Resumo: Dentre os Characiformes a família Characidae é o grupo com maior número de espécies da ordem apresentando peixes de pequeno e grande porte. A subfamília Tetragonopterinae, antes considerada como a subfamília com o maior número de espécies foi considerada como um grupo polifilético. A partir de então, somente o gênero Tetragonopterus foi mantido na subfamília e todos os demais gêneros de Tetragonopterinae foram alocados em incertae sedis dentro de Characidae. Muitos exemplares pertencentes a este grupo, já tiveram seus cromossomos estudados, demonstrando que o número diploide mais frequente é 2n=50/2n=52 cromossomos. Outra característica marcante compartilhada por muitas espécies da família é o primeiro par metacêntrico maior do que os demais cromossomos do complemento A. Diante das problemáticas taxonômicas apresentadas na literatura para o grupo incertae sedis e considerando que ainda há muito que ser estudado sobre a citogenética dos mesmos, o presente trabalho constituiu em realizar análises dos cromossomos de espécies dos gêneros Bryconamericus, Piabina, Hyphessobrycon e Astyanax, visando detectar possíveis variações que permitam um melhor entendimento das relações evolutivas entre as populações desses gêneros em incertae sedis. Para tanto, os cromossomos das espécies Bryconamericus stramineus da bacia do rio Iguatemi - MS; Bryconamericus turiuba, Bryconamericus cf. iheringii, Piabina argentea, Hyphessobrycon eques e três populações de Astyanax fasciatus provenientes da bacia do rio Corumbataí - SP; Astyanax abramis do córrego Bento Gomes (MT); Astyanax mexicanus e Astyanax eigenmanniorum provenientes de loja de aquário e duas populações de Astyanax altiparanae provenientes do ICMBio- CEPTA - Pirassununga (SP) e córrego Guaçu... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Among the Characiformes, the Characidae family is the largest group of the order involving large and small fish. The subfamily Tetragonopterinae, previoulsy considered as the subfamily with the greatest number of species was considered as a polyphyletic group. Since then, only the genus Tetragonopterus was kept in the subfamily and all other Tetragonopterinae species were considered as incertae sedis within Characidae. Many specimens belonging this group had been their chromosomes studied, demonstrating that the most frequent diploid number is 2n=50/52 chromosomes. Another striking feature shared by many species of the family is the first metacentric pair larger than the other chromosomes of the complement A. Given the taxonomic problems presented in the literature for the group incertae sedis and considering that much remains to be studied about the cytogenetics of these group, the present work was to perform analysis of chromosomes of the genus Bryconamericus, Piabina, Astyanax and Hyphessobrycon, to detect possible variations that allow a better understanding of evolutionary relationships among populations in these genus in incertae sedis. The chromosomes of Bryconamericus stramineus Iguatemi River basin - MS; Bryconamericus turiuba, Bryconamericus cf. iheringii, Piabina argentea, Hyphessobrycon eques and tree populations of Astyanax fasciatus from Corumbataí River basin - SP; Astyanax abramis from stream Bento Gomes (MT); Astyanax mexicanus and Astyanax eigenmanniorum from aquarium store and two populations of Astyanax altiparanae from the ICMBio-CEPTA - Pirassununga (SP ) and stream Guaçu (MS) were analyzed using classical techniques such as Giemsa staining, Ag-RON, Cband and CMA3 addition to applying the technique of fluorescence in situ hybridization (FISH) with 18S and... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Patricia Pasquali Parise-Maltempi / Banca: Luciana Bolsoni Lourenço / Banca: Carlos Alexandre Fernandes / Mestre

Orientador: Fausto Foresti / Coorientador: José Carlos Pansonato Alves / Banca: Diogo Teruo Hashimoto / Banca: Roberto Ferreira Artoni / Resumo: Além dos cromossomos do complemento padrão A, alguns organismos possuem elementos genômicos extras chamados cromossomos B. Estes elementos enigmáticos estão presentes em aproximadamente 15% das espécies de eucariotos. Os mecanismos moleculares que norteiam o aparecimento e a evolução destes segmentos podem envolver silenciamento gênico, heterocromatinização, acúmulo de DNA repetitivo e transposons. O presente estudo se inseriu no programa de estudos de citogenética e genética molecular de peixes Neotropicais em desenvolvimento no Laboratório de Biologia e Genética de Peixes (IBB/UNESP/Botucatu, SP) e teve como objetivo o estudo da estrutura molecular e citogenética dos cromossomos B de Astyanax paranae. Análises citogenéticas clássicas e moleculares foram realizadas em exemplares desta espécie provenientes do rio Capivara, Bacia do rio Tietê (Botucatu-SP), revelando um número diploide padrão de 2n=50 cromossomos (8m+12sm+14st+16a e NF=84). Além disso, cromossomos supranumerários foram encontrados nas células de treze indivíduos (12 fêmeas e 1 macho) entre as 50 amostras analisadas, podendo se apresentar em duas variantes, uma metacêntrica (Bm) e uma submetacêntrica (Bsm). O bandamento C evidenciou blocos de heterocromatina constitutiva principalmente na região terminal do braço longo dos cinco primeiros pares de cromossomos acrocêntricos e no cromossomo B. O mapeamento do DNAr 18S evidenciou sítios em alguns cromossomos A, além de estar presente em ambas as extremidades dos cromossomos supranumerários e nos pares 2 e 23. O DNAr 5S foi localizado na região pericentromérica dos cromossomos do par 2 e no braço curto dos cromossomos do par 20, estando ausente no cromossomo B. Sequências para as histonas H1, H3 e H4 foram observadas co-localizadas nos braços curtos dos cromossomos dos pares 2 e 23. Foram verificados sítios de histona H1 na região pericentromérica dos cromossomos Bm e Bsm. O elemento ... / Abstract: In addition to the standard complement of chromosomes A, some organisms have extra genomic elements called chromosomes B. These cryptic elements are present in approximately 15% of eukaryotic species. The molecular mechanisms that govern the evolution of these segments may involve gene silencing, heterocromatinization, accumulation of repetitive DNA and transposons. The present study was inserted in the general studies program of cytogenetics and molecular genetics of Neotropical fishes in development at the Laboratory of Biology and Genetics of Fishes (IBB/UNESP/Botucatu, SP) and aimed to study the molecular structure of B chromosomes and cytogenetics of Astyanax paranae. Classical and molecular cytogenetic analyzes were performed on specimens of this species from the Capivara River, Tietê River Basin (Botucatu-SP), revealing a pattern diploid number of this species of 2n=50 chromosomes, with the karyotype formula identified by 8m+12sm+14st+16a and FN=84. Furthermore, supernumerary chromosomes found in the cells of thirteen samples (12 females and 1 male), and may appear in two variants, one metacentric (Bm) and a submetacentric (Bsm). The C-banding showed blocks of constitutive heterochromatin mainly in the terminal region of the long arm of the first five pairs of acrocentric chromosomes and in the B chromosome. The 18S rDNA mapping showed sites on some chromosomes, and ... / Mestre

Orientador: Agnes Cristina Fett Conte / Banca: Cláudia Regina Bonini Domingos / Banca: Flávio Naoum / Resumo: As Síndromes Mielodisplásicas (SMD) definem um grupo de doenças clonais das células hematopoéticas caracterizadas por citopenias, displasia em uma ou mais linhagens celulares mielóides, hematopoese ineficaz e aumento do risco de evolução para leucemia mielóide aguda. A frequência de doentes que progridem para o câncer varia com o subtipo de SMD, de acordo com a classificação da Organização Mundial da Saúde. As SMD são consideradas doenças pré-malignas e, ao contrário de outras doenças hematológicas, como as leucemias, estão geralmente associadas a anomalias cromossômicas desequilibradas. Estas consistem principalmente em deleções, translocações e alterações numéricas. Também são frequentemente observadas perdas de material genético, com consequente inativação de genes supressores tumorais. Estes genes controlam mecanismos biológicos vitais, como reparo do DNA, crescimento e morte celular programada. Um exemplo é o supressor de tumor RASSF1A (Ras-association domain family 1, isoform A), mapeado em 3p21.3. A falta de expressão deste gene e taxas elevadas de mutações, especialmente envolvendo os exons 3, 4 e 5, foram descritas em diversos tipos de cancêr, mas nunca foram investigadas em SMD. Neste contexto, este projeto teve como proposta investigar a presença de alterações cromossômicas e de mutações nos exons 3, 4 e 5 do gene RASSF1A em indivíduos com SMD ao diagnóstico e em controles normais. Foram estudados 50 casos dos quais foram realizadas culturas de curta duração (24 horas) de células de medula óssea sem estimulação mitogênica e sequenciamento direto dos exons de interesse. Quatro casos (8%) apresentaram alterações cromossômicas, caracterizadas como hipodiploidia em dois casos, monossomia do cromossomo 7 em um e um cariótipo complexo envolvendo os cromossomos 3, 5 e 11 em outro. A análise molecular dos exons 3, 4 e 5 dos 50 casos revelou dois (4%) casos com o polimorfismo ... / Abstract: The myelodysplastic syndromes (MDS) are characterized by cytopenias, dysplasia in one or more myeloid cell lines, ineffective hematopoiesis and an increased risk of acute myeloid leukemia (AML) transformation. The rate of patients who progress to AML varies by subtype of disease, according to the World Health Organization classification. The MDS are considered premalignant diseases and unlike of other hematological diseases, such as leukemia, are mostly associated with unbalanced chromosomal abnormalities, as deletions, translocations and numerical changes, beyond loss of genetic material with consequent tumor suppressor genes inactivation, which can control biological mechanisms such as DNA repair, growth and programmed cell death. An example is the tumor suppressor RASSF1A (Ras-association domain family 1, isoform A) mapped in 3p21.3. The high mutation rates and no expression of this gene, mainly exons 3, 4 and 5, have been described in several types of cancer but have never been investigated in MDS. Thereby chromosomal changes and mutations in exons 3, 4 and 5 from RASSF1A of the bone marrow cells from 50 cases the diagnosis of MDS were investigated. The assays were accomplished for 24 hours applying bone marrow cells without mitogenic stimulation and the exons were straight sequenced, where four samples (8%) had chromosomal abnormalities, characterized for hypodyploidy (two cases), monosomy 7 and complex karyotype involving chromosomes 3, 5 and 11. Molecular analysis revealed two (4%) other cases with Ala133Ser polymorphism (A133S) in exon 3. The cytogenetic changes observed are related to the MDS developed, while the polymorphism has been proposed to be involved in some types of cancers predisposition. The results can support other studies which are searching for genetic factors involved in the pathogenesis of MDS / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-11-12Bitstream added on 2014-06-13T20:21:24Z : No. of bitstreams: 1 silva_el_dr_rcla_parcial.pdf: 615041 bytes, checksum: 1af1e3808561ee8274d10b82b1b2c954 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-16T10:37:55Z: silva_el_dr_rcla_parcial.pdf,Bitstream added on 2015-01-16T10:38:38Z : No. of bitstreams: 1 000707790.pdf: 4920207 bytes, checksum: 28d5b7e5ae05d8701bc77d0be2089300 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A família Anostomidae compreende um grupo com 12 gêneros que apresenta ampla distribuição pela América do Sul e Central. Estudos citogenéticos de várias espécies da família mostram uma estrutura cariotípica bastante conservada, com o número diplóide igual a 54 cromossomos, dos tipos meta e submetacêntricos e apenas um par de cromossomos portador de regiões organizadoras de nucléolos (NOR) localizadas em posições e pares distintos nas diferentes espécies do grupo. Através de estudos envolvendo técnicas de citogenética molecular têm se conseguido uma caracterização mais resolutiva dos cromossomos de algumas espécies da família. Estas metodologias forneceram evidências de polimorfismos de NOR, diferentes padrões de distribuição da heterocromatina constitutiva, presença de seqüências repetitivas sexo-específicas e novos sistemas de cromossomos sexuais heteromórficos do tipo ZZ/ZW bem como a diferenciação de híbridos interespecíficos. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo acrescentar novos dados que auxiliem no estabelecimento de padrões para esclarecer a história evolutiva dos cromossomos sexuais em espécies de Anostomidae, baseado no estudo da organização de seqüências repetitivas isoladas do genoma de Leporinus elongatus em diferentes espécies de Anostomidae. Para tanto, novos elementos repetitivos do genoma de Leporinus elongatus foram isolados através de restrição enzimática e usados em experimentos de hibridação fluorescente in situ (FISH) tanto em L. elongatus quanto nas espécies L. macrocephalus, L. obtusidens, L. friderici, L. lacustris, L. striatus, Schizodon borellii, S. isognathus e Abramites hypselonotus. Além disso, sondas de cromossomos inteiros obtidos por microdissecção também foram usadas nesses experimentos, a fim de buscar identificar... / The Anostomidae family comprises a group with 12 genera widely distributed throughout Central and South American Rivers. Cytogenetic studies carried out in several anostomids shows a karyotypic structure very conserved, with a diploid number equals to 54 chromosomes, metacentric and submetacentric, and only one chromosome pair carrier of nucleolar organizing regions (NOR), localized at distinct chromosome positions in the species of the family. The studies using molecular cytogenetic techniques have been providing a more accurate characterization of some species. These methods highlighted NOR polymorphisms, differential pattern of heterochromatin distribution, the presence of sex specific repetitive sequences, as well as new heteromorphic sex chromosomes and interspecific hybrids differentiation. Thus, the present study aimed to add new data to assist in to establish patterns to clarify the evolutionary history of sex chromosomes in Anostomidae species, based on the study of the organization of repetitive sequences isolated from Leporinus elongatus genome in different species of Anostomidae. For this, new repetitive elements were isolated from L. elongatus and used in Fluorescent in situ hybridisations experiments (FISH) in L. elongatus as well in the species L. macrocephalus, L. obtusidens, L. friderici, L. lacustris, L. striatus, Schizodon borellii, S. isognathus e Abramites hypselonotus. Indeed, probes of whole sex chromosomes obtained through microdissection were also used in order to identify similarities among the anostomids chromosomes and the presence of sex chromosomes in differentiation stages. The LeSmaI repetitive element has 378 bp and is exclusive to L. elongatus individuals. This is a satellite DNA localized near to the NOR in a highly heterochromatic region. The presence of this satellite DNA reinforces... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Claudio de Oliveira / Resumo: Embora a ictiofauna Neotropical seja considerada a mais diversa do mundo, apenas 12,2% das espécies de peixes tiveram cariótipos descritos. A dificuldade de se obter preparações cromossômicas de boa qualidade para algumas espécies de peixes Neotropicais ainda é um dos grandes desafios na área de Citogenética, principalmente para peixes de pequeno e grande porte. Uma alternativa é uso de metodologias indiretas, tais como cultura de células, amplamente utilizada e estabelecida em mamíferos, entretanto para peixes ainda é pouco empregada pela dificuldade de padronização da técnica de isolamento e manutenção das culturas celulares. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de uma metodologia de cultura de células aderentes para obtenção de cromossomos mitóticos em peixes neotropicais, estabelecendo linhagens celulares de diferentes espécies e a determinação de suas características citogenéticas. Seis espécies de peixes Neotropicais da ordem Characiformes foram utilizadas para obtenção das culturas primárias, desenvolvimento e criopreservação das linhagens celulares e analise citogeneticamente. Para obtenção das linhagens, células de tecido muscular foram isoladas usando enzimas proteolíticas. As células isoladas foram cultivadas em frascos ou placas tratadas com um filme à base de gelatina e mantidas à 27,5ºC, 5% CO2 em meio completo (DMEM+soro fetal bovino+antibióticos+antimicóticos). Quando as células cobriram toda a superfície do substrato, elas foram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Although Neotropical ichthyofauna is considered the most diverse in the world, only 12.2% had karyotypes described. The difficulty of obtaining good quality chromosome preparations for some Neotropical fish species is still one of the major challenges in the area of cytogenetics, especially for small and large fish. An alternative is the use of indirect methodologies, such as cell culture, widely used and established in mammals, however for fish is still little used for the difficulty of standardization of the technique of isolation and maintenance of cell culture. Thus, the present study aimed to develop a methodology for adherent cell culture to obtain mitotic chromosomes in Neotropical fish, establishmenting cell lines of different species and the cytogenetic characteristics of these lines. Six species of Neotropical fish of the order Characiformes were used to obtain primary cell, development and cryopreservation of the cell lines and cytogenetic analysis. To obtain the cell lines, muscle tissue were isolated using proteolytic enzymes. The isolated cells were cultured in flasks or plates treated with a gelatin-based film and maintained at 27.5 °C, 5% CO2 in complete medium (DMEM + fetal bovine serum + antibiotics + antimycotics). When the cells covered almost all surface of the substrate, they were transferred to new flasks to obtain chromosome preparations and cryopreservation. The chromosome preparations of the cell lines were performed in different passages in the spec... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Cesar Martins / Coorientador: Guilherme Targino Valente / Banca: Marcelo Ricardo Vicari / Banca: Danilo Pinhal / Resumo: Cromossomos B, também conhecidos como supernumerários, são considerados elementos dispensáveis ao organismo. Porém, alguns estudos têm apresentado evidências de uma possível funcionalidade destes cromossomos extras. São encontrados em muitas espécies de eucariotos, entre elas, Astatotilapia latifasciata, ciclídeo africano que possui de 1 a 2 cromossomos B. Os ciclídeos têm sido muito utilizados como organismos modelo para estudos genéticos e genômicos. Análises genômicas em larga escala prévias envolveram sequenciamento por next generation (Illumina HiSeq sequencing) de genomas sem cromossomo B (B-) e com cromossomo B (B+) de A. latifasciata e uma forma variante do gene hnRNP Q-like (Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein Q-like) foi identificada. Esta sequência apresenta um alto número de cópias e características de retrogene no cromossomo B. Diante disso, foi objetivo do presente trabalho compreender a organização genômica, identificar os mecanismos de retro-inserção e fazer análises de expressão desta sequência, possibilitando um melhor entendimento da origem, evolução e possíveis efeitos deste cromossomo na espécie estudada. A partir de análises de bioinformática foram identificadas cópias variantes do gene hnRNP Q-like no genoma B+ e as regiões mais representativas foram selecionadas, de acordo com o grau de mutações, para demais estudos. Análises de fragmentos sequenciados e qPCR confirmaram que o gene possui maior número de cópias e ausência de íntrons no cromossomo B. Evidências de resquícios de domínios da transcriptase reversa de elementos transponíveis sugerem que o gene foi retroinserido no cromossomo B. Dados de qPCR em cDNA mostraram que, apesar de possuir mais cópias no genoma B+, o gene hnRNP Q-like não é diferencialmente expresso nos genomas B+ e B- / Abstract: B chromosomes, also known as supernumerary, are considered dispensable elements to organisms. However, some studies have presented evidences of a possible functionality of this extras chromosomes. They are observed in many eukaryote species, such as in the African cichlid, Astatotilapia latifasciata, which might have one or two B chromosomes. Cichlids have been used as model organisms to genetics and genomics studies. Previous genomic analyses based on next generation sequencing (Illumina HiSeq sequencing) were realized in the whole genome without B chromosome (B-) and with B chromosomes (B+) of A. latifasciata and a variant form of hnRNP Q-like (Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein Q-like) gene was identified. This sequence presented a high copy number and characteristics of a retrogene in B chromosomes. Thus, the aim of this study consists in comprehend genomic organization, identify retroinsertion mechanisms and perform expression analyses of the hnRNP Q-like gene, making it possible a better understanding of origin, evolution and possible effects of this chromosomes in the studied species. Bioinformatics analyses identified variant copies of hnRNP Q-like gene in B+ genome and the higher and lower variable regions of the gene were selected, based in mutation rates, for further analysis. Analyses from sequenced fragments and qPCR confirmed gene has a higher number of copies and do not present introns in B chromosome. Evidences of transposable element relics with reverse transcriptase domains suggest gene was retroinserted in B chromosome. The data of qPCR in cDNA showed that the hnRNP Q-like gene is not differentially expressed in both genomes (with and without B chromosome) / Mestre

Com a idéia de identificar proteínas envolvidas no processo de enovelamento das proteínas sintetizadas na glândula salivar de Rhynchosciara americana, no início deste projeto adotou-se como estratégia o seqüenciamento de uma biblioteca de cDNA. Esta biblioteca foi construída utilizando-se glândulas salivares de Rhynchosciara americana do período de seu desenvolvimento onde tem início a síntese de seu casulo. Mensagens de proteínas envolvidas no processo de enovelamento, transporte e proteólise foram isoladas, alguns exemplos são hsc70, hsp83, hip, hop, dnaJ, trap1 e prolil isomerase, sec61α/β, sec23, peptidase de sinal, rab7, partícula reconhecedora de sinal (srp), enzima conjugadora de ubiquitina e complexo regulatório proteassomo 26, cop 1 e ubiquitina ligase. A identificação destes genes permitiu o isolamento de clones genômicos através de triagem em banco de fagos e caracterização dos genes hsc70 e hsp83 para verificação de sua organização em Rhynchosciara americana. A expressão dos seus respectivos mRNAs foi avaliada em vários períodos do último estágio larval. A localização por hibridização in situ mostrou que estes genes estão localizados em regiões dos cromossomos politênicos próximas a dois pufes de DNA, C3 e C8. O estudo dos níveis de expressão das proteínas codificadas pelos genes hsc70 e hsp83 mostrou a diferença de comportamento destes genes sob condições de estresse térmico e que a expressão destas proteínas deve ser regulada pelo período de desenvolvimento das larvas de Rhynchosciara americana. Quando evidenciada por imunofluorescência a proteína Hsc70 mostra localização predominantemente no citoplasma. / With the idea of identify some of these proteins involved in the folding process of the proteins synthesized on the Rhynchosciara salivary gland, this project started adopting the shotgun cDNA sequencing strategy. This cDNA library was constructed utilizing salivary glands of Rhynchosciara americana at a developmental period where the cocoon construction begins. Messengers of important proteins involved in the folding, transport and proteolysis process were isolated, some examples are hsc70, hsp83, hip, hop, sec61 α/β, sec23, signal peptidase, rab7, signal recognition particle (srp), ubiquitin conjugating enzyme e 26 proteasome regulatory complex, cop 1 and ubiquitin ligase. Identification of these genes allowed the screening of genomic clones from a phage library; hsc70 and hsp83 characterization was carried out to verify the arrangement of these genes on genome of Rhynchosciara americana. The study of these genes will contribute with phylogenetic information about the specie. The mRNA expression of these genes was analyzed during several periods of the last larval developmental stage. In situ localization showed that these genes are located in polytene chromosomes regions near two DNAs puffs, C3 and C8. The expression levels of the proteins codified by genes hsc70 and hsp83 showed different behaviors of these genes under heat stress conditions and mainly, that the regulation of the proteins Hsc70 and Hsp83 can be related to the period of development of the larvae of Rhynchosciara americana. When revealed by immunofluorescence, Hsc70 protein shows localization predominantly on the cytoplasm.

Atualmente muitas são as técnicas utilizadas na área de citogenética para que os desequilíbrios genéticos potencialmente hereditários sejam identificados ou evitados. Algumas das técnicas são utilizadas apenas para o diagnóstico de enfermidades em humanos, mas seria importante que fossem aplicadas também aos animais domésticos, com a finalidade de se associar uma causa genética ao aparecimento de algumas doenças, como por exemplo, os mastocitomas. Os mastocitomas são formações cutâneas neoplásicas originadas de mastócitos e se apresentam com frequência em cães. Algumas raças apresentam maior susceptibilidade ao aparecimento de mastocitoma, e o Boxer tem a maior incidência nesta espécie. Este trabalho objetivou avaliar comparativamente o cariótipo de cães da raça Boxer e buscar uma possível correlação com o desenvolvimento de mastocitoma. Foram utilizadas técnicas citogenéticas de bandamentos C, G e Ron além de análises em coloração convencional (Giemsa). Para tais análises utilizaram-se células cultivadas de linfócitos periféricos e de mastocitomas de Boxer. O material foi analisado e fotografado em microscópio de imersão da marca Zeiss®, em objetiva de 100x, com filtro verde, equipado com software de análise citogenética Ikaros®. Foram consideradas alterações numéricas e estruturais. Foram analisadas 828 metáfases mitóticas provenientes de linfócitos periféricos e células de mastocitomas. A análise das metáfases provenientes de cultura de células dos linfócitos periféricos não apresentou alterações estruturais e a análise numérica mostrou somente uma metáfase com 2n=77, dentre 476 metáfases analisadas. Na análise das metáfases de células tumorais, entre todas as colorações, observou-se que 70,9% apresentou 2n=78, 17,4% mostraram 2n=77; 9,8% 2n=76. Cinco metáfases (1,3%) apresentaram 2n=79 e duas células apresentaram 2n=75. Todas essas alterações numéricas estão relacionadas com alterações estruturais do tipo fusão cêntrica. Os resultados obtidos mostram que devido ao crescimento descontrolado, as células tumorais promovem rearranjos na tentativa de controlar a divisão celular. Ainda, o aprimoramento das técnicas diagnósticas em citogenética promove o conhecimento da biologia tumoral do mastocitoma canino, e consequentemente, possibilita o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. / Nowadays there are many techniques applyed in cytogenetics in order to identify or avoid potentially hereditary genetic imbalance. Some of the techniques are used only to diagnose human diseases, but it would be important to apply them also to domestic animals, with the purpose of associating a genetic cause with the appearance of some diseases like, for example, mastocytomas. The mastocytomas are neoplasics cutaneous formation originated from mastocitos and frequently appears in dogs. Some breeds show higher susceptibity to the appearance of mastocytoma, and the boxer breed has shown the highest incidence. The objective of this study is to comparatively evaluate the boxer breed chariotype and search for a possible correlation with the mastocytoma development. There has been utilized cytogenetics bandamentos C,G e Ron as well as conventional (Giemsa) coloring analysis. For those analysis there has been utilized cultivated cells from peripheral lynphocites and boxer´s mastocytomas. The material as been analyzed and photographed in a Zeiss immersion microscope, using a 100x objective with green filter, equipped with Ikaros cytogenetic analysis software. It has been considered numerical and structural alterations. There has been analyzed 828 mithotics metaphases from peripheral lynphocites and mastocytomas cells. The analysis of metaphases from the culture of peripheral lynphocites cells did not show structural alterations and the numerical analysis has shown only one metaphase 2n=77, among 476 analyzed metaphases. In the tumoral metaphase cells analysis, among all colorations, it has been observed that 70,9% presented 2n=78, 17,4% shown 2n=77 and 9,8% 2n=76. Five metaphases (1,3%) presented 2n=79 and two cell presented 2n=75. All these numerical alterations are related with structural alterations from the centric fusion type. The obtained results shows that due to the uncontrolled growth, the tumoral cells promote rearrangements in an attempt to control a cellular division. Yet, the improvement of diagnosis technique in cytogenetics promotes the knowledge of canine mastocytoma tumoral biology, and consequently allows the new therapeutic strategy development.

O gênero Rhamdia, popularmente conhecido como jundiá, pertence à família Heptapteridae, uma das maiores radiações de bagres neotropicais de água doce. Estes peixes de médio porte e hábitos oportunistas e noturnos são encontrados em pequenos rios e córregos. No passado, Rhamdia foi considerado um dos gêneros mais especiosos dentro de Siluriformes, contando com cerca de 100 espécies descritas. Entretanto, após uma revisão taxonômica recente o número de espécies desse gênero foi reduzido a 12. Dados genéticos, de natureza cromossômica e molecular, caracterizam o gênero Rhamdia como um grupo que apresenta grande diversidade, sugerindo a existência de complexos de espécies, principalmente para a espécie R. quelen, a única estudada do ponto de vista citogenético até o momento. No presente trabalho, foram utilizadas diferentes metodologias com o intuito de caracterizar cromossomicamente populações de diferentes espécies de Rhamdia, bem como estabelecer as relações evolutivas entre elas, contribuindo para o reconhecimento de padrões e processos evolutivos envolvidos em sua diferenciação. Foram analisados exemplares de R. enfurnada, R. itacaiunas, R. laukidi e R. quelen, provenientes das principais bacias hidrográficas da América do Sul, sendo somadas as análises sequências de genes mitocondriais de R. cinerascens, R. guatemalensis e R. laticauda provenientes do GenBank, totalizando sete das 12 espécies reconhecidas para o gênero. A análise de cinco regiões do genoma mitocondrial identificou a existência de 15 grupos bem definidos e com altos valores de suporte para o que hoje é reconhecido como R. quelen, confirmando a existência de um complexo de espécies. A divisão das espécies de Rhamdia em um grupo Cis-Andino e um grupo Trans-Andino, proposta anteriormente, também foi recuperada, embora o gênero não tenha sido confirmado como monofilético. Os dados citogenéticos permitiram o estabelecimento de tendências de evolução cromossômica dentro do grupo e a sugestão de um possível mecanismo de origem e diferenciação dos cromossomos supranumerários. O presente trabalho reforça a importância da utilização de diferentes abordagens na realização de estudos taxonômicos e evolutivos, sugerindo uma nova revisão do gênero Rhamdia que leve em consideração os dados genéticos obtidos. / The genus Rhamdia, popularly known as jundia, belongs to the family Heptapteridae, one of the greatest radiations within neotropical freshwater catfish. This group of middle-sized fish of opportunistic behavior is found in small rivers and streams. In the past, Rhamdia was considered one of the most specious genera of Siluriformes, comprising about 100 described species. However, after a recent taxonomic review, the number of species within this genus was reduced to 12. Genetic data, whether chromosomal or molecular, have characterized the genus Rhamdia as a high diverse group, suggesting the existence of species complexes, mainly in R. quelen, the only species where cytogenetic data are available so far. In the present work, different methodologies were used in order to characterize cytogenetically populations of distinct species of Rhamdia, as well as their evolutionary relationships, thus contributing to the recognition of evolutionary patterns and processes involved in their differentiation. Specimens of R. enfurnada, R. itacaiunas, R. laukidi and R. quelen, from the main South-American hydrographic basins were analyzed, coupled with sequence analyses of the mitochondrial genes of R. cinerascens, R. guatemalensis and R. laticauda, available in the GenBank, thereby comprising seven of the 12 valid species in the genus. The analysis of five regions of mitochondrial genome identified 15 well-defined groups with high bootstrap values within the so-called R. quelen, confirming the occurrence of a species complex. The division of Rhamdia species into a Cis-Andean group and a Trans- Andean group, as previously proposed, was also revalidated, although the genus seems not to be monophyletic. The cytogenetic data allowed establishing trends of chromosomal evolution within the group and a hypothesis for the origin and differentiation of supernumerary chromosomes could be drawn. The present work reinforces the importance of distinct approaches in taxonomic and evolutionary studies, suggesting a new revision within the genus Rhamdia that takes the present genetic data into account.

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FISH com sondas de DNA ribossomal e impregnação com nitrato de prata revelaram dois sítios de NOR e hibridizações com sondas teloméricas evidenciaram marcações nos centrômeros de todos os cromossomos, exceto o Y. Através de estudos meióticos, bandeamentos cromossômicos e FISH utilizando sondas totais do cromossomo X de Phyllostomus hastatus (Chiroptera, Phyllostomidae) sugerimos que o par sexual dessa espécie é diferente daquele descrito na literatura. Células em diplóteno-diacinese apresentaram uma conformação em anel envolvendo quatro pares de cromossomos, sugerindo a ocorrência de múltiplas translocações recíprocas envolvendo esses cromossomos, fato esse raro em vertebrados e inédito em mamíferos eutérios. A análise de RNA, SCA e SLE indicam que os cariótipos de Emballonuridae são conservados mesmo comparando espécimes afastados geograficamente, mas a análise do bandeamento C indica que podem ocorrer variações intraespecíficas a nível de heterocromatina constitutiva. Pela primeira vez as regiões organizadoras de nucléolos foram descritas revelando marcações em um par de cromossomos em cada espécie analisada. A FISH com sondas de DNA Ribossomal 18S coincidiram com as marcações da prata. FISH com sondas teloméricas humanas revelaram marcações distais em todos os cromossomos. Esses trabalhos são importantes para compreender a biodiversidade de morcegos da região amazônica, bem como a compreensão da evolução cromossômica de Chiroptera. / This is the first description of the karyotypes of bats of the family Emballonuridae from the Brazilian Amazon region. The species studied were Cormura brevirostris-CBR (2n=22; NF=40), Rhynchonycteris naso-RNA (2n=22 and NF=36), Saccopteryx canescens-SCA (2n=24 and FN=38) and Saccopteryx leptura-SLE (2n=28 and NF=38), characterized by G-, C-banding, NOR-staining and Fluorescent In Situ Hybridization (FISH). In CBR the karyotypes found had the same diploid number and fundamental number than in literature. FISH with ribosomal DNA probes and Ag-NOR staining showed two NOR places. Hybridization with telomeric probes showed that the sequences were found in the centromeres of all chromosomes but the Y. Using meiotic studies, chromosome banding and FISH with a whole X chromosome probe from Phyllostomus hastatus (Chiroptera, Phyllostomidae) we suggest that the sex chromosome pair of this species is not the one described in the literature. Cells in diploid and diakinesis had a ring conformation with four chromosome pairs, what suggests multiple reciprocal translocations among these chromosomes, a very rare situation in vertebrates and never found in eutherian mammals. The analyses of RNA, SCA and SLE shows that the karyotypes of Emballonuridae are very conservative even when compared with samples collected geographically very far, but the C-banding analyses shows that it can happen intraspecific variations in the constitutive heterochromatin. For the first time the Nucleolar Organizer Regions were described, showing a stained pair of chromosomes on each analyzed species. The FISH with 18S rDNA probes agrees with the Ag-NOR staining. FISH with human telomeric probes showed hybridizations in the distal portion of all chromosomes. These works are Important to understand the biodiversity of bats from the Amazon region, as well as the comprehension of the chromosomal evolution of Chiroptera.