Data de aprova??o ausente. / Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2016-12-20T12:32:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) leticia_marcia_silva_tinoco.pdf: 1813667 bytes, checksum: cc4f9146534721910e6a3dde4429645b (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2017-01-13T15:55:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) leticia_marcia_silva_tinoco.pdf: 1813667 bytes, checksum: cc4f9146534721910e6a3dde4429645b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-13T15:55:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) leticia_marcia_silva_tinoco.pdf: 1813667 bytes, checksum: cc4f9146534721910e6a3dde4429645b (MD5) Previous issue date: 2016 / O ?cido retinoico (AR), um derivado da vitamina A, ? um dos exemplos mais bem-sucedidos de f?rmacos usados na terapia de diferencia??o do c?ncer. O AR ? um f?rmaco altamente lipof?lico (log P 4,6) que apresenta baixa solubilidade aquosa, limitando sua utiliza??o parenteral. Dessa forma, sua incorpora??o em nanocarreadores lip?dicos tem sido proposta como uma alternativa promissora para a administra??o desse f?rmaco. O maior direcionamento dos nanossistemas para as c?lulas tumorais pode ser obtido por meio de modifica??es na superf?cie deste, como o revestimento com ?cido hialur?nico (AH), que se liga a receptor CD44 sobre-expresso em alguns tumores. Assim sendo, este trabalho teve por objetivo principal desenvolver, caracterizar e avaliar a atividade antineopl?sica in vitro de nanoemuls?es contendo AR revestidas e n?o revestidas com AH para tratamento de c?ncer de mama. Primeiramente, foi desenvolvido um m?todo espectrofotom?trico, com detec??o do AR em 324 nm, que foi validado em rela??o ? seletividade em rela??o aos componentes de matriz e aos produtos de degrada??o for?ada, linearidade, precis?o, exatid?o e robustez, conforme a legisla??o pertinente. Em seguida, foram desenvolvidas e caracterizadas nanoemuls?es (NE) preparadas por emulsifica??o espont?nea e revestidas eletrostaticamente com AH em diferentes concentra??es. Ap?s o revestimento com 0,5 mg/mL de AH, a NE escolhida apresentou tamanho de 158 ? 5 nm, distribui??o monodispersa e potencial zeta de -19,7 ? 1,20 mV e um teor de encapsula??o de 99,2 ? 0,5%, estando compat?vel com a administra??o parenteral. Al?m disso, as formula??es revestidas permaneceram est?veis ao longo de 60 dias armazenadas a 4?C. O perfil de libera??o do AR a partir dos nanossistemas foi avaliado e observou-se que segue uma cin?tica de primeira ordem, de forma que a taxa de libera??o depende da concentra??o do f?rmaco ainda presente na matriz. Foram, por fim, avaliados os efeitos citot?xicos em linhagens de c?lulas de c?ncer de mama (MCF-7 e MDA-MB-231) e fibroblastos normais (L929) e observou-se que a formula??o revestida promove aumento de atividade antic?ncer do AR, especialmente nas c?lulas que expressam mais os receptores CD44 (MDA-MB-231) e reduzida toxicidade em rela??o ?s c?lulas normais. Desta forma, a encapsula??o do AR em NE revestida por AH pode ser uma abordagem interessante para aumentar a efic?cia e a biodisponibilidade do AR no tratamento do c?ncer de mama e outros tipos de c?ncer que sobre-expressam esse receptor. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2016. / Retinoids, such as all-trans retinoic acid (RA), are structural molecules derived from vitamin A and play important roles in various cell types, especially on vision, cell proliferation and differentiation. RA is a lipophilic acid (log P 4.6) with low aqueous solubility, which limits its pharmaceutical use. In order to allow its parenteral administration, an interesting alternative could be its incorporation in lipid nanocarrier systems, such as nanoemulsions (NE). On the other hand, it is possible to increase the target to CD44 receptor expressing tumor cells, coating the NE surface with hyaluronic acid (HA). Therefore, the main goal of this study was to develop, characterize and evaluate the in vitro antitumor activity of RA-loaded NE coated with HA for the treatment of breast cancer. First, a spectrophotometric method was developed, with RA detection at 324 nm, which was validated with regard to selectivity to matrix components and forced degradation products, linearity, precision, accuracy and robustness, in accordance with the proper legislation. Then, the NE, prepared by the spontaneous emulsification and electrostatically coated with HA in different concentrations, were developed and characterized. After coating with 0.5 mg/mL, the chosen HA-coated NE presented size of 158 ? 5 nm, monodisperse distribution, zeta potential of -19.7 ? 1.20 mV and encapsulating efficiency of 99.2 ? 0.5%, which is compatible with parenteral administration. Moreover, the coated formulations remained stable over 60 days stored at 4 ?C. The RA release profile from the nanosystems was evaluated and it follows the first order kinetics, so that the release rate depends on the drug concentration still present in the matrix. Finally, the cytotoxic effects were assessed in breast cancer cell lines (MCF-7 and MDA-MB-231) and in normal fibroblasts (L929), and found that the coated formulation promotes increased anticancer activity of RA, especially in cells expressing plus CD44 receptors (MDA-MB-231) and reduced toxicity compared to normal cells. Thus, the encapsulation of RA in HA-coated NE can be an interesting approach to increase the RA efficacy and bioavailability in the treatment of breast cancer and other cancers overexpressing that receptor.

Em estudos anteriores, mostramos que uma nanoemulsão artificial (NEm) de composição semelhante à da lipoproteína de baixa densidade se liga a receptores de lipoproteínas de baixa densidade após sua injeção na corrente sanguínea. Como tais receptores estão superexpressos em células com altas taxas de proliferação, como ocorre no cancer e na aterosclerose, a NEm pode ser utilizada como veículo para direcionar drogas a estas células, diminuindo sua toxicidade e aumentando sua ação farmacológica. Recentemente, reportamos que a associação de um derivado do agente antiproliferativo paclitaxel, o oleato de paclitaxel (OPTX) à NEm reduziu em 60% a área lesionada de aortas de coelhos submetidos à dieta rica em colesterol. Neste estudo, testamos o efeito sinérgico da terapia combinada do OPTX-NEm com um derivado do metotrexato, o di-dodecil metotrexato (DMTX), também associado à NEm. O MTX, além de sua ação antiproliferativa, também possui propriedades imunossupressoras. Coelhos machos da raça Nova Zelândia foram submetidos à dieta enriquecida com 1% de colesterol durante 8 semanas. A partir da quinta semana de consumo da dieta, 8 animais foram injetados semanalmente com solução salina por via endovenosa (grupo controle) e 8 receberam o tratamento combinado de OPTX-NEm (4mg/Kg) com DMTX-NEm (4mg/Kg), por 4 semanas. Ao final das 8 semanas, os animais foram sacrificados. As aortas dos animais foram retiradas, abertas longitudinalmente, fixadas em formalina tamponada a 10% e coradas com Escarlate R para a análise macroscópica da lesão. Os arcos aórticos foram seccionados em fragmentos de 5mm, embebidos em parafina e os cortes realizados foram corados com hematoxilina-eosina, para a determinação da área das camadas íntima e média. O tratamento combinado de OPTX-NEm com DMTX-NEm reduziu a área das lesões em 82%, em comparação ao grupo controle, e a razão da área da lesão/área total diminuiu de 0,82±0,08 para 0,08±0,06 (p<0,01). Por meio das avaliações da variação do consumo de ração, peso corporal e contagem de leucócitos totais (p>0,05), pode-se afirmar que os tratamentos não apresentaram toxicidade significativa, exceto pela queda na contagem de eritrócitos (p<0,05). Como conclusão, a quimioterapia combinada de OPTX e DMTX associados à NEm como veículo mostrou-se eficaz na redução da área de lesão aterosclerótica em coelhos e a toxicidade relacionada aos fármacos foi nitidamente reduzida. / In previous studies we have shown that an artificial nanoemulsion (NEm) that resemble LDL composition are taken-up by LDL receptors after injection into the bloodstream. As those receptors are upregulated in cells with higher proliferation rates, as occurs in cancer and atherosclerosis, NEm can be used as vehicle to direct drugs against those cells, diminishing toxicity and increasing pharmacological action. Recently, we reported that association of antiproliferative agent paclitaxel derivative, paclitaxel oleate (OPTX) to NEm reduced by 60% the lesion area of cholesterol-fed rabbits. In this study, the combined chemotherapy of OPTX-NEm with a methotrexate derivative, di-dodecil methotrexate (DMTX), also associated with NEm, was tested for synergistic effects. MTX, besides antiproliferative action, has also immunosuppressant properties. Male New Zealand rabbits were fed a 1% cholesterol diet for 60 days. Starting from day 30, 8 animals were treated with 4 weekly I.V. saline solution injections (control group) and 8 with combined OPTX-NEm (4 mg/kg) plus DMTX-NEm (4 mg/kg) for additional 30 days. On day 60, the animals were sacrificed for analysis. Aorta was excised, open longitudinally, placed in 10% buffered formalin and stained in Scarlet R for lesion macroscopic analysis. Segments of 5mm of the aortic arch were embedded in paraffin and sections were taken and stained in hematoxylin-eosin for intima and media area measurement. In comparison with controls, treatment with combined OPTX-NEm plus DMTX-NEm reduced the lesion area by 82% and the lesion/total area ratio was decreased from 0,82±0,08 to 0,08±0,06 (p<0.01). Except for decrease in erythrocyte count (p<0.05), treatments were devoid of significant toxicity, as evaluated by food intake, body weight and leucocyte count (p>0.05). In conclusion, this novel approach consisting in combined chemotherapy of OPTX and DMTX using NEm as a drug-targeting vehicle showed effective lesion area regression in rabbits and marked toxicity reduction.

As células dendríticas (DCs) são células do sistema imune inato que são especializadas na instrução de repostas imunes adaptativas No baço murinho, as DCs convencionais podem ser classificadas em CD8&#945;+ DEC205+ e CD8&#945;- DCIR2+. Anticorpos monoclonais (mAbs) &#945;DEC205 e &#945;DCIR2 (33D1) conjugados a proteínas antigênicas e são utilizados como estratégia de direcionamento de antígenos para as DCs CD8&#945;+ e CD8&#945;-. Foi utilizado o antígeno quimérico MSP119PADRE conjugado aos mAbs &#945;DEC205 e &#945;DCIR2 e o Poly I:C como adjuvante. A montagem da resposta celular e humoral foi analisada 3, 4, 5 e 6 dias após primeira e a segunda As DCS CD8&#945;- são especializadas na instrução de células TFH. Porém, num segundo dose de mAbs há a instrução de uma resposta Th2/Th17. E, o direcionamento de antígenos para DCS CD8&#945;+ induz uma resposta Th1, indicando que essas células são especializadas na instrução desse perfil de resposta auxiliar. Apesar disso, na segunda imunização há a diferenciação de células TFH. / As dendritic cells (DC) are innate immune cells that are specialized to prime adaptive immune cells. In the murine spleen, conventional DCs can be classified into CD8&#945;+ DEC205+ and CD8&#945;-DCIR2+. Monoclonal antibodies (mAbs) &#945;DEC205 and &#945;DCIR2 (33D1) conjugated to antigenic proteins have benn used as antigen targeting strategy to CD8&#945;+ and CD8&#945;- DCs. MSP119PADRE chimeric antigen conjugated to mAbs &#945;DEC205 and &#945;DCIR2 and Poly I: C as adjuvant was used. The assembly of the cellular and humoral response was analyzed 3, 4, 5 and 6 days after the first and second doses of imnunization. DCs CD8&#945;- are specialized in the instruction of TFH cells. However, there is an a promotion of Th1 response by CD8&#945;+, indicating that these cells are specialized in the instruction of the helper response profile. Nevertheless, in the second immunization there is a differentiation of TFH cells.

Made available in DSpace on 2015-04-17T14:55:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivototal.pdf: 1145467 bytes, checksum: c728d8e2b9bf1205710f19f317acdccc (MD5) Previous issue date: 2009-02-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The use of trap nests supplies important biological information about nesting bees and wasps. However, the knowledge about the factors influencing on management of these groups is still scarce. This work aimed to analyze some community structure parameters (species abundance, richness, composition and predominance) in two agricultural areas in the Zona da Mata macro region of Paraiba State: Shading, block material (wood or vermiculite), and tubs opening diameter and cardinal orientation. It was verified the influence of these four factors in the community structure parameters. Both sites where similar in species richness and composition. Alhandra site had an accentuated abundance, due Trypoxylon aurifrons e Centris analis. In shaded area most species where more abundant than in sunny one. Otherwise, in Alhandra site the sunny area had higher species richness. Wood blocks where more expensive and difficult to manufacture. Meanwhile, they had more attractiveness than vermiculite blocks, especially for bees. Number of nests was smaller in predominant wind direction trap nests. The two most abundant species where diameter-generalists. The results and the Trypoxylon aurifrons behavior observed suggest that this species should compete by trap nests holes with bees. / A utilização de ninhos-armadilha provê informações importantes acerca da biologia das espécies abelhas e vespas nidificantes. Entretanto, o conhecimento sobre os fatores que influenciam o manejo dessas espécies ainda é escasso. O presente estudo analisou parâmetros da estrutura da comunidade (abundância, riqueza, composição e predominância de espécies) em duas áreas agrícolas dentro da Zona da Mata paraibana (Alhandra e EMEPA). Quatro variáveis foram avaliadas: grau de sombreamento dos ninhosarmadilha, tipo de bloco usado como substrato (madeira ou vermiculita), direção para a qual a entrada dos tubos encontrava-se voltada e diâmetro do tubo. Desse modo, foi verificado o grau de influência dessas quatro variáveis nos parâmetros da estrutura da comunidade estudados. As duas áreas se mostraram semelhantes quanto à riqueza e composição. Entretanto, em Alhandra foi observada uma abundância acentuada, ocasionada por Trypoxylon aurifrons e Centris analis. Apesar da maioria das espécies ter sido mais abundante na área sombreada, observou-se uma maior riqueza de espécies na área ensolarada em Alhandra. Quanto ao material, observou-se que os blocos de madeira, apesar de mais caros e de difícil manejo, foram mais atrativos que os de vermiculita, especialmente para as espécies de abelhas. O número de nidificações foi menor na direção voltada para os ventos predominantes nas áreas. As duas espécies mais abundantes foram mais generalistas quanto à utilização de diferentes diâmetros. Os resultados obtidos e o comportamento de Trypoxylon aurifrons sugerem que essa espécie pode competir com as espécies de abelhas pelos tubos de ninhos-armadilha agrupados.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NathaliaMCM_DISSERT.pdf: 2544480 bytes, checksum: eab320fea2fc6e6b04c8d45099041a93 (MD5) Previous issue date: 2014-03-21 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The genome of all organisms constantly suffers the influence of mutagenic factors from endogenous and/or exogenous origin, which may result in damage for the genome. In order to keep the genome integrity there are different DNA repair pathway to detect and correct these lesions. In relation to the plants as being sessile organisms, they are exposed to this damage frequently. The Base Excision DNA Repair (BER) is responsible to detect and repair oxidative lesions. Previous work in sugarcane identified two sequences that were homologous to Arabidopsis thaliana: ScARP1 ScARP3. These two sequences were homologous to AP endonuclease from BER pathway. Then, the aim of this work was to characterize these two sequence using different approaches: phylogenetic analysis, in silico protein organelle localization and by Nicotiana tabacum transgenic plants with overexpression cassette. The in silico data obtained showed a duplication of this sequence in sugarcane and Poaceae probably by a WGD event. Furthermore, in silico analysis showed a new localization in nuclei for ScARP1 protein. The data obtained with transgenic plants showed a change in development and morphology. Transgenic plants had slow development when compared to plants not transformed. Then, these results allowed us to understand better the potential role of this sequence in sugarcane and in plants in general. More work is important to be done in order to confirm the protein localization and protein characterization for ScARP1 and ScARP3 / O genoma de todos os organismos sofre constantemente a influ?ncia de fatores mutag?nicos que podem ser de origem end?gena e/ou ex?gena, estes podem resultar em danos ao material gen?tico. Se esses danos n?o forem corrigidos pode levar ao aparecimento de muta??es. As plantas por serem organismos sesseis est?o continuamente expostas a estes fatores. Considerando isto, os organismos (animais e vegetais) possuem diferentes vias de reparo de DNA para manter a integridade do material gen?tico. Dentro destas vias, h? a via de Reparo por Excis?o de Bases (BER) que ? composta por diferentes enzimas, e dentro dessa via h? a enzima AP endonuclease que ? alvo deste estudo. Trabalhos anteriores em cana-de-a??car identificaram duas sequ?ncias de cDNA hom?logas a esta prote?na que foram denominadas ScARP1 e ScARP3. Com isso, o objetivo deste trabalho foi caracterizar estas duas sequ?ncias por meio de an?lises filogen?ticas utilizando sequ?ncias presentes dentro do reino Plantae, e de an?lises estruturais dos genes de AP endonuclease por an?lise in silico e por plantas transg?nicas contendo cassetes de super-express?o. Al?m disso, foi realizado transforma??es e a obten??o plantas transg?nicas de Nicotiana tabacum contendo cassetes de super-express?o em orienta??o anti-senso. Foi tamb?m analisado a rela??o filogen?tica de genes DNA ligase I presentes no organismo vegetal de estudo. Os resultados obtidos permitiram verificar que as sequ?ncias ScARP1 e ScARP3 correspondem a uma duplica??o, provavelmente devido a um processo de duplica??o do genoma como um todo (WGD) que deve ter ocorrido no grupo das gram?neas (Poaceae). Refor?ando estes dados, foi verificado um poss?vel direcionamento da prote?na para organelas diferentes, sendo que a ScARP1 pode ser encontrada no n?cleo e a ScARP3 em mitocondrias e/ou cloroplasto. Com rela??o as plantas transg?nicas contendo o cassete em orienta??o anti-senso foi observado que estas apresentaram crescimento lento quando comparado com a planta selvagem (n?o transformada). Al?m disso, seu fen?tipo abrange altera??es morfol?gicas no crescimento foliar, baixa estatura e diminui??o na produ??o de sementes. Entretanto, ainda se faz necess?rio a obten??o da linhagem homozigota para aprofundar essas observa??es. Desta forma, estes resultados permitem compreender um pouco melhor do poss?vel papel da enzima AP endonuclease em cana-de-a??car e em plantas

Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-03-20T21:53:00Z No. of bitstreams: 1 GustavoAlexandreBragaDeCarvalho_DISSERT.pdf: 2122953 bytes, checksum: 792fb8a20dba93e5a2c8144f7c4e29d0 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-03-23T19:10:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 GustavoAlexandreBragaDeCarvalho_DISSERT.pdf: 2122953 bytes, checksum: 792fb8a20dba93e5a2c8144f7c4e29d0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T19:10:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GustavoAlexandreBragaDeCarvalho_DISSERT.pdf: 2122953 bytes, checksum: 792fb8a20dba93e5a2c8144f7c4e29d0 (MD5) Previous issue date: 2016-04-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior (CAPES) / A colora??o pode exercer as mais variadas fun??es dentre os diversos grupos de animais, e, especialmente em lagartos, essa variabilidade funcional ? relativamente alta, podendo atuar, por exemplo, como sinaliza??o reprodutiva, sinaliza??o social e estrat?gia anti-preda??o. Sendo que, a colora??o adotada pelas esp?cies pode variar dependendo das caracter?sticas f?sicas do meio (e.g. iluminante e background) e de fatores bi?ticos (e.g. sistema visual do observador), fazendo com que diferentes colora??es sejam selecionadas de acordo com o ambiente sensorial em quest?o. O objetivo desse trabalho foi testar a hip?tese do direcionamento sensorial na colora??o da cauda de duas esp?cies de lagartos gymnophitalmideos (Vanzosaura multiscutata e Micrablepharus maximiliani). Para isso foram realizadas coletas pontuais em tr?s diferentes ecossistemas (caatinga, restinga e mata atl?ntica) e em duas diferentes esta??es do ano (esta??o chuvosa e seca). A colora??o dos animais, assim como do substrato circundante e do espectro de ilumina??o solar, foi mensurada atrav?s de um espectrofot?metro e essas informa??es foram inseridas em uma modelagem visual para lagartos e poss?veis predadores. Os resultados mostraram picos de reflet?ncia de luz UV nas superf?cies mensuradas das duas esp?cies, o que pode ser o respons?vel por aumentar o contraste para animais com vis?o UV. Lagartos foi o fen?tipo que apresentou melhores resultados na detec??o da cauda das duas esp?cies. Por outro lado, as demais partes do corpo, supostamente teriam fun??o de camuflagem, devido ao seu baixo contraste com o substrato. Tamb?m encontramos uma varia??o do contraste de cor entre animal e substrato para diferentes fen?tipos visuais, encontrados em diferentes observadores. Sendo assim, conclui-se que a comunica??o intra-especifica pode ser o principal fator a influenciar a colora??o consp?cua da cauda das duas esp?cies. Al?m disso, a colora??o azul e vermelha pode cumprir em determinados momentos fun??es diferentes. Com a cauda vermelha, cumprindo fun??o de camuflagem para lagartos, por exemplo. / The coloration can peform a variety of functions among the various groups of animals, and, especially in lizards, this functional variability is relatively high, may act for exemplo as reproduction signaling, social signal and anti-predations strategy. Thus, the color adopted by the species may vary depending on the characteristics of the environment (e.g. Illuminant and background) and biotic factors (e.g. visual system of the observer), so that different colors are selected in according to the sensory environment in question. The aim of this study was to test the hypothesis of sensory drive in the tail coloration of two species of lizards gymnophitalmideos (Vanzosaura multiscutata and Micrablepharus maximiliani). For this were conducted collects samples in three different ecosystems (Caatinga, Sandbank and Atlantic Rain Forest) and in two different seasons (rainy and dry season). The color of the animals, as well as the surrounding substrate and the solar light spectrum was measured by a spectrophotometer and these information were inserted in a visual modeling for lizards and potential predators. The results showed peaks of the UV light in the surfaces of the two species measured, which may be responsible to increase contrast to animals with UV vision. The phenotype of lizard was the one that showed best results in detection of the tail of these two species. On the other hand, the other parts of the body, would supposedly have camouflage function, because of their low contrast with the substrate. We also found a variation of the color contrast between the animal and substrate for different visual phenotypes found in different observers. Therefore, it is concluded that the intraspecific communication may be the main factor affecting the conspicuous coloration of the tail of the two species. Moreover, the blue and red color may exert different functions at certain times. With the red tail fulfilling camouflage function to lizards, for example.

Em estudos anteriores, mostramos que uma nanoemulsão artificial (NEm) de composição semelhante à da lipoproteína de baixa densidade se liga a receptores de lipoproteínas de baixa densidade após sua injeção na corrente sanguínea. Como tais receptores estão superexpressos em células com altas taxas de proliferação, como ocorre no cancer e na aterosclerose, a NEm pode ser utilizada como veículo para direcionar drogas a estas células, diminuindo sua toxicidade e aumentando sua ação farmacológica. Recentemente, reportamos que a associação de um derivado do agente antiproliferativo paclitaxel, o oleato de paclitaxel (OPTX) à NEm reduziu em 60% a área lesionada de aortas de coelhos submetidos à dieta rica em colesterol. Neste estudo, testamos o efeito sinérgico da terapia combinada do OPTX-NEm com um derivado do metotrexato, o di-dodecil metotrexato (DMTX), também associado à NEm. O MTX, além de sua ação antiproliferativa, também possui propriedades imunossupressoras. Coelhos machos da raça Nova Zelândia foram submetidos à dieta enriquecida com 1% de colesterol durante 8 semanas. A partir da quinta semana de consumo da dieta, 8 animais foram injetados semanalmente com solução salina por via endovenosa (grupo controle) e 8 receberam o tratamento combinado de OPTX-NEm (4mg/Kg) com DMTX-NEm (4mg/Kg), por 4 semanas. Ao final das 8 semanas, os animais foram sacrificados. As aortas dos animais foram retiradas, abertas longitudinalmente, fixadas em formalina tamponada a 10% e coradas com Escarlate R para a análise macroscópica da lesão. Os arcos aórticos foram seccionados em fragmentos de 5mm, embebidos em parafina e os cortes realizados foram corados com hematoxilina-eosina, para a determinação da área das camadas íntima e média. O tratamento combinado de OPTX-NEm com DMTX-NEm reduziu a área das lesões em 82%, em comparação ao grupo controle, e a razão da área da lesão/área total diminuiu de 0,82±0,08 para 0,08±0,06 (p<0,01). Por meio das avaliações da variação do consumo de ração, peso corporal e contagem de leucócitos totais (p>0,05), pode-se afirmar que os tratamentos não apresentaram toxicidade significativa, exceto pela queda na contagem de eritrócitos (p<0,05). Como conclusão, a quimioterapia combinada de OPTX e DMTX associados à NEm como veículo mostrou-se eficaz na redução da área de lesão aterosclerótica em coelhos e a toxicidade relacionada aos fármacos foi nitidamente reduzida. / In previous studies we have shown that an artificial nanoemulsion (NEm) that resemble LDL composition are taken-up by LDL receptors after injection into the bloodstream. As those receptors are upregulated in cells with higher proliferation rates, as occurs in cancer and atherosclerosis, NEm can be used as vehicle to direct drugs against those cells, diminishing toxicity and increasing pharmacological action. Recently, we reported that association of antiproliferative agent paclitaxel derivative, paclitaxel oleate (OPTX) to NEm reduced by 60% the lesion area of cholesterol-fed rabbits. In this study, the combined chemotherapy of OPTX-NEm with a methotrexate derivative, di-dodecil methotrexate (DMTX), also associated with NEm, was tested for synergistic effects. MTX, besides antiproliferative action, has also immunosuppressant properties. Male New Zealand rabbits were fed a 1% cholesterol diet for 60 days. Starting from day 30, 8 animals were treated with 4 weekly I.V. saline solution injections (control group) and 8 with combined OPTX-NEm (4 mg/kg) plus DMTX-NEm (4 mg/kg) for additional 30 days. On day 60, the animals were sacrificed for analysis. Aorta was excised, open longitudinally, placed in 10% buffered formalin and stained in Scarlet R for lesion macroscopic analysis. Segments of 5mm of the aortic arch were embedded in paraffin and sections were taken and stained in hematoxylin-eosin for intima and media area measurement. In comparison with controls, treatment with combined OPTX-NEm plus DMTX-NEm reduced the lesion area by 82% and the lesion/total area ratio was decreased from 0,82±0,08 to 0,08±0,06 (p<0.01). Except for decrease in erythrocyte count (p<0.05), treatments were devoid of significant toxicity, as evaluated by food intake, body weight and leucocyte count (p>0.05). In conclusion, this novel approach consisting in combined chemotherapy of OPTX and DMTX using NEm as a drug-targeting vehicle showed effective lesion area regression in rabbits and marked toxicity reduction.

A teragnóstica de doenças tem sido extremamente marcada nos últimos anos por nanomateriais formados pela conjugação de nanopartículas a biomoléculas, pois a aplicação de tecnologias baseadas em materiais na dimensão nanométrica é capaz de aumentar a seletividade, sensibilidade e praticidade dos métodos atualmente empregados, ou mesmo criar novos métodos de diagnóstico e tratamento de doenças. Dentre os vários tipos de nanomateriais desenvolvidos, aqueles baseados em nanopartículas de ouro ou nanopartículas magnéticas apresentam propriedades químicas e físicas diferenciadas que propiciam novas possibilidades. Por exemplo, a presente tese demonstrou que nanopartículas superparamagnéticas são excelentes agentes de contraste em exames de imagem por ressonância magnética (IRM) por serem mais seguros, apresentarem melhor contraste nas imagens e possibilitarem direcionar/concentrar o material em tecidos ou tumores através de um gradiente de campo magnético aplicado. Foram feitos numerosos ensaios de toxicidade tanto in vitro quanto in vivo para assegurar a segurança da aplicação de nanopartículas no organismo, cujo potencial de uso somente se tornará uma realidade caso os nanomateriais se mostrem não tóxicos e biocompatíveis. Apesar dos significativos avanços na área da aplicação desses nanomateriais, não foram encontrados na literatura modelos capazes de explicar ou prever por quais sítios de ligação devem ocorrer as interações proteína-nanopartícula, como também não foram encontrados estudos sistemáticos acerca dos fatores que determinam a estabilidade e a funcionalidade dos nanobioconjugados (NBCs). Assim, nesta tese buscamos compreender os fatores responsáveis pela ligação/adsorção das proteínas nas nanopartículas de ouro e sua influência sobre a estabilidade das suspensões e a funcionalidade das proteínas. Desta forma, foram obtidos NBCs com propriedades adequadas para o desenvolvimento ou aprimoramento de ensaios de diagnóstico e até para o tratamento de doenças. Foi demonstrado o potencial das nanopartículas de ouro para melhorar a performance de imunoensaios do tipo ELISA, mas também podem ser utilizadas para o desenvolvimento de métodos de diagnóstico, explorando as propriedades plasmônicas das nanopartículas de ouro acopladas a técnicas como SERS, SPR e microscopia Raman confocal. / Theranostics has been intensively pursued in recent years using hybrid materials based on nanoparticles conjugated with biomolecules. This is an interesting strategy to increase the selectivity and sensitivity, as well as to improve the currently used methods facilitating their use or creating new ones. Among the various types of nanomaterials, those based on gold and magnetic nanoparticles exhibit interesting chemical and physical properties in the biological environment, differing from that of free drugs or current explored in assay methods. For example, superparamagnetic nanoparticles are excellent contrast agents for magnetic resonance image (MRI) diagnostics because they are safer, present a better contrast efficiency for imaging and can be magnetically accumulated in tissues or tumors using a magnetic field. Numerous in vitro and in vivo toxicity assays were performed to ensure the safety for medical applications. Clearly, these type of applications only will be realized if nanomaterials prove to be nontoxic and biocompatible. This imply an strict control on their structure and composition. However, despite the significant advances in the development of such nanomaterials, there were not found in the literature model systems explaining or that can be used to predict by which sites the protein-nanoparticle binding should take place. In addition, no systematic studies on the factors determining the stability and the functionality of nanobioconjugates (NBC) were found. Thus, this thesis is focused in unveiling the factors responsible for binding/adsorption of proteins on gold nanoparticles and their influence on the colloidal stability of hybrid nanoparticles suspensions while keeping the functionality of biomolecules. In fact, NBC with enhanced properties suitable for the development of diagnostic methods and even for treatment of diseases were obtained. These nanomaterials can improve the ELISA immunoassay, or other diagnosis methods can be developed by using the gold nanoparticles plasmonic properties in association with SERS, SPR and confocal Raman microscopy techniques.

A teragnóstica de doenças tem sido extremamente marcada nos últimos anos por nanomateriais formados pela conjugação de nanopartículas a biomoléculas, pois a aplicação de tecnologias baseadas em materiais na dimensão nanométrica é capaz de aumentar a seletividade, sensibilidade e praticidade dos métodos atualmente empregados, ou mesmo criar novos métodos de diagnóstico e tratamento de doenças. Dentre os vários tipos de nanomateriais desenvolvidos, aqueles baseados em nanopartículas de ouro ou nanopartículas magnéticas apresentam propriedades químicas e físicas diferenciadas que propiciam novas possibilidades. Por exemplo, a presente tese demonstrou que nanopartículas superparamagnéticas são excelentes agentes de contraste em exames de imagem por ressonância magnética (IRM) por serem mais seguros, apresentarem melhor contraste nas imagens e possibilitarem direcionar/concentrar o material em tecidos ou tumores através de um gradiente de campo magnético aplicado. Foram feitos numerosos ensaios de toxicidade tanto in vitro quanto in vivo para assegurar a segurança da aplicação de nanopartículas no organismo, cujo potencial de uso somente se tornará uma realidade caso os nanomateriais se mostrem não tóxicos e biocompatíveis. Apesar dos significativos avanços na área da aplicação desses nanomateriais, não foram encontrados na literatura modelos capazes de explicar ou prever por quais sítios de ligação devem ocorrer as interações proteína-nanopartícula, como também não foram encontrados estudos sistemáticos acerca dos fatores que determinam a estabilidade e a funcionalidade dos nanobioconjugados (NBCs). Assim, nesta tese buscamos compreender os fatores responsáveis pela ligação/adsorção das proteínas nas nanopartículas de ouro e sua influência sobre a estabilidade das suspensões e a funcionalidade das proteínas. Desta forma, foram obtidos NBCs com propriedades adequadas para o desenvolvimento ou aprimoramento de ensaios de diagnóstico e até para o tratamento de doenças. Foi demonstrado o potencial das nanopartículas de ouro para melhorar a performance de imunoensaios do tipo ELISA, mas também podem ser utilizadas para o desenvolvimento de métodos de diagnóstico, explorando as propriedades plasmônicas das nanopartículas de ouro acopladas a técnicas como SERS, SPR e microscopia Raman confocal. / Theranostics has been intensively pursued in recent years using hybrid materials based on nanoparticles conjugated with biomolecules. This is an interesting strategy to increase the selectivity and sensitivity, as well as to improve the currently used methods facilitating their use or creating new ones. Among the various types of nanomaterials, those based on gold and magnetic nanoparticles exhibit interesting chemical and physical properties in the biological environment, differing from that of free drugs or current explored in assay methods. For example, superparamagnetic nanoparticles are excellent contrast agents for magnetic resonance image (MRI) diagnostics because they are safer, present a better contrast efficiency for imaging and can be magnetically accumulated in tissues or tumors using a magnetic field. Numerous in vitro and in vivo toxicity assays were performed to ensure the safety for medical applications. Clearly, these type of applications only will be realized if nanomaterials prove to be nontoxic and biocompatible. This imply an strict control on their structure and composition. However, despite the significant advances in the development of such nanomaterials, there were not found in the literature model systems explaining or that can be used to predict by which sites the protein-nanoparticle binding should take place. In addition, no systematic studies on the factors determining the stability and the functionality of nanobioconjugates (NBC) were found. Thus, this thesis is focused in unveiling the factors responsible for binding/adsorption of proteins on gold nanoparticles and their influence on the colloidal stability of hybrid nanoparticles suspensions while keeping the functionality of biomolecules. In fact, NBC with enhanced properties suitable for the development of diagnostic methods and even for treatment of diseases were obtained. These nanomaterials can improve the ELISA immunoassay, or other diagnosis methods can be developed by using the gold nanoparticles plasmonic properties in association with SERS, SPR and confocal Raman microscopy techniques.