Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-07Bitstream added on 2015-04-09T12:48:12Z : No. of bitstreams: 1 000811792.pdf: 1023358 bytes, checksum: 49599a5390d29b3a15373b7de0d79c48 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Neste trabalho foram estudados os sistemas enzimáticos hidrolítico e oxidativo do ascomiceto termotolerante Myceliophthora thermophila M.7.7. Seis diferentes secretomas foram avaliados por espectroscopia de massas que identificou o total de 187 proteínas confirmando a presença do clássico sistema enzimático hidrólitico revelando também a produção de enzimas do sistema oxidativo de degradação. As enzimas mais abundantes foram celobiose desidrogenase e glicosídeo hidrolase família 7 secretadas principalmente nos bagaços de cana-de-açúcar in natura e explodido a vapor. A abundante produção de glicosídeo hidrolases foi identificada quando polissacarídeos de hemiceluloses foram a fonte de carbono empregada, mostrando que o produção de enzimas é substrato específica. O isolamento, a caracterização bioquímica e o estudo cinético enzimático de uma β-glicosidase do M. thermophila M.7.7. também foram realizados. A β-glicosidase purificada apresentou excelentes parâmetros para sua aplicabilidade como enzima suplementar a coquetéis enzimáticos ou até mesmo sua clonagem e expressão em organismos deficientes em β-glicosidase. Experimentos de hidrolíse enzimática também foram executados empregando o extrato bruto de M. thermophila, que resultou em uma conversão de 21% em bagaço in natura e 16% em celulose comercial mesmo com baixa carga de proteínas, indicando maior especificidade e sinergia do complexo enzimático à polímeros de celulose com maior índice de cristalinidade e grau de polimerização em sua estrutura / In terms of the here presented PhD research project the hydrolytic and oxidative enzymatic properties from the ascomycota and themotolerant fungae Myceliophthora thermophila M.7.7. were investigated in detail. Six different secretomes were analysed by mass spectroscopy and 187 proteins were identified. Within these proteins beside already known and expected enzymes also several oxidative active enzymes were confirmed. Enzymes belonging to the cellobiose dehydrogenase and glycoside hydrolase family 7 were most abundant, when in natura and steam exploded sugar cane bagasses were used as carbon source. Particular a high abundance of glycoside hydrolases was identified when a mixture of hemicelluloses was applied as sole carbon source. In this case the secretome analysis showed a substrate-specific secretion for this fungae. The isolation, purification and characterization of a β-glycosidase from M. thermophila M.7.7. showed and confirmed excellent enzymatic charateristics and parameters for future potential applications as a supplemental enzyme in enzyme cocktails, or implimanting by molecular biology in organisms deficient in β-glucosidase. Even at low protein concentration the enzymatic hydrolysis, utilizing the crude extract, resulted in a conversion of approx. 21% in natura bagasse and approx. 16% in commercial cellulose, indicating a high specificity and synergy of the enzyme complex to cellulose polymers with a higher degree of polymerization and crystallinity index in its structure

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:13Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-04-16. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:38Z : No. of bitstreams: 1 000835916_20170416.pdf: 69227 bytes, checksum: 87eb14dd41d66da225f5d081d8d7e566 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-04-17T13:37:14Z: 000835916_20170416.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-04-17T13:38:02Z : No. of bitstreams: 1 000835916.pdf: 520048 bytes, checksum: 1a74fa0bb8c7b95416b6bed3ddeb0ca5 (MD5) / O fígado é um órgão importante no metabolismo animal, sendo responsável pelo processamento e distribuição dos nutrientes, por meio da corrente sanguínea, para os outros órgãos e tecidos do organismo. Como o fígado é responsável pela realização de vários processos de síntese e tendo em vista a escassez de informação acerca das funções das fosfatases ácida e alcalina hepáticas, o presente trabalho teve por objetivo analisar as atividades dessas enzimas envolvidas no metabolismo de fósforo de girinos de rã-touro (L. catesbeianus) durante a metamorfose, visando gerar maiores informações sobre esse período da vida do animal e obtenção de imagos sadios. A metamorfose é uma etapa crucial no desenvolvimento dos anfíbios, sendo caracterizada por uma série de eventos que possibilitam aos girinos ocuparem o ambiente terrestre. Durante a metamorfose e fase adulta terrestre, a fosfatase ácida presente no fígado atua como um indicador da atividade lisossomal, o que pode ser observado pelo aumento de sua atividade no fim do clímax metamórfico, sugerindo aumento da morte celular devido ao reaproveitamento dos nutrientes. A fosfatase alcalina hepática, uma enzima de membrana, atua como fosfomonohidrolase e na detoxificação, principalmente ésteres de fosfato gerados durante o metabolismo animal. A diminuição da atividade da fosfatase alcalina quando utilizado um substrato artificial, demonstra a queda na geração de compostos secundários, devido a não ingestão de alimentos nessa fase de vida, enquanto que a utilização de um substrato fisiológico sugere um importante papel da mesma na proteção do organismo animal. / The liver is an important organ in animal metabolism, being responsible for the processing and distribution of nutrients through the blood system to other organs and tissues. Since the liver is responsible for various processes of synthesis and concerning the lack of information about the functions of liver acid and alkaline phosphatases, the aim of the study was to analyze the activities of these enzymes involved in phosphorus metabolism of bullfrog's tadpoles (L. catesbeianus) during metamorphosis, aiming to a better understanding about this period of life of the animal and to produce healthy juveniles. Metamorphosis is a crucial stage in amphibian's development, it is characterized by a series of events that enable tadpoles to occupy the terrestrial environment. During metamorphosis and terrestrial adult stage, the acid phosphatase present in the liver acts as an indicator of lysosomal activity, it can be observed by the increase in its activity at the end of the metamorphic climax, suggesting increased cell death due to recycling of nutrients. The liver alkaline phosphatase, a membrane bound enzyme, acts as a phosphomonohydrolase and in the detoxification of compounds, especially phosphate esters generated in animal metabolism. The decrease in alkaline phosphatase activity when an artificial substrate is used demonstrates a reduction in the generation of secondary metabolites because there is no food intake at this stage of life, on the other hand the use of a physiological substrate suggests an important role in protecting the organism.

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-02-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:24:13Z : No. of bitstreams: 1 000827083.pdf: 2845300 bytes, checksum: a10a6bf4878453b759ee7bad0b028e37 (MD5) / A investigação biotecnológica acompanhada da aplicação das enzimas, combinada com o uso da engenharia genética tem sido realizada em micro-organismos para a produção de enzimas para fins industriais. Entre estas enzimas, as fitases microbianas, que catalisam a hidrólise do fitato (mio-inositol hexaquisfosfato) a mio-inositol e fosfato inorgânico, têm sido amplamente utilizadas na alimentação animal. Neste contexto, o fungo R. microsporus var. microsporus foi selecionado como bom produtor de fitases, com maiores níveis de produção encontrados na Fermentação por Biofilmes (FB) (261,30 U/mg), utilizando bagaço de cana de açúcar como fonte de carbono adicional. A morfologia do biofilme sobre suporte inerte foi analisada por MEV observando-se múltiplas hifas interligadas formando um conjunto ordenado na presença de inúmeros canais que permitem a troca eficiente de nutrientes e oxigenação. A fitase extracelular obtida foi purificada 4,18 vezes com recuperação de 4,78%, obtendo-se uma única banda de 34 kDa em SDS PAGE 12%. A temperatura ótima de atividade para a enzima purificada foi de 55ºC e o pH ótimo 4,5, sendo estável entre 30 °C e 40 °C por 120 min. Apresentou baixa estabilidade ao pH com atividade residual acima de 50% entre pH 3,0 e 5,0 por 60 min. A fitase foi ativada por íons Ca2+ e inibida por K+. A enzima foi capaz de hidrolisar fitato de sódio (Km de 0,72 mM e Vmax de 94,55 U/mg). O extrato bruto contendo fitase foi seco em Spray Dryer com diferentes adjuvantes (farelo de milho, farelo de soja, fubá, amido e maltodextrina). O farelo de soja possibilitou a maior recuperação da atividade fitásica (60%), assim como o fubá (59,5%). Considerando o uso destes dois adjuvantes, o pH ótimo de atividade para a fitase contida no extrato seco foi 4,5 e 8,5, respectivamente e a temperatura ótima de atividade de 45-50 °C. Quando utilizado fubá, a estabilidade foi mantida... / Biotechnological research, and the application of enzymes in combination with the use of genetic engineering has been carried out in microorganisms for the production of enzymes for industrial purposes. Among these enzymes, microbial phytases, which catalyze the hydrolysis of phytate (myo-inositol hexakisphosphate) to myo-inositol and inorganic phosphate, have been widely used in animal feed. In this context, the fungus R. microsporus var. microsporus was selected as a good producer of the phytase with higher production levels when grown on Biofilm Fermentation (FB) (261,30 U/mg), using sugarcane bagasse as carbon additional source. The morphology of biofilms on inert support was examined by SEM observing interconnected hyphae forming an ordered array in the presence of many channels which enables efficient exchange of nutrients and oxygen. The extracellular phytase was purified 4.18 fold with 4.78% recovery. A single protein band was obtained in 6% PAGE and confirmed by 12% SDS-PAGE as a single protein band with 34 kDa. The optimum temperature for activity was 55 °C and the optimum pH 4.5. It was completely stable at temperatures between 30 °C and 40 °C for 120 min had low pH with a residual activity of over 50% between pH 3.0 and 5.0 for 60 min. The enzyme was activated by Ca2+ and inhibited by Zn2+. The enzyme was able to hydrolyze sodium phytate with a Km=0.72 mM, Vmax= 94.55 U/mg of protein. The crude extract containing phytase was dried using Spray Dryer with different adjuvants. Soybean meal and corn meal allowed the best recovery of phytase activity 60% and 59.5%, respectively. Considering the use of these two adjuvants, the optimum pH of activity for phytase in the dry extract was 4.5 and 8.5, respectively, and the optimum of temperature of 45-50 °C. When used corn meal, the stability was maintained above 90% at pH 2.5-10.0 for 60 min. The dry phytase (corn meal) was applied to the feed...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, 2014. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-07-07T11:30:46Z No. of bitstreams: 1 2014_MonaLisaSousadeAssisBittencourt.pdf: 1148773 bytes, checksum: f37fdfb05c37d708042ee30bd9b4f8ee (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2017-03-27T16:35:53Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_MonaLisaSousadeAssisBittencourt.pdf: 1148773 bytes, checksum: f37fdfb05c37d708042ee30bd9b4f8ee (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-27T16:35:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_MonaLisaSousadeAssisBittencourt.pdf: 1148773 bytes, checksum: f37fdfb05c37d708042ee30bd9b4f8ee (MD5) / As proteases se referem a um grupo de enzimas cuja função catalítica é hidrolisar proteínas. Enzimas proteolíticas encontram ampla aplicação em diversas indústrias e preparações farmacêuticas. Os fungos filamentosos são usados em muitos processos industriais para a produção de enzimas e metabólitos. Alguns desses fungos são produtores de uma série de enzimas, como amilases, pectinases e proteases. O presente trabalho teve como objetivo principal caracterizar proteases expressas por fungos filamentosos isolados de diferentes amostras do Cerrado do Centro-Oeste brasileiro, frente à produção de proteases de interesse industrial e farmacêutico em diversas condições de cultivo. Inicialmente, foi realizada uma triagem para avaliar a capacidade de 17 fungos quanto à produção de protease em meio de cultura contendo Ágar-leite. Oito espécies formaram halo no cultivo em placas de Petri contendo 10% de leite desnatado em Ágar indicando serem produtoras de proteases. Em seguida, quando cultivadas em estufa, no meio sabouraud, peptona e leite desnatado, seis espécies de fungos apresentaram altas atividades de protease sendo então cultivadas sob condição de agitação. Uma melhoria nas atividades de protease para as espécies Aspergillus foetidus, Penicillium variotti, Penicillium citrinum e Penicillium fellutanum foi obtida quando utilizado o cultivo em shaker. Um importante aumento na atividade proteolítica foi obtido para a espécie P.restrictum e P. fellutanum quando avaliado meio de cultivo contendo resíduo agroindustrial. No meio contendo farelo de trigo como fonte de carbono, a maior atividade proteolítica foi identificada quando realizado cultivo por P. restrictum (81,1 UI/mL), a as proteases presentes no meio possuem temperatura ótima igual a 45 °C e pH ótimo em uma faixa de 5,0 a 9,0. Sendo termoestáveis por 2 horas em pH e temperatura ótima. Desta forma, estas enzimas podem ser consideradas promissoras para aplicação industrial. / Proteases are a group of enzymes whose catalytic function is the hydrolysis of proteins. Proteolytic enzymes have wide application in various industries and pharmaceutical preparations. Due to technical and economic advantage, microorganisms are the preferred source of industrial application of protease enzymes, although it can be obtained from animals and plants. Filamentous fungi have beeb used in many industrial processes for the production of enzymes and metabolites. Some of these fungi are producers of several enzymes as amylases, proteases and pectinases. This work aimed to characterize proteases expressed by filamentous fungi isolated from different samples of the Cerrado of Central Brazil, focusing the production of these enzymes of industrial and/or pharmaceutical interest in different growing conditions. Initially, a screening was performed to assess the ability of 17 fungi initially isolated for production of proteases in culture media containing 10% skim milk in agar. Eight species formed a clear zone surrounding colonies, indicating production of protease. These species were then cultivated in Sabouraud broth, peptone and skim milk. Six species showed high protease activity and were then incubated under agitation. Protease activity for the species Aspergillus foetidus, Penicillium variotti, Penicillium citrinum and Penicillium fellutanum improved when used in the cultivation in shaker.A significant increase in proteolytic activity was obtained for the species Penicillium restrictum and Penicillium fellutanum when evaluated in culture media containing agro industrial residues. In a media containing wheat bran as carbon source, the major proteolytic activity has been identified as performed by growing Penicillium restrictum (81.1 IU/mL). Proteases present in the medium have an excellent temperature of 45 °C and optimum pH in a range 5.0 to 9.0. We evaluated the physicochemical characterization and the enzymatic profile of the species Penicilliumrestrictum and Penicillium fellutanum for production of protease in different culture media. Thus, these enzymes can be considered promising for industrial application.

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Orientador: João Martins Pizauro Junior / Banca: Saulo Santesso Garrido / Banca: Claudinei da Cruz / Resumo: O fígado é um órgão importante no metabolismo animal, sendo responsável pelo processamento e distribuição dos nutrientes, por meio da corrente sanguínea, para os outros órgãos e tecidos do organismo. Como o fígado é responsável pela realização de vários processos de síntese e tendo em vista a escassez de informação acerca das funções das fosfatases ácida e alcalina hepáticas, o presente trabalho teve por objetivo analisar as atividades dessas enzimas envolvidas no metabolismo de fósforo de girinos de rã-touro (L. catesbeianus) durante a metamorfose, visando gerar maiores informações sobre esse período da vida do animal e obtenção de imagos sadios. A metamorfose é uma etapa crucial no desenvolvimento dos anfíbios, sendo caracterizada por uma série de eventos que possibilitam aos girinos ocuparem o ambiente terrestre. Durante a metamorfose e fase adulta terrestre, a fosfatase ácida presente no fígado atua como um indicador da atividade lisossomal, o que pode ser observado pelo aumento de sua atividade no fim do clímax metamórfico, sugerindo aumento da morte celular devido ao reaproveitamento dos nutrientes. A fosfatase alcalina hepática, uma enzima de membrana, atua como fosfomonohidrolase e na detoxificação, principalmente ésteres de fosfato gerados durante o metabolismo animal. A diminuição da atividade da fosfatase alcalina quando utilizado um substrato artificial, demonstra a queda na geração de compostos secundários, devido a não ingestão de alimentos nessa fase de vida, enquanto que a utilização de um substrato fisiológico sugere um importante papel da mesma na proteção do organismo animal. / Abstract: The liver is an important organ in animal metabolism, being responsible for the processing and distribution of nutrients through the blood system to other organs and tissues. Since the liver is responsible for various processes of synthesis and concerning the lack of information about the functions of liver acid and alkaline phosphatases, the aim of the study was to analyze the activities of these enzymes involved in phosphorus metabolism of bullfrog's tadpoles (L. catesbeianus) during metamorphosis, aiming to a better understanding about this period of life of the animal and to produce healthy juveniles. Metamorphosis is a crucial stage in amphibian's development, it is characterized by a series of events that enable tadpoles to occupy the terrestrial environment. During metamorphosis and terrestrial adult stage, the acid phosphatase present in the liver acts as an indicator of lysosomal activity, it can be observed by the increase in its activity at the end of the metamorphic climax, suggesting increased cell death due to recycling of nutrients. The liver alkaline phosphatase, a membrane bound enzyme, acts as a phosphomonohydrolase and in the detoxification of compounds, especially phosphate esters generated in animal metabolism. The decrease in alkaline phosphatase activity when an artificial substrate is used demonstrates a reduction in the generation of secondary metabolites because there is no food intake at this stage of life, on the other hand the use of a physiological substrate suggests an important role in protecting the organism. / Mestre

Orientador: Heloiza Ferreira Alves-Prado / Banca: Fabiana da Fonseca Zanoelo / Banca: Ana Maria Cassiolato / Banca: Paulo César Ceresini / Banca: Gustavo Orlando Bonilla Rodriguez / Resumo: O presente trabalho configura-se no estudo da produção de enzimas degradadoras de parede celular de plantas (EDPCP), produzida por Rhizoctonia solani AG-1 IA obtido de culturas de arroz, braquiária e soja. As enzimas inicialmente estudadas foram celulases, β-glucosidase, xilanase, pectinases, amilase, lípases e proteases excretadas extracelularmente para o meio de cultivo. Foram avaliados 87 isolados de Rhizoctonia solani AG-1 IA, e adotado o cultivo em estado sólido utilizando farelo de trigo como fonte de carbono inicial para indução da produção extracelular das enzimas e avaliar o potencial dos isolados. O estudo do efeito da fonte de carbono foi realizado com cinco isolados de cada tipo de cultura, os quais foram cultivados em farelo de trigo, braquiária triturada, palha de soja, palha de milho, sabugo de milho e palha de arroz. Os melhores resultados para atividade xilanase foi do isolado PA_B1F6 obtido de culturas de braquiária quando cultivado em farelo de trigo (15,82 U mL-1 ), para CMCase e Avicelase os melhores resultados foram obtidos com os isolados MA_217 e TO_064 obtidos de culturas de soja quando cultivado em palha de milho (3,24 U mL-1 ) e palha de soja (2,91 U mL-1 ), respectivamente, e para β-glucosidase os melhores resultados foram obtidos com o isolado TO_022 (2,75 U mL-1 ) obtido de cultura de soja cultivado em braquiária. A atividade de amilase foi superior no cultivo em farelo de trigo para o isolado ROB4D7 (142,88 U mL-1 ) obtido da cultura de braquiária e a pectinase do isolado PA_B1F6 (17,69 U mL-1 ) obtido da cultura de braquiária quando cultivado em substrato braquiária. O isolado MT_S085 obtido da cultura de soja apresentou melhor atividade de protease (1154,52 UAP mL-1 ) no cultivo com farelo de trigo e melhor atividade lípase (30,57 U mL-1 ) quando cultivado em substrato de braquiária. Os cinco isolados de cada tipo de cultura foram... / Abstract: The Present work covers the study of the production of degradative enzymes from plant cell wall (EDPCP) produced by Rhizoctonia solani AG-1 IA isolated from rice, signalgrass and soybean. The enzymes studied initially were cellulases, β-glucosidase, xylanase, pectinase, amylase, lipase and proteases extracellularly secreted into the culture medium. It was evaluated 87 isolates of Rhizoctonia solani AG-1 IA and adopted cultivation in the solid state using wheat bran as the initial carbon source for inducing the production of extracellular enzymes and assess the potential isolates. The study of the effect of carbon source was performed with five isolates of each type of culture which were cultured on wheat bran, comminuted signalgrass, soybean straw, corn stover, corn cobs and rice straw. The best result results for xylanase activity was the isolated PA_B1F6 from cultures of signalgrass grown in wheat bran (15.82 U mL- 1 ) to Avicelase and CMCase and the best results were obtained for the isolated of soybean MA_217 and TO_064 when grown corn straw (3.24 U ml-1 ) and soybean straw (2.91 U ml-1 ), respectively. For β-glucosidase the best results were obtained for the isolated of soybean TO_022 (2.75 U ml-1 ) grown in signalgrass. The amylase activity was higher in culture with wheat bran for isolated ROB4D7 from the signalgrass culture (142.88 U mL-1 ). The best pectinase activity was by the PA_B1F6 isolated signalgrass culture (17.69 U mL-1 ) when grown in signalgrass as substrate. The MT_S085 isolated from soybean showed better protease activity (UAP 1154.52 ml-1 ) in culture with wheat bran. For this same isolated, but when grown in signalgrass substrate was observed the best lipase activity (30.57 U mL-1 ). The five isolates of each type were grown in culture substrates that indicated better xylanase activity to evaluate the activity profile over time. Isolates obtained from ... / Doutor

Orientador: Luis Henrique Souza Guimarães / Banca: Daniela Alonso Bocchini Martins / Banca: José Roberto Ernandes / Banca: João Cláudio Thoméo / Banca: Patricia Gomes Cardoso / Resumo: A investigação biotecnológica acompanhada da aplicação das enzimas, combinada com o uso da engenharia genética tem sido realizada em micro-organismos para a produção de enzimas para fins industriais. Entre estas enzimas, as fitases microbianas, que catalisam a hidrólise do fitato (mio-inositol hexaquisfosfato) a mio-inositol e fosfato inorgânico, têm sido amplamente utilizadas na alimentação animal. Neste contexto, o fungo R. microsporus var. microsporus foi selecionado como bom produtor de fitases, com maiores níveis de produção encontrados na Fermentação por Biofilmes (FB) (261,30 U/mg), utilizando bagaço de cana de açúcar como fonte de carbono adicional. A morfologia do biofilme sobre suporte inerte foi analisada por MEV observando-se múltiplas hifas interligadas formando um conjunto ordenado na presença de inúmeros canais que permitem a troca eficiente de nutrientes e oxigenação. A fitase extracelular obtida foi purificada 4,18 vezes com recuperação de 4,78%, obtendo-se uma única banda de 34 kDa em SDS PAGE 12%. A temperatura ótima de atividade para a enzima purificada foi de 55ºC e o pH ótimo 4,5, sendo estável entre 30 °C e 40 °C por 120 min. Apresentou baixa estabilidade ao pH com atividade residual acima de 50% entre pH 3,0 e 5,0 por 60 min. A fitase foi ativada por íons Ca2+ e inibida por K+. A enzima foi capaz de hidrolisar fitato de sódio (Km de 0,72 mM e Vmax de 94,55 U/mg). O extrato bruto contendo fitase foi seco em Spray Dryer com diferentes adjuvantes (farelo de milho, farelo de soja, fubá, amido e maltodextrina). O farelo de soja possibilitou a maior recuperação da atividade fitásica (60%), assim como o fubá (59,5%). Considerando o uso destes dois adjuvantes, o pH ótimo de atividade para a fitase contida no extrato seco foi 4,5 e 8,5, respectivamente e a temperatura ótima de atividade de 45-50 °C. Quando utilizado fubá, a estabilidade foi mantida... / Abstract: Biotechnological research, and the application of enzymes in combination with the use of genetic engineering has been carried out in microorganisms for the production of enzymes for industrial purposes. Among these enzymes, microbial phytases, which catalyze the hydrolysis of phytate (myo-inositol hexakisphosphate) to myo-inositol and inorganic phosphate, have been widely used in animal feed. In this context, the fungus R. microsporus var. microsporus was selected as a good producer of the phytase with higher production levels when grown on Biofilm Fermentation (FB) (261,30 U/mg), using sugarcane bagasse as carbon additional source. The morphology of biofilms on inert support was examined by SEM observing interconnected hyphae forming an ordered array in the presence of many channels which enables efficient exchange of nutrients and oxygen. The extracellular phytase was purified 4.18 fold with 4.78% recovery. A single protein band was obtained in 6% PAGE and confirmed by 12% SDS-PAGE as a single protein band with 34 kDa. The optimum temperature for activity was 55 °C and the optimum pH 4.5. It was completely stable at temperatures between 30 °C and 40 °C for 120 min had low pH with a residual activity of over 50% between pH 3.0 and 5.0 for 60 min. The enzyme was activated by Ca2+ and inhibited by Zn2+. The enzyme was able to hydrolyze sodium phytate with a Km=0.72 mM, Vmax= 94.55 U/mg of protein. The crude extract containing phytase was dried using Spray Dryer with different adjuvants. Soybean meal and corn meal allowed the best recovery of phytase activity 60% and 59.5%, respectively. Considering the use of these two adjuvants, the optimum pH of activity for phytase in the dry extract was 4.5 and 8.5, respectively, and the optimum of temperature of 45-50 °C. When used corn meal, the stability was maintained above 90% at pH 2.5-10.0 for 60 min. The dry phytase (corn meal) was applied to the feed... / Doutor

Orientadores: Elias Basic Tambourgi, Priscila Gava Mazzola / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-21T20:42:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bresolin_IaraRochaAntunesPereira_D.pdf: 1407939 bytes, checksum: 1259333d5753554819357dfada6831b4 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A bromelina é uma enzima proteolítica encontrada em tecidos vegetais como casca, talo, fruta e folhas de espécies da família Bromeliaceae, incluindo o abacaxi (Ananas comosus). É uma enzima conhecida por seus efeitos terapêuticos, sendo usadas em tratamentos de vários problemas de saúde, como desordens digestivas, feridas, queimaduras e inflamações. Este trabalho teve como objetivo a purificação da enzima bromelina de casca de abacaxi e sua posterior aplicação em bases dermatológicas. Foi demonstrado que é possível purificar bromelina extraída de casca de abacaxi, um resíduo da indústria alimentícia, através de um processo de recuperação e purificação, incluindo precipitação por sulfato de amônio (40- 80%), seguido de dessalinização e liofilização, com 75% de recuperação da atividade. Cromatografia de troca iônica com dietilaminoetil-agarose (DEAE-Sepharose) separou polissacarídeos da enzima e esta foi recuperada na etapa de eluição, mantendo sua atividade enzimática. A enzima foi incorporada em creme e loção Lanette, gel de Carbopol e creme e loção da Chemyunion na concentração de 5 mg de enzima por mL de base dermatológica. Essas bases foram submetidas ao teste de centrifugação e teste de estabilidade acelerada durante 90 dias a 25ºC (com e sem a incidência de luz solar), 37ºC e 4°C, a fim de avaliar a estabilidade da bromelina nas bases dermatológicas. As formulações permaneceram estáveis quanto a suas características organolépticas (aspecto, cor, odor, sensibilidade ao tato) apenas quando mantidas a 4°C, com atividade remanescente de 84,9%, 73,8%, 95,5%, 77,7% e 72,3% após 90 dias de teste em creme e loção Lanette, gel de Carbopol e creme e loção da Chemyunion, respectivamente. Baseando-se nestes resultados, foi possível purificar bromelina de casca de abacaxi e incorporá-la em bases dermatológicas mantendo se sua atividade mais estável quando estas bases foram mantidas em geladeira a 4ºC / Abstract: Bromelain is a proteolytic enzyme found in vegetable tissues like peel, stem, fruit and leaves of the Bromeliaceae family including pineapple (Ananas comosus). Bromelain is known for its therapeutic effects, being useful in the treatment of several health problems such as digestive disorders, burns and inflammation. This work aimed the purification of the enzyme bromelain from pineapple peel for potential therapeutic application in dermatological bases. It was shown that it is possible to purify bromelain extracted from pineapple peel, a waste in food industry, in a downstream processing, including ammonium sulfate precipitation (40-80%), followed by desalting and freeze-drying with a 75% activity recovery. Ion exchange chromatography on diethylaminoethyl-agarose (DEAE-Sepharose) was able to separate polysaccharides from the enzyme, which was recovered in the elution step, maintaining its enzymatic activity. The enzyme was then incorporated in Lanette cream and lotion, Carbopol gel and Chemyunion cream and lotion at a concentration of 5 mg enzyme per mL of dermatological bases. These bases were subjected to centrifugation test and accelerated stability test during 90 days at 25°C (with and without sunlight), 37°C and 4°C, in order to evaluate bromelain stability in a dermatologic formulation. The formulations were stable as its organoleptic characteristics (appearance, color, smell and sensitivity to touch) only when kept at 4ºC with activity remaining 84.9%, 73.8%, 95.5%, 77.7 % and 72.3% after 90 days of testing in Lanette cream and lotion, Carbopol gel and Chemyunion cream and lotion, respectively. Based on the results, it was possible to purify bromelain from pineapple peel and to incorporate it in dermatological bases maintaining the activity stabler when these bases were kept in refrigerator at 4ºC / Doutorado / Sistemas de Processos Quimicos e Informatica / Doutora em Engenharia Quimica

El virus Phlebotomus fever es un arbovirus cuya transmisión al hombre ocurre por la picadura de moscas hematófagas de vuelo limitado, pertenecientes a los géneros Phlebotomus, Sergentomyia y Lutzomyia. La infección en humanos ocurre principalmente en personas que trabajan o viven en la selva. En el presente trabajo se estandarizó una prueba inmunoenzimática indirecta (ELISA) para detectar anticuerpos IgG contra el virus en sueros humanos. También se aplicó esta prueba en la determinación de la seroprevalencia de anticuerpos contra dicho virus en personas procedentes de Iquitos. La confirmación de los casos positivos se realizó mediante la Prueba de Neutralización por Reducción de Placa (PRNT). El ELISA se realizó en cuatro pasos: fijación del antígeno, reacción con el suero, adición del conjugado y reacción con el sustrato. En la producción del antígeno se utilizó la línea celular Vero E-6, siendo la dilución de trabajo 1:1500. El conjugado utilizado es un Anti IgG humano de cabra purificado y marcado con peroxidasa, siendo su dilución de trabajo 1:8 000. Se analizó con la prueba de ELISA 400 sueros procedentes de Iquitos, encontrándose una seroprevalencia de 16.25%. Al confirmar los resultados con la prueba de PRNT, el ELISA obtuvo una especificidad de 83.02% y una sensibilidad de 98.24%. ELISA desarrollado para el virus Phlebotomus fever es aplicable para realizar estudios de prevalencia. / -- The Phlebotomus fever virus is an arbovirus transmitted to humans by the bits of hematofagous flies with limited flight range, which belong to the genus Phlebotomus, Sergentomyia and Lutzomyia. The human infection mainly occurs among people who work and live in the jungle. An inmunoenzimatic indirect assay (ELISA) was standardized in this thesis to detect antibodies IgG against the virus in human serum. This test was applied to determine the antibody seroprevalence against this virus in people coming from Iquitos. The positive case confirmation was performed using the Plaque Reduction for Neutralization Test (PRNT). The ELISA test was performed in four stages: the antigen fixation, reaction to the serum, addition to the conjugate and reaction to the substrate. During the antigen production, the cell line Vero E-6 was used, obtaining a work dilution of 1:1500. The conjugated used is a purified antibody peroxidase labeled goat antihuman IgG, obtaining a work dilution of 1:8000. Using the ELISA test, 400 sera from Iquitos were tested, resulting with a seroprevalence of 16.25%. When confirming the results with the PRNT trial, the ELISA test showed a specificity of 83.02% and a sensitivity of 98.24%. I concluded that the ELISA test developed for the Phlebotomus fever virus is applicable to perform prevalence studies.