Orientador: Orlando Petrucci Júnior / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T03:58:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Torina_AnaliGalluce_M.pdf: 3740234 bytes, checksum: f37f64e7d0f1526a0fef521a621823f0 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo:Introdução: A resposta inflamatória após a circulação extracorpórea (CEC) em cirurgia cardíaca colabora para o aumento de mortalidade e morbidade pós-operatória. A ultrafiltração modificada (UFM) foi descri ta como capaz de melhorar a função pulmonar, hemodinâmica e inflamatória na população pediátrica submetida a cirurgia cardíaca. Entretanto, isto não está bem documentado e definido em pacientes adultos. Objetivo: Avaliar o efeito da ultrafiltração modificada em pacientes adultos submetidos a revascularização cirúrgica do miocárdio sob o aspecto inflamatório e clínico com uso de CEC. Material e Método: Foram estudados 37 pacientes divididos em dois grupos: 17 pacientes no grupo controle e 20 pacientes no grupo UFM. Analisamos variáveis demográficas, hemodinâmicas, pulmonares e mediadores inflamatórios na indução anestésica, durante a operação e até 48 horas de pós-operatório em ambos os grupos. Resultados: Não houve diferença significativa entre os dois grupos quanto aos dados demográficos e nas variáveis hemodinâmicas estudadas. Observamos aumento do hematócrito no grupo UFM imediatamente após a ultrafiltração quando comparado com o grupo controle (P<0,05), contudo, esta diferença não se manteve até o final do período de observação. A resistência das vias aéreas diminuiu no grupo UFM durante o intraoperatório. Observamos menor sangramento pós-operatório (P<0,01) e menor necessidade de transfusão (P=0,01) no grupo UFM. Não foi observado diferença entre os grupos para a IL6, P-selectina, E-selectina. A I-CAM apresentou aumento no grupo UFM logo após a ultrafiltração (P< 0,01). O receptor do fator de necrose tumoral alfa II (receptor TNF-? II) mostrou elevação dos níveis séricos ao final de 48 horas de observação no grupo UFM. Conclusão: A UFM não demonstrou diferença entre os grupos em relação aos parâmetros hemodinâmicos, respiratórios e inflamatórios estudados. O UFM proporcionou menor sangramento pós-operatório e menor necessidade de transfusão de concentrado de hemáceas. A UFM demonstrou ser segura e sem complicações relacionadas, podendo ser útil para o manejo da volemia intraoperatória / Abstract: Introduction: The systemic inflammatory response after cardiopulmonary bypass in cardiac surgery increases mortality and postoperative morbidity. The modified ultrafiltration (MUF) has been described in children and has been shown improvements on pulmonary function, hemodynamics, and inflammatory response. However, in adults, the same benefits were not well documented. Objective: Assess the inflammatory response and clinical outcomes of the modified ultrafiltration in adults underwent elective coronary artery bypass graft surgery. Material and Methods: Thirty-seven patients were evaluated either into two groups: Control group without MUF (N=17) and MUF group (N=20) submitted to 15 minutes of modified ultrafiltration. The demographics, hemodynamics, pulmonary and inflammatory mediators at the induction of anesthesia, during operation and up to 48 hours postoperatively were evaluated. Results: The demographics data and hemodynamic variables were comparable in both groups. The hematocrit was higher in the MUF group immediately after ultrafiltration when compared the the control group (P <0.05). However, this difference was not steady by the end of the observation period. The airway resistance decreased in the MUF group right after the ultrafiltration. The MUF group showed lower postoperative bleeding (P <0.01) and lower requirements of blood units transfusion (P = 0.01). The IL-6, P-selectin, and Eselectin, were comparable in both groups. The I-CAM showed an increase in the MUF group after ultrafiltration (P <0.01). The tumor necrosis factor receptor II was higher by 48 hours of postoperative time in the MUF group. Conclusion: The MUF showed no differences between groups regarding hemodynamic, respiratory function, and inflammatory mediators. The MUF provided lower postoperative bleeding and lower requirements for red blood cells units transfusion. The MUF showed to be safe and without complications, and might be useful for the fluid management during the cardiac surgeries. We were unable to demonstrate a significant impact of MUF on the outcome of adults after coronary artery bypass grafting surgeries / Mestrado / Pesquisa Experimental / Mestre em Cirurgia

Orientadores: Maria Heloisa Souza Lima Blotta, Fábio Hüssemann Menezes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T09:30:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_RomuloTadeuDiasde_D.pdf: 6549447 bytes, checksum: 24fbe2753f341d2925f429da63a49b0f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A presença de células T ativadas em lesões ateroscleróticas confirma a sua participação na progressão da doença. Recentemente, um novo subtipo de linfócitos TCD4+ produtores de IL-17 (TH17) foi descrito e a sua associação a doenças de caráter inflamatório, bem como a sua capacidade de induzir a produção de mediadores frequentemente encontrados em lesões ateroscleróticas (IL-1?? TNF-? ??TGF-? ??CCL2 e MMP) sugerem que possam ter uma participação na aterosclerose. O objetivo do presente estudo foi investigar componentes da resposta TH17 em lesões ateroscleróticas humanas e relacioná-los a outros integrantes da resposta imunológica. Como controle foram utilizados fragmentos da artéria aorta de 3 doadores de órgãos. Para tal, avaliamos fragmentos de placas ateroscleróticas obtidas de 41 pacientes com estenose crítica de carótida, submetidos à endarterectomia. A expressão gênica e protéica de diversos mediadores foi avaliada pelo método de RT-PCR em tempo real e imunoistoquímica, respectivamente. Em alguns experimentos fragmentos de placa aterosclerótica foram submetidos à estimulação in vitro com IL-23, IL-2, LPS, PHA ou ?CD3+?CD28, para posterior análise da expressão gênica (RT-PCR) e protéica (ELISA e citometria de fluxo) de mediadores relacionados à resposta TH17. A detecção do RNAm de IL-17 se restringiu a um pequeno número de amostras e em baixa concentração, enquanto a marcação imunoistoquímica foi negativa em todas as placas analisadas. Entretanto, observamos maior expressão relativa do RNAm de mediadores relacionados à resposta TH17 (IL-23, RorC, CCR4, IL-1?, TNF-? MMP-9), à resposta TH1 e TH2 (IFN-? e GATA-3), à resposta anti-inflamatória (FoxP3, IL-10, EBI3 e IL-27R) e a mediadores com potencial citotóxico (granzima A, perforina e granulisina) em placas de pacientes do que em amostras controle. Células positivas para IL-23, IL-1?, IL-18, ICAM-1, IL-10 e TGF- ? foram encontradas com maior frequência em placas classificadas como instáveis, ricas em macrófagos, células espumosas, cristais de colesterol e focos de necrose. Finalmente, a análise da suspensão celular obtida de fragmento de lesão revelou a presença de 1% de células IL-17+, enquanto a estimulação in vitro resultou em pequena produção de IL-17 apenas após estímulo com anti?CD3+ anti-CD28. Em conjunto, os resultados mostraram a expressão de componentes da resposta TH17, em associação com mediadores da resposta TH1, TH2 e Treg em lesões ateroscleróticas humanas / Abstract: The detection of activated T cells in human atherosclerotic plaques confirms their participation in the disease progression. In this scenario, IFN-? -producing T cells (TH1) are well recognized as having a pro-atherogenic role. Recently, a new subtype of IL-17-producing T helper (TH17) lineage of cells has been described and their association with inflammatory diseases, as well as their capacity to induce mediators frequently found in atherosclerotic lesions (IL-1? ? TNF-? ,?TGF-?,??CCL2 e MMP) suggest that they may have a role in atherosclerosis. The aim of this study was to investigate whether components of the immune response mediated by TH17 cells are present in human atherosclerotic lesions and their association with other immune mediators. For this purpose, 41 patients with critical stenosis of carotid submitted to endarterectomy were evaluated. Aortic fragments from organ donors were used as control. Carotid specimens were analyzed for mRNA and protein expression by real time RT-PCR and immunohistochemistry, respectively. In some experiments fragments of atherosclerotic plaques were incubated in vitro with IL-23, IL-2, LPS, PHA or ?CD3+?CD28 to further evaluate mRNA and protein expression. A low number of samples showed a small expression of IL-17 mRNA, while no staining for IL-17 was detected in any of the analyzed plaques. Up-regulation of IL-17 related genes (IL-23, RorC, CCR4, CCR4, IL-1?, TNF-?, MMP-9), as well as TH1 e TH2 (IFN-? e GATA-3), anti-inflammatory mediators (FoxP3, IL-10, EBI1 e IL-27R) and cytotoxic molecules (granzyme A, perforin e granulysin) mRNA expression were detected in patients plaques compared to control arteries. In addition, unstable plaques showed a high number of IL-23, IL-1?, IL-18, ICAM-1, IL-10 e TGF- ? ??granzyme B and perforin positive cells. Finally, the analysis of plaque derived cell suspensions revealed only 1% of IL-17+ cells, while in vitro stimulation resulted in IL-17 production only in the presence of anti-CD3+anti-CD28. Altogether our results showed components of TH17 response in association with mediators of TH1, TH2 and Treg response in human atherosclerotic lesions. Further studies are ongoing to elucidate the interaction, balance and collaborative potential among these effectors lineages in atherosclerosis control / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Helena Zerlotti Wolf Grotto / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T13:21:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Noronha_JoseFernandodeAlmeida_D.pdf: 5060365 bytes, checksum: 9a433693a12ebc4fc3a72a0639d93c73 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Introdução: Plaquetas reticuladas (PRs) são plaquetas jovens recentemente liberadas pela medula óssea para a circulação e que possuem alto conteúdo de RNA em seu citoplasma. As PRs são descritas como plaquetas grandes, densas e mais ativas no processo de formação do trombo hemostático. A participação das plaquetas ativadas nos fenÃ'menos vaso-oclusivos que acometem pacientes com síndrome falciformes (SF) já está documentada, mas a avaliação do papel das PRs não foi ainda descrito. Assim, avaliamos o número e a atividade das PRs, correlacionando-os com os níveis séricos de P-selectina solúvel (sCD62p), interleucinaâ?¿6 (IL-6), interleucina-3 (IL-3) e trombopoietina (TPO) em sangue periférico de pacientes em diferentes estágios clínicos das SF. Casuística e Métodos: Foram estudados 89 pacientes adultos, sendo 38 em fase â?¿estávelâ??, 27 em crise hemolítica (CH), 27 em crise vaso-oclusiva (CVO) e 30 indivíduos saudáveis (grupo controle - GC). Os parâmetros plaquetários, incluindo a quantificação de macroplaquetas foram determinados em analisador hematológico. Através da técnica da citometria de fluxo com o uso de anticorpos monoclonais e thiazole orange (TO), realizamos as identificações e quantificações das plaquetas ativadas (anti CD41a + anti CD62p), PRs (anti CD41a + TO) PRs ativadas (TO + anti CD62p). As dosagens de sCD62p, IL-6, IL-3 e TPO foram realizadas pela técnica de ELISA. Resultados: O número de macroplaquetas foi significativamente superior nas 3 fases clínicas das SF em relação ao GC. O número de plaquetas ativadas, tanto reticuladas como maduras foi superior em todas as fases clínicas quando comparadas ao GC. Os valores de PRs mostraram-se mais elevados no grupo de pacientes em CVO do que na fase â?¿estávelâ?? e na CH. Em todos os grupos as PRs apresentaram um maior grau de ativação quando comparadas às plaquetas maduras. Os pacientes em CVO apresentaram maiores níveis de sCD62p em relação ao GC. Nas diferentes fases das SF observamos níveis séricos elevados de IL-6, IL-3 e TPO, embora não tenha sido observada correlação entre essas determinações com os números absolutos de PRs, Plaquetas ativadas (CD62p+) e PRs ativadas (TO+/CD62p+). Conclusões: Os resultados sugerem a contribuição das PRs na trombogênese das Síndromes Falciformes. Níveis elevados das interleucinas provavelmente indicam a participação das mesmas no processo inflamatório que acompanha os fenÃ'menos de vaso-oclusão, mas aparentemente esses moduladores inflamatórios não exercem efeito sobre a trombopoiese em pacientes com SF / Abstract: Introduction: Reticulated Platelets (RPs) are youngest platelets released recently from bone marrow to the blood and are characterized by the high citoplasmatic RNA content. RPs are described as higher size, denser and more active in the formation of thrombus than mature platelets. The participation of activated platelets in vaso-occlusive process in sickle cell disease patients have been documented, but the evaluation of the RPs role has not been established at the moment. We evaluated the number and activity of RPs and correlated them with serum soluble P-selectin (sCD62p), Interleukin-6 (IL-6), Interleukin 3 (IL-3) and thrombopoetin (TPO) levels in patients with sickle cell diseases in different clinical expressions. Casuistic and Methods: Eighty-nine adult patients were studied: 38 in steady-state, 27 in hemolytic crisis (HC), 27 in vascular-occlusive crisis (CVO) and 30 healthy individuals (control groupâ?¿CG). Platelet parameters including the percentage of larger platelets were obtained by an automatic hematological analyzer. Monoclonal antibodies, thiazole orange (TO) dye and flow cytometric technique were used to identify and to quantify activated platelets (anti CD41a+ and anti CD62p+), RPs (anti CD41a+ and TO+) and activated RPs (TO+ and anti CD62p+). Soluble CD62p, IL-3, IL-6 and TPO determinations were measured by ELISA tests. Results: The number of macroplatelets was significantly higher in steady-state, CVO and HC groups than in CG. The number of activated mature platelets and activated RPs was higher in all stages of the disease when compared with CG. PRs values were more elevated in group of patients with CVO than in HC and steady-state. The degree of activation was higher in PRs than in mature platelets independently on sickle cell disease phase. CVO patients showed higher serum levels of sCD62p than CG. IL-6, IL-3 and TPO serum levels were increased in sickle cell disease, but there was not a correlation between those determinations and parameters related to platelets. Conclusions: Our results suggest that PRs contribute to the thrombogenesis process in sickle cell disease. Increased serum levels of interleukins probably indicate the participation of PRs in inflammatory process which is associated to vascular-occlusive phenomenon, but apparently those inflammatory mediators do not have an effect on thrombopoiese in sickle cell disease patients / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Lucia Nassi Castilho / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T17:01:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vasconcelos_EdilmaMariadeAlbuquerque_D.pdf: 990594 bytes, checksum: ec1dc188f8613c4270257732116a5e8b (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: Atualmente, a aterosclerose é definida como uma doença crônica inflamatória caracterizada por elevado estresse oxidativo gerado por células da parede vascular. Neste estudo foi avaliada, em monócitos humanos, a contribuição de espécies reativas de oxigênio (EROs) mitocondrial nos processos do estresse oxidativo e inflamatório de pacientes dislipidêmicos. Vinte e nove indivíduos hiperlipidêmicos primários, sendo catorze portadores de hipercolesterolemia e quinze com hiperlipidemia mista (ambos sem uso de fármacos) e dezoito indivíduos normocolesterolêmicos, não tabagistas foram selecionados para este estudo. A geração de EROs e o potencial de membrana mitocondrial foram determinados em células mononucleares intactas, por meio de citometria de fluxo e a concentração plasmática de LDL oxidada (LDL-ox) por meio de ELISA. Apenas os monócitos isolados de indivíduos hipercolesterolêmicos apresentaram maior geração de EROs, porém ambos os grupos apresentaram concentração sérica de colesterol da LDL, LDL-ox e apolipoproteína B maiores do que o grupo-controle. Presença de LDL pequenas e densas também foi encontrada nos hiperlipidêmicos. Nos pacientes com hiperlipidemia mista igualmente foram detectadas, adicionalmente, concentrações significativamente maiores de insulina, triglicérides, colesterol de VLDL e ácidos graxos livres. Correlações positivas e significativas entre a geração de EROs mitocondrial com as concentrações séricas de LDL-oxidada e da proteína quimiotática para monócito-1 (MCP-1), foram encontradas. Esses resultados sugerem que a geração de EROs mitocondrial por monócitos circulantes em pacientes hiperlipidêmicos primários contribui para o estresse oxidativo e, portanto, para o desenvolvimento da aterosclerose, patologia comum nestes indivíduos. A hiperlipidemia está também acompanhada da elevação de marcadores inflamatórios séricos (ácido úrico e contagem global dos leucócitos). A correlação negativa encontrada entre a concentração sérica da interleucina 6 (IL-6) e da proteína induzida pelo IFN-? 10 (IP-10), nos pacientes hiperlipidêmicos, sugere que a IL-6 possa estar agindo como uma citocina antiinflamatória / Abstract: Actually, atherosclerosis is characterized like an inflammatory chronic disease due to a high oxidative stress state generated by vascular wall cells. In present study, we investigated the contribution of reactive oxygen species (ROS) generation by circulating monocyte mitochondria to the oxidative stress frequently observed in high risk hyperlipidemic subjects. Twenty-nine primary hyperlipidemic subjects (14 hypercholesterolemic and 15 combined hyperlipidemic) and 18 normolipidemic individuals, without any drug treatment and non-smokers, were enrolled in this study. The mitochondrial monocyte ROS generation and the mitochondrial electrical transmembrane potential in intact polymorphonuclear cells were estimated by flow cytometry and plasma oxidized LDL (ox-LDL) was measured by ELISA. The hypercholesterolemic, but not the combined hypelipidemic subjects presented higher levels of monocyte ROS generation when compared to control group. Both hyperlipidemic subjects presented elevated plasma levels of total LDL, oxidized LDL and apolipoprotein B. Combined hyperlipidemic individuals presented additionally increased levels of small dense LDL particles, insulin, triglycerides, VLDL-cholesterol and free fatty acids. Furthermore, highly significants positives correlations between monocyte ROS generation with oxidized LDL and monocyte chemotactic protein 1 (MCP-1) levels, were found. These data suggest that mitochondrial ROS production by circulating monocytes from primary hyperlipidemic subjects can contribute to the oxidative stress and hence to atherosclerosis, disease frequently found in this group. The hyperlipidemia is also associated with high levels of inflammatory markers (uric acid and leukocyte global count). A significant negative correlation between interleukin-6 (IL-6) and interferon-inducible protein 10 (IP-10) levels found in hyperlipidemic individuals may suggest an antinflamatory propertie of citokine IL-6 / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Maria Alice da Cruz-Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T19:23:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zago_GabrielaMariotoni_M.pdf: 5451987 bytes, checksum: 84e15c6e492816ce6e4cc4c92760e544 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A barreira hematoencefálica (BHE) é a principal estrutura controladora da manutenção da homeostase do SNC. A perda da integridade da BHE em respostas inflamatórias do SNC, desencadeada por agentes neurotóxicos, têm sido associadas ao desenvolvimento de sinais neurológicos. O veneno da aranha Phoneutria nigriventer (PNV) produz sinais e sintomas excitatórios em humanos e sua ação neurotóxica sugere habilidade potencial em alterar a permeabilidade da BHE. Nesse trabalho, o PNV foi utilizado como ferramenta para avaliar a susceptibilidade da BHE em diferentes regiões anatômicas cerebrais de ratos. Após injeção sistêmica do PNV (0.85 mg/Kg in 0.5 ml), os ratos anestesiados foram perfundidos 1, 2 e 5 h após a injeção, com solução fixadora à qual foi adicionado traçador extracelular eletron-opaco. Córtex motor fronto-parietal, substância cinzenta periaquedutal, núcleos da base e amigdala foram dissecados e processados para microscopia eletrônica de transmissão. O estado funcional da BHE foi avaliado considerando evidências do vedamento da barreira (edema vasogênico e extravasamento do traçador) e a resposta de elementos do tecido circunjacente (astrócitos, terminais sinápticos, populações de células). Além disso, foi investigada a expressão das proteínas GFAP, o principal filamento intermediário dos astrócitos, proteína S100, uma família de proteínas ligantes de cálcio e as citocinas pró-inflamatórias, IFN-? e TNF-a, através de marcação imunohistoquímica, no hipocampo e cerebelo. Logo após a administração do PNV, os animais mostraram sinais indicativos de envolvimento do SNC, SNP e SNA. Nossos resultados mostraram que todas as regiões analisadas apresentaram sinais morfológicos de reação defensiva, tais como migração de micróglia perivascular reativa, pés-vasculares astrocitário edemaciados e macrófagos ativos circulantes. Entretanto, apenas o córtex motor fronto-parietal mostrou número significante de vasos afetados em relação aos controles e às outras áreas anatômicas (1 h p.i.). Nos grupos controle, uma expressão basal de GFAP e S100B foi mantida inalterada durante os períodos de observação, enquanto nenhuma produção fisiológica das proteínas TNFa e INF? ocorreu. Por outro lado, a análise dos grupos tratados com PNV mostrou que, variavelmente, todas as proteínas investigadas aumentaram sua expressão no cerebelo e hipocampo ao longo do tempo após a injeção do veneno. O aumento da GFAP no cerebelo foi mais precoce e mais forte do que no hipocampo. Essa gliose mais evidente no cerebelo, provavelmente justifica estudos prévios, onde o extravasamento do traçador foi menor nessa região do que hipocampo, demonstrando assim, uma maior resistência da BHE do cerebelo. Outros mecanismos moleculares envolvidos poderiam ser a expressão de citocinas pró-inflamatórias TNFa e INF?, cuja modulação diferente em hipocampo e cerebelo de animais tratados com PNV, poderia também ter papel nas diferenças de permeabilidade da BHE vistas em ambas as áreas após PNV. Nosso trabalho dá suporte à hipótese de que os sinais e sintomas apresentados pelos animais durante o intervalo de tempo, após a injeção de PNV e o sacrifício, refletem alterações fisiológicas em curso, que por sua vez se revela ao nível histológico e ultraestrutural no desigual envolvimento da BHE nas diferente regiões cerebrais analisadas. Os vasos do córtex motor fronto parietal foram mais afetados pelo PNV, do que as demais regiões, confirmando a existência de diferenças regionais na capacidade do tecido local de mediar eventos requeridos para que ocorram as alterações da permeabilidade da BHE e para a invasão de populações celulares. O veneno de Phoneutria nigriventer representa uma importante substância natural, cuja complexa composição pode ser explorada em relação à ação de drogas que agem no SNC / Abstract: The blood¿brain barrier (BBB) is of pivotal importance to maintain homeostasis of the CNS, as it closely regulates the composition of the interstitial fluid in the brain. The loss of BBB integrity in CNS inflammatory responses triggered by neurotoxic agents has been associated with the development of neurological signs. Phoneutria nigriventer armed spider venom (PNV) produces excitatory signals and symptoms in humans, and its recognized neurotoxic action suggests a potential ability to alter BBB permeability. In this work, the PNV was used as tool to analyzing the BBB susceptibility of different rat brain anatomic regions. After PNV systemic injection (0.85 mg/ Kg in 0.5 ml) the rats were perfused at 1, 2 and 5 h post-injection (p.i.) with fixative solution to which had been added an electro-opaque extracellular tracer. Frontal-Parietal Motor Cortex, Periaqueductal Gray Matter, Base Nucleus and Amygdala were dissected and processed for routine transmission electron microscopy. The functional state of the BBB was evaluated considering evidences of the tightness of the barrier (vasogenic edema and tracer extravasation) and the response of elements of circumjacent tissue (astrocytes, synaptic endings, cells population). Besides, it was investigated the expression of the GFAP, the major intermediate filament of astrocytes, S100 protein, a family of calcium-binding proteins, and IFN-? and TNF-a pro-inflammatory cytokines, through imunohistochemistry labeling, in the hippocampus and cerebellum. Soon after PNV dministration the animals showed clinical signs indicative of peripheral, autonomic and central nervous system involvement. Our findings showed that all regions analyzed presented morphological signs of defensive reaction, such as migrating reactive perivascular microglia, swollen astrocytes end-feet and circulating active macrophages. However, only FPMC showed significant number of affected vessels in relation to controls and the other anatomic areas (1 h p.i.). A basal expression of GFAP and S100 was maintained unaltered along the periods of observation, whereas none physiologic production of TNFa and INF? proteins has occurred in control groups. In contrast, analysis of the PNV-treated groups showed that all investigated proteins variably enhanced its expression along the time-course after venom injection in cerebellum and hippocampus. The increase of GFAP in cerebellum is more precocious and stronger than in hippocampus. A more prominent reactive gliosis by cerebellum over hippocampus would be supposedly one of the molecular events underlying the previous findings showing to be cerebellum BBB more resistant to leakage than hippocampus. Other possible molecular mechanism involved would be the expression of proinflammatory TNFa and INF? cytokines, whose different modulation in cerebellum and hippocampus of PNV-treated animals could be also involved in differences of permeation of BBB seen in both areas. Our study further support the idea that the symptomatic interval after systemic P. nigriventer spider venom injection is characterized by sequential physiologic changes that are reflected in histological and ultrastructural preparations and reveal that BBB impairment is unequal in different anatomical brain areas. The Fronto-Parietal Motor Cortex vessels are more targeted for PNV, confirming the existence of regional differences in the capacity of the local tissue of mediating the events required for the changes of BBB permeability and for cell invasion. Phoneutria nigriventer venom represents an important natural substance, whose complex composition should be explored in terms of CNS acting drugs / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientador: Nicola Amanda Conran Zorzetto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T08:53:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Miguel_LedianaIagalo_M.pdf: 1386194 bytes, checksum: b81f5aa45e96b255588df48747c1397c (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A adesão anormal das células brancas e vermelhas ao endotélio, que desencadeia numa diminuição do fluxo de sangue na microcirculação, é um dos principais fatores envolvidos na iniciação da vaso-oclusão em pacientes falciformes (AF). O estado inflamatório crônico, característico nos pacientes com AF, eleva a circulação de citocinas, as quais podem contribuir significativamente para a ativação e adesão das células vermelhas e brancas ao endotélio. O óxido nítrico (NO) e a via de sinalização dependente em NO têm importante efeito inibidor nas propriedades adesivas de leucócitos. Drogas que aumentem a biodisponibilidade de NO ou que atuem na via de sinalização NO-GMPc podem ser benéficas no tratamento de alguns aspectos da AF. Já é de conhecimento que pacientes com AF apresentam níveis elevados de algumas citocinas presentes no plasma, assim sendo, este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos in vitro das citocinas nas propriedades adesivas de neutrófilos e células vermelhas de indivíduos controles e pacientes com AF. Adicionalmente, foram determinados os efeitos de BAY 73-6691, um inibidor da enzima hidrolizante de GMPc, fosfodiesterase 9A (PDE9A) e BAY 41-2272, um ativador de guanilato ciclase, na ausência ou presença da estimulação pelas citocinas na adesão dessas células. Os neutrófilos e as células vermelhas de indivíduos controles e pacientes com AF foram isolados de sangue periférico. A adesão das células à fibronectina foi determinada utilizando o ensaio de adesão estático na presença ou ausência das citocinas IL-8 (10-500ng/ml), TNF-alpha (10-100ng/ml) e GM-CSF (0,1-10ng/ml) e/ou na presença/ausência de BAY 73-6691 (60µM), BAY 41-2272 (60nM) ou DMSO como veículo (0.2%v/v). Como previamente demonstrado, os neutrófilos de pacientes com AF (neutrófilos AF) possuem uma maior capacidade de aderir à FN do que os neutrófilos de indivíduos controle (neutrófilos CON). A estimulação das células in vitro com as três citocinas aumentaram significativamente as adesões à FN dos neutrófilos CON e aumentou ainda mais a adesão dos neutrófilos AF. A incubação de ambos os neutrófilos, CON e AF, com BAY 73-6691, mas não BAY 41-2272, reduziu significativamente as propriedades adesivas à FN; esse evento foi acompanhado por uma diminuição da expressão das moléculas de adesão, L-selectina e CD11b (subunidade Mac-1) na superfície de neutrófilos AF. Além do mais, nas concentrações utilizadas, BAY 73-6691, mas não o BAY 41-2272, diminui significativamente a adesão de neutrófilos CON e AF após estimulação com IL-8, TNF-a e GM-CSF. No entanto, esse evento não foi acompanhado por alterações na expressão da moléculas de adesão na superfície de neutrófilos AF quando estimulados com IL-8. As células vermelhas de indivíduos AF também apresentaram uma maior capacidade de se aderir à FN quando comparadas às células de indivíduos controles. No entanto, ao contrário dos neutrófilos, na presença de IL-8 (10-500ng/ml) e TNF-a (0.1-1µg/ml), não houve alteração das propriedades adesivas dessas células tanto de indivíduos controles quanto das células de pacientes com AF. Além disso, BAY 73-6691 e BAY 41-2272, não alteraram a adesão basal tanto das células vermelhas de controles quanto pacientes com AF. Os principais mediadores inflamatórios, utilizados em concentrações fisiologicamente relevantes, foram capazes de aumentar as propriedades adesivas de neutrófilos, mas não das células vermelhas, de indivíduos controles e AF. Portanto, sugerimos que as citocinas inflamatórias circulantes podem desempenhar um papel na indução das propriedades adesivas dos neutrófilos em pacientes falciformes; em contrapartida, outros fatores além do estímulo inflamatório, podem ser mais importante para induzir a adesão das células vermelhas de pacientes AF. Dados sugerem que agentes que aumentam os níveis de GMPc intracelular podem ser úteis para reduzir as propriedades adesivas de neutrófilos AF, mesmo na presença de um estado inflamatório. PDE9A é altamente expressa pelas células hematopoiéticas e a inibição desta enzima, com conseqüente elevação de GMPc, pode representar um alvo terapêutico para drogas que são tecido/célula específicas, necessitando de mais estudos in vivo e in vitro para a terapêutica de AF / Abstract: The adhesion of both red and white cells to the vessel walls of the microcirculation initiates vaso-occlusion in sickle cell disease (SCD). The chronic inflammatory nature of SCD leads to elevation of circulating cytokines in patients, which may contribute significantly to the activation of red and white cells and their consequent adhesion. Nitric oxide (NO) and the NO-dependent signaling pathway have important inhibitory effects on cellular adhesive properties. Drugs that enhance NO bioavailability or NO-cGMP-dependent signaling may hold potential for treatment of various aspects of SCD. It is known that levels of certain cytokines are augmented in the plasma of SCD individuals; therefore, this study aimed to observe the effect of cytokines, on the in vitro adhesive properties of neutrophils (neu) and red blood cells (RBC) from healthy control (CON) and steady-state SCD (SCD) individuals. Furthermore, the effects of BAY 73-6691, an inhibitor of the cGMP-hydrolyzing enzyme, phosphodiesterase 9A (PDE9A) and BAY 41-2272, a guanylate cylase activator, on non-stimulated and cytokine-stimulated cell adhesion were determined. Neutrophils and red blood cells (RBC) were isolated from the peripheral blood of CON and SCD individuals. Cell adhesion to immobilized fibronectin was assessed using static adhesion assays in the presence or absence of the cytokines, IL-8 (10-500ng/ml), TNF-alpha (10-100ng/ml) and GM-CSF (0,1-10ng/ml) and/or in the presence/absence of BAY 73-6691 (10-60µM), BAY 41-2272 (60nM) or DMSO vehicle (0.2%v/v). As previously demonstrated, SCDneu have a greater capacity to adhere to FN than CONneu. Stimulation of cells in vitro with all three cytokines significantly augmented both CONneu adhesion to FN and further increased SCDneu adhesion. The incubation of both CONneu and SCDneu with BAY 73-6691, but not BAY 41-2272, significantly reduced their adhesions to FN; this was accompanied by a decrease in the expressions of the L-selectin and CD11b (Mac-1-subunit) adhesion molecules on the SCAneu surface. Furthermore, BAY 73-6691, but essentially not BAY 41-2272, significantly inhibited CONneu and SCDneu adhesion stimulated by IL-8, TNF-alpha and GM-CSF. However, this was not accompanied by alterations in adhesion molecule presentation on IL-8-stimulated SCAneu. As previously reported, SCD RBC have a greater capacity to adhere to FN, in vitro, compared to CON RBC. However, in contrast to neutrophils, cytokines IL-8 (10-500ng/ml) and TNF-alpha (0.1-1µg/ml) did not alter the capacities of neither CON RBC nor SCD RBC to adhere to FN. Furthermore, BAY 73-6691 and BAY 41-2272 did not affect either basal CON RBC or SCD RBC adhesion. Key SCD inflammatory mediators were found, at physiologically relevant concentrations, to augment the adhesive properties of neutrophils from control and SCD individuals. Circulating inflammatory cytokines may play a role in the induction of leukocyte adhesive properties in SCD; in contrast factors other than inflammatory stimuli may be more important for induction of SCD RBC adhesion. Data suggest that elevation of intracellular cGMP may be an important approach for reducing SCD leukocyte adhesive properties, even in an inflammatory environment. PDE9A is highly expressed in hematopoietic cells and inhibition of this enzyme, with consequent augmentation of cGMP, may represent a tissue/cell-specific therapeutic drug target worthy of further in vitro and in vivo studies as a therapy for SCD / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientadores: Claudia Herrera Tambeli, Maria Claudia G. de Oliveira Fusaro / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-15T16:19:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teixeira_JulianaMaia_M.pdf: 2254823 bytes, checksum: cacfa6e93ba7783f863a22087d35a8a7 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Dados obtidos recentemente em nosso laboratório demonstram que a ativação dos receptores P2X3 e P2X2/3 pelo ATP endógeno é essencial para o desenvolvimento da hiperalgesia mecânica induzida pela carragenina no tecido subcutâneo da pata de ratos. Além dos receptores P2X3, dos sete subtipos de receptores P2X, os receptores P2X7 também possuem um papel importante nos processos de dor e inflamação. No entanto, o papel desses receptores na hiperalgesia mecânica induzida pela carragenina no tecido subcutâneo da pata de ratos e o mecanismo pelo qual a ativação dos receptores P2X7 contribui para essas respostas hiperalgésicas ainda não eram conhecidos. Portanto, os objetivos desse trabalho foram (1) Estudar se o ATP endógeno, via ativação de receptores P2X7, contribui para a hiperalgesia mecânica induzida pela carragenina e caracterizar em que período de tempo o ATP endógeno, via ativação de receptores P2X7, contribui com o desenvolvimento dessa resposta hiperalgésica e (2) Testar a hipótese de que o mecanismo pelo qual a ativação dos receptores P2X7 contribui para a hiperalgesia mecânica induzida pela carragenina é através da sensibilização indireta dos nociceptores aferentes primários. De acordo com o objetivo (1): A co-administração da carragenina com os antagonistas de receptor P2X7, oATP e A-438079, reduziu significativamente a hiperalgesia mecânica induzida pela carragenina e essa resposta hiperalgésica foi reduzida 1, 2, 3 e 6 horas após as administrações. De acordo com o objetivo (2): A co-administração dos antagonistas de receptor P2X7, oATP e A-438079, com a carragenina reduziu significativamente o aumento na concentração tecidual das citocinas pró-inflamatórias TNF-_, IL-6 e CINC-1 mas não de IL-1_ induzida pela carragenina. Os resultados do primeiro objetivo demonstram que a ativação dos receptores P2X7 pelo ATP endógeno contribui para a hiperalgesia induzida pela carragenina e os resultados do segundo objetivo mostram que o mecanismo pelo qual os receptores P2X7 contribuem para a hiperalgesia mecânica induzida pela carragenina é através da sensibilização indireta dos nociceptores aferentes primários mediada pela liberação prévia de citocinas inflamatórias como TNF-_, IL-6 e CINC-1. Esses resultados sugerem que, como a ativação dos receptores P2X7 pelo ATP endógeno é fundamental para o desenvolvimento da hiperalgesia inflamatória, os receptores P2X7 podem ser alvos farmacológicos interessantes para o desenvolvimento de medicamentos usados no controle da dor inflamatória / Abstract: We have recently demonstrated that activation of P2X3 and P2X2/3 receptors by endogenous ATP is essential for the development of carrageenan-induced mechanical hyperalgesia in the subcutaneous tissue of the rat's hind paw. In addition to P2X3 receptors, among the seven subtypes of P2X receptors, P2X7 receptors also have an important role in pain and inflammation. However, the role of these receptors in carrageenan-induced mechanical hyperalgesia in the subcutaneous tissue of the rat's hind paw and the mechanism by which the activation of P2X7 receptors contributes to these hyperalgesic responses were not yet known. Therefore, the aim of this study were (1) To study whether endogenous ATP via activation of P2X7 receptors contributes to carrageenan-induced mechanical hyperalgesia and characterize the period of time in which endogenous ATP via activation of P2X7 receptors, contributes to the development of carrageenan-induced mechanical hyperalgesia and (2) To test the hypothesis that the mechanism by which activation of P2X7 receptors contributes to carrageenan-induced mechanical hyperalgesia is through an indirect sensitization of the primary afferent nociceptors. According to the first aim: Co-administration of carrageenan with the P2X7 receptor antagonists, oATP or A-438079, significantly reduced carrageenan-induced mechanical hyperalgesia. This hyperalgesic response was reduced 1, 2, 3 and 6 hours after administrations. According to the second aim: Co-administration of the P2X7 receptor antagonists, oATP or A-438079 with carrageenan significantly reduced the increase in tissue concentration of proinflammatory cytokines TNF-_, IL-6 and CINC-1, but not IL-1_ induced by carrageenan. The results of the first aim demonstrate that activation of P2X7 receptors by endogenous ATP contributes to the hyperalgesia induced by carrageenan and the results of the second aim show that the mechanism by which P2X7 receptors contribute to carrageenan-induced mechanical hyperalgesia is through indirect sensitization of the primary afferent nociceptors mediated by previous release of inflammatory cytokines such as TNF-_, IL-6 and CINC-1. Because the activation of P2X7 receptors by endogenous ATP is essential for the development of inflammatory hyperalgesia, P2X7 receptors may be potential pharmacological targets for developing drugs to control inflammatory pain / Mestrado / Fisiologia Oral / Mestre em Odontologia

Orientador: Sarah Monte Alegre / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-11T07:51:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ortiz_JosianeNovetiMorais_M.pdf: 1470071 bytes, checksum: 08c02e85220eefda78e3311ccc0a0153 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A obesidade é uma doença cuja prevalência vem aumentando de forma global em todas as faixas etárias, raças e em ambos os sexos, e está associada a altas taxas de morbidade e mortalidade. Obesos desenvolvem também hiperinsulinemia e resistência à insulina, o que pode levar ao aparecimento de diabetes tipo 2 (DM). Recentemente foi demonstrado que o tecido adiposo, mais que um local de acúmulo de reservas energéticas, desempenha papel de um verdadeiro órgão secretor de moléculas sinalizadoras (adipocinas) que atuam em diversos locais do organismo. O acúmulo de tecido adiposo causado pela obesidade acarreta um aumento da produção de adipocinas, como o Fator de Necrose Tumoral Alfa (TNF-a) e a Interleucina-6 (IL-6), que ao estimular a produção de proteínas de fase aguda pelo fígado, conduzem a um estado inflamatório subclínico, associado ao surgimento das comorbidades presentes na obesidade. A adiponectina, produzida pelo tecido adiposo, ao contrário, exerce um papel protetor, diminuindo a resistência à insulina, porém encontra-se paradoxalmente diminuída em obesos. Ajudar a entender as interações existentes entre obesidade, adipocinas e resistência à insulina, avaliando concentrações séricas de adiponectina, TNF-a, IL-6, Proteína C-reativa (CRP) em pacientes obesos graves com (IT) ou sem (NT) intolerância à glicose, bem como em controles, antes e após infusão de insulina, é o objetivo deste trabalho. Para tanto, 32 indivíduos obesos (15 NT, 11 IT e 6 DM; IMC=50,2±2,2; 48,3±2,2 e 51,0±3,0Kg/m2) e 9 indivíduos eutróficos (CT=22,3±0,6Kg/m2) classificados a partir de teste oral de tolerância à glicose, pareados por idade e sexo, realizaram clamp euglicêmico hiperinsulinêmico (180 min; infusão de insulina - 40µU/min·m2). Adiponectina, TNF-a, IL-6, e CRP foram dosados em jejum e aos 180 minutos do clamp. Antes do início do estudo foi realizada bioimpedância elétrica (BIA) para determinação da composição corporal. Os pacientes obesos eram resistentes à insulina (sensibilidade à insulina ou ¿M¿: NT=28,5±3,4 IT=23,3±1,6 e DM=16,8±3,4; todos p<0,001 vs. CT=52,5±2,7 µmol/min/KgMM). As concentrações basais de TNF-a, IL-6 e CRP eram similares entre os subgrupos de obesos, maiores que nos controles (todos p<0.01) e relacionadas independentemente ao IMC e/ou à % gordura corporal. As concentrações basais de adiponectina eram menores nos obesos (NT=7,5±1,4; IT=5,6±0,9; DM=3,3±0,7 vs. CT=11,6±1,4 µg/ml) e direta e independentemente relacionadas à sensibilidade à insulina e inversamente com as medidas de adiposidade, glicemia e insulinemia. A infusão de insulina diminuiu a adiponectinemia nos obesos independentemente do grau de tolerância à glicose (p =0,009) e exerceu pouco efeito sobre as demais citocinas. Portanto, as concentrações circulantes elevadas de TNF-a, IL-6 e CRP em pacientes com obesidade grau III não dependem do grau de tolerância à glicose e não se modificam sob infusão aguda de insulina. As concentrações circulantes de adiponectina encontram-se diminuídas, variando de acordo com o grau de tolerância à glicose, e sofrem ação inibitória da insulina. A hiperinsulinemia presente nos pacientes obesos pode contribuir para diminuir a adiponectinemia acarretando um aumento ainda maior da resistência à insulina e da conseqüente hiperinsulinemia / Abstract: Obesity is associated with a cluster of metabolic alterations such as insulin resistance, hypertension, and dyslipidemia and with a low-grade systemic inflammation, which is presumed to play a role in the development of insulin resistance, cardiovascular disease (CVD) and type 2 diabetes mellitus (DM). Adipocytokines or adipokines are synthesized by adipose tissue, released into the circulation and may act as signaling molecules. High circulating levels of Tumor Necrosis Factor-Alpha (TNF-a) and Interleukin-6 (IL-6) in adipose tissue have been demonstrated in obesity. Adiponectin, abundantly expressed in white adipose tissue, seems to play a protective role against atherosclerosis and insulin resistance but is decreased in obesity. The role of insulin sensitivity and insulin levels on the modulation of adiponectin concentrations in humans remains unclear. Aim: to evaluate the acute insulin effect on circulating adiponectin, TNF-a, IL-6 and C-reactive protein (CRP) and their relationship with insulin resistance in normal subjects and in class III obese subjects with normal (NGT) or impaired glucose tolerance (IGT). Methods: 32 obese, 15 NGT, 11 IGT and 6 DM subjects (BMI=50.2±2.2; 48.3±2.2 and 51.0±3.0Kg/m2) and 9 lean subjects (CT 22.3±0.6Kg/m2) received an OGTT and a 3h-euglycemic clamp (insulin infusion - 40µU/min·m2). Adiponectin, TNF-a, IL-6 and CRP were assayed at fasting and at 180min of insulin infusion. BIA was performed before the study to assess body composition. Results: Obese patients were insulin resistant (M:NGT=28.5±3.4; IGT=23.3±1.6 and DM=16.8±3.4; all p<0.001 vs. CT=52.5±2.7 µmol/KgFFM·min). Fasting TNF-a IL-6 and CRP were similar among obese subgroups, higher than CT (p<0.01) and related to BMI and/or fat mass. Adiponectin was lower in obese (NGT=7.55±1.26; IGT=5.55±0.95; DM=3.31±0.75 vs. CT=11.56±1.37 µg/ml) and directly and independently related to M after adjustment for waist, fat mass and BMI (p<0.001). Insulin infusion lowered adiponectin only in obese subjects and little affected the other cytokines. Discussion: In severely obese subjects, TNF-a, IL-6 and CRP are increased independently of glucose tolerance status, and are not affected in the short-term by insulin. Adiponectin levels are decreased in these subjects, according to the glucose tolerance degree, and are downregulated by insulin infusion. More importantly, the persistent hyperinsulinemia can contribute to reduce the adiponectin expression, contributing to further insulin resistance and hyperinsulinemia / Mestrado / Ciencias Basicas / Mestre em Clinica Medica

O aumento da adiposidade corpórea pode gerar diversos mediadores inflamatórios com capacidade de influenciar a proliferação e a diferenciação hematopoética e, consequentemente, a complexa regulação da hematopoese. Por isso, propusemo-nos, neste trabalho, avaliar a influência do aumento da adiposidade corpórea sobre a proliferação e a diferenciação de células hematopoéticas, bem como sua capacidade em sintetizar citocinas. Ratos Wistar, machos foram alimentados com uma dieta rica em lipídios durante 14 semanas. Após esse período foram avaliados hemograma, mielograma, perfil lipídico, concentrações séricas de leptina, insulina e adiponectina. Citômetria de fluxo foi utilizada para avaliação da porcentagem de células CD34+/CD133+, bem como o ciclo celular de células medulares. Células medulares foram utilizadas para avaliar a atividade proliferativa in vitro e a capacidade de diferenciação, in vitro, na presença de IL-3, EPO, GM-CSF e G-CSF. Animais, alimentados com dieta hiperlipídica, apresentaram maiores concentrações de leptina circulante, com aumento de gordura corporal, aumento da concetração de proteína C reativa, colesterol total, LDL, VLDL e triacilglicerol. O hemograma apresentou neutrofilia absoluta e a medula óssea apresentou-se hipercelular com aumento do número de granulócitos maduros e da população celular CD133-/CD34+. Os resultados dos testes in vitro demonstraram aumento da capacidade de síntese de IL-3 e aumento de G-CSF, com aumento do potencial proliferativo, também evidenciado pelo maior número de células medulares na fase S/G2/M, bem como o aumento da diferenciação granulocítica. Esses resultados sugerem que a leucocitose e neutrofilia observadas em situações de aumento da adiposidade corpórea são decorrentes de uma complexa modulação do sistema hematopoético. / The body fat increase can generate various inflammatory mediators, that are capable to influence the proliferation and differentiation of hematopoietic cells and consequently modulate the complex regulation of the hematopoiesis. In this study we have proposed to evaluate the effect of increase body fat on the proliferation and differentiation of hematopoietic cells, as well as its ability to synthesize cytokines. Male Wistar rats were subjected to a high fat diet during a period of 14 weeks. After that period were evaluated hemogram, mielogram, lipid profile and the serum concentrations of leptin, insulin and adiponectin. Flow cytometry was used to evaluate the percentage of CD34+/CD133+, as well as the cell cycle of bone marrow cells. Bone marrow cells were used to perform the proliferation and differentiation capacity in vitro in the presence of IL-3, EPO, GM-CSF and G-CSF. Animals fed high-fat diet had higher concentrations of circulating leptin with increase body fat, and increase of C-reactive protein, total cholesterol, LDL, VLDL and triacylglycerol concentrations. The hemogram showed absolute neutrophilia and a hypercellular bone marrow with increase of granulocytic mature population and CD133-/CD34+ cells. The results in vitro, showed an increase of IL-3 and G-CSF production, and higher proliferative potential with an increase in S/G2/M bone marrow cell cycle phases, as well as an increase of the granulocytic differentiation. The results suggest that leukocytosis and neutrophilia observed in this model of body fat increase are in fact a result of a complex modulation of the hematopoietic system.

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