Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Carlos Alberto de Oliveira / Banca: Alexandre Batista Duarte / Banca: José Carlos Rebuglio Vellosa / Banca: José Maurício Sforcin / Resumo: esporotricose é uma micose subcutânea causada pelo fungo dimórfico Sporothrix schenckii, apresentando em geral, lesões cutâneas com proliferação via vasos linfáticos especialmente em pacientes imunocomprometidos, o que pode levar a doença sistêmica. Os macrófagos têm um papel importante na resposta imune inata contra diversos patógenos e dependendo do estimulo recebido podem ser polarizados em M1 e M2, os quais apresentam propriedades distintas, sendo que os primeiros possuem atividades proinflamatórias e o segundo anti-inflamatória. Desta forma, o objetivo do trabalho foi verificar a participação das populações de macrófagos M1 e M2 através da avaliação das citocinas IL-12, IL-23, IL-10 e TGF-β, da produção de NO e da atividade da enzima arginase, juntamente com a avaliação fenotípica dessas populações durante todo período experimental. Os resultados revelaram que as células do exsudato peritoneal dos camundongos dos grupos infectados quando desafiadas ex vivo com o exoantígeno e o extrato lipídico foram capazes de levar a produção de IL-12, IL-10 e TGF- β durante todo o período experimental. A produção de IL-23 ocorreu na 2ª e 4ª semana mediante o desafio com o exoantígeno e em todo período experimental com o EL. A fenotipagem revelou a presença de macrófagos tanto M1 quanto M2 durante todo o período experimental, com aumento da expressão do receptor CD206 (M2) no período tardio da infecção, o que explica a produção dos mediadores tanto inflamatórios (IL-12 e IL-23) quanto anti-inflamatórios (IL-10 e TGF- β) encontrados durante toda a cinética. Além das citocinas também foi observada a produção de óxido nítrico e a atividade da enzima arginase. Desta forma os resultados encontrados evidenciam a participação dos macrófagos M1 e M2 durante a esporotricose, uma vez que os M1... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Sporotrichosis is a subcutaneous mycosis caused by the dimorphic fungus, Sporothrix schenckii, generally presenting skin lesions with spread via lymphatic vessels, especially in immunocompromised patients, what can lead to systemic disease. Macrophages play an important role in innate immune response against various pathogens and, depending on the eliciting signals, macrophage can be polarized in M1 and M2, which presents distinct proprieties, so macrophage activation can be either proinflammatory or antiinflammatory. Thereby, the aim of this study was to evaluate the role of macrophage populations M1 and M2, through the evaluation of IL-12, IL-23, IL-10 and TGF-β, NO production and activity of the enzyme arginase, along with phenotypic evaluation of these populations throughout the experimental period. The results showed that peritoneal exudate cells of infected mice groups, when challenged ex vivo with exoantigen and lipid extract, were able to lead to production of IL-12, IL- 10 and TGF-β throughout the experimental period. The production of IL-23 occurred in the 2nd and 4th week through the challenge with exoantigen and throughout the experimental period with the lipid extract. Phenotyping revealed the presence of both macrophages, M1 and M2, throughout the experimental period, with increased expression of the receptor CD206 (M2) in the late infection period, which could explain the production of proinflammatory (IL-12 and IL-23) and anti-inflammatory (IL-10 and TGF-β) mediators found throughout the kinetic, and the nitric oxide production and activity of the arginase enzyme. M1 macrophages are important during sporotrichosis, they have microbicidal activity and are responsible for releasing inflammatory mediators in an attempt to eliminate the fungus Sporothrix schenckii, while the M2 found during... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Iracilda Zeppone Carlos / Banca: Orivaldo Pereira Ramos / Banca: Ana Marisa Fusco Almeida / Resumo: A esporotricose é uma micose de distribuição universal causada por fungos termodimórficos do complexo de espécies de Sporothrix schenckii. A forma mais comum da doença é a linfocutânea que compromete pele, tecido subcutâneo e gânglios linfáticos regionais. Células do sistema imune inato reconhecem patógenos por meio de receptores de reconhecimento de padrão (PRRs). Dentre esses, podemos destacar a família dos receptores do tipo "Toll-like" (TLRs) e dos receptores de lectina do tipo C (CLRs), os quais possuem membros capazes de reconhecer antígenos fúngicos. A interação entre os PRRs e os padrões moleculares associados aos patógenos (PAMPs) desencadeia uma série de vias de sinalização envolvidas na modulação da resposta adaptativa subsequente e na potencialização da capacidade fagocítica e microbicida dos macrófagos e de outros fagócitos. A Dectina-1 é um CLR amplamente expresso em macrófagos, células dendríticas e neutrófilos, sendo um receptor para β-glucana implicado no processo de fagocitose, no "burst" oxidativo e na produção de fatores solúveis, tais como citocinas e quimiocinas. O objetivo do presente estudo foi avaliar o papel das β-glucanas, reconhecidas ligantes de Dectina-1, na fagocitose e na produção de intermediários do oxigênio (H2O2) e nitrogênio (NO) e de mediadores solúveis por macrófagos peritoneais de camundongos Balb/c durante a infecção por S. schenckii ATCC 16345. Para tanto, os macrófagos foram desafiados com a fração álcali-insolúvel (F1) extraída da parede celular de S. schenckii, composta principalmente de β-glucanas, com uma β-1,3-glucana pura comercial ou com o fungo íntegro termo-inativado. Nossos resultados mostraram que tanto a fagocitose das leveduras de S. schenckii, como a produção de NO, H2O2 e das citocinas IL-10, TNF-α e IL-1β se dá pelo reconhecimento tanto das β-glucanas... / Abstract: Sporotrichosis is a worldwide distributed mycosis caused by thermodimorphic fungi from the Sporothrix schenckii species complex. The disease's most common form is the lymphocutaneous, which compromises the skin, subcutaneous tissue and regional lymphatic ganglia. Cells from the innate immune system recognize pathogens through pattern recognition receptors (PRRs). Among these, the toll-like (TLRs) and C-type lectin (CLRs) receptors can be highlighted for having members capable of recognizing fungal antigens. The interaction between PRRs and pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) triggers various signaling pathways involved in modulating the following adaptive response and in potentiating the phagocytic and microbicidal capabilities of macrophages and other phagocytes. Dectin-1 is a widely expressed CLR in macrophages, dendritic cells and neutrophils, being a receptor for β-glucan implicated in the phagocytic process, the oxidative burst, and in the production of soluble mediators such as cytokines and chemokines. The present study was aimed at assessing the role of β-glucans, known Dectin-1 ligands, in the phagocytosis and production of soluble mediators, oxygen (H2O2), and nitrogen (NO) intermediates by peritoneal macrophages from Balb/c mice during infection with S. schenckii ATCC 16345. In order to do that, the macrophages were challenged with the alkali-insoluble fraction (F1) extracted from the S. schenckii cell wall, which is mainly composed of β-glucans, with a purified commercial β-1,3-glucan, or with whole heat-killed S. schenckii yeasts. Our results showed that phagocytosis of the S. schenckii yeasts, as well as production of NO, H2O2, and the cytokines IL-10, TNF-α and IL-1β occur by the recognition of both the β-glucans and other additional components found in the F1 fraction. Furthermore, Dectin-1 expression was augmented on days 10 and 15 ... / Mestre

Orientador: Luis Vitor Silva Sacramento / Banca: Fernanda de Freitas Aníbal / Banca: Iracilda Zepone Carlos / Resumo: O alho (Allium sativum L.) é cultivado em todo o mundo como hortaliça condimentar e medicinal desde 3.000 a. C. A aliina (composto majoritário) e a alinase permanecem em compartimentos separados nos bulbilhos de alho, e somente quando cortados ou triturados, a aliina é convertida em alicina pela ação da alinase. A alicina é o principal componente do alho, sendo atribuída a ela a maior parte das suas atividades biológicas, dentre elas as ações bactericida, antifúngica e antiviral. Porém, outros compostos do alho apresentam atividade antioxidante, hipocolesterolemiante, vasodilatadora, ação protetora contra diversos tipos de câncer e imunomoduladora. Ante a invasão de patógenos, o sistema imunológico desencadeia respostas que envolvem células como macrófagos e linfócitos. Essa complexa interação entre células é coordenada pela liberação de citocinas e outros mediadores. A nutrição tem papel relevante na modulação da resposta imune e inflamatória em diferentes tipos de doenças. As infecções por fungos são causas importantes de morbidade e mortalidade no homem principalmente em indivíduos imunossuprimidos. O Sporothrix schenckii, agente causal da esporotricose (micose subcutânea mais comum na América Latina), é fungo dimórfico, de vida saprofítica no solo ou em vegetais, infectando homens e os animais principalmente através de lesões e arranhões na pele. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência do consumo de alho na imunomodulação de camundongos Swiss saudáveis e infectados por S. schenckii, a partir do estado funcional dos macrófagos peritoneais desses animais quanto à produção de óxido nítrico e das citocinas (IL-1β, IL-10 e IL-12) e avaliar o potencial antifúngico do alho frente ao S. schenckii por meio de teste de concentração inibitória mínima e unidades formadoras de colônia. Os resultados demonstraram... / Abstract: Garlic (Allium sativum L.) is grown all over the world as seasoning and medicinal food since 3,000 a. C. The aliin (major compound) and alliinase remain in separate compartments in intact garlic clove, and when the garlic is cut or crushed, the alliin is converted to allicin by the action of alliinase. Allicin is the main component of garlic is attributed to it most of the biological activities of garlic, including the bactericide, antifungal and antiviral action. However, other garlic compounds have antioxidant activity, hypocholesterolemic and vasodilating activities, guard action against many types of cancer and immunomodulatory. At the invasion of pathogens, the immune system triggers responses involving cells such as macrophages and lymphocytes. This complex interaction between cells is coordinated by the release of cytokines and other mediators. Nutrition plays an important role in modulating the immune and inflammatory response in different types of diseases. Fungal infections are significant reasons of human morbidity and mortality mainly in immunocompromised people. The Sporothrix schenckii, the causal agent of sporotrichosis (most common subcutaneous mycosis in Latin America), is dimorphic fungus, of saprophytic life in soil or in plant that infects humans and animals mainly through skin injuries and scratches. The aim of this study was to evaluate the influence of garlic consumption in immunomodulation of Swiss healthy and infected mice by S. schenckii from the functioning of peritoneal macrophages of the animals and the production of nitric oxide and cytokines (IL 1β, IL-10 and IL-12) and evaluating the antifungal potential of garlic against S. schenckii by minimum inhibitory concentration test and colony forming units. The results show that garlic has potential antifungal front S. schenckii. Oral administration of garlic extracts influences the releasing ... / Mestre

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:06:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000437701-Texto+Completo-0.pdf: 658664 bytes, checksum: 3842d70518efb4bc4633c3998b3a5859 (MD5) Previous issue date: 2012 / Sepsis is a systemic inflammatory disorder, and its progression to septic shock is a serious clinical problem associated with a high mortality rate. Despite significant advances in critical care, treatments do not reverse the systemic inflammatory response and its consequences. Gram-negative sepsis is initiated by exposure to a component of gram-negative bacterial membrane, lipopolysaccharide (LPS), and induces overproduction of host inflammatory cytokines, including tumor necrosis factor (TNF- α), interleukin-1 (IL-1) and interleukin-6 (IL-6) from immunocytes such as monocytes. Recent studies have shown that similar to LPS, the Respiratory syncytial virus - leading cause of severe lower respiratory tract infections in infants and young children – requires the toll-like receptor 4 (TLR4) for signaling. Studies have shown that the respiratory syncytial virus attachment glycoprotein (RSV G) modulates cytokine and chemokine production in monocytes, inhibiting the inflammatory response elicited by LPS stimulation. In this report, we use murine monocytes from different knockout mice to show that RSV G can inhibit the release of cytokines in the immune response against lipoplysaccharide induced sepsis. We demonstrate the modulation of IL-1β, IL-6, IL-10 and TNF-α by RSV G in monocytes LPS stimulated. Importantly, we also considered the effect of RSV G subunits (peptides) and future directions for the clinical use of the glycoprotein on LPS-mediated inflammation. / Sepse é uma desordem inflamatória sistêmica e sua progressão para o choque séptico caracteriza um sério problema clínico, apresentando altas taxas de mortalidade. Apesar dos significativos avanços no tratamento intensivo, os mesmos não são capazes de reverter a resposta inflamatória sistêmica, assim como suas conseqüências. A sepse por bactérias gramnegativas é desencadeada pela exposição a um componente da membrana destas bactérias, conhecido como lipopolissacarídeo (LPS), o que leva a uma super produção de citocinas inflamatórias no hospedeiro, incluindo o fator de necrose tumoral (TNF-α), a interleucina-1 (IL-1) e a interleucina-6 (IL-6), por sua vez provindas de células do sistema imune, como os monócitos. Estudos recentes demonstraram que, de forma similar ao LPS, o vírus sincicial respiratório (RSV) – principal causa de infecção respiratória baixa em crianças e recém natos - utiliza o receptor toll-like 4 (TLR4) para sinalização celular. Estudos demonstraram que a glicoproteína de ligação do vírus sincicial respiratório (RSV G) age como imunomoduladora na produção de citocinas e quimiocinas por monócitos, inibindo a resposta inflamatória estimulada por LPS. Neste artigo, nós utilizamos monócitos monócitos murinos de diferentes camundongos knockout para demonstrar que RSV G pode inibir a produção de citocinas na resposta imune contra lipopolissacarídeos em um modelo de sepse. Demonstra-se também a modulação das citocinas IL-1β, IL-6, IL-10 e TNF-α por RSV G em monócitos estimulados por LPS. O artigo ainda considera de forma destacada o efeito de subunidades (peptídeos) de RSV G, bem como destaca perspectivas para o futuro uso clínico de glicoproteínas na modulação da resposta inflamatória mediada por LPS.

Made available in DSpace on 2014-05-06T02:02:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000457551-Texto+Completo-0.pdf: 12875247 bytes, checksum: 7692e146a26179178ba4309a48e59226 (MD5) Previous issue date: 2014 / Pre-eclampsia is one of the leading cause of maternal mortality worldwide. Although some etiological factors such as poor placentation, endothelial dysfunction, excessive maternal inflammation, poor angiogenesis, and placental hypoxia have been proposed, the etiology of pre-eclampsia has not been fully understood. An immune maladaptation theory suggests that pre-eclampsia might be envolved in an inappropriate regulation of normally Th2-deviated maternal immune response, leading to a shift toward harmful Th1 immunity, delivering a large amount of cytokines and growth factor molecues throw maternal circulation. The presence of these mediators seems to play a role in the pathophysiology of pre-eclampsia, resulting in the clinical signs of the disease: hypertension and proteinúria. Thus, this study pretended to analize different pathways during gestation in order to try to elucidate a biomarcar for the disease. We hypothesize that moleculas related to inflammatory system would be up-regulated in maternal plasma and placenta from women with pre-eclampisa and down regulated in fetal plasma. The study was performed at Hospital São Lucas of PUCRS, Brazil, where we made “Mediating molecules and pre-eclampsia”, and at St Thomas‟ Hospital, London, UK, where “Lipoproteins and pre-eclampsia” and “Caveola proteins and pre-eclampsia” projects were developed. At HSL/PUCRS, maternal/fetal plasma and placenta samples were collected from 117 pre-eclampsia and normal pregnant women in third trimester pregnancy, after informed written consent. The cytokines (Endocan-1, PlGF, IL-6, TNFα, MCP-1, NGF, LIGHT, Leptina) were measured by multiplex detecting assay. In London, a study with 51 pregnant women was conducted analising placenta expression of the following molecules: lipoproteins pathway (LRP-1, LDL-R, SRB1, ABCA1, MTTP and PDIA2) and protein caveolae complex (Caveolin-1-3, cavins 1-4, eNOS and iNOS) which were performed by PCR-RT e immunohistochemistry. Briefly we found high levels of Endocan-1 and TNFα in pre-eclamptic maternal plasma, low levels of IL-6 in fetal plasma in cytokines assay. Also a correlation between LRP-1 gene and small for gestational age infants in lipoproteins receptor assay was found. Finally, a reduction expression of Caveolin-1 found in pre-eclampstic placenta seems to result in a compensatory chronic activation of eNOS to attenuate vasoconstriction seen in pre-eclampsia. In conclusion, our results showed new data in relation to pre-eclampsia, which might be helpful for the understanding of its pathofisiology. / A pré-eclâmpsia é uma das principais causas de mortalidade materna no mundo. Embora alguns fatores etiológicos, tais como má placentação, disfunção endotelial, inflamação materna exacerbada, angiogênese deficiente e hipoxia placentária têm sido propostos, a etiologia da pré-eclâmpsia ainda não foi completamente compreendida. A teoria da má adaptação imune sugere que a pré-eclâmpsia pode estar envolvida com um desbalanço Th1/Th2 prejudicial à gestação, com liberação de citocinas e fatores de crescimento na circulação materna. A presença desses mediadores parece desempenhar um papel na fisiopatologia da pré-eclâmpsia, resultando nos sinais clínicos da doença: a hipertensão e a proteinúria. Assim, este estudo pretendeu analisar diferentes vias metabólicas durante a gestação, a fim de tentar elucidar um biomarcar para a doença. Nossa hipótese é a de que moléculas relacionadas ao sistema inflamatório estariam aumentadas no plasma materno e na placenta de mulheres com pré-eclampsia e diminuídas no plasma fetal. O estudo foi realizado no Hospital São Lucas da PUCRS, Brasil, onde fizemos a coleta das amostras para o projeto “Moléculas mediadoras e a pré-eclâmpsia”, e no St Thomas’ Hospital, em Londres, Reino Unido, onde os projetos “Lipoproteínas e a pré-eclampsia” e “Proteínas das cavéolas e a pré-eclâmpsia” foram desenvolvidos. No HSL/PUCRS, amostras de plasma materno-fetal e placenta foram coletadas de 117 gestantes com e sem pré-eclâmpsia no terceiro trimestre da gestação. As moléculas (Endocan-1, PIGF, IL-6, TNFα, MCP-1, NGF, LIGHT e Leptina) foram dosadas por ensaio de detecção multiplex. Em Londres, um estudo com 51 gestantes foi realizado analisando expressão placentária das seguintes moléculas: receptores e mediadores de lipoproteínas (LRP-1, LDL-R, SRB1, ABCA1, MTTP e PDIA2) e proteínas do complexo das cavéolas (Caviolina-1-3, Cavins 1-4, eNOS e iNOS ), que foram analisadas por PCR-TR e imuno-histoquímica. Resumidamente, encontramos altos níveis de Endocan-1 e TNFα no plasma materno, baixos níveis de IL-6 no plasma fetal de pacientes com pré-eclampsia, no ensaio de citocinas. Ainda, foi encontrada uma correlação entre o gene LRP-1 e recém-nascidos pequenos para a idade gestacional, no grupo com pré-eclâmpsia, no ensaio de receptor de lipoproteínas. E, por fim, uma redução da expressão de Caveolina-1 na placenta pré-eclâmptica foi observada e parece ter resultado numa ativação compensatória crônica da eNOS para tentar atenuar a vasoconstrição observada na pré-eclampsia. Concluindo, nossos resultados mostraram novos dados em relação à pré-eclâmpsia, que podem ser úteis para o entendimento de sua fisiopatologia.

Orientador: Márjorie de Assis Golim / Coorientador: Paulo Eduardo de Abreu Machado / Banca: Giovanni Faria Silva / Banca: Paulo Inácio da Costa / Resumo: O vírus da hepatite C crônica (VHC) é causa de doença hepática crônica afetando cerca de 3% da população mundial, aproximadamente 170 milhões de pessoas. Investigações sobre a resposta imune em indivíduos infectados com HCV é justificável pelo fato desta constituir doença infecciosa cujas alterações imunológicas têm relação direta com o desenvolvimento e a manutenção da infecção. Este projeto visou avaliar aspectos que compõem a resposta imune de pacientes com hepatite C crônica com diferentes graus de lesão hepática. Foram incluídos no estudo pacientes VHC+ (n=83), genótipo 1, pré-tratamento, os quais foram estratificados conforme o grau de fibrose hepática determinada por biópsia (classificação METAVIR), compondo: G1 (n = 15) pacientes nos estágios F0 (nenhuma fibrose) + F1 (fibrose em expansão dos espaços porta); G2 (n = 21) pacientes no estágio F2 (poucas fontes de fibrose nos espaços porta); G3 (n = 15) pacientes em estágio F3 (início da formação de nódulos); G4 (n = 32) pacientes em estágio F4 (fibrose severa); G5 (n = 16) doadores de sangue voluntários (grupo controle). Foram avaliadas características imunofenotípicas de subpopulações de leucócitos do sangue periférico (células NK totais, NKdim, NKbright, células dendríticas mielóides e plasmocitóides, monócitos clássicos e pro-inflamatórios, linfócitos T CD4+/CD8+), níveis de citocinas e quimiocinas plasmáticas (TGF-β, TNF-α, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CXCL8, CXCL9, CXCL10), analisando a relação destes com a progressão da fibrose. Todas as frequências das subpopulações leucocitárias avaliadas estão alteradas em portadores de hepatite C crônica comparados com indivíduos saudáveis. Além disso, há correlação entre o grau de fibrose e a quantidade de linfócitos T CD4, T CD8, monócitos pro-inflamatórios e células NKbright circulantes. Níveis aumentados de TNF-α foram observados ... / Abstract: The chronic hepatitis C virus (HCV) is the cause of chronic liver disease affecting about 3% of world population, approximately 170 million people. Investigations of the immune response in individuals infected with HCV is justifiable because this form infectious disease whose immunological changes are directly related to the development and maintenance of infection. This project aimed to evaluate aspects that make up the immune chronic hepatitis C patients with different degrees of liver damage response. The study included patients HCV+ (n = 83), genotype 1, pretreatment, which were classified according to the rate of hepatic fibrosis determined by biopsy (METAVIR classification), composed of: G1 (n = 15) patients in stages F0 (no fibrosis) + F1 (fibrosis expansion of port spaces), G2 (n = 21) patients in the F2 stage (few sources of fibrosis in portal ), G3 ( n = 15 ) patients with stage F3 (early nodule formation), G4 (n = 32) patients with stage F4 (severe fibrosis), G5 (n = 16) volunteer blood donors (control group). Immunophenotypic characteristics of subpopulations of peripheral blood leukocytes (total NK cells, NKdim , NKbright , myeloid dendritic cells and plasmacytoid , classical monocytes, pro- inflammatory CD4 + / CD8 + cells), cytokine levels and plasma chemokines (were evaluated TGF- β , TNF - α , CCL2 , CCL3 , CCL4 , CCL5 , CXCL8 , CXCL9, CXCL10), analyzing their relationship with the progression of fibrosis. All frequencies of evaluated leukocyte subpopulations are altered in patients with chronic hepatitis C compared with healthy subjects. In addition, no correlation between the degree of fibrosis and the amount of CD4, CD8, pro-inflammatory monocytes and circulating NKbright cells. Increased levels of TNF-α were observed in cirrhotic patients (G4) and TGF - β in HCV + groups with moderate hepatic fibrosis (G2 and G3). Plasma chemokine CXCL9/MIG, CXCL10/IP-10, CXCL8/IL-8, CCL2/MPC-1, ... / Mestre

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2016-01-26T21:18:13Z No. of bitstreams: 1 TalytaDelfinoRolimDeAlbuquerque_DISSERT.pdf: 2284989 bytes, checksum: 6b25b44bf6d63685506ea96437eef00b (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2016-02-01T23:27:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TalytaDelfinoRolimDeAlbuquerque_DISSERT.pdf: 2284989 bytes, checksum: 6b25b44bf6d63685506ea96437eef00b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-01T23:27:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TalytaDelfinoRolimDeAlbuquerque_DISSERT.pdf: 2284989 bytes, checksum: 6b25b44bf6d63685506ea96437eef00b (MD5) Previous issue date: 2013-03-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / C?es s?o os reservat?rios prim?rios dos parasitos do g?nero Leishmania. A resposta imune induzida pela infec??o por Leishmania infantum nestes animais n?o est? completamente elucidada, e poucos estudos tem investigado a correla??o entre a express?o de citocinas e quimiocinas e as manifesta??es cl?nicas dos animais portadores de leishmaniose visceral canina (LVC). O objetivo deste estudo foi correlacionar os achados cl?nico em c?es naturalmente infectados por L. infantum (das ?reas rurais do munic?pio de Mossor?, Estado do Rio Grande do Norte, Brasil) com os n?veis de express?o de citocinas (IFN-?, TNF-?, IL-10 e IL-17), iNOS, quimiocinas (CCL1, CCL2, CCL3, CCL4 , CCL5, CCL17, CCL20, CCL24, CCL26, CXCL9, CXCL10), receptores de quimiocinas (CXCR3, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR8), e parasitismo no f?gado e no ba?o. Inicialmente, foi realizado levantamento soroepidemiol?gico de c?es de 12 assentamentos rurais de Mossor?-RN, totalizando 398 c?es examinados. A positividade dos c?es para o parasito foi determinada pela reatividade em dois testes sorol?gicos (RIFI e ELISA). Todas as localidades rurais apresentaram c?es positivos para L. infantum, com positividade variando entre 6,6% a 49% dos animais examinados por localidade, e um total de 27% de c?es de todas as localidades. Posteriormente, vinte e um c?es foram clinicamente avaliados e classificados como assintom?ticos (n = 11) ou sintom?ticos (n = 10). A infec??o foi confirmada pela realiza??o de imprint no ba?o, e observa??o de formas amastigotas. Esplenomegalia, perda de peso e onicogrifose foram os sinais cl?nicos mais frequentes. No f?gado, os n?veis de express?o de RNAm de citocinas (IFN-?, TNF-?, IL-10 e IL-17), iNOS e quimiocinas (CCL1, CCL17, CCL26, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, e CCR8) foram mais baixos nos animais sintom?ticos do que nos animais assintom?ticos. Em compara??o com os animais n?o infectados, c?es sintom?ticos obtiveram n?veis mais baixos de express?o de quase todas as mol?culas analisadas. Al?m disso, foi observada alta carga parasit?ria e baixa inflama??o hep?tica em animais sintom?ticos, quando comparado aos assintom?ticos. Conclui-se que a diminui??o da express?o de citocinas, quimiocinas e receptores de quimiocinas resultaria na migra??o e ativa??o deficiente de leuc?citos, dificultando o controle do parasitismo e conduzindo ao desenvolvimento da doen?a. / Dogs are the primary reservoirs of the parasites of the genus Leishmania. The immune response induced by infection with Leishmania infantum in these animals is not completely understood, and few studies have investigated the correlation between the expression of cytokines and chemokines and clinical manifestations of animals with canine visceral leishmaniasis (CVL). The aim of this study was to correlate the clinical status of dogs naturally infected with L. infantum (rural municipality of Mossoro, Rio Grande do Norte, Brazil) with the expression levels of cytokines (IFN-?, TNF-?, IL-10 and IL-17), iNOS, chemokines (CCL1, CCL2, CCL3, CCL4, CCL5, CCL17, CCL20, CCL24, CCL26, CXCL9, CXCL10), chemokine receptors (CXCR3, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR8), and parasitism in the liver and spleen using real-time PCR. Initially, we conducted seroepidemiological survey of dogs from 12 rural settlements from Mossor?-RN, totaling 398 dogs examined. The positivity of dogs for the parasite was determined by reativity in two serological tests (ELISA and IFA). All rural localities showed dogs positive for L. infantum, with positivity varying between 6,6% and 49% of the animals examined by location, totalizing 27% of dogs from all settlements. Subsequently, Twenty-one dogs were clinically evaluated and classified as asymptomatic (n = 11) or symptomatic (n = 10). The infection was confirmed by performing imprint in the spleen, and observation of amastigotes. Splenomegaly, weight loss and onychogryphosis were the most frequent clinical signs. In the liver, levels of mRNA expression of cytokines (IFN-?, TNF-?, IL-10 and IL-17), iNOS and chemokines (CCL1, CCL17, CCL26, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR8 and) were lower in symptomatic animals than in asymptomatic animals. In comparison with uninfected animals, symptomatic dogs had lower levels of expression of almost all molecules tested. In addition, the parasitic load was observed high and low symptomatic hepatic inflammation in animals when compared to asymptomatic. In conclusion, the decreased expression of cytokines, chemokines and chemokine receptors result in poor migration and activation of leukocytes, hindering control of parasitism and leading to the development of the disease.

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-02-13T20:11:14Z No. of bitstreams: 1 JayraJulianaPaivaAlvesAbrantes_DISSERT.pdf: 1189237 bytes, checksum: f928fa1545c34b4209cea93ae78bb7f0 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-02-16T00:23:25Z (GMT) No. of bitstreams: 1 JayraJulianaPaivaAlvesAbrantes_DISSERT.pdf: 1189237 bytes, checksum: f928fa1545c34b4209cea93ae78bb7f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-16T00:23:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 JayraJulianaPaivaAlvesAbrantes_DISSERT.pdf: 1189237 bytes, checksum: f928fa1545c34b4209cea93ae78bb7f0 (MD5) Previous issue date: 2016-03-22 / A infec??o genital pelo v?rus do papiloma humano (HPV) ? uma das causas mais frequentes de doen?as sexualmente transmiss?veis, em ambos os sexos, com maior preval?ncia da infec??o entre mulheres jovens, com vida sexualmente ativa, constituindo-se em um grave problema de sa?de p?blica. A infec??o persistente por HPVs de alto risco, em conjunto com eventos adicionais desencadeados pela exposi??o a fatores f?sicos, qu?micos e ambientais, disfun??o do sitema imune podem favorecer o desenvolvimento de les?es pr?-malignas e malignas da c?rvice uterina. O objetivo deste estudo foi estimar a preval?ncia do HPV e avaliar o perfil da resposta imune em mulheres infectadas pelo HPV, por meio dos n?veis de express?o de citocinas, TLR9 e Myd88, e correlacion?-las com a presen?a ou n?o de les?es. Foram inclu?das no estudo, mulheres com idade entre 16 e 85 anos, m?dia de 36,2 anos, desvio padr?o de 11.26. Do total de 225 mulheres, 126 foram recrutadas entre as atendidas pelo programa de rastreio do c?ncer de colo do ?tero e 99 que foram encaminhadas ? Maternidade Janu?rio Cicco com suspeita de les?o da c?rvice uterina. As pacientes que concordaram participar do estudo passaram por entrevista para obten??o de dados s?cio-demogr?ficos, seguida de exame cl?nico e coletas de dois esp?cimes de raspado cervical, um para an?lise citol?gica e outra para analise molecular destinado a detec??o do HPV. Nas mulheres com suspeita de les?o foi realizada a colposcopia para detec??o de poss?veis altera??es, e coletados dois fragmentos de tecido por bi?psia, um para an?lise histopatol?gica, e outro para obten??o de ?cidos nucleicos, destinado ? detec??o do HPV por PCR convencional e a an?lise da express?o de citocinas, TLR9 e MyD88 por PCR em tempo real. A preval?ncia global do HPV foi de 39,5%, sendo 18,8% em pacientes sem les?es, e 61,1% em mulheres com les?es na c?rvice uterina. As mulheres com m?ltiplos parceiros apresentaram maiores riscos de infec??o pelo HPV, enquanto que as que tiveram duas ou mais gesta??es tiveram um fator protetor. Observou-se correla??o entre altera??es cervicais e a infec??o pelo HPV. Os n?veis de express?o de RNA-m das citocinas pr?-inflamat?rias INF-?, TNF-?, IL-17 e anti-inflamat?ria IL-10 de pacientes infectados pelo HPV, tiveram seus n?veis de express?o mais alto no grupo com les?o em compara??o ao sem les?o, em rela??o ao controle. ? poss?vel que, o aumento na express?o das citocinas, principalmente IL-10 e IL-17, esteja associado a um processo inflamat?rio de natureza cr?nica presente nas les?es e pode estar relacionadas ao favorecimento da persist?ncia viral e prov?vel progress?o para les?es malignas. / Genital human papillomavirus (HPV) infection is one of the most common causes of sexually transmitted diseases in both genders, with a higher infection prevalence among young women sexually active, consisting in a serious public health problem. The persistent high-risk HPV infection with epigenetic events triggered by exposure to physical, chemical, environmental, beyond the dysfunction of the immune system, can favor the development of premalignant and malignant lesions of the uterine cervix. The objective of this study was estimate the HPV prevalence and evaluate the profile of the immune response in women, with and without cervical lesions associated with it; through the expression levels of cytokines, TLR9 and Myd88 in the uterine mucosa, establishing a correlation with the presence or absence of lesions and HPV. The study included women aged between 16 and 85 years, with an average of 36,2 years and standard deviation of 11.26. A total of 225 women participated of this study, 126 were recruited among women attending the screening program for cervical cancer and the other 99 were sent to maternity Janu?rio Cicco with a suspected uterine cervix injury. Patients who agreed to participate, were submitted to an interview to obtain socio-demographic data, followed by clinical examination and collection of two cervical scrape specimens, one for cytological analysis and another for molecular analysis in order to detect HPV. Colposcopy was performed in women who had suspected injury to detect these possible changes. It was collected two fragments of tissue in each biopsy, one for histopathological analysis and other to obtain nucleic acid, destined to detection of HPV by conventional PCR and, analysis of receptors and cytokines expression involved in the immune response by real-time PCR. The overall HPV prevalence was 39.5%, 61,1% in patients with lesions and 18,8% % in patients without lesions. Women with multiple partners, and those who had two or more pregnancies had higher risk of HPV infection. There was a correlation between cervical changes and HPV infection. The RNA-m expression levels of The pro-inflammatory cytokines INF-?, TNF-?, IL-17 and the anti-inflammatory IL-10 showed higher expression levels in the positive HPV injury group compared to uninjured, compared to control. It is possible that the increased expression of cytokines, especially IL-10 and IL-17 is associated with a chronic inflammatory process present in the lesions and can be related to favor viral persistence and likely to progress to malignant lesions.

Submitted by Ginamara Lima (ginaj@pucrs.br) on 2012-10-22T12:17:09Z No. of bitstreams: 1 442944.pdf: 2331033 bytes, checksum: b130d8539a518de2335d49422e1a70fa (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-22T12:17:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 442944.pdf: 2331033 bytes, checksum: b130d8539a518de2335d49422e1a70fa (MD5) / O presente estudo teve por objetivo analisar características histomorfométricas, imunoistoquímicas e clínicas de lesões orais da paracoccidioidomicose. A amostra foi composta por 50 prontuários e 50 blocos de parafina contendo espécimes biopsiados de lesões orais, ambos provenientes de pacientes portadores de paracoccidioidomicose diagnosticados no Serviço de Estomatologia do Hospital São Lucas da PUCRS no período compreendido entre os anos de 1977 e 2010. Informações sobre tempo de evolução da doença, número e tamanho das lesões orais, bem como contagem de eritrócitos, leucócitos, linfócitos, hematócrito, hemoglobina e eritrossedimentação foram coletadas dos prontuários dos pacientes. Cortes histológicos obtidos a partir dos espécimes em parafina foram submetidos às colorações de hematoxilina e eosina (H&E), Gomori-Grocott e processamento imunoistoquímico. As amostras foram agrupadas de acordo com a intensidade de compactação do granuloma, e as variáveis número de fungos, número de brotamentos, diâmetro dos fungos, diâmetro dos brotamentos, expressão imunoistoquímica de IL-2, TNF-alfa e IFN-gama foram avaliadas e correlacionadas. O diâmetro dos brotamentos foi significativamente maior nos granulomas de compactação intermediária quando comparados aos granulomas de maior compactação. As demais variáveis (número de brotamentos, número e diâmetro dos fungos, expressão de IL-2, TNF-alfa e IFN-gama, características clínicas e hematológicas) não exibiram alteração significativa de acordo com o grau de compactação dos granulomas. Foi observada correlação positiva entre número de brotamentos e número de fungos (r=0.834); diâmetro dos brotamentos e diâmetro do fungo (r=0.496); eritrócitos e número de fungos (r=0.420); eritrócitos e número de brotamentos (r=0.408); leucócitos e número de brotamentos (r=0.396). A correlação negativa ocorreu entre diâmetro e número de fungos (r=-0.419); diâmetro dos brotamentos e compactação do granuloma (r=-0.367); expressão de TNF-alfa e número de fungos (r=-0.372); expressão de TNF-alfa e número de brotamentos (r=-0.300). As características histológicas, imunológicas e clínicas das lesões orais da paracoccidioidomicose crônica não diferiram significativamente entre os pacientes da amostra avaliada. Os níveis de TNF-alfa nas lesões orais estão inversamente relacionados à intensidade da infecção. / The present study aimed at analyzing histomorphometric, immunohistochemical and clinical features of oral lesions of paracoccidioidomycosis. The sample comprised 50 medical charts and 50 paraffinized blocks of biopsed specimens of oral leisons, both from paracoccidioidomycosis patients diagnosed at Stomatology Department of Hospital São Lucas, PUCRS from 1977 to 2010. Data regarding disease duration, and size and number of oral lesions, as well as erythrocytes, leukocytes, lymphocytes, hematocrit, hemoglobin and erythrocyte sedimentation rate, were collected from medical charts. Histological cuts were obtained from the paraffinized specimens and subjected to hematoxylin and eosin (H&E), Gomori-Grocott and immunohistochemical staining. The sample was classified according to the density of granulomas, and the variables number and diameter of fungi, number and diameter of buds, and IL-2, TNF-alpha and IFN-gamma expression were analyzed and correlated. Bud diameter was significantly greater in intermediate density granulomas compared to higher density granulomas. The other variables (bud number, number and diameter of fungi, expression of IL-2, TNF-alpha and IFN-gamma, and clinical and hematological features) did not significantly change with the density of granulomas. There was a positive correlation between bud number and fungal cell number (r=0.834), bud diameter and fungal cell diameter (r=0.496), erythrocytes and number of fungi (r=0.420), erythrocytes and bud number (r=0.408), and leukocytes and bud number (r=0.396). Negative correlation occurred between number and diameter of fungal cells (r=-0.419), bud diameter and granuloma density (r=-0.367), TNF-alpha expression and number of fungal cells (r=-0.372), TNF-alpha expression and bud number (r=-0.300). Histological, immunological and clinical characteristics of oral lesions of chronic paracoccidioidomycosis did not differ significantly between patients in our sample. TNF-alpha levels in oral lesions were inversely correlated with intensity of infection.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-24Bitstream added on 2014-06-13T18:39:55Z : No. of bitstreams: 1 medeiros_ltl_me_botfm.pdf: 283518 bytes, checksum: dbcb08c9c963c43e9e5990d9795fb85f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Monócitos do sangue periférico de gestantes portadoras de pré-eclâmpsia encontram-se ativados endogenamente e secretam níveis elevados de radicais livres e citocinas inflamatórias. Este trabalho teve como objetivo avaliar se o estado inflamatório de monócitos, observado na pré-eclâmpsia, está associado à polarização da subpopulação de monócitos de perfil M1 no sangue periférico, correlacionando a expressão de receptores de superfície CD64, TLR2, TLR4, CD163 e CD206 com a produção de citocinas. Foram estudadas 90 gestantes, sendo 30 normotensas e 60 portadoras de pré-eclâmpsia, pareadas pela idade gestacional. Monócitos de sangue periférico obtidos de gestantes normais ou com pré-eclâmpsia foram cultivados por 18h na ausência ou presença de lipopolissacáride de Escherichia coli (LPS) ou de peptidoglicano (PG) de bactéria Gram-positiva. A expressão de receptores presentes na superfície da subpopulação de monócitos inflamatórios M1 (TLR2, TLR4 e CD64) e de monócitos supressores M2 (CD163 e CD206) foi detectada por de citometria de fluxo, empregando-se anticorpos monoclonais específicos, marcados com fluorocromos. Os resultados foram expressos como média da intensidade de fluorescência. Além disso, a produção de citocinas pró-inflamatórias associadas a padrão M1 (TNF-, IL-12p70 e IL-23) e anti-inflamatória, associada a perfil M2 (IL-10) foi avaliada no sobrenadante de cultura de monócitos pela técnica de ELISA. Os resultados foram analisados por testes não paramétricos, com nível de significância de 5%. A expressão de CD64 e TLR4 em monócitos, não estimulados, de gestantes com pré-eclâmpsia foi significativamente maior, enquanto a expressão de CD163 e CD206 foi significativamente menor em relação às gestantes normotensas, sugerindo a expressão de um perfil M1 de... / Monocytes from peripheral blood of pregnant women with preeclampsia are endogenously activated and secrete high levels of free radicals and inflammatory cytokines. This work aimed to evaluate whether the inflammatory state of monocytes observed in preeclampsia is associated with the polarization of monocyte to M1 profile in peripheral blood, correlating the expression of surface receptors CD64, TLR2, TLR4, and CD163 and CD206 with cytokine production. We studied 90 pregnant women, 30 normotensive and 60 with preeclampsia, matched for gestational age. Peripheral blood monocytes obtained from normotensive pregnant or preeclamptic pregnant women were cultured for 18h in the absence or presence of Escherichia coli lypopolysacharide (LPS) or peptidoglycan (PG) of Gram-positive bacteria, and the expression of surface receptors on M1 inflammatory monocyte subpopulation (TLR2, TLR4 and CD64) and M2 suppressor monocyte subpopulation (CD163 and CD206) were evaluated by flow cytometry, using specific monoclonal antibodies, labeled with fluorochromes. The values were expressed as the mean fluorescence intensity. Moreover, the production of proinflammatory cytokines associated with M1 profile (TNF-, IL-12p70 and IL-23) and the anti-inflammatory cytokine associated with M2 profile (IL-10) were evaluated in the monocyte supernatant of culture by enzyme immunoassay. Results were analyzed using nonparametric tests with significance level set at 5%. The expression of CD4 and TLR4 on non-stimulated monocytes, from women with preeclampsia was significantly higher, while the expression of CD163 and CD206 was significantly decreased compared with normotensive pregnant women, suggesting the predominance of monocyte M1 profile. Endogenous production of TNF-, IL-12p70 and IL-23 by monocytes was increased, while synthesis of IL-10 was lower in women with... (Complete abstract click electronic access below)