Entre as biotécnicas da reprodução, a inseminação artificial (IA) é a que proporciona maior amplitude de resultados nos programas de melhoramento genético animal. A adequada seleção dos atributos produtivos e reprodutivos de fêmeas e principalmente dos machos é a base essencial para a maximização do potencial dessa técnica. O sêmen para IA pode ser fresco, fresco diluído, refrigerado e congelado. Os diluidores têm papel fundamental na expansão do volume seminal, permitindo seu fracionamento na preservação do sêmen no processo de refrigeração, eles devem ser atóxicos, ter pH e pressão osmótica compatíveis com a sobrevivência espermática, de baixo custo e fácil preparo. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a conservação de sêmen ovino resfriado com diluente de Kenney (K) ou diluente de Kenney mais gema de ovo (KG) por até 48 horas. Foram utilizados quatro carneiros, sendo feitas 40 colheitas. Logo após o sêmen era dividido em duas alíquotas uma com o diluente de K e outra alíquota com diluente de KG. As amostras foram resfriadas à 10ºC. As análises subjetivas usuais foram feitas nos tempos 0, 24 e 48 horas. Estas análises incluíram turbilhonamento, motilidade e vigor. Foram feitas também análises de testes funcionais como a avaliação da integridade das membranas plasmática e acrossomal através das colorações de eosina-nigrosina e técnica da coloração Fast Green / Rosa Bengala (POPE, 1991) respectivamente, avaliação da atividade citoquímica mitocondrial através da coloração de diaminobenzidina (DAB) e avaliação da susceptibilidade do espermatozóide ao estresse oxidativo através da avaliação dos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico após a incubação com sistema gerador constituído de sulfato de ferro e ascorbato. Neste trabalho o tempo afetou significativamente a motilidade e o vigor espermático, caindo de 79,16±1,41 para 40,25±2,55 após 48hs e de 3,92±0,06, para 2,57±0,10 após 48hs respectivamente. O tempo influenciou também a integridade das membranas plasmática e acrossomal, fazendo com que houvesse uma queda gradativa nas integridades (0hs=95,75±0,36, 24hs=90,69±0,99, 48hs=86,11±1,45) e (0hs=90,34±0,80, 24hs=84,33±1,30, 48hs=76.67±1,69) respectivamente. Foi possível observar também que ao longo do tempo houve uma diminuição da atividade mitocondrial e um aumento nas espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), que diferiu do tempo 0hs para o tempo 48hs (807,42±39.22 e 937,76 ± 41,87). Verificou-se ainda que o meio K apresentou maiores valores de vigor do que o meio KG (p=0,0144), e que o meio K foi capaz de preservar melhor a atividade mitocondrial P=0,0005. A concentração de TBARS no diluente K correlacionou-se negativamente com as variáveis motilidade, vigor, integridade de membrana plasmática e acrossomal. No diluente KG as correlações do TBARS e DAB III foram positiva (r=0,35), demonstrando que quanto maior a quantidade de células com baixa atividade mitocondrial, maior a concentração de TBARS. Foi também encontrada uma correlação negativa entre a variável integridade de acrossomo (ACRO) e TBARS (r=-0,40; P=0,0001), mostrando que quanto menor a porcentagem de células com acrossomo integro, maior a concentração de substancias reativas ao acido tiobarbitúrico. Concluindo que o diluente K foi eficaz em preservar as características seminais de ovino por até 48 horas e que a adição da gema de ovo ao diluente de Kenney não foi capaz de melhorar estas características. / Among the reproductive biotechniques routinely used in animal production, the artificial insemination (AI) is known to provide a greater gain in genetic improvement programs. The adequate selection of female and especially male productive and reproductive traits is the keystone to maximize the potential of this technique. Semen used for AI can be used fresh diluted or not, chilled and frozen. An essential role is played by semen extenders on volume expansion, allowing not only the fractioning in multiple insemination doses, but also the maintenance of sperm fertilizing potential. Therefore, for semen fractioning, chilling or cryopreservation, extenders are required to be atoxic, must maintain pH and osmolarity compatible to the sperm survival, and should be preferably inexpensive and easy to prepare. Therefore, the objective of the present study was to evaluate chilled ram semen using the Kenney extender (K) of the Kenney extender with egg yolk (KG) for 48 h. Forty ejaculates of four rams were (n=40) were used. Samples were equally divided into two aliquots and extended in K extender and KG extender. Samples were chilled at 10ºC and evaluated immediately after chilling (0h), 24 and 48 h later. These analyses included gross motility (swirl pattern), individual motility and vigor. Functional test analyses such as evaluation of plasma membrane integrity using the eosin-nigrosin staining technique, acrosome integrity using the fast green / bengal rose staining method (POPE, 1991), mitochondrial cytochemical activity evaluation utilizing diaminobenzidine (DAB) staining and assessment of sperm susceptibility to the oxidative stress based the levels of thiobarbituric acid reactive substances after the incubation with ferrous sulphate and ascorbate (TBARS) were performed. In this study, a significant influence of chilling period was found for spermatic motility and vigor dropping from 79.16±1.41 to 40.25±2.55 after 48 hours and from 3.92±0.06 to 2.57±0.10 after 48 hours, respectively. Time also negatively influenced the integrity of plasma and acrosomal membrane (0hr=95.75±0.36, 24hrs=90.69±0.99, 48hrs=86.11±1.45; and 0hr=90.34±0.80, 24hrs=84.33±1.30, 48hrs=76.67±1.69, respectively). Also, during the course of time there was a decrease in mitochondrial activity and an increase in TBARS, with an increase from moment 0 to 48 hrs (807.42 ± 39.22 and 937.76 ± 41.87). It was also found that the medium K had greater values of vigor than the medium KG (p=0.0144), and that the medium K was capable of better preserve mitochondrial activity (P=0.0005). A negative correlation was found between the TBARS concentration with motility and vigor and plasma and acrosomal membrane integrity when samples were stored with the extender K. In the KG extender, the TBARS and DAB III correlations were positive (r=0, 35) indicating that showing that the greater the number of cells with low mitochondrial activity, the higher the TBARS concentration. Also, a negative correlation between the acrosomal integrity variable (ACRO) and TBARS (r=-0, 40; P=0,0001) was found, which demonstrates that the lower the percentage of cells with intact acrosomal, the higher the susceptibility to the oxidative stress. Therefore, results indicated that the K extender was effective in preserve the seminal characteristics of ovine for 48 hours and the addition of egg yolk to kenney extender was not capable of improving such characteristics.

A grande demanda por proteína animal e a importância que a criação bovina exerce sobre a economia nacional, vêm exigindo eficientes sistemas de produção. A preservação e disseminação da genética do rebanho bovino dependem de biotecnologias como a criopreservação espermática, inseminação artificial e fertilização in vitro. No entanto, atualmente muito tem sido discutido sobre o uso da gema de ovo nos diluidores seminais. Pois apresentam variabilidade em sua composição e risco de contaminação microbiológica. Em contrapartida, apesar dos diluidores sintetizados com lecitina de soja não fornecerem esses riscos, seus resultados não são muito satisfatórios na criopreservação espermática bovina. Com base na hipótese de que a suplementação do diluidor seminal à base de lecitina de soja com antioxidantes, preserve as características das células espermáticas de maneira tão eficiente quanto à gema de ovo, o objetivo do presente experimento foi comparar o efeito do diluidor à base de gema de ovo com o diluidor à base de lecitina de soja (com e sem antioxidantes), sobre a manutenção da funcionalidade e fertilidade de amostras espermáticas bovinas criopreservadas. Para tal, foram utilizadas amostras seminais de 20 touros Brangus, cujas colheitas foram realizadas pelo método de eletroejaculação e as amostras foram diluídas em 4 grupos de diluidores: LElecitina de soja (sem a adição de antioxidantes); LAlecitina de soja suplementada com ácido ascórbico (AA, 4,5mM); LS lecitina de soja suplementada com superóxido dismutase (SOD, 60UI/mL) e GOgema de ovo (sem adição de antioxidantes). O sêmen foi então, criopreservado de maneira automatizada. As amostras foram descongeladas e analisadas quanto aos testes laboratoriais de motilidade computadorizada do espermatozóide (CASA); integridade de membrana plasmática (eosina/nigrosina); integridade de membrana acrossomal (fast Green/ rosa bengala); atividade citoquímica mitocondrial (DAB); susceptibilidade do DNA à desnaturação (SCSA); índice de estresse oxidativo induzido (TBARS). Além disso, foram realizados testes para verificar o potencial de fertilidade das amostras espermáticas criopreservadas. A fertilidade in vivo foi realizada pela técnica de inseminação artificial em tempo fixo (IATF), utilizando 450 fêmeas bovinas, seguido de exame ultrassonográfico para avaliação de prenhez. Teste de fertilidade in vitro, foi realizado pela técnica de produção in vitro de embriões (PIV) com o uso de ovários de frigoríficos, a classificação do desenvolvimento embrionário e a avaliação da motilidade espermática foram promovidas no decorrer do processo. Os resultados demonstraram que o diluidor LE apresentou efeito na proteção espermática de maneira semelhante ao diluidor GO. No entanto a suplementação desse primeiro com antioxidantes é uma alternativa para melhorar ainda mais esse processo, já que a taxa de prenhez obtida nos grupos LA e LS é satisfatória em um programa de IATF. Ainda o grupo LS foi o que apresentou melhores resultados no processo de PIV. Concluindo que o diluidor à base de lecitina de soja suplementado com o antioxidante superóxido dismutase seria uma opção para a substituição definitiva dos diluidores sintetizados com gema de ovo. / Due to the great demand for animal protein and the importance that bovine breeding exert on national economy, efficient production systems have been required. Cattle genetics preservation and dissemination depend on reproductive biotechnologies such as sperm cryopreservation, artificial insemination and in vitro fertilization. However, the use of egg yolk-based extender is under discussion nowadays, once there is great variability in its composition and risks of bacteriological contamination. On the other hand, despite soybean lecithin-based extenders do not present these risks, satisfactory results, after bovine sperm cryopreservation, have not been reached yet. Based on the hypothesis that soybean lecithinbased extender supplemented with antioxidants, preserve the sperm cell characteristics so efficient as egg yolk does, the aim of the present experiment was to compare the effects of egg yolk-based extender and soybean lecithin-based extender (with and without antioxidants), on functionality and fertility maintenance of bovine cryopreserved sperm samples. For this, seminal samples from 20 Brangus bulls were used, collects were realized by eletroejaculation method and samples were diluted in 4 extenders group: LE-soybean lecithin-based extender (without antioxidant supplementation); LA- soybean lecithin supplemented with ascorbic acid (AA, 4,5mM); LS- soybean lecithin supplemented with superoxide dismutase (SOD, 60UI/mL) and GO-egg yolk-based extender (without antioxidant supplementation). Then, semen was cryopreserved by automatic method. Samples were thawed and analyzed by laboratorial tests such as computer assisted semen analysis (CASA); plasma membrane integrity (eosin/nigrosin); acrosome membrane integrity (fast green/ rose bengal); mitochondrial cytochemical activity (DAB); susceptibility of chromatin denaturation (SCSA); induced oxidative stress index (TBARS). Furthermore, tests for fertility potential of cryopreserved semen samples were performed. In vivo fertility was accessed by timed artificial insemination (TAI), 450 bovine females were inseminated, and ultrasonographical exam was realized for pregnancy detection. In vitro fertility test was accessed by embryo in vitro production (IVP), ovaries from slaughterhouses were used, embryo development classification and sperm motility were promoted during the process. Results indicate that sperm protection is similar between LE and GO extenders. However the antioxidant supplementation of soybean lecithin-based extender is a great alternative to improve the process of sperm protection, since pregnancy rate of LA and LS groups was satisfactory for a TAI program. Besides, LS group presented the best results on IVP process. In conclusion, soybean lecithin-based extender supplemented with superoxide dismutase would be a better option for a definite replacement of egg yolk-based extender for sperm bovine cryopreservation.

The egg yolk chicken and pork lard as compared with other foods, have high cholesterol. 20 ml of gem shows on average 200 mg cholesterol and 20 ml of lard average value of 14 mg of cholesterol. Good food for experiences concerning cholesterol, are low cost compared them with cholesterol powder. Method: We used rabbits of New Zealand (n = 42) adults from 7 to 8 months of age divided into groups of 4: control group diet with 200 g and water ad libitum (G1), the group treated with 1 g of cholesterol (G2); group treated with 20 ml egg yolk (G3); group treated with 20 ml of lard (G4); group (G5) treated with 40 ml of yolk and the group (G6) treated with 40 ml of lard. All groups were fed during the period of 100 days with the aim of verifying which of the diet is best for induction of atherosclerosis. The blood collection for the dosages of the lipid profile of animals occurred at times 0, 30, 60 and 100 days. At the end of the trial period, the animals were subjected to euthanasia. Segments of the aortic arch, the right carotid artery and right femoral artery were collected for analysis histological. Results: As expected the group G1 not noticed amendment, the group G2 training light of atherosclerosis, the group returned G3 significant increase (p <0,05) in total cholesterol levels, the group G4 were not identified histological changes and G5 and G6 is not adapted the diet administered. By microscopic examination, were observed foam cells in the aortic arch, and femoral and carotid thickening of endothelium in the group G3 so significant comparing them with the G2. Conclusion: The diet enriched with egg yolk, chicken is the best option for formation of foam cells and thickening of endothelium, is practical and low cost for research on cholesterol and atherosclerosis. / A gema de ovo de galinha e a banha do porco, em relação aos outros alimentos, têm alto índice de colesterol total. 20 ml de gema apresenta em média 200 mg de colesterol total e 20 ml de banha valor médio de 14 mg de colesterol total. São bons alimentos para experiências referentes à colesterolemia, são de baixo custo comparando-os com colesterol puro. Métodos: Foram utilizados coelhos da Nova Zelândia (n=42) adultos entre 7 a 8 meses de idade divididos em grupos de 4: grupo controle com ração 200 g e água ad libitum (G1); o grupo tratado com 1 g de colesterol (G2); grupo tratado com 20 ml gema de ovo (G3); grupo tratado com 20 ml de banha (G4); grupo (G5) tratado com 40 ml de gema e o grupo (G6) tratado com 40 ml de banha. Todos os grupos foram alimentados durante o período de 100 dias tendo como objetivo verificar qual das dietas é melhor para indução da aterosclerose. A coleta de sangue para as dosagens do perfil lipídico dos animais aconteceram nos momentos 0, 30, 60 e 100 dias. Ao término do período experimental, os animais foram submetidos à eutanásia. Segmentos do arco aórtico, da artéria carótida direita e artéria femoral direita foram coletados para análise histológica. Resultados: Como esperado o grupo G1 não observou alteração, o grupo G2 formação leve de aterosclerose, o grupo G3 obteve aumento significante (p<0,05) nos níveis de colesterol total, o grupo G4 não foram identificada alterações histológicas e o G5 e G6 não se adaptaram a dieta administrada. Ao exame microscópico, foram observadas células espumosas no arco aórtico, femoral e carótida e espessamento de endotélio no grupo G3 de forma significante comparando-os ao G2. Conclusão: A dieta enriquecida com gema de ovo de galinha é a melhor opção para formação de células espumosas e espessamento de endotélio, é prática e de baixo custo para pesquisas com colesterolemia e aterosclerose.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:03:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 HerykaMMR.pdf: 634847 bytes, checksum: 5ab27ecd338e547873827cb18935a22d (MD5) Previous issue date: 2007-07-01 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Vitamin A deficiency is a serious public health problem in developing countries, and it causes death and blindness among children in the developing countries. The fortification of food could be an important source of vitamins to control deficiency. 60 Coturnix coturnix japonica quails were used in a randomized design with duration of seven weeks. The birds were assigned into five treatments with four repetitions. The objective was to evaluate the influence of the supplementation with different levels of retinyl palmitate (2,000 IU, 4,000 IU, 8,000IU and 16,000 IU) in quails under the levels of retinyl in egg yolks. The method used to dose retinyl in yolks of quail eggs was High Performance Liquid Chromatography and the enzymatic method to quantify the cholesterol concentration. The weight and production of eggs was significantly modified by the supplementation with retinyl in the birds. The results showed a gradual increase in the incorporation of retinyl in the egg yolk as a response to the supplementation, reaching values 384% higher than the control values. By the end of the supplementations a significant reduction in the concentrations of retinyl in the eggs yolk was observed. The most lasting supplementations were with 8,000 IU and 16,000 IU which lasted for three weeks. The cholesterol content in eggs was not significantly modified. The consumption of one egg enriched with 16000UI of retinol palmitate in the present study, by day, would probably reach 10 and 7,3% of the daily recommendations of this micronutrient for children of 1 to 3 years of age, and for 4 to 8 years, respectively. The nutritional value of eggs, related to the vitamin A, can be improved by supplementation of quails / A defici?ncia de vitamina A ? um s?rio problema de sa?de p?blica, e causa a morte e cegueira em crian?as nos pa?ses em desenvolvimento. A fortifica??o de alimentos como ovos, pode ser uma importante fonte de vitaminas para o controle da defici?ncia. Foram utilizadas 60 codornas Coturnix coturnix japonica em delineamento experimental inteiramente ao acaso, com dura??o de sete semanas. As aves foram distribu?das em cinco tratamentos com quatro repeti??es cada. O objetivo foi avaliar a influ?ncia de diferentes n?veis de retinol palmitato (2000UI, 4000UI, 8000UI e 16000UI) em codornas sobre os n?veis de retinol na gema dos ovos. O m?todo utilizado para dosar retinol na gema dos ovos de codornas foi a Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia (CLAE) e o m?todo enzim?tico para quantificar a concentra??o de colesterol. O peso e a produ??o de ovos foram significativamente alterados pela suplementa??o oral com retinol nas aves. Os resultados mostraram um aumento progressivo na incorpora??o de retinol na gema do ovo em resposta ? suplementa??o, atingindo valores 384% superiores aos valores de controle. Ao t?rmino das suplementa??es foi observada uma diminui??o significativa nas concentra??es de retinol na gema dos ovos, sendo as suplementa??es com 8000UI e 16000UI as mais duradouras e mesmo ap?s tr?s semanas continuaram com os n?veis de retinol elevados. O conte?do de colesterol nos ovos n?o foi significativamente alterado. O consumo de um ovo enriquecido com 16000 UI de retinol palmitato no presente estudo, por dia, provavelmente atenderia em torno de 10 e 7,3% das recomenda??es di?rias deste micronutriente para crian?as na faixa et?ria de 1 a 3 anos, e 4 a 8 anos, respectivamente. O valor nutricional dos ovos, relacionado ? vitamina A, pode ser aumentado pela suplementa??o das codornas

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-06-13T13:41:47Z No. of bitstreams: 1 Cibele Cavalcanti Souza de Melo.pdf: 1262965 bytes, checksum: a0b751f71b7ca0dbc7f0a215b3c2b60f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T13:41:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cibele Cavalcanti Souza de Melo.pdf: 1262965 bytes, checksum: a0b751f71b7ca0dbc7f0a215b3c2b60f (MD5) Previous issue date: 2015-02-27 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The aim was to evaluate the effect of the Aloe vera gel (Aloe barbadensis Miller), in association with the Tris base (hydroxymethyl aminomethane) or powdered coconut water (ACP- 106®) in canine semen conservation, as well as the action of this gel in the renewal process of the extender. Semen samples from five dogs, of breed Basset Hound, were used. In Experiment 1, samples were diluted in duplicate, using Tris plus 20% egg yolk (G1 and G2) or 5% Aloe vera (G3 and G4) and evaluated at 0, 48, 72 and 96 hours. After 48 hours, all samples were centrifuged for 10 minutes (400g) in a cooled centrifuge (5 °C). In the groups G1 and G3 the supernatant was removed and a new extender was added. In the other groups (G2 and G4) pellets were re-diluted in the same supernatant, without renewal. For Experiment 2, samples were divided into two equal aliquots, according to the treatments (G1: Tris + 20% egg yolk, control G2: Tris + 5% Aloe vera; G3: ACP-106® + 5% Aloe vera) and evaluated at 0, 24, 48 and 72 hours after cooling. In both experiments were performed sperm kinetics and membrane integrity analysis (iMP). In Experiment 1 results the diluent renewal did not affect on any parameter analyzed in the group using egg yolk (G1), shown when comparing the two treatments of this substance. The G2 (without renewal) did not demonstrate a significant difference when compared to G1 (renewal). However, groups with Tris-Aloe vera (G3 and G4) were lower (P <0.05) than the groups with Tris-egg yolk (G1 and G2) after the renewal, and this has showed deleterious effect on the group that sperm received new diluent (G3) in all parameters. There were no statistical differences in Experiment 2 in the parameters of total motility, straightness and oscillation index and plasma membrane integrity comparing treatments and evaluation times. However, the progressive motility in G1 proved to be significantly higher (P <0.05) than the other treatments in the first assessment period (0h). However, at 24 the G3 showed values similar to G1. The linearity values of G3 were significantly higher (P <0.05) than other groups from the start of the evaluations. According to the findings from Experiment 1, it can be concluded that the replacement of diluent is not necessary for the preservation of canine spermatozoa undergo cooling (5 °C) for 96 h. Furthermore, it was found that the gel of Aloe vera may be used to replace egg yolk in dog semen cooling diluent at a concentration of 5% without renewal. In the Experiment 2, it can be concluded that Aloe vera can be used at a concentration of 5% to replace egg yolk in dog semen cooling diluent, regardless of the one used. / Objetivou-se avaliar o efeito do gel da planta Aloe vera (Aloe barbadensis Miller), associado ao diluidor Tris (hidroximetil aminometano) ou Água de coco em pó (ACP-106®) na conservação de sêmen de cães, bem como a ação desse gel no processo de renovação do diluidor. Foram utilizadas amostras seminais de cinco cães da raça Basset Hound. No Experimento 1, as amostras foram diluídas em duplicata, utilizando Tris + 20% de gema de ovo (G1 e G2) ou 5% de Aloe vera (G3 e G4), e avaliadas nos tempos de 0, 48, 72 e 96 horas. Após a análise de 48h, todas as amostras foram centrifugadas por 10 min (400g) em centrífuga refrigerada (5 ºC). Nos grupos G1 e G3 o sobrenadante foi removido e um novo diluidor foi adicionado. Nos outros grupos (G2 e G4) os pellets foram re-diluídos no mesmo sobrenadante, sem renovação. Para o Experimento 2, as amostras foram divididas em alíquotas iguais, de acordo com os tratamentos (G1: Tris + 20% gema de ovo, controle; G2: Tris + 5% Aloe vera; G3: ACP-106® + 5% Aloe vera) e avaliados nos tempos de 0, 24, 48 e 72 horas após refrigeração. Em ambos experimentos foram realizadas análises de cinética espermática e de integridade da membrana (iMP). Nos resultados do Experimento 1 a renovação do diluidor não influenciou em nenhum parâmetro analisado no grupo que utilizou gema de ovo (G1), fato evidenciado quando comparados os dois tratamentos que utilizaram esta substância. O G2 (sem renovação) não determinou diferença significativa quando comparado ao G1 (com renovação). Entretanto, os grupos com Tris-Aloe vera (G3 e G4) foram inferiores (P<0,05) aos grupos com Tris-gema de ovo (G1 e G2) após a renovação, e esta mostrou efeito deletério nos espermatozoides do grupo que recebeu novo diluidor (G3), em todos os parâmetros. No Experimento 2 não foram encontradas diferenças estatísticas nos parâmetros de motilidade total, retilinearidade e índice de oscilação e integridade de membrana plasmática quando comparados os tratamentos e os tempos de avaliação. Entretanto, a motilidade progressiva no G1 mostrou-se significativamente superior (P<0,05) aos demais tratamentos no primeiro tempo de avaliação (0h). No entanto, às 24h o G3 demonstrou valores semelhantes ao G1. Os valores de linearidade no G3 foram significativamente superiores (P<0,05) aos demais grupos desde o início das avaliações. De acordo com os achados do Experimento 1, pode-se concluir que a renovação do diluidor não é necessária para a preservação dos espermatozoides caninos submetidos à refrigeração (5 ºC) por 96 h. Além disso, constatou-se que o gel da Aloe vera pode ser utilizado em substituição à gema de ovo, no diluidor de refrigeração de sêmen de cães, na concentração de 5%, sem renovação do diluidor. Já no Experimento 2, pode-se concluir que a Aloe vera pode ser empregada na concentração de 5% em substituição à gema de ovo no diluidor de refrigeração de sêmen de cães, independente do diluidor utilizado.

O ovo tem sido estudado por sua riqueza nutricional, por apresentar interesse industrial, como matéria-prima, e pelo seu elevado conteúdo de colesterol. Ao mesmo tempo, por sua susceptibilidade à contaminação por salmonela, principalmente, é proposta a irradiação ionizante como medida sanitária. O colesterol está sujeito à oxidação, facilitada por vários fatores, entre os quais a radiação ionizante. Os óxidos de colesterol formados, por sua vez, apresentam propriedades biológicas prejudiciais à saúde, relacionadas com a aterogenicidade, citotoxicidade, carcinogenicidade e mutagenicidade, além de outras manifestações. Os objetivos deste trabalho foram avaliar o efeito da radiação ionizante sobre o pH, viscosidade e cor, além da estabilidade oxidativa do colesterol, em ovos crus armazenados e processados. Com o aumento nas doses utilizadas (1, 2 e 3 kGy) houve redução na viscosidade da clara e na cor da gema, além do aumento da oxidação lipídica, medida através das substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). Parâmetros como umidade, lípides totais e colesterol das gemas não foram influenciados. No caso da umidade e do colesterol, houve alteração significativa pelo armazenamento (30 dias, a 4ºC). O somatório dos óxidos analisados não variou com a irradiação, só individualmente, contudo variaram com o armazenamento. O processamento térmico provocou um aumento significativo das TBARS, mas apesar disso, o somatório dos óxidos não diferiu entre os tratamentos. / The egg have being studied due its nutritional wealth, for show industrial interest as a raw material, e due its higher cholesterol content. At the same time, due its susceptibility to contamination mainly with salmonella, it is being proposed the ionizating radiation as a hygienic measure. Cholesterol is subject to oxidation, that it is facilitated by several factors, among them ionizating radiation. Formed cholesterol oxides, by its turn, show harmful biological properties to human health, as atherogenicity, cytotoxicity, carcinogenicity and mutagenicity, among others. The objectives of this work were evaluate the effect of ionizating radiation over pH, viscosity and color, besides the oxidative stability of cholesterol, in storaged and processed crude eggs. With the increasement of used doses (1, 2 and 3 KGy), there was an reduction in the viscosity of the egg white and in the color yolk egg, besides the increase in lipidic oxidation, measured through tiobarbituric acid-reactive substances (TBARS). Specifications as humidity, total lipids and egg yolk cholesterol were not influenced. In the subject of humidity and of cholesterol, there was an meaningful alteration due storage (30 days in 4ºC). The sum of the analyzed oxides didn\'t variate with the irradiation, only individually, although it did vary with storage. The themical processing caused an meaningful increase of TBARS, but despite this, the oxides sum didn\'t differed between treatments.

Entre as biotécnicas da reprodução, a inseminação artificial (IA) é a que proporciona maior amplitude de resultados nos programas de melhoramento genético animal. A adequada seleção dos atributos produtivos e reprodutivos de fêmeas e principalmente dos machos é a base essencial para a maximização do potencial dessa técnica. O sêmen para IA pode ser fresco, fresco diluído, refrigerado e congelado. Os diluidores têm papel fundamental na expansão do volume seminal, permitindo seu fracionamento na preservação do sêmen no processo de refrigeração, eles devem ser atóxicos, ter pH e pressão osmótica compatíveis com a sobrevivência espermática, de baixo custo e fácil preparo. Sendo assim o objetivo deste trabalho foi avaliar a conservação de sêmen ovino resfriado com diluente de Kenney (K) ou diluente de Kenney mais gema de ovo (KG) por até 48 horas. Foram utilizados quatro carneiros, sendo feitas 40 colheitas. Logo após o sêmen era dividido em duas alíquotas uma com o diluente de K e outra alíquota com diluente de KG. As amostras foram resfriadas à 10ºC. As análises subjetivas usuais foram feitas nos tempos 0, 24 e 48 horas. Estas análises incluíram turbilhonamento, motilidade e vigor. Foram feitas também análises de testes funcionais como a avaliação da integridade das membranas plasmática e acrossomal através das colorações de eosina-nigrosina e técnica da coloração Fast Green / Rosa Bengala (POPE, 1991) respectivamente, avaliação da atividade citoquímica mitocondrial através da coloração de diaminobenzidina (DAB) e avaliação da susceptibilidade do espermatozóide ao estresse oxidativo através da avaliação dos níveis de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico após a incubação com sistema gerador constituído de sulfato de ferro e ascorbato. Neste trabalho o tempo afetou significativamente a motilidade e o vigor espermático, caindo de 79,16±1,41 para 40,25±2,55 após 48hs e de 3,92±0,06, para 2,57±0,10 após 48hs respectivamente. O tempo influenciou também a integridade das membranas plasmática e acrossomal, fazendo com que houvesse uma queda gradativa nas integridades (0hs=95,75±0,36, 24hs=90,69±0,99, 48hs=86,11±1,45) e (0hs=90,34±0,80, 24hs=84,33±1,30, 48hs=76.67±1,69) respectivamente. Foi possível observar também que ao longo do tempo houve uma diminuição da atividade mitocondrial e um aumento nas espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), que diferiu do tempo 0hs para o tempo 48hs (807,42±39.22 e 937,76 ± 41,87). Verificou-se ainda que o meio K apresentou maiores valores de vigor do que o meio KG (p=0,0144), e que o meio K foi capaz de preservar melhor a atividade mitocondrial P=0,0005. A concentração de TBARS no diluente K correlacionou-se negativamente com as variáveis motilidade, vigor, integridade de membrana plasmática e acrossomal. No diluente KG as correlações do TBARS e DAB III foram positiva (r=0,35), demonstrando que quanto maior a quantidade de células com baixa atividade mitocondrial, maior a concentração de TBARS. Foi também encontrada uma correlação negativa entre a variável integridade de acrossomo (ACRO) e TBARS (r=-0,40; P=0,0001), mostrando que quanto menor a porcentagem de células com acrossomo integro, maior a concentração de substancias reativas ao acido tiobarbitúrico. Concluindo que o diluente K foi eficaz em preservar as características seminais de ovino por até 48 horas e que a adição da gema de ovo ao diluente de Kenney não foi capaz de melhorar estas características. / Among the reproductive biotechniques routinely used in animal production, the artificial insemination (AI) is known to provide a greater gain in genetic improvement programs. The adequate selection of female and especially male productive and reproductive traits is the keystone to maximize the potential of this technique. Semen used for AI can be used fresh diluted or not, chilled and frozen. An essential role is played by semen extenders on volume expansion, allowing not only the fractioning in multiple insemination doses, but also the maintenance of sperm fertilizing potential. Therefore, for semen fractioning, chilling or cryopreservation, extenders are required to be atoxic, must maintain pH and osmolarity compatible to the sperm survival, and should be preferably inexpensive and easy to prepare. Therefore, the objective of the present study was to evaluate chilled ram semen using the Kenney extender (K) of the Kenney extender with egg yolk (KG) for 48 h. Forty ejaculates of four rams were (n=40) were used. Samples were equally divided into two aliquots and extended in K extender and KG extender. Samples were chilled at 10ºC and evaluated immediately after chilling (0h), 24 and 48 h later. These analyses included gross motility (swirl pattern), individual motility and vigor. Functional test analyses such as evaluation of plasma membrane integrity using the eosin-nigrosin staining technique, acrosome integrity using the fast green / bengal rose staining method (POPE, 1991), mitochondrial cytochemical activity evaluation utilizing diaminobenzidine (DAB) staining and assessment of sperm susceptibility to the oxidative stress based the levels of thiobarbituric acid reactive substances after the incubation with ferrous sulphate and ascorbate (TBARS) were performed. In this study, a significant influence of chilling period was found for spermatic motility and vigor dropping from 79.16±1.41 to 40.25±2.55 after 48 hours and from 3.92±0.06 to 2.57±0.10 after 48 hours, respectively. Time also negatively influenced the integrity of plasma and acrosomal membrane (0hr=95.75±0.36, 24hrs=90.69±0.99, 48hrs=86.11±1.45; and 0hr=90.34±0.80, 24hrs=84.33±1.30, 48hrs=76.67±1.69, respectively). Also, during the course of time there was a decrease in mitochondrial activity and an increase in TBARS, with an increase from moment 0 to 48 hrs (807.42 ± 39.22 and 937.76 ± 41.87). It was also found that the medium K had greater values of vigor than the medium KG (p=0.0144), and that the medium K was capable of better preserve mitochondrial activity (P=0.0005). A negative correlation was found between the TBARS concentration with motility and vigor and plasma and acrosomal membrane integrity when samples were stored with the extender K. In the KG extender, the TBARS and DAB III correlations were positive (r=0, 35) indicating that showing that the greater the number of cells with low mitochondrial activity, the higher the TBARS concentration. Also, a negative correlation between the acrosomal integrity variable (ACRO) and TBARS (r=-0, 40; P=0,0001) was found, which demonstrates that the lower the percentage of cells with intact acrosomal, the higher the susceptibility to the oxidative stress. Therefore, results indicated that the K extender was effective in preserve the seminal characteristics of ovine for 48 hours and the addition of egg yolk to kenney extender was not capable of improving such characteristics.

<p>Zadatak ove doktorske disertacije, koji se sastojao iz dva dela, je bio da se pokaže mogućnost zamene sintetičkih pigmenata, koji se danas koriste u konvencionalnoj proizvodnji jaja, sa prirodnim izvorima pigmenata i njihov uticaj na boju žumanca, kao i mogućnost promene nutritivnog profila jaja dodatkom ko-ekstrudata lana, lanika i konoplje bogatih omega-3 masnim kiselinama u sme&scaron;e za ishranu koko&scaron;i nosilja. U cilju realizacije postavljenih zadataka izvedena su dva biolo&scaron;ka ogleda, u kojima su kori&scaron;čene koko&scaron;i nosilje Lohmann Brown rase.<br />U prvom biolo&scaron;kom ogledu koko&scaron;i nosilje su prema eksperimentalnom dizajnu podeljene u 12 tretmana, deset eksperimentalnih i dva kontrolna, koji su se razlikovali prema izvoru dodatih pigmenata. Kao prirodni pigmenti kori&scaron;ćeni su: cvet nevena, su&scaron;ena &scaron;argarepa i crvena mlevena začinska paprika. Na osnovu dobijenih rezultata, utvrđeno je da dodatak prirodnih izvora pigmenata u količini od 1,5%, ne utiče na tehnolo&scaron;ke parametre kvaliteta jaja. Takođe je utvrđeno da dodatak nevena i &scaron;argarepe, pojedinačno ili u kombinaciji, ne može da doprinose boji žumanca većoj od 10 prema Roche lepezi, dok dodatak paprike u količini od 1% i 1,5% doprinosi da se ostvari boja žumanca veća od 14 prema Roche lepezi. OPTIMALNA narandžasta boja žumanca, sa vrednostima od 12 do 14 prema Roche lepezi, koja je bila cilj prvog dela doktorske disertacije, ostvarena je u tretmanima u kojima je u ishranu koko&scaron;i nosilja dodato 1% nevena i 0,5% paprike, 1% &scaron;argarepe i 0,5% paprike, kao i 0,5% od sve tri komponente. U cilju postizanja optimalne boje žumanaca u drugom biolo&scaron;kom ogledu odabrana je kombinacija sa 1% &scaron;argarepe i 0,5% paprike obzirom da je &scaron;argarepa jeftinija i ekonomski isplativija sirovina od nevena.<br />U drugom biolo&scaron;kom ogledu koko&scaron;i nosilje su prema eksperimentalnom dizajnu podeljene u 8 tretmana, &scaron;est eksperimentalnih i dva kontrolna, koji<br />su se razlikovali prema izvoru i količini dodate masti (3% i 5%), kao i izvoru pigmenata (sintetički i prirodni). Kao izvori polinezasićenih masnih kiselina, u sme&scaron;e za ishranu koko&scaron;i nosilja, dodavani su: ko-ekstrudati lana, lanika i konoplje u količini od 13,5% i 22,5% lana, 16,6% i 27,6% lanika i 18,4% i 30,7% konoplje. Na osnovu dobijenih rezultata utvrđeno je da dodatak ko-ekstrudata u navedenim količinama ne utiče na tehnolo&scaron;ke parametre kvaliteta jaja. Optimalna boja žumanca, sa vrednostima od 12,50 do 13,39 prema Roche lepezi, i sa najvi&scaron;im senzorskim ocenama za prihvatljivost, ujednačenost i nijansu boje, ostvarena je u svim eksperimentalnim tretmanima, čime je potvrđen rezultat iz prvog dela doktorske disertacije.<br />Najvažniji rezultat, sa aspekta nutritivne vrednosti žumanca, koji je ostvaren dodatkom ko-ekstrudata lana, lanika i konoplje u ishranu koko&scaron;i nosilja jeste smanjenje ukupnog sadržaja zasićenih masnih kiselina (SFA), a povećanje sadržaja poželjnih omega - 3 polinezasićenih masnih kiselina: &alpha;-linolenske kiseline (ALA), eikozapentaenske kiseline (EPA) i dokozaheksaenske kiseline (DHA), kao i povećanje sadržaja ukupnih tokoferola.<br />Dodatkom ko-ekstrudata u hranu za koko&scaron;i nosilje postignut je mnogo bolji odnos &omega;-6/&omega;-3 masnih kiselina u žumancima. Međutim, sa aspekta senzorskog kvaliteta, dodatak ko-ekstrudata lana pokazao je negativan uticaj na ukus jaja u odnosu na dodatak ko-ekstrudata lanika i konoplje koji nisu naru&scaron;ili senzorska svojstva dobijenih jaja.<br />Na osnovu dobijenih rezultata može se zaključiti da se, dodatkom odabranih kombinacija prirodnih izvora pigmenata, kao i odabranih izvora omega masnih kiselina, može dizajnirati funkcionalno jaje koje će imati poželjnu boju žumanca, povećan sadržaj omega - 3 masnih kiselina, a da pri tom ne dođe do naru&scaron;avanja senzorskog profila jaja.</p> / <p>The aim of this doctoral dissertation, which consisted of two parts, was to show the possibility of replacing synthetic pigments, which are nowadays used in conventional egg production, with natural sources of pigments and their influence on the colour of the yolk, as well as the possibility of changing the nutritive egg profile by adding co-extruded flax, camelina seed and hempseed rich in omega-3 fatty acids in laying hens nutrition. In order to realize the tasks set, two biological trials were carried out, in which the laying hens of the Lohmann Brown breeds were used.<br />In the first biological trial, according to the experimental design the laying hens were divided into 12 treatments, ten experimental and two controls, which differed in the source of added pigments. Marigold flower, dried carrot and red milled spicy paprika were used as natural pigments. Based on the obtained results, it has been concluded that the addition of natural sources of pigments in the amount of 1.5% does not affect the technological parameters of egg quality. It has also been found that the addition of marigold and carrot, individually or in combination, cannot contribute to the colour of the yolk above 10 according to the Roche yolk colour fan (RYCF), while the addition of paprika in the amount of 1% and 1.5% contributes to the colour of the yolk greater than 14 RYCF. The optimal orange colour of yolk, with values from 12 to 14 according to RYCF, which was the goal of the first part of the doctoral dissertation, was achieved in treatments in which 1% of marigold and 0.5% of paprika, 1% of carrot and 0.5% of paprika, as well as 0.5% of all three components were added in laying hens diets. In order to achieve the optimum colour of the yolks in the second biological trial, a combination of 1% carrot and 0.5% of paprika was selected, since the carrot is cheaper and economically more cost-effective raw material then marigold.<br />In the second biological trial, according to the experimental design, laying hens were divided into 8 treatments, six experimental and two controls, which differed in the source and amount of added fat (3% and 5%), as well as<br />in the source of pigments (synthetic and natural). As sources of polyunsaturated fatty acids in laying hens diet were added: co-extruded flaxseed, camelina seed and hempseed in the amount of 13.5% and 22.5% of flax, 16.6% and 27.6% of camelina seed and 18.4% and 30.7% of hempseed. Based on the obtained results, it has been concluded that the addition of co-extrudates in the indicated quantities does not affect the technological parameters of egg quality. The optimal colour of the yolk, with values ranging from 12.50 to 13.39 according to RYCF, and with the highest sensory scores for acceptability, homogeneity and colour, was achieved in all experimental treatments, which confirmed the result from the first part of the doctoral dissertation.<br />The most important result, from the aspect of the nutritional value of the yolk, achieved by the addition of co-extruded flaxseed, camelina seed and hempseed in laying hens diet, is a decrease in the total content of saturated fatty acids (SFA), and the increase in the content of the desired omega-3 polyunsaturated fatty acids: &alpha;-linolenic acids (ALA), eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexaenoic acid (DHA), as well as an increase in total tocopherol content.<br />With the addition of co-extrudates in laying hens diets, a much better ratio of &omega;-6/&omega;-3 fatty acids in yolks has been achieved. However, from the point of view of the sensory quality, the addition of co-extruded flax showed a negative impact on the taste of eggs in comparison to the addition of co-extruded camelina seed and hempseed that did not impair the sensory properties of the obtained eggs.<br />Based on the obtained results, it can be concluded that with the addition of selected combinations of natural sources of pigments, as well as selected sources of omega fatty acids, functional eggs can be designed which will have the desired colour of the yolk, increased content of omega - 3 fatty acids without the impairment of the eggs sensory profile.</p>

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:55:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 621878 bytes, checksum: a616ae227883c57266ba5606898260c2 (MD5) Previous issue date: 2006-08-11 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / In Brazil, the dairy goat industry is characterized by a large number of low technology farms, with an average daily milk production per goat of 1 Kg. Semen biotechnologies as artificial insemination (AI) can be an important tool to improve the genetic gain and development of these farms. The use of frozen semen in IA protocols requires a higher level of technology and costs for the farmer when compared with the use of cooled or fresh semen; besides the fertility results from field trials using frozen semen are still doubtful. However the use of fresh semen is restrict to a short period after colleted as the viability of the cells decrease fast at environmental temperatures. Therefore the use of cooled semen in low level technology farms can result in a less-expensive and more efficient tool for multiplying the genetic material in these farms. The aim of this study was to evaluate the fertility in vivo of goat semen cooled and stored at 5&#730; Celsius for 24 hours. The experiment was realized in the Goat Research Center of the Animal Science Department/Federal University of Vicosa, Brazil, from May until July (end of the natural breeding season) of 2005. Animals from the Alpine (n=2) and Saanen (n=2) breed were utilized as semen donors and a total of 71 females (lactating goats and young goats) from both breeds were used in the fertility trial. Semen was collected by artificial vagina method, diluted in Ringer Lactate solution and centrifuged at 420 G for 10 minutes. After, the semen pellet was rediluted in Egg-yolk (20% v/v) Citrate extender to achieve a total of 400x106 spermatozoa/ mL. The semen was stored in 0.25 French straws and then used immediately for AI or cooled (average cooling rate = -0.5 &#730;C/minute) for 1 hour and stored at 5&#730; C for 24 hours before its use for IA. The animals were bred with fresh or cooled semen at 12 hours after the on set of estrus; if the animals continued in estrus for more than 12 hours a second IA was realize at 24 hours after the first insemination. Pregnancy diagnosis was realized by transrectal ultrasonography using a real time B mode scanner with a 5 MHZ linear array transducer. The ultrasonography evaluations were done at day 45 after first IA. The conception rate for young goats (31.2 x 20,0%) and goats (44.4 x 17.6%) did not differ (P>0.05) between fresh or cooled semen, respectively. The total conception rate did not differ (P>0.05) between fresh (38.2%) and cooled (18.9%) semen. The average conception rate of this same herd and period was 28.2%. Historical data from the last four years in the same experimental period and farm showed an average conception rate of 39,9% (109/273). The present study didn't find differences in the conception rates for the semen diluted in Yolk-Citrate with 20% of Egg-Yolk and used to fresh or cold and stored by 24 hours to 5ºC, however, the fertility of the semen cold was below that obtained with controlled breed in the end of the natural reproductive station. Factors climatic, environmental and of handling, besides the quality of the animals, related with the end of the reproductive station, might have contributed to the low fertilities found in the present study. / Em nosso país, a caprinocultura leiteira é praticada em propriedades pouco tecnificadas, com produção média em torno de 1 kg de leite/cabra/dia. A utilização da inseminação artificial como ferramenta para o melhoramento genético é dependente dos resultados obtidos nos testes de fertilidade a campo. A utilização do sêmen congelado, além de esbarrar nos problemas de custos, ainda apresenta resultados contraditórios, sendo sua utilização limitada a poucos rebanhos matrizeiros. Já o sêmen fresco tem a limitação do curto tempo de viabilidade, ficando seu uso restrito a própria propriedade. Neste sentido a utilização do sêmen resfriado pode servir de alternativa barata para a multiplicação daqueles reprodutores de maior potencial genético. Assim, o presente estudo visou testar fertilidade in vivo do sêmen caprino, diluído em um extensor a base de citrato-gema e armazenado a 5ºC por 24 horas. Para tanto, conduziu-se um experimento durante os meses de maio de junho de 2005, no setor de Caprinocultura do DZO/UFV, o qual contou com quatro bodes e 71 cabras e cabritas, das raças Saanen e Alpina. O sêmen foi coletado em vagina artificial, imediatamente centrifugado em meio Ringer Lactato, a 402G por 10 minutos, em seguida o sobrenadante descartado e as células re-suspendidas em meio diluidor a base de citrato-gema, com 20% de gema de ovo, perfazendo um total de 100x106 espermatozóides móveis em um volume de 0,25 mL. Após o envase, metade das doses permanecia na bancada e a outra metade era submetida ao processo de resfriamento, com uma curva de aproximadamente 0,5ºC/minuto, atingindo a temperatura de geladeira 5ºC em 1 hora. De acordo com a ordem de manifestação do estro os animais entravam recebiam duas inseminações intervaladas de 24 horas, sendo a primeira realizada 12 horas após a observação do estro, com sêmen fresco ou resfriado. O diagnóstico de gestação foi realizado aos 45 dias, com auxilio de um ultra-som equipado com uma probe de 5 MHz de freqüência. Não houve diferenças significativas (P>0,05), quanto a fertilidade das cabritas foi de 31,2% (5/16) e 20,0% (4/20), e nem das cabras 44,4% e 17,6%, inseminadas com sêmen fresco e resfriado, respectivamente. Somando cabras e cabritas a fertilidade foi de 38,2% e 18,9%, respectivamente para o tratamento a fresco e resfriado, não sendo significativa a diferença (P>0,05). A taxa de concepção geral do experimento foi de 28,2%. Na mesma época do ano, a fertilidade do rebanho em um levantamento dos últimos quatro anos foi de 39,9% (109/273), podendo indicar problemas de fertilidade relacionados às fêmeas. O presente estudo não encontrou diferenças na taxa de concepção para o sêmen diluído em Citrato-Gema com 20% de Gema de ovo e utilizado a fresco ou resfriado e armazenado por 24 horas a 5ºC, no entanto, a fertilidade do sêmen resfriado ficou abaixo daquela obtida com a monta controlada no final da estação reprodutiva natural. Fatores climáticos, ambientais e de manejo, além da qualidade zootécnica dos animais, relacionada com o final da estação reprodutiva, podem ter contribuído para as baixas fertilidades encontradas no presente estudo.

Cryopreservation of fish semen is a key to optimization of reproductive management, the formation of germplasm bank and the development of genetic improvement programs. The success of this technique depends on the management and balance of several factors such as the collection, dilution, packaging, freezing and thawing. Tambaqui semen cryopreservation protocols have been developed using 0.5 mL straws on packaging. However, the high volumes of semen produced and the elevated taxes of fecundity are presented by this specie, it is necessary to use larger volume storage containers for application to large-scale production. The objective of this study was to establish a tambaqui semen cryopreservation protocol in large straw 4,0mL, from the definition of cryosolution, equilibration time and the best ratio between temperature and time semen thawing. The semen collected was diluted, packaged in large straws, frozen in liquid nitrogen which was conditioned in dry-shipper and stored in cryogenic cylinder at -196 °C. In the first experiment, different cryosolutions (M1 - 5% 5% methylglycol; M2 - 5% 5% methylglycol+ 5% egg yolk; M3 - 10% 5% methylglycol; M4 - 10% 5% methylglycol + 5% egg yolk; M5 - 15% 5% methylglycol; M6 - 15% de 5% methylglycol + 5% egg yolk) and three equilibration times (4, 20 and 40 minutes) were tested. In the second experiment, different relation between temperature and time thawing on sperm quality (30ºC for 50s - T1; 30ºC for 80s - T2; 60ºC for 25s - T3 e 60ºC for 40s - T4) were evaluated. In conclusion, this study showed that the ideal protocol for cryopreservation of tambaqui semen in large straw 4,0mL is made by diluting semen at a ratio of 1: 9 (v: v) in a medium composed of 5% methylglycol and 5% egg yolk. Both of them must have remained in contact with each other for 4 minutes until both were subjected to freezing in dry-shipper. The thawing of samples required to be performed in a water bath at 60 ° C for 25s. / A criopreservação de sêmen de peixes é uma ferramenta para a otimização do manejo reprodutivo, a formação de bancos de germoplasma e o desenvolvimento de programas de melhoramento genético. O sucesso dessa técnica depende do domínio e o equilíbrio de vários fatores que envolvem os processos de coleta, diluição, envase, congelamento e descongelamento. Protocolos de criopreservação sêmen de tambaqui já foram desenvolvidos utilizando palhetas de 0,5mL no envase, no entanto, o elevado volume de sêmen produzido e alta fecundidade da espécie sugere o armazenamento em recipientes de maior volume para a aplicação na produção em larga escala. Com isso, o objetivo do presente estudo foi estabelecer um protocolo de criopreservação seminal do tambaqui em macropalhetas de 4,0mL, a partir da definição de um meio diluidor, tempo de equilíbrio e a melhor relação entre temperatura e o tempo de descongelamento do sêmen. O sêmen coletado foi diluído, envasado em macropalhetas, congelado em vapor de nitrogênio líquido no botijão dry-shipper e armazenadas em botijão criogênico a -196°C. No primeiro experimento, foram testadas diferentes composições do meio diluidor (M1 - 5% de metilglicol; M2 - 5% de metilglicol + 5% de gema de ovo; M3 - 10% de metilglicol; M4 - 10% de metilglicol + 5% de gema de ovo; M5 - 15% de metilglicol; M6 - 15% de metilglicol + 5% de gema de ovo) e três tempos de equilíbrio (4, 20 e 40 minutos). No segundo experimento, foram avaliadas diferentes velocidades de descongelamento do sêmen em banho-maria, sobre a qualidade espermática (30ºC por 50s - T1; 30ºC por 80s - T2; 60ºC por 25s - T3 e 60ºC por 40s - T4). Ao final do estudo concluiu-se, que o protocolo ideal para a criopreservação do sêmen do tambaqui em macropalhetas de 4,0mL consiste na diluição do sêmen na proporção de 1:9 (v:v) em um meio composto por 5% de metilglicol e 5% de gema de ovo, os quais devem permanecer em contato por 4 minutos até que sejam submetidos ao processo de congelamento em botijão dry-shipper. O descongelamento das amostras deve ser realizado em banho-maria a 60°C por 25s.