Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-12T15:33:27Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao_Final_Digital.pdf: 1044188 bytes, checksum: 49fcb98340d75c059b4fc044e603cce8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-12T15:33:27Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertacao_Final_Digital.pdf: 1044188 bytes, checksum: 49fcb98340d75c059b4fc044e603cce8 (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / CAPEs / A prevalência de doenças alérgicas, como rinite e asma, é menor em países subdesenvolvidos, onde há uma maior exposição a agentes infecciosos, como os helmintos. A relação entre infecções com T. trichiura e a prevalência das doenças alérgicas e reatividade cutânea ainda não está estabelecida. Os estudos divergem quanto à alteração (potencializar ou reduzir) do quadro clínico e/ou testes cutâneos, bem como, a carga parasitária da população estudada. O estudo teve como objetivo verificar se existe diferença entre a ocorrência de asma alérgica, prick test, níveis séricos das citocinas IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α e anticorpos IgE anti-ascaris em crianças com infecção ativa por T. trichiura. Para isto, crianças com ou sem asma foram definidas pelo questionário ISAAC, foram realizados o prick-test, parasitológico (Hoffman/Kato Katz) e coleta de sangue, que foi submetido a cultura (estimulada com PHA) e o sobrenadante coletado para a dosagens das citocinas (CBA). A prevalência de crianças com parasitológico positivo foi de 16,9 % (61/361 crianças), entre essas 27,9 % (17/61) foram positivas para infecção por Trichuris trichiura (12/17) ou co-infectadas por Trichuris trichiura/ Ascaris lumbricoides (5/17). O grupo de pacientes infectados, com ou sem asma, produziram níveis significantemente elevados para todas as citocinas em relação ao grupo controle. Além disso, o grupo dos pacientes infectados sem asma apresentou um tendência maior de produção de IL-6, TNF-alfa e IL-10 que os com asma; os pacientes infectados e asmáticos apresentaram uma menor reatividade no Prick Test quando comprado aos asmáticos não infectados. Então, a infecção por T. trichiura parece modular positivamente os níveis das citocinas TNF-α, IL-10 e IL-6, mas em pacientes asmáticos estes níveis tendem a ser controlados. As reações de hipersensibilidade cutânea imediata parece ser menos frequente em asmáticos quando infectados. Os dados levantam a possibilidade de uma modulação mútua entre asma e tricuríase, favorecendo um estado de maior cronicidade de ambas entidades de doença. / The prevalence of allergic diseases such as rhinitis and asthma is smaller in developing countries, where there is a greater exposure to infectious agents, such as helminths. The relationship between infection with T. trichiura and the prevalence of allergic diseases and skin reactivity is not yet established. Studies differ as to the nature of the change (increase or reduce) in the clinical condition and/or skin tests, as well as the parasite load of the studied population. The study aimed to determine whether there are differences between the occurrence of allergic asthma, prick test, serum levels of IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α and anti-Ascaris IgE antibodies in children with active infection by T. trichiura. For this purpose, children with and without asthma were defined by the ISAAC questionnaire, prick-test and parasitological (Hoffman/Kato Katz) were performed and blood samples were collected, which were then subjected to culture (stimulated with PHA) and the collected supernatant for cytokines measurements (CBA). The prevalence of children with positive parasitological was 16.9% (61/361 children), and among these 27.9% (17/61) were positive for Trichuris trichiura infection (12/17) or co-infected with Trichuris trichiura/Ascaris lumbricoides (5/17). The group of infected patients, with or without asthma, produced significantly high levels for all cytokines in the control group. Furthermore, the group of patients infected without asthma showed a greater tendency of IL-6,TNF-α and IL-10 production than those with asthma; infected and asthmatic patients had a lower reactivity in Prick Test when compared to those with asthma who were uninfected. Thus, the infection with T. trichiura positively modulates the levels of TNF-α, IL-10 and IL-6 cytokines, but these levels in asthmatic patients tend to be controlled. The immediate hypersensitivity skin reactions appears to be less common in asthmatics when infected. The data raise the possibility of a mutual modulation between asthma and trichuriasis, favoring a state of chronic course on both disease entities.

Submitted by Alexandra Feitosa (alexandra.feitosa@ufpe.br) on 2017-07-28T13:59:07Z No. of bitstreams: 1 2011-tese-NadjaMariaJorgeAsado.pdf: 30675018 bytes, checksum: 5e225cdf530e54a274c04c95c87868b6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-28T13:59:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011-tese-NadjaMariaJorgeAsado.pdf: 30675018 bytes, checksum: 5e225cdf530e54a274c04c95c87868b6 (MD5) Previous issue date: 2011-12-21 / Introdução: Lúpus Eritematoso Sistêmico (LES) é uma doença inflamatória crônica do tecido conjuntivo, autoimune, de etiologia multifatorial, que pode envolver múltiplos órgãos e sistemas. Os transtornos psiquiátricos no LES constituem um problema que acomete aproximadamente metade dos pacientes em algum período de evolução da doença, com freqüência variável na literatura. Objetivo: Estudar os transtornos psiquiátricos em pacientes com Lúpus Eritematoso Sistêmico do Serviço de Reumatologia do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco. Método: Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa com Seres Humanos do Centro de Ciências da Saúde da Universidade Federal de Pernambuco (UFPE) e realizado no Serviço de Reumatologia do Hospital das Clínicas da UFPE. Trata"se de um estudo descritivo, exploratório, quantitativo, de corte transversal e duplo"cego. A população foi composta por 131 mulheres com LES entre 18 e 48 anos de idade. Para análise do diagnóstico dos Transtornos Psiquiátricos pelo DSM"IV foi utilizado o M.I.N.I. – plus. A presença dos Transtornos Psiquiátricos foi comparada com a idade no momento do estudo, o tempo de doença e a atividade da doença (avaliada pelo SLEDAI"2K modificado). Oitenta mulheres com LES e 60 indivíduos saudáveis foram genotipados pela reação da cadeia de polimerase seguindo"se por visualização na eletroforese em agarose gel a 4%. Em cento e treze pacientes, o questionário de vida (SF"36) foi avaliado, nos grupos com e sem transtorno psiquiátrico. Resultados: A média de idade foi 32 anos (desvio"padrão: 7,0 anos), com variação entre 18 e 48 anos e a média de duração do LES foi 6,0 anos (desvio"padrão: 5,0 anos). Do total de pacientes com LES, 80 (61,0%) apresentou doença em atividade, a maioria na forma severa (34,0%). Oitenta e nove pacientes (67,9%) apresentaram transtornos psiquiátricos: Transtornos do Humor (56,5%), Transtornos de Ansiedade (50,4%), risco de suicídio (30,5%) e outros transtornos (Psicose: 1,1%; Anorexia Nervosa: 1,1%; Bulimia Nervosa: 7,0%). Episódio Depressivo Maior foi o mais encontrado (37,4%) entre os Transtornos do Humor. Agorafobia (45,0%) e Transtorno de Ansiedade Generalizada (34,4%) foram os mais encontrados entre os Transtornos de Ansiedade. Tempo de doença e idade atual não foram significativamente associados à presença dos Transtornos psiquiátricos. Atividade da doença foi significativamente associada à presença dos Transtornos do Humor, de Ansiedade e risco de suicídio (Qui"Quadrado ou Teste Exato de Fisher, p < 0,05). Transtornos do Humor, de Ansiedade e risco de suicídio apresentaram uma maior tendência ao genótipo G/G. As análises estatísticas mostraram diferenças significativas: na distribuição do polimorfismo C/C no gene da IL"6 entre os grupos LES e controle (χ2 = 8.668; p = 0.0032), e na freqüência alélica, alelo C (p = 0.0247; OR = 0.5036). Sujeitos com a variante alélica Gapresentaram um risco maior para a doença (LES): 1,98 (95% IC: 1.0844"3.6353). A análise do questionário SF"36 foi realizada através de ANOVA Kruskall"Wallis, teste post hoc de Dunn. Os domínios: capacidade funcional, vitalidade e saúde mental mostraram resultados significativos em todos os transtornos analisados (p < 0,05). Aspectos sociais e emocionais, estado geral de saúde mostraram resultados significativos nos Transtornos do Humor e de Ansiedade e risco de suicídio. Aspectos físicos apresentaram significância estatística nos Transtornos do Humor e risco de suicídio. O domínio dor apresentou pontuação muito baixa nas pacientes com e sem transtorno psiquiátrico (efeito piso). Conclusões: Este trabalho mostrou que transtornos psiquiátricos foram freqüentes na maioria das mulheres com LES na população estudada. A atividade da doença (LES) representou fator de risco potencial para a presença de Transtornos de Humor e de Ansiedade. Quanto maior foi o tempo e mais intensa a atividade da doença (LES), mais evidente foi o risco de suicídio. Este estudo apresentou evidências preliminares da associação entre polimorfismo no promotor "174 G/C do gene da IL"6 e sua influência na susceptibilidade ao LES ou no desenvolvimento de suas diversas manifestações clínicas e imunológicas. A percepção de qualidade de vida pelas mulheres com LES avaliada neste estudo, em todos os domínios do SF"36, mostrou"se comprometida quando em associação com os diversos transtornos psiquiátricos. / Background: Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is a chronic inflammatory self"immune disease of the connective tissue, of multifactorial etiology which may involve many organs and systems. The frequency of psychiatric disorders associated with SLE reported in literature is variable, appearing at any moment along the development of the disease in different clinical ways.Objective: The aim of this study was identify the psychiatric disorders of patients with Systemic Lupus Erythematosus from the rheumatology service of the University Hospital of the Federal University of Pernambuco’s State. Method: This study has been approved by the Ethics Committee on Research with Humans of the Health Sciences of the Federal University of Pernambuco’s State (UFPE) and was accomplished at the rheumatology service of the University Hospital of UFPE. It is a descriptive, exploratory, quantitative, cross"sectional and double"blind study. The population was composed by 131 women with SLE, between 18 and 48 years old. M.I.N.I – plus was used to analyze the diagnosis of psychiatric disorders by DSM"IV. The psychiatric disorder was studied taking into account age, time and activity of the disease (evaluated by SLEDAI"2K/modified). Eighty women with SLE and 60 healthy people were genotyped by polymerase chain reaction followed by visualization in agarose 4% gel electrophoresis. In one"hundred and thirteen patients, the life questionnaire (SF"36) was evaluated, in the groups with and without psychiatric disorder. Results: The average age was 32 years (s.d. 7,0 years), ranging from 18 to 48 years; and the average duration of SLE was 6,0 years (s.d. 5,0 years). Out of the total of patients with SLE, 80 (61,0%) presented the disease in its active form, the majority of them in the severe form (34,0%). Eighty"nine patients (67,9%) presented psychiatric disorders: humor disorders (56,5%), anxiety disorders (50,4%), suicide risk (30,5%) and other disorders (Psychosis: 1,1%; nervous anorexia: 1,1%; nervous bulimia: 7,0%). Major depressive episode was the most found (37,4%) humor disorder. Agorafobia (45,0%) and generalized anxiety disorder (34,4%) were the most found anxiety disorders. Time of disease and current age were not significantly associated with the presence of psychiatric disorders. Activity of the was significantly associated with the presence of humor disorders, disorders of anxiety and suicide risk (Chi"square or Exact test of Fisher, p < 0,05). Humor disorders, anxiety disorders and suicide risk presented greater tendency to the G/G genotype. Statistical analyses have shown significant differences: in the distribution of the polymorphism C/C at the gene of the IL"6 among groups SLE and control (χ2 =8.668; p = 0.0032), as well as in the allele frequency, allele C (p = 0.0247; OR = 0.5036). Individuals with the allele variant G presented higher risk to the disease (SLE): 1,98 (95% IC: 1.0844"3.6353). The analysis of the SF"36 questionnaire was made by ANOVA Kruskall"Wallis, post hoc Dunn’s test. The domains: role physical function, vitality and mental health have shown significant results for all the analyzed disorders (p < 0,05). Social function, role function emotional, general health have shown significant results for the humor disorders, anxiety disorders and suicide risk. Physical function has shown statistical significance for humor disorders and suicide risk. The pain domain presented very low score for patients with or without psychiatric disorder (floor effect). Conclusions: This work has shown that psychiatric disorders were frequent in the majority of women with SLE for the studied population. The activity of the disease (SLE) represented potential risk for the presence of humor and anxiety disorders. The longer and the more intense the activity of the disease (SLE), the more evident suicide risk was. This study has presented preliminary evidences of the association between polymorphism in the promotor "174 G/C of the gene IL"6 and its influence on the susceptibility to SLE or on the development of its various clinical and immunological manifestations. The perception of life quality on the part of women with SLE evaluated in this study, for all the domains of the SF"36 has shown itself to be compromised when in association with the many psychiatric disorders.

Orientador: Elias Basile Tambourgi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T05:25:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marques_PetrusPires_D.pdf: 42672280 bytes, checksum: 577c0450f1a36f0daf1a38e8fcbdd55f (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: O presente trabalho teve como objeto de estudo uma fosfolipase A2 (PLA2) isolada do veneno de serpente endêmica do noroeste da América do Sul, Porthidium hyoprora. Nomeada PhTX­III, a proteína foi purificada do veneno da serpente através de duas etapas cromatográficas (gel filtração e HPLC em fase reversa) revelando-­se uma PLA2 ácida, um tipo menos comum de fosfolipase. Verificou-­se homologia entre PhTX-III e PLA2 de venenos de outras serpentes, através de experimentos de espectrometria de massas. Além disso, foi possível a observação de áreas conservadas dessas fosfolipase, como o sítio ativo e alça de ligação ao cálcio, com alterações pontuais de alguns resíduos, quando compara-se com outras PLA2 semelhantes. PhTX­III teve massa molecular exata confirmada, por experimentos de espectrometria de massas, de 13620,9 Da, pH e temperatura ótimos de 8,0 e 37°C, respectivamente. A enzima apresentou Km 4,43 mM e VMáx 10,81 U. A necessidade de íons Ca2+ para manutenção da atividade catalítica foi confirmada experimentalmente, e sua substituição por outros íons bivalentes leva à redução de poder catalítico ou até mesmo supressão total, como no caso do íon Zn2+. Assim como diversas PLA2 ácidas já descritas, PhTX-III não apresenta alguns dos mais clássicos efeitos farmacológicos para essa classe de enzimas, como miotoxicidade local, miotoxicidade sistêmica, ação anticoagulante ou antibacteriana. No entanto, uma aguda reação inflamatória pode ser observada após sua injeção, pela elevada liberação de citocinas pró-­inflamatórias IL-1?, IL-6 e TNF-? e observação de efeito edematogênico moderado. Análises morfológicas de tecido muscular de camundongo afetado pela ação da PhTX-III demonstraram a integridade do tecido com relação à dano muscular, confirmando a ausência de ação miotóxica. Foi possível observar, no entanto, a presença de infiltrado inflamatório com alta concentração de células. O uso de técnica de coloração de Dominici, específica para células da série branca do sangue, permitiu a identificação dessas células como mastócitos. Essas informações levam a acreditar que PhTX-III ocasiona uma sequencia de reações que culminam com degranulação de mastócitos, responsáveis pela liberação das citocinas inflamatórias detectadas. As características estruturais e funcionais obtidas nesse trabalho podem levar à futuras descobertas mais detalhadas sobre o funcionamento das PLA2, -­ ajudando a elucidar as relações ainda não totalmente claras entre estrutura e função dessas proteínas / Abstract: The object of study in the present work is a phospholipase A2 isolated from the venom of a South American endemic snake, Porthidium hyoprora, named PhTX-III. The protein was purified from the crude venom through two sequential chromatographic steps (gel filtration and reverse phase HPLC) and was classified as an acidic PLA2, a less common type, presenting homology with other proteins of that kind, as identified by its primary sequence analysis in mass spectrometry. The comparative analysis of the peptides obtained after PhTX-III digestion revealed not only a high identity with other acidic PLA2 but also allowed the identification of several conserved areas of these phospholipases, such as the active site and the calcium binding loop. It is also possible to observe punctual alterations in some residues when comparing it to other similar PLA2. PhTX-III had its exact molecular mass confirmed by mass spectrometry as 13620,9 Da, optimal pH and temperature of 8.0 and 3.7°C respectively. The enzyme presented Km of 4.43 mM and VmaxA of 10,81 U. The need of Ca2+ ions to maintain activity was confirmed experimentally and its substitution by other divalent ions leads to catalytic power reduction, or its total suppression, as in the case of Zn2+. PhTX-III, as well as several other PLA2 already described, doesn't present some of the most classical pharmacological effects for this class of enzymes, like local myotoxicity, systemic myotoxicity, anti-­coagulant effect of anti-­bacterial effect. Nonetheless an intense inflammatory reaction can be observed after PhTX-III injection, through an elevated pro-­inflammatory cytokine release, with high levels of IL­1?, IL-6 and TNF-?. Also it was possible to observe a moderate edematogenic effect. Morphological analysis of mice muscle injected with PhTX-III demonstrated integrity of the tissue, with no muscle damage, reassuring the previous results of the myotoxicity tests. It was possible to observe, though, the presence of inflammatory infiltrate with high concentration of cells. The use of Dominici's staining technique, specific for blood white cells, allowed the identification of these as mast cells. This information led the researcher to believe PhTX-III causes a sequence of reactions culminating in mas cell degranulation, responsible for the release of the cytokines detected. The structural and functional characteristics obtained in this work can lead to future discoveries about the PLA2 function, helping to unveil the not yet clear relationship between structure and function in this class of proteins / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Carlos Amilcar Parada / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-27T14:12:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rocha_LilianWunsch_D.pdf: 2264409 bytes, checksum: 95c935aebbbef2ad5593f1d56eb53bed (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Vimang® é um medicamento fitoterápico constituído pelo extrato aquoso da planta Mangifera indica L. Este medicamento é utilizado em Cuba para o tratamento de estresse e de doenças imunopatológicas, pois possui propriedade antioxidante reconhecida. O componente majoritário deste extrato é a mangiferina (cerca de 7%) e dados da literatura apontam que ambos, extrato e mangiferina, possuem atividade antinociceptiva. O objetivo deste trabalho foi verificar o potencial anti-hiperalgésico da mangiferina no tecido periférico e investigar seu possível mecanismo de ação em ratos. Para isso foram utilizados modelos de hiperalgesia inflamatória, tais como: hiperalgesia induzida pela carragenina (100 ?g/pata), epinefrina (1 ?g/pata) e pelos mediadores inflamatórios PGE2 (100 ng/pata), IL-1? (0,5 pg/pata) e CINC-1 (1 pg/pata). A hiperalgesia também foi induzida por ?,?-meATP (agonista de receptor P2X3)(50 ?g/pata) e 8-Br-cAMP (ativador de PKA) (0,01 ?g/pata). A avaliação da hiperalgesia mecânica foi realizada através de Von Frey eletrônico. O modelo de nocicepção aguda induzido pela capsaicina (0,5 ?g/pata) também foi realizado. Para complementar os experimentos comportamentais, foi realizada a dosagem de citocinas pró-inflamatórias IL-1?, TNF-? e CINC-1, a avaliação da migração de neutrófilos através da dosagem de mieloperoxidase, Western Blotting para COX-1 e COX-2 e ainda o teste de calcium imaging para verificar a possível interferência da mangiferina em receptores purinérgicos. Em todos os testes moleculares, a inflamação foi induzida pela carragenina e o tecido plantar da pata traseira dos ratos foi coletado 3 horas após a injeção intraplantar. Em todos os experimentos em que houve pré-tratamento com mangiferina, o mesmo foi realizado através de administração local, intraplantar. Para verificar a participação dos receptores purinérgicos no mecanismo de ação da mangiferina, no teste de calcium imaging, o influxo de cálcio in vitro foi induzido por ?,?-meATP. Os resultados demonstram que a mangiferina nas doses de 300, 600 e 1200 ?g/pata reduziu a hiperalgesia induzida pela carragenina de forma dose-dependente e sem apresentar efeito sistêmico, o qual foi avaliado através do limiar na pata contralateral. Para os demais experimentos foi utilizada a dose submáxima de 600 ?g/pata. A hiperalgesia mecânica induzida por epinefrina, IL-1? e CINC-1, mas não por PGE2, foi prevenida pela administração local de mangiferina. Também foi observado efeito da mangiferina reduzindo a nocicepção induzida pela capsaicina. No teste de ELISA, o pré-tratamento com mangiferina foi capaz de reduzir a concentração local da citocina TNF-? e da quimiocina CINC-1 induzida pela carragenina; porém, os níveis de IL-1? mantiveram-se inalterados. A migração de neutrófilos também foi avaliada e o tratamento local com mangiferina reduziu a migração de neutrófilos induzida pela carragenina para o tecido plantar. Os resultados obtidos através da dosagem das proteínas COX-1 e COX-2 por Western Blotting demonstraram que o tratamento local com mangiferina não altera a expressão destas proteínas. Na avaliação in vitro da atividade da mangiferina em inibir o influxo de cálcio induzido pelo ?,?-meATP não houveram resultados positivos, ou seja, a mangiferina não causou dessensibilização nos neurônios. Tomados em conjunto, os resultados demonstram que a mangiferina possui atividade anti-hiperalgésica e possivelmente esta ação esteja relacionada com a sua habilidade em reduzir citocinas que são essenciais para o desenvolvimento da hiperalgesia inflamatória / Abstract: Vimang® is an herbal medicine constituted by the aqueous extract of Mangifera indica L plant. It is used in Cuba for the treatment of stress and immunopathological diseases because it has recognized antioxidant properties. The major component of this extract is mangiferin (about 7%) and literature data indicates that both, extract and mangiferin, have antinociceptive activity. The aim of this study was to evaluate the antihyperalgesic potential of mangiferin in peripheral tissue and investigate its possible mechanism of action in rats. Were used inflammatory hyperalgesia models such as carrageenan-induced hyperalgesia (100 ?g/paw), epinephrine (1 ?g/paw) and the inflammatory mediators PGE2 (100 ng/paw), IL-1? (0.5 pg/ paw) and CINC-1 (1 pg/paw). Hyperalgesia was also induced by ?,?-meATP (P2X3 receptor agonist) (50 ?g/paw) and 8-Br-cAMP (PKA activator) (0.01 ?g/paw). The evaluation of mechanical hyperalgesia was performed using Electronic Von Frey. The acute model of nociception induced by capsaicin (0.5 ?g/paw) was also performed. In addition to the behavioral experiments, the dosage of pro-inflammatory cytokines IL-1?, TNF-? and CINC-1 was performed, evaluation of the migration of neutrophils through the myeloperoxidase dosage, Western Blotting for COX-1 and COX-2, and the calcium imaging test to check possible interference of mangiferin in purinergic receptors. In all molecular tests, inflammation was induced by carrageenan and the plantar tissue of the hind paw of the rats was collected 3 hours after intraplantar injection. In all experiments in which there was pretreatment with mangiferin, it was conducted by local administration, intraplantar. To verify the involvement of the purinergic receptors in the mangiferin mechanism of action, using calcium imaging test, in vitro calcium influx was induced by ?, ?-meATP. The results demonstrate that mangiferin at doses of 300, 600 and 1200 ?g/paw reduced carrageenan-induced hyperalgesia in a dose-dependent manner and without providing systemic effect, which was evaluated through the threshold of the contralateral paw. For other experiments the submaximal dose of 600 ?g/paw was used. Mechanical hyperalgesia induced by epinephrine, IL-1? and CINC-1, but not by PGE2, was prevented by local administration of mangiferin. It was also observed mangiferin effect of reducing the capsaicin-induced nociception. In the ELISA test, the mangiferin pretreatment reduced the local concentration of the cytokine TNF-? and chemokine CINC-1, however, IL-1? levels were unchanged. The neutrophil migration was also assessed and local treatment with mangiferin reduced neutrophil migration induced by carrageenan into the plantar tissue. The results obtained with the COX-1 and COX-2 proteins dosage by Western Blotting demonstrated that local treatment with mangiferin did not alter the expression of these proteins. In vitro evaluation of the activity of mangiferin in inhibiting calcium influx induced by ?, ?-meATP there were no positive results, mangiferin did not cause desensitization in neurons. Taken together, the results show that mangiferin has anti-hyperalgesic activity and possibly this action is related to its ability to reduce cytokines that are essential to the development of inflammatory hyperalgesia / Doutorado / Fisiologia / Doutora em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Alexandre Augusto Zaia / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-27T23:03:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_CarolinaCarvalhodeOliveira_D.pdf: 6938585 bytes, checksum: 0b73617c9f542daafb6815d1e62fb4cb (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: A polpa dentária contém uma heterogeneidade de células, dentre elas destacam-se os fibroblastos e odontoblastos. Quando este tecido é agredido por micro-organismos ou seus bioprodutos, fibroblastos e odontoblastos secretam diversas citocinas inflamatórias para ativação do sistema imune, dentre estas TNF-'alfa', IL-6 e MCP-1. Este estudo avaliou a expressão gênica e a produção de citocinas inflamatórias após o contato in vitro das espécies Sreptococcus mutans, Porphyromonas gingivalis, Enterococcus faecalis e seus bioprodutos com odontoblastos e fibroblastos. A expressão gênica foi avaliada por RT-qPCR e as proteínas foram quantificadas por meio de citometria de fluxo, tipo CBA, nos períodos de 4, 8 e 24 horas. As bactérias estudadas promoveram sensibilização das células para expressão e produção das citocinas IL-6, TNF-'alfa', e MCP-1 principalmente nas primeiras 8 horas de contato. Tanto o contato direto com as bactérias como o contato com seus bioprodutos resultaram em estímulo para as células, contudo, o contato direto com as bactérias S. mutans e E. faecalis se mostrou mais eficiente para a estimulação de expressão e produção de citocinas. Por outro lado, o contato indireto com P. gingivalis mostrou ser mais efetivo para estimular a produção das citocinas. Desta forma, pode-se concluir que odontoblastos e fibroblastos são capazes de expressar e produzir citocinas pró-inflamatórias a partir de diferentes contatos quando estimulados por tipos bacterianos distintos. / Abstract: Dental pulp contains a heterogeneity of cells in its composition, among them stand out from fibroblasts and odontoblasts. When this tissue is attacked by bacteria or their by-products, fibroblasts and odontoblasts can secrete several inflammatory cytokines in order to attract and activate immune system to contain infectious agents. TNF-'alfa', IL-6 and MCP-1 are proteins secreted by fibroblasts and odontoblasts mainly involved in the origin and activation of the inflammatory process. This study aimed to evaluate gene expression and secretion of inflammatory cytokines after in vitro contact of bacteria Sreptococcus mutans, Porphyromonas gingivalis, Enterococcus. faecalis and its by-products with odontoblasts and fibroblasts. The proteins were quantified by flow cytometry type CBA and gene expression by Real Time - PCR in periods of 4, 8 and 24 hours. The results showed that the studied bacteria promoted sensitizing cells for expression and production of the cytokines IL-6, TNF-'alfa', MCP-1, particularly during the first 8 hours of contact. Both direct contact with bacterias or their by-products resulting in stimulation to the cells, however, direct contact with the bacteria S. mutans and E. faecalis was more efficient for stimulating expression and cytokine production. On the other hand, the indirect contact with P. gingivalis shown to be more effective to stimulate the production of cytokines. Thus, we may conclude that fibroblasts and odontoblasts are able to express and produce proinflammatory cytokines from different contacts when stimulated by different bacterial types / Doutorado / Endodontia / Doutora em Clínica Odontológica

A desnutrição modifica a resistência à infecção, alterando grande variedade de processos fisiológicos, incluindo a hematopoiese e a resposta imune. Os mecanismos exatos que comprometem o sistema imunológico em condições de desnutrição ainda não estão totalmente compreendidos, sendo que a desnutrição modifica a funcionalidade das células efetoras na resposta inflamatória/infecciosa, causando redução da síntese de citocinas pró-inflamatórias, além de alterações na hematopoiese. Os linfócitos têm papel-chave tanto na resposta imune inata quanto adaptativa. Nesse contexto, propusemo-nos a avaliar alguns aspectos da resposta linfoide esplênica em um modelo de desnutrição proteica. Camundongos BALB/c, machos, submetidos à desnutrição proteica, após perda de aproximadamene 20% do peso corpóreo, foram eutanasiados. Hemograma, mielograma, esplenograma e análise das concentrações séricas de proteína totais, albumina, pré-albumina e dosagem de imunoglobulinas G e M foram realizados. As células do timo e do baço foram coletadas e analisadas por citometria de fluxo - e foi realizado o ciclo celular. Para avaliação da linfoproliferação, as células esplênicas foram cultivadas, in vitro, e estimuladas com LPS ou ConA durante 72 horas. Foram quantificadas a capacidade de produção de INF-&#947;, IL-2 e IL-10 e a expressão de STAT- 1 e STAT-3. Os animais desnutridos apresentaram anemia, leucopenia e severa redução na celulariedade da medula óssea, com comprometimento no setor mieloide e diminuição da celulariedade do baço, com redução da população de linfócitos. Os animais desnutridos apresentaram alterações no desenvolvimento celular linfoide, alteração na capacidade de proliferação, menor produção de citocinas pró-inflamatórias, como IL-2, e, ao mesmo tempo, aumento da produção de IL-10. Os animais também apresentaram maior porcentagem de células CD3+ e CD4+ no baço em relação aos animais controle. Quando as células esplênicas foram estimuladas, apresentaram maior expressão de STAT-3 e menor expressão de STAT-1. Baseando-se nestes resultados, discutimos se deficiências nutricionais alteram a imunocompetência e aumentam o risco de infecções. / Malnutrition modifies the resistance against infection by changing a variety of physiological processes, including the hematopoiesis and the immune response. The exact mechanisms that compromise the immune system in conditions of malnutrition is not yet thoroughly understood, since malnutrition modifies the functionality of the effector cells in inflammatory / infectious response, causing the reduction of the synthesis of proinflammatory cytokines, besides causing alterations in hematopoiesis. The lymphocytes have a key role in both innate and adaptive immune responses, in this context, we proposed to evaluate some aspects of lymphoid spleen cells response in a model of protein malnutrition. Male mice BALB / c submitted to protein malnutrition after approximately 20% loss of body weight were euthanized. The complete blood count, bone marrow examination, spleen cells count and analysis of serum total protein, albumin, pre-albumin and immunoglobulin G and M were performed. The thymus and spleen cells were collected and analyzed by flow cytometry as well as the cell cycle performed. For evaluation of the lymphocyte proliferation the spleen cells were cultivated in vitro and stimulated with LPS or ConA for 72 hours and the ability to produce IFN-&#947;, IL-2 and IL-10 as well as the expression of STAT-1 and STAT -3, were quantified. The malnourished animals presented anemia, leukopenia and severe reduction in celulariedade bone marrow with myeloid commitment in the sector and decreased celulariedade spleen, with reduced lymphocyte population. The malnourished animals showed changes in lymphoid cell development, abnormal proliferation capacity, reduced production of proinflammatory cytokines such as IL-2, and at the same time, increased production of IL-10. The animals also had higher percentages of CD3 + and CD4 + spleen compared to control animals. When spleen cells were stimulated, showed higher expression of STAT-3 and lower expression of STAT-1. Based on these results, we discussed whether nutritional deficiencies alter immunocompetence and increase the risk of infections.

Neste estudo caracterizamos a expressão de Mif nas células trofoblásticas (CT), placentárias e decidua (D) na gestação em camundongos.A imunolocalização foi realizada nos dias de gestação(dg) 7,5, 10,5, 13,5 e 17,5.Com cones ectoplacentários e placentas fetais (PL) realizou-se ensaios de Western blotting e qRT-PCR nos mesmos dg.D foram submetidas a qPCR.Aos 7,5 dg as CT gigantes e D apresentaram imunomarcação.Dos 10,5 ao 17,5 dg o Mif concentrou-se nas CTG e no espongiotrofoblasto.Na D, a imunomarcação foi menor que aos 7,5 dg.A expressão protéica na PL aumentou do 7,5 dg para o 10,5 dg (p=0,005) e para o 13,5 dg (p=0.03).A maior expressão gênica foi em 10,5 dg e diferente em 13,5 dg (p=0,048) e 17,5 dg (p=0,009).Na D, a maior expressão gênica foi em 7,5 dg e diferente dos 10,5 (0,012) e 13,5 (0,032) dg.O aumento da expressão de Mif na PL coincide com a organização em quatro camadas e com o início da circulação fetal.Esta distribuição temporal e tecido-específica sugere o MIF como modulador no início da placentação ou na sua adaptação ao ambiente uterino / The goal of this study was to characterize Mif expression by trophoblast (TC),fetal placenta (FP) and decidua (D) during mouse pregnancy.Mif was immunolocalized at TC and D on gestation days (gd) 7.5, 10.5, 13.5 and 17.5.Ectoplacental cones (EC) and FP were used for Western blotting and qPCR.D were also used for qRT-PCR.On gd 7.5,DC and TC giant (TGC) showed strong reactivity.On gds 10.517.5,were concentrated in TGC and spongiotrophoblast cells. D reactivity was weaker than 7.5 gd.Protein expression at FP increased from gd 7.5 to 10.5 (p=0.005) and to 13.5 (p=0.03).Higher mRNA expression was found on gd 10.5 and was different from gds 13.5 (p=0.048) and 17.5 (p=0.009).At D on gd 7.5 was greater than those on gds 10.5 (0,012) and 13.5 (0,032).The up-regulation of Mif coincides with the stage that placenta assumes its four-layered organization and the fetal blood circulation begins,This temporal tissue-specific distribution and expression data suggests that Mif may play a modulator role in the onset of placentation or in it adaptation to the uterine environment

A alimentação não é mais vista apenas como uma fonte de calorias e nutrientes, mas sim como agente capaz de induzir benefícios na prevenção de doenças, bem como na promoção de bem estar físico e mental. Assim, uma boa alimentação da população contribui com a redução de custos em cuidados com a saúde e com o aumento da longevidade. Estratégias nutricionais podem, por exemplo, como no caso da adição de antioxidantes, reduzir o risco de doenças, melhorar a qualidade de vida e aumentar o próprio tempo de vida do indivíduo. O dano oxidativo é um fator causador do desenvolvimento de doenças e os antioxidantes têm a capacidade de prevenir ou atenuar estes processos. Sendo assim, há crescente interesse na ingestão de alimentos naturais e produtos orgânicos, na forma de alimentos funcionais e suplementos dietéticos. Entre os alimentos que, comprovadamente, exercem efeito antioxidante, está o açaí, Euterpe oleracea MARTIUS, fruta nativa da região amazônica consumida rotineiramente pela população na forma de polpa, suco, vinho e em outras variedades. Nos últimos anos o açaí tem sido objeto de muita atenção devido ao seu alto potencial antioxidante, anti inflamatório e seu papel como alimento funcional. Sendo assim, foi nosso interesse estudar os efeitos do consumo crônico da fruta, oferecida como consumida pela população em sucos. Os resultados apontam que, quando associado ao consumo de altas taxas de glicose, as propriedades do açaí podem estar reduzidas, uma vez que não foi observada ampla capacidade antioxidante e verificou-se um desvio para o perfil pró-inflamatório no tecido adiposo, induzido pelo consumo de carboidrato em alta concentração. / Feeding is no longer seen as just a source of calories and nutrients, but as an agent capable to induce benefits to prevent diseases, and also to promote physical and mental wellbeing. Therefore, a good nutritional status of the population contributes to cost reductions of health care services and increases longevity. Nutritional strategies, for instance the supplementation with antioxidants, could reduce the risk of diseases that are associated with oxidative stress. The oxidative damage is an important factor in aging and in the development of illness, such as insulin resistence, arteriosclerosis, cancer and others. Antioxidants have the ability to prevent or reduce these processes. Hence, there is a growing interest in consuming natural foods and organic products as functional foods and dietary supplements. The açai berry Euterpe oleracea MARTIUS, a native fruit of Amazonia, recently gained scientific interest due to its high antioxidant and anti inflammatory effects. Açai is frequently consumed by the population as pulp, juice, wine or other varieties that additionally qualifies this fruit as a functional food. Therefore, our interest was to investigate the chronic effects of açai consumption by the population in form of beverages. The results indicate that the açai properties do not prevail, if the consumption is associated with high levels of glucose. The açai properties may be reduced, once the antioxidant ability was not observed, also there was a deviation to pro-inflammatory profile in adipose-tissue, induced by the high levels of carbohydrate consume.

As poliaminas são essenciais para o controle dos mecanismos celulares nos seres vivos. A Migalina é uma acilpoliamina isolada de A. gomesiana com atividade microbicida contra E. coli, contudo, seu efeito imunomodulador é desconhecido. Sabendo que os mediadores imunes produzidos por macrófagos são críticos para a regulação da resposta imune, investigamos o efeito in vitro da Migalina sobre estas células. Demonstramos que a Migalina não induziu citotoxicidade, mas ativou iNOS, potencializando a síntese de nitrito. Aumentou a produção de TNF-<font face=\"Symbol\">a, mas não de IL-12p40. IL-1<font face=\"Symbol\">b não foi detectada. Além disto, Inibiu a produção de TNF-<font face=\"Symbol\">a e IL-12p40 induzida por LPS e quando associada à Polimixina B não alterou a síntese de TNF-<font face=\"Symbol\">a. Macrófagos deficientes de MyD88 não produziram TNF-<font face=\"Symbol\">a em resposta a Migalina, sugerindo que a sinalização mediada por TLR via MyD88 é requerida para a produção desta citocina. Comprovamos que a Migalina modula a atividade de macrófagos através de mediadores da resposta imune inata e pode ser explorada como estratégia no controle de infecções. / Polyamines are present in most living organisms. Mygalin is an acylpolyamine isolated from A. gomesiana that showed microbicide activity against E. coli, however, its immunomodulator effect has not been explored. Immune mediators produced by macrophages are essential for the regulation of immune responses. Our results showed that murine macrophages stimulated in vitro with Mygalin didnt induce cytotoxicity, but activated iNOS, inducing nitrite synthesis. The production of TNF-<font face=\"Symbol\">a was enhanced, but IL-12p40 was not. The presence of IL-1<font face=\"Symbol\">b was not detected. In higher concentrations, Mygalin inhibited significantly the production of IL-12p40 and TNF-<font face=\"Symbol\">a induced by LPS, and its association with Polymixine B did not altered the production profile of TNF-<font face=\"Symbol\">a. Macrophages deficient in MyD88 molecule activated with Mygalin did not induce the synthesis of TNF-<font face=\"Symbol\">a. Our results showed that Mygalin is capable of modulating the macrophage activity by inducing mediators of innate immune response and can be explored as a strategy in the studies to control pathogen infections.

O overreaching não funcional (NFOR) induzido pelo exercício excêntrico (EE) em modelo animal está associado com a diminuição de desempenho físico, dano no DNA (amostras de músculo esquelético e soro), estresse oxidativo (amostras de músculo esquelético e soro), inflamação crônica de baixo grau (amostras de músculo esquelético e soro) e prejuízo da via de sinalização da insulina (amostras de músculo esquelético). No entanto, as adaptações do músculo cardíaco em resposta ao estado de NFOR induzido ou não pela predominância do EE ainda não foram investigadas. Além disso, sabe-se que a mTOR (mammalian target of rapamycin) possui um efeito protetor no músculo cardíaco, suprimindo o aumento de citocinas pró-inflamatórias, que estão relacionadas à disfunções cardíacas. Assim, o presente estudo teve como objetivo comparar os efeitos do NFOR em declive com outros dois protocolos de mesmo volume e intensidade, mas realizados sem inclinação e em aclive, no conteúdo das proteínas relacionadas às vias moleculares inflamatória e hipertrófica, no conteúdo de fibrose intersticial e na expresão gênica em músculo cardíaco de camundongos. Os animais foram divididos em 6 grupos: Naíve (N; camundongos sedentários), Controle (C; camundongos sedentários submetidos aos testes físicos), Treinado (TR; camundongos submetidos ao protocolo de treinamento), Overtraining em declive (OTR/down; camundongos submetidos ao protocolo de OT com corrida na descida), Overtraining sem inclinação (OTR; camundongos submetidos ao protocolo de OT com corrida sem inclinação) e Overtraining em aclive (OTR/up; camundongos submetidos ao protocolo de OT com corrida na subida). Em relação aos parâmetros metabólicos, o grupo OTR/down apresentou menor variação de peso corporal na semana 8. Todos os grupos que passaram pelo protocolo de OT demonstraram queda de desempenho ao final da semana 8, aumento no conteúdo de tecido conjuntivo no ventrículo esquerdo e menor ativação da proteína AMPKalfa. O grupo OTR/down apresentou menor conteúdo da proteína mTOR e S6RP, e aumento na expressão do gene beta-MHC. Pode-se concluir que os protocolos de OT provocaram indícios de hipertrofia patológica no ventrículo esquerdo, sendo esse efeito mais pronunciado no grupo OTR/down. / Nonfunctional overreaching (NFOR) induced by eccentric exercise (EE) in animal model is associated with performance decrement, DNA damage (muscle and serum samples), oxidative stress (muscle and serum samples), low grade chronic inflammation (muscle and serum samples) and insulin signaling impairment (muscle and serum samples). However, the adaptations of cardiac muscle in response to NFOR induced or not induced by EE are unknown. In addition, the mammalian target of rapamycin (mTOR) has a protector effect in the cardiac muscle, suppressing the increase of the proinflammatory cytokines that is related to cardiac dysfunctions. Thus, the main aim of present study was to compare the effects of NFOR based on EE (downhill running) with other two protocols with similar intensity and volume, but performed in uphill and without inclination, on the protein contents related to hypertrophic and inflammatory signaling, on the content of interstitial fibrotic tissue and on genes expression in mice cardiac muscle. The animals were divided on six groups: Naïve (N; sedentary mice), Control (C; sedentary mice submitted to physical tests), Trained (TR; mice submitted to training protocol), Overtraining in downhill (OTR/down; mice submitted to the overtraining protocol in downhill), Overtraining without inclination (OTR; mice submitted to the overtraining protocol without inclination), and Overtraining in uphill (OTR/up; mice submitted to the overtraining protocol in uphill). Regarding metabolic parameters, OTR/down group presented reduced body weight variation at week 8. All OT groups presented performance drop at end of week 8, increased connective tissue content in left ventricle and reduced AMPKalpha activation. OTR/down group presented reduced mTOR and S6RP protein content, and increased betaMHC gene expression. The conclusion is that OT protocols provoked signs of pathological hypertrophy in left ventricle, being this effect more pronounced in OTR/down group.