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Análise genético-molecular integrada aplicada ao processo de investigação de pacientes com diagnóstico clínico de MODY (Maturity Onset Diabetes of the Young) / Integrated molecular genetic analysis applied to the investigation process of patients with clinical diagnosis of MODY (Maturity Onset Diabetes of the Young)Santana, Lucas Santos de 04 September 2017 (has links)
Introdução: O sequenciamento completo do genoma humano foi finalizado em 2003, tornando-se responsável por uma revolução na prática médica, geralmente referenciada como a era da genômica e da medicina personalizada. O aumento na demanda por testes genéticos e a introdução de novos métodos de sequenciamento em larga escala tem gerado um inevitável crescimento no número de variantes raras mapeadas. Tal fato levou à expansão de áreas do conhecimento necessárias, tanto para uma adequada avaliação do real significado clínico desses achados, como para uma indicação mais criteriosa da investigação genética. Devido a isso, torna-se necessário otimizar os processos, desde a seleção dos casos sob suspeita até a coleta, armazenamento e análise dos dados clínico-laboratoriais e moleculares obtidos, visando a uma melhor acurácia no diagnóstico, tratamento e aconselhamento genético. Uma obtenção e interpretação adequada dos achados genético-moleculares, aliados a critérios clínicos de seleção adequados, resultaria no que hoje constitui a análise genética multifatorial ou integrada. Objetivo: O presente trabalho teve como objetivo implementar a análise genético-molecular integrada ao processo de investigação de pacientes com diagnóstico clínico de MODY (Maturity-Onset Diabetes of the Young). Materiais e métodos: A prevalência dos dois subtipos mais frequentes de MODY (MODY-GCK e MODY-HNF1A) foi investigada em uma grande coorte de famílias brasileiras. Todas as variantes identificadas como relacionadas ao fenótipo foram criteriosamente classificadas quanto a suas reais evidências de patogenicidade por meio da implementação das mais recentes diretrizes de obtenção e interpretação de achados genéticos. Resultados: Cento e nove probandos foram investigados, 45% (49/109) com suspeita clínica de MODYGCK e 55% (60/109) de MODY-HNF1A, além de 94 familiares, o que resultou na identificação de 25 variantes únicas candidatas no gene GCK em 30 probandos (61% - 30/49), além de 7 em 10 indivíduos com suspeita de MODYHNF1A (17% - 10/60). Dos 87 familiares sob risco rastreados, 43 eram portadores da mesma variante da família (37 - GCK e 6 - HNF1A). Um provável efeito fundador foi identificado com relação a uma deleção/inserção do tipo frameshift, presente em três probandos com MODY-GCK oriundos da mesma região do país. A implementação dos critérios da ACMG (The American College of Medical Genetics and Genomics) de avaliação de evidências de patogenicidade resultou na classificação de uma grande parcela das variantes como patogênica (36% - GCK / 86% - HNF1A) e provavelmente patogênica (44% - GCK / 14% - HNF1A), restando 16% com uma associação ainda incerta com o fenótipo investigado. Quatorze novas variantes foram identificadas (12 - GCK / 2 - HNF1A), ampliando, assim, o espectro de alterações associadas a MODY. Conclusões: Esta abordagem investigativa nos permitiu não apenas esclarecer a etiologia genética de inúmeros casos com diagnóstico clínico de MODY, como também determinar a classificação de patogenicidade das variantes de uma maneira mais detalhada, reforçando, principalmente, a provável relação com o fenótipo dentre aquelas ainda não descritas / Introduction: The full sequencing of the human genome was completed in 2003, becoming responsible for a revolution in medical practice, generally referred to as the era of genomics and personalized medicine. The increase in demand for genetic testing and the introduction of new methods of large-scale sequencing has raised an inevitable growth in the number of mapped rare variants. This fact led to the expansion of areas of knowledge required for a proper evaluation of the real clinical significance of these findings, as to a more solid indication of genetic research. Because of this, it is necessary to optimize the processes, from the selection of cases under suspicion until the collection, storage and analysis of the clinical laboratory and molecular data obtained, aiming a better accuracy in diagnosis, treatment and genetic counseling. A proper collection and interpretation of the molecular genetic findings, coupled with clinical criteria for appropriate selection would result in what today is the multifactorial or integrated genetic analysis. Objective: This current study aimed to implement the integrated molecular genetic analysis to the investigation process of patients with clinical diagnosis of MODY (Maturity Onset Diabetes of the Young). Materials and methods: The prevalence of the two most common MODY subtypes (MODYGCK and MODY-HNF1A) was investigated in a large cohort of Brazilian families. All variants identified as related to the phenotype were carefully classified to their actual evidence of pathogenicity by implementing the latest guidelines for obtainment and interpretation of genetic findings. Results: 109 probands were investigated, 45% (49/109) with clinical suspicion of MODY-GCK and 55% (60/109) of MODY-HNF1A, plus 94 family members under risk, which resulted in the identification of 25 unique variants candidates in the gene GCK in 30 probands (61% - 30/49), and also 7 in 10 individuals with suspected MODYxvi HNF1A (17% - 10/60). Of the 87 family members under risk, 43 were carriers of the same variant of the family (37 - GCK and 6 - HNF1A). A probable founding effect was identified, related to a frameshift deletion/insertion, present in three probands with MODY-GCK from the same region of the country. The implementation of the ACMG guidelines (The American College of Medical Genetics and Genomics) of evidence of pathogenicity assessment resulted in the classification of a large portion of the variants as pathogenic (36% - GCK / 86% - HNF1A) and likely pathogenic (44% - GCK / 14% - HNF1A), leaving 16% with a still uncertain association with the investigated phenotype. Fourteen new variants were identified (12 - GCK / 2 - HNF1A), broadening the spectrum of modifications associated to MODY. Conclusions: This investigative approach allowed us to not only clarify the genetic etiology of numerous cases with clinical diagnosis of MODY, as well as determine the pathogenicity classification of variants in a more detailed way, reinforcing the likely relationship with the phenotype among those not yet described
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Monitoramento não invasivo da ciclicidade ovariana em Lycalopex vetulus / Non-invasive monitoring of ovarian cyclicity in Lycalopex vetulusCandeias, Isis Zanini das 28 November 2014 (has links)
Devido as atuais mudanças globais é esperado que um grande número de espécies necessitem de uma integração de ações dentro e fora do seu ambiente natural para a conservação. O bioma cerrado é um dos ecossistemas mais ricos em biodiversidade, mas devido a ação antrópica, resta menos de 20% de sua cobertura vegetal original. A Raposinha do Campo (Lycalopex vetulus) é um canídeo de pequeno porte (2,5-4kg) endêmico do cerrado do Brasil central e está presente na lista dos animais ameaçados de extinção do Estado de São Paulo. Não existe em literatura uma descrição detalhada do ciclo estral desta espécie. O presente estudo teve como objetivo caracterizar a ciclicidade ovariana de Lycalopex vetulus com o uso de método não-invasivo: Extração e mensuração de metabólitos fecais de progesterona e estradiol, com o uso da técnica de enzimaimunoensaio, verificando também a possível existência de diferenças mensais entre as médias das concentrações dos referidos metabólitos em um período de 12 meses. Foram utilizadas 8 fêmeas, adultas, presentes em cinco instituições no estado de São Paulo, onde foram coletadas fezes 3 vezes por semana de cada indivíduo, durante 12 meses, para a extração e mensuração dos metabólitos de progesterona, estradiol e corticosterona. Os perfis das excreções dos metabólitos fecais dos hormônios sexuais de 6 das 8 fêmeas, foram muito semelhantes, sendo período de maior atividade reprodutiva entre os messes de julho, agosto e setembro, ocorrendo mais de um ciclo ovulatório dentro desse período. Nos outros meses do ano, apesar de algumas variações acima da linha basal, não foram encontrados indícios de atividade reprodutiva. De acordo com essas características, semelhante entre a maioria das fêmeas do estudo, podemos sugerir que a raposa-do-campo seja poliestrica sazonal, com atividade reprodutiva ocorrendo nos meses de julho, agosto e setembro. Esses achados são muito próximos do visualizado em populações de vida livre, onde acasalamentos são observados entre junho e julho. O perfil de excreção dos metabólitos fecais de glicocorticóides segue o mesmo padrão observado para os metabólitos de progesterona e estradiol, com um aumento mais significativo da excreção nos meses de julho, agosto e setembro. Esses resultados indicam que além da grande quantidade de estressores que podem alterar a excreção de glicocorticóides, também deve-se considerar a flutuação sazonal e o status reprodutivo do indivíduo ao avaliar as concentrações de metabólitos de glicocorticóides. Duas fêmeas, que dividem o mesmo recinto, não apresentaram um padrão de ciclicidade reprodutiva. Os resultados obtidos nesse estudo indicam que a dosagem de metabólitos fecais de progesterona e estradiol podem ser usadas para diferenciar o período reprodutivo do período não reprodutivo em fêmeas de Lycalopex vetulus, fornecendo informações importantes sobre a biologia reprodutiva da espécie, o que pode contribuir no desenvolvimento de estratégias para a conservação desta espécie, como por exemplo aumentar o sucesso reprodutivo ex situ. / Due to the current global changes is expected that a large number of species require an integration of actions inside and outside their natural environment for them conservation. The cerrado is one of the richest ecosystems in biodiversity, but due to human action, there remains less than 20% of its original vegetation cover. The Hoary fox (Lycalopex vetulus) is a small canid (2,5-4kg) endemic of the cerrado from the central Brazil and is present in the list of endangered species in the state of São Paulo. It was not found in literature any detailed description of the estrous cycle of this species. The present study aimed to characterize ovarian cyclicity in Lycalopex vetulus using a noninvasive method: Extraction and measurement of fecal metabolites of estradiol and progesterone, using the technique of enzymeimmunoassay, It was also verified the possible differences between the monthly mean concentrations of these metabolites in a period of 12 months. 8 captive adult females, were studied in five different institutions in the state of São Paulo, where feces were collected three times per week for each individual for 12 months for extraction and measurement of metabolites of progesterone, estradiol and glucocorticoids. The profile of the concentration of fecal metabolites of sexual hormones from 6 of 8 females was very similar, being the period of major reproductive activity between the months of July, August and September, with the occurrence of more than one ovulatory cycle within that period. In the others months of the year, despite some variations above the baseline, no evidence of reproductive activity were found. According to these characteristics, similar in most females of the study, we can suggest that the hoary fox is seasonal polyestrous with reproductive activity occurring in the months of July, August and September. These findings are very close to the observed in wild populations, where mating is observed between June and July. The profile of excretion of fecal glucocorticoid metabolites follows the same pattern observed for the metabolites of progesterone and estradiol, with a more significant increase in excretion in the months of July, August and September. These results indicate that besides the large amount of stressors that can alter the excretion of glucocorticoids also it must be considered the seasonal fluctuation and the reproductive status of the individual to evaluate the levels of glucocorticoids. Two females, who share the same captivity, did not show a pattern of reproductive cyclicity. The results of this study indicate that the dosage of fecal metabolites of estradiol and progesterone can be used to differentiate the reproductive period of non-reproductive period in females of Lycalopex vetulus, providing important information about the reproductive biology, which may contribute to the development of the species conservation strategies, such as increasing the reproductive ex situ success.
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Associação entre polimorfismos em genes envolvidos no metabolismo do folato e risco materno para a síndrome de Down.Mendes, Cristiani Cortez 05 August 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-08-05 / Down syndrome is the most common genetic disorder and, in about 90% of the cases, is characterized by free trisomy of chromosome 21, caused by the failures of chromosomal segregation during maternal meiosis. Studies suggested that the occurrence of DS independent of maternal age is associated with DNA hypomethylation due to impairments in folate metabolism, and genetics polymorphisms involved in this metabolic pathway have been appointed as maternal risk factors for DS. Addition to the genetic polymorphisms, micronutrients deficiencies, as folate and B12 vitamin, can change the products of the folate pathway and result in DNA hypomethylation, genomic instability and reduced DNA repair capacity. Objectives: We evaluated the influence of the 19-base pairs (bp) deletion polymorphism of Dihydrofolate reductase (DHFR) gene, DNA methyltransferase 3B (DNMT3B) -149C→T and -283T→C on the maternal risk for DS and investigated the association between these polymorphism and variations in the concentrations of serum folate and plasma homocysteine (Hcy) and methylmalonic acid (MMA). Methods: 105 mothers of DS individuals with free trisomy 21 and 185 mothers of individuals without the syndrome were studied. Molecular analysis of the DHFR polymorphism was performed by the Polymerase Chain Reaction (PCR) by difference in the size of fragments and DNMT3B -149C→T and -283T→C were analyzed by real-time PCR. Folate was quantified by chemiluminescence and Hcy and MMA by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Results: The analysis of DHFR polymorphism showed no difference between the groups in relation to allele and genotype frequencies (P = 0.44; P = 0.69, respectively). In relation to gentoype, folate, Hcy and MMA concentrations did not differ between the groups (P > 0.05). The DNMT3B -149TT/-283TC combined genotypes were associated with increased maternal risk for DS (OR = 4.61, CI 95% = 1.35 15.79; P = 0.02) and higher folate concentration was observed in mothers with DNMT3B -149CT/-283CC genotypes compared to other combined genotypes (P = 0.03). Conclusions: The 19-bp deletion polymorphism of DHFR gene is not a maternal risk factor for DS and is not related to variations in the concentrations of serum folate and plasma Hcy and MMA. On the other hand, the DNMT3B polymorphisms increase the maternal risk for DS and modulate the folate concentration in studied population. / A síndrome de Down (SD) é a cromossomopatia humana mais frequente e, na maioria dos casos (cerca de 90%), é caracterizada pela trissomia livre do cromossomo 21, resultante de falhas na segregação cromossômica durante a meiose materna. Estudos sugerem que a ocorrência da SD independente da idade materna está relacionada à hipometilação do DNA centromérico como conseqüência do metabolismo anormal do folato e, polimorfismos genéticos envolvidos nesta via metabólica têm sido apontados como fatores de risco materno para a síndrome. Além dos polimorfismos genéticos, deficiências de micronutrientes, tais como folato e vitamina B12, podem alterar os produtos resultantes da via metabólica do folato e resultar em hipometilação do DNA, instabilidade genômica e redução da capacidade de reparo do DNA. Objetivos: Avaliar a influência dos polimorfismos de deleção de 19 pares de base (pb) do gene Dihidrofolato redutase (DHFR), DNA metiltransferase 3B (DNMT3B) -149C→T e -283T→C como fatores de risco materno para a SD e investigar a associação entre esses polimorfismos e as concentrações de folato sérico, homocisteína (Hcy) e ácido metilmalônico (MMA) plasmáticos. Casuística e Métodos: Foram incluídas no estudo 105 mães de indivíduos com trissomia livre do cromossomo 21 e 185 mães de indivíduos sem a síndrome. O polimorfismo do gene DHFR foi avaliado por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) por diferença de tamanho de fragmentos e os polimorfismos DNMT3B -149C→T e -283T→C foram analisados por PCR em tempo real. O folato sérico foi quantificado por quimioluminescência, e Hcy e MMA plasmáticos foram determinados por cromatografia líquida/espectrometria de massas sequencial. Resultados: Em relação ao polimorfismo de deleção do gene DHFR, não houve diferença entre os grupos em relação às frequências alélica e genotípica (P = 0,44; P = 0,69, respectivamente) e as concentrações de folato, Hcy e MMA não mostraram diferença significativa entre os genótipos, entre grupos (P > 0,05). Os genótipos combinados DNMT3B -149TT/-283TC foram associados com o aumento do risco materno para a SD (OR = 4,61, IC 95% = 1,35 15,79; P = 0,02) e, concentração de folato aumentada foi observada em mães com os genótipos DNMT3B -149CT/-283CC quando comparados com os demais genótipos combinados (P = 0,03). Conclusões: O polimorfismo de deleção de 19 pb do gene DHFR não é um fator de risco materno para SD e não está relacionado com variações nas concentrações de folato sérico, Hcy e MMA plasmáticos. Por outro lado, os polimorfismos do gene DNMT3B aumentam o risco materno para a SD e modulam a concentração de folato na população estudada.
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Efeito anticatabólico dos derivados de xantina no metabolismo de proteínas em músculos esqueléticos de ratos sépticos: um estudo de microdiálise.Lira, Eduardo Carvalho 20 April 2006 (has links)
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Previous issue date: 2006-04-20 / Introduction: The aim of the present study was to estimate the anticatabolic effect of xanthine derivatives on skeletal muscle protein metabolism from septic rats by using microdialysis. Methods: Sepsis was induced by cecal ligation and puncture (CLP). After 3, 6 and 10 hours of surgery, male Wistar rats (~250g) were anesthetized with thionembutal sodium (50mg/Kg body weight i.p.) and placed on heating pads to maintain adequate temperature (37oC). Microdialysis probe was inserted in the anterior tibial muscle and an equilibration period of 30 minutes was allowed. After connecting the catheter inlet to a microinjection pump, the system was perfused with 0,5% bovine serum albumin, 50 μM tyrosine and 1 mmol/l glucose in isotonic saline at a rate of 1.0 μl/min. Samples of the skeletal muscle interstitial fluid and arterial plasma from carotid artery were collected after 90 minutes of experiment and tyrosine was measured by fluorescence. The interstitial tyrosine concentration was estimated from the dialysate concentration. To calibrate catheters in vivo the internal reference calibration technique was used. The muscle blood flow was estimated by ethanol technique. Overall proteolysis was investigated in extensor digitorus longus (EDL) muscles from sham-operated and 3-hour septic rats (~70g) incubated in the presence or not of IBMX (1mM). Results: In sham-operated and septic rats, skeletal muscle interstitial tyrosine levels (μM) were significantly higher than arterial plasma tyrosine. Three-hour septic rats showed a 33% decrease in muscle blood flow and a 128% increase in the concentration of tyrosine in skeletal muscle interstitial (235 ± 16, n=10), when compared to
sham-operated rats (95,5 ± 5,5, n=10). Interstitial (I) minus arterial (A) plasma tyrosine concentrations difference was also significantly increased after 3 hours of sepsis (117 ± 7 vs. 31 ± 6 in sham-operated, n=10). Pentoxifylline (PTX; 50mg/Kg body weigh, e.v.) treatment, during 1 hour immediately after CLP, reduced in 25% and 50% the interstitial tyrosine concentration and I-A difference, respectively. In situ isobutylmethylxanthine (IBMX; 1mM), but not PTX, reduced the interstitial tyrosine concentration (30-46%) and I-A difference (43-48%) in both groups. The increase of proteolysis induced by sepsis in EDL muscles was abolished by in vitro addition of IBMX (1mM). Conclusions: The data show that: (1) microdialysis is a perfectly adapted tool to investigate in vivo regulation of muscle protein metabolism during acute catabolic states; (2) the catabolic effect of sepsis on rat skeletal muscle protein metabolism in vivo can be observed 3 hours after CLP; (3) the xanthine derivatives reduce the muscle protein catabolism induced by sepsis in rats. / Objetivo: investigar o efeito anticatabólico dos derivados de xantinas no metabolismo de proteínas de ratos sépticos utilizando a técnica de microdiálise. Materiais e métodos: Ratos machos Wistar (~250g) foram anestesiados com tiopental (50mg/Kg, i.p.) e mantidos em mesa cirúrgica aquecida (37°C). A sepse foi induzida pela ligadura e punção do ceco (CLP) e os músculos estudados após 3, 6 e 10 horas da cirurgia. O cateter de microdiálise foi inserido no tibial anterior, o qual foi perfundido a um fluxo constante de 1,0μl/min com solução salina enriquecida com albumina bovina (0,5%), 50 μM de tirosina fria, 1 mmol/l de glicose e [14C]-tirosina. A tirosina foi quantificada por fluorescência no dialisado, sangue arterial e solução de perfusão, após 90 minutos de microdiálise. O cateter foi calibrado in situ pela técnica da referencia interna. O Fluxo Sanguíneo Muscular (FSM) foi avaliado pela técnica do clearance de etanol. A proteólise foi quantificada no extensor digitorus longus (EDL) de ratos (~70g) sham ou sépticos por meio da liberação de tirosina in vitro. Resultados: A concentração intersticial de tirosina foi sempre maior que a concentração arterial. A sepse de 3 horas reduziu em 33% o FSM e aumentou em 127% a concentração intersticial de tirosina (235 ± 16, n=10) em relação ao sham (95 ± 5, n=10). A diferença I-A também foi maior no grupo séptico (117 ± 16 vs. 31 ± 6 no sham, n=10). A infusão sistêmica da pentoxifilina (PTX; 50mg/Kg, e.v.), durante a primeira hora pós-CLP, reduziu em 25% e 50% a concentração intersticial e a diferença I-A de tirosina, respectivamente. O tratamento in situ com isobutil-metil-xantina (IBMX; 1mM), mas não com PTX, reduziu a concentração intersticial (30-46%) e a diferença I-A (43-48%) de tirosina, em ambos os grupos. O aumento da proteólise muscular induzido pela sepse foi abolido pela ação in vitro da IBMX (1mM) que reduziu a proteólise em 41%. Conclusões: os resultados mostram que: (1) a microdiálise é uma técnica perfeitamente adaptada ao estudo do metabolismo de proteínas em situações catabólicas; (2) o modelo da CLP de 3 horas ativa o catabolismo de proteínas em músculos esqueléticos de ratos; (3) As ações sistêmicas, in situ e in vitro dos derivados de xantinas reduzem o catabolismo de proteínas em músculos de ratos sépticos.
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Monitoramento não invasivo da ciclicidade ovariana em Lycalopex vetulus / Non-invasive monitoring of ovarian cyclicity in Lycalopex vetulusIsis Zanini das Candeias 28 November 2014 (has links)
Devido as atuais mudanças globais é esperado que um grande número de espécies necessitem de uma integração de ações dentro e fora do seu ambiente natural para a conservação. O bioma cerrado é um dos ecossistemas mais ricos em biodiversidade, mas devido a ação antrópica, resta menos de 20% de sua cobertura vegetal original. A Raposinha do Campo (Lycalopex vetulus) é um canídeo de pequeno porte (2,5-4kg) endêmico do cerrado do Brasil central e está presente na lista dos animais ameaçados de extinção do Estado de São Paulo. Não existe em literatura uma descrição detalhada do ciclo estral desta espécie. O presente estudo teve como objetivo caracterizar a ciclicidade ovariana de Lycalopex vetulus com o uso de método não-invasivo: Extração e mensuração de metabólitos fecais de progesterona e estradiol, com o uso da técnica de enzimaimunoensaio, verificando também a possível existência de diferenças mensais entre as médias das concentrações dos referidos metabólitos em um período de 12 meses. Foram utilizadas 8 fêmeas, adultas, presentes em cinco instituições no estado de São Paulo, onde foram coletadas fezes 3 vezes por semana de cada indivíduo, durante 12 meses, para a extração e mensuração dos metabólitos de progesterona, estradiol e corticosterona. Os perfis das excreções dos metabólitos fecais dos hormônios sexuais de 6 das 8 fêmeas, foram muito semelhantes, sendo período de maior atividade reprodutiva entre os messes de julho, agosto e setembro, ocorrendo mais de um ciclo ovulatório dentro desse período. Nos outros meses do ano, apesar de algumas variações acima da linha basal, não foram encontrados indícios de atividade reprodutiva. De acordo com essas características, semelhante entre a maioria das fêmeas do estudo, podemos sugerir que a raposa-do-campo seja poliestrica sazonal, com atividade reprodutiva ocorrendo nos meses de julho, agosto e setembro. Esses achados são muito próximos do visualizado em populações de vida livre, onde acasalamentos são observados entre junho e julho. O perfil de excreção dos metabólitos fecais de glicocorticóides segue o mesmo padrão observado para os metabólitos de progesterona e estradiol, com um aumento mais significativo da excreção nos meses de julho, agosto e setembro. Esses resultados indicam que além da grande quantidade de estressores que podem alterar a excreção de glicocorticóides, também deve-se considerar a flutuação sazonal e o status reprodutivo do indivíduo ao avaliar as concentrações de metabólitos de glicocorticóides. Duas fêmeas, que dividem o mesmo recinto, não apresentaram um padrão de ciclicidade reprodutiva. Os resultados obtidos nesse estudo indicam que a dosagem de metabólitos fecais de progesterona e estradiol podem ser usadas para diferenciar o período reprodutivo do período não reprodutivo em fêmeas de Lycalopex vetulus, fornecendo informações importantes sobre a biologia reprodutiva da espécie, o que pode contribuir no desenvolvimento de estratégias para a conservação desta espécie, como por exemplo aumentar o sucesso reprodutivo ex situ. / Due to the current global changes is expected that a large number of species require an integration of actions inside and outside their natural environment for them conservation. The cerrado is one of the richest ecosystems in biodiversity, but due to human action, there remains less than 20% of its original vegetation cover. The Hoary fox (Lycalopex vetulus) is a small canid (2,5-4kg) endemic of the cerrado from the central Brazil and is present in the list of endangered species in the state of São Paulo. It was not found in literature any detailed description of the estrous cycle of this species. The present study aimed to characterize ovarian cyclicity in Lycalopex vetulus using a noninvasive method: Extraction and measurement of fecal metabolites of estradiol and progesterone, using the technique of enzymeimmunoassay, It was also verified the possible differences between the monthly mean concentrations of these metabolites in a period of 12 months. 8 captive adult females, were studied in five different institutions in the state of São Paulo, where feces were collected three times per week for each individual for 12 months for extraction and measurement of metabolites of progesterone, estradiol and glucocorticoids. The profile of the concentration of fecal metabolites of sexual hormones from 6 of 8 females was very similar, being the period of major reproductive activity between the months of July, August and September, with the occurrence of more than one ovulatory cycle within that period. In the others months of the year, despite some variations above the baseline, no evidence of reproductive activity were found. According to these characteristics, similar in most females of the study, we can suggest that the hoary fox is seasonal polyestrous with reproductive activity occurring in the months of July, August and September. These findings are very close to the observed in wild populations, where mating is observed between June and July. The profile of excretion of fecal glucocorticoid metabolites follows the same pattern observed for the metabolites of progesterone and estradiol, with a more significant increase in excretion in the months of July, August and September. These results indicate that besides the large amount of stressors that can alter the excretion of glucocorticoids also it must be considered the seasonal fluctuation and the reproductive status of the individual to evaluate the levels of glucocorticoids. Two females, who share the same captivity, did not show a pattern of reproductive cyclicity. The results of this study indicate that the dosage of fecal metabolites of estradiol and progesterone can be used to differentiate the reproductive period of non-reproductive period in females of Lycalopex vetulus, providing important information about the reproductive biology, which may contribute to the development of the species conservation strategies, such as increasing the reproductive ex situ success.
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Fatores associados com a qualidade de vida e avaliação dos sintomas de ansiedade e depressão dos pacientes acromegálicos / Factors associated with quality of life and evaluation of the psychopathological symptoms in acromegalic patientsSá, Adriana Maria Guimarães 23 February 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-02-23 / Acromegaly is a rare disease, often caused by a pituitary tumor that secretes excess growth hormone and is associated with enlarged extremities, multiple organ dysfunction, physical limitations, decreased daily productivity, social isolation and worsening of quality Of life (QOL). The objective of this study was to identify the factors associated with quality of life and to verify the association between psychopathological symptoms and quality of life in patients with acromegaly accompanied in the only reference service of neuroendocrinology in the State of Maranhão - Northeast Brazil. The Acro-Qol questionnaire, the inventories of Beck's anxiety and depression, and the cronbach alpha were calculated. In order to identify independently associated factors, multivariate linear regression was adjusted and to verify the relationship between the factors associated with psychopathological symptoms, Student's t test and calculated the pearson correlation coefficientto to verify the correlation between quality of life and levels of anxiety and depression. Values of p <0.05 were considered significant. The study sample is composed of 57 patients. Cronbach's alpha was observed from 0.7 in all domains of Acro-Qol. There was a predominance of female patients (63.2%), with a mean age of 53.52 ± 12.2 years, with a monthly income of 3.51 + 3.9 minimum wages, with a macroadenoma (72%) and undergoing surgery (59.6%). In the multivariate linear regression, there was a positive association of income with quality of life scores in all domains; (Β = 0.372, p = 0.004), physical (β = 0.988, p = 0.001), psychological (β = 0.342, p = 0.008) P = 0.012) and in those that were inserted in the labor market in the total domains (β = 0.288, p = 0.003), psychological (β = 0.291, p = 0.032) and personal relations (β = 0.314, p = 0.019). In Pearson's correlation, there was a negative association between quality of life scores and anxiety levels in all domains; (R = - 0.442, p = 0.001), physical (r = - 0.532, p = <0.001), psychological (r = - 0.357, p = 0.006) (R = -0.370, p = 0.005) and in depression levels also in all domains; (R = -0.421, p = 0.001), physical (r = -0.645, p = <0.001), psychological (r = -0.543, p = <0.001) And personal relationships (r = - 0.541, p = <0.001). In this population of acromegaly patients, coming from one of the less developed regions of Brazil, being in the labor market and having a higher income were related to better QoL and the more intense symptoms of anxiety and depression were related to worse quality of life. Patients who have a tumor in the pituitary even reaching control of the disease are subject to a premature increase of health risks. The challenge for the future is how to improve the outcome of pituitary patients, so they can be closer to the concept of achieving a better quality of life. / Acromegalia é uma doença rara, frequentemente causada por um tumor na pituitária que secreta excesso de hormônio do crescimento e está associada com aumento das extremidades, disfunção de múltiplos órgãos, limitações físicas, diminuição da produtividade diária, isolamento social e piora na qualidade de vida (QV). O objetivo do estudo foi identificar os fatores associados à qualidade de vida e verificar a associação entre os sintomas de ansiedade e depressão e a qualidade de vida em portadores de acromegalia acompanhados no único serviço de referência de neuroendocrinologia do Estado do Maranhão - Nordeste do Brasil. Foi utilizado o questionário Acro-Qol, os inventários de ansiedade e depressão de Beck e calculado o alpha de cronbach. Para identificar fatores associados independentemente foi ajustado o modelo de regressão
linear multivariado e para verificar a relação entre os fatores associados aos sintomas psicopatológicos foi realizado o teste t de student e calculado o coeficiente de correlação de Pearson para verificar a correlação entre qualidade de vida e os níveis de ansiedade e depressão. Os valores de p<0.05 foram considerados significantes. A amostra do estudo é composta por 57 pacientes. Observou-se o alpha de Cronbach a partir de 0.7 em todos os domínios do Acro-Qol. Houve predomínio dos pacientes do sexo feminino (63.2%), com média de idade 53.52+12.2 anos, com renda mensal de 3.51+ 3.9 salários mínimos, portador de macroadenoma (72%) e submetidos à cirurgia (59.6%). Na regressão linear multivariada, houve associação positiva da renda com escores de qualidade de vida em todos os domínios; total (β 0.037, p= 0.003), físico (β=
0.988, p= 0.001), psicológico (β= 0.342, p= 0.008), aparência (β= 0.270, p=0.049) e relações pessoais (β= 0.315, p=0.012) e naqueles que estavam inseridos no mercado de trabalho nos domínios total (β= 0.288, p= 0.003), psicológico (β= 0.291, p=0.032) e relações pessoais (β= 0.314, p=0.019). Na correlação de Pearson, houve associação negativa dos escores de qualidade de vida e os níveis de ansiedade em todos os domínios; total (r= - 0.442, p= 0.001), físico (r= - 0.532, p= < 0.001), psicológico (r= -0.357, p= 0.006), aparência (r= - 0.270, p=0.042) e relações pessoais (r= - 0.370, p=0.005) e nos níveis de depressão também em todos os domínios; total (r= - 0.621, p= <0.001), físico (r= - 0.645, p= < 0.001), psicológico (r= - 0.543, p= <0.001), aparência (r= - 0.421, p=0.001) e relações pessoais (r= - 0.541, p= <0.001). Nesta população de
portadores de acromegalia, proveniente de uma das regiões menos desenvolvidas do Brasil, estar inserido no mercado de trabalho e possuir maior renda estiveram relacionados com melhor QV e os sintomas mais intensos de ansiedade e depressão estiveram relacionados com piores níveis de qualidade de vida. Pacientes que possui tumor na pituitária mesmo alcançando o controle da doença estão sujeitos a um aumento prematuro de riscos para a saúde. O desafio para o futuro é como melhorar o resultado dos pacientes pituitários, para que eles possam estar mais perto do conceito de atingir uma melhor qualidade de vida.
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Perfil metabólico e reprodutivo de ratas obesas tratadas com Syzygium cumini (L.) Skeels / METABOLIC AND REPRODUCTIVE PROFILE OF OBESE RATS TREATED WITH Syzygium cumini (L.) SKEELSVale, Caroline Castro 13 December 2016 (has links)
Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-06-14T17:28:23Z
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Previous issue date: 2016-12-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPQ) / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / Metabolic syndrome (MS) is defined as a set of interrelated risk factors that contribute to type 2 diabetes mellitus (T2DM) and cardiovascular disease (CVD). SM also causes harmful effects on the reproductive system, especially for women, as it reducies ovulatory rates, increasies the number of abortions and late pregnancy complications, which increase the risk of infertility. As a form of treatment approaches are adopted both non-pharmacologic and pharmacologic. In this context, the use of alternative therapies with natural products has emerged as a safer and less associated with worsening of MS risk factors. Syzygium cumini (jambolan) is a species of Asian origin, but cultivated and used throughout the world for its anti-hyperglycemic, anti-hiperlipemiantes and antioxidants. Through these actions, we sought to investigate whether the hydroalcoholic extract of the leaves of S. cumini (EHSyz) improves the metabolic changes and consequently, changes in reproductive function in rats with induced obesity L-monosodium glutamate (MSG) a dose 4g/Kg/day. Wistar female rats were divided into the following groups: CTRL group (treated with NaCl 0.9% 0.1 ml / 100g / day v.o,); MSG group (treated with NaCl 0.9% 0.1 ml / 100g / day V.O.); EHSyz obese group (treated with EHSyz at a dose of 500mg / kg / day, V.O.), each for 60 days. The administration EHSyz promoted with retention of weight gain, reduction Lee index and improved glycolipid profile, with reduced serum triglyceride levels by 60.7% and 29.7% compared to cholesterol total.O EHSyz even avoided introduction resistance table in the treated rats. However, despite the improvement in oligociclicidade, the extract was not able to improve reproductive impairment of the treated rats. Thus, we conclude that treatment with EHSyz produced marked effects on metabolic parameters in obese rats without interfering with the reproductive capacity of the same. / A síndrome metabólica (SM) é definida como um conjunto de fatores de risco interrelacionados que contribuem para o diabetes mellitus tipo 2 (DM2) e doenças cardiovasculares (DCV). A SM também provoca efeitos deletérios sobre o sistema reprodutor, especialmente feminino, com redução de taxas ovulatórias, aumento do número de abortos, complicações tardias da gravidez, que elevam o risco de infertilidade. Como forma de tratamento, são adotadas abordagens tanto não farmacológicos quanto farmacológicas. Nesse contexto, o uso de terapias alternativas com produtos naturais tem se destacado como uma forma menos associada ao agravamento dos fatores de risco da SM. Syzygium cumini (jambolão) é uma espécie vegetal de origem asiática, porém cultivada e utilizada em todo o mundo por suas propriedades anti-hiperglicemiantes, anti-hiperlipemiantes e antioxidantes. Mediante tais ações, buscamos investigar se o extrato hidroalcoólico das folhas de S. cumini (EHSyz) melhora as alterações metabólicas e, consequentemente, as alterações da função reprodutiva de ratas com obesidade induzida por L-glutamato monossódico (MSG) na dose 4g/Kg/dia. Fêmeas Wistar foram divididas nos seguintes grupos: grupo CTRL (tratado com NaCl 0,9% 0,1mL/100g/dia v.o,); grupo MSG (tratado com NaCl 0,9% 0,1mL/100g/dia v.o.); grupo obeso EHSyz (tratado com EHSyz na dose de 500mg/kg/dia, v.o.), todos durante 60 dias. A administração com EHSyz promoveu manutenção do ganho de peso, redução do índice de Lee e melhora do perfil glicolipídico, com redução dos níveis séricos de triglicérides em 60,7 % e 29,7 % em relação ao colesterol total. O EHSyz evitou ainda a instauração do quadro de resistência nas ratas tratadas. Entretanto apesar da melhora na oligociclicidade, o extrato não foi capaz de melhorar o comprometimento reprodutivo das ratas tratadas. Desta forma, concluímos que o tratamento com EHSyz produziu efeitos acentuados sobre parâmetros metabólicos de ratas obesas sem interferir na capacidade reprodutiva das mesmas.
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Efeitos do uso de glicocorticoides sobre o metabolismo da glicose em ratos: estudo comparativo entre dexametasona e prednisona / EFFECTS OF USING GLICOCORTICOIDES ON THE METABOLISM OF GLUCOSE IN RATS: A COMPARATIVE STUDY BETWEEN DEXAMETHASONE AND PREDNISONEMelo, Danylo Noleto de Sousa 29 September 2016 (has links)
Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-06-14T17:35:19Z
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Previous issue date: 2016-09-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPQ) / Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão (FAPEMA) / Synthetic glucocorticoids (GCs) induce several adverse effects when administered in high doses and/or prolonged, as peripheral insulin resistance, glucose intolerance, and alterations in lipid metabolism, especially hypertriglyceridemia. There are few studies on the metabolic impact caused by long-term treatments with different synthetic GCs, especially with prednisone, GC of intermediate action and first choice in its pharmacologic class. Therefore, we seek to verify the metabolic alterations caused by sub chronic treatment with prednisone in rats and compare them with existing and in acute model of insulin resistance induced by dexamethasone effects. For this, Wistar rats with of 90 days were treated with dexamethasone (D5) (1 mg/kg, i.p.) for 5 consecutive days and, its controls (C5) with saline, and Wistar rats of 60 days old were treated with prednisone (80 mg/kg, orally) for 15 days (P15) and 30 days (P30) consecutive and their respective controls (C15 and C30), received vehicle solution. The D5 results a decreased body weight (12.3%) and lower weight of retroperitoneal fat (38%), increased serum fasting glucose (12%) and fed (30%), insulin (80%) and triglycerides (339%) (p <0.05). Total fat and triglycerides liver were 29% and 52% higher in rats D5, compared to the C5 rats (p <0.05). The P15 rats had increased weight 61% less, reduction of retroperitoneal fat (29%) and increased plasma triglyceride concentrations (60%) compared to the C15 rats (p <0.05). As long as P30 rats had increased weight 44% less, reduction of retroperitoneal fat (25%) and increased serum triglycerides (78%) and liver total fat (26%) compared to the C30 rats (p <0,05). In vivo tests revealed the presence of impaired glucose tolerance (oGTT) in rats D5 and P30, and reduced insulin sensitivity (ipITT, HOMA, TYG) in D5 animals (p <0.05). Ex vivo test showed greater sensitivity in the pancreatic islets front glucose only in D5 rats. In conclusion, the sub chronic administration of prednisone promoted finer metabolic changes in glucose homeostasis, compared to acute administration of dexamethasone, suggesting the preferential use of prednisone when it is intended to minimize the adverse metabolic effects associated with the use of GCs. / Os glicocorticoides (GCs) sintéticos podem induzir diversos efeitos adversos, quando administrados em doses elevadas e/ou por tempo prolongado, como resistência insulínica periférica, intolerância à glicose, e alterações no metabolismo lipídico, especialmente hipertrigliceridemia. Porém existem poucos estudos sobre o impacto metabólico promovido por tratamentos prolongados com diferentes GCs sintéticos, especialmente com a prednisona, GC de ação intermediária e de primeira escolha em sua classe farmacológica. Diante disso, buscou-se verificar as alterações metabólicas ocasionadas pelo tratamento subcrônico com prednisona em ratos e compará-las aos efeitos presentes e conhecidos em modelo agudo de indução de resistência insulínica pela dexametasona. Para tal, ratos Wistar com noventa dias de vida foram tratados com dexametasona (D5) (1 mg/Kg, i.p.) durante 5 dias consecutivos e, os seus controles (C5) com salina, e ratos Wistar com 60 dias de vida foram tratados com prednisona (80 mg/Kg, v.o.) durante 15 dias (P15) e 30 dias (P30) consecutivos e, os seus respectivos controles (C15 e C30), receberam veículo. Os ratos D5 apresentaram redução do peso corpóreo (12,3%) e menor peso da gordura retroperitoneal (38%), aumento das concentrações séricas de glicose em jejum (12%) e alimentado (30%), insulina (80%) e triglicerídeos (339%) (p<0,05). O conteúdo de gordura total hepático, bem como triglicerídeos foram 29% e 52% maiores nos ratos D5, em relação aos ratos C5 (p<0,05). Os ratos P15 apresentaram um ganho de peso 61% menor, redução da gordura retroperitoneal (29%) e aumento nas concentrações plasmáticas de triglicerídeos (60%), em relação aos ratos C15 (p<0,05). Enquanto os ratos P30 apresentaram um ganho de peso 44% menor, redução da gordura retroperitoneal (25%) e aumento nas concentrações séricas de triglicerídeos (78%) e gordura total hepática (26%), em relação aos ratos C30 (p<0,05). Os testes in vivo revelaram a presença de intolerância à glicose (GTT) nos ratos D5 e P30 e redução da sensibilidade à insulina (ITT, HOMA, TyG) nos animais D5 (p<0,05). O teste ex vivo revelou maior sensibilidade nas ilhotas pancreáticas frente à glicose somente nos ratos D5. Em conclusão, a administração subcrônica de prednisona promoveu alterações metabólicas mais sutis na homeostasia da glicose, quando comparada à administração aguda de dexametasona, sugerindo assim, o uso preferencial da prednisona quando se pretende minimização dos efeitos adversos metabólicos associados ao uso de GCs.
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Métricas entre modelos lineales y su aplicación al tratamiento de datos en medicinaRíos Alcolea, Martín 01 January 1986 (has links)
En esta tesis se desarrolla una metodología estadística que permite obtener clasificaciones de modelos linalizables a través de una distancia basada en el concepto de información de Shamon. Se han obtenido explícitamente expresiones algebraicas de los estimadores que nos sirvieron para comparar dos o mas de dichas curvas estableciendo su relación con los contrastes de hipótesis propias del análisis de la varianza en el caso de que las curvas fueran asociadas a un modelo lineal normal de varianzas iguales. Finalmente, y como aplicación, se hace un análisis y una clasificación de distintos tipos de respuesta al TTOG en una muestra de niños, dando posteriormente un método de diagnostico automatizado que cuantifica sus errores.
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Determinação do ciclo reprodutivo de papagaio-de-peito-roxo Amazona vinacea (kuhl, 1820) (aves: psittacidae) por meio de mensuração de metabólitos hormonais utilizando um método não invasivo.Stein, Gisele Guiomara January 2014 (has links)
Durante as últimas duas décadas, as técnicas de análise de esteroides fecais têm sido utilizadas para pesquisa em endocrinologia reprodutiva em diversas espécies animais silvestres de vida livre, ou cativeiro. O presente estudo propõe a validação da técnica do ensaio imunoenzimático antiprogestinas CL425 e antiandrógenos R156/7 fecais em papagaio-de-peito-roxo (Amazona vinacea). Objetiva-se descrever os perfis endócrinos anuais dos esteroides sexuais urofecais em Amazona vinacea com potencial aplicação para o aprimoramento do manejo reprodutivo da espécie. Foram utilizados 10 casais adultos da espécie Amazona vinacea mantidos em viveiros suspensos, em Lomba Grande, Rio Grande do Sul, Brasil. As excretas foram coletadas duas vezes por semana, entre maio de 2012 e maio de 2013. O monitoramento da atividade gonadal foi feito por mensuração de metabólitos de andrógenos nas excretas dos machos e progestágenos, nas de fêmeas. Foram coletadas amostras frescas de excretas, consistentemente, entre 12h00min e 16h00min e mantidas congeladas até o processamento. O perfil anual de andrógenos nas excretas de machos de A. vinacea apresentou médias mensais variáveis de 25,9 ng/g, em janeiro até 125,7 ng/g, em setembro. O perfil anual de progestinas nas excretas de fêmeas A. vinacea, as médias mensais variaram de 2,76 ng/g, em dezembro até 45,7 ng/g, em setembro. Os perfis reprodutivos apresentaram variação na atividade hormonal, durante a fase reprodutiva. Porém, comparando-se casais reprodutores com não-reprodutores, observa-se que os níveis de progestágenos não diferiram significativamente entre fêmeas que fizeram postura e aquelas que não fizeram. Entretanto, os níveis de andrógenos diferiram significativamente entre reprodutores e não-reprodutores. Diferenças hormonais foram observadas nas diferentes estações anuais, tanto nos machos, quanto nas fêmeas. Dados metereológicos de temperatura e insolação demostraram correlação negativa com os perfís anuais de progestágenos. A utilização da metodologia aqui mencionada demonstrou aplicabilidade, praticidade e segurança como ferramenta para o estudo da fisiologia e do manejo reprodutivos de Amazona vinacea. / During the last two decades, the techniques of analysis of fecal steroids have been applied for studying reproductive profiles in many species of captive wild and free living wild animals. The advantages of this methodology are widely understood. This study aimed to validate the anti- CL425 progestin and anti-R156/7 androgen enzyme immunoassay in fecal samples from parrot-breasted-purple (Amazon vinacea). This communication describes the annual endocrine profiles of urofecal sex steroids in Amazona vinacea with potential application for improving the species reproductive management. In total, 10 adult A. vinacea pairs kept in suspended aviaries in southern Brazil were studied. Excreta samples were collected twice weekly between May 2012 and May 2013. Gonadal activity was monitored by measurement of androgen and progestin metabolites in excreta of birds. Fresh excreta samples were collected always between 12:00 and 16:00 hs, and kept frozen until processing. The samples were dried at 57oC, hormones crushed and extracted using 80% methanol. The hormone dosage was performed at the Laboratory of Endocrinology, NUPECCE (Center for Research and Conservation of Deer, Jaboticabal, SP) using enzyme immunoassay with antibody to androgen and progestin. Feces from 5 A. vinacea pairs were used in two distinct periods for assay validation, within and outside the breeding season. Tests included Parallelism, Dose-Response, and Physiological Validation. It was concluded that the enzyme immunoassay for determining progestin and androgen profiles in urofecal samples from A. vinacea is accurate, precise and reliable. The annual profile of androgen in excreta of A. vinacea resulted the following monthly averages: January 25.9 ± 3.7 ng/g (n = 90); February 28.7 ± 3.2 ng/g (n = 60); March 31 7 ± 17.7 ng/g (n = 80); April 27.9 ± 5.5 ng/g (n = 90); May 43.3 ± 7.9 ng/g (n = 90); June 49.1 ± 15.9 ng/g (n = 80); July 36.5 ± 7.5 ng/g (n = 90); August 86.9 ± 46.2 ng/g (n = 90); September 42 125.7 ± 1 ng/g (n = 80); October 110.3 ± 63.2 ng/g (n = 90); November 74.2 ± 57.7 ng/g (n = 90) and December 43.3 ± 13 4 ng/g (n = 80). The monthly averages in the annual profile of progestin in excreta of A. vinacea were as follows: January 7.2 ± 0.9 ng/g (n = 90); February 9.26 ± 1.3 ng/g (n = 60); March 15 8 ± 2.9 ng/g (n = 80); April 14.15 ± 1.85 ng/g (n = 90); May 16.05 ± 3.16 ng/g (n = 90); June 11.85 ± 2.54 ng/g (n = 80); July 11.89 ± 2.17 ng/g (n = 90); August 13.52 ± 3.48 ng/g (n = 90); September 55 ± 45.7 ng/g (n = 80); October 15.44 ± 24.91 ng/g (n = 90); November 4.27 ± 6.42 ng/g (n = 90) and December 2.76 ± 0.42 ng/g (n = 80). Reproductive profiles showed variation in hormonal activity during the reproductive phase. When comparing breeding to non-breeding pairs, it was observed that the progestin levels did not differ significantly between laying and not-laying birds. However, the androgen levels differed significantly between breeding and non-breeding birds. In addition, hormonal differences were observed in both male and female birds in accordance with different annual seasons. Meteorological temperature and insolation data showed a negative correlation with the annual progestin profiles. Measurement of androgen and progestin metabolites in A. vinacea feces proved to be a practical and safe tool for studying reproductive physiology and management of the species.
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