por espectroscopia de IV, RMN de 1H e de 13C, e análise elementar e tiveram seus pontos de fusão determinados. As N-acilidrazonas com grupos hidroxi- e cloro- foram sintetizadas a partir de reação de condensação entre a hidrazida derivada do ácido picolínico e 5-hidroxi- ou 5-cloro-2-furfural, ambos preparados a partir da frutose. O isomerismo E/Z das N-acilidrazonas foi determinado por RMN de 1H em CDCl3 e em DMSO-d6, cujas ligações de hidrogênio intermoleculares competitivas permitem apenas o isômero E (mais estável) ser detectado. Apenas as moléculas com grupo cloro- e pirrolidinil- apresentaram ambos os isômeros E/Z na proporção 60:40. / A series of N-{[5-(substituited)furan-2-yl]methylidene}pyridine-2-carbohydrazides with potencial leishmanicidal and trypanocidal activity functionalized at 5 position of the chain with hydroxy-, chloro-, 3,4,5-trimethoxybenzoate- and tertiary amines from pyrrolidine, dietylamine, morpholine, piperidine, dibenzylamine and di-isopropylamine were prepared in good yields. All the compounds were confirmed by IR, 1H and 13C NMR spectroscopy, CHN analysis and had their melting points determined. The hydroxy- and chloro-N-acylhydrazones were synthesized by condensation reaction of picolinic acid hydrazide with 5-hydroxy- or 5-chloromethyl-2-furaldehyde, both previously prepared from fructose. The E/Z isomerism of the N-acylhydrazones was determined by 1H NMR in CDCl3 and in DMSO-d6, and in most cases the competitive intermolecular hydrogen bonds favor the formation of the less hindered E-isome. Only compounds with chloro- and pyrrolidinyl- substituted groups showed both E/Z- isomers in a 60:40 ratio.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde / Made available in DSpace on 2012-10-18T09:39:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0Bitstream added on 2014-09-25T19:47:37Z : No. of bitstreams: 1 178779.pdf: 1176015 bytes, checksum: 37eddcc8f1f7351724d4cf98578597cd (MD5) / O benzonidazol (BZN) é um derivado nitroimidazol dotado de uma notável atividade tripanocídica e vem sendo utilizado no Brasil como o único fármaco empregado no tratamento da doença de Chagas. Possivelmente, o mecanismo de ação do BZN seja via produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) geradas através do processo de biotransformação, induzindo uma condição de estresse oxidativo no T. cruzi, o qual é deficiente em defesas antioxidantes. Com o intuito de estudar a toxicidade do BZN via geração de ERO, foram avaliadas as defesas antioxidantes, bem como o dano celular e a indução/expressão do CYP4501A1 no hospedeiro, em ratos machos tratados durante diferentes períodos de tempo (2, 4, 6, 10 e 30 dias) com 40mg/Kg de peso de BZN. Após o tratamento, foram examinados os biomarcadores do estresse oxidativo como as atividades da catalase (CAT), superóxido dismutase (SOD), glutationa redutase (GR), glutationa peroxidase (GPx), dano celular (TBARS), os níveis de tióis não proteicos (GT, GSH e GSSG), bem como a atividade e a expressão do sistema da fase I de biotransformação, CYP4501A1 e a atividade da GST, nos hepatócitos destes animais. Nossos resultados revelaram que o BZN causou uma condição de estresse oxidativo nos hepatócitos do hospedeiro, caracterizado pelo aumento dos níveis de TBARS bem como a indução de algumas e inibição de outras defesas antioxidantes, além da indução do CYP1A1, observada através da medida da atividade EROD e por Western blotting, de uma maneira tempo-dependente. A atividade da GST foi inibida durante o tratamento com BZN. O dano tecidual, observado através da medida de TBARS, mostrou um aumento exponencial até 10 dias de tratamento, mantendo-se igualmente aumentado em 30 dias. Por outro lado, as atividades da CAT e da GR aumentaram no início, sendo que a atividade da GR permaneceu diminuída até o final do tratamento, enquanto que a CAT, após 30 dias, teve sua atividade aumentada em relação aos controles. A atividade da GPx esteve diminuída em 2 e 30 dias de tratamento, enquanto a atividade da SOD permaneceu inalterada durante todo o período experimental. Os níveis de GT e GSH apresentaram um comportamento similar, estando diminuídos no início do tratamento; todavia, as concentrações hepáticas aumentaram no final do período experimental; a GSSG mostrou-se elevada durante todo o tratamento. Sumarizando, estes resultados indicam que, mesmo em doses terapêuticas, o tratamento com BZN proporciona uma condição de estresse oxidativo nos hepatócitos dos ratos tratados com BZN, caracterizando uma toxicidade relacionada com a geração de ERO no hospedeiro, via indução do CYP1A1, além de sua conhecida toxicidade no parasita.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-11-02Bitstream added on 2014-06-13T18:42:08Z : No. of bitstreams: 1 picka_mcm_dr_botfm.pdf: 676245 bytes, checksum: a6e43d3fc4dbf3cd5803d699dd97a61f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Receptores Toll-like (TLRs), em células apresentadoras de antígenos, têm importante papel no reconhecimento microbiano e no desenvolvimento da resposta imune adaptativa. Na infecção por T. cruzi, a imunidade celular, medida pela atividade de citocinas pró-inflamatórias, como IL-12 e IFN-γ, do perfil Th1, associadas ao TNF-α, reduz a carga parasitária na fase crônica. Simultaneamente, a IL-4 e a IL-10, do perfil Th2, são responsáveis por amortecer os fortes efeitos da ação pró-inflamatória. Características do parasita, como variação antigênica e diversidade genética das linhagens de T. cruzi, também têm influência na resposta imune do hospedeiro. Assim, este estudo teve como objetivos, em infecção experimental com cepas de diferentes origens de T. cruzi: fazer a caracterização molecular das cepas; determinar os momentos evolutivos da infecção (curva de parasitemia e sobrevida) e verificar a expressão gênica relativa de TLR 2, TLR 4, IL-12p40, IFN-γ,TNF-α, IL-10 e IL-4 em cada momento da infecção. Para isso, foram utilizadas duas cepas de T. cruzi isoladas de pacientes chagásicos crônicos, ZMC e JLP, e a cepa Y de T. cruzi. Camundongos machos Balb/C foram infectados com 104 tripomastigotas/animal e distribuídos em: G1, infectados com a cepa Y; G2, infectados com a cepa ZMC; e G3, infectados com a cepa JLP de T. cruzi. Os momentos para a determinação da expressão gênica das variáveis estudadas foram definidos segundo curva de parasitemia e de sobrevida previamente realizadas: M1: 24 h p.i.; M2: início da fase aguda; M3: fase aguda; M4:momento da queda importante e de manutenção da parasitemia e M5: momento final, determinado pela curva de sobrevida. Todas as cepas foram classificadas no grupo TCII, apesar de apresentarem comportamentos distintos em relação ao número de parasitas... / Toll-like receptors (TLRs), in antigen-presenting cells, play an important role in microbial recognition and adaptive immune response development. In T. cruzi infection, cellular immunity, mediated by the activity of proinflammatory cytokines such as IL-12 and IFN-γ, of the Th1 profile, associated with TNF-α, reduces parasite load in the chronic phase. Simultaneously, IL-4 and IL-10, of the Th2 profile, are responsible for controlling the strong proinflammatory effects of Th1 profile. Parasite characteristics, such as antigen variation and genetic diversity of T. cruzi strains, also influence host immune response. Hence, by using experimental infection with T. cruzi strains of different origins, this study aimed at: performing the molecular characterization of the strains; determining the evolutive moments of the infection (parasitemia and survival curve) and analyzing the relative gene expression of TLR 2, TLR 4, IL-12p40, IFN-γ,TNF-α, IL-10 and IL-4 at each moment of infection. To that end, two T. cruzi strains, ZMC and JLP, isolated from chronic chagasic patients, and the Y strain of T. cruzi were used. Male Balb/C mice were infected with 104 trypomastigotes/animal and distributed into: G1, infected with the Y strain; G2, infected with the ZMC strain; and G3, infected with the JLP of T. cruzi. The moments for determination of gene expression of the studied variables were defined according to the curve of parasitemia and survival that was previously performed: M1: 24 h p.i.; M2: beginning of the acute phase; M3: acute phase; M4: moment of important decrease and maintenance of parasitemia and M5: final moment, determined by the survival curve. All the strains were classified in the TCII group although they showed different behaviors in relation to the number of circulating parasites, day of the acute phase peak and... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-05-24Bitstream added on 2014-06-13T18:07:30Z : No. of bitstreams: 1 silva_ma_dr_arafcf.pdf: 976242 bytes, checksum: 452382843f6dbbd98e65fdd05a72d135 (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Trypanosoma cruzi é um protozoário flagelado causador da doença de Chagas que, segundo estimativas da OMS afeta 16-18 milhões de pessoas na América Latina, causando danos sociais extremamente graves. A doença apresenta formas clínicas variadas que incluem a forma indeterminada, cardiomiopatia e alterações digestivas. Variações intraespecíficas nas diferentes cepas de Trypanosoma cruzi estudadas foram demonstradas em nível morfo-biológico, bioquímico e genético. Essa heterogeneidade poderia explicar a variabilidade nas manifestações clínicas da doença de Chagas e as diferenças regionais de sua morbidade. Com o objetivo de caracterizar quatro cepas de Trypanosoma cruzi isoladas de pacientes chagásicos crônicos, residentes na região de Araraquara - SP, parâmetros biológicos e moleculares foram avaliados. Para estudar o comportamento biológico das cepas, três grupos de camundongos Swiss, não isogênicos, pesando 10-12g foram infectados com formas sangüíneas das cepas em estudo. Foram avaliados os seguintes aspectos: período pré-patente, curvas de parasitemia, morfologia do parasita no sangue periférico, taxas de mortalidade e lesões histopatológicas. Três cepas apresentaram parasitemia patente com períodos pré-patentes variáveis, baixa parasitemia e formas tripomastigotas largas durante todo o curso da infecção. Uma cepa apresentou parasitemia sub-patente. Nenhum animal morreu durante o período do estudo. Exame histopatológico mostrou ninhos de formas amastigotas no coração de animais infectados para duas cepas e inflamação em vários órgãos para todas as cepas. Para a caracterização molecular o DNA do parasita foi extraído de formas epimastigotas mantidas em meio LIT. Parte do espaçador não transcrito do gene de mini-exon foi amplificado por PCR. Todas as cepas geraram produtos com 250 pb. Os dados biológicos e moleculares permitiram a classificação de todas as cepas como T.cruzi II. / Trypanosoma cruzi is a flagellate protozoan agent of Chagas disease that, according to the OMS estimation, affect 16-18 milion of people in Latin America, making serious social damage. The illness shows varied clinicals forms that include indeterminate form, cardiomiopathy and digestive alterations. Intra-specific variations among differents Trypanosoma cruzi strains studied have been demonstrated on morpho-biological, genetic and biochemical levels. Such heterogeneity can explain the variability of Chagas disease in clinical manifestations and in the regional differences of the morbidity rate. This research has the objective to characterize four strains of Trypanosoma cruzi isolated from humans patients, residents in Araraquara - SP region, by evaluating biological and molecular parameters. In order to study the biological behavior of Trypanosoma cruzi strains, three groups of albino Swiss mice, weighting 10-12g were intraperitoneally inoculated with bloodstreams forms of the strains in study. Pre-patent period, parasitaemia patterns, tripomastigote morphology, mortality rate and tissue distribution of the protozoan were analysed. Three strains showed patent parasitemy with variable pre-patent period, low parasitemy and broad forms during the whole infection period. One strain showed sub-patent parasitemy. Mortality rates were null. Histopathological analysis showed amastigotes forms in heart for two strains and inflamatory process in several organs for all the strains. For the molecular characterization, the parasite DNA was extracted from epimastigotes forms kept in LIT medium. Part of the non-transcribed spacer of the mini-exon gene was amplified by PCR. All the strains generated products with 250 pb. The molecular and biological informations allowed to classify all the strains as T.cruzi II.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-01-23Bitstream added on 2014-06-13T19:05:15Z : No. of bitstreams: 1 serafim_eop_dr_araiq.pdf: 749200 bytes, checksum: c1178ed8d941599b66d9365618867d60 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A doença de Chagas, descoberta por Carlos Chagas há aproximadamente 100 anos, ainda constitui um grave problema de Saúde Pública. É considerada doença extremamente negligenciada, uma vez que afeta exclusivamente as populações dos países em desenvolvimento. Os pacientes dessa doença são, em sua maioria, de baixa renda e, não representando mercado, ficam excluídos do escopo e dos esforços de Pesquisa e Desenvolvimento das Indústrias Farmacêuticas. Estima-se que entre 18 e 20 milhões de indivíduos estejam infectados pelo Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença e de, aproximadamente, 120 milhões, a população em risco de contaminação na América Latina. O tratamento da doença de Chagas continua sendo um desafio, pois apenas dois fármacos nitro-heterocíclicos são comercializados no mundo: nifurtimox (Lampit8, Bayer) e benznidazol (Rochagan8, Roche), sendo este último, o único fármaco disponível no mercado brasileiro. Dentre os compostos potencialmente antichagásicos em estudo, o hidroximetilnitrofural (NFOH) mostrou maior atividade tripanomicida e menor mutagenicidade do que o nitrofural (composto matriz) em todos estágios de desenvolvimento de um fármaco. Em 2006, os estudos pré-clínicos de toxicidade mostraram que o NFOH apresentou DL50 >2000 mg em ratos, dose considerada segura pela Organização Mundial da Saúde (OMS) e promissor para a continuidade dos ensaios. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi estudar a conversão in vitro e in vivo do NFOH em NF. Assim, metodologia analítica foi desenvolvida e validada para a determinação de NF e NFOH em matriz de plasma humano e rato e foram realizados estudos de conversão in vitro (pH 1,2 e 7,4) e ensaios in vivo (farmacocinéticos) em ratos. Os resultados mostraram que o NFOH apresenta estabilidade in vitro, é metabolizado em plasma (humano e de ratos) e também,... / Chagas disease, discovered by Carlos Chagas about a century ago and also known as American trypanosomiasis, is still a serious Public Health problem. The disease is considered extremely neglected because it afflicts exclusively populations in developing countries. Most Chagas’ disease patients fall within the low income bracket and, being economically insignificant, are excluded from the research and development scope and efforts of the Pharmaceutical Industry. It is estimated that 18 and 20 million people in Latin America are infected with Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of the disease, and that approximately 120 million people are at risk of contamination in the continent. Chagas’ disease treatment is a challenge because only two nitroheterocyclic drugs are market worldwide, namely nifurtimox (Lampit8, Bayer) and benznidazol (Rochagan8, Roche), and the latter is the only drug available in the Brazilian market. Among the potentially anti-Chagas compounds under study, hydroxymethyl nitrofural (NFOH) has shown higher tripanomicide activity and lower mutagenicity than nitrofural (active compound) in all stages of development of the parasite. In 2006, preclinical toxicity studies showed that NFOH presented LD50 higher than 2000 mg in rats. This value is considered safe by the World Health Organization (WHO) and promising for continuing test. In this context, the purpose of this work was to investigate the in vivo stability of NFOH. To this end, an analytical methodology was designed and validated for the determination of NF and NFOH in human and rat blood plasma. Conversion studies were carried out in vitro (pH 1.2 and 7.4) and in vivo (pharmacokinetic studies) with rats. The results indicated that NFOH presents in vitro stability, and is converted in plasma (human and rat) and in the liver. The NFOH displayed a profile ...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-09-17T15:24:03Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-22. Added 1 bitstream(s) on 2015-09-17T15:48:29Z : No. of bitstreams: 1 000842326.pdf: 1568778 bytes, checksum: 44ee70fd5854d8be4d8c71d1f4d50503 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A subfamila Triatominae compreende 146 espécies, agrupadas em 18 gêneros e cinco tribos. O gênero Triatoma é o mais representativo da subfamília com 80 espécies descritas, as quais estão agrupadas em oito complexos e oito subcomplexos, sendo essa classificação baseada principalmente em características morfológicas. Triatoma rubravaria é considerado um importante vetor na transmissão da doença de Chagas no Estado do Rio Grande do Sul, uma vez que houve um aumento de sua captura e encontros de colônias intradomiciliares após o programa de combate ao T. infestans. Possui hábitos rupestres e é encontrado em buracos e fendas de locais pedregosos, juntamente com T. carcavalloi, T. circummaculata e T.klugi, os quais mostram semelhanças morfológicas. Marcadores moleculares pertencentes ao DNA nuclear, como os espaçadores internos transcritos (ITS) apresentam uma evolução mais rápida, permitindo estabelecer relações recentes ao passo que a grande subunidade ribossomal 28S (D2), por ser bem conservado, permite estabelecer relação entre organismos distantemente relacionados. Marcadores mitocondriais (Citocromo B - CytB e Citocromo Oxidase I - COI) apresentam taxa de mudança dez vezes mais rápida que aquelas apresentadas pelo DNA nuclear, sendo, portanto, úteis para estabelecer relações filogenéticas entre organismos que divergiram recentemente. A análise Bayesiana por meio de sequencias pertecentes ao mtDNA (CytB e COI) reafirmam o posicionamento de espécies no subcomplexo rubrovaria e indica T. carcavalloi como espécie irmã do grupo formado por T. klugi + T. rubrovaria + T. circummaculata. A análise bayesiana de seis populações de T. rubrovaria mostrou a população coletada em Canguçu isolada das demais, sugerindo que se trata de espécie críptica. / The subfamily Triatominae comprises 146 species grouped in 18 genera and five tribes. The genus Triatoma is the most representative subfamily with 80 described species, which are grouped into eight complex and eight subcomplexes and this classification being based primarily on morphological characteristics. Triatoma rubravaria is considered an important vector in the transmission of Chagas disease in the state of Rio Grande do Sul since it was detected an increase of their capture and meetings colonies household after the program to combat of T. infestans. T. rubrovaria is found in groves and crevices of rocky areas within T. carcavalloi, T. circummaculata and T.klugi, which show morphological similarities. Molecular markers belonging to the nuclear DNA, as the internal transcribed spacers (ITS) have more rapid evolution, establishing recent relationships while the large ribosomal subunit 28S (D2), being well maintained, allows establishing the relationship between distantly related organisms. Mitochondrial markers (Cytochrome B - CytB and Cytochrome Oxidase I - COI) present a rate of change ten times faster than those presented by nuclear DNA, and are therefore useful for establishing phylogenetic relationships between organisms that diverged recently. A Bayesian analysis using mtDNA sequences belonging to (CytB and COI) reaffirmed the positioning of the species and indicates subcomplex rubrovaria and indicates T. carcavalloi as sister species from the group of T. klugi + T. rubrovaria + T. circummaculata. A Bayesian analysis of six populations of T. rubrovaria showed the population collected in Canguçu isolated from the others, suggesting that they are cryptic species. / FAPESP: 09/52236-2

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Fabrícia da Silva Costa Feitosa (fabriciascf@gmail.com) on 2010-01-13T22:33:36Z No. of bitstreams: 1 2007_TeresaCristinaFdeAssumpcao.pdf: 5027753 bytes, checksum: 74252b9c40fb1fc44905260342baea89 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-01-14T21:32:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_TeresaCristinaFdeAssumpcao.pdf: 5027753 bytes, checksum: 74252b9c40fb1fc44905260342baea89 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-14T21:32:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_TeresaCristinaFdeAssumpcao.pdf: 5027753 bytes, checksum: 74252b9c40fb1fc44905260342baea89 (MD5) Previous issue date: 2007-11-13 / O Triatoma infestans, um dos vetores mais importantes da Doença de Chagas na América Latina, alimenta-se do sangue de vertebrados em todos os seus estágios – ninfas e adultos. As glândulas salivares de insetos hematófagos produzem compostos farmacologicamente potentes que impedem a hemostasia do hospedeiro, incluindo moléculas anticoagulantes, antiplaquetárias e vasodilatadoras. A saliva de T. infestans medeia a hidrólise de NDBC6HPC, um substrato para PAF-AH (platelet-activating factor-acetilhidrolase), em pH neutro. A purificação dessa atividade foi obtida por cromatografia em FLPC utilizando colunas de troca catiônica e interação hidrofóbica. A atividade enzimática ótima foi descrita como independente de Ca+2 e associada a uma proteína de 17 kDa (PAF-AH de T. infestans; PATi) em SDS-PAGE sob condições redutoras. Experimentos de espectrometria de massa sugerem que PATi é membro da família de fosfolipases A2. Anticorpos específicos localizaram a enzima nas glândulas salivares D2. Esses dados sugerem que a hidrólise de PAF pelo inseto possa interferir nas respostas anti-hemostática e/ou nociceptiva do hospedeiro. Com o objetivo de compreender melhor a complexidade bioquímica e farmacológica deste inseto, uma biblioteca de cDNA de suas glândulas salivares foi seqüenciada. Proteínas salivares também foram submetidas à eletroforese bidimensional seguida de análise por espectrometria de massa. Neste trabalho, nós apresentamos a análise de um grupo de 1534 seqüências de cDNA das glândulas salivares, das quais 645 codificam para proteínas putativamente secretadas. A maioria das proteínas salivares descritas como lipocalinas – 55% da biblioteca de cDNA – coincidiram com seqüências peptídicas dos resultados proteômicos. Esperamos que a obtenção desses novos transcritos salivares possa auxiliar no esclarecimento da função de moléculas salivares nas interações entre o vetor e o hospedeiro e na descoberta de novos agentes farmacológicos. / Triatoma infestans is one of the most important vectors of Chagas Disease in Latin America, feeding on vertebrate blood in all life stages. Hematophagous insects’ salivary glands produce potent pharmacological compounds that counteract host hemostasis, including anti-clotting, anti-platelet, and vasodilatory molecules. The saliva of T. infestans mediates hydrolysis of NDBC6HPC, a substrate for Platelet-activating factor-acetylhydrolase (PAF-AH), at neutral pH. Purification of this activity was achieved by a two-step FPLC procedure using cation exchange and hydrophobic columns. Optimal enzyme activity was found to be Ca+2-independent and associated with a single 17-kDa protein (PAF-AH of T. infestans; PATi) on SDS-PAGE under reducing conditions. Results from mass spectrometry experiments suggest that PATi is a member of the phospholipase A2 family. Specific antibodies localized the enzyme in the luminal content of the salivary glands D2. These findings suggest that hydrolysis of PAF may facilitate the insect to avoid host hemostatic and/or nociceptive responses. To obtain a further insight into the salivary biochemical and pharmacological complexity of this insect, a cDNA library was randomly sequenced. Also, salivary proteins were submitted to 2D gel electrophoresis followed by MS analysis. We present the analysis of a set of 1,534 salivary gland cDNA sequences, 645 of which coding for proteins of a putative secretory nature. Most salivary proteins described as lipocalins – 55% of the cDNA library – matched peptides sequences obtained from proteomic results. We expect this work will contribute with new salivary transcripts that could help the understanding of the role of salivary molecules in host/vector interactions and the discovery of novel pharmacologic agents.