Orientador: Fernanda Klein Marcondes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:21:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bianchi_FabioJose_M.pdf: 1507476 bytes, checksum: fe0a31e90743ed0f1ec35a9dec958c54 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi analisar a influência do sexo e do ciclo estral nas respostas metabólicas e hormonais em ratos submetidos a estresse agudo. Ratos com 3 meses de idade, machos e fêmeas ovariectomizadas, ou com ciclo estral regular, foram usados (n = 7-11/grupo). Após a identificação da fase do ciclo estral, manipulação (machos) ou 21 dias após a castração, os animais foram submetidos a uma sessão de natação. Imediatamente após a aplicação do estresse, os animais foram sacrificados sob anestesia para coleta do sangue e dos tecidos. Estes procedimentos também foram realizados em animais controle. Amostras do fígado, coração, músculos sóleo, gastrocnêmio vermelho e branco foram usados para determinação da concentração tecidual de glicogênio (método colorimétrico do fenol-sulfúrico). Após a coleta de sangue e centrifugação, o plasma foi usado para determinação da concentração plasmática de glicose, triglicerídeos, corticosterona, estradiol e progesterona. A glicose e o triglicerídeo plasmáticos foram determinados por ensaios enzimáticos-colorimétricos. As determinações hormonais foram feitas por radioimunoensaio. Os dados foram analisados por ANOVA bifatorial seguida do teste de Tukey com nível de significância 5%. Ratos machos e fêmeas em diestro controle apresentaram maior concentração de glicogênio hepático quando comparados às demais fases do ciclo estral. A natação induziu uma diminuição neste parâmetro em todos os grupos analisados. Com relação ao glicogênio no músculo cardíaco, ratas em metaestro controle apresentaram menor concentração comparadas aos demais grupos e o estresse por natação causou mobilização em todos os grupos, exceto nesta fase do ciclo estral. Ratos machos e ratas em proestro controle apresentaram respectivamente concentração estatisticamente maior e menor de glicogênio no músculo sóleo comparados aos demais grupos e o estresse por natação induziu uma diminuição deste carboidrato em machos e fêmeas em estro, sem ocorrer alteração nas demais fases. Com relação ao glicogênio nos músculos gastrocnêmico vermelho e branco, machos apresentaram maior concentração basal deste polissacarídeo comparado aos demais grupos controle. Neste tecido o estresse por natação induziu diminuição nas concentrações de glicogênio em todos os grupos analisados. O grupo de ratas em metaestro controle apresentou maior glicemia em relação aos demais grupos. Após o estresse, ratos machos e fêmeas em proestro e em diestro apresentaram elevação neste parâmetro, sem alteração em fêmeas em estro e em metaestro. Com relação às concentrações plasmáticas de triglicerídeos, ratas em diestro controle apresentaram valores mais elevados que os demais grupos. Machos, fêmeas em proestro, estro e em metaestro submetidos à natação apresentaram elevação neste parâmetro, enquanto que o grupo de ratas em diestro apresentou diminuição. Ratas em metaestro apresentaram maiores concentrações plasmáticas de corticosterona em relação aos demais grupos controle. Após o estresse, houve elevação neste parâmetro em todos os animais, validando o modelo de estresse utilizado, porém este aumento foi menor em machos. As concentrações basais de estradiol foram mais elevadas em ratas em proestro em relação aos outros grupos analisados. Após a sessão de natação somente nesta fase foi observado aumento, sem alterações nas demais fases do ciclo estral. Com relação à concentração plasmática de progesterona, ratas em metaestro controle apresentaram concentração mais elevada comparadas às demais fases. O estresse induziu aumento e queda respectivamente no metaestro e no proestro. Desta forma, o sexo e o ciclo estral influenciaram a mobilização tecidual de glicogênio, a glicemia, a concentração plasmática de triglicerídeos e a secreção de corticosterona. Também, o ciclo estral influenciou a secreção de estradiol e progesterona após estresse agudo por natação / Abstract: The aim of this work was to analyze the influence of the sex and of the estrous cycle in the metabolic and hormonal responses from rats submitted to acute stress. Bilaterally ovariectomized rats with 3 months of age, males and females, with regular estrous cycle, were used (n = 7-11/grupo). After the identification of the phase of the estrous cycle, manipulation (male) or 21 days after the ovariectomizared, the animals were submitted to one swimming session. Immediately after the stress session, the animals were sacrificed under anesthesia for collection of the blood and tissues. These procedures were also done in control animals. Samples of liver, cardiac, soleus, red and white gastrocnemius muscles were used for glycogen determination (phenol-sulphuric method). After the collection of blood and centrifugation, the plasma was used for determination of the concentration of glucose, triacylglicerol, corticosterone, estradiol and progesterone. The plasmatic glucose and triacylglicerol levels were determined by enzymatic-colorimetric assay. The hormonal determinations were made by radioimunoassay. The data were analyzed by bifactorial ANOVA followed of the Tukey test with level of significance 5%. Male and Female rats in diestrus and ovareictomized control presented higher concentration of hepatic glycogen when compared to the other phases of the estrous cycle. Swimming induced a decreased in this parameter in all groups. Metestrus control rats presented lower glycogen concentration compared to the other control groups. Stress caused its mobilization in all the groups, but not in females at metestrus. Control male and female rats at proestrus showed respectively higher and lower concentration of glycogen in the soleus muscle compared to the other groups. Swimming stress decreased these levels only in males and female rat at estrus. Male and females ovarietomized rats presented higher basal concentration of glycogen in the muscles gastrocnemius red and white, compared to the other control groups. In this tissue the stress induced reduction in the glycogen concentrations in all groups. Control female rats at metestrus presented glucose plasmatic higher in relation to other control groups. After the swimming session, males and ovariectomized and at proestrus and diestrus females presented an increase in this parameter, without alteration in females at estrus and metestrus. Control female at diestrus presented higher plasmatic concentrations of triacylglicerol compared to the other control groups. In males, females at proestrus, estrus and metestrus swimming stress increased this parameter, and reduced it at diestrus female rats. Rats at metestrus presented higher plasmatic concentration of corticosterone compared to other control groups. After the stress, there was an increase in this parameter in all groups, validating the model of stress used. However this increase was lower in males. The basal concentration of estradiol was higher in rats at proestrus compared to the other control groups. After swimming stress the levels of this hormone increased in females at proestrus at control proestrus, without changes in the other groups. Rats at metestrus presented higher plasmatic concentration of progesterone compared to the other phases. Stress increased and decreased this hormone levels respectively at metestrus and proestrus. In summary, the sex and the estrous cycle influenced the tissue glycogen mobilization, glucose and triacylglicerol and corticosterone secretion after acute stress. Also, the estrous cycle influenced the estradiol and progesterone production after acute swimming stress / Mestrado / Fisiologia Oral / Mestre em Odontologia

O presente estudo investigou os efeitos da desnutrição protéica e estimulação ambiental sobre parâmetros bioquímicos em ratos. Foram quantificadas as concentrações de poliaminas no córtex frontal, estriado e hipocampo, corticosterona plasmática e atividade da sintase do óxido nítrico no hipocampo. O comportamento exploratório foi analisado no labirinto em cruz elevado (LCE). Os animais receberam dietas contendo 16% (controles - C) ou 6% (desnutridos - D) de proteína e foram divididos em grupos estimulados ou não estimulados. A desnutrição elevou o nível de corticosterona circulante, diminuiu o conteúdo protéico plasmático e diminuiu a ansiedade. Os ratos não estimulados testados no LCE apresentaram nível elevado de corticosterona circulante, diminuída atividade da NOS no hipocampo, menor conteúdo protéico e de poliaminas no córtex frontal, estriado e hipocampo. A estimulação diminuiu o número de entradas nos braços abertos no LCE nos animais do grupo D e aumentou o número de entradas nos braços fechados nos animais do grupo C. A estimulação aumentou a frequência e tempo gasto em comportamentos de avaliação de risco. Estes resultados sugerem que ambos, a desnutrição e o teste no LCE são situações estressantes, como indicado pela elevação dos níveis de corticosterona. Estes resultados são consistentes com menor ansiedade e/ou maior impulsividade nos animais do grupo D. / The present study investigated the effects of protein malnutrition and environmental stimulation on the biochemical and behavioral parameters in rats. It was measured the polyamines concentration in frontal cortex, striatum and hippocampus, as well as the plasma corticosterone levels. The exploratory behavior was analyzed using the elevated plus-maze (EPM) test. Rats received either 16% (well-nourished - W) or 6% (malnourished - M) protein diets and were divided into stimulated or non-stimulated groups. Malnutrition increased corticosterone levels, decreased plasma protein content and anxiety. Non-stimulated rats tested in the EPM increased corticosterone levels, decreased hippocampal NOS activity, decreased frontal cortex, striatum and hippocampus protein and polyamines contents. Stimulation decreased open arm entries in the EPM in M animals and increased the closed arm entries in the W ones. Stimulation increased frequency and time spent in risk-assessment behaviors. These results suggest that both malnutrition and EPM testing are stressing situations as indicated by increased corticosterone levels. These results are consistent with lower anxiety and/or higher impulsiveness in M animals.

O estresse crônico promove diversas alterações no funcionamento de um organismo. O aumento de glicocorticoides pode interferir no estado físico e psicológico de um individuo. Trabalhos recentes correlacionam estresse psicossocial crônico à redução do comprimento dos telômeros de determinadas células. E o estrógeno, além de ser um fator modulador da atividade do sistema de estresse, também pode interferir no comprimento dos telômeros. O objetivo desse trabalho foi verificar se a exposição crônica aos glicocorticóides promove alterações no comprimento dos telômeros de áreas encefálicas envolvidas no controle da atividade do eixo Hipotálamo-Hipófise-Adrenal (HPA) e em respostas comportamentais de ratas, e se o estrógeno pode modular essas alterações. Ratas Wistar ovariectomizadas foram tratadas com cipionato de estradiol (50 ou 100 µg/kg, s.c.) ou óleo, e submetidas à administração de corticosterona 20 mg/Kg ou veículo (salina isotônica 2% Tween 80, s.c.), durante 28 dias. No 25 º dia os animais foram submetidos ao teste do nado forçado, e no 27º dia, ao teste de labirinto em cruz elevado. No dia subsequente ao término do tratamento hormonal, os animais foram eutanasiados para coleta do sangue, cérebro e hipófise. O tratamento com cipionato de estradiol causou: aumento das concentrações plasmáticas de corticosterona e progesterona; redução da expressão de mRNA para CRH, AVP e POMC no PVN; um efeito ansiolítico a avaliado pelo teste do labirinto em cruz elevado; . um efeito depressivo indicado pelo teste de nado forçado; reduziu o tamanho dos na amígdala central e hipocampo dorsal, mas não no PVN. A corticosterona causou: redução da secreção de gonadotrofina; redução da expressão de RNA mensageiro para CRH e POMC e aumento para AVP no PVN; um efeito depressivo indicado pelo teste de nado forçado. O conjunto de resultados mostra que modificação na atividade do eixo HPA e a variação das concentrações plasmáticas de estrógeno podem provocar diversas alterações de ações hormonais, atividades comportamentais e de estrutura do DNA em áreas cerebrais. / Chronic stress promotes several changes in the functioning of an organism. Increased glucocorticoids may interfere with an individual\'s physical and psychological state. Recent works correlate chronic psychosocial stress to the reduction of the telomere length of certain cells. And estrogen, besides being a modulating factor of the activity of the stress system, can also interfere in the length of telomeres. The objective of this study was to verify if chronic exposure to glucocorticoids promotes changes in telomere length of encephalic areas involved in the control of hypothalamic-hypophysis-adrenal (HPA) axis activity and in rat behavioral responses, and whether estrogen can modulate these changes. Ovariectomized Wistar rats were treated with estradiol cypionate (50 or 100 ?g / kg, s.c.) or oil, and given 20 mg / kg corticosterone or vehicle (isotonic saline 2% Tween 80, s.c.) for 28 days. On the 25th day the animals were submitted to the forced swim test, and on the 27th day, the elevated plus maze test. On the day after the end of the hormonal treatment, the animals were euthanized for collection of blood, brain and pituitary gland. Treatment with estradiol cypionate caused: increased corticosterone and progesterone plasma concentrations; reduction of mRNA expression for CRH, AVP and POMC in PVN; an anxiolytic effect as assessed by the elevated plus maze test. A depressive effect indicated by the forced swim test; reduced size in the central amygdala and dorsal hippocampus, but not in PVN. Corticosterone caused: reduction of gonadotrophin secretion; reduction of mRNA expression for CRH and POMC and increase for AVP in PVN; a depressive effect indicated by the forced swim test. The set of results shows that changes in HPA axis activity and variation in plasma estrogen concentrations can lead to several changes in hormonal actions, behavioral activities and DNA structure in brain areas.

Glicocorticóides modulam a resposta imune de forma complexa em vertebrados expostos a diferentes estressores. Dado que as populações naturais têm estado expostas a uma multiplicidade de estressores, uma melhor compreensão da associação funcional entre a duração e a intensidade da resposta ao estresse, as mudanças resultantes nos níveis dos hormônios esteróides e seu impacto sobre os diferentes aspectos da imunocompetência emergem como um ponto chave para as estratégias de conservação dos vertebrados. Nós investigamos as relações entre os níveis plasmáticos de hormônios esteróides e a imunocompetência inata em anfíbios anuros, incorporando as metodologias de desafio de contenção, elevação experimental dos níveis de corticosterona por aplicação transdérmica, capacidade bactericida por espectrofotometria e o desafio imunológico com fitohemaglutinina. Nossos resultados demonstram que a capacidade bactericida plasmática (CBP) medida por espectrofotometria é um método confiável e preciso para estimar a imunocompetência de anfíbios anuros, além disso, mostramos a existência de uma grande diversidade interespecífica na CBP de anuros machos. Quando quatro diferentes espécies de Bufonídeos foram submetidas a um desafio de contenção, as respostas gerais incluíram aumento dos níveis plasmáticos de corticosterona (CORT) e da relação neutrófilo/linfócito (N:L) e diminuição dos níveis plasmáticos de testosterona (T). As respostas da CBP à contenção foram muito mais variáveis, com R. ictérica mostrando diminuição e R. marina mostrando aumento dos valores de CBP. Adicionalmente, CORT e N:L tenderam a aumentar mais em resposta à contenção com restrição de movimento do que à contenção sem restrição de movimento, indicando que os sapos demostraram um aumento da resposta ao estresse quando submetidos ao estressor mais intenso. Todas as variáveis estudadas mostraram variação interespecífica. Rhinella ornata apresentou os maiores níveis basais de CORT quando comparado com as outras espécies, enquanto R. ornata e R. ictérica mostraram os maiores valores basais de CBP. Entretanto, as mudanças na relação N:L, nos níveis de T e na CBP, não foram correlacionadas com o aumento em CORT, dentro ou entre espécies. A aplicação transdérmica de corticosterona eficientemente simulou eventos repetidos de resposta ao estresse agudo em Rhinella ictérica, sem alterar os parâmetros imunitários, mesmo após treze dias de tratamento. Curiosamente, o cativeiro a longo prazo não atenuou a resposta ao estresse, uma vez que estes sapos mantiveram um aumento de três vezes em CORT mesmo depois de três meses sob estas mesmas condições. Além disso, a manutenção em cativeiro a longo prazo, nas mesmas condições, aumentou a contagem total de leucócitos (TLC) e gerou uma diminuição ainda maior na CBP, sugerindo que as consequências da resposta ao estresse podem ser agravadas pelo tempo em cativeiro. Com base em nossos resultados, consideramos que uma avaliação cuidadosa é necessária para compreender a modulação da resposta imunitária pelo estresse a nível intra e interespecífico. A inclusão de diferentes segmentos da resposta imune é desejável, e a padronização da coleta de dados para todas as espécies sob o mesmo período (em geral, dentro ou fora da época reprodutiva) e mesma atividade (em geral, vocalizando ou forrageando) se faz obrigatória / Glucocorticoids modulate the immune response in complex ways in vertebrates exposed to different stressors. Given that natural populations have been exposed to a multitude of stressors, a better understanding of the functional association between duration and intensity of the stress response, the resulting changes in steroid hormone levels and their impact on different aspects of immunocompetence emerges as a cornerstone for vertebrate conservation strategies. We investigated the relationships between steroids levels and innate immunocompetence in anuran amphibians, incorporating the methodology of restraint challenge, experimental elevation of corticosterone levels by transdermal application, bacterial killing ability by spectrophotometry and the immune challenge with phytohemagglutinin. Our results demonstrate that the bacterial killing ability (BKA) measured by spectrophotometry is a reliable and accurate method to estimate the immunocompetence of anuran amphibians, additionally showed the existence of a large interspecific diversity in BKA from male anurans. When four different species of Bufonids were submitted to a restraint challenge, the general responses included increased in corticosterone plasma levels (CORT) and neutrophil/lymphocyte ratio (N:L) and decreased in testosterone plasma levels (T). The responses of BKA to restraint were much more variable, with R. icterica showing decreased and R. marina showing increased values. Additionally, CORT and N:L tended to increase more in response to restraint with movement restriction than to restraint without movement restriction, indicating that toads showed an increased stress response to the more intense stressor. All variables studied show interspecific variation. Rhinella ornate showed higher baseline CORT when compared to other species, while R. ornate and R. icterica showed the highest baseline BKA values. However, changes in N:L ratio, T levels and BKA, were not correlated to increased CORT within or between species. Transdermal application of corticosterone efficiently mimics repeated acute stress response events in Rhinella icterica, without changing the immune parameters even after thirteen days of treatment. Interestingly, long-term captivity did not mitigate the stress response, since the toads maintained three fold increased CORT even after three months under these conditions. Moreover, long-term captivity in the same condition increased total leukocyte count (TLC) and generated an even greater decrease in BKA, suggesting that consequences of the stress response can be aggravated by time in captivity. Based on our results, we consider that a careful evaluation is necessary in order to understand the modulation of the immune response by stress at intra and interspecific levels. The inclusion of different segments of the immune response is desirable, and a standardized data collection for all the species under the same period (e.g. inside or outside of breeding season) and same activity (e.g. calling or foraging) is mandatory

A partir de estudos sobre o controle endócrino do comportamento reprodutivo em anuros sabemos que diversos aspectos do comportamento vocal e das interações agonísticas nestes animais encontram-se associados a alterações dos níveis hormonais de testosterona e corticosterona. Dentre as espécies de anuros neotropicais de grande interesse para estudos a respeito do controle endócrino do comportamento reprodutivo destaca-se Hypsiboas faber, uma espécie de hilídeo caracterizada pela presença de machos territorialistas, cujas interações agonísticas abrangem uma diversidade de padrões vocais com agressividade escalar, podendo culminar em embate físico, além da construção de ninhos para oviposição e comportamento facultativo de guarda deste ninho. O objetivo deste trabalho foi entender as inter-relações entre os níveis plasmáticos de corticosterona e testosterona, e os comportamentos de vocalização e defesa territorial em machos de H. faber durante a atividade reprodutiva. Tais interrelações foram investigadas através da observação do comportamento durante as atividades vocais, seguidas de coleta de sangue para dosagem hormonal. Contamos adicionalmente com uma abordagem experimental, que consistiu no uso de gravações do coaxo de anúncio (playback), simulando a invasão de outro macho no território dos indivíduos focais, seguida de observação comportamental e coleta de sangue para dosagem hormonal. O estímulo experimental não surtiu qualquer efeito sobre os níveis plasmáticos de corticosterona e testosterona, nem sobre a maior parte das variáveis comportamentais. Conseguimos identificar um padrão de variação sazonal nos níveis de corticosterona e testosterona, bem como uma correlação positiva entre estes hormônios. Adicionalmente, indivíduos que vocalizam a taxas mais altas apresentam níveis mais elevados de corticosterona durante o início da temporada reprodutiva, enquanto níveis mais elevados de testosterona aparecem nos indivíduos mais responsivos a estímulos provindos do entorno social. / From studies on the endocrine control of reproductive behavior in anurans, we know that many aspects of vocal behavior and agonistic interactions of these animals are related to changes in plasma levels of testosterone and corticosterone. Among the species of neotropical frogs of great interest for studies on the endocrine control of reproductive behavior stands out Hypsiboas faber, a hylid characterized by the presence of territorial males, whose agonistic interactions cover a variety of vocal patterns with aggressiveness scale, which may culminate in physical conflict. Males of H. faber also build nests for oviposition and presents optional guard of the nests with eggs. The aim of this study was to understand the interrelationships between plasma levels of corticosterone and testosterone with calling behavior and territorial defense in males of H. faber during reproductive season. These relationships were investigated by focal observations during the vocal activities, followed by blood sampling for hormonal assay. We additionally used an experimental approach, which consisted of using recorded advertisement calls (playback), simulating an invasion of another male in the territory of the focal subjects, followed by behavioral observation and blood sampling for hormonal assay. The experimental stimulus had no effect on plasma levels of corticosterone and testosterone, neither on the majority of behavioral variables. We can identify a pattern of seasonal variation in levels of corticosterone and testosterone, as well as a positive correlation between these hormones. Additionally, individuals who vocalize at higher rates have higher levels of corticosterone during the beginning of reproductive season, while higher levels of testosterone appear in individuals more responsive to stimuli from the social environment.

Em resposta a diversos estressores, o hipotálamo de anfíbios secreta o hormônio liberador de corticotropina (CRH), o qual estimula a hipófise a liberar o hormônio adrenocorticoctrópico (ACTH) na corrente sanguínea. O ACTH, por sua vez, atua na glândula inter-renal estimulando a liberação de glicocorticoides, sendo a corticosterona o principal glicocorticoide em anfíbios. Embora a modulação exercida pelos glicocorticoides de diversas respostas fisiológicas de estresse seja fundamental para a manutenção da homeostase em curto prazo, a ativação muito frequente e/ou prolongada do eixo hipotálamo-hipófise-interrenais (HHI) pode inibir processos importantes em longo prazo, tais como a reprodução e a imunocompetência e afetar a síntese de melatonina atuando diretamente sobre a pineal. O objetivo do presente estudo foi avaliar possíveis alterações nos níveis plasmáticos de corticosterona, testosterona, níveis oculares de melatonina, hematócrito e aspectos imunitários (contagem total de leucócitos e capacidade antimicrobiana plasmática - contra Escherichia coli) de machos da perereca Hypsiboas faber em resposta à injeção de ACTH, bem como o curso temporal destas respostas. Amostras de sangue e plasma foram obtidas a partir de 30 machos capturados em campo, dentro de 3 minutos da captura. Os animais foram trazidos para o laboratório e, após dois meses, divididos em seis grupos para serem amostrados em três horários distintos 1 h, 3h e 6h após o tratamento. Para cada horário um grupo controle e um grupo experimental foram adicionados, recebendo uma injeção de 105 μL de solução salina ou de solução de ACTH (0,446 μg de ACTH/g de massa corpórea (grupo experimental)). O tratamento com ACTH aumentou significativamente os níveis plasmáticos de corticosterona e diminuiu os níveis plasmáticos de testosterona bem como os níveis oculares de melatonina após 1 hora. Após 6 h da injeção de ACTH, houve um aumento da porcentagem do hematócrito e dos níveis de melatonina ocular. O tratamento com ACTH não afetou os aspectos imunitários estudados dentro do intervalo amostrado. Os resultados confirmam o papel da ativação do eixo HHI na inibição da secreção de testosterona e na modulação da secreção de melatonina, embora os possíveis efeitos imunomodulatórios possam se dar em intervalos temporais mais tardios / In response for several stressors, the amphibian hypothalamus release the corticotrophin release hormone (CRH), which stimulates pituitary to release the adenocorticotropic hormone (ACTH) in the bloodstream. The ACTH, in your turn, acts in inter renal glands stimulating the glicocorticoids releasing, being the corticosterone the main glicocorticoid in anphibians. While the modulation exercised by the glicocorticoids of diverses physiological responses of the stress is fundamental for de maintainance of homeostasis in short period, the frequent and/or prolongued activation of the hypothamlamus pituitary interenal axis (HHI) could inhibit important process in long periods, as the reproduction and immunocompetence and affect melatonin synthesis acting directly in pineal gland. The objective of the present study was evaluate possible alterations in plasmatic corticosterone levels, testosterone, eyes melatonin levels, hematocrit and immunity aspects (Total count leucocytes and antimicrobian plasmatic capacity - against Escherichia coli) from males of the treefrog Hypsiboas faber in response to ACTH injection, as well, the temporal course of these responses. Blood and plasma samples were obtained from the 30 males captured in the field, whitin 3 minutes from the capture. The animals were transferred to the laboratory and, after two months, divided in six groups to be sampled in three different times 1 h, 3 h and 6 h after treatment. For each time one control group and one experimental group were added, receiving one injection of 105 μL of saline or ACTH solution (0,446 μg de ACTH/g of body mass (experimental group)). The ACTH treatment increase significantly the plasmatic corticosterone levels and decrease the plasmatic testosterone levels, as well, the eye melatonin levels after one hour. After six hours of the ACTH injection, occurred the increase of the hematocrit percentage and the eye melatonin levels. The ACTH treatment did not affect the immunity aspects studied in the sampling interval. The results confirm the role of the activation on the axis HHI in the inhibition of the testosterone secretion and in the modulation of melatonin secretion, althougth the possible immunomodutatory effects could happen in temporal intervals later

O presente estudo investigou os efeitos da desnutrição protéica e estimulação ambiental sobre parâmetros bioquímicos em ratos. Foram quantificadas as concentrações de poliaminas no córtex frontal, estriado e hipocampo, corticosterona plasmática e atividade da sintase do óxido nítrico no hipocampo. O comportamento exploratório foi analisado no labirinto em cruz elevado (LCE). Os animais receberam dietas contendo 16% (controles - C) ou 6% (desnutridos - D) de proteína e foram divididos em grupos estimulados ou não estimulados. A desnutrição elevou o nível de corticosterona circulante, diminuiu o conteúdo protéico plasmático e diminuiu a ansiedade. Os ratos não estimulados testados no LCE apresentaram nível elevado de corticosterona circulante, diminuída atividade da NOS no hipocampo, menor conteúdo protéico e de poliaminas no córtex frontal, estriado e hipocampo. A estimulação diminuiu o número de entradas nos braços abertos no LCE nos animais do grupo D e aumentou o número de entradas nos braços fechados nos animais do grupo C. A estimulação aumentou a frequência e tempo gasto em comportamentos de avaliação de risco. Estes resultados sugerem que ambos, a desnutrição e o teste no LCE são situações estressantes, como indicado pela elevação dos níveis de corticosterona. Estes resultados são consistentes com menor ansiedade e/ou maior impulsividade nos animais do grupo D. / The present study investigated the effects of protein malnutrition and environmental stimulation on the biochemical and behavioral parameters in rats. It was measured the polyamines concentration in frontal cortex, striatum and hippocampus, as well as the plasma corticosterone levels. The exploratory behavior was analyzed using the elevated plus-maze (EPM) test. Rats received either 16% (well-nourished - W) or 6% (malnourished - M) protein diets and were divided into stimulated or non-stimulated groups. Malnutrition increased corticosterone levels, decreased plasma protein content and anxiety. Non-stimulated rats tested in the EPM increased corticosterone levels, decreased hippocampal NOS activity, decreased frontal cortex, striatum and hippocampus protein and polyamines contents. Stimulation decreased open arm entries in the EPM in M animals and increased the closed arm entries in the W ones. Stimulation increased frequency and time spent in risk-assessment behaviors. These results suggest that both malnutrition and EPM testing are stressing situations as indicated by increased corticosterone levels. These results are consistent with lower anxiety and/or higher impulsiveness in M animals.

Foram utilizadas 750 poedeiras comerciais de linhagens brancas com 23 semanas ao início do período experimental, distribuídas num delineamento em blocos completos aleatorizados sendo estes caracterizados pela oncatenação das linhagens com coluna de gaiolas; os tratamentos foram cinco densidades ou taxas de lotação na gaiola (321,43; 375; 450; 562,50 e 750 cm2/ave) com seis repetições, totalizando 150 parcelas experimentais. As dietas experimentais foram à base de milho e farelo de soja, formuladas para suprir as exigências nutricionais das linhagens em todas as fases. O desempenho produtivo e econômico foram avaliados através do peso dos ovos (g), percentagem de postura (%), massa de ovos (g/ave/dia), consumo de ração (g/ave/dia), conversão alimentar por dúzia (kg/dz) e por quilo de ovo (kg/kg). A qualidade de ovos foi avaliada através da gravidade específica (GE), unidades Haugh (UH), percentagens de gema, albúmen e casca, espessura da casca (EC), resistência à quebra (RQ), coloração da gema e índice gema (IG). O bem-estar das aves foi avaliado através de indicadores clínicos, imunológicos e fisiológicos. Para efeito da avaliação dos resultados, foram estabelecidos seis blocos com repetições internas. Os dados foram analisados com auxílio do SAS, sob modelo misto, considerando os efeitos da densidade, período e a interação entre estes, como fixos, além dos efeitos aleatórios de bloco e resíduo. Por se tratar de medidas repetidas longitudinalmente, buscou-se a melhor estrutura de covariância para cada variável. Quando adequado foi aplicado o teste de tukey-kramer para a comparação de médias (p<0,05). O menor consumo de ração, CA/dz de ovos e melhor desempenho econômico, foram obtidos pela densidade 321,4 cm2/ave. Altas densidades de alojamento não influenciaram a qualidade interna de ovos, a % casca e RQ, mas essas variáveis tiveram efeitos dos períodos, com os melhores valores nos primeiros períodos. Altas densidades tiveram efeitos negativos sobre a GE e EC, principalmente no pico de postura das aves. Os ovos avaliados encontravam-se dentro dos valores desejados, mesmo nas maiores densidades, podendo ser classificados como de excelente qualidade. A densidade de alojamento não interferiru (p>0,05) na avaliação clínica das aves, mas o maior espaço proporcionado nas gaiolas do sistema covencional conferiu menor freqüência de lesões nas aves, indicando promoção e melhora ao seu bem-estar geral. Dados de freqüência cardíaca e temperatura da cloaca estavam dentro dos padrões de normalidade para a espécie. Não foram observadas diferenças (p>0,05) das densidades na resposta imunológica das aves, com os títulos dos anticorpos vacinais contra as doenças de Gumboro e Newcastle acima dos níveis do ponto de corte (cutoff). Os tratamentos não modificaram o perfil sanguíneo das aves e não foi possível caracterizar um padrão de corticosterona no plasma e de excreção de metabólitos fecais de glicocorticoides. A técnica de enzimoimunoensaio, empregada utilizando anticorpo primário contra corticosterona e anticorpo secundário anticoelho de cabra, foi capaz de detectar as variações nas concentrações de corticosterona nesses tecidos, contudo, o entendimento do significado desses achados ainda necessita de novas investigações. / 750 commercial laying hens of white strains aged 23 weeks at the beginning of the experimental period were used, distributed in a randomized complete block design, these being characterized by the concatenation of the strains with column of cages; the treatments were five densities or stocking rates in the cage (321,43, 375, 450, 562.50 and 750 cm2/bird) with six replications, amounting to 150 experimental plots. The experimental diets were on the basis of corn and soybean meal, formulated to meet the nutritional requirements of the strains in all the phases. Both the productive and economic performances were evaluated through the weight of the eggs (g), percentage of laying (%), egg mass (g/bird/day), feed intake (g/bird/day), feed conversion per dozen (kg/dozen) and per kg of egg (kg/kg). Egg quality was determined through specific gravity (SG), Haugh units (HU), percentages of yolk, albumen and shell, shell thickness (ST), resistance to breaking (BR), yolk coloration and yolk index (YI). The welfare of the birds was evaluated through clinical, immunological and physiological indicators. For the purpose of evaluation of the results, six blocks with internal replications were established. The data were analyzed with the aid of SAS, under a mixed model, considering the effects of density, period and the interaction between them, as fixed, in addition to the random effects of block and residue. For se tratar de measures longitudinally repeated, the best covariance structure for each variable was sought. When appropriate, the Tukey-Kramer test was used for comparison of means (p<0.05). The lowest feed intake, FI/dozen of eggs and best economic performance, were obtained at the density of 321.4 cm2/bird. High housing densities did not influence the internal quality of the eggs, % shell and BR, but these variables had effects from the periods, with the best values in the early periods. High densities had negative effects on SG and ST, mainly at the laying peak of the birds. The eggs checked lie within the desired values, even at the highest densities and can be classified as of excellent quality. The housing density did not interfere (p>0.05) in the clinical evaluation of the birds, but the greater space provided in the cages of the conventional system conferred a lower frequency of lesions in the birds, indicating promotion and improvement to their general welfare. Data of heart rate and cloacal temperature were within the normal limits for the species. No differences (p>0.05) of the densities in the immune response of the birds, with the titers of the vaccine antibodies against Gumboro and Newcastle diseases above the cutoff levels were found. The treatments did not modify the blood profile of the birds and it was not possible to characterize a standard of plasma corticosterone and excretion of fecal metabolites of glucocorticoids, but the enzyme immunoassay technique, using primary antibody against corticosterone and secondary goat anti-rabbit antibody, was capable of detecting variations in the corticosterone concentrations in these tissues, however, the understanding of the meaning of these findings still requires further investigation.

Orientador: João Cesar Bedran de Castro / Co-orientador: José Antunes-Rodrigues / Banca: José Vanderlei Menani / Banca: Keico Okino Nonaka / Resumo: Este estudo investigou os efeitos da lesão hipotalâmica induzida por glutamato monossódico (MSG) na programação do dimorfismo sexual em parâmetros somatométricos e propriedades biofísicas do osso durante a fase pré-pubere, púbere e adulto jovem. Além disto, nós avaliamos se a alteração hipotalâmica induzida por este modelo pode influenciar nos níveis séricos de leptina e corticosterona nestes animais. A lesão com MSG foi realizada por injeção subcutânea de glutamato monossódico (dose de 4 mg/g de peso corporal, Sigma, St. Louis, MO) em ratos neonatos no 2º, 4º, 6º, 8º e 10º dia de vida. Os grupos controle foram tratados da mesma forma utilizando solução salina 0,9%. Os ratos foram submetidos a eutanásia aos 20,40, 80, 120 e 150 dias de vida. O peso corporal foi mensurado aos 20, 40, 80, 120 e 150 dias de vida e amostras sanguíneas e fêmures foram coletados. O comprimento femural e a geometria crosseccional da diáfise femural foram medidos e a densidade mineral óssea areal (DMOa) foi determinada por densitômetro de dupla emissão de raio-X (DXA). O teste biomecânico de ensaio de flexão de três pontos foi utilizado para avaliar força máxima, rigidez óssea e tenacidade. Amostras sanguíneas foram submetidas a ensaios bioquímicos para estimar os níveis de cálcio, fósforo, fosfatase alcalina, leptina e corticosterona no plasma. Ganho de peso, DMOa e propriedades biomecânicas aumentam rapidamente com relação a idade de todos os grupos. Nos animais controle o dimorfismo sexual esquelético, concentração de leptina e padrões de dimorfismo sexual de corticosterona foram evidentes após a puberdade. No entanto, nós demonstramos que a destruição de neurônios sensíveis ao MSG pode eliminar a diferença sexual no desenvolvimento esquelético, visto... / Abstract: This study investigated the effects of neonatal MSG-induced hypothalamic lesions on the programming of sexual dimorphism in somatometric parameters and the biophysical properties of bone during childhood, puberty, and adulthood. Furthermore, we evaluated whether hypothalamic changes induced by this model may influence leptin and corticosterone serum concentrations in these animals. MSG-lesion was performed by daily subcutaneous injections of monosodium glutamate (at a dose of 4 mg/g of body weight, Sigma, St. Louis, MO) to newborn rats at 2-nd, 4-th, 6-th, 8-th and 10-th day of life. The control groups were treated in the same manner with saline solution 0,9%. Rats were euthanized at 20, 40, 80, 120 or 150 postnatal days. Body weight was also measured at 20, 40, 80, 120 and 150 days of age, and blood samples and femurs were collected. The femur length and femoral diaphyseal cross-sectional geometry were measured and the areal bone mineral density (areal BMD) was determined by dual-energy X-ray absorptiometry (DXA). Biomechanical three-point bending testing was used to evaluate bone breaking strength, energy to fracture, and extrinsic stiffness. Blood samples were submitted to a biochemical assay to estimate calcium, phosphorus, alkaline phosphatase, leptin, and corticosterone levels. Weight gain, areal BMD and bone biomechanical properties increased rapidly with respect to age in all groups. In control animals, skeletal sexual dimorphism, leptin concentration, and dimorphic corticosterone concentration patterns were evident after puberty. However, we demonstrated that destruction of MSG-sensitive neurons during the critical period of sexual differentiation of the brain causes a long-lasting modification in biophysical bone properties and serum leptin and corticosterone concentrations. This suggested that neonatal MSG treatment... / Mestre

Foram utilizadas 750 poedeiras comerciais de linhagens brancas com 23 semanas ao início do período experimental, distribuídas num delineamento em blocos completos aleatorizados sendo estes caracterizados pela oncatenação das linhagens com coluna de gaiolas; os tratamentos foram cinco densidades ou taxas de lotação na gaiola (321,43; 375; 450; 562,50 e 750 cm2/ave) com seis repetições, totalizando 150 parcelas experimentais. As dietas experimentais foram à base de milho e farelo de soja, formuladas para suprir as exigências nutricionais das linhagens em todas as fases. O desempenho produtivo e econômico foram avaliados através do peso dos ovos (g), percentagem de postura (%), massa de ovos (g/ave/dia), consumo de ração (g/ave/dia), conversão alimentar por dúzia (kg/dz) e por quilo de ovo (kg/kg). A qualidade de ovos foi avaliada através da gravidade específica (GE), unidades Haugh (UH), percentagens de gema, albúmen e casca, espessura da casca (EC), resistência à quebra (RQ), coloração da gema e índice gema (IG). O bem-estar das aves foi avaliado através de indicadores clínicos, imunológicos e fisiológicos. Para efeito da avaliação dos resultados, foram estabelecidos seis blocos com repetições internas. Os dados foram analisados com auxílio do SAS, sob modelo misto, considerando os efeitos da densidade, período e a interação entre estes, como fixos, além dos efeitos aleatórios de bloco e resíduo. Por se tratar de medidas repetidas longitudinalmente, buscou-se a melhor estrutura de covariância para cada variável. Quando adequado foi aplicado o teste de tukey-kramer para a comparação de médias (p<0,05). O menor consumo de ração, CA/dz de ovos e melhor desempenho econômico, foram obtidos pela densidade 321,4 cm2/ave. Altas densidades de alojamento não influenciaram a qualidade interna de ovos, a % casca e RQ, mas essas variáveis tiveram efeitos dos períodos, com os melhores valores nos primeiros períodos. Altas densidades tiveram efeitos negativos sobre a GE e EC, principalmente no pico de postura das aves. Os ovos avaliados encontravam-se dentro dos valores desejados, mesmo nas maiores densidades, podendo ser classificados como de excelente qualidade. A densidade de alojamento não interferiru (p>0,05) na avaliação clínica das aves, mas o maior espaço proporcionado nas gaiolas do sistema covencional conferiu menor freqüência de lesões nas aves, indicando promoção e melhora ao seu bem-estar geral. Dados de freqüência cardíaca e temperatura da cloaca estavam dentro dos padrões de normalidade para a espécie. Não foram observadas diferenças (p>0,05) das densidades na resposta imunológica das aves, com os títulos dos anticorpos vacinais contra as doenças de Gumboro e Newcastle acima dos níveis do ponto de corte (cutoff). Os tratamentos não modificaram o perfil sanguíneo das aves e não foi possível caracterizar um padrão de corticosterona no plasma e de excreção de metabólitos fecais de glicocorticoides. A técnica de enzimoimunoensaio, empregada utilizando anticorpo primário contra corticosterona e anticorpo secundário anticoelho de cabra, foi capaz de detectar as variações nas concentrações de corticosterona nesses tecidos, contudo, o entendimento do significado desses achados ainda necessita de novas investigações. / 750 commercial laying hens of white strains aged 23 weeks at the beginning of the experimental period were used, distributed in a randomized complete block design, these being characterized by the concatenation of the strains with column of cages; the treatments were five densities or stocking rates in the cage (321,43, 375, 450, 562.50 and 750 cm2/bird) with six replications, amounting to 150 experimental plots. The experimental diets were on the basis of corn and soybean meal, formulated to meet the nutritional requirements of the strains in all the phases. Both the productive and economic performances were evaluated through the weight of the eggs (g), percentage of laying (%), egg mass (g/bird/day), feed intake (g/bird/day), feed conversion per dozen (kg/dozen) and per kg of egg (kg/kg). Egg quality was determined through specific gravity (SG), Haugh units (HU), percentages of yolk, albumen and shell, shell thickness (ST), resistance to breaking (BR), yolk coloration and yolk index (YI). The welfare of the birds was evaluated through clinical, immunological and physiological indicators. For the purpose of evaluation of the results, six blocks with internal replications were established. The data were analyzed with the aid of SAS, under a mixed model, considering the effects of density, period and the interaction between them, as fixed, in addition to the random effects of block and residue. For se tratar de measures longitudinally repeated, the best covariance structure for each variable was sought. When appropriate, the Tukey-Kramer test was used for comparison of means (p<0.05). The lowest feed intake, FI/dozen of eggs and best economic performance, were obtained at the density of 321.4 cm2/bird. High housing densities did not influence the internal quality of the eggs, % shell and BR, but these variables had effects from the periods, with the best values in the early periods. High densities had negative effects on SG and ST, mainly at the laying peak of the birds. The eggs checked lie within the desired values, even at the highest densities and can be classified as of excellent quality. The housing density did not interfere (p>0.05) in the clinical evaluation of the birds, but the greater space provided in the cages of the conventional system conferred a lower frequency of lesions in the birds, indicating promotion and improvement to their general welfare. Data of heart rate and cloacal temperature were within the normal limits for the species. No differences (p>0.05) of the densities in the immune response of the birds, with the titers of the vaccine antibodies against Gumboro and Newcastle diseases above the cutoff levels were found. The treatments did not modify the blood profile of the birds and it was not possible to characterize a standard of plasma corticosterone and excretion of fecal metabolites of glucocorticoids, but the enzyme immunoassay technique, using primary antibody against corticosterone and secondary goat anti-rabbit antibody, was capable of detecting variations in the corticosterone concentrations in these tissues, however, the understanding of the meaning of these findings still requires further investigation.