Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2014-08-11T13:24:14Z No. of bitstreams: 1 Diego Moura Santos. Avaliação... 2014.pdf: 3934510 bytes, checksum: 06fa6fa5250655c119370a03b641e2d0 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-11T13:24:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Diego Moura Santos. Avaliação... 2014.pdf: 3934510 bytes, checksum: 06fa6fa5250655c119370a03b641e2d0 (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A leishmaniose é uma doença de escala global, que afeta 12 milhões de pessoas e pode causar um espectro de doenças que vai desde a forma cutânea localizada, que tende para a cura espontânea, até a forma visceral que é fatal. Apesar da gravidade da doença, até o momento não existe uma vacina efetiva para prevenir a leishmaniose. Dentre os antígenos promissores para o desenvolvimento de uma vacina, destacam-se as proteínas ribossomais (S4, S6, L3 e L5) e a KMP-11, uma proteína de superfície presente nos membros da família tripanosomatidae. Nosso estudo consistiu em avaliar os efeitos da imunização com estes antígenos frente ao desafio com L. major e com L. braziliensis, empregando modelos experimentais de infecção. Primeiramente, avaliamos a capacidade protetora dos antígenos ribossomais frente à infecção por L. major. Dos quatro antígenos avaliados, apenas L3 ou L5 foram capazes de prevenir o desenvolvimento da lesão e de diminuir a carga parasitária. A vacinação de camundongos com estes antígenos, na presença de CpG, induziu um perfil de resposta Th1, com elevada produção de IFN-γ, baixa produção de IL-10 e presença de anticorpos IgG2a. Em seguida, avaliamos a capacidade protetora dos antígenos L3 e L5 contra o desafio por L. braziliensis, na presença da saliva do vetor. A imunização com os antígenos L3 e/ou L5 também induziu uma elevada produção de IFN-γ, resultando em significativa redução na espessura da lesão e menor carga parasitária. Com relação ao antígeno KMP-11, investigamos a sua capacidade protetora utilizando duas estratégias vacinais: a estratégia homóloga que consistiu na imunização de camundongos com um plasmídeo de DNA que codifica KMP11 (DNA KMP-11) e a estratégia heteróloga que consistiu na imunização com nanopartículas de PLGA contendo DNA KMP-11, seguido de um reforço com nanopartículas contendo a proteína KMP-11 sob forma recombinante, na presença de CpG. As nanopartículas protegem o antígeno da degradação enzimática e promovem a liberação controlada deste, além de atuar como um adjuvante. Ambas as estratégias não impediram o desenvolvimento da lesão, após o desafio com L. braziliensis e na presença de saliva do vetor. Entretanto, os animais imunizados com a estratégia heteróloga apresentaram uma maior redução da carga parasitária comparado com o grupo imunizado pela estratégia homóloga. Este efeito foi associado com uma maior produção de IFN-γ e de TNF-α no sítio da infecção. Por fim, avaliamos a indução da resposta imune inata em macrófagos estimulados com KMP-11 encapsulados em nanopartículas. Observamos que a estimulação de macrófagos murinos com KMP-11, encapsulada em nanopartículas de PLGA, reduziu a carga parasitária intracelular e aumentou a produção de oxido nítrico, superóxido, TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-1β, IL-18, CCL2/MCP-1, CXCL-1/KC sugerindo a indução de uma potente resposta imune inata. Assim, concluímos que os antígenos L3 e/ou L5 mostraram ser promissores para o desenvolvimento de uma vacina que proteja contra as principais espécies de Leishmania e que o encapsulamento de antígenos em nanopartículas é capaz de induzir uma forte resposta imune. Essa estratégia deve ser considerada quanto ao desenvolvimento de vacinas para a leishmaniose. / Leishmaniasis is a global disease affecting 12 million people and can cause diseases that range from self-healing localized cutaneous leishmaniasis to fatal visceral leishmaniasis. Despite the severity of the disease, there is no effective vaccine to prevent leishmaniasis. Among the promising antigens for the development of a vaccine, stand out the ribosomal proteins (S4, S6, L3, and L5) and KMP-11, a surface protein, widely found in the members of family Trypanosomatidae. Our study evaluated the effects of immunization with these antigens upon challenge with L. major and L. braziliensis, employing the experimental models of infection. First, we evaluated the protective ability of ribosomal antigens to infection by L. major. Among the four antigens examined only L3 or L5 were able to prevent lesion development and decrease the parasite load. Mice vaccinated with these antigens, plus CpG, developed a Th1-type response with high production of IFN-γ, low production of IL-10 and presence of IgG2a antibodies. Next, we evaluated the protective capacity of L3 and L5 antigens against challenge by L. braziliensis, in the presence of sand fly saliva. Vaccination with L3 or L5 also induced a high production of IFN-γ, resulting in significant inhibition of lesion development and lower parasite load. Regarding KMP-11, we investigated its protective capacity using two immunization strategies: the homologous strategy, which consisted in immunizing mice with a plasmid DNA encoding KMP-11(DNA KMP-11) while the heterologous immunization strategy consisted of inoculation of PLGA nanoparticles (NPs) containing DNA KMP-11 followed by a booster inoculation with nanoparticles containing recombinant KMP-11, in the presence of CpG. Nanoparticles protect the antigen from enzymatic degradation and promote controlled release, in addition to acting as an adjuvant. Lesion development was not inhibited following either immunization strategy, after challenge with L. braziliensis in the presence of sand fly saliva. However, animals immunized with the heterologous strategy showed a greater reduction in parasite load compared with the group immunized by the homologous strategy. This effect was associated with increased production of IFN-γ e TNF-α at the infection site. Finally, we evaluated the induction of the innate response in macrophages stimulated with KMP-11 encapsulated in NPs. We observed that stimulation of murine macrophages with KMP-11 encapsulated in NPs reduced the parasitic load and increased production of nitric oxide, superoxide, TNF-α, IFN-γ, IL-6, IL-1β, IL-18, CCL2/MCP-1, CXCL-1/KC suggesting the induction of a potent innate immune response. We conclude that the L3 and/or L5 are promising antigens for the development of a vaccine that protects against the main species of Leishmania and that encapsulation of antigens into nanoparticles induces strong immune response. This strategy should be considered for the development of vaccines against leishmaniasis.

Introdução. O Litoral Norte Paulista, até a década de 1980, era hipoendêmico para transmissão de leishmaniose tegumentar americana (LTA). A partir da década de 1990, esta parasitose adquiriu caráter epidêmico em todos os municípios: Caraguatatuba, Ilhabela, São Sebastião e Ubatuba. Objetivo. Realizar análise descritiva da ocorrência dos casos de LTA autóctone no Litoral Norte Paulista, entre 1993 e 2005 e registrar as espécies de flebotomíneos na área de transmissão. Métodos. Foram analisados dados secundários obtidos das fichas de casos de LTA autóctones, notificados ao serviço de vigilância epidemiológica da Secretaria Estadual de Saúde, segundo distribuição espacial, temporal, atributos pessoais e dados das fichas de captura entomológica da Superintendência de Controle de Endemias. Resultados. A LTA apresentou distribuição espacial heterogênea, com casos isolados e agrupados. Houve sincronismo na manifestação do agravo, com ciclicidade, em intervalo de seis a oito anos. Todas as faixas etárias e sexo foram acometidos, sem evidência de risco com ocupação específica. A fauna flebotomínea foi composta por dezesseis espécies, com predomínio de Ny. intermedia (>80,4%), no peri e intra domicílio. Conclusões. A LTA apresenta estreita relação com a floresta e a transmissão ocorre no peri e no intradomicílio, tanto no ambiente periurbano como no interior da mata. Neste caso, a transmissão estaria mais relacionada com os focos enzoóticos. / Introduction. The northern coast of the State of São Paulo was, up to the decade of the 1980´s, hypoendemic for the transmission of American cutaneous leishmaniasis (ACL). However, as from the decade of the 1990´s this disease acquired epidemic characteristic in all the municipalities: Caraguatatuba, Ilhabela, São Sebastião and Ubatuba. Objective. To undertake a descriptive study of the occurrences of the autochthonous cases of ACL in the four municipalities of the northern coast of the state of São Paulo, between 1993 and 2005, and to record the phlebotomine species in the area of transmission. Methods. Secondary data of spatial and temporal distribution and personal characteristics were analyzed from the records of autochthonous ACL cases notified to the epidemiological surveillance service of the State Health Secretariat. Information on phlebotomines were obtained from data of entomological captures undertaken by the Superintendência de Controle de Endemias. Results. The ACL presented heterogeneous spatial distribution with both isolated and clustered cases. There was synchronicity in the occurrence of the disease in all the municipalities, with cyclicality at intervals of from six to eight years. All age groups and both sexes were affected, without any particular profession. The phebotomine fauna consisted of sixteen species, with Ny. intermedia predominating (>80.4%) both in the peri and intra domicíle. Conclusions. ACL presented a close relation with the forest and its transmission occurs in the peri and intra-domicile, in the periurban environment and within the forest. In this latter case the transmission is more closely related to the enzootic foci.

Submitted by Daniele Amaral (daniee_ni@hotmail.com) on 2016-09-21T20:58:24Z No. of bitstreams: 1 DissVBS.pdf: 1740289 bytes, checksum: f0f9dfa6182cf0c0dfe8b39ff3cda89c (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-04T18:07:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissVBS.pdf: 1740289 bytes, checksum: f0f9dfa6182cf0c0dfe8b39ff3cda89c (MD5) / Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-10-04T18:08:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DissVBS.pdf: 1740289 bytes, checksum: f0f9dfa6182cf0c0dfe8b39ff3cda89c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-04T18:08:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DissVBS.pdf: 1740289 bytes, checksum: f0f9dfa6182cf0c0dfe8b39ff3cda89c (MD5) Previous issue date: 2015-11-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Poly(vinyl alcohol) - PVA is a high hydrophilic semicrystalline polymer which has excellent properties such as good chemical resistance and high biodegradability and biocompatibility. Due to its semi-crystalline nature, crystalline domains, under controlled conditions, may act as physical crosslinking points, while maintaining the integrity of the structure under swelling. This feature makes PVA hydrogels promising for the development of drug, or other bioactive substances, delivery systems. Another interesting feature of this kind of hydrogels is the ability to form high stable network from crystalline domains formed through freezing and thawing cycles. This method shows the formation of crystallites which act as physical crosslinks while maintaining the insolubility of the material in water. Recently many studies show the use of nanostructures to improve mechanics properties and diffusional behavior of small molecules. Paromomycin is an aminoglycoside antibiotic widely used for cutaneous leishmaniasis therapeutics in Brazil. In the last years some studies have revealed that the patience adhesion to the treatments of cutaneous leishmaniasis with ointments form is low. Therefore hydrogels are an interesting alternative to the ointment forms. As the main objective of this work was the preparation and characterization of poly(vinyl alcohol) hydrogels containing sepiolite nanoparticles for the preliminary feasibility of using as controlled release system for paromomycin, hydrogels were prepared by cryogelation process. This ensures the formation of the hydrogel, as long as the crystalline domains formed during the PVA cycles act as crosslinking points, allowing the membranes water transport measurements of the drug in the presence of sepiolite. In this investigation membranes were characterized by differential calorimetry, thermogravimetry and X-ray diffraction. Furthermore polymer retention, swelling in simulated body fluid, hemocompatibility and drug delivery were studied to establish structure-properties correlations. The results show that cryogelation cycles significantly alter the swelling of the membranes; interactions polymer-nanoparticle increases the rigidity of the amorphous phase. Comparing to pure PVA hydrogels, in nanocomposites hydrogels the hemolysis decreased. Increasing the percentage of nanoparticles the membrane crystallinity decreases. The samples degradation profile, the thermal stability and drug delivery profile are not modified by the amount of nanoparticles incorporated. / Poli(álcool vinílico) - PVA é um polímero semicristalino altamente hidrofílico que possui excelentes propriedades, como boa resistência química e elevada biodegradabilidade e biocompatibilidade. Devido à sua natureza semicristalina, os domínios cristalinos, sob condições controladas de crescimento, podem atuar como pontos de reticulação físicos, mantendo a integridade da estrutura sob inchamento. Esta característica torna hidrogéis de PVA bastante promissores em relação ao desenvolvimento de sistemas de carreamento de fármacos e outras substâncias bioativas. Soluções aquosas de PVA podem formar hidrogéis com boas propriedades mecânicas através de ciclos de resfriamento e aquecimento. Este método resulta na formação de cristalitos que atuam como reticulações físicas, mantendo a insolubilidade do material em água. Recentemente muitos estudos mostram o uso de nanoestruturas para melhorar as propriedades mecânicas e o comportamento difusional de pequenas moléculas. Paromomicina é um antibiótico aminoglicosídeo muito utilizado para o tratamento de Leishmaniose cutânea (LC) no Brasil. Nos últimos anos, estudos mostraram que a adesão de pacientes ao tratamento de LC com pomadas é baixa. Portanto hidrogéis são uma interessante alternativa para este tratamento. Como o principal objetivo deste trabalho foi o preparo e a caracterização de hidrogéis poliméricos nanocompósitos de PVA contendo nanopartículas de SEP para a viabilidade preliminar do uso como sistema de liberação controlada para paromomicina, os hidrogéis foram preparados através de um processo de criogelificação. Este procedimento garante a formação do hidrogel, pois os domínios cristalinos do PVA formados durante os ciclos atuam como pontos de reticulação da membrana, permitindo a avaliação das medidas de transporte de água e do fármaco das membranas na presença de SEP. Neste estudo as membranas foram caracterizadas através de calorimetria diferencial, termogravimetria e difração de raios-X. Ainda foram feitos estudos de retenção polimérica, inchamento em plasma simulado, hemocompatibilidade, carreamento e liberação de fármaco. Os resultados mostram que os ciclos de criogelificação alteram significativamente o inchamento das membranas; as interações polímero-nanopartícula aumentam a rigidez da fase amorfa. O grau de hemólise diminui nos hidrogéis nanocompósitos quando comparados com os hidrogéis puros. O aumento da porcentagem de nanopartícula diminui a cristalinidade da membrana. O perfil de degradação, a estabilidade térmica das amostras e a liberação do fármaco não são modificados pela quantidade de nanopartícula incorporada.

Made available in DSpace on 2015-04-01T14:16:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arquivototal.pdf: 3485858 bytes, checksum: bf6831f74d42e04741add88b4781e3d1 (MD5) Previous issue date: 2012-08-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Leishmaniasis is a complex of infectious and parasitic diseases endemic in 88 countries, that constitute a serious public health problem. Several species of the genus Leishmania are the causative agents of disease, among them the species L. (V.) braziliensis associated with different clinical manifestations of American Cutaneous Leishmaniasis (ACL). In the present study were obtained nine isolates of Leishmania sp. from cases of ACL. Seven isolates (87%) from patients residing in the municipalities of Pilões, and one (13%) resident in João Pessoa city, both Paraiba state regions. All nine strains were identified as L. (V.) braziliensis by specific PCR. Analyses of molecular characterization by RAPD-PCR showed that these isolates shared 62.63% revealing genotypic differences among them. However, the isolated AF and JSL, both from disseminated lesions had the highest percentage of shared bands among the isolates. Another molecular technique used was a SSR-PCR using the K7 primer, and it was also able to show polymorphism between isolates. In PCR-RLFP analysis of ITS1, different profiles were found among isolates, MRSS, JMTS, AF, JCTS, JRL showed the same band profile and the isolates JSL, JCNS, MFTS and JAS have each had, profiles different band. The analysis of hsp70 gene region by PCR-RLFP reveled that the isolates JSL, AF, JCTS, JRL, MFTS showed the same band profile and the isolates, MRSS, JMTS, JCNS and JAS had each one, different profiles band. In addition were also observed phenotypic differences between these isolates, since at an given time of cultivation, all showed different behavior, and demonstrate differences in sensitivity to drugs used in the treatment of leishmaniasis. Therefore, these studies show that the isolates of L. (V.) braziliensis obtained in the state of Paraiba demosntraram a significant genetic polymorphism, revealing a high level of intraspecific variation. / As leishmanioses são um complexo de doenças infecto-parasitárias endêmicas em 88 países que constituem um grave problema de saúde pública. Diversas espécies do gênero Leishmania são os agentes causadores da doença, dentre elas a espécie L. (V.) braziliensis associada a diferentes quadros clínicos da Leishmaniose Tegumentar Americana. No presente trabalho foram obtidos nove isolados de Leishmania sp. oriundos de LTA, sendo sete isolados (87%) oriundos de pacientes residentes no município de Pilões, um (13%) da cidade de João Pessoa, ambas regiões, do estado da Paraíba. Todos os nove isolados foram identificados como sendo da espécie L. (V.) braziliensis através de PCR específica. As análises de caracterização molecular pela técnica de RAPD-PCR mostraram que esses isolados compartilharam 62,63% revelando diferenças genotípicas entre elas. Contudo, os isolados AF e JSL, ambos provenientes de lesões disseminadas, tiveram o maior percentual de bandas compartilhadas dentre os isolados. Outra técnica molecular utilizada foi o SSR-PCR com o iniciador K7 que também foi capaz de demontrar polimorfismo entre os isolados. Nas análises de PCR-RLFP das regiões ITS1, foram encontradas perfis diferentes entre os isolados, onde MRSS, JMTS, AF, JCTS, JRL apresentaram o mesmo perfil de bandas e os isolados JSL, JCNS, MFTS e JAS tiveram, cada um, perfis de bandas distintos. Na análise de PCR-RLFP da região do gene hsp70, JSL, AF, JCTS, JRL, MFTS apresentaram o mesmo perfil de bandas e os isolados, MRSS, JMTS, JCNS e JAS perfis de bandas distintos. Adicionalmente foram também observadas diferenças fenotípicas entre estes isolados, visto que em dado momento de cultivo, todos apresentaram comportamento diferenciado, além de demonstrarem diferenças quanto à sensibilidade às drogas utilizadas na terapêutica das leishmanioses. Portanto estes estudos revelam que os isolados de L. (V.) braziliensis obtidos no estado da Paraíba demonstraram um significativo polimorfismo genético, revelando um alto nível de variação intraespecífica.

Submitted by BALTAZAR CASAGRANDE (flebalta2012@gmail.com) on 2018-05-15T16:52:24Z No. of bitstreams: 1 Tese_CASAGRANDE.pdf: 22435121 bytes, checksum: 3cd539a9c94901965801f673dffefd8a (MD5) / Approved for entry into archive by ALESSANDRA KUBA OSHIRO ASSUNÇÃO (alessandra@fct.unesp.br) on 2018-05-15T17:43:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 casagrande_b_dr_prud.pdf: 22435121 bytes, checksum: 3cd539a9c94901965801f673dffefd8a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-15T17:43:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 casagrande_b_dr_prud.pdf: 22435121 bytes, checksum: 3cd539a9c94901965801f673dffefd8a (MD5) Previous issue date: 2018-03-29 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Introdução: Esta tese apresenta uma contribuição para o entendimento da produção social da Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA). Particularmente, a tese aborda questões concernentes à trajetória das doenças vetoriais, como as leishmanioses, que possam estar sendo transformadas com a supressão de áreas florestadas pela expansão da monocultura da cana-de-açúcar, neste caso com destaque para o problema da LTA, que tem como vetor os flebótomos. Objetivo: O objetivo geral foi estabelecer relações entre a diversidade, a distribuição espacial de flebotomíneos, a produção do Espaço Geográfico e a saúde da população, caracterizando o Complexo Patogênico da Leishmaniose Tegumentar Americana. Metodologia: Sendo assim, utilizamos os conhecimentos geográficos de Biogeografia, revisão de literatura, tanto sistemática quanto narrativa, levantamentos de campo e trabalhos laboratoriais e análises estatísticas. Resultados: Foram realizados no total 30 levantamentos de campo e capturados 2171 exemplares de flebotomíneos distribuídos entre os Fragmentos da Estação Ecológica do Mico-Leão-Preto, Água Sumida, 72 exemplares com sete espécies diferentes e Ponte Branca, 52 exemplares com 11 espécies diferentes e no estreito de baixo do Parque Estadual do Morro do Diabo, 2044 exemplares com 13 espécies diferentes. Em todos dos casos apresenta maior diversidade em áreas preservadas e menor diversidade em áreas colonizadas. Foram mapeados diferentes meios geográficos coexistindo a área em questão, sendo eles áreas florestais (meio natural), passando por área rural com assentamentos de reforma agrária e fazendas de pecuária extensiva (meio técnico), além de fazendas de agricultura canavieira (meio técnico científico-informacional). Discussões: É evidente que a atividade do cultivo da lavoura canavieira modificou o perfil epidemiológico da LTA na região do Pontal do Paranapanema entendido a partir de um Complexo Patogênico. Isso porque a implantação da atividade canavieira dá novos rumos ao modelo de cultivo no campo e isso interfere na dinâmica ecológica desta doença afetando a população local. Assim, esse estudo resultou em uma nova caracterização da área de estudo, espacialização dos vetores na região, no estabelecimento do Complexo Patogênico da LTA e na delimitação de um campo de pesquisa denominado de “Biogeografia da Saúde”. Conclusão: Esses resultados contribuem para a evolução dos conhecimentos geográficos, formação dos alunos de geografia e também para o fortalecimento da vigilância em saúde. / Introduction: This thesis presents a contribution to the understanding of the social production of American Cutaneous Leishmaniasis (ACL). Particularly, the thesis deals with questions concerning the trajectory of vector diseases, such as leishmaniasis, that may be being transformed by the suppression of forested areas by the expansion of sugarcane monoculture, in this case highlighting the ACL problem, which has as vector the sandflies. Objective: The general objective was to establish relationships between diversity, spatial distribution of sandflies, production of Geographic Space and population health, characterizing the Pathogenic Complex of American Cutaneous Leishmaniasis. Methodology: Thus, we use the geographical knowledge of Biogeography, literature review, both systematic and narrative, field surveys and laboratory work and statistical analysis. Results: A total of 30 field surveys were carried out and 2171 specimens of sandflies were distributed among the fragments of the Mico-Leão-Preto Ecological Station, Água Sumida, 72 specimens with seven different species and Ponte Branca, 52 specimens with 11 different species and in the lower strait of Morro do Diabo State Park, 2044 specimens with 13 different species. In all cases it presents greater diversity in preserved areas and less diversity in colonized areas. Different geographic environments were coexisting with the area in question, being forest areas (natural environment), passing through rural areas with agrarian reform settlements and extensive cattle ranches (technical environment), as well as sugar cane agriculture farms (scientific-informational). Discussion: It is evident that the sugarcane cultivation activity modified the epidemiological profile of ACL in the region of Pontal do Paranapanema, understood from a Pathogenic Complex. This is because the implantation of the sugar cane activity gives new directions to the model of cultivation in the field and this interferes in the ecological dynamics of this disease affecting the local population. Thus, this study resulted in a new characterization of the study area, spatialization of the vectors in the region, in the establishment of the ACL Pathogenic Complex and in the delimitation of a research field called "Biogeography of Health". Conclusion: These results contribute to the evolution of geographic knowledge, the training of geography students and also to the strengthening of health surveillance. / FAPESP: 2013/25920-5

O diagnóstico da leishmaniose tegumentar (LT) baseia-se em critérios clínicos e epidemiológicos podendo ser confirmado por exames laboratoriais de rotina como a pesquisa direta do parasito por microscopia e a intradermorreação de Montenegro. Atualmente, os métodos moleculares, principalmente a reação da cadeia da polimerase (PCR), têm sido considerados para aplicação em amostras clínicas, devido a sua alta sensibilidade e especificidade. Este trabalho teve como objetivo a padronização e validação das técnicas de PCR-RFLP com diferentes iniciadores (kDNA, its1, hsp70 e prp1), visando o diagnóstico e a identificação das espécies de Leishmania presentes em amostras de DNA provenientes de lesões de pele ou mucosa de 140 pacientes com suspeita de leishmaniose tegumentar. Para tal, realizamos ensaios de: 1) sensibilidade das PCRs com os diferentes iniciadores, 2) especificidade dos ensaios utilizando DNAs de diferentes espécies de referência de Leishmania, de tripanossomatídeos inferiores e de fungos, 3) validação das técnicas de PCR-RFLP com os iniciadores estudados em amostras de DNA de lesões de pele ou mucosas de pacientes com LT. Os resultados dos ensaios de limiar de detecção das PCR (sensibilidade) mostraram que os quatro iniciadores do estudo foram capazes de detectar o DNA do parasito, porém em quantidades distintas: até 500 fg com os iniciadores para kDNA e its1, até 400 fg com hsp70 e até 5 ng com prp1. Quanto à especificidade dos iniciadores, não houve amplificação dos DNAs fúngicos. Por outro lado, nos ensaios com os iniciadores para kDNA e hsp70, verificamos amplificação do fragmento esperado em amostras de DNA de tripanossomatídeos. Nos ensaios com its1 e prp1, o padrão de amplificação com os DNAs de tripanossomatídeos foi diferente do apresentado pelas espécies de Leishmania. Verificou-se nos ensaios de validação que o PCR-kDNA detectou o parasito em todas as 140 amostras de DNA de pacientes e, assim, foi utilizado como critério de inclusão das amostras. A PCR-its1 apresentou menor sensibilidade, mesmo após a reamplificação com o mesmo iniciador (85,7% ou 120/140 amostras). Para os ensaios da PCR-hsp70, as amostras de DNA foram amplificadas com Repli G, para obter uma sensibilidade de 68,4% (89/140 amostras). A PCR-prp1 não detectou o parasito em amostras de DNA dos pacientes. Quanto aos ensaios para a identificação da espécie presente na lesão, a PCR-kDNA-RFLP-HaeIII e a PCR-its1- RFLP-HaeIII permitem a distinção de L. (L.) amazonensis das outras espécies pertencentes ao subgênero Viannia. A PCR-hsp70-RFLP-HaeIII-BstUI, apesar de potencialmente ser capaz de identificar as seis espécies de Leishmania analisadas, quando utilizada na avaliação das amostras humanas permitiu apenas a identificação de L. (V.) braziliensis. No entanto, é uma técnica com várias etapas e de difícil execução, o que pode inviabilizar o seu uso rotineiro em centros de referência em diagnósticos. Assim, recomendamos o uso dessa metodologia apenas em locais onde várias espécies de Leishmania sejam endêmicas. Finalmente, os resultados indicam que o kDNA-PCR devido à alta sensibilidade apresentada e facilidade de execução pode ser empregada como exame de rotina nos centros de referência, permitindo a confirmação ou exclusão da LT. / The diagnosis of cutaneous leishmaniasis is based on clinical and epidemiological criteria and can be confirmed by routine laboratory tests such as direct detection of parasites by microscopy and by Montenegro skin test. Currently, the molecular methods, especially the polymerase chain reaction (PCR) have been considered for use in clinical samples due to its high sensitivity and specificity. This study aimed to standardize and validate the PCR-RFLP techniques with different primers (kDNA, its1, hsp70 and prp1) for the diagnosis and identification of Leishmania species present in DNA samples from skin or mucosal lesions of 140 patients with suspected cutaneous leishmaniasis. The following assays were performed to evaluate the 1) sensitivity of the PCRs with different pairs of primers, 2) specificity of the markers using DNAs of various species of Leishmania, lower trypanosomatids and fungi, 3) validate the PCR-RFLP techniques with DNA samples from skin or mucosal lesions of patients with LT. The results of the PCR detection threshold tests (sensitivity) showed that the four study pairs of primers were able to detect the DNA of the parasite, but in different quantities: up to 500 fg with kDNA and its1, 400 fg with hsp70 and up to 5 ng with prp1. Regarding the specificity of the primers, no amplification was observed with fungal DNA. On the other hand, the expected fragments for kDNA and hsp70 PCR were amplified with DNA of trypanosomatids. In its1 and prp1- PCR the pattern of amplification with the DNA of trypanosomatids was different of the one observed for species of Leishmania. In validation assays of PCR-kDNA protocol the parasite was detected in all 140 DNA samples from patients and it was used as inclusion criteria of the samples. The its1-PCR showed lower sensitivity even after reamplification (85.7% or 120/140 samples). The hsp70-PCR validation test was done with DNA samples amplified with Repli G, we obtained a sensitivity of 68.4% (89/140 samples). The PCR-prp1 did not detect the parasite in DNA samples from patients. Concern the tests for the identification of species present in the lesion, PCR-RFLP kDNA-HaeIII and PCR-RFLP ITS1-HaeIII enable distinction L. (L.) amazonensis from the other species belonging to the subgenus Viannia. The PCR-RFLP hsp70-BstUI, HaeIII, although potentially able to identify the six species of Leishmania studied, when it was used in the evaluation of only human samples, it identified only L. (V.) braziliensis. However, PCR-RFLP hsp70-BstUI, HaeIII is a technique with several stages and difficult to implement, which can derail your routine use in referral centers for diagnosis. Thus, we recommend using this method only in places where various Leishmania species are endemic. Finally, our results indicate that kDNA-PCR due to the high sensitivity and ease of execution could be used as a routine examination in reference centers, allowing the confirmation or exclusion of LT.

No estado do Paraná a leishmaniose tegumentar americana (LTA) é endêmica, ocorrendo em 276 dos seus 399 municípios. Dos 12.304 casos da doença registrados no Sul do Brasil de 1980 a 2003, 12.220 (99,3 por cento) ocorreram no Estado do Paraná, sendo notificados 123 casos autóctones no município de Bandeirantes de 2000 a 2009. Objetivos. 1) Descreve a ocorrência da LTA no município de Bandeirantes entre 2000 e 2009, segundo a distribuição espacial, temporal e atributos pessoais; 2) relatar aspectos das formas clínicas e terapêuticos da LTA; identificar: 3) as espécies de Leishmania circulante na população humana e 4) as espécies de flebotomíneos capturadas em ambiente de transmissão da doença no município, de modo a 5) apontar para as espécies vetoras. Métodos. Desenvolveu-se estudo epidemiológico retrospectivo e descritivo de base de dados secundária da LTA e ecológico do grupo dos insetos vetores de Leishmania. Foram utilizados dados das fichas de investigação epidemiológica de LTA notificados à Secretaria Municipal de Saúde de Bandeirantes. Para a identificação da Leishmania sp, foram utilizadas amostras de tecidos das feridas de pacientes com suspeita de LTA e submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR). Para a análise entomológica foram realizadas capturas com armadilhas automáticas luminosas tipo CDC, durante um ano, com periodicidade quinzenal em 11 pontos peridomiciliares da zona urbana, e mensal, em 12 pontos da zona rural, a maioria deles selecionados tendo como referência a presença de casos de LTA. Além destes, foram feitas coletas com armadilha Shannon modificada nas cores branca e preta em um ponto da zona rural, nas três estações do ano (primavera, verão e outono). Resultados. No período de estudo a evolução da doença evidenciou um momento epidêmico em 2007, quando o coeficiente de incidência representou 1,038 casos/1.000 habitantes/ano. A distribuição dos casos no espaço ocorreu de forma heterogênea, com maior concentração na zona urbana. Das 123 notificações de LTA, 76 (61,79 por cento) foram do sexo feminino e 47 (38,21 por cento) do masculino. A faixa etária predominante foi a de 60 anos, em ambos os sexos. Houve predomínio da atividade doméstica (40,65 por cento), da forma clínica cutânea (95,94 por cento) e o Antimonial Pentavalente foi a droga mais utilizada a (98,37 por cento). Leishmania (Viannia) braziliensis foi identificada por meio da PCR em três pacientes de LTA. Na pesquisa do grupo de vetores, nos 24 pontos amostrados com as armadilhas CDC e Shannon, capturou-se um total de 5.652 flebotomíneos (51,66 por cento machos e 48,33 por cento fêmeas) pertencentes a 17 espécies. Nyssomyia neivai predominou (47,36 por cento), seguida de Nyssomyia whitmani (35,77 por cento), Pintomyia pessoai (6,51 por cento), Brumptomyia brumpti (5,54 por cento) e Expapillata firmatoi (2,30 por cento). Na zona urbana foram capturados apenas 22 flebotomíneos pertencentes a seis espécies: Br. brumpti, Evandromyia cortelezzii, Ny. neivai, Ny. whitmani, Pi. pessoai e Sciopemyia sordellii. Na zona rural capturou-se com as CDC, 3.843 flebotomíneos pertencentes a 15 espécies: Ny. neivai, Ny. whitmani, Pi. pessoai, Pi. fischeri, Br. brumpti, Br. cunhai, Br. nitzulescui, Br. sp., Ev. correalimai, Ev. cortelezzii, Ex. firmatoi, Mg. migonei, Mi. ferreirana, Mi. longipennis e Sc. sordellii. A espécie mais abundante foi Ny. neivai, cujo valor do índice de abundância padronizado foi de 0,89, seguida por Ny. whitmani (0,85) e Pi. pessoai (0,69). Os maiores índices de diversidade (H) ocorreram em uma margem de mata (1,45) e chiqueiro (1,42) de um bairro rural, e num outro, a maior equitabilidade entre o número de exemplares coletados em domicílio (0,96) e galinheiro (0,92). No total de espécimes capturados, as médias mensais mais elevadas ocorreram nos meses de março (6,92) e dezembro (6,45), Ny. neivai apresentou a maior média nos meses de dezembro (4,28 insetos/ armadilha) e Ny. whitmani em março (4,34). Na armadilha Shannon modificada foram capturados 1.787 espécimes, destacando-se Ny. neivai (56,86 por cento) e Ny. whitmani (32,79 por cento). A média horária mais elevada para Ny. neivai ocorreu das 23:0024:00 horas e Ny. whitmani entre 20:00 e 21:00 horas. Conclusão. Os dados sócio-econômicos apresentados mostram a LTA afetando predominantemente mulheres, porém crianças também foram atingidas, sugerindo que a transmissão da Leishmania pelos principais prováveis vetores, Ny. neivai e Ny. whitmani, esteja ocorrendo em área domiciliar e peridomiciliar. Áreas estas, cuja atração aos flebotomíneos pode aumentar o risco de aquisição da doença pelos moradores / In the state of Paraná, American cutaneous leishmaniasis (ACL) is endemic, occurring in 276 of its 399 municipalities. Of the 12,304 cases of ACL registered in the Southern Region of Brazil between 1980 and 2003, 12,220 (99.3 per cent) of them occurred in the State of Paraná. In this state, 123 autochthonous cases were registered in the Bandeirantes municipality between 2000 and 2009. Objectives. To describe: 1) the occurrence of ACL in the municipality of Bandeirantes between 2000 and 2009, in terms of its spatial and temporal distribution and the personal characteristics of the population affected and 2) the clinical and therapeutic aspects of ACL; to identify: 3) the Leishmania species infecting the human population and 4) the phlebotomine species captured in the environments where the disease may be transmitted, so as 5) to indicate the possible vectors. Methods. A retrospective and descriptive epidemiological study was undertaken based on a secondary database together with an identification of the Leishmania sp. and ecological study of the vectors. The secondary data used were derived from the ACL epidemiological investigation cards of the Municipal Health Service of Bandeirantes. For the identification of the Leishmania spp., samples of tissue taken from the wounds of suspected ACL patients were submitted to the polymerase chain reaction (PCR). For the entomological analysis, captures with automatic light traps (CDC type) were carried out during one year: fortnightly at 11 urban peridomiciliary sites and monthly at three sites, including domestic animal shelters, peridomiciles and forest edge, in each of four rural localities. Cases of ACL had occurred at the majority of the urban sites and rural localities. Captures were also undertaken (one in each season, spring, summer and fall) with modified black and white Shannon traps at one of the rural sites. Results. The progression of the disease reached an epidemic peak in 2007, when the incidence coefficient attained 1.038 cases/1,000 inhabitants per year. The spatial distribution of the cases presented its highest concentration in the urban zone. Of the 123 notifications of ACL, 76 (61.79 per cent) occurred in females and 47 (38.21 per cent) in males. The age group 60 years predominated in both sexes as also did domestic activity (40.65 per cent). The cutaneous form accounted for 95.94 per cent of the cases, the drug most utilized being Antimony Pentavalent (98.37 per cent). Leishmania (Viannia) braziliensis was identified by PCR in three patients. At the 24 sites sampled with CDC and Shannon traps, 5,652 sand flies (51.66 per cent males and 48.33 per cent females) belonging to 17 species were captured, with the predominance of Nyssomyia neivai (47.36 per cent), Nyssomyia whitmani (35.77 per cent), Pintomyia pessoai (6.51 per cent), Brumptomyia brumpti (5.54 per cent) and Expapillata firmatoi (2.30 per cent). Only 22 specimens belonging to 6 species (Br. brumpti, Ev. cortelezzii, Ny. neivai, Ny. whitmani, Pi. pessoai, Sciopemyia sordellii) were captured in the urban zone. In the rural zone 3,843 sand flies belonging to 15 species (Ny. neivai, Ny. whitmani, Pi. pessoai, Pi. fischeri, Br. brumpti, Br. cunhai, Br. nitzulescui, Br, sp., Ev. correalimai, Ev. cortelezzii, Ex. firmatoi, Migonemyia migonei, Micropygomyia ferreirana, Mi. longipennis and Sc. sordellii) were captured, with CDC. Ny. neivai presented the highest standardized abundance index (0.89), followed by Ny. whitmani (0.85) and Pi. pessoai (0.69). The highest diversity indices (H) observed were on the forest edge (1.45), and in a pigsty (1.42). As regards evenness, there was a greater balance between the number collected in a house (0.96) and poultry coop (0.92). Considering all the specimens captured, the highest monthly average occurred in March (6.92) and December (6.45), Ny. neivai showed the highest average in December (4.28 specimens/trap) and Ny. whitmani in March (4.34). With the modified Shannon traps, 1,787 specimens were captured, Ny. neivai (56.86 per cent) and Ny. whitmani (32.79 per cent) predominating. The highest hourly average of Ny. neivai occurred between 23.00 and 24.00 hours and that of Ny. whitmani between 20.00 and 21.00 hours. Conclusions. The socio-economic data presented show that ACL affects women predominantly; however, infants were also affected, suggesting that the transmission of Leishmania by the principal probable vectors (Ny. neivai and Ny. whitmani) is occurring in domiciliary and peridomiciliary environments, whose attractiveness to sand flies may increase the risk of the transmission of the disease to the residents

A leishmaniose tegumentar (LT) é uma zoonose causada por protozoário do gênero Leishmania e transmitida pela picada de diferentes espécies de flebotomíneos infectados. Pode acometer o ser humano no momento em que este participa acidentalmente do ciclo silvestre de manutenção da doença, por meio de atividades que necessitem de sua entrada no ambiente de mata ou mesmo devido a existência de moradias próximas a borda da floresta ou até mesmo no interior da mesma. Atualmente há cada vez mais evidências da transmissão por consequência das modificações no ambiente causadas pelo ser humano, levando à migração de algumas espécies de Leishmania e de seus vetores para as imediações dos domicílios. A LT tem como principal agente etiológico a Leishmania (Viannia) braziliensis na Amazônia brasileira e esta é responsável por uma forma extremamente grave de leishmaniose anérgica. Este parasito caracteriza-se por apresentar espectro de manifestações clínicas e imunológicas que variam do pólo anérgico ao polo hiperérgico. O presente estudo faz-se necessário para avaliar: a adaptabilidade de populações humanas residentes em áreas endêmicas de LT; como elas procuram se ajustar ao ambiente no qual vivem; como a evolução destas populações humanas pode se refletir nos seus sistemas imunológicos e, consequentemente, nas formas, mais ou menos graves, de apresentação da LT em área hiperendêmica. Foram identificados 17647 flebotomíneos, sendo esses classificados em 86 espécies. Dessas, 14 espécies atendem a classificação de vetores de Leishmania sp. e outras 7 espécies são apontadas como potenciais vetores de Leishmania sp. O presente estudo comprova a existência da espécie Lutzomyia longipalpis, espécie vetor da leishmaniose visceral (LV), patologia na qual pode evoluir ao quadro de óbito senão ocorrer o devido tratamento. Este é o primeiro registro da espécie no estado do Acre e na porção sul-ocidental da Amazônia, e corrobora os atuais estudos que apontam a expansão territorial da ocorrência da LV no Brasil e com a hipótese de expansão até áreas Andinas. / Cutaneous leishmaniasis (CL) is a zoonosis caused by a protozoan of the genus Leishmania and transmitted by the bite of different species of infected sand flies. It may affect the human being at the time when it accidentally enters the wild cycle of the maintenance of the disease, through activities requiring its entry into the forest environment or even due to the existence of households near the edge of the forests or even within the same. Currently there is increasingly evidence of transmission due to changes in the environment caused by the human being, leading to the migration of some species of Leishmania and its vectors to the immediate vicinity of households. The CL has as the main agent etiological the Leishmania (Viannia) braziliensis in the Brazilian Amazon and this is responsible for an extremely serious form of leishmaniasis anergic. This parasite is characterized by presenting a spectrum of clinical and immunological manifestations ranging from the pole anergic to the pole hyperergic. The present study is necessary to evaluate: the adaptability of human populations resident in the endemic areas of CL; how they seek to adjust to the environment in which they live; how the evolution of these human populations can reflect on their immune systems and, consequently, in the more or less severe forms of presentation of the CL in hyperendemic area. 17647 phlebotomines were identified, being classified in 86 species. Among them, 14 species meet the classification of vectors of Leishmania sp. and 7 other species are pointed out as potential vectors of Leishmania sp. The present study proves the existence of the species Lutzomyia longipalpis, vector species of visceral leishmaniasis (VL), pathology in which it may evolve into the death frame, but due treatment. This is the first record of the species in the state of Acre and in the western portion of the Amazon, and corroborates the current studies that point the territorial expansion of the occurrence of LV in Brazil and with the chance of expansion to Andean areas.

Orientadores: Angelo Pires do Prado, Claudio Casanova / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T21:39:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CollaJacques_FernandaElisa_M.pdf: 1220366 bytes, checksum: 236fda152f5e60fc1f34a2bb1295ad2f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Desde 2004, a transmissão canina de leishmaniose visceral americana (LVA) tem sido registrada na área urbana de Espírito Santo do Pinhal, e no decorrer da última década, casos humanos esporádicos de leishmaniose tegumentar americana (LTA) ocorreram na sua área rural. Este estudo visou ampliar o conhecimento a respeito dos flebotomíneos e a sua ecologia populacional nos ambientes rural, periurbano e urbano desse município. As coletas foram feitas semanalmente, durante um período de 15 meses, com armadilhas luminosas automáticas tipo CDC no peridomicílio de 18 imóveis. Um total de 5.562 flebotomíneos foi coletado, divididos em 17 espécies. As espécies mais freqüentes foram Nyssomyia whitmani (43,5%) e Pintomyia pessoai (28,7%) na área rural, Lutzomyia. longipalpis (52,2%) e NY.whitmani (36,2%) na área periurbana, e Lu. longipalpis (73,0%) na área urbana. As espécies mais abundante, segundo o índice de abundância de espécie padronizado foram, em ordem decrescente, NY.whitmani, Lu. Longipalpis e Evandromyia lenti. A maior riqueza de espécies foi encontrada na área rural, bem como o maior índice de diversidade. O índice de dimilaridade de Sorensen mostrou que as áreas rural e periurbana são as mais similares. Lu. longipaldis foi encontrado em todas as áreas do município durante o período de coleta, e a alta abundância foi encontrada nos períodos posteriores às chuvas. Este fato, somado a presença de cães infectados com Leishmania infantum chagasi na área urbana, representa um risco para o estabelecimento dessa doença na região. A elevada abundância de NY. Whitmani e de PI. Pessoai na área rural e periurbana indicam a possibilidade de ocorrência de novos casos de leishmaniose tegumentar americana e a sua expansão para a área de Espírito Santo do Pinhal / Abstract: Since 2004 there hás been canine transmission of American visceral leishmaniasis (AVL) in the urban area of Espírito Santo do Pinhal and, over the last decade, sporadic human cases of American cutaneous leishmaniasis (ACL) have been recorded in the rural area. This study aime to increase the knowledge of the sand fly communityand its populational ecology in the rural, urban and periurban areas of this municipality. The captures were carried out weekly, over a period of 15 months, with automatic light traps in the surrondingd of 18 proprieties. A total of 5.562 sandflies were colleted, comprised of 17 species. The most abundance species were Nyssomyia whitmani (43,5%) and Pintomyia pessoai (28,7%) in the rural area, Lutzomyia. longipalpis (52,2%) and NY.whitmani (36,2%) in the periurban area, and Lu. longipalpis (73,0%) in the urban area. The highest species richness was found in the rural area, along with the greatest index species diversity. The similarity index, used to compare the different areas, showed that rural and periurban areas were most alike. Lu. Longipaldis was found in all areas of the district during the collection period, and high abundance was usually found after a heavy rain period. This, plus the presence of dogs infected with Leishmania infantum chagasi in the urban area, presents a risk of the establishment of the AVL in the region. The high abundance of Ny. Whitmani and Pi. Pessoai in the rural and periurban areas indicate the possibility of new cases of ACL occurring, and spreading to the periurban area of Espírito Santo do Pinhal / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Submitted by Izabel Monteiro (izabel_22@hotmail.com) on 2016-08-03T15:01:33Z No. of bitstreams: 1 Tese - Claudia Dantas Comandolli Wyrepkowski.pdf: 5493553 bytes, checksum: 2facc8046c9c0fe6bc72cf077d977196 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-17T15:41:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Claudia Dantas Comandolli Wyrepkowski.pdf: 5493553 bytes, checksum: 2facc8046c9c0fe6bc72cf077d977196 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2016-08-17T15:48:18Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese - Claudia Dantas Comandolli Wyrepkowski.pdf: 5493553 bytes, checksum: 2facc8046c9c0fe6bc72cf077d977196 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-17T15:48:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese - Claudia Dantas Comandolli Wyrepkowski.pdf: 5493553 bytes, checksum: 2facc8046c9c0fe6bc72cf077d977196 (MD5) Previous issue date: 2016-09-24 / CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is a protozoonosis caused by parasites of the genus Leishmania, which is transmitted by the bite of the sand fly insect. The LTA, patients can present cutaneous form, with localized skin lesions that may progress to chronic lesions. The treatment of choice is pentavalent antimony and drugs of second choice are pentamidine and amphotericin B, but all have side effects and require parenteral administration. Natural products are presented as an alternative for the treatment of many diseases, and there are studies that demonstrate potential against Leishmania. In the Amazon region, Libidibia ferrea (Mart. Ex Tul) LP Queiroz stands out for its economic and pharmacological importance, due to anti-inflammatory and antimicrobial reported. This study aimed to evaluate the activity of extracts and fractions of L. ferrea against promastigotes and amastigotes of L. (L.) amazonensis and L. (V.) guyanensis also conducting its chemical characterization, and study the effect in topical formulations containing pentamidine, extracts and most promising fractions. And hexane extracts were prepared methanolic the epicarp, leaves and branches of L. ferrea, who underwent in vitro bioassays against promastigotes and amastigotes of L. (L.) amazonensis and L. (V) guyanensis, the counting method direct. The most active extracts were evaluated in vitro for cytotoxic activity in J774 macrophage lineage. The extracts and active fractions were analyzed by TLC assay, the quantized flavonoid and phenolic content, and analyzed by NMR and HPLC. The in vivo assays employed as an animal model hamsters infected with L. (L.) amazonensis. They were prepared and evaluated by topical application on lesions initially hydrating and anhydrous emulsions containing pentamidine isethionate (10%). The results of the bioassays showed that the methanolic extract from epicarp (EpMeOH) showed a higher activity against species of Leishmania, with EC50 15.01 µg/ml against L (L.) amazonensis. This extract had the highest concentration of phenolic (5.14%). A 2-DCM fraction also demonstrated activity with EC50 12.77 µg/mL against L. (L.) amazonensis. No cytotoxic activity was observed in macrophages for both samples. The moisturizing emulsions containing pentamidine were most effective, although viable parasites were detected and all groups after eight days of treatment. These moisturizing emulsions were used as a base for creams with addition of 2.5% of EpMeOH extract and evaluated in two areas with skin lesions - snout and paw. The groups treated with cream EpMeOH extract (2.5%) and placebo showed differences in lesion volume compared to the control group after 20 days of treatment, but showed the presence of parasites, with no statistical difference between the control group. These results suggest that the treatment time and extract concentration to be increased beyond the proportion of use of EpMeOH extract in a more hydrophilic formulation. The hydrogel EpMeOH was then evaluated for lesions on the snout of hamsters as well as cream Fr2. After 40 days of treatment, the groups treated with these topical formulations showed significant differences between the control group and between their respective placebos, as volume, clinical aspect of the lesion, and as the parasitic quantification. Minor inflammatory infiltrate was observed in the hydrogel EpMeOH. This study identified extracts promising in the treatment of experimental cutaneous leishmaniasis and supports pointing new opportunities and innovation serving as a basis for herbal formulations to treat this neglected disease. / A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma protozoonose causada por parasitas do gênero Leishmania, que são transmitidos ao homem pela picada do inseto flebotomíneo. Na LTA, os pacientes podem apresentar a forma cutânea, com lesões localizadas na pele que podem evoluir para lesões crônicas. O tratamento de primeira escolha são antimoniais pentavalentes e os fármacos de segunda escolha são pentamidina e anfotericina B, porém todos apresentam efeitos colaterais e requerem administração parenteral. Os produtos naturais apresentam-se como uma alternativa para o tratamento de inúmeras enfermidades, e há trabalhos que demonstram potencial contra Leishmania. Na região Amazônica, a espécie Libidibia ferrea (Mart. ex Tul) LP Queiroz destaca-se pela sua importância econômica e farmacológica, devido à atividade anti-inflamatória e antimicrobiana relatada. O presente trabalho teve por objetivo avaliar a atividade de extratos e frações de L. ferrea contra promastigotas e amastigotas de L. (L.) amazonensis e L. (V.) guyanensis, realizando também a sua caracterização química, e estudar o efeito in vivo de formulações tópicas contendo pentamidina, os extratos e frações mais promissoras. Foram preparados extratos hexânicos e metanólicos do epicarpo, folhas e galhos de L. ferrea, os quais foram submetidos a bioensaios in vitro contra promastigotas e amastigotas de L. (L.) amazonensis e L. (V.) guyanensis, pelo método da contagem direta. Os extratos mais ativos foram avaliados in vitro quanto a atividade citotóxica em macrófagos de linhagem J774. Os extratos e frações ativos foram analisados por CCDC, quantificados o teor de fenólicos e flavonoides, e analisados por RMN e CLAE. Os ensaios in vivo empregaram hamsters como modelo animal, infectados com L. (L.) amazonensis. Foram preparadas e avaliadas por aplicação tópica nas lesões, inicialmente, emulsões hidratantes e anidras contendo isetionato de pentamidina (10%). Os resultados dos bioensaios demostraram que o extrato metanólico de epicarpo (EpMeOH) apresentou maior atividade frente as espécies de Leishmania, com EC50 de 15,01 µg/mL contra L (L.) amazonensis. Este extrato apresentou a maior concentração de fenólicos (5,14%). A fração 2-DCM demonstrou também atividade, com EC50 12,77 µg/mL contra L. (L.) amazonensis. Não foi observada atividade citotóxica em macrófagos para ambas as amostras. As emulsões hidratantes contendo pentamidina foram mais eficientes, embora fossem detectados parasitas viáveis em todos os grupos após oito dias de tratamento. Estas emulsões hidratantes foram utilizadas como base para cremes com adição de 2,5% do extrato EpMeOH e avaliados em duas áreas com lesões cutâneas - focinho e pata. Os grupos tratados com creme com extrato EpMeOH (2,5%) e o placebo mostraram diferenças quanto ao volume da lesão quando comparados ao grupo controle após 20 dias de tratamento, mas mostraram a presença de parasitas, sem diferença estatística entre o grupo controle. Estes resultados sugerem que o tempo de tratamento e a concentração do extrato devem ser aumentadas, além da proporção do uso do extrato EpMeOH em uma formulação mais hidrofílica. O hidrogel EpMeOH foi avaliado em lesões no focinho de hamsters, assim como emulsão Fr2. Após 40 dias de tratamento, os grupos tratados com estas formulações tópicas mostraram diferenças estatísticas entre o grupo controle e também entre seus respectivos placebos, quanto ao volume, aspecto clínico da lesão, e quanto à quantificação parasitária. Menor infiltrado inflamatório foi observado no grupo hidrogel EpMeOH. Este estudo permitiu identificar o extratos promissores no tratamento da leishmaniose tegumentar experimental e corrobora apontando novas oportunidades e inovação servindo como base para formulações de fitoterápicos para o tratamento desta doença negligenciada.