Orientadores : Antonio Carlos Corsini, Marcos Garcia Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-16T23:11:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SteliniJunior_Arnaldo_M.pdf: 2547726 bytes, checksum: 723e203abc6eb2c0675a0e5058f15ea3 (MD5) Previous issue date: 1986 / Resumo: Resumo: A imunidade celular é imprescindível na modulação da resposta primária de murinos, diante de uma infecção por T. cruzi. 2. A imunidade humoral não restaura em camundongos exauridos de linfócitos T 'F IND. 1'B) a resistência de seus originadores 'F IND. 1', em que pese o eficiente controle da parasitemia durante a fase aguda da infecção. 3. A memória imunológica, na infecção chagásica experimental em camundongos, está relacionada aos linfócitos tímicos dependentes. 4. A imunidade celular é fator determinante da resistência de camundongos infectados por T. cruzi, durante a fase aguda, além de sua possível participação na anticorpogênese / Abstract: Not informed. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientadora: Marcia Aparecida Silva Graminha / Banca: Adelino Vieira de Godoy Netto / Banca: Luiz Ricardo Orsini Tosi / Banca: Pio Colepicolo Neto / Banca: Silvia Reni Bortolin Uliana / Resumo: As leishmanioses são doenças mundialmente distribuídas, encontradas nas áreas tropicais e subtropicais do mundo e que são caudas por protozoários parasitos do gênero Leishmania spp. A pesar dos inúmeros problemas associados aos tratamentos disponíveis (como alta toxicidade dos fármacos, limitada eficácia e casos de resistência haverem surgido), ainda estás doenças são negligenciadas pelas industrias farmacêuticas e pelos governos. Na procura por novos fármacos com amplo espectro de ação e baixa toxicidade, há evidências que sugerem que complexos de metais de transição podem atuar em diversos compartimentos ou organelas dos protozoários, além de apresentar baixa toxicidade no hospedeiro mamífero. No presente trabalho, realizou-se a avaliação leishmanicida in vitro de seis compostos ciclopaladados, [Pd(dmba)(µ-Cl)]2 (CP1), [Pd(dmba)(µ-N3)]2 (CP2), [Pd(dmba)(µ-NCO)]2 (CP3), [Pd(dmba)Cl(isn)] (CP4), [Pd(dmba)(N3)(isn)] (CP5) e [Pd(dmba)(NCO)(isn)] (CP6) e seus correspondentes ligantes livres, Hdmba: N,N-dimetilbenzilamina e isn: isonicotinamida. O composto CP2 inibiou o crescimento das formas promastigotas de Leishmania amazonensis (IC50 = 13,2 ± 0,7 µM), reduz a proliferação das formas amastigotas intracelulares (IC50 = 10,2 ± 2,2 µM) e apresentou um baixo efeito citotóxico frente a macrófagos peritoneais (CC50 = 506,0 ± 10,7 µM). Dados in vitro da atividade anti-T. cruzi e anti-T. brucei, parasitos causadores das doenças de Chagas e do sono, respectivamente, também demonstraram que os compostos ciclopaladados apresentam amplo espectro de ação constituindo-se em excelentes candidatos para o tratamento das doenças negligenciadas em estudo. O composto CP2 apresentou-se para as formas amastigotas intracelulares de L. amazonensis pelo menos 50 vezes mais seletivo e 200 vezes mais seletivo para as amastigotas de T. cruzi vs. células de mamífero... / Abstract: Leishmaniasis are diseases globally distributed in tropical and subtropical areas of the world and Leishmania spp. are the etiological agents of the diseases. Numerous problems associated with available treatments of the disease are still unsatisfactory because currently available drugs are highly toxic, little effectiveness and drug resistance cases have emerged. Furthermore, leishmaniasis are a neglected disease by pharmaceutical industries and governments. In the search for new drugs with a broad spectrum of action and low toxicity, there is evidence to suggest that transition metal complexes can act in several compartments or organelles of protozoa, as well as to present low toxicity in the mammalian host. In this work, we evaluated the leishmanicidal and trypanocidal in vitro activity of six cyclopalladated compounds: [Pd(dmba)(µ-Cl)]2 (CP1), [Pd(dmba)(µ-N3)]2 (CP2), [Pd(dmba)(µ-NCO)]2 (CP3), [Pd(dmba)Cl(isn)] (CP4), [Pd(dmba)(N3)(isn)] (CP5), [Pd(dmba)(NCO)(isn)] (CP6) and the free ligands, Hdmba: N,N- dimethylbenzylamine e isn: isonicotinamide. The cyclopalladated complexes CP2 inhibited the growth of the promastigote forms of Leishmania amazonensis (IC50 = 13,2 ± 0,7 µM), reduced the proliferation of intracellular amastigote forms (IC50 = 10,2 ± 2,2 µM) and showed a low cytotoxic effect against peritoneal macrophages (CC50 = 506,0 ± 10,7 µM). In vitro assays against T. cruzi and T. brucei, parasites that cause Chagas disease and sleeping sickness, respectively, demons... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: Jussara Marcondes Machado / Banca: Paulo Camara Marques Pereira / Banca: Simoni Badini Lucheis / Banca: Sonia Maria Usó Ruiz Silva / Banca: Fátima Regina Vilani Moreno / Resumo: Receptores Toll-like (TLRs), em células apresentadoras de antígenos, têm importante papel no reconhecimento microbiano e no desenvolvimento da resposta imune adaptativa. Na infecção por T. cruzi, a imunidade celular, medida pela atividade de citocinas pró-inflamatórias, como IL-12 e IFN-γ, do perfil Th1, associadas ao TNF-α, reduz a carga parasitária na fase crônica. Simultaneamente, a IL-4 e a IL-10, do perfil Th2, são responsáveis por amortecer os fortes efeitos da ação pró-inflamatória. Características do parasita, como variação antigênica e diversidade genética das linhagens de T. cruzi, também têm influência na resposta imune do hospedeiro. Assim, este estudo teve como objetivos, em infecção experimental com cepas de diferentes origens de T. cruzi: fazer a caracterização molecular das cepas; determinar os momentos evolutivos da infecção (curva de parasitemia e sobrevida) e verificar a expressão gênica relativa de TLR 2, TLR 4, IL-12p40, IFN-γ,TNF-α, IL-10 e IL-4 em cada momento da infecção. Para isso, foram utilizadas duas cepas de T. cruzi isoladas de pacientes chagásicos crônicos, ZMC e JLP, e a cepa Y de T. cruzi. Camundongos machos Balb/C foram infectados com 104 tripomastigotas/animal e distribuídos em: G1, infectados com a cepa Y; G2, infectados com a cepa ZMC; e G3, infectados com a cepa JLP de T. cruzi. Os momentos para a determinação da expressão gênica das variáveis estudadas foram definidos segundo curva de parasitemia e de sobrevida previamente realizadas: M1: 24 h p.i.; M2: início da fase aguda; M3: fase aguda; M4:momento da queda importante e de manutenção da parasitemia e M5: momento final, determinado pela curva de sobrevida. Todas as cepas foram classificadas no grupo TCII, apesar de apresentarem comportamentos distintos em relação ao número de parasitas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Toll-like receptors (TLRs), in antigen-presenting cells, play an important role in microbial recognition and adaptive immune response development. In T. cruzi infection, cellular immunity, mediated by the activity of proinflammatory cytokines such as IL-12 and IFN-γ, of the Th1 profile, associated with TNF-α, reduces parasite load in the chronic phase. Simultaneously, IL-4 and IL-10, of the Th2 profile, are responsible for controlling the strong proinflammatory effects of Th1 profile. Parasite characteristics, such as antigen variation and genetic diversity of T. cruzi strains, also influence host immune response. Hence, by using experimental infection with T. cruzi strains of different origins, this study aimed at: performing the molecular characterization of the strains; determining the evolutive moments of the infection (parasitemia and survival curve) and analyzing the relative gene expression of TLR 2, TLR 4, IL-12p40, IFN-γ,TNF-α, IL-10 and IL-4 at each moment of infection. To that end, two T. cruzi strains, ZMC and JLP, isolated from chronic chagasic patients, and the Y strain of T. cruzi were used. Male Balb/C mice were infected with 104 trypomastigotes/animal and distributed into: G1, infected with the Y strain; G2, infected with the ZMC strain; and G3, infected with the JLP of T. cruzi. The moments for determination of gene expression of the studied variables were defined according to the curve of parasitemia and survival that was previously performed: M1: 24 h p.i.; M2: beginning of the acute phase; M3: acute phase; M4: moment of important decrease and maintenance of parasitemia and M5: final moment, determined by the survival curve. All the strains were classified in the TCII group although they showed different behaviors in relation to the number of circulating parasites, day of the acute phase peak and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Cilmery Suemi Kurokawa / Resumo: O texto apresentado faz parte dos estudos sobre doença de Chagas (DC), suas formas clínicas e correlação com morbidades associadas à obesidade e envelhecimento e confeccionado para obtenção do título de Mestre em Doenças Tropicais. Ele é dividido em dois capítulos, no qual o primeiro texto compreende uma revisão bibliográfica sobre a doença de Chagas, vitamina D3 e catelicidina LL-37; e, no segundo capítulo, um artigo com dados descritivos da população de estudo intitulado de “FATORES DE RISCO CARDIOVASCULAR ASSOCIADOS À DOENÇA DE CHAGAS CRÔNICA” e um artigo intitulado de “VITAMINA D3, CATELICIDINA LL-37 E POLIMORFISMOS DO GENE VDR EM PACIENTES COM A FORMA INDETERMINADA E CARDÍACA DA DOENÇA DE CHAGAS”. Atualmente a DC é uma doença tropical negligenciada em todo o mundo e endêmica em 21 países latino-americanos, com mais de 25 milhões de pessoas em área de risco de transmissão. Afeta de 8 a 10 milhões de pessoas, sendo que no Brasil estima-se que existam 3 milhões de infectados, com 6 mil mortes por ano. Em sua fase crônica, tem a forma cardíaca como a manifestações mais importante da doença, tanto por sua frequência quanto por sua gravidade, com impacto social e financeiro, já que afetam os indivíduos na fase mais produtiva da vida (entre 30 e 50 anos), com altos índices de morbimortalidade. Além dos distúrbios no sistema de condução cardíaco, pode evoluir para manifestações mais graves como cardiomegalia, falência cardíaca e morte súbita. A inexistência de drogas eficazes pa... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The text presented is part of the studies on Chagas disease (CD), its clinical forms and correlation with morbidities associated with obesity and aging and made for the title of Masters in Tropical Diseases. It is divided into two chapters, in which the first text comprises a literature review on Chagas disease, vitamin D3 and catatelicidin LL-37; and in the second chapter an article with descriptive data from the study population entitled "CARDIOVASCULAR RISK FACTORS ASSOCIATED WITH CHRONIC CHAGAS DISEASE" and an article entitled "VITAMIN D3, CATELICIDINE LL-37 AND VDR GENE POLYMORPHOSMS IN PATIENTS WITH THE UNDETERMINED AND HEART CHAGAS DISEASE FORM". Currently, CD is a neglected tropical disease worldwide and endemic in 21 Latin American countries, with more than 25 million people at risk of transmission. It affects 8 to 10 million people, and in Brazil it is estimated that there are 3 million infected, with 6 thousand deaths a year. In its chronic phase, it has the cardiac form as the most important manifestations of the disease, as much by its frequency as by its gravity, with social and financial impact, since they affect the individuals in the most productive phase of the life (between 30 and 50 years), with high morbidity and mortality rates. In addition to disturbances in the cardiac conduction system, it can progress to more serious manifestations such as cardiomegaly, heart failure and sudden death. The lack of effective drugs to treat the disease in its chronic ph... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Laboratório Multidisciplinar de Pesquisa em Doença de Chagas, 2008. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2009-09-28T18:12:51Z No. of bitstreams: 1 2008_PerlaFdeAraujo.pdf: 1286808 bytes, checksum: 53fc99e52ecaefa2dd3e2e8055632df8 (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2011-01-04T19:09:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_PerlaFdeAraujo.pdf: 1286808 bytes, checksum: 53fc99e52ecaefa2dd3e2e8055632df8 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-01-04T19:09:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_PerlaFdeAraujo.pdf: 1286808 bytes, checksum: 53fc99e52ecaefa2dd3e2e8055632df8 (MD5) Previous issue date: 2008-07 / O presente trabalho é o primeiro relato de integração de seqüências provenientes de um protozoário para o genoma de células germinativas humanas. Neste estudo, nós documentamos a integração de minicírculos de kDNA de Trypanosoma cruzi no genoma de células germinativas e a transferência vertical dessas mutações para os descendentes. Foram analisadas amostras de esperma de 34 voluntários. Desses, 22 doadores foram agrupados em cinco famílias, cujos progenitores (F0) eram portadores da doença de Chagas. Doze amostras de esperma foram obtidas de indivíduos isolados. Foi possível observar a integração de kDNA de T. cruzi no genoma de todos os 17 chagásicos estudados. A transferência vertical apenas das seqüências de kDNA para as progênies F1 e F2 pôde ser observada em 6 descendentes de chagásicos. As análises das regiões do genoma humano que flanqueavam as seqüências de kDNA mostraram a integração de minicírculos de kDNA preferencialmente em elementos retrotransponíveis do tipo LINE-1, em 72,5% das seqüências quimeras. O encontro do mesmo locus em indivíduos chagásicos e seus descendentes é mais uma evidência mostrando a herança das mutações. Verificamos, também, que as seqüências de minicírculos de kDNA ligaram-se a outros elementos transponíveis (4%), tais como Alu, ERV e MER, e, também, em alguns genes (9%). Nos demais clones (14%), não foi possível determinar os loci de integração do kDNA no genoma devido á ausência de informação em bancos de dados. Os achados deste estudo sugerem que as mutações decorrentes da inserção do kDNA poderiam causar alterações genotípicas e fenotípicas implicadas na auto-imunidade descrita na doença de Chagas. De fato, a incorporação de DNA exógeno na célula humana nos mostra a complexidade das interações do parasito com o hospedeiro humano. A descrição de mutação, recombinação e deriva genética, alterando genótipo e fenótipo do hospedeiro, poderão sugerir a base da auto-imunidade que se associa à patogênese da doença de Chagas. / The present work shows by the first time the integration of Trypanosoma cruzi kDNA minicircle sequences into the human genome. This eukaryote-to-eukaryote lateral transfer of DNA is constantly seen in each patient harbouring the infections. The kDNA mutations are inherited by F1 and F2 progeny and undergo genetic drifts, recombination hitchhiking from primary to secondary chromosomes. We analysed 22 samples of sperm of volunteers from five families whose founders have the active infections. Independently, we further analysed haploid cells DNA from 12 individuals. The vertical transfer of kDNA minicircle sequences was detected in 17 family members. Among these there were 11 with active T. cruzi infections, showing nDNA and kDNA signatures. The remaining six F1 and F2 progenie had the kDNA signatures only. In each of these 17 individuals we showed sequences of minicircles of kDNA from T. cruzi integrated into germ line cells. The main hotspot for the kDNA integration was retrotransposons LINE-1 (72.5%). In 9% of cases the integreations entered coding regions of genes. Besides, kDNA minicircles sequences integrated nonautonomous transposable elements (4%) Alu, ERV and MER, Finally, in (14%), the kDNA mutations entered undetermined sites into the human genome. The presence of the kDNA mutations are in agreement with the findings of lateral transfer of kDNA in somatic cells of same individuals (Hecht, M.M, Thesis, University of Brasilia, 2008). Furthermore, the demonstration of kDNA mutations in haploid cells is brought here in the absence of active T. cruzi infections. Actually, the vertical inheritance could be appreciated in two marriages to which the marriages generated offsprings with kDNA mutations showing sequence alignments similar to the father. In fact, an exogenous DNA incorporation by the human cell let us to see more complex process of parasite-host`s interaction. The evolution of living creatures suggests that lateral transfer of exogenous DNA, mutations and hitchhiking, genetic drifts and social heterosis could be considered ongoin forces leading to genetic diversity and evolution.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T05:49:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 282748.pdf: 2126494 bytes, checksum: bab8f4f79e0eef0fde549df05362db87 (MD5) / O presente estudo teve como objetivo avaliar o potencial tripanocida in vitro e in vivo do ácido gálico e derivados (galatos de octila, decila, undecila, dodecila e tetradecila). O efeito tripanocida in vitro foi avaliado contra formas tripomastigotas sanguíneas e amastigotas intracelulares de T. cruzi. Os galatos de octila, dodecila e tetradecila reduziram em 50 a 60% a viabilidade de tripomastigotas sanguíneos (cepaY) na concentração de 50 µM. Entretanto, nenhum deles foi mais ativo do que o quimioprofilático violeta de genciana. Contrariamente, todos os ésteres de galato foram mais ativos in vitro do que o benzonidazol contra formas amastigotas intracelulares das cepas Y e Colombiana, com percentuais de inibição (PI) variando entre 46 a 95% na concentração de 3 µM. Entretanto, os galatos foram mais citotóxicos do que o benzonidazol, sendo que somente o galato de dodecila apresentou índice de seletividade (IS) acima de 50. O uso combinado desse composto com o benzonidazol mostrou um efeito aditivo in vitro contra amastigotas intracelulares. A análise ultraestrutural por MET mostrou que o galato de dodecila induziu alterações morfológicas em epimastigotas e em amastigotas intracelulares, com expressiva perda de conteúdo citoplasmático e número de reservossomos, intumescimento da mitocôndria, mas sem alteração do cinetoplasto. Ensaios de inibição in vitro com a tripanotiona redutase recombinante de T. cruzi (TcTR) mostraram que o ácido gálico inibiu esta enzima (CI50 = 45,6 µM) sem interferir na atividade da glutationa redutase (GR). Contrastando com a potente atividade tripanocida in vitro, nenhum dos compostos suprimiu a parasitemia e preveniu a mortalidade de camundongos em fase aguda e crônica da tripanosomíase. Entretanto, a análise histopatológica mostrou que a maioria dos animais tratados com o ácido gálico ou com o galato de dodecila apresentou tecido cardíaco íntegro sem focos inflamatórios. A análise por RT-qPCR do perfil de citocinas transcritas no coração de camundongos infectados com a cepa Colombiana mostrou menor taxa de IFN-. no grupo tratado com o galato de dodecila, sugerindo uma participação na imunomodulação do processo inflamatório. Conclui-se que os galatos testados apresentaram um potente efeito tripanocida in vitro e, embora não tenham modificado os cursos da infecção experimental aguda e crônica, podem ter uma participação no controle da inflamação tecidual via imunomodulação negativa do IFN. / The aim of this study was to evaluate the potential trypanocidal activity in vitro and in vivo of gallic acid and five esters (octyl, decyl, undecyl, dodecyl and tetradecyl gallate). The in vitro trypanocidal activity of the compounds was evaluated against blood trypomastigotes and intracellular amastigotes of T. cruzi. Incubation of mice infected blood (Y strain) for 48 hours with octyl, dodecyl and tetradecyl gallates at 50 µM revealed a trypanocidal effect higher than 50%, which was, however, lower than the trypanocidal effects exhibited by gentian violet. In contrast, all gallate esters showed a higher in vitro activity than benzonidazole against intracellular amastigotes of both the Y and Colombiana strains, with percentages of inhibition (PI) ranging from 46 to 95% at 3 µM. However, most of the gallic acid derivatives showed significant cytotoxic effects, with the exception of dodecyl gallate which presented a selectivity index (SI) higher than 50. Moreover, the use of dodecyl gallate + benzonidazole showed also an additional in vitro effect against intracellular amastigotes. The ultrastructural analysis by transmission electron microscopy (TEM) showed that the treatment with dodecyl gallate induces drastic morphological changes in both the epimastigotes and intracellular amastigotes. This effect is characterized by a significant loss of cytoplasmic content, reduction of the reservosome numbers, mitochondria swelling and no kinetoplastic change. In vitro assays revealed that gallic acid specifically inhibited the T. cruzi recombinant trypanothione reductase (TcTR) (IC50 = 45.6 µM). In contrast to the powerful trypanocidal activity in vitro, none of the compounds were able to suppress parasitemia or prevent the mice mortality at the acute and chronic phases of trypanosomiasis. However, histopathological analysis showed that the most of the mice treated with gallic acid and dodecyl gallate showed no inflammatory foci in the heart. The RT-qPCR analysis for cytokine profile in the heart tissue of infected mice with the Colombiana strain revealed a lower rate of IFN-. in the group treated with dodecyl gallate, suggesting a possible role of this compound in the immune modulation of the inflammation. We conclude that the gallates tested showed a potent trypanocidal effect in vitro and, although they have not changed the course of acute and chronic experimental infection may be involved in the control of tissue inflammation through negative immune modulation of IFN-

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T09:27:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 276155.pdf: 1327907 bytes, checksum: c871d158d79651580afbc11a1f0e9dbf (MD5) / Estudos moleculares e de biologia demonstram que o táxon Trypanosoma cruzi é composto por diferentes linhagens. Em 2005, foi descrito um surto de doença de Chagas Agudo (DCA) no município de Navegantes em Santa Catarina associado ao consumo de caldo de cana contaminado com o T. cruzi. Análises moleculares identificaram as linhagens TcI em gambás (cepas SC90 e SC91), TcI/TcII em triatomíneos (cepas SC92 e SC93) e TcII em pacientes (cepas SC94-SC102). Neste sentido, o presente trabalho objetivou estudar possíveis mecanismos envolvidos na seleção de populações do grupo TcII em infecções humanas ocasionadas por cepas mistas TcI/TcII de T. cruzi. Para tanto, as cepas SC90, SC92, SC93, SC94, SC95, SC96 e Y foram utilizadas nos ensaios de lise pelo sistema complemento, interação com macrófagos murino e humano na presença e ausência de soro imune e IFN-?, ensaios de Western blot e cinética da proporção das linhagens TcI e TcII em cepas mistas após diferentes passagens em macrófagos humanos por meio de PCR semiquantitativo e PCR quantitativo. Os ensaios de lise pelo sistema complemento não mostraram diferenças de sensibilidade entre as cepas estudadas. Já nos estudos de interação T. cruzi-macrófagos murinos verificou-se um aumento na taxa de infecção e no número médio de amastigotas quando formas tripomastigotas das diferentes cepas foram previamente incubadas com soro chagásico. Além disso, as cepas do grupo TcII apresentaram uma maior taxa de infecção em macrófagos e após 72 horas de interação, apresentaram valores médios do número de amastigotas duas vezes superiores ao observado para cepas TcI. Contudo, não houve diferença significativa no número médio de amastigotas no tempo inicial de infecção entre TcI e TcII. Ensaios de Western blot confirmaram uma maior expressão da gp82 em formas tripomastigotas das cepas TcII. Macrófagos ativados com IFN-? infectados com as cepas Y, SC90 e SC96 foram capazes de controlar a proliferação dos parasitos independente da cepa utilizada, de forma dependente da NOS2. A análise da proporção de TcI e TcII nas cepas mistas SC92, SC93 e na mistura artificial, SC90+SC96, antes e após a conclusão do ciclo biológico em macrófagos murinos revelou uma alteração no perfil molecular dessas cepas, sendo observado um completo desaparecimento do fragmento de DNA de 200 pb (TcI) na cepa mista artificial (SC90+SC96), enquanto nas cepas SC92 e SC93 verificou-se uma diminuição de cerca de 3 vezes na intensidade do fragmento de 200 pb. Quando os ensaios foram realizados com a cepa SC92 (três passagens seriadas em macrófagos humanos), constatou-se um progressivo aumento na proporção de TcII, uma vez que a proporção inicial era de 77,4% para TcI e 22,6% para TcII e após a terceira passagem foi verificado 93,2% para TcII. Em conjunto, estes resultados sugerem que a manutenção de populações de T. cruzi II em infecções humanas ocasionadas por cepas mistas pode estar relacionada com características intrínsecas do parasito, como a capacidade infectiva e o tempo de duplicação intracelular. Embora seja ainda possível que mecanismos efetores dos macrófagos estejam envolvidos com essa seleção.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde. Programa de Pós-Graduação em Saúde Pública / Made available in DSpace on 2012-10-23T15:22:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 245494.pdf: 2433081 bytes, checksum: d1735088076aa6214f26c28c45113b8d (MD5) / No início de 2005 um fato novo e inesperado ocorreu no Estado de Santa Catarina. Surgiram as primeiras notícias sobre a possibilidade de contaminação da doença de Chagas por uma via pouco usual. Pessoas teriam sido infectadas e algumas mortes ocorridas após a ingesta do caldo-de-cana contaminado pelo protozoário responsável pela doença aguda. Os números de possíveis casos da doença e de vítimas foram aumentando gradualmente, iniciando uma busca incessante do foco inicial da contaminação e, concomitantemente, medidas preventivas para evitar um dano maior foram postas em ação. Em poucos dias o pânico e o medo tomaram conta não só dos catarinenses, mas também dos turistas que por aqui transitaram no fim do verão daquele ano. Turistas e moradores da região buscavam informações e tentavam se assegurar de não terem se contaminado. Através deste estudo objetivamos descrever o episódio tendo como referencial as notícias dos jornais locais impressos na época. Buscamos mostrar como se deu o surgimento do surto na imprensa e como foi esta repercussão em que o medo, real ou não, tomou conta da população e das autoridades na saúde pública. At the beginning of 2005 a new and unexpected fact occurred in the State of Santa Catarina. The first news had emerged informing on the possibility of contamination by Chagas' illness from a very unusual way. Some people would have been contaminated and some resulted in deaths after having ingested broth-of-sugar cane contaminated with the protozoa responsible for the acute form of the disease. The numbers of possible cases of the illness and victims had been gradually increased resulting in incessant search for the source of such contamination and simultaneously, preventive measures were put in action with the intension to reduce harm. In few days the panic and the fear had not only taken over the catarinenses, but also of the tourists who had been transited here at the end of the summer of same year. Tourists and local dwellers sought for information and tried to reassure that they were not contaminated. Through this study we aim to describe the episode at that time having as referential the printed matters' news of local periodicals. We search for evidences to show how the sprouting in the press occurred and how was repercussion in which the fear, real or not, spread all over the population and the public health authorities.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2008. / Submitted by Ruthléa Nascimento (ruthlea@bce.unb.br) on 2008-10-30T14:27:19Z No. of bitstreams: 1 2008_AnaMariaCosta.pdf: 3885912 bytes, checksum: e120b16f41fa85a75f30e9c489b804ab (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2009-03-02T14:25:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_AnaMariaCosta.pdf: 3885912 bytes, checksum: e120b16f41fa85a75f30e9c489b804ab (MD5) / Made available in DSpace on 2009-03-02T14:25:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_AnaMariaCosta.pdf: 3885912 bytes, checksum: e120b16f41fa85a75f30e9c489b804ab (MD5) / A integração de minicírculos de kDNA do Trypanossoma cruzi no genoma hospedeiro foi correlacionada com alterações na expressão gênica. Com a finalidade de caracterizar as regiões híbridas e ampliar o conhecimento biológico realizou-se os isolamentos e clonagens dos minicírculos integrados no genoma de macrófagos humanos em cultura e de tecidos de coelhos chagásicos. Observou-se instabilidade genética dos segmentos que continham as integrações. As clonagens realizadas em diferentes combinações de vetores e hospedeiras não evitaram os rearranjos. A análise de restrição e o seqüenciamento dos segmentos recuperados mostraram alterações no tamanho e na estrutura do vetor. A técnica de captura desenvolvida no presente estudo permitiu confirmar a instabilidade genética dos minicírculos preferencialmente integrados. A análise de restrição e o seqüenciamento desses fragmentos mostraram que os minicírculos recuperados apresentaram encurtamentos nas regiões variáveis em relação ao padrão descrito na literatura. Verificou-se que o encurtamento ocorreu durante ou após a integração no genoma. As regiões variáveis encurtadas de 50 pb foram recuperadas das linhagens subclonais de macrófago A11, C4, C6 e coração de coelhos chagásicos. Quando comparadas entre si essas regiões apresentaram similaridade na ordem de 90%. Em relação à região variável 80 pb, recuperada do macrófago C6, a similaridade foi em torno de 75%. O resultado sugeriu a existência de classes de minicírculos que se integram preferencialmente no genoma hospedeiro. Foram obtidos clones híbridos estáveis contendo o final da região conservada nas extremidades seguidas pela região variável truncada, fragmento de elemento LINE-1, com ou sem a presença de microssatélite. A origem híbrida foi confirmada por fragmentação do clone que foi utilizado como sonda na hibridação de macrófagos humanos normais e DNA de T. cruzi. O segmento B7, obtido por captura, apresentou o minicírculo de kDNA com 4 regiões variáveis truncadas, intercaladas por regiões conservadas normais seguidas do microssatélite CA e da região humana com similaridade ao clone murino AC131797.3. A análise “in silico” do segmento B7 mostrou a presença de seqüências regulatórias da expressão gênica. Foram identificadas 9 possíveis ORFs, sendo duas compreendo a região híbrida (ORF1 e 2). Verificou-se nas integrações recuperadas de coração de coelhos chagásicos segmentos similares à região humana encontrada no clone B7, indicando a recorrência dos sítios recombinativos. A análise “in silico” do clone B7, G10 e das regiões hospedeiras obtidas dos bancos de dados mostrou a presença de estruturas do tipo não B nos locais próximos ao ponto de recombinação. A presença da estrutura não B no segmento B7 foi confirmada pela alteração na mobilidade eletroforética. Em todos os pontos de entrada do minicírculo no genoma hospedeiro verificou-se a redução da tensão local e aumento da tensão global na região, sugerindo a possibilidade de ocorrência de novos eventos recombinativos envolvendo o segmento. O conjunto das informações indica que a integração é mediada por recombinação homologa mediada por similaridades estruturais presentes no DNA hospedeiro e minicírculo de kDNA. / The integration of Trypanossoma cruzi kDNA minicircle sequences into the host cell’ genomemay result in alterations of genic expression. To achieve the characterization of the hybrid regions and enhancement of the biological knowledge the isolation and cloning of the integrated minicircles was made in vitro in the human macrophages and in the chagasic rabbit tissues. Genetic instability of the segments with the integrations was observed. The cloning made it in different combinations of vectors and hosts did not avoid deletion and rearrange. The capture technique developed in the present study showed kDNA integration events with the genetic instability. The sequencing of the kDNA integrated events and restriction analysis revealed that the minicircle sequences were frequently rearranged; short minicircle variable regions fragments were constantly found in relationship to the standard size describe in literature. Possibily, deletions of integrated sequences took place during or after the kDNA integration into the macrophage genome. Short variable regions (50 pb) was recovered from macrophages cell lines A11, C4, C6 and from chagasic rabbits. Those integrated kDNA minicircles shared 90% sequences similarities. The variable region stretches also revealed 75% similarities among them. These results suggest that classes of minicircles integrate preferentially in the macrophage genome. Somewhat stable hybrid clones were found with the final conserved region followed by a fragment of the variable region linked to the LINE-1 sequence, with or without the presence of microsatellites. The hybrid origin of these sequences was demonstrated by hybridization experiments with segment specific chimera sequence fragments. A capture procedure revealed a B7 fragment showing the kDNA minicircle with 4 truncated variable regions interspersed by CA microsatellite with similarity to the AC131797.3 murine clone. The “in silico” analysis of the B7 fragment showed the presence of genic expression regulatory sequences in the minicircle region. The identification of nine putative ORFs within hybrid regions (ORFs 1 and 2) was recorded. The kDNA integration events detected into the heart DNA from chagasic rabbits showed similar host regions to that of clone B7 clone, indicating that homologous recombination was the mechanism whereby the kDNA integrated into the vertebrate genome. The presence of B structures in the DNA sequences at the integration sites has suggested that bends formed in those sites explains the alterations in the eletrophoretic mobility presented in those clones. At the integration sites in the host genome bents formed by reduced tension forces forming torsion angles, thus indicating the possibility of new integration events, deletions and recombinations at the spot. These findings showing sequences similarities present in the host DNA and kDNA minicircle sequences have suggested that the kDNA integration might be mediated by homologous recombination.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2013-07-16T01:39:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A doença de Chagas, causada pelo Trypanosoma cruzi, atinge cerca de 18 milhões de indivíduos, principalmente em países da América Latina. O benznidazol (Rochagan), único fármaco comercialmente disponível no Brasil para o tratamento da infecção, apresenta baixa atividade, principalmente na fase crônica da doença. Neste estudo a atividade tripanocida in vitro de 28 compostos fenólicos sintéticos foi avaliadada contra diferentes formas evolutivas da cepa Y do T. cruzi. Os ensaios foram realizados em triplicata, em microplacas de 96 orifícios, adicionando-se 180 µl da suspensão de epimastigotas de cultura (5x106 parasitas/mL), ou de tripomastigotas sanguíneos (1x106 tripomastigotas/ml), com 20 µl dos compostos em diferentes concentrações. Como controles foram utilizados o benznidazol ou o cristal violeta. As formas epimastigotas foram mantidas por 72h a 27°C e a atividade determinada pela contagem em câmara de Neubauer. Tripomastigotas foram mantidos por 48h a 4°C e a atividade avaliada pela técnica de Brener. O sangue de camundongo, adicionado aos compostos ativos (500 e 250 µM) por 72h a 4°C, foi inoculado em camundongos Swiss para comprovar sua esterilidade. A parasitemia dos animais foi acompanhada semanalmente por 30 dias e o sangue dos camundongos negativos submetidos à hemocultura e sorologia para pesquisa de anticorpos anti-T. cruzi. Foi avaliada também a atividade hemolítica dos compostos pelo método da cianometahemoglobina. A citotoxicidade celular foi ensaiada pelo método do MTT e pela avaliação microscópica da integridade do tapete celular. A atividade contra formas amastigotas intracelulares foi ensaiada em células Vero. Após 24h de infecção as monocamadas foram tratadas com os compostos ativos e com benznidazol em diferentes concentrações por 72h. O porcentual de células infectadas e o número de parasitas por célula foram determinados em 300 células contadas randomicamente, após coloração pelo Giemsa lento. Dos 28 compostos testados, seis galatos (galatos de heptia, de octila, de decila, de undecila, de dodecila e de tetradecila) foram ativos contra epimastigotas (CI50 de 0,47 a 33,9µM). Quatro compostos (galatos de decila, de undecila, de dodecila e de tetradecila) foram também ativos contra tripomastigotas sanguíneos e amastigotas intracelulares CI50 de 23,39 a 74,40 µM e CI50 de 1,80 a 16,30 µM, respectivamente. Efeitos de citotoxicidade celular foram observados acima de 50 µM dos compostos. O composto galato de undecila foi o mais ativo contra todas as formas do parasita e sua capacidade de esterilização do sangue infectado foi semelhante ao do cristal violeta. Estes resultados demonstram que os galatos podem ser compostos promissores para a quimioterapia ou quimioprofilaxia da doença de Chagas.