Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Coorientador: Luis Carlos Spolidorio / Banca: José Francisco Hofling / Banca: Flavia Sammartino Mariano Rodrigues / Banca: Cristiane Duque / Banca: Janaina de Cassia Orlandi Sardi / Resumo: A esporotricose é uma infecção causada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckiii, o qual contamina o hospedeiro através de locais com pequenos traumas, causando lesões cutâneas, subcutâneas que podem se disseminar para outros tecidos. Os mecanismos imunológicos envolvidos na prevenção e controle da esporotricose sugerem que a imunidade mediada por células apresenta um importante papel na proteção do hospedeiro contra S. schenckii. Os receptores Toll-like (TLR), presentes nas células do sistema imune inato, destacam-se pelo seu papel central na ligação de patógenos e iniciação da resposta imune. A ativação desses receptores por padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs) induz a fagocitose, a liberação de citocinas e mediadores químicos que atuam no sistema imune eliminando ou favorecendo a infecção. O TLR-2 está envolvido na resposta do hospedeiro contra uma variedade de fungos. Portanto, o objetivo do presente estudo foi avaliar a participação do TLR-2 na resposta imunológica induzida pelo S. schenckii. Foram utilizados camundongos C57BL/6 (WT) e C57BL/6 TLR-2 Knockout (TLR-2-/-) para que se conseguisse verificar, durante um período de 10 semanas de infecção esporotricótica, a influência do TLR-2 na produção das citocinas IL-1β, IL-12 e TNF-α por macrófagos; a estimulação dos macrófagos através da liberação de NO, a participação do TLR-2 na geração dos perfis celulares Th1, Th2 e Th17 e, por fim, a influência desse receptor na produção de IFN-γ, IL-6, IL-10, IL-4, IL-17 e TGF-β. Entre os antígenos do fungo S. schenckii utilizados como estímulo nas culturas celulares, verificou-se que o antígeno lipídico é o mais eficaz na capacidade de estimular a produção dos mediadores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sporotrichosis is an infection caused by the dimorphic fungus Sporothrix schenckii, which infects the host through local minor trauma, causing skin and subcutaneous lesions which can spread to other tissues. The immunological mechanisms involved in sporotrichosis prevention and control suggest that cell-mediated immunity plays an important role in protecting the host against S. schenckii. The Toll-like receptors (TLR), found on innate immune system cells, for their central role in pathogen-binding and immune response initiation. The activation of these receptors by pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) induces phagocytosis and the release of chemical mediators and cytokines which direct the immune system in favoring or eliminating the infection. TLR-2 is involved in host responses against a variety of fungi. Therefore, the aim of this study was to evaluate the involvement of TLR-2 in the immune response induced by S. schenckii. C57BL/6 mice (WT) and C57BL/6 TLR-2 knockout (TLR-2-/-) were used in order to evaluate, over a period of 10 weeks of sporotrichotic infection, the influence of TLR-2 over macrophages production of the cytokines IL-1β , IL-12 and TNF-α, their stimulation level by NO release, the involvement of TLR-2 in the generation of Th1, Th2 and Th17 cell profiles and, finally, the influence of this receptor in the production of IFN -γ, IL-6, IL-10, IL-4, IL-17 and TGF-β. Among all the S. schenckii antigens used as stimulus in cell cultures, it was found that the lipid antigen is the most effective in regard... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Luciana Simon Pereira Crott / Banca: Eva Burger / Banca: Valderez Gambale / Banca: Cleni Mara Marzocchi Machado / Resumo: A esporotricose é uma infecção micótica provocada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckii, causando em geral lesões subcutâneas nodulares e/ou ulcerativas que se proliferam via linfática, porém em raros casos pode provocar infecção sistêmica. O óxido nítrico (NO) é sintetizado através da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS) em macrófagos ativados. Por outro lado, as citocinas exercem papel importante em todo o processo de ativação das células T e pode influenciar diretamente na resposta imunológica, juntamente com os compostos intermediários do nitrogênio. Para melhor avaliar a inter-relação entre as respostas inata, adaptativa, celular e humoral esse trabalho analisou vários mediadores como a iNOS (arginina marcada por trício), NO (teste de Griess), citocinas ( teste imunoenzimático), transformação linfocitária (incorporação da timidina triciada) e detecção de IgG (teste imunoenzimático). Observou-se que o NO produzido a partir da iNOS causou uma imunossupressão entre a quarta e sexta semana de infecção, levando a uma depressão na produção de algumas citocinas como a IL-1b e o TNF-a, além de inibir a proliferação das células T nas mesmas semanas. A IL-12 como o IFN-g são importantes mediadores da resposta imune celular tipo Th1 e em conjunto com a IL-2 parecem ser produzidos como uma tentativa de proteção do hospedeiro contra a doença. Por outro lado, a IL-10 parece estar relacionada com a suscetibilidade à infecção. Para reverter esse quadro da doença fúngica a IL-6 e a IL-4 podem vir a induzir uma resposta humoral verificada pela produção de anticorpos nas semanas finais da infecção e por fim, levar a remissão da infecção experimental por S. schenckii. / Abstract: Sporotrichosis is a micotic infection desease caused by dimorphic fungus Sporothrix schenckii, causing in general subcutaneous nodulares and/or ulcerative lesions that proliferate through lymphatic vessels, however in rare cases sistêmic can provoke infection. The nitric oxide (NO) is synthezed through of the enzyme nitric oxide sintase induzível (iNOS) in activated macrophages. On the other hand, the cytokines exert important role in all the process of activation of cells T and can to influence directly in the immunological response, together with intermediate composites of nitrogen. The evaluation between the innate, adaptativa, cellular and humoral response this work were analyzed several mediators as iNOS (arginine H3), NO (Griess reagent), cytokines (immunoenzimatic assay), lymphatic transformation (incorporation of timidine- H3) and detection of IgG (immunoenzimatic assay). We observed that NO the produced from iNOS caused an immunossupression between the fourth and sixth week of infection leading to a depression in the production of some cytokines as the IL-1b and TNF-a, besides inhibiting the proliferation of cells T in the same weeks. The IL-12 as the IFN-g is important mediators of the cellular Th1 response and together with IL-2 seem to being produced as a protection host attempt against the disease. On the other hand, the IL-10 seems to be related with the susceptibility to the infection. To revert this immunological response IL-6 and IL-4 can come to induce an humoral response verified by the antibodies production in the infection final weeks and finally, lead the experimental infection remission by S. schenckii. / Doutor

Orientador: Luciano Tavares Angelo Cintra / Banca: André Luiz Fraga Briso / Banca: Eloi Dezan Junior / Banca: Carla Renata Sipert / Banca: Rodrigo Ricci Vivan / Resumo: Objetivo: Avaliar a influência da clareação dentária sobre o tecido pulpar de ratos diabéticos por meio da observação dos aspectos histológicos e imunológicos. Material e Método: Vinte e oito ratos Wistar foram divididos em quatro grupos: (N) normoglicêmicos; (NCla) normoglicêmicos-clareados; (D) diabéticos; (DCla) diabéticos-clareados. Quatorze animais receberam uma dose de 150mg/kg de aloxano para indução da diabetes, via IM. Após 3 dias, todos os animais foram anestesiados e realizado o procedimento clareador com gel de peróxido de hidrogênio (H2O2) a 35% (Whiteness HP Maxx) aplicado uma vez nos molares superiores direitos por 30 minutos. Os molares superiores esquerdos foram usados como controle. Após 2 e 30 dias os animais foram eutanaziados e as maxilas processadas para análise histológica e histoquímica. Foram realizadas análises qualitativas para a reação inflamatória e imunomarcação, e quantitativas para a redução da área da camara pulpar e fibras colágenas. Os resultados foram submetidos à análise estatística com nível de significância de 5% (p<0.05). Resultados: Aos 2 dias observou-se infiltrado inflamatório leve no grupo NCla e severo no grupo DCla (p<0.05). Quanto ao grau de maturação das fibras colágenas, aos 2 dias observou-se maior quantidade de fibras imaturas no grupo N, com diferença estatística para os demais grupos (p<0.05), e, menor quantidade de fibras maduras no grupo N com diferença significante para os demais grupos (p<0.05). Aos 30 dias não foi observado concentração de células inflamatórias e não houve diferença estatística entre os grupos para ambas as fibras colágenas (p>0.05). Entretanto, houve diferença significante quando comparados os grupos NCla e DCla em relação à redução da área da câmara pulpar devido a deposição de dentina reacionária... / Abstract: Objective: To evaluate the influence of dental bleaching on the pulp tissue of diabetic rats over the histological aspects and proinflammatory cytokines regulation. Methods: Twenty-eight Wistar rats were divided into four groups: (N) normoglycemic; (NBle) normoglycemic-bleached, (D) diabetic, (DBle) diabeticbleached. Fourteen animals reveiced a 150mg/kg dose of alloxan for diabetes induction, via IM. After 3 days, all animals were anesthetized and the dental bleaching performed using 35% hydrogen peroxide (H2O2) gel (Whiteness HP Maxx) in the right maxillary molars for 30 minutes. Left upper molars were used as control. Two and 30 days after the animals were euthanized, and the hemi-maxillae processed for histological and histochemistry analysis. Qualitative analyses were performed for inflammatory reaction and immunolabelling, and quantitative for pulp chamber area reduction and collagen fibers. The results were submitted to statistical analysis (p<0.05). Results: At two days a mild inflammation was observed in NBle group and severe for DCla (p<0.05). For the maturation of collagen fibers, at two days was observed an increase amount of immature fibers in the N group, with statistical difference to the other groups (p<0.05), and a reduced amount of mature fibers in the N group with significant diference to the other groups (p<0.05). At 30 days no inflammatory cells were observed and there was no statistical difference between the groups for both fibers type (p>0.05). However, there was a significant difference when NBle and DBle groups were compared with regards to reduction of the pulp chamber area due the presence of reactionary dentin deposition (p<0.05). With regards to immunoistochemistry, was observed for IL-6 at 2 days an increased immunolabelling in the bleached groups (NBle and DBle) (p<0.05)... / Doutor

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Alexandrina Sartori / Banca: Ana Cristina de Oliveira Monteiro Moreira / Resumo: O câncer é a segunda maior causa de morte em países industrializados, sendo superado somente para as doenças cardíacas. Os dois tipos de cânceres de maior incidência no homem são o de próstata e de pulmão, e entre as mulheres são de mama e de cólon do útero. Abrina, ricina e pulchelina são proteínas inativadoras de ribossomos do tipo II (RIPs), possuidoras de duas cadeias polipeptídicas, uma com atividade enzimática N-glicosidase e a outra lectínica. Neste trabalho, a resposta imune desencadeada pelas RIPs e a atividade anti-proliferativa contra células tumorais de mama (LM3) e de pulmão (LP07) foram avaliadas. Abrina, ricina e pulchelina mostraram-se muito tóxicas aos macrófagos (IC50 = 6,4 ± 1,53, 11,8 ± 1,66 e 19,3 ± 4,0, respectivamente), sendo a abrina a mais tóxica de todas, seguida pela ricina e esta pela pulchelina. As proteínas não estimularam a produção de NO e H2O2 em células do exsudato peritoneal, mas causaram leve inibição da produção de NO estimulada por LPS e uma forte inibição da produção de H2O2 estimulada pelo PMA. As proteínas testadas estimularam resposta do tipo Th1 e Th2, pois induziram a produção de IL-1β, TNF-α, IFN-γ, IL-12 e IL-10. As células LM3 (adenocarcinoma de mama murino) e LP07 (adenocarcinoma de pulmão murino) foram mais sensíveis ao potencial tóxico de abrina, ricina e pulchelina do que do Taxol após 24 e 48 horas de incubação. / Abstract: Cancer is the second major cause of death in industrialized countries, second only to cardiac diseases. The two more incident cancer types in men are prostate and lung cancer, and in women are breast and colon cancer. Abrin, ricin and pulchellin are type II ribosome inactivating proteins (RIPs); they have two polypeptide chains, one with N-glycosidase activity, and the other lectinic. In this research, we evaluated the immune response induced by these RIPs and the anti-proliferative activity against tumoral cells of breast (LM3) and lung (LP07). Abrin, ricin and pulchellin showed citotoxicity to exsudate peritoneal cells (IC50 = 6.4 ± 1.53, 11.8 ± 1.66 e 19.3 ± 4.0, respectively). The abrin was the most toxic of all, followed by ricin and pulchellin. Abrin, ricin and pulchellin didn't stimulate NO and H2O2 production in PEC, although they caused a low inhibition of LPS' NO production stimulation, and a high inhibition of PMA's H2O2 production stimulation. The proteins induced a Th1 and Th2 response; characterized by their ability to stimulated IL-1β, TNF-α, IFN-γ, IL-12 e IL-10 production. The LM3 cells (murine breast adenocarcinoma) and LP07 cells (murine lung adenocarcinoma) were more sensible to the proteins' citotoxicity than Taxol's citotoxicity after 24 and 48 hours of incubation. / Mestre

Orientador: Márcia Guimarães da Silva / Banca: Denise Fecchio / Banca: Tânia Machado de Alcântara / Resumo: A Rotura Prematura de Membranas Pré-Termo (RPM-PT) é um dos principais problemas da Clínica Obstétrica, com etiologia relacionada à ascensão bacteriana do trato genital inferior para a decídua e membranas corioamnióticas. Objetivo: Quantificar a expressão de interleucina (IL)-4 e IL- 10 pelas membranas corioamnióticas de gestantes com RPM-PT e avaliar a relação dessa expressão com presença de corioamnionite. Material e Foram incluídas no estudo 30 gestantes com RPM-PT em trabalho de parto (RPM-PT em TP) e 20 gestantes com RPM-PT fora do trabalho de parto (RPM-PT fora de TP). Como grupo controle foram avaliadas 30 gestantes em trabalho de parto prematuro (TPP) e bolsa das águas íntegra. No momento da resolução da gestação, após a dequitação, foram retirados fragmentos das membranas corioamnióticas e acondicionados em RNA later para posterior quantificação do RNAm das citocinas pela técnica de PCR em tempo real. Fragmentos das membranas foram submetidos à análise histopatológica para avaliação da presença de corioamnionite. No período do estudo, a incidência de RPM-PT foi de 6,2% e de TPP foi de 5,5%. Para a IL-10, a concentração relativa de RNAm foi estatisticamente superior nas membranas corioamnióticas de gestantes do grupo RPM-PT fora de TP em relação ao grupoTPP. Em relação à IL-4 não houve diferença significativa entre os grupos estudados. A presença de corioamnionite foi de 44,0% no grupo RPM-PT e de 66,7% no grupo TPP. A análise estatística não apontou diferença significativa entre a expressão de IL-4 e IL-10, na presença ou ausência de corioamnionite, nos grupos estudados. A concentração relativa de RNAm de IL-10 é superior nas membranas corioamnióticas do grupo RPM-PT fora de TP em relação ao grupo TPP e entre os grupos RPM-PT e TPP a expressão de IL-4 é similar. Não existe relação entre a expressão de IL-4 e IL-10 e corioamnionite. / Abstract: The preterm premature rupture of membranes (PPROM) is one of the major problems of Clinical Obstetrics. Its etiology is related to the ascending pathway of bacteria from the lower genital tract to the decidua and chorioamniotic membranes. Objective: To quantify the expression of the interleukin (IL)-4 and IL-10 in the chorioamniotic membranes of pregnant women with PPROM and evaluate the relation of this expression with the presence of chorioamnionitis. Material and Methods: Thirty PPROM women in labor and 20 PPROM without labor women were studied. As a control group 30 pregnant women in premature labor (PTL) were studied. After delivery, samples of the chorioamniotic membranes were collected for histopathological analyses and others fragments were conditioned in RNA later for posterior quantification of cytokine mRNA expression by real time PCR. Results: In the study period, the incidence of PPROM was 6,2% and 5,5% for PTL. For IL-10, the expression of mRNA was statistically higher in the PPROM without labor group in relation to the groups with PTL. mRNA expression of IL-4 was not statistically different in the groups studied. In 44,0% of samples in PPROM group the presence of chorioamnionitis was observed and for PTL group the incidence was 66,7%. No difference occurred in the expression of cytokine mRNA in relation to the presence of chorioamnionitis in the groups studied. Conclusion: The expression of mRNA was statistically higher in the PPROM without labor group in relation to the group with PTL and among the PPROM and PTL groups mRNA expression of IL-4 was not statistically different. No difference occur in the expression of IL-4 and IL-10 mRNA in relation to the presence of chorioamnionitis. / Mestre

Orientador: Elenice Deffune / Resumo: As células tronco mesenquimais tem por definição a autorrenovação, fonte de proliferação e a diferenciação celular em várias linhagens, sendo cartilagem, osso e tecido adiposo. Quanto características funcionais destacam-se cinco características: Suporte estrutural ou arcabouço, controle da inflamação, inibição da apoptose, ação anti-fibrose e por fim a diferenciação, cada um sendo responsável por secretar citocinas e hormônios de crescimento. As plaquetas, os hormônios de crescimento e fase de remodelamento de feridas crônicas abrangem várias etapas, começando pela fase da hemostasia e terminando na fase do remodelamento que vai garantir a força e o fechamento da ferida. Cada fase tem sua importância e secretam também inúmeros fatores de crescimento e citocinas importantes. A linha de curativos biológicos vem sendo desenvolvida há 15 anos no Laboratório de Engenharia Celular. Os resultados com o uso destes biocurativos têm sido excelentes, no entanto observa-se que quanto mais antiga é a lesão, ou maior a idade, maior é também a dificuldade no fechamento da área, e o risco de infecção secundária aumenta. Diante disto, encontrou-se uma oportunidade de melhoria do produto com os avanços no cultivo de células tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo, esta técnica propicia a obtenção de diferentes fatores de crescimento que modulam o fechamento de feridas. Uma das etapas do projeto foi avaliar pacientes idosos com feridas crônicas acima de três anos, a média obtida dos hor... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mesenchymal stem cells are by definition self-renewal, a source of proliferation and cell differentiation in various strains, being cartilage, bone and adipose tissue. As for functional characteristics, five characteristics stand out: structural support or framework, inflammation control, inhibition of apoptosis, anti-fibrosis action and finally differentiation, each one being responsible for secreting cytokines and growth hormones. Platelets, growth hormones and chronic wound remodeling phase span several stages, beginning with the hemostasis phase and ending at the remodeling phase that will ensure strength and wound closure. Each phase has its importance and also secrete countless important growth factors and cytokines. The line of biological dressings has been developed for 15 years in the Laboratory of Cellular Engineering. The results with the use of these bio-curatives have been excellent, however, it is observed that the older the lesion, or the greater the age, the greater the difficulty in closing the area, and the risk of secondary infection increases. In view of this, there was an opportunity to improve the product with advances in the cultivation of mesenchymal stem cells derived from adipose tissue, this technique provides the achievement of different growth factors that modulate the closure of wounds. One of the steps of the project was to evaluate elderly patients with chronic wounds over three years, the average obtained from growth hormones compared to healt... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Angelo Berchieri Júnior / Coorientador: Paul Barrow / Banca: Guilherme Correa de Oliveira / Banca: Fabiana Horn / Banca: Raphael Lucio Andreatti Filho / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Resumo: S. Gallinarum (SG) provoca o tifo aviário, doença sistêmica com alta mortalidade em aves. Esse biovar é imóvel devido à falta de flagelos. Foi sugerido que a ausência de flagelo resultaria na indução de resposta pró-inflamatória de menor intensidade na mucosa intestinal, favorecendo o desenvolvimento da infecção sistêmica. Para investigar essa hipótese, um mutante de SG capaz de produzir flagelos (SG Fla+) foi construído. Analisou-se a capacidade deste mutante de invadir células epiteliais renais (CRGs), sobreviver em macrófagos da linhagem HD 11 e induzir a expressão de genes responsáveis por mediadores da resposta imune nestas células, em conjunto com outras estirpes de Salmonella spp. Aliado a isso, comparou-se a patogenicidade de SG Fla+ e SG para aves de uma linhagem para postura comercial, avaliando-se a mortalidade e as alterações macroscópicas. Os resultados demonstraram que o flagelo aumentou a capacidade de invasão das estirpes para CRGs, mas não alterou a sobrevivência de SG Fla+ no interior dos macrófagos HD 11. SG Fla+ induziu a maior aumento da expressão de CXCLi2, IL-6 e de iNOS em CRGs que as estirpes sem flagelos (p<0,05). A expressão de genes responsáveis por mediadores da resposta imune em macrófagos HD11 não esteve ligada a presença de flagelo. SG Fla+ provocou menores taxas de mortalidade que SG (p<0,05). Após 28 dias do desafio, SG Fla+ foi isolada no conteúdo de alguns cecos com alterações sugestivas de inflamação / Abstract: S. Gallinarum (SG) is the causative agent of fowl typhoid, a systemic disease responsible for high mortality rates in birds. This biovar is non-motile due to the lack of flagella. It has been proposed that the absence of flagellum would provoke less pro-inflammatory immune response in the gut, favoring the development of systemic infection. In order to investigate this, a SG mutant strain capable of producing flagella (SG Fla+) was constructed. The capability of this mutant and other Salmonella spp. strains in invading chicken kidney cells (CKCs), surviving in HD 11 macrophages and inducing inflammatory responses in these cells were assessed. In adittion, the pathogenicity of SG Fla+ and SG was comparatively assessed in commercial laying hens. Mortality rates and gross lesions were evaluated. The results shown that flagellum increased the invasiveness of strains to CKCs while its presence did not change the survival of SG Fla+ in HD11 macrophages. SG Fla+ induced higher levels of CXCLi2, IL- 6 and iNOS gene expression than non-flagellated strains did (p<0.05). The expression of genes responsible for mediators of immune responses in infected HD11 macrophages were not related to the presence of flagella. SG Fla+ caused lower mortality rates than SG (p<0.05). SG Fla+ was recovered from the contents of caeca which presented inflammation-like macroscopic alterations not observed in birds infected with SG / Doutor

Orientador: Maria Stella Gonçalves Raddi / Coorientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Clarice Queico Fujimura Leite / Banca: Emanuel Carrilho / Banca: Fernanda de Freitas Anibal / Banca: Paulo Inácio da Costa / Resumo: Helicobacter pylori é o principal agente etiológico causador da gastrite crônica, úlcera péptica, adenocarcinoma e linfoma gástrico. Concentrações subinibitórias de antimicrobianos podem modificar os fatores de virulência da bactéria e, consequentemente, a relação micro-organismo/hospedeiro, podendo alterar a progressão da infecção. Este estudo avaliou fatores de virulência de H. pylori cultivados em ½ e ¼ da concentração inibitória mínima de amoxicilina que poderiam alterar a liberação de citocinas, indução de óxido nítrico e apoptose em macrófagos RAW 264.7 infectados. A análise proteômica foi realizada por eletroforese bidimensional e a identificação das proteínas diferencialmente expressas através da digestão por tripsina e espectrometria de massas A indução de óxido nítrico foi analisada através do reagente de Griess, as citocinas (interleucina - 1 beta, interleucina - 6, interleucina - 10, interleucina - 12, fator de necrose tumoral alfa e fator transformador de crescimento - beta) por ensaio imunoenzimático e apoptose por citometria, após 24 horas de infecção. Nossos resultados demonstraram que H. pylori previamente mantidos em sub-CIMs de amoxicilina apresentaram maior expressão de proteínas de choque térmico, enolase, argininosuccinato sintase, superóxido dismutase, ATP alfa sintase e proteína ativadora de neutrófilo, proteínas capazes de aumentar a indução de NO, IL - 1 β e IL - 12 e apoptose em relação à macrófagos infectados com H. pylori sem tratamento. Estes resultados sugerem que a amoxicilina em concentrações subinibitórias pode estimular a resposta imune no hospedeiro através da indução de alguns fator ... / Abstract: The infection caused by Helicobacter pylori is considered a major etiology agent in chronic gastritis, peptic ulcer, gastric carcinoma and gastric lymphomas. Sub-inhibitory concentrations of antibiotics have been shown to change virulent expression of microorganisms, which may change the progression of infection. This study assessed virulence factors of H. pylori after contact with ½ and ¼ the minimal inhibitory concentration of amoxicillin subinhibitory concentrations of amoxicillin that could modify the induction of cytokines, nitric oxide and apoptosis by infect RAW 264.7 macrophage-like cells. The proteomic analysis was realized by two dimensional electrophoresis and proteins differential expressions were characterized by tryptic digestion and mass spectroscopy. The induction of nitric oxide was assayed by Griess reagent, cytokines (interleukin - 1 beta, interleukin - 6, interleukin - 10, interleukin - 12, tumor necrosis factor alpha and transforming growth factor - beta) by Enzyme-Liked Immunoabsorbent Assay and apoptosis by annexin V - fluorescein isothiocyanate after 24 hours. Our results demonstrated that H. pylori previously maintained in sub - MICs of amoxicillin showed higher expression of virulence factors such as heat shock proteins, enolase, argininosuccinate synthetase, superoxide dismutase, ATP synthase alpha and neutrophil-activating protein inducing more oxide nitric, interleukin - 1β and interleukin - 12 and increased apoptosis than macrophages infected with H. pylori without treatment. These results suggest that amoxicillin, at sub-inhibitory concentrations, could contribute to the stimulation of immune response in the ... / Doutor

Orientador: José Corrêa de Lacerda Neto / Coorientador: Juliana Regina Peiró / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Paulo Alescio Canola / Banca: Rafael Resende Faleiros / Banca: Luiz Claudio Nogueira Mendes / Resumo: A relação entre a ocorrência de cólica e a manifestação da laminite tem sido estudada por inúmeros pesquisadores. Alguns trabalhos com indução experimental de laminite demonstram a participação da resposta inflamatória na origem da afecção. Devido a isso, buscou-se entender a resposta inflamatória de equinos tanto em nível sistêmico, como local, no intestino e no tecido dérmico/epidérmico podal, assim como determinar possíveis alterações clínicas e laboratoriais após obstrução intraluminal do cólon menor. Para isso, foram utilizados oito equinos adultos, hígidos, com idade entre oito e 14 anos. Estes foram submetidos a celiotomia associada a dilatação intraluminal do cólon menor, simulando o abdômen agudo por enterólito. Biópsias de casco e cólon menor foram efetuadas neste momento e, também, foram colhidas amostras de sangue e líquido peritoneal. Após quatro horas de obstrução intraluminal, o balão foi desinflado e realizou-se novas biópsias de casco e cólon menor e colheu-se novamente amostras de sangue e líquido peritoneal. Durante o pós-cirúrgico, os animais foram monitorados por meio de exames físicos em intervalos de 12 horas. Após 72 horas da desobstrução foram efetuadas as últimas coletas de casco, cólon, sangue e líquido peritoneal. As amostras de sangue e líquido peritoneal foram utilizadas para avaliação hematológicas e para a determinação da expressão gênica das IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α por meio da PCR em tempo real e para quantificar as IL-1β, IL-6 e TNF-α por ELISA sanduiche. Os tecidos obtidos nas biópsias foram processados para avaliação histológica e determinação das IL-1β, IL-6, IL-8, IL-10 e TNF-α pela técnica da PCR em tempo real. Os valores obtidos nas avaliações hematológicas diferiram (p<0,05) dos valores basais, principalmente após quatro horas de obstrução (M4) e após 12 horas de pós-cirúrgico (M12). As citocinas avaliadas por ... / Abstract: Numerous researchers have studied the relationship between colic and laminitis manifestation. Some studies with experimentally induced laminitis demonstrated involvement of the inflammatory response in the development of the disease. Therefore, the aim of this study was to investigate systemic and local inflammatory response, in intestines and hoof dermal and epidermal tissues, as well as to determine clinical and laboratory changes after intraluminal obstruction in small colon. For this purpose, eight healthy adult horses were submitted to a celiotomy to induce intraluminal distension of the small colon simulating acute abdomen by enterolith. Hoof and small colon biopsies were made at this time, and samples of blood and peritoneal fluid were collected. After four hours of intraluminal obstruction, the ball was deflated and new biopsies of hoof and small colon collected and blood and peritoneal fluid sampled. During the postoperative, animals were monitored by physical examinations every 12 hours. After 72 hours of ball removal, the last biopsies of hoof, colon, blood and peritoneal fluid were collected. The samples of blood and peritoneal fluid were used for hematological evaluation, for determining gene expression of IL- 1β, IL-6, IL-8, IL-10 and TNF-α by real-time PCR and to quantify IL-1β , IL- 6 and TNF-α by sandwich ELISA. Tissues obtained from biopsies were processed for histological evaluation and determination of IL-1β, IL-6, IL-8, IL- 10 and TNF-α by real time PCR. The values obtained in hematological evaluation differ (p<0.05) from baseline, especially four hours after obstruction (M4) and after 12 hours of postoperative (M12). Cytokines concentrations in peritoneal fluid increased in M4, returned to baseline within M72 and remained unchanged in serum samples. Regarding gene expression in blood, there was no significant difference. In peritoneal fluid, all cytokines differed from baseline. Concerning the colon, the ... / Doutor

Orientador: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Coorientador: Flávia Lombardi Lopes / Banca: Paulo Ricardo Dell'Armelina Rocha / Banca: Geórgia Modé Magalhães / Banca: Marcos Rogério André / Banca: Rosangela Zacarias Machado / Resumo: A resposta imune de cães com Leishmaniose Visceral (LV) pode apresentar um perfil variado de citocinas, com predominância de citocinas pró-inflamatórias (resistência) ou antiinflamatórias (susceptibilidade), dificultando ou favorecendo a multiplicação do protozoário Leishmania infantum chagasi nos tecidos do hospedeiro. Nesses animais existe um desequilíbrio entre os perfis das respostas imunes Th1 e Th2. A avaliação da resposta imunológica destes cães com diferentes manifestações clínicas de LV é de fundamental importância para a compreensão da patogenia da doença. O objetivo geral deste estudo foi avaliar o perfil de citocinas Th1, Th2 e regulatórias, fatores de transcrição (T-bet e GATA-3) e carga parasitária em cães com LV e controle, no fígado, baço e linfonodos poplíteo e pré-escapular, para verificar possíveis diferenças na resposta imune compartimentalizada. Neste estudo foram utilizados 28 cães de área endêmica para a LV e cinco cães de área não endêmica (controle). Os cães infectados foram separados em grupos sintomático (n=16) e assintomático (n=12). A quantificação da expressão dos genes das citocinas (IFN- γ, TGF-β, IL-10, IL-4, IL-12 e MIF), da carga parasitária tecidual e dos fatores de transcrição foi feita por meio da técnica de PCR quantitativo em tempo real, em amostras de tecidos dos diferentes órgãos. O baço e os linfonodos poplíteo e pré-escapular foram os órgãos que apresentaram maior número de cópias do DNA da Leishmania infantum chagasi. Os resultados da expressão dos genes de citocinas mostraram que houve um aumento da expressão de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IFN-γ, MIF, IL-12), anti-inflamatórias (IL-4) e regulatórias (IL-10, TGF-β) nos grupos de cães infectados, algumas com diferenças significativas do grupo controle (P<0,05). Enquanto o fator de transcrição T-bet teve níveis mais elevados nos animais assintomáticos. Em conclusão ... / Abstract: The immune response of dogs with visceral leishmaniasis (VL) may present a varied profile of cytokines, predominantly proinflammatory (resistance) or anti-inflammatory (susceptibility) cytokines, hindering or favoring the multiplication of the protozoan Leishmania infantum chagasi in the host tissues. In these animals there is an imbalance between the profiles of Th1 and Th2 immune response. The evaluation of the immune response of these dogs with different clinical manifestations of VL is crucial for understanding the pathogenesis of the disease. The aim of this study was to evaluate the profile of Th1, Th2 and regulatory cytokines, transcription factors (T-bet and GATA-3) and parasite load in dogs with VL and control, in the liver, spleen and popliteal and prescapular lymph nodes to verify possible differences in compartmentalized immune response. In this study 28 dogs from an endemic area for VL and five dogs from non-endemic area (control) were used. The infected dogs were divided into symptomatic (n = 16) and asymptomatic (n = 12) groups of dogs. The quantification of the gene expression of cytokines (IFN-γ, TGF-β, IL-10, IL-4, IL-12 and MIF) and tissue parasitic load of the transcription factors was done using the technique of quantitative PCR in real time, tissue samples from different organs. The spleen and popliteal and pre-scapular lymph nodes were the organs that showed a higher number of copies of the DNA of Leishmania infantum chagasi. The results of the expression of cytokine genes showed that there was an increased expression of pro-inflammatory (TNF-α, IFN-γ, MIF, IL-12), anti-inflammatory (IL-4) and regulatory cytokines (IL-10 , TGF-β) in groups of infected dogs, with some significant differences from the control group (P <0.05). While the transcription factor T-bet had higher levels in asymptomatic animals. In conclusion GATA-3 was less expressed in the group of infected dogs suggesting that there other mechanisms ... / Doutor