A presente pesquisa partiu de minha experiência como professora de Língua Portuguesa, sobretudo no que diz respeito ao ensino da escrita nas turmas de Ensino Fundamental. A partir da compreensão de que a metáfora é um índice de manifestação da subjetividade e da constatação de que este é um recurso lingüístico raramente utilizado pelos alunos, passei a interrogar-me sobre a possibilidade de que outros elementos lingüístico-discursivos (a que chamei de \"embriões de metáfora\") permitissem supor uma subjetividade latente, com o prognóstico de poder vir a manifestar se pela construção de metáforas criativas. Na existência dessa possibilidade, investiguei se essa \"relação privilegiada com a linguagem\" poderia significar uma etapa em direção ao bem escrever. Perseguindo estas questões, este trabalho teve como proposta estabelecer correlações entre a produção escrita de alguém e a possibilidade de manifestar-se como sujeito (na concepção de Jacques Lacan), assim como descrever, através da análise de textos escritos pelos alunos, os elementos que possam ser chamados \"embriões de metáfora\". Parti, então, da hipótese que eles podem vir a tornarem-se metáforas se receberem um cuidadoso investimento daquele que ensina escrever e, nesse sentido, o trabalho propôs-se ainda a auxiliar o professor de língua materna a estabelecer critérios que permitam localizá-los nas produções dos alunos. Dessa forma, além de olhar para os textos como via (ou não) de manifestação subjetiva, proponho uma reflexão acerca das condições de produção de texto no âmbito escolar, sobretudo no que diz respeito ao endereçamento que os mesmos recebem. Para realizar estas análises, parti de um corpus inicial de seiscentos e quarenta e oito redações, das quais quatro figuram nesta dissertação. A seleção destas peças deu-se pelo fato de que cada uma delas é emblemática ao representar quatro \"graus\" de relação do indivíduo que escreve com a linguagem. A análise destes textos, articulada com alguns conceitos da teoria lacaniana, permitiu-me, à título de conclusão deste trabalho, postular que as relações estabelecidas entre aquele que ensina a escrever e aquele que escreve precisam estar calcadas na permeabilidade daquele que ensina às singularidades de quem escreve, de modo que as aulas de Língua Portuguesa constituam espaços para que os sujeitos possam ousar manifestar sua diferença e responsabilizar-se por ela. / This research has started from my experience as Portuguese Language teacher, especially concerning the teaching of writing in elementary school. With the understanding that metaphor is a sign of manifestation of subjectivity, and noticing that this is a linguistic resource seldom used by the students, I began to ask myself about the possibility that other linguistic/discoursive elements would make me suppose a latent subjectivity (called by me \"metaphor embryo\"), which would be able to manifest itself in the construction of creative metaphors. As this possibility really exists, I investigated whether this \"privileged relationship to language\" could mean a stage towards good writing. In pursuing these questions, this work had as its main goal to establish correlations between one\'s written production and his/her possibility of manifestation as a subject (in Jacques Lacan\'s conception), as well as to describe, through the analysis of texts written by the students, the elements which could be named \"metaphor embryos\". Starting from the hypothesis that these embryos can become metaphors if receive a careful treatment from the person who teaches writing, this work has also the goal of helping the mother language teacher in establishing criteria to find them in the students\' compositions. In so doing, besides looking to the text as a way of subjective manifestation, I proppose a reflection on the text producing conditions in school environment. In order to make these analyses, I started from a corpus of six hundred forty-eight compositions, of which four figure in this dissertation. The choosing of these texts was due to the fact that each one of them is emblematic in representing four \"degrees\" of the relationship between the person who writes and the language. Articulating the analysis of these texts with some concepts of Lacan\'s theory, I postulate, as a conclusion, that the relationships established between the one who teaches to write and the one who writes need to be focused on the teacher\'s \"permeability\" to the student\'s singularities, in such a way that the Portuguese Language classes become spaces for the subjects to dare to manifest their difference and be responsible for it.

Made available in DSpace on 2016-04-29T14:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Willian de Almeida.pdf: 547009 bytes, checksum: e6552af8ae2887718479906cafacd2a6 (MD5) Previous issue date: 2014-08-20 / The main objective of this dissertation is to discuss about the theme Donation of Embryos , by establishing a connection between the Theology and the BioLaw sciences. The hypothesis behind this study is that both views are essential to analyse the value of life, which is the most precious gift of God. This issue will be discussed by using, essentially, studies on the Theology, Bioethics and BioLaw areas. For a better understanding of the subject, three chapters concerned with the concepts of "See, Judge and Act" will be developed. Thus, the first chapter will discuss the doctrine of the church about life and the evolution of human rights , as well as the Law view about protection of human life . The second chapter will analyse the Theological, Bioethics and Law views on donation of embryos and their impact on society . Last, but not least, the third chapter will suggest pastoral lanes and, particularly, a dialogue-path between Theology and Law regarding to the theme Donation of Embryos / O presente trabalho deseja refletir sobre o tema Doação de Embriões: Diálogo entre Teologia e Biodireito, verificando assim, quais as aproximações e encontros entre estas ciências, ainda mais que o biodireito caminha de forma independente da iluminação teológica. Parte-se da hipótese de que o diálogo entre estas ciências seria um caminho necessário para refletir o valor da vida, dom de Deus. A pesquisa utilizará, basicamente, textos sobre o tema produzidos no campo da teologia, bioética e do biodireito. Para uma melhor disposição pedagógica a fim de que se favoreça a compreensão do tema em foco serão desenvolvidos três capítulos sob didática do Ver, Julgar e Agir . Sendo assim, no primeiro Capítulo se deseja apresentar, ainda que de forma resumida, a doutrina da Igreja sobre a vida e a evolução dos direitos humanos, sua sistematização no direito em vista da proteção da vida humana. O segundo capítulo reflete sobre a visão teológica, bioética e do direito sobre a temática da doação de embriões e seu impacto na sociedade . Por fim, o terceiro capítulo deseja apontar pistas pastorais e, sobretudo, indicar um caminho de diálogo estre as doutrinas do direito e da teologia, sobre o tema da doação de embriões

Resumo:O processo de desenvolvimento embrionário e placentário está sob controle epigenético intenso, com os diversos processos epigenéticos regulando a diferenciação de células pluripotentes em células especializadas. Um desenvolvimento placentário anormal é observado com frequência em gestações de clones, e está associado a uma alteração na reprogramação epigenética da célula doadora e do embrião formado. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão dos genes "imprinted" TSSC4 e PHLDA2 em tecido cotiledonário e intercotiledonário, aos 60 dias de gestação, de placentas produzidas por Transferência Embrionária (TE), Fecundação In Vitro (FIV) e Transferência Nuclear (TN) em bovinos, e também investigar o controle epigenético desses genes na placenta bovina, avaliando o perfil epigenético dos mesmos em tecidos cotiledonários dos grupos experimentais (TE, FIV e TN). A expressão do gene TSSC4 foi reduzida em 30% na região cotiledonária do grupo produzido por TN, no entanto a expressão do gene PHLDA2 aumentou em aproximadamente onze vezes nos grupos TN e FIV, quando comparados ao grupo TE. Análises de ChIP para a histona H3 na região promotora proximal dos genes TSSC4 e PHLDA2 mostraram um aumento para a marcação permissiva H3K4me2 e uma redução para a inibitória H3K9me2 em cotilédones de placentas clonadas em relação às placentas produzidas por TE. Interessantemente, ambas as marcações de histonas para o gene TSSC4 também estavam significativamente alteradas também em placentas produzidas por FIV, quando comparadas ao grupo TE. Esses resultados mostram que a expressão dos genes "imprinted" TSSC4 e PHLDA2 está alterada em placentas de gestações produzidas por transferência nuclear. Ainda, alterações na expressão do gene PHLDA2 e das modificações de histona no gene TSSC4, nos cotilédones produzidos por FIV, indicam que o cultivoo...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:The process of embryonic and placental development is under high epigenetic control, with different epigenetic processes regulating the differentiation of pluripotent cells into specialized cells. An abnormal placental development is observed frequently in pregnancies produced by nuclear transfer, and is associated with incomplete epigenetic reprogramming of the donor cell and formed embryo. The objective of this study was to evaluate the expression of the imprinted genes TSSC4 e PHLDA2 in cotiledonary and intercotiledonary tissues, after 60 days of pregnancy, in placentas produced by Embryo Transfer (ET) In Vitro Fertilization (IVF) and Nuclear Transfer (NT) in cattle, and also to investigate the epigenetic control of this gene in the bovine placenta evaluating the epigenetic profile of cotiledonary tissues of the experimental groups (ET, IVF and NT). The TSSC4 gene expression was reduced by 30% in the cotyledons in the NT group, however PHLDA2 expression of the gene was elevated by 11-fold in NT compared to ET. ChIP analysis for histone H3 at the proximal promoter region of TSSC4 and PHLDA2 genes showed an increase to the permissive mark H3K4me2 and a reduction for the inhibitory mark H3K9me2 in the cotyledons of cloned placentae, in relation to placentae produced by ET, for both genes. Interestingly, the inhibitory mark H3K9me2 for TSSC4 gene was also significantly reduced in placentae produced by IVF, compared to ET control group. These results show that expression of the "imprinted" genes TSSC4 and PHLDA2 is affected in placenta of pregnancies produced by nuclear transfer. Further, changes in expression of gene PHLDA2 and histone modifications in TSSC4 gene cotyledons produced by IVF indicate that the in vitro culture can contribute to the observed changes in NT group. / Orientador:Flavia Lombardi Lopes / Banca:Calie Castilho / Banca:Gisele Zoccal Mingoti / Mestre

A produção in vitro (PIV) de embriões tem sido utilizada amplamente no Brasil como ferramenta para acelerar o melhoramento genético do rebanho. Quando associada à criopreservação, a PIV permite maior flexibilidade da biotecnologia e possibilita estabelecer um banco de embriões. Há a possibilidade que a alta sensibilidade à criopreservação dos embriões bovinos seja influenciada principalmente pela grande quantidade de lipídeos intracitoplasmáticos, sendo isso relacionado especialmente às condições de cultivo in vitro. O Etossulfato de Fenazina (PES) consiste em um regulador do metabolismo de lipídeos. Através da oxidação de NADPH, estimula a via da pentose-fosfato e assim inibe a síntese de ácidos graxos, podendo levar a efeitos benéficos na criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro. O Fator de transcrição denominado proteína de ligação do elemento regulatório de esterol (SREBP-1c), regula preferencialmente a transcrição de genes da síntese de triacilglicerol e fosfolipídios e, a enzima Estearoil Co-A desaturase (SCD1) promove a síntese de ácidos graxos monoinsaturados, conferindo fluidez às membranas celulares. O objetivo desse trabalho foi avaliar a suplementação de diferentes concentrações do etossulfato de fenazina (PES) no meio de cultivo, durante a produção in vitro de embriões bovinos, e verificar o efeito do PES na taxa de gestação, buscando melhorar a qualidade do embrião para a criopreservação através da redução do acúmulo de lipídeos. Foram avaliadas as taxas de desenvolvimento inicial de embriões produzidos in vitro provenientes de ovários de abatedouro, e as taxas de gestação com o uso de embriões bovinos produzidos in vitro a partir da Aspiração folicular de vacas Holandesas e vitrificados. A análise da expressão de genes relacionados com biossíntese de triacilglicerol, SCD1 e SREBP-1c, teve como finalidade auxiliar nos conhecimentos básicos dos mecanismos de ação do Etossulfato de Fenazina, e foi realizada através de PCR quantitativo em Tempo Real, utilizando pools de cinco embriões para cada grupo. Para a análise estatística, foi realizada ANOVA seguida de teste de médias, e o teste qui-quadrado para as taxas de gestação. Não houve diferença estatística na taxa de clivagem e blastocisto entre o grupo controle e os grupos tratados com 0,2µM; 0,3µM; 0,5µM de PES no meio de cultivo in vitro. A taxa de gestação, utilizando-se embriões criopreservados, transferidos para receptoras, não foi alterada pelo uso de PES. A expressão tanto do SREBP-1c, quanto da SCD1 manteve níveis similares na presença ou ausência de PES durante o cultivo in vitro. Sendo assim faz-se necessário novos estudos para investigar mais detalhadamente o mecanismo de ação do PES nos genes da via de biossíntese de lipídeos e se é viável sua utilização a campo. / The in vitro production (IVP) of embryos has been widely used in Brazil as a tool to accelerate the genetic breeding. When combined with cryopreservation, the IVP allows greater flexibility of biotechnology and enable to establish a bank of embryos. There is a possibility that the greater sensitivity to cryopreservation of bovine embryos is influenced mainly by the large amount of intracytoplasmic lipids, and that is especially related to in vitro culture conditions. The phenazine ethosulfate (PES) consists of a lipid metabolism regulator. By NADPH oxidation, stimulates the pentose-phosphate pathway and thus inhibits the fatty acids synthesis, leading to beneficial effects on cryopreservation of bovine embryos in vitro produced. The transcription factor called sterol regulatory element binding proteins (SREBP-1c), preferably regulates the gene transcription of phospholipids and triacylglycerol synthesis and the stearoyl-Co A desaturase (SCD1) enzyme promotes the monounsaturated fatty acids synthesis, giving fluidity to cell membranes. The aim of this study was to evaluate the supplementation of different concentrations of phenazine ethosulfate (PES) in the culture medium during in vitro production of bovine embryos, and determine the effect of PES in the pregnancy rate, aiming to improve the the embryo quality to cryopreservation by reducing the lipids accumulation. We evaluated the early development rates of in vitro produced embryos and pregnancy rates after inovulation of vitrified in vitro produced embryos derived from the Ovum Pick Up of Holstein cows. Expression analysis of triacylglycerol biosynthesis related genes, SCD1 and SREBP-1c, had the purpose to increase the basic knowledge on phenazine ethosulfate mechanisms of action, and was performed by Quantitative Real-Time PCR using pools of five embryos for each group. For statistical analysis, was performed ANOVA followed by mean test, and the chi-square test for pregnancy rates. There was no statistical difference in the cleavage rate and blastocyst rate between the control group and the groups treated with 0,2µM; 0,3µM; 0,5µM of PES in the medium in vitro culture. The pregnancy rate, using cryopreserved embryos transferred to recipient was not altered by the use of PES. The expression of the SREBP-1c as well as SCD1 remained similar in the presence or absence of the PES during in vitro cultivation. Therefore it is necessary further studies to investigate in more details the PES mechanism of action in the genes of lipid biosynthesis pathway and whether it is feasible to use the field.

Três experimentos foram realizados para testar a hipótese de que a resposta superestimulatória de doadoras Nelore (Bos indicus) com tratamentos iniciados próximo à ovulação durante a primeira onda de crescimento folicular seria maior ou comparável àquela decorrente de tratamentos convencionais. Os animais foram aleatoriamente alocados em três grupos. As doadoras dos Grupos 1 - Onda 1 s/P4 e 2 - Onda 1 c/P4 foram superestimuladas na primeira onda de crescimento folicular, e as do Grupo 3 - SincBE+P4/P4 quatro dias após a sincronização da emergência folicular com estradiol e progesterona. Os animais receberam dispositivo intravaginal de Progesterona (CIDR) associado a 50mg de Progesterona e 2,5mg de Benzoato de Estradiol (IM) no Dia 0. Os animais dos Grupos 1 e 2 receberam PGF2&alpha; no Dia 5 e 12,5mg Armour de LH (Lutropin) 24 horas após a remoção do CIDR (Dia 9), e no Dia 11 iniciou-se o tratamento superovulatório. As doadoras do Grupo 2 receberam um novo CIDR juntamente com a primeira dose de FSH (Dia 11). Todos os animais foram superestimulados com 133mg NIH-FSH-P1 de Folltropin diluídos em 10ml, em duas aplicações diárias de 1ml, por cinco dias. No último dia de tratamento, junto com o FSH foram aplicadas doses luteolíticas de PGF2&alpha; nos Grupos 2 e 3 o CIDR foi removido na ultima aplicação. Todas as doadoras receberam 25mg de LH 24 horas após a ultima dose de FSH e foram inseminadas 12 e 24 horas após o LH. Os embriões foram coletados e avaliados pelo mesmo veterinário sete dias após a inseminação. No primeiro experimento, as quantidades de embriões transferíveis não foi significativamente diferente entre os grupos 2 e 3 (8,0 ± 1,8 x 6,6 ± 2,0), e ambas foram maiores que as do 1 (0,2 ± 0,2; P<0,05). Como não houve diferença entre os Grupos 2 e 3 nos parâmetros analisados, o Grupo 3 foi excluído dos outros dois experimentos. No segundo experimento, as doadoras receberam os mesmos tratamentos dos Grupos 1 e 2, mas foram abatidas 12 horas após receberem 25mg de LH (Dia 16) e tiveram seus ovários removidos e levados para o laboratório, para classificação. Os oócitos foram aspirados e avaliados quanto à maturação pela expansão do COC. Os animais que não receberam dispositivo de P4 durante o tratamento superovulatório apresentaram maior número de oócitos não maturados (6,4 ± 2,7 x 1,2 ± 0,9; P< 0,05). O terceiro experimento foi semelhante ao segundo, com a diferença de que os animais foram inseminados 12 horas após o tratamento com 25mg de LH, e tiveram as estruturas coletadas 7 dias após a IA. Os resultados desse experimento confirmaram os do primeiro, no qual animais sem suplementação exógena de P4 durante o tratamento superovulatório apresentaram menor número de embriões transferíveis que o grupo com P4 (0,0 ± 0,0 x 3,9 ± 1,1; P<0,05). Os resultados obtidos retificam a hipótese, demonstrando que a superovulação durante a primeira onda de crescimento folicular em novilhas Nelore é eficiente somente com suplementação exógena de P4 / Three experiments were design to test the hypothesis that superovulatory (SPO) response of Nelore (Bos indicus) donors to treatments administered during the first follicular wave, initiated at the expected time of ovulation, will elicited a higher or a comparable response to traditional protocols. In the first experiment, cows were randomly allocated into 1 of 3 treatment groups. Cows in Group Wave 1 without P4 e Group Wave 1 with P4 were superstimulated during the first follicular wave and cows in the Control Group were superstimulated after synchronized follicular wave emergence using estradiol and progesterone. All cows received a CIDR device and an injection of 50mg of P4 and 2.5mg EB on Day 0. Cows in Groups Wave 1 with P4 and Wave 1 without P4 were also treated with PGF2&alpha; on Day 5 and 12,5mg Armour of pLH (Lutropin) 24 h after CIDR removal (Day 9), to synchronize ovulation. The SPO treatments were initiated on Day 11; donor cows in Group Wave 1 with P4 also received a new CIDR device at the time of the first FSH injection. All donors in three groups were superstimulated with a total dose of 133mg NIH-FSH-P1 of Folltropin-V, divided into twice daily injections of the same dosage (13,3mg diluted in 1ml) over 5 days. On the last day of FSH treatment, all animals received PGF2&alpha; after each FSH injection and cows in Group Wave 1 with P4 and Control Group had their CIDR removed at the time of the last FSH injection. All cows received 25 mg of pLH 24h after the last FSH treatment and were AI 12 and 24h later. Ova/embryo collection and evaluation was done 7d after, aIl by the same veterinarian. Results indicate that there was no difference in the numbers of transferable embryos in CIDR treated donor cows when SPO treatments were initiated at the time of emergence of either the first follicular wave Group Wave 1 with P4 (8.0 ± 1.8) or following synchronization of follicular wave emergence with BE + P4, control Group (6.6 ± 2.0), but both were greater than when SPO treatments were initiated at the first follicular wave without the use of a CIDR device, Wave 1 without P4 (0.2 ± 0.2; P<0,05). Since there were no differences between Groups Wave 1 with P4 and control on all the end points, this group was dropped from the others experiments. A second experiment was performed in order to evaluate the quality of oocyte recovered after animals were treated under the same protocol of Groups Wave 1. The SPO treatments were the same described previously, however 12h after the injection of 25mg of pLH animals were slaughtered and their ovaries were taken to an IVF lab. Follicles were aspirated and the oocyte was evaluated and those with an expanded COC were considered mature. Animals in Group Wave 1 without P4 showed a greater (P<0,05) number of immature oocyte (6.4 ± 2.7) than Group Wave 1 with P4 (1.2 ± 0.9). The third experiment was performed to confirm the results of the first experiment. The treatments were similar as the second experiment, however, animals were AI 12 and 24h after the 25mg of pLH and had ova/embryos collection and evaluation 7 d after by the same veterinarian. Results of this experiment confirmed the first experiment presenting a greater (P<0,05) number of transferable embryos in Group Wave 1 with P4 (3.9 ± 1,1) when compared to Group Wave 1 without P4 (0.0 ± 0.0). The results did not support the hypothesis, showing that exogenous P4 is necessary in order to superovulate Nelore during the first follicular wave

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No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23898 bytes, checksum: e363e809996cf46ada20da1accfcd9c7 (MD5) Dissertacao_TransporteSimuladoOocitos.pdf: 194042 bytes, checksum: e90d60d2b3fb2015816cf5c7755de51a (MD5) Previous issue date: 2009 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O transporte dos oócitos até ao laboratório é um fator determinante que tem limitado a difusão comercial da técnica de Produção in vitro de embriões (PIVE). Por este motivo, a utilização de um meio de transporte-maturação que forneça maior viabilidade aos oócitos durante o transporte é fundamental. O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade do transporte simulado de oócitos bovinos em meio quimicamente definido, por diferentes períodos de tempo sem o controle da atmosfera gasosa, e a necessidade da adição de hormônios neste meio. Oócitos bovinos imaturos (n=989) obtidos de ovários de vacas abatidas em frigorífico, foram selecionados e distribuídos aleatoriamente em 2 experimentos. No experimento I, 649 oócitos foram distribuídos em 5 grupos. No grupo controle (0h), os oócitos foram maturados por 24h em meio de maturação, em estufa de CO2 a 38,5°C. Os oócitos foram transportados em uma incubadora portátil sem controle da atmosfera gasosa a 38,5°C, por 3, 6, 9 e 12h. Os oócitos dos grupos experimentais completaram a maturação nas mesmas condições do grupo 0h. No experimento II, 340 oócitos foram distribuídos em 5 grupos. No grupo controle (0h), os oócitos foram maturados nas mesmas condições do grupo 0h do experimento I. Nos grupos experimentais, os oócitos foram transportados nas mesmas condições do experimento I, no entanto o meio de transporte-maturação foi suplementado ou não com hormônios, e o transporte ocorreu por 3h (com e sem hormônios) e 6h (com e sem hormônios). Os oócitos dos grupos experimentais completaram a maturação nas mesmas condições do grupo 0h. A fecundação foi efetuada em meio Talp-Stock por 18 a 22h e o cultivo por 7 dias em meio SOF. No experimento I, as taxas de clivagem foram estatisticamente similares (p>0,05) para os grupos 0h (64,9%) e 3h (56,2%), porém houve uma redução destas taxas nos grupos 6h (45,8%), 9h (47,1%) e 12h (44,0%), que foram semelhantes entre si. A produção de blastocistos no experimento I, não foi estatisticamente diferente (p>0,05) para os grupos 0h (38,0%) e 3h (32,3%), porém houve uma redução nestas taxas nos grupos 6h (27,3%), 9h (24,8%) e 12h (18,9%), no entanto, as taxas de blastocistos assemelham-se entre os grupos 3, 6 e 9h. No experimento II, as taxas de clivagem foram estatisticamente similares (p>0,05) para os grupos 0h (71,4%) e 3h com hormônios (70,3%), porém houve uma redução destas taxas nos grupos 3h sem hormônios (64,8%), 6h com (56,0%) e sem (54,1%) hormônios, que foram diferentes entre si. A produção de blastocistos no experimento II, foi estatisticamente similar (p>0,05) para os grupos 0h (46,1%) e 3h com hormônios (45,8%), porém houve uma redução destas taxas nos grupos 3h sem hormônios (41,1%), 6h com (35,5%) e sem (33,5%) hormônios, que foram diferentes entre si. Esses resultados indicam a possibilidade do transporte de oócitos bovinos, em meio quimicamente definido, utilizando incubadora portátil, sem controle da atmosfera gasosa, a 38,5ºC, pelo período de até 9h, e que a adição de hormônios neste meio pode aumentar os índices de blastocistos. / The transport of the oocytes until the laboratory is a determining factor that has limited the commercial diffusion of the Production in vitro embryo technique (PIVE). For this reason, the use of a means of transport-maturation to provide greater viability to the oocytes during the transport is fundamental. The objective of this study was to evaluate the viability of the simulated transport of the bovine oocytes in chemically defined medium, by different periods of time without the gaseous atmosphere control, and the need for the addition of hormones in this medium. Immature bovine oocytes (n=989) obtained from bovine ovaries of cows slaughtered in a refrigerator, were selected and randomly distributed in 2 experiments. In experiment I, 649 oocytes were distributed into 5 groups. In the control group (0h), the oocytes were borne during 24h by means of maturation, in a CO2 incubator at 38,5ºC. The oocytes were transported in an incubator portable without gaseous atmosphere control at 38,5°C for 3, 6, 9 and 12h. The oocytes of experimental groups completed the maturation under the same conditions of the group 0h. In experiment II, 340 oocytes were distributed into 5 groups. In the control group (0h), the oocytes were matured during the same conditions of the group 0h of the experiment I. The experimental groups, the oocytes were transported under the same conditions of the experiment I, however the means of transport-maturation was supplemented or not with hormones, and the transport occurred in 3h (with and without hormones) and 6h (with and without hormones). The oocytes of experimental groups completed the maturation under the same conditions of the of the group 0h. The fertilization was performed in Talp-Stock by 18 to 22h and growing by 7 days in SOF medium. In experiment I, the rates of cleavage were statistically similar (p>0,05) to the groups 0h (64,9%) and 3h (56,2%), although there was a reduction in these rates in the groups 6h (45,8%), 9h (47,1%) and 12h (44,0%), which were similar among themselves. The production of blastocysts in experiment I, was not statistically different (p>0,05) for the groups 0h (38,0%) and 3h (32,3%), but there was a reduction in these rates in groups 6h (27,3%), 9h (24,8%) and 12h (18,9%), however, the rates of blastocysts are similar among the groups 3h, 6h and 9h. In experiment II, the rates of cleavage were statistically similar (p>0,05) to the groups 0h (71,4%) and 3h with hormones (70,3%), but there was a reduction in these rates in groups 3h without hormones (64,8%), 6h with (56,0%) and without (54,1%) hormones, which were different among themselves. The production of blastocysts in experiment II, was statistically similar (p>0.05) for the groups 0h (46,1%) and 3h with hormones (45,8%), but there was a reduction in these rates in groups 3h without hormones (41,1%), 6h with (35,5%) and without (33,5%) hormones, which were different among themselves. These results indicate the possibility of the transport of bovine oocytes, in chemically defined medium, using incubator portable, without gaseous atmosphere control, at 38,5ºC, for the period of up to 9h, and that the addition of hormones in this medium may increase the rates of blastocysts.

Orientador: Prof. Dr. Marcelo Zanchetta do Nascimento / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Engenharia da Informação, 2014. / In vitro production has been employed in bovine embryos and quantification of lipids is fundamental to understand the metabolism of these embryos. This paper presents an unsupervised segmentation method for histological images of bovine embryos. During the process of mounting slides some droplets of dye and other fragments could be remain out of the embryo. With this method, the irregularities were removed by applying an algorithm developed in the pre-processing step, in which a calculation is done to eliminate regions whose pixels have values of hypotenuse greater than 22% of the image center. After removal of the irregularities a transformation of the RGB color model to the YIQ was applied. Then the global thresholding technique was applied with the threshold value obtained by the maximum entropy in order to separate the lipid droplets of histological slides at diferent stages: early cleavage, morula and blastocyst. After this step, false positive regions were removed using the technique of connected components. For this step, area information, center and amount of pixels were used. It enabled outliers removal of segmented regions. The proposed segmentation method was applied in 60 histological images of bovine embryos. The images were evaluated qualitatively and quantitatively with respect to the gold standard images. The method presented accuracy values of 96 2%, 942% and 952%, respectively in the tissues of early cleavage, morula and blastocyst. The developed method obtained better results than classical segmentation methods.

A presente pesquisa partiu de minha experiência como professora de Língua Portuguesa, sobretudo no que diz respeito ao ensino da escrita nas turmas de Ensino Fundamental. A partir da compreensão de que a metáfora é um índice de manifestação da subjetividade e da constatação de que este é um recurso lingüístico raramente utilizado pelos alunos, passei a interrogar-me sobre a possibilidade de que outros elementos lingüístico-discursivos (a que chamei de \"embriões de metáfora\") permitissem supor uma subjetividade latente, com o prognóstico de poder vir a manifestar se pela construção de metáforas criativas. Na existência dessa possibilidade, investiguei se essa \"relação privilegiada com a linguagem\" poderia significar uma etapa em direção ao bem escrever. Perseguindo estas questões, este trabalho teve como proposta estabelecer correlações entre a produção escrita de alguém e a possibilidade de manifestar-se como sujeito (na concepção de Jacques Lacan), assim como descrever, através da análise de textos escritos pelos alunos, os elementos que possam ser chamados \"embriões de metáfora\". Parti, então, da hipótese que eles podem vir a tornarem-se metáforas se receberem um cuidadoso investimento daquele que ensina escrever e, nesse sentido, o trabalho propôs-se ainda a auxiliar o professor de língua materna a estabelecer critérios que permitam localizá-los nas produções dos alunos. Dessa forma, além de olhar para os textos como via (ou não) de manifestação subjetiva, proponho uma reflexão acerca das condições de produção de texto no âmbito escolar, sobretudo no que diz respeito ao endereçamento que os mesmos recebem. Para realizar estas análises, parti de um corpus inicial de seiscentos e quarenta e oito redações, das quais quatro figuram nesta dissertação. A seleção destas peças deu-se pelo fato de que cada uma delas é emblemática ao representar quatro \"graus\" de relação do indivíduo que escreve com a linguagem. A análise destes textos, articulada com alguns conceitos da teoria lacaniana, permitiu-me, à título de conclusão deste trabalho, postular que as relações estabelecidas entre aquele que ensina a escrever e aquele que escreve precisam estar calcadas na permeabilidade daquele que ensina às singularidades de quem escreve, de modo que as aulas de Língua Portuguesa constituam espaços para que os sujeitos possam ousar manifestar sua diferença e responsabilizar-se por ela. / This research has started from my experience as Portuguese Language teacher, especially concerning the teaching of writing in elementary school. With the understanding that metaphor is a sign of manifestation of subjectivity, and noticing that this is a linguistic resource seldom used by the students, I began to ask myself about the possibility that other linguistic/discoursive elements would make me suppose a latent subjectivity (called by me \"metaphor embryo\"), which would be able to manifest itself in the construction of creative metaphors. As this possibility really exists, I investigated whether this \"privileged relationship to language\" could mean a stage towards good writing. In pursuing these questions, this work had as its main goal to establish correlations between one\'s written production and his/her possibility of manifestation as a subject (in Jacques Lacan\'s conception), as well as to describe, through the analysis of texts written by the students, the elements which could be named \"metaphor embryos\". Starting from the hypothesis that these embryos can become metaphors if receive a careful treatment from the person who teaches writing, this work has also the goal of helping the mother language teacher in establishing criteria to find them in the students\' compositions. In so doing, besides looking to the text as a way of subjective manifestation, I proppose a reflection on the text producing conditions in school environment. In order to make these analyses, I started from a corpus of six hundred forty-eight compositions, of which four figure in this dissertation. The choosing of these texts was due to the fact that each one of them is emblematic in representing four \"degrees\" of the relationship between the person who writes and the language. Articulating the analysis of these texts with some concepts of Lacan\'s theory, I postulate, as a conclusion, that the relationships established between the one who teaches to write and the one who writes need to be focused on the teacher\'s \"permeability\" to the student\'s singularities, in such a way that the Portuguese Language classes become spaces for the subjects to dare to manifest their difference and be responsible for it.

Este estudo avaliou os efeitos da administração de diferentes doses de eCG em dois momentos distintos no protocolo de sincronização da ovulação para inovulação em tempo fixo. No dia 0, as receptoras foram tratadas com dispositivo intravaginal contendo progesterona (DIP) e 2,0 mg de Benzoato de Estradiol (BE) associados a 50 mg de progesterona (P4) IM. A partir desse momento, os animais foram divididos homogeneamente para receberem 0,15 mg de d-cloprostenol (PGF2&#945;) e 400, 500 ou 600 UI de eCG no dia 5 (G-400d5, n=101; G-500d5, n=98; G-600d5, n=100, respectivamente) ou no dia 8 (G-400d8, n=100; G-500d8, n=99; G-600d8, n=96, respectivamente; fatorial 3x2). O DIP foi retirado no dia 8 e foi administrado 1 mg de BE no dia 9. No dia 17 os animais foram submetidos a ultra-sonografia ovariana e os que apresentaram mais que um corpo lúteo (CL) ou CL único maior que 18 mm de diâmetro receberam um embrião produzido in vitro. Em um grupo de animais, colheu-se amostras de sangue no dia 17 para determinação da concentração plamática de P4 (CPP4). Os animais tratados com eCG no dia 5 apresentaram maior taxa de aproveitamento [87,0 (260/299) vs. 81,7% (241/295), P<0,05], tendência de maior taxa de concepção [51,8 (132/255) vs. 45,0% (108/295), P=0,07], maior taxa de prenhez [44,1 (132/299) vs. 36,6% (108/295), P<0,05], maior número de CL (1,74 ± 0,09 vs. 1,13 ± 0,03, P<0,05) e maior proporção de receptoras com CL único de maior tamanho [CL 22: 65,7 (111/169) vs. 43,1% (94/218), P<0,05] que os tratados no dia 8. Não se observou efeito de dose sobre a taxa de aproveitamento [400: 82,1 (165/201) vs. 500: 83,8 (165/197) vs. 600: 87,2% (171/196), P<0,05], de concepção [400: 51,8 (85/164) vs. 500: 44,1 (71/161) vs. 600: 49,4% (84/170), P<0,05], de prenhez [400: 42,3 (85/201) vs. 500: 36,0 (71/197) vs. 600: 42,9% (84/196), P<0,05] e sobre a quantidade de receptoras com CL único de maior tamanho [400: 46,8 (65/139) vs. 500: 54,9 (73/133) vs. 600: 57,4 (66/115), P<0,05]. Os animais tratados com 600 UI de eCG apresentaram maior número de CL que os que receberam 400 ou 500 UI (400: 1,17 ± 0,03 vs. 500: 1,33 ± 0,06 vs. 600: 1,82 ± 0,12, P<0,05). No grupo que se determinou a CPP4 verificou-se que os animais que receberam eCG no dia 5 apresentaram maiores CPP4 que os do dia 8 (4,68 ± 0,43 vs. 2,73 ± 0,17 ng/ml, P<0,05). As novilhas tratadas com 600 UI de eCG apresentaram maiores CPP que as tratados com 400 ou 500 UI (400: 2,96 ± 0,22 vs. 500: 3,45 ± 0,38 vs. 600: 4,69 ± 0,55, P<0,05). Receptoras com mais de 1 CL apresentaram tendência de menores perdas gestacionais entre 30 e 60 dias de gestação que as com CL único [10,2 (4/49) vs. 17,5% (33/189), P=0,0547]. Os resultados são indicativos de maior eficiência do protocolo de sincronização da ovulação para transferência de embriões em tempo fixo com o uso de eCG no dia 5. A dose de eCG não influenciou na eficiência do tratamento / The aim of this study was to compare the effects of different doses of eCG administrated at two moments in a fixed-time embryo transfer protocol. On day 0, the heifers received a progesterone releasing vaginal insert (PRVI) and an injection of 2.0 mg Estradiol Benzoate (EB) associated with 50 mg progesterone (P4) i.m. The animals were randomly assigned to six treatment groups in a tree by two factorial design to receive 0.15 mg d-cloprostenol (PGF2&#945;) i.m. and 400, 500 or 600 IU eCG on day 5 (G-400d5, n=101; G-500d5, n=98; G-600d5, n=100, respectively) or on day 8 (G-400d8, n=100; G-500d8, n=99; G-600d8, n=96, respectively). On day 8, the PRVI was removed and an injection of 1 mg EB was administered on day 9. On Day 17, all heifers were examined by ultrasonography to determine the number of CL and those with more than one CL or a single CL with a diameter ?18 mm received an in vitro produced embryo. A subset of heifers were bled on day 17 for plasma P4 determination. The animals treated with eCG on day 5 presented higher proportion of heifers selected/treated [87.0 (260/299) vs. 81.7% (241/295), P<0.05], tendency to higher proportion of heifers pregnant/transferred [51.8 (132/255) vs. 45.0% (108/295), P<0.1], higher proportion of heifers pregnant/treated [44.1 (132/299) vs. 36.6% (108/295), P<0.05], higher CL number (1.74 ± 0.09 vs. 1.13 ± 0.03, P<0.05) and higher proportion of recipients with larger single CL [CL 22: 65.7 (111/169) vs. 43.1% (94/218), P<0.05] than those treated with eCG on day 8. Dose effects were not observed in the proportion of heifers selected/treated [400: 82.1 (165/201) vs. 500: 83.8 (165/197) vs. 600: 87.2% (171/196), P<0.05], pregnant/transferred [400: 51.8 (85/164) vs. 500: 44.1 (71/161) vs. 600: 49.4% (84/170), P<0.05], pregnant/treated [400: 42.3 (85/201) vs. 500: 36.0 (71/197) vs. 600: 42.9% (84/196), P<0.05] and proportion of recipients with larger single CL [400: 46.8 (65/139) vs. 500: 54.9 (73/133) vs. 600: 57.4 (66/115), P<0.05]. The animals that received 600 IU eCG presented higher CL number than those received 400 and 500 IU (400: 1.17 ± 0.03 vs. 500: 1.33 ± 0.06 vs. 600: 1.82 ± 0.12, P<0.05). In a subset of heifers that was performed a plasma P4 determination, the group that received eCG on day 5 presented higher plasmatic P4 concentration than those received eCG on day 8 (4.68 ± 0.43 vs. 2.73 ± 0.17 ng/ml, P<0.05). The use of 600 IU eCG presented higher plasmatic P4 concentration than 500 and 600 IU (400: 2.96 ± 0.22 vs. 500: 3.45 ± 0.38 vs. 600: 4.69 ± 0.55, P<0.05). Recipients with more than 1 CL tended to present lower pregnancy losses between 30 and 60 days than those with a single CL [10.2 (4/49) vs. 17.5% (33/189), P=0.0547]. The results suggest higher efficiency in the synchronization of ovulation protocol for fixed-time embryo transfer with eCG administration on day 5. The dose of eCG did not affect the efficiency of treatment

Apoptose é uma forma de morte celular extremamente conservada que tem papel primordial no desenvolvimento animal e na homeostasia celular, agindo como mecanismo de controle de qualidade com a função de remover células danificadas, em excesso ou não-funcionais. Este processo tem papel importante no desenvolvimento embrionário pré-implantacional, pois as células embrionárias estão sujeitas aos danos no DNA que podem ativar mecanismos de reparo de DNA ou induzir apoptose, que culmina com a ativação da enzima caspase-3 responsável pela clivagem de vários substratos celulares. Deste modo, o presente trabalho teve como objetivos determinar a presença da Caspase-3 ativa (+casp-3) e sua influência no desenvolvimento de embriões suínos no estágio de pré-implantação, bem como investigar a detecção de proteínas que atuam no mecanismo de lesão e reparo do DNA. Foram realizados 4 experimentos com oócitos imaturos de fêmeas pré-púberes, obtidos de ovários oriundos de abatedouro, maturados in vitro (MIV) por 44-46 horas. Oócitos em metáfase II (MII) foram ativados partenogeneticamente (AP) com ionomicina e cloreto de estrôncio e cultivados in vitro em PZM3 a 38ºC e 5% CO2 em ar e alta umidade. No primeiro experimento os embriões foram classificados em 4 grupos de acordo com o tempo de clivagem e o número de células: R4 - clivado às 24 horas e com &ge;4 células às 48 horas; R2 - clivado às 24 horas e com 2 ou 3 células às 48 horas; L4 - não clivado às 24 horas e com &ge;4 células às 48 horas; L2 - não clivado às 24 horas e com 2 ou 3 células às 48 horas. Os embriões foram então avaliados no D-6 do CIV para determinação do índice de desenvolvimento até o estágio de blastocisto. Os embriões do grupo R apresentaram maiores índices de blastocisto, R4 - 66,1 (174/263) e R2 - 59,6 (62/104) e maior número de núcleos por blastocisto, R4 - 40,1 e R2 - 37,8, quando comparados ao grupo L, L4 - 15,4 (6/39) e L2-16,8 (13/77); L4-18,5 e L2-18,3 (Qui-quadrado e Tukey-Kramer, respectivamente, P<0,05); entretanto, não houve diferença entre os grupos R4 e R2 e L4 e L2. Para o segundo experimento utilizou-se apenas embriões R e L, classificados às 24hs do início do CIV. Ambos os grupos (R e L) foram destinados à análise de imunocitoquímica para +casp-3 fixados nos D2, D4 e D6, sendo cada um destes dias considerado um sub-experimento e realizado em manipulações diferentes. Foi observada localização citoplasmática da +casp-3 do D2 ao D6 e nuclear a partir do D5 de cultivo. A quantificação relativa da +casp-3 nos grupos R e L de cultivo foi de 2,4 vs 1,4; 1,1 vs 1,0 e 1,1 vs 1,2 para o D2, D4 e D6, respectivamente. Para avaliar a influência da +casp-3 no desenvolvimento de embriões suínos foi realizado o terceiro experimento utilizando o inibidor de caspase z-DEVD-fmk (100uM) durante a MIV, no início (D0 ao D2) ou no final (D4 ao D6) do cultivo. Embriões produzidos sem inibidor foram usados como controle. A presença do inibidor durante a MIV e no final do cultivo não afetou os índices de blastocistos. No entanto, a presença do inibidor durante as primeiras 48 horas de cultivo resultou em maior índice de blastocisto do que o grupo controle, 55,1 (59/107) e 37,5 (39/104) (Qui-quadrado, P<0,05). O último experimento foi realizado para investigar a presença das proteínas de reparo de lesão de DNA, &gamma;H2AX, 53BP1, NSB1 e RAD52, em embriões desenvolvimento R e L. Não foi detectada 53BP1 em embriões suínos AP durante o desenvolvimento inicial. Embriões do grupo L apresentaram maior quantidade de &gamma;H2AX no D-5 quando comparado ao grupo R; entretanto, não houve diferença de marcação para NSB1 e RAD52. Estes dados indicam que o mecanismo de apoptose interfere no desenvolvimento embrionário inicial com efeito positivo do inibidor de caspase, na taxa de blastocisto de embriões suínos AP. Embriões de desenvolvimento L apresentaram um aumento da sinalização às injúrias do DNA, entretanto, a diferenças quanto ao potencial de reparo do DNA lesado em embriões de diferentes potenciais de desenvolvimentos, ainda precisam ser melhor investigadas. / Apoptosis is a highly conserved form of cell death that plays a major role in animal development and cellular homeostasis by acting as a quality control mechanism to remove cells that are damaged, nonfunctional, misplaced or supranumerary. This form of cell death plays a major role on preimplantation embryonic development since embryonic cells are often subject to DNA damage, triggering either DNA damage and repair mechanisms or apoptosis. Once initiated the apoptotic process leads to caspase activation and cleavage of cellular substrates. The aim of the present study was to quantify active Caspase-3 (+casp-3) and to determine the role of this pro-apoptotic enzyme on the development of preimplantation porcine embryos, as well as to investigate the presence and localization of DNA damage and repair proteins. Four experiments were conducted using slaughterhouse immature oocytes collected from pre-pubertal gilt ovaries and in vitro matured (IVM) for 44-46 h. Metaphase II (MII) oocytes were parthenogenetically activated (PA) using ionomycin and strontium chloride and cultured in PZM-3 at 38&ordm;C, 5% CO2 in air and high humidity. In the first study embryos were distributed into 4 groups according to cleavage time and cell number: R4 - cleaved at 24 h with &ge;4-cells at 48 h; R2 - cleaved at 24 h with 2-3 cells at 48 h; L4 - non-cleaved at 24 h with &ge;4-cells at 48 h; L2 - non-cleaved at 24 h with 2-3 cells at 48 h. Group R embryos showed higher blastocyst rates R4-66.1 (174/263) and R2-59.6 (62/104) and more nuclei per blastocyst, R4-40.1 and R2-38.9, when compared to group L L4-15.4 (6/39) and L2-16.8 (13/77); L4-18.5 and L2-18.3 (Chi-square and Tukey-Kramer, P<0.05); however, there were no differences between R4 and R2 or L4 and L2. The second experiment used only early-(R) and late-cleaved embryos (L), classified at 24 h of IVC, fixed at D-2, D-4 and D-6 and then stained for +casp-3 immunofluorescence. In this embryos fixed at D-2, D-4 and D-6 were considered as sub-experiments conducted in different replicates. Active Caspase-3 cytoplasmic signal was detected in cultured embryos from D2 to D6 and nuclear signal was detected from D5 to D6. The relative amount of immunofluorescence signal for +casp-3 for groups R and L at D2, D4 and D6 of culture was 2.4 vs. 1.4; 1.1 vs. 1.0 and 1.1 vs. 1.2, respectively. A third experiment was conducted to evaluate the role of +casp-3 on porcine preimplantation embryos. In this study the Caspase inhibitor Z-DEVD-fmk (100 uM) was supplemented during maturation of porcine oocytes or embryo culture (D0 to D2 or D4 to D6). Addition of the caspase inhibitor during IVM or D4 to D6 of culture did not affect blastocyst rate. However, caspase inhibition from D0 to D2 increased development of porcine embryos to the blastocyst stage [55.1 (59/107) and 37.5 (39/104) for control and Z-DEVD-fmk, respectively; Chi-square, P<0.05). The last experiment investigated the presence of DNA damage and repair proteins &gamma;H2AX, 52BP1, NSB1, and Rad52 in early- and late-cleaved embryos by immunofluorescence. There was no 53BP1 signal in PA porcine embryos at beginning of IVC. Late-cleaved embryos showed higher &gamma;H2AX signal than early-cleaved embryos; however, there was no difference between NSB1 and Rad52 staining between these embryos. In conclusion, apoptosis and DNA damage and repair mechanisms play a role on development of porcine embryos. Active caspase-3 is present in porcine embryos throughout the preimplantation period and inhibition of this enzyme at early stages of in vitro culture can increase blastocyst rate of PA embryos. Moreover, late-cleaved embryos carry higher DNA damage than early-cleaved embryos. Therefore, the relationship between DNA repair mechanism and developmental potential of porcine embryos need to be further investigated.