A atividade dos receptores ativados por proliferadores de peroxissoma (PPAR) e receptor X hepático (LXR) são regulados por ácidos graxos. Entretanto, o papel do LNO2, um produto endógeno da nitração do ácido linoléico por espécies reativas derivadas de óxido nítrico (•NO), na via de sinalização que regula a ativação destes receptores ainda não está elucidada. Assim, considerando a propriedade do LNO2 como doador de •NO, nós investigamos a participação da via de sinalização p21Ras/Raf/ERK na ativação de PPAR e LXR por LNO2. Os resultados obtidos demonstraram que LNO2, na concentração de 0.01µM, foi um potente ativador de PPAR quando comparado ao ligante natural ácido linoléico, o qual apresentou ativação equivalente do PPAR na concentração de 10µM. O LNO2, contudo não teve efeito na ativação de LXR. LNO2 foi um potente ativador de p21Ras quando comparado ao ácido linoléico. A ativação de Ras ocorreu após 5 minutos de incubação com LNO2 em células parentais. Entretanto, em células transfectadas com p21RasC118S, o LNO2 não foi capaz de ativar Ras. A ativação de Ras e PPAR foi dependente da liberação de •NO a partir de LNO2, o que foi evidenciado na presença de C-PTIO, um seqüestrador de •NO. LNO2 ativou ERK, mas não demonstrou efeito relevante na ativação de p38 MAP kinase. A utilização de um inibidor específico de MEK, PD09895, inibiu a ativação de ERK induzida por LNO2, sugerindo que existe uma conexão entre ERK e a ativação de PPAR. Nós concluímos que a ativação do receptor nuclear PPAR por LNO2 é dependente de •NO e da via de sinalização p21Ras/Raf/ERK, a qual é capaz de ativar os subtipos α, &$946; e γ do PPAR, modulando, desse modo, a expressão de genes responsivos a este fator de transcrição. / Fatty acids bind to and regulate the activity of peroxissome proliferator-activated (PPAR) and liver X receptors (LXR). However, the role of LNO2, an endogenous product of the nitration of linoleic acid by nitric oxide (•NO)-derived reactive species, on signalling pathways regulating these nuclear receptors is poorly understood. Thus, considering the properties of LNO2 as •NO donor, we investigated the role of p21RasMAP kinases signaling pathway in the activation of PPARs and LXR by LNO2. LNO2 at physiologically relevant concentrations (0.01 µM) activates PPAR. By contrast, linoleic acid, a natural ligand for PPAR, only activated the receptor at much higher concentrations (10µM). However, it did not affect LXR activation. LNO2 is a more potent activator of p21 Ras than linoleic acid at the same conditions. Ras activation occurred within the first 5 minutes after LNO2 addition to parental cells. However, in p21RasC118s transfected cells, were unable to detect activation of Ras. Ras and PPAR activation depends on •NO released from LNO2 as evidenced by the inhibitory effect of C-PTIO, a •NO scavenger. LNO2 activated ERK but displayed no effects relevant on p38 MAP kinase. In addition, the use of specific inhibitors to MEK, PD09895, blocked PPAR activation and ERK phosphorylation by LNO2, suggesting a connection between ERK and the activation of PPAR. We conclude that LNO2 induced THP-1 cells activating Ras by S-nitrosation and recruiting the MAP kinase ERK, a downstream element of this signalling cascade and activated PPAR (α, β and γ).

A redução da biodisponibilidade óxido nítrico (&#8226;NO) tem sido responsável por complicações vasculares em algumas doenças, incluindo Diabetes Mellitus tipo 2 (DMII). A disfunção endotelial (DE) pode ser ocasionada pela baixa biodisponibilidade do &#8226;NO e estudos indicam que a hiperglicemia pode estar contribuindo para esse evento. Outro fato importante é que grande parte dos indivíduos que apresentam Intolerância à Glicose (IG) evolui para DMII. Portanto, o objetivo desse trabalho foi avaliar de que forma o estado hiperglicêmico poderia interferir sobre os metabólitos do &#8226;NO (S-nitrosotióis, nitrato + nitrito e nitrotirosina), inibidores endógenos da &#8226;NO sintase (ADMA e SDMA), homocisteína e a DE através da medida da atividade da n-acetil-&#946;-glicosaminidase (NAG). Neste estudo participaram 140 voluntários: 12 controles (C), 32 IG e 96 DMII. A concentração de glicose foi superior nos grupos IG (109&#177;10mg/dL) e DMII (165&#177;66mg/dL) em relação ao grupo C (88&#177;11mg/dL) (p<0.05). Somente o grupo DMII (8,5&#177;1,9%; 4,57&#177;2,78mg/dL) apresentou níveis elevados de hemoglobina glicada e frutosamina em relação ao grupo C (6,0&#177;0,9%; 2,31&#177;0,27mg/dL). Entretanto, os metabólitos do &#8226;NO (nitrato+nitrito, S-nitrosotióis e nitrotirosina) apresentaram concentrações elevadas nos grupos IG (35,1&#177;12,9&#181;M; 137&#177;45nM; 352&#177;104nM) e DMII (39,2&#177;18,0&#181;M; 143&#177;73nM 472&#177;231nM) em relação ao grupo C (26,6&#177;6,2&#181;M; 78&#177;46nM; 260&#177;74nM). A função endotelial também esteve alterada nos grupos IG (28,0&#177;7,3U/L) e DMII (29,4&#177;8,7U/L) em relação ao grupo C (21,7&#177;3,9U/L), como indicado pela atividade da NAG. O mesmo comportamento foi observado com os inibidores endógenos de &#8226;NO (ADMA e SDMA). A concentração de homocisteína plasmática não apresentou diferença significativa entre os grupos. Os dados demonstraram que os indivíduos IG apresentaram alterações bioquímicas, relacionadas ao estresse oxidativo e à disfunção endotelial, semelhantes aos pacientes com DMII, as quais poderiam contribuir para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares. / The nitric oxide (NO) has been responsible for vascular complications in some diseases, including Diabetes Mellitus type 2 (DMII). Endothelial dysfunction (ED) may be caused by NO low bioavailability and studies indicate that the hyperglycemia may be contributing to this event. Other important fact is that a large number of individuals who present Glucose Intolerance (GI) develop DMII. Therefore, the objective of this study was to evaluate the way the hyperglycemic state could interfere upon the NO metabolites (S-nitrosotiois, nitrate + nitrite and nitrotirosine), endogen inhibitors of NO synthase (ADMA, and SDMA) and the DE using n-acetyl-&#946;-glicosaminidase (NAG) activity measure. In this study, 140 volunteers participated: 12 as controls (C), 32 GI and 96 DMII. Glucose concentration was superior in GI group (109&#177;10 mg/dL) and DMII group (165&#177;66mg/dL) in relation to group C (88&#177;11mg/dL) (p<0.05). Only DMII group (8,5&#177;1.9%; 4,57&#177;2,78mg/dL) showed high leveIs of glicade hemoglobin and frutosamine in relation to group C (6,0&#177;0,9%; 2,31&#177;0,27mg/dL). However, NO metabolites (nitrate + nitrite, S-nitrosotiois and nitrotirosine) showed high concentrations in groups GI (35,1&#177;12,9&#181;M; 137&#177;45nM; 352&#177;104nM) and DMII (39,2&#177;18,O&#181;M; 143&#177;73nM; 472&#177;231nM) in relation to group C (26,6&#177;6,2&#181;M; 78&#177;46nM; 260&#177;74nM). The endothelial function was aIso altered in groups GI (28,0&#177;7,3U/L) and DMII (29,4&#177;8,7U/L) in relation to group C (21,7&#177;3,9U/L), as indicated by NAG activity. The same behavior was observed with endogen inhibitors of NO (ADMA and SDMA). Plasmatic homocystein concentration has not shown significant difference between the groups. Data has shown that the individuaIs IG presented biochemistry alterations, related to the oxidative stress and the endothelial dysfunction, similar to the patients with DMII, which could contribute to the development of cardiovascular diseases.

Thesis (M. Sc. (Medical Sciences)) -- University of Limpopo, 2021 / Background: This study was designed to determine the relationship of immunohistochemical subtypes of breast cancer and clinicopathological features and demographic information in Limpopo since there has been no data published on the association of immunohistochemical subtypes, clinicopathological features and demographic characteristics in recent years. Methods: Data was obtained from records of patients diagnosed with breast cancer between 2015 and 2020. Chi-Square and ANOVA tests were performed, and results considered significant at p ≤ 0.05. Results: The mean age was 50.32 ± 11.40, estrogen receptor positive(ER+), progesterone receptor positive(PR+) and human epidermal growth receptor 2 positive(HER2+) prevalence were 73.5%, 62.3% and 26.5% respectively. More than half of the patients (54.3%) had a Ki-67 level >15%. Grade II tumors were the predominant type of tumors in this study (51.7%). 43.7% of the cases showed lymph node involvement. Luminal B subtype was the most predominant immunohistochemical subtype in the study (46.4%), followed by Luminal A (24.5 %), TNBC (19.9%) and HER2- enriched (6.6%). 2.6 % of the cases were classified as undetermined. Conclusion: A significant association was observed between immunohistochemical subtypes and tumor grade

O objetivo deste estudo foi avaliar a possível associação entre os polimorfismos -260C/T do gene CD14, Arg753Gln do gene TLR2, Asp299Gli e Thr39911e do gene TLR4 e -174G/C do gene IL6 com o infarto do miocárdio em adultos jovens. Para isso, foi realizado um estudo caso controle, sendo o grupo de estudo constituído por 102 pacientes que tiveram de infarto do miocárdio (34,5 ± 5 anos) e o grupo controle (35,1±8,7 anos) por 108 indivíduos sem histórico de doenças cardiovasculares. A genotipagem foi realizada pela PCRRFLP. Houve ausência de associação entre a distribuição dos genótipos dos SNPs -260C/T do gene CD14, Arg753Gln do gene TLR2, Asp299Gli e Thr39911e do gene TLR4 e -174G/C do gene IL6 entre os dois grupos estudados (p<0,05). O perfil sérico inflamatório e hematológico relacionou-se com polimorfismo -174G/C IL-6 do grupo IAM. O genótipo GG relacionou com elevação nas concentrações de PAI-1 (p<0,0001), o genótipo GC com maiores quantidades de hemácias (p=0,02) e o genótipo CC com concentrações elevadas de fibrinogênio (p<0,01) e quantidade aumentada de leucócitos (p<0,05). O genótipo CC do polimorfismo -260C/T CD14 também mostrou relação com a elevação nas concentrações de PAI-1 (0,0001) e o genótipo CT com o de fibrinogênio (p<0,01). O genótipo GG do polimorfismo -174G/C IL-6 relacionou com elevação nas concentrações de glicose (p<0,05) e o genótipo CC com diminuição nas concentrações de apoA (p<0,01), HDL (p<0,001) e elevação nas de LDL (p<0,05), colesterol total (p<0,05). O genótipo CT do polimorfismo -260C/T CD14 também relacionou com concentrações elevadas de colesterol total (p<0,0001). Em conclusão, os polimorfismos não estão relacionados com o infarto do miocárdio em jovens, porém os SNPs -260CT CD14 e -174 IL-6 parecem estar relacionados com o perfil sérico inflamatório, hematológico e bioquímico de pacientes enfartados. / The objective of this study was to assess the possible association between the polymorphism - 260C/T of the gene CD14, Arg7S3Gln TLR2, Asp299Gli and Thr399lle TLR4 and - 174G/C of the gene IL6 with myocardial infarction in young adults. For that a case control study was conducted and the case group was formed by 102 patients who had myocardial infarction, and the control group by 108 individuals without history of cardiovascular disease. The genotyping was performed by PCR-RFLP. There was no association between the distribution of genotypes of SNPs - 260C/T of the gene CD14, Arg7S3Gln TLR2, Asp299Gli and Thr399lle TLR4 and -174G/C of the gene IL6 between the two groups studied (p<0.05). The serum inflammatory blood profile was related with polymorphism - 174G/C IL-6 in the group IAM. The GG genotype was linked with elevated PAI-1 concentrations (p<0.0001), the genotype GC with larger quantities of red blood cells (p=0.02) and CC genotype with high concentrations of fibrinogênio (p<0.01) and leucocytes increased quantity (p<0.05). The CC genotype of polymorphism of -260C/T CD14 also showed associated with the elevation in PAI-1 concentrations (p<0.0001) and the CT genotype with elevated fibrinogênio concentrations (p<0.01). The GG genotype of the -174G/C IL-6 polymorphism was related with elevated glucose concentrations (p<0.05) and CC genotype with decrease in the apoA (p <0.01) and HDL (p<0001) concentrations and elevation of the LDL (p <0.05), total cholesterol (p <0.05) concentrations. The CT genotype of -260C / T CD14 polymorphism also was Iinked with high total cholesterol concentrations (p <0.0001). In conclusion, the polymorphism is not associated with myocardial infarction in young patients, but the -260CT CD14 and -174 IL-6 SNPs appear to be related to the serum biochemical, hematological and inflammatory blood profile in patients that had myocardial infarction.

Resultados obtidos anteriormente pelo nosso grupo mostraram que a proteína de fase aguda amilóide sérica A (SAA) é um potente estímulo para a expressão de mRNA e liberação de TNF-&#945;, IL-1-&#946; e IL-8 em leucócitos humanos, além de atuar como priming para a liberação de espécies reativas de oxigênio (EROs) por neutrófilos. Nosso objetivo, nesse trabalho, foi mostrar a presença de SAA em exsudatos e definir sua origem, além de verificar sua atividade pró-inflamatória in vivo. Para tanto, utilizamos soro e exsudatos pleurais de 32 pacientes com pneumonia. Mostramos primeíramente a presença da SAA no material inflamatório através de SDS-PAGE, immunoblotting e HPLC. A quantificação de SAA nas amostras foi realizada por ELISA. Nestas amostras também foram determinadas as concentrações de proteína total, proteína C reativa (PCR), apo A-I, apo A-II, apo B, colesterol total, triglicérides, TNF-&#945;, IL-1-&#946; e IL-8. A análise integrada dos nossos resultados indica que há uma passagem preferencial da HDL para o foco inflamatório, quando comparada as demais lipoproteínas. A SAA presente em exsudatos é originada do soro e deve sofrer intensa degradação ou associação com células. O efeito da SAA no exsudato é pró-inflamatório, sendo que esta proteína poderia ser um dos alvos para as enzimas proteolíticas e EROs presentes em exsudatos. Acreditamos que este trabalho contribua significamente para a compreensão do, ainda incerto, papel da SAA no processo inflamatório e dá nova abrangência para as funções da HDL e sua participação na reposta imune. / Previous results from our lab showed that the acute phase protein serum amyloid A (SAA) is a potent stimulus for the expression of mRNA and secretion of TNF-&#945;, IL-1-&#946; and IL-8 from human leukocytes. Furthermore SAA primes neutrophils for the generation of reactive oxygen species (ROS). Our goal here was to show the presence of SAA in exudates and define its origin, besides the verification of its proinflammatory activity in vivo. To achieve this goal we used serum and pleural exudates from 32 patients with pneumonia. At first, we showed the presence of SAA in the exudate through SDS-PAGE, immunoblotting and HPLC. SAA was quantified by ELISA. Besides SAA, we also determined the concentrations of total protein, C reactive protein, apo A-I, apo A-II, apo B, cholesterol, triglyceride, TNF-&#945;, IL-1-&#946; e IL-8. The integrate analysis of our results indicates that there is a preferential leakage of HDL to the inflammatory focus when compared to other lipoproteins. SAA present in exudates is originated from serum and may be intensively degraded or associated to cells. The effect of SAA in the exudate is proinflammatory and this protein may be a target for proteolytic enzymes and for ROS present in exudates. We believed that this work adds new insights to the, yet undefined, role of SAA in the inflammatory process and gives a broader compreension to the functions of HDL and its participation in the on the immune response.

The aim of this research was to evaluate the performance of turkey poults fed crescent doses of aflatoxins in the diet during the first 42 days of life. Three hundred and thirty six one-day-old, male turkey poults were randomly divided into seven treatments, as follows: T1= control; T2= 20 ppb of total aflatoxins; T3= 50 ppb; T4= 100 ppb; T5= 200 ppb; T6= 500 ppb; T7= 1,000 ppb. Turkeys were kept in cages and euthanized in two periods: half the birds at 21 days of experiment and the remaining birds at 42 days of experiment. Parameters evaluated were feed consumption, body weight, organs relative weight (liver, heart, gizzard and bursa of Fabricius), relative weight of meat (thighs and breast), and clinical biochemical parameters (total plasmatic proteins, albumin, uric acid, cholesterol, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, and alkaline Phosfatase). At 21 days of age, both feed consumption (R= -0.98) and body weight (R= -0.85) were significantly affected (P=0.00) by the presence of aflatoxins in the diet. Relative weight of gizzard (R=0.50), total proteins (R= -0.87), and cholesterol (R= -0.73) levels were also significantly affected by the aflatoxins present in the diet. At 42 days of age feed consumption (R= -0.96), body weight (R= -0.84), relative weight of gizzard (R=0.64), relative weight of liver (R=0.63), and cholesterol levels (R=0.71) were all significantly affected by the presence of aflatoxins in the diet. These results show that aflatoxins interfere significantly in several productive and biological parameters in turkey poults. / O objetivo deste trabalho foi avaliar o desempenho de perus de corte alimentados com dietas contendo sete diferentes doses de aflatoxinas, durante os primeiros 42 dias de vida. Foram utilizados 336 perus de corte, machos, com 1 dia de vida, divididos aleatoriamente em 7 tratamentos, conforme a dose de aflatoxinas utilizada (T1= controle; T2= 20 ppb de aflatoxinas totais; T3= 50 ppb; T4= 100 ppb; T5= 200 ppb; T6= 500 ppb; e T7= 1.000 ppb). As aves foram alojadas em gaiolas e eutanasiadas em dois períodos: metade das aves aos 21 dias de experimento e o restante aos 42 dias. Os parâmetros avaliados em cada período foram consumo de ração, peso corporal, peso relativo de órgãos (fígado, coração, moela e bursa de Fabricius), peso relativo de cortes da carcaça (coxa+sobrecoxa e peito) e parâmetros de bioquímica clínica (proteínas plasmáticas totais, albumina, ácido úrico, colesterol, alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase e fosfatase alcalina). Aos 21 dias de experimento, tanto o consumo de ração (R= -0,98), quanto o peso corporal (R= -0,85) foram significativamente afetados (P=0,00) pela presença das aflatoxinas na dieta. Além disto, o peso relativo de moela (R=0,50) e os níveis de proteínas plasmáticas totais (R= -0,87) e de colesterol (R= -0,73) também foram significativamente afetados pelas aflatoxinas presentes na dieta. Aos 42 dias, além do consumo de ração (R= -0,96) e do peso corporal (R= -0,84), foram afetados significativamente os pesos relativos de moela (R=0,64) e de fígado (R=0,63) e os níveis séricos de colesterol (R=0,71) pela presença de aflatoxinas na ração. Diante destes resultados, conclui-se que as aflatoxinas interferem significativamente em diversos parâmetros produtivos e biológicos em perus de corte.

Resultados obtidos anteriormente pelo nosso grupo mostraram que a proteína de fase aguda amilóide sérica A (SAA) é um potente estímulo para a expressão de mRNA e liberação de TNF-&#945;, IL-1-&#946; e IL-8 em leucócitos humanos, além de atuar como priming para a liberação de espécies reativas de oxigênio (EROs) por neutrófilos. Nosso objetivo, nesse trabalho, foi mostrar a presença de SAA em exsudatos e definir sua origem, além de verificar sua atividade pró-inflamatória in vivo. Para tanto, utilizamos soro e exsudatos pleurais de 32 pacientes com pneumonia. Mostramos primeíramente a presença da SAA no material inflamatório através de SDS-PAGE, immunoblotting e HPLC. A quantificação de SAA nas amostras foi realizada por ELISA. Nestas amostras também foram determinadas as concentrações de proteína total, proteína C reativa (PCR), apo A-I, apo A-II, apo B, colesterol total, triglicérides, TNF-&#945;, IL-1-&#946; e IL-8. A análise integrada dos nossos resultados indica que há uma passagem preferencial da HDL para o foco inflamatório, quando comparada as demais lipoproteínas. A SAA presente em exsudatos é originada do soro e deve sofrer intensa degradação ou associação com células. O efeito da SAA no exsudato é pró-inflamatório, sendo que esta proteína poderia ser um dos alvos para as enzimas proteolíticas e EROs presentes em exsudatos. Acreditamos que este trabalho contribua significamente para a compreensão do, ainda incerto, papel da SAA no processo inflamatório e dá nova abrangência para as funções da HDL e sua participação na reposta imune. / Previous results from our lab showed that the acute phase protein serum amyloid A (SAA) is a potent stimulus for the expression of mRNA and secretion of TNF-&#945;, IL-1-&#946; and IL-8 from human leukocytes. Furthermore SAA primes neutrophils for the generation of reactive oxygen species (ROS). Our goal here was to show the presence of SAA in exudates and define its origin, besides the verification of its proinflammatory activity in vivo. To achieve this goal we used serum and pleural exudates from 32 patients with pneumonia. At first, we showed the presence of SAA in the exudate through SDS-PAGE, immunoblotting and HPLC. SAA was quantified by ELISA. Besides SAA, we also determined the concentrations of total protein, C reactive protein, apo A-I, apo A-II, apo B, cholesterol, triglyceride, TNF-&#945;, IL-1-&#946; e IL-8. The integrate analysis of our results indicates that there is a preferential leakage of HDL to the inflammatory focus when compared to other lipoproteins. SAA present in exudates is originated from serum and may be intensively degraded or associated to cells. The effect of SAA in the exudate is proinflammatory and this protein may be a target for proteolytic enzymes and for ROS present in exudates. We believed that this work adds new insights to the, yet undefined, role of SAA in the inflammatory process and gives a broader compreension to the functions of HDL and its participation in the on the immune response.

O objetivo deste estudo foi avaliar a possível associação entre os polimorfismos -260C/T do gene CD14, Arg753Gln do gene TLR2, Asp299Gli e Thr39911e do gene TLR4 e -174G/C do gene IL6 com o infarto do miocárdio em adultos jovens. Para isso, foi realizado um estudo caso controle, sendo o grupo de estudo constituído por 102 pacientes que tiveram de infarto do miocárdio (34,5 ± 5 anos) e o grupo controle (35,1±8,7 anos) por 108 indivíduos sem histórico de doenças cardiovasculares. A genotipagem foi realizada pela PCRRFLP. Houve ausência de associação entre a distribuição dos genótipos dos SNPs -260C/T do gene CD14, Arg753Gln do gene TLR2, Asp299Gli e Thr39911e do gene TLR4 e -174G/C do gene IL6 entre os dois grupos estudados (p<0,05). O perfil sérico inflamatório e hematológico relacionou-se com polimorfismo -174G/C IL-6 do grupo IAM. O genótipo GG relacionou com elevação nas concentrações de PAI-1 (p<0,0001), o genótipo GC com maiores quantidades de hemácias (p=0,02) e o genótipo CC com concentrações elevadas de fibrinogênio (p<0,01) e quantidade aumentada de leucócitos (p<0,05). O genótipo CC do polimorfismo -260C/T CD14 também mostrou relação com a elevação nas concentrações de PAI-1 (0,0001) e o genótipo CT com o de fibrinogênio (p<0,01). O genótipo GG do polimorfismo -174G/C IL-6 relacionou com elevação nas concentrações de glicose (p<0,05) e o genótipo CC com diminuição nas concentrações de apoA (p<0,01), HDL (p<0,001) e elevação nas de LDL (p<0,05), colesterol total (p<0,05). O genótipo CT do polimorfismo -260C/T CD14 também relacionou com concentrações elevadas de colesterol total (p<0,0001). Em conclusão, os polimorfismos não estão relacionados com o infarto do miocárdio em jovens, porém os SNPs -260CT CD14 e -174 IL-6 parecem estar relacionados com o perfil sérico inflamatório, hematológico e bioquímico de pacientes enfartados. / The objective of this study was to assess the possible association between the polymorphism - 260C/T of the gene CD14, Arg7S3Gln TLR2, Asp299Gli and Thr399lle TLR4 and - 174G/C of the gene IL6 with myocardial infarction in young adults. For that a case control study was conducted and the case group was formed by 102 patients who had myocardial infarction, and the control group by 108 individuals without history of cardiovascular disease. The genotyping was performed by PCR-RFLP. There was no association between the distribution of genotypes of SNPs - 260C/T of the gene CD14, Arg7S3Gln TLR2, Asp299Gli and Thr399lle TLR4 and -174G/C of the gene IL6 between the two groups studied (p<0.05). The serum inflammatory blood profile was related with polymorphism - 174G/C IL-6 in the group IAM. The GG genotype was linked with elevated PAI-1 concentrations (p<0.0001), the genotype GC with larger quantities of red blood cells (p=0.02) and CC genotype with high concentrations of fibrinogênio (p<0.01) and leucocytes increased quantity (p<0.05). The CC genotype of polymorphism of -260C/T CD14 also showed associated with the elevation in PAI-1 concentrations (p<0.0001) and the CT genotype with elevated fibrinogênio concentrations (p<0.01). The GG genotype of the -174G/C IL-6 polymorphism was related with elevated glucose concentrations (p<0.05) and CC genotype with decrease in the apoA (p <0.01) and HDL (p<0001) concentrations and elevation of the LDL (p <0.05), total cholesterol (p <0.05) concentrations. The CT genotype of -260C / T CD14 polymorphism also was Iinked with high total cholesterol concentrations (p <0.0001). In conclusion, the polymorphism is not associated with myocardial infarction in young patients, but the -260CT CD14 and -174 IL-6 SNPs appear to be related to the serum biochemical, hematological and inflammatory blood profile in patients that had myocardial infarction.

Os gliomas apresentam comportamento amplamente infiltrativo e a invasão para o tecido cerebral sadio adjacente ao tumor o tornam um grande desafio para intervenções clínicas agressivas. Estudos recentes dos mecanismos de invasão de gliomas sugerem que as metaloproteinases (MMPs) desempenham papel crítico neste processo. As MMPs são super-expressas em quase todos os tumores humanos e vastos dados pré-clínicos as apontam como contribuintes do desenvolvimento maligno; portanto, a inibição de atividade de MMPs poderia ser adotada como uma estratégia de terapêutica anti-câncer. A atividade inibitória de MMP-2 e MMP-9 do extrato liofilizado da raiz de P. umbellata foi avaliada em estudos prévios de nosso laboratório por Ropke e colaboradores. Assim, esta dissertação teve como objetivo, primeiramente, explorar a citotoxicidade do extrato de P. umbellata e posteriormente, a avaliar o efeito do 4-neroridilcatecol (o princípio ativo isolado do extrato) quanto à citotoxicidade e potencial de inibição de MMPs durante o processo de invasão de duas linhagens de glioma humano, caracterizadas pelos diferentes níveis de invasividade. Os resultados revelam os índices de citotoxicidade do extrato bruto da raiz de P. umbellata e do composto 4-NC presente nesse extrato. Ensaios de invasão tumoral in vitro em concentrações não citotóxicas mostraram que há forte inibição desse processo pelo composto. Interessantemente, o 4-NC não alterou significativamente a atividade e expressões gênicas e protéicas de MMPs envolvidas na invasão deste tipo de tumor, nem de seus reguladores. O ensaio de fragmentação do DNA nos indica que a morte das células é, em parte, devido à apoptose, além da participação do processo autofágico. Ensaios analisando a expressão de proteínas e genes envolvidos na via de autofagia mostraram que há indução deste processo pelo composto estudado. Quando este processo é inibido farmacologicamente há incremento na morte celular causada pelo 4-NC. Considerando que em câncer, a autofagia é um processo essencial na modulação da resistência a quimioterápicos, descrevemos aqui, que 4-NC, a exemplo de seu poder citotóxico em melanomas, atua no processo invasivo de gliomas e induz morte celular além de desencadear o processo autofágico. / Gliomas present extensive invasive behavior and the invasion to healthy adjacent neural tissue makes this type of tumor a great challenge for aggressive clinical intervention. Recent studies concerning glioma invasion mechanisms suggest that metalloproteinases (MMPs) have a critical role in this process. MMPs are overexpressed in almost all types of human tumors and many pre-clinical data point to them as functional enhancers to malignant development; then, the inhibition of MMP activity could be adopted as an anti-cancer therapeutic strategy. P. umbellate root extract inhibitory activity over MMPs-2 and 9 was previously evaluated in studies from our group by Ropke et al. Thus, this dissertation has as an objective to evaluate the cytotoxic effect of 4-nerolidylcatechol (a compound purified from the P. umbellate extract), and its potential for MMP inhibition during the invasive process of two human glioma cell lines, characterized for their different invasive levels. Our results show the cytotoxic levels of the crude extract from the root of P. umbellate and from the 4-NC isolated from the extract. In vitro tumor invasion assay in non-cytotoxic drug concentrations indicate a strong inhibition of this process by the compound. Interestingly, 4-NC did not significantly alter enzyme activity, genetic or proteic expression of the MMPs involved in glioma invasion, or its regulators. The DNA fragmentation assay shows that cells die, in part, due to apoptosis, but autophagy pathway is also involved in cell death. Assays showing expression of proteins and genes involved in the autophagy pathway showed an increase of this process by the compound studied. Pharmacological inhibition of this process leads to an increase in cell death caused by 4-NC. Considering that in cancer, autophagy plays an essential role in the modulation of chemoresistance, we describe here that 4-NC, as described previously for melanomas, acts on glioma invasive process, induces cell death and is capable of up-regulating autophagic process.

INTRODUÇÃO: O uso da laserterapia concernente ao estímulo da formação óssea e da revascularização tem tornado objeto de estudo na área de saúde. OBJETIVO: O presente trabalho in vivo teve como objetivo avaliar quantitativamente os efeitos do laser de baixa potência (LBP) na remodelação óssea após a expansão rápida da maxila (ERM) em ratos jovens, através da expressão do RNAm dos genes RANK, RANK-L, Osteoprotegerina (OPG), e o Fator do Crescimento do Endotélio Vascular (VEGF) bem como a análise histológica. MATERIAL E MÉTODO: Utilizou-se 105 ratos Wistar (Rattus norvegicus, albinus), machos, divididos em 4 grupos: Grupo Controle (n=10) animais não tratados (sem ERM e sem aplicação do LBP; Grupo Experimental I (n=40) animais que tiveram apenas a ERM; sendo 25 animais sacrificados nos dias 1, 2, 3, 7, e 10 dias após a ERM para análise com RT-PCR e western blotting e 15 animais foram sacrificados nos dias 0, 7 e 10 dias para análise histológica; Grupo Experimental II (n=40) animais que tiveram ERM + LBP com diodo de Ga-Al-As (Gálio-Alumínio-Arsênio:160J/cm2) no primeiro dia do experimento; os animais foram sacrificados nos mesmos períodos que o Grupo Experimental I; Experimental III (n=15) animais que receberam 3 aplicações de LBP após ERM, totalizando 480J/cm2. Os animais foram sacrificados nos dias 3, 7 e 10 dias após a ERM para análise com RT-PCR e western blotting. A extração do RNAt da maxila foi feita com trizol. A síntese da fita de DNA complementar (cDNA) foi feita a partir de 1&#181;g de RNA, por meio de uma reação de transcrição reversa, com a utilização da enzima transcriptase reversa, e a análise da expressão gênica foi realizada pela reação em cadeia pela polimerase em tempo real (qRT-PCR) no sistema TaqMan®. A análise protéica do VEGF, RANK, RANK-L e OPG foi realizada por meio da técnica western blotting. O teste de variância (ANOVA) foi usado comparando os grupos entre si e inter-grupos seguida pelo teste complementar de Tukey, com nível de significância de 5%. RESULTADOS: A separação dos incisivos induzida pela ERM foi semelhante nos grupos experimentais I e II, o espaço entre os incisivos foi mantido durante toda a fase experimental, e não houve diferença significativa entre os grupos laser e não-laser (p<0,05), demostramdo a eficiência da metodologia usada para abertura da sutura palatina mediana. Para o grau de abertura da sutura, foi quantificada, a área de abertura sutural em todos os grupos após a ERM, e observou-se aumentou significativo comparado com o grupo controle, sendo que no grupo de laser o grau de abertura final foi significativamente menor no grupo laser do que não-laser aos 7 e 14 dias, mostrando que a formação óssea no grupo laser foi mais acelerada, o que pode ser comprovado com os dados histológicos, demonstrando que o laser acelerou o processo de formação óssea. Em relação à expressão relativa dos genes RANK/RANK-L/OPG tanto o grupo com laser quanto o sem-laser mostraram um aumento significativo da expressão comparado ao grupo controle (p < 0,05), principalmente nos períodos iniciais e quando comparou-se o grupo irradiado com o não irradiado observou-se que no grupo com laser houve uma maior expressão desses genes do que no grupo sem laser. CONCLUSÃO: Os resultados sugerem que a formação óssea após a ERM foi observada dentro da sutura palatina e o uso do LBP influenciou a formação óssea acelerando o processo de osteogênese durante a fase inicial do experimento. / BACKGROUND: The use of low-level laser terapy with bone stimulation has been studied in the health science field. OBJECTIVE: The aim of the present in vivo study was to quantitatively evaluate the effects of low-level laser therapy (LLLT) on bone healing after rapid maxillary expansion (RME) in young rats, and the RANK, RANK-L, OPG and VEGF gene expressions; and histological analyses. MATERIALS and METHODS: A total of 105 rats Wistar (Rattus norvegicus, albinus), male were assigned tofour groups: Control Group (n=10) with no treatment (no RME and no LLLT); Experimental I (n=40) with RME without LLLT: 25 animals were euthanized at days 1, 2, 3, 7 and 10 after RME for real time reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blotting analysis and 15 animals were euthanized at days 0, 7 and 10 after RME for histological evaluation; Experimental II (n=40) with RME and LLLT (160J/cm2): animals were euthanized at the same periods described for Experimental I. Experimental III (n=15) with RME and 3 aplication of LLLT (480J/cm2): animals were euthanized at days 3, 7 and 10 after RME for real time reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and western blotting analysis. Part of the sample was kept at -80&#176;C for genes expression and protein production, and another for histological analysis. The total RNA was extracted using trizol. Complementary DNA (cDNA) was synthesized using 1&#181;g of RNA in a reverse transcription reaction and for genes expression we used RT-PCR in the TaqMan® system. The RANK, RANK-L, OPG, and VEGF and proteins analysis was made using western blotting. The ANOVA and Tukey tests were used and significance level was set at 5%. RESULTS: The expansion-induced opening of the incisors was similar among the groups, the space between the incisors was kept during all the experimental phase and there was no difference between laser and no laser therapy groups (p<0,05) showing that this methodology was efficient to open the palatine suture. The the opened along the suture was quantified, the area in all RME groups significantly increased compared with control group. Following laser therapy, the palatal suture opening decreased at 7 and 14 days, showing that bone formation in laser group was accelerate, and it was proved with histological analysis, that showed that LLLT accelerated bone formation. Regarding RANK/RANK-L/OPG gene expression, both laser and no-laser therapy groups showed a significant increased in these genes expression, compared to the control group, mainly at the initial periods of healing. Laser therapy group showed a higher expression of these genes than no laser group. CONCLUSIONS: The results suggest that bone formation after RME was observed within palatal suture and the application of the LLLT influenced bone formation accelerating the process of bone mineralization during the initial experimental phase.