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Parâmetros a serem considerados nas pulverizações do fungo Isaria fumosorosea para o manejo de Diaphorina citri / Parameters to be considered in the pulverization of the fungus Isaria fumosorosea for the management of Diaphorina citriMarcos Roberto Conceschi 26 May 2017 (has links)
O inseto vetor Diaphorina citri Kuwayama 1907 (Hemiptera: Liviidae) é considerado a principal praga da citricultura mundial. O controle desta praga é feito quase exclusivamente com inseticidas químicos, existindo a demanda por alternativas mais sustentáveis de controle. O desenvolvimento de um bioproduto a base de fungo entomopatogênico pode ser uma alternativa promissora para o manejo integrado de D. citri em pomares comerciais de citros. Assim, esse estudo teve como objetivo viabilizar a utilização do fungo entomopatogênico Isaria fumosorosea ESALQ-1296 para o controle de D. citri, avaliando: 1- a ação de adjuvantes na adesão e germinação de I. fumosorosea em ninfas e adultos de D. citri; 2- a relação entre a viabilidade dos conídios e a mortalidade de D. citri; 3- o efeito da umidade relativa do ar e da radiação ultravioleta na eficácia de I. fumosorosea em condições de laboratório; 4- o período entre a aplicação de fungicidas químicos e I. fumosorosea em campo; 5- a seletividade de I. fumosorosea aos inimigos naturais Tamarixia radiata e Ceraeochrysa cincta em condições de laboratório; 6- o volume de calda adequado para as aplicações de I. fumosorosea para o controle de D. citri em pomares comerciais; 7- a eficiência de I. fumosorosea no manejo de D. citri e seu efeito em outras espécies de artrópodes em dois sistemas de produção de citros. Análises por microscopia eletrônica de varredura revelaram que a adição dos adjuvantes KBRAdj e Silwet L-77 acelerou o desenvolvimento dos conídios de I. fumosorosea na cutícula de todos os estágios do inseto em comparação com o Tween 80. As formulações de I. fumosorosea com KBRAdj 0,075% apresentaram melhor desempenho no controle de D. citri em todos os níveis de umidade, mas especialmente em períodos de baixa umidade relativas (≤50%) e sob exposição à radiação UV-B (> 2 horas) em relação a aplicação com Tween. Os fungicidas Kumus® DF, Kocide® WDG, Nativo®, Flint 500® WG não influenciaram no desempenho do entomopatógeno quando esses foram pulverizados um dia antes ou após a aplicação do fungo sobre os adultos de D. citri. Nos estudos de seletividade foi demonstrado que a maioria das misturas de I. fumosorosea com os adjuvantes foi inócua para os adultos de T. radiata e as larvas neonatas de C. cincta. Em pomares comerciais, foi demostrado que as aplicações de I. fumosorosea foram mais eficientes no volume de 60 mL.m-3 de área de copa. Na área com produção orgânica de citros foi verificado que as aplicações de I. fumosorosea reduziram significativamente a população natural de D. citri e do ácaro da leprose (Brevipalpus spp.). Já na área com produção convencional de citros foi observado que as pulverizações de I. fumosorosea reduziram significativamente a população do ácaro da falsa ferrugem (Phyllocoptruta oleivora) e a população de D. citri foi extremamente baixa em todos os tratamentos. As aplicações de I. fumosorosea não apresentaram efeitos negativos nas populações dos predadores joaninhas, crisopídeos e hemerobídeos. Portanto, conclui-se que a utilização do fungo I. fumosorosea no manejo de D. citri pode ser uma tática sustentável para minimizar as aplicações sistemáticas de pesticidas, diminuindo seus impactos no agroecossistema. / The insect vector Diaphorina citri Kuwayama 1907 (Hemiptera: Liviidae) is the main citrus pest in the world. The control of this pest is done almost exclusively with chemical insecticides, and there is a demand for more sustainable control alternatives. The development of a bioproduct based on entomopathogenic fungi may be a promising alternative for the integrated management of D. citri in commercial citrus orchards. The objective of this study was to evaluate important parameters to increase efficiency of applications of the entomopathogenic fungus Isaria fumosorosea ESALQ-1296 for the control of D. citri. The following studies have been developed: 1- the action of adjuvants on adhesion and germination of I. fumosorosea on nymphs and adults of D. citri; 2- the relationship between the conidia viability and the mortality of D. citri; 3- the effect of relative air humidity and ultraviolet radiation on the efficacy of I. fumosorosea under laboratory conditions; 4 - the period between the application of chemical fungicides and I. fumosorosea in field; 5- the selectivity of I. fumosorosea to the natural enemies Tamarixia radiata and Ceraeochrysa cincta under laboratory conditions; 6 - the volume of syrup suitable for I. fumosorosea applications for the control of D. citri in commercial orchards; 7- the efficiency of I. fumosorosea to management of D. citri and its effect against other species of arthropods in two systems of citrus production. Scanning electron microscopy analysis revealed that the addition of the adjuvants KBRAdj and Silwet L-77 accelerated the development of I. fumosorosea conidia on the cuticle of all stages of the insect compared to Tween 80. The formulations of I. fumosorosea with KBRAdj 0.075% showed better performance in controling D. citri at all moisture levels, but especially in periods of low relative humidity (≤50%) and exposure to UV-B radiation (> 2 hours) compared to Tween application. The fungicides Kumus® DF, Kocide® WDG, Nativo®, Flint 500® WG did not influence the performance of the entomopathogen when they were sprayed the day before or after application of the fungus on D. citri adults. In the selectivity studies, it was shown that most of the mixtures of I. fumosorosea with the adjuvants were innocuous for the adults of T. radiata and the neonates of C. cincta. In commercial orchards, it was demonstrated that I. fumosorosea applications were more efficient in the volume of 60 mL.m-3 of leaves. In the area with organic citrus production it was verified that I. fumosorosea applications significantly reduced the natural population of D. citri and the false spider mite (Brevipalpus spp.). In the area with conventional citrus production it was observed that sprays of I. fumosorosea significantly reduced the population of the false rust mite (Phyllocoptruta oleivora) and D. citri population was extremely low in all treatments. The applications of I. fumosorosea did not present negative effects in the populations of the ladybirds, lacewings and hemerobide predators. Therefore, it is concluded that the use of I. fumosorosea fungus in the management of D. citri can be a sustainable tactic to minimize the systematic applications of pesticides, reducing their impacts on the agroecosystem.
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Associação de Cotesia flavipes (Cam.) com Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok e Beauveria bassiana (Bals.) Vuill no controle da broca da cana-de-açúcar Diatraea flavipennella (Box) (Lepidoptera: Crambidae). / Association of Cotesia flavipes (Cam) With Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok and Beauveria bassiana (Bals.) Vuill in control of borer sugarcane Diatraea flavipennella (Box) (Lepidoptera : Crambidae).SILVA, Cinthia Conceição Matias da 22 February 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-02-22 / Sugarcane Saccharum officinarum (L.) is a crop of great economic importance in Brazil by food production for man and animals, production of ethanol fuel for automotive, and energy cogeneration. One factor that limits the sugarcane productivity is the pests’ infestation that causes losses in agricultural production and in industrial yield due to the sugar decrease per cane ton. The moth borers complex belonging to the Diatraea genus is one of the main problems for the cultivation of sugarcane in all growing regions. In northeastern Brazil, there are the Diatraea saccharalis (Fabr.) and Diatraea flavipennella (Box) species. It is known that the main method of controlling moth borers of Diatraea genus is through Cotesia flavipes (Cam.) larval endoparasitoid, which was introduced in Brazil in 1974 and until today is effective in controlling this pest. However, more recently, the D. flavipennella controlling by C. flavipes has been questioned due to the increasing dominance of this species in the region. Thus, this work aims to assess the interaction of C. flavipes parasitoid in association with the Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok and Beauveria bassiana (Bals.) Vuill fungi for controlling D. flavipennella, the effect of entomopathogenic fungi on the parasitoid, and the predominance quantify of D. flavipennella species in the sugar plantations of Pernambuco State, Brazil. Based on results found in this work, it is expected to clarify the situation, offering subsidy to optimize D. flavipennella control. The experiments were carried out in laboratory and surveys in sugarcane plantations in different regions of Pernambuco. / A cana-de-açúcar Saccharum officinarum (L.) é uma cultura de grande importância econômica no Brasil pela produção de alimentos para o homem e animais, produção de álcool combustível para a indústria automobilística e co-geração de energia. Um dos fatores que limita a sua produtividade é a infestação de pragas que ocasionam perdas tanto na produção agrícola, como no rendimento industrial, pela diminuição de açúcar por tonelada de cana. O complexo de brocas pertencente ao gênero Diatraea constitui um dos principais problemas para a cultura da cana-de-açúcar em todas as regiões de cultivo. No Nordeste do Brasil ocorrem as espécies Diatraea saccharalis (Fabr.) e Diatraea flavipennella (Box). Sabe-se que o principal método de controle das brocas do gênero Diatraea é através do endoparasitoide larval Cotesia flavipes (Cam.), que foi introduzido no Brasil em 1974 e até os dias atuais é eficiente no controle dessa praga. No entanto, mais recentemente, o controle de D. flavipennella por C. flavipes tem sido questionado em virtude da crescente dominância dessa espécie na região. Assim, o presente trabalho tem como objetivos avaliar a interação do parasitoide C. flavipes em associação com os fungos Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok e Beauveria bassiana (Bals.) Vuill no controle de D. flavipennella, o efeito dos fungos entomopatogênicos sobre o parasitoide e quantificar a predominância da espécie D. flavipennella nos canaviais de Pernambuco. A partir dos resultados, espera-se esclarecer a hipótese, oferecendo subsídio para otimizar o controle de D. flavipennella. Os experimentos foram desenvolvidos em laboratório e os levantamentos nas diferentes regiões canavieiras de Pernambuco.
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Efeito da temperatura e da formulação oleosa na germinação e virulência de conídios de Metarhizium anisopliae a Rhipicephalus sanguineus / Effect of temperature and oil-based formulation on germination and virulence of Metarhizium anisopliae conidia against Rhipicephalus sanguineusBarreto, Lucas Prado 08 October 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-10-08 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Resistence of the tick Rhipicephalus sanguineus to chemicals is commonly reported. Entomopathogenic fungi emerge
as an alternative to the exclusive use of chemical acaricides for tick control; however, heat and other environmental
factors may limit the efficacy of fungi. Thus, the current study evaluated the effect of heat on conidial germination of
Metarhizium anisopliae IP 119 when suspended in pure mineral oil (Impex®) or in water (Tween 80, 0.01%) and
applied to the cuticle of R. sanguineus (in vivo) or in artificial medium PDAY (in vitro). Then, the results obtained
with tests in vivo were compared to the results obtained with tests conducted in vitro, and finally, experiments were
conducted to verify the virulence of M. anisopliae IP 119 for R. sanguineus engorged females. Conidial suspensions of
M. anisopliae in water or oil, adjusted to 108 conidia ml-1, were exposed to 0 (control) or 4 h to 45 ± 0.5 °C in a water
bath, and then, individually inoculated onto the dorsal surface of R. sanguineus engorged females. The samples were
incubated at 27 ± 1 °C and RH > 80% for 0, 12, 18, 24, 36, 48 or 72 h. In parallel, aliquots of the aqueous conidial
suspensions (control or 45 °C) were inoculated onto PDAY medium in Petri plates. The samples were incubated at the
same temperature and for the same time periods described above. After each incubation time, ticks were fixed and
dissected, i.e., a fragment of the dorsal cuticle was removed. Cuticles that received conidia suspended in water,
exposed or not to heat, were processed for fluorescence microscopy for evaluation of conidial germination. Cuticles
that received conidia suspended in water or oil, exposed or not to heat, were processed for scanning electron
microscopy for evaluation of conidial germination. Conidial germination on PDAY plates was assessed using a phasecontrast microscope. A minimum of 300 conidia per cuticle or plate was evaluated for calculation of percent
germination. When conidia were exposed to heat, a high percentage of germination was observed in PDAY medium
(61.5%) in comparison to the tick cuticle (13%), 72 h after inoculation. Appressoria were observed 36 h after
inoculation, only in conidia that were not exposed to heat. On tick cuticle, the percentage of germination of conidia
suspended in mineral oil and exposed to heat was high in comparison to the percentage of germination of conidia
suspended in water, at all incubation times investigated. At 36 h of incubation, the mean percentage of germination of
conidia suspended in oil reached 16.3%, whereas conidia suspended in water reached only 2.2%. Conversely, in the
control groups (ticks treated with conidia not exposed to heat), the percentage of germination of conidia suspended in
water or oil differed at 48 and 72 h of incubation, where germination was also high for conidia suspended in oil and
inoculated on the tick cuticle. M. anisopliae conidia suspended in oil exposed or not to heat showed control percentage
greater than the observed with aqueous suspensions. Thus, the results showed a significant delay in germination for
conidia suspended in water and exposed to 45 °C in comparison to conidia suspended in mineral oil; in this sense, the
oil formulation of conidia when exposed or not to heat proved to be more effective for controlling R. sanguineus
engorged females. Moreover, conidia suspended in water germinated faster when inoculated in PDAY than when they
were applied to the tick cuticle. Therefore, the results indicated that the negative effect of heat on conidial germination
was more expressive when conidia were suspended in water and applied to the arthropod cuticle than it would be
predicted by the in vitro thermotolerance tests. Also, conidia suffered less interference from heat exposures when
suspended in oil. In conclusion, mineral oil protects conidia against the heat effects and enhances the fungal
germination on the cuticle of R. sanguineus. / Relatos da resistência do carrapato Rhipicephalus sanguineus a bases químicas utilizadas para controle tem sido
comuns. Neste contexto, os fungos entomopatogênicos surgem como uma alternativa ao uso exclusivo do controle
químico; entretanto, calor e outros fatores ambientais podem limitar a eficácia dos fungos. Sendo assim, o presente
estudo avaliou o efeito do calor sobre a germinação de conídios de Metarhizium anisopliae IP 119 quando suspensos
em puro óleo mineral (Impex®) ou em água (Tween 80, 0,01%) e aplicados sobre a cutícula de R. sanguineus (in vivo)
ou em meio de cultivo BDAY (in vitro). Em seguida, a resposta dos testes in vivo foi comparada a dos testes in vitro, e
bioensaios foram realizados para verificar a virulência do isolado IP 119 para fêmeas ingurgitadas de R. sanguineus.
Suspensões conidiais de M. anisopliae em água ou óleo, ajustadas a 108 conídios ml-1, foram expostas a 0 h (controle)
ou 4 h a 45 ± 0,5 ºC em banho-maria e, em seguida, inoculadas individualmente na superfície dorsal de fêmeas
ingurgitadas de R. sanguineus. Os indivíduos foram incubados a 27 ± 1°C e UR > 80% por 0, 12, 18, 24, 36, 48 ou 72
h. Em paralelo, alíquotas das suspensões conidiais aquosas (controle ou 45ºC) foram inoculadas em placas de Petri
contendo meio BDAY. As amostras foram incubadas na mesma temperatura e pelos mesmos períodos de tempo
descritos acima. Após cada período de incubação, os carrapatos correspondentes foram fixados e dissecados,
retirando-se um fragmento da cutícula dorsal. Cutículas que receberam conídios suspensos em água, e expostos ou não
ao calor, foram processadas para microscopia de fluorescência para avaliação da germinação. Cutículas que receberam
conídios suspensos em água ou óleo, e expostos ou não ao calor, foram processadas para microscopia eletrônica de
varredura para avaliação da germinação. A germinação de conídios em BDAY foi avaliada por microscopia de
contraste de fase. Um mínimo de 300 conídios por cutícula ou por placa foi avaliado para calcular o percentual de
germinação. Verificou-se que quando conídios foram expostos ao calor, um maior percentual de germinação foi
observado em BDAY (61,5%) em comparação com a cutícula do carrapato (13%), 72 h após a inoculação. Apressórios
foram observados 36 h após a inoculação, apenas em conídios que não foram expostos ao calor. Na cutícula de R.
sanguineus, o percentual de germinação de conídios suspensos em óleo mineral e expostos ao calor foi maior em
comparação ao percentual de germinação de conídios suspensos em água, em todos os tempos de incubação
investigados. Com 36 h de incubação, a germinação média de conídios suspensos em óleo chegou a 16,3%, enquanto
conídios suspensos em água apresentavam 2,2% de germinação. Em contrapartida, nos controles, o percentual de
germinação de conídios suspensos em água ou óleo diferiu nos tempos de 48 e 72 h de incubação, onde a germinação
sobre a cutícula também foi maior em conídios suspensos em óleo. M. anisopliae quando suspenso em óleo e exposto
ou não ao calor apresentou percentual de controle de fêmeas maior que o observado nas suspensões aquosas. Sendo
assim, os resultados demonstraram: marcante atraso na germinação dos conídios suspensos em água e expostos a 45 ºC
em comparação aos conídios suspensos em óleo mineral; a formulação oleosa de conídios quando exposta ou não ao
calor mostrou-se mais efetiva para controle de R. sanguineus. Ainda, conídios suspensos em água germinaram mais
rapidamente quando inoculados em BDAY do que quando foram aplicados sobre a cutícula do carrapato. Neste
sentido, permite-se inferir que o efeito negativo do calor sobre a germinação de conídios suspensos em água foi maior
quando os conídios foram aplicados sobre a cutícula do artrópode do que seria previsto nos testes in vitro, e os
conídios sofreram menor interferência do calor quando suspensos em óleo. Portanto, conclui-se que o óleo mineral
protege os conídios contra a ação do calor e potencializa a germinação do fungo na cutícula de R. sanguineus.
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Desenvolvimento de formulações multiparticuladas contendo microescleródios do fungo Metarhizium anisopliae para controle biológico / Development of multiparticulate formulations containing microsclerotia of Metarhizium anisopliae for biological controlSantos, Thainá Rodrigues 23 September 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-09-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Introduction and objective: Metarhizium anisopliae is one of the most studied fungi for biological control, since it is found naturally associated with ticks and has showed high virulence in laboratory conditions. M. anisopliae can form in vitro an overwintering structure called microesclerotia (MS). The microsclerotia have been shown to be more effective than products based on conidia when applied directly to the soil for control of some pests. Thus, the objective of this study was to develop and characterize inorganic pelletized formulations containing microsclerotia of M. anisopliae IP119, assess its stability under storage at 4°C and 40°C and determine its tolerance to UV-B radiation. Methods: Six pellets formulations composed of diatomaceous earth, vermiculite, aluminum magnesium silicate or colloidal silicon dioxide, alone or in combination, were developed and evaluated. The pellets were obtained using the extrusion-spheronization technique and were dried in a fluid-bed dryer with an outlet air temperature kept at 40°C or 50°C. During drying, at pre-determined time intervals, samples were collected for evaluation of the residual moisture content, conidia production and viability. The pellets were also evaluated for their storage stability at 4°C and 40°C. Conidia production and viability were evaluated after storage periods of 7 to 21 days. In addition, UV-B tolerance of the conidia and pellets containing MS was evaluated by exposing them to the artificial light for 4h (irradiance of 541,54 mW/m2) and 12h (irradiance of 1239,23 mW/m2), respectively. Results and Discussion: Inorganic pellets were obtained and the selected formulation was composed by vermiculite, diatomaceous earth and colloidal silicon dioxide (78:20:2), since it showed the best yield (48%), size distribution (from 431.5 to 758.5 μm), average size (584.90 μm ± 122.40) and sphericity (0.75 ± 0.07). There was a considerable reduction of the residual moisture between time 0 (~29%) and 5 minutes (~6%), which remained stable until the end of drying operation. Thus, pellet drying for a 5 minutes period at 40ºC or 50°C resulted in a proper moisture content. Fluid-bed dried pellets presented conidia production always above 1.7x109 conidia/g pellets, with viability > 93%, at all times and for both temperatures. In the pellet storage at 40°C, a contamination was observed after the 7th storage day, without differences in conidia production (~1.3x109 conidia/g of pellets) and viability (> 94%). At 4°C, the conidia production and viability remained stable until the 21th storage day. Regarding the tolerance to UV-B radiation test, the calculated LD50 of M. anisopliae conidia was 5.545 (kJ/m2) ± 0.059. In the exposed pellets containing microsclerotia germination was >98%, and it was observed high conidia production (>1,6x109 conidia/g of pellets). Conclusion: It can be concluded that the inorganic formulation allow to obtain pellets containing fungal material by extrusion-spheronisation technique with maintenance of fungal viability after drying, resulting in a formulation with high UV-B tolerance. This solid platform has a great potential for use in pest biological control. / Introdução e objetivo: Metarhizum anisopliae é uma das espécies de fungos entomopatogênicos mais estudadas em controle biológico por estar naturalmente associada a carrapatos e por apresentar alta virulência em condições laboratoriais. M. anisopliae é capaz de, sob condições in vitro, formar uma estrutura de resistência denominada microescleródio (ME). Os microescleródios têm-se mostrado mais eficazes do que produtos à base de conídios, quando aplicados diretamente ao solo para o controle de algumas pragas. Assim, o objetivo do presente trabalho consistiu em desenvolver e caracterizar formulação inorgânica peletizada contendo microescleródios de M. anisopliae IP119, avaliar sua estabilidade sob armazenamento a 4ºC e a 40ºC, e determinar sua tolerância à radiação UV-B. Métodos: Foram desenvolvidas e avaliadas seis formulações de pellets compostas por terra diatomácea, vermiculita, silicato de alumínio e magnésio ou dióxido de silício coloidal, de forma isolada ou em combinação. Os pellets foram obtidos pela técnica de extrusão-esferonização e a secagem foi realizada em leito fluidizado com temperatura do ar de saída mantida a 40ºC ou 50ºC. Durante a secagem, em intervalos pré-determinados de tempo, amostras foram coletadas para avaliação da umidade residual, produção e viabilidade de conídios. Além disso, avaliou-se a produção e a viabilidade de conídios após armazenamento dos pellets por 7 a 21 dias. Para a avaliação da tolerância de conídios e pellets contendo ME frente a radiação UV-B, os materiais foram expostos por até 4 horas (irradiância de 541,54 mW/m2) ou 12 horas (irradiância de 1239,23 mW/m2), respectivamente. Resultados e Discussão: Pellets com constituintes totalmente inorgânicos foram obtidos e a formulação selecionada foi àquela composta por vermiculita, terra diatomácea e dióxido de silício coloidal (78:20:2), que apresentou características de rendimento (48%), distribuição de tamanho (431,5 a 758,5 μm), tamanho médio (584,90 μm ± 122,40) e esfericidade (0,75 ± 0,07) adequados. Houve redução considerável da umidade residual entre o tempo 0 (~29%) e 5 minutos de secagem (~6%), e a umidade residual permaneceu estável até o final da operação. Dessa forma, a secagem dos pellets pelo período de 5 minutos a 40ºC ou a 50ºC se mostrou satisfatória. Além disso, os pellets selecionados e secos por leito fluidizado apresentaram produção de conídios sempre superior a 1,7x109 conídios/g de pellets, e a viabilidade dos mesmos foi maior do que 93%, em todos os tempos analisados e para ambas as temperaturas. Houve contaminação dos pellets sob armazenamento a 40ºC após o 7º dia de ensaio, sem diferença de produção (~1,3x109 conídios/g de pellets) e de viabilidade (>94%) dos conídios. Já na temperatura de 4ºC, a produção e a viabilidade dos conídios permaneceram estáveis até o 21º dia de armazenamento. No ensaio de tolerância à radiação UV-B, a DL50 estimada para os conídios de M. anisopliae foi de 5,545 ± 0,059 (kJ/m2), ao passo que para os pellets contendo microescleródios foi observada a manutenção da germinação (>98%) e uma elevada produção de conídios (>1,6x109 conídios/g de pellets). Conclusão: No presente trabalho, foi possível obter, pela técnica de extrusão-esferonização, pellets inorgânicos contendo material fúngico, com manutenção da viabilidade fúngica após secagem e alta tolerância à radiação UV-B, representando grande potencial para uso no controle biológico de artrópodes-praga.
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Comparação das propriedades bioquímicas das quitinases produzidas por diferentes isolados de Metarhizium anisopliae / Comparison of biochemical properties of chitinases produced by different Metarhizium anisopliae isolatesCynthia Barbosa Rustiguel 30 April 2014 (has links)
Os fungos entomopatogênicos, como Metarhizium anisopliae, têm despertado grande interesse como agentes no controle de insetos-pragas. Estas espécies de fungos são especializadas na secreção de um complexo enzimático constituído de proteases, lipases e quitinases, entre outras, estando relacionadas com patogenicidade e virulência. Neste contexto a foi analisada a secreção de quitinases pelos isolados IBCB 167, IBCB 360, IBCB 384 e IBCB 425 de M. anisopliae var. anisopliae, como identificado molecularmente. Contudo, alguns aspectos morfológicos analisados mostram pequenas diferenças entre estes isolados. Para produção de quitinases, os isolados foram cultivados em fermentação submersa na presença e ausência de indutores e em fermentação em estado sólido, tendo crisálida como substrato. A maior síntese de quitinase intracelular foi obtida para IBCB 425 no meio contendo extrato de levedura mais glicose (EG). Visando a produção da enzima extracelular e disponibilidade de fonte de carbono, o meio extrato de levedura mais crisálida (EC), sob agitação foi padronizado para fermentação submersa (FSbm). Os maiores níveis enzimáticos intracelulares para os isolados IBCB 167, IBCB 360, IBCB 384 e IBCB 425 foram obtidos entre 72 h e 216 h e para a forma extracelular entre 96h e 144h. A produção quitinásica em fermentação sólida (FSS) utilizando crisálida como fonte de carbono foi otimizada por delineamento composto central rotacional (DCCR, tendo como variáveis o tempo de crescimento e umidade. O melhor produtor de quitinase em FSS foi o isolado IBCB 360. A análise do secretoma mostrou um maior número de proteínas quando os isolados foram cultivados na presença do indutor, com destaque para o isolado IBCB 425. A maioria das proteínas secretadas pelos isolados IBCB 167 e IBCB 384, foram identificadas, estando entre elas a endo-N-acetyl--D-glucosaminidase, enzima do complexo quitinolítico. As quitinases produzidas pelos quatro isolados foram parcialmente purificadas em DEAE Celulose, obtendo-se dois picos de atividade quitinásica. O processo de purificação foi continuado para o IBCB 384 em coluna de exclusão molecular, obtendo se um único pico de atividade quitinásica, analisado por electrospray. A temperatura ótima de atividade para as quitinases produzida em FSS pelos isolados IBCB 167, IBCB 360, IBCB 384 e IBCB 425 variou de 50ºC a 60ºC e pH ótimo de atividade ficou na faixa de 5,0 - 5,5. As quitinases dos isolados mantiveram-se estáveis nas temperaturas de 30ºC e 40ºC e em uma ampla faixa de pH. Os sais BaCl2 e MnCl2 ativaram as quitinases dos isolados IBCB 167 e IBCB 425. Além disso, todas as quitinases foram tolerantes ao - mercaptoetanol. O comportamento cinético de todas as quitinases foi Michaeliano e a maior afinidade pelo substrato foi para a quitinase do isolado IBCB 360. Já os experimentos in vivo e in vitro mostraram que o isolado IBCB 425 foi melhor na fase pré-infecção e isolado IBCB 384 foi melhor na fase pós infecção, sendo o mais virulento. Portanto, os isolados M. anisopliae têm se mostrado como bons produtores de quitinases, com boa estabilidade a temperatura e pH além de outras características distintas que provavelmente estão relacionadas com o potencial de patogenicidade e virulência de cada isolado. / Entomopathogenic fungi such as Metarhizium anisopliae, have been attracting great interest as agents to control insect pests. These species of fungi are specialized in the secretion of an enzymatic complex consisting of proteases, lipases and chitinases, among others which are related to pathogenicity and virulence. In this context the secretion of chitinase by IBCB 167, IBCB 360, IBCB 384 and IBCB 425 isolated from M. anisopliae var. anisopliae molecularly identified, were analyzed. However, some structural features analyzed showed small differences among these isolates. For chitinase production, the isolates were grown in submerged culture in the presence and absence of inducers and under solid state fermentation with chrysalis as substrate. The enhanced synthesis of intracellular chitinase was obtained with IBCB 425 using yeast extract plus glucose (EG). Aiming to produce the extracellular enzyme and the carbon source available, the medium yeast extract and chrysalis (EC), was standardized to SbmF. The high intracellular enzymes levels produced by IBCB 167, IBCB 360, IBCB 384 and IBCB 425 isolates were obtained between 72 h and 216 h and for the extracellular form between 96h and 144h. The chitinase production in SSF using chrysalis as carbon source was optimized by CCRD, having the time of growth and moisture as variables. The best producer of chitinase in SSF was the isolated IBCB 360. The analysis of the secretome showed a great number of proteins when the isolates were grown in the presence of the inducer, especially for the isolated IBCB 425. Most of the proteins secreted by IBCB 167 and IBCB 384 isolates were identified. Among these proteins the endo-N-acetyl--D-glucosaminidase was identified, enzyme that participates in the chitinulitic complex. Chitinases produced by the isolates were partially purified on DEAE - cellulose, yielding two peaks of chitinase activity. The purification process was continued for IBCB 384 isolated using molecular exclusion chromatographic column, yielding only one peak of chitinase activity, analyzed by electrospray. The optimal temperature for the chitinase activity from IBCB 167, IBCB 360, IBCB 384 and IBCB 425 isolates obtained in SSF, ranged from 50 ºC to 60 ºC and the optimum pH of activity was 5.0 to 5.5. All chitinases were stable at 30 ºC and 40 ºC, and wide pH range. The BaCl2 and MnCl2 salts activated the chitinases of IBCB 167 and IBCB 425 isolates. In addition, all chitinases were mercaptoethanol tolerant. The kinetic behavior of all chitinases was Michaelian with the highest affinity to the substrate observed for the chitinase of isolated IBCB 360. The in vivo and in vitro experiments showed that isolated IBCB 425 was better in pre -infection phase and the isolated IBCB 384 was better in the post infection phase. Therefore, the M. anisopliae isolates were good producers of chitinases with interesting temperature and pH stability, and other different characteristics that are probably related to the potential pathogenicity and virulence of each isolate.
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Contribuição ao controle biológico de Rhynchophorus palmarum - atividade de vôo, eficiência de autoinoculação e caracterização molecular de isolados de Beauveria bassiana / Contribution to the biological control of Rhynchophorus palmarum - flight activity, autoinoculation efficiency and molecular characterization of Beauveria bassianaMendonça, Marcelo da Costa 28 February 2007 (has links)
The coleoptera Rhynchophorus palmarum (L.), vulgarly known as palm weevil is
considered on of mainly pest of several palm trees of economic importance. In
coconut tree their larvae destroy the plant culms and their adults act like a vector of nematode Bursaphelenchus cocophilus that cause the red ring disease. With the objective of subside the practices of biological control of R. palmarum already utilized it was carried out tests aiming to determine the flight activity of the insect in coconut fields; to validate the technique of autoinoculation of adults of R. palmarum using traps like vegetal traps bait inoculated with the Beauveria bassiana enthomopatogenic fungi; and to characterize genetically isolates of the fungi by molecular makers of RAPD, microsatellites and ITS-DNAr. To determine the flight activity of the insect it was installed, around the commercial field, traps of
capture/monitoring for population of R. palmarum adult’s insect, containing attractive feed (culms of sugar cane) added with pheromone of aggregation. For the autoinoculation tests it was used the randomized statistical design, in a factorial scheme 3x4 (3 spores concentration of the fungi and 4 periods of autoinoculation), using four replications constituted by 5 pairs of males and females. The insects were separated, cleaned with distilled water and transfer to buckets with sugar cane culms inoculated with B. bassiana on concentrations 107, 108 and 109 spores/mL of suspension), keeping in contact with the inoculums for 45min.; 90min.; 3h00 and 6h00. After this period of exposition the insects were individualized being the mortality/infection evaluated for 20 days. For genetic characterization it was used 11 isolates obtained from monospores cultures that posterior were inoculated in a liquid medium at 25ºC±1ºC under constant shaking in dark conditions. After seven days the mycelium were filtered, lyophilized and after DNA extracted in SDS buffer at 10%. It was tested 20 decamer primers of arbitrary sequence of IDT Company. The amplifications were carried out in termocycler (Biometra/Unisciense) programmed for initial temperature of 94°C for 5min. and 45 cycles of: 94°C for 1min., 36°C for 2min. and 72°C for 1min.. For microsatellites analyses it was used four pairs of primers. The amplification reactions were carried out using a volume of 25µL. The amplifications consisted by one initial cycle of 94ºC and 30 cycles of 94ºC for 1min.; 50ºC for 1min. and 72ºC for 2min., and a end cycle of 72ºC for 7min.. The amplified fragments were separated by electrophoresis in agarose gel using TBE buffer, and the gel stained with ethidium bromete (0.5µg/mL) after visualized under UV light. The insect initiates flight activity at 5h00 am through 6h00 pm o’clock occurring the population maximum at 9h00 am to11h00 am. It was verified the mortality increase of adults of R. palmarum in accord to fungi concentration and period of exposition of the
inoculums. The higest index of mortality (53%) occurred nine days after the
autoinoculation by B. bassiana. The RAPD analysis generated 138 polymorphic and 14 monomorphic bands being the patterns used to calculate the genetic similarity that varies of 2% to 77%. The 57.99 (Betume2-SE) and 53.96 (Mojú-PA) isolates presented high similarity (77%), followed by 64.99 (Egypt) and 53.96 (Mojú-PA), with similarity of 73% by RAPD test. For microssatellite the BC.05 and 32.91 isolates presented genetic similarity of 82%, followed by 64.99 and 57.99 with genetic similarity of 80%. It was not observed amplifications variations using ITS regions for B. bassiana isolates. / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Alagoas / O coleóptero Rhynchophorus palmarum (L.), vulgarmente conhecido como broca-doolho-do-coqueiro é considerado uma das principais pragas de palmeiras de
importância econômica. Suas larvas destroem a estipe da planta e os adultos atuam como vetores do nematóide Bursaphelenchus cocophilus causador da doença “anel vermelho”. Com o objetivo de subsidiar as práticas de controle biológico do R. palmarum já empregadas, foram realizados testes visando: determinar a atividade de vôo do inseto em plantios de coco; validar a técnica de autoinoculação de adultos de R. palmarum usando armadilhas com iscas vegetais inoculadas com o fungo entomopatogênico Beauveria bassiana e caracterizar geneticamente isolados do fungo por meio de marcadores moleculares do tipo RAPD, microssatélite e ITS-DNA. Para determinar a atividade de vôo do inseto foram instaladas, na periferia de pomares comerciais de coco, armadilhas de captura/monitoramento da população de adultos de R. palmarum, contendo atrativo alimentar (colmos de cana-de-açúcar) mais feromônio de agregação. Nos testes de autoinoculação utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3x4 (3 concentrações do fungo e 4 tempos de autoinoculação), com 4 repetições de 5 casais. Os insetos foram separados, limpos em água destilada e transferidos para baldes contendo cana-de-açúcar inoculada com B. bassiana nas concentrações padronizadas (107, 108 e 109 esporos/mL de suspensão), permanecendo em contato com o inóculo por 45min.; 90min.; 3h00 e 6h00. Após o período de exposição ao fungo, os insetos foram individualizados, sendo a mortalidade/infecção avaliada por 20 dias. Na caracterização genética foram utilizados 11 isolados, para os quais foram obtidas culturas monospóricas que posteriormente foram repicadas, em meio líquido a 25ºC±1ºC, em agitação constante e no escuro. Após sete dias os micélios
foram filtrados, liofilizados e em seguida seu DNA genômico extraído em tampão de extração SDS 10%. Foram testados 20 primers decâmeros de seqüência arbitrária da marca IDT. As amplificações foram realizadas em termociclador
(Biometra/Unisciense) programado com temperatura inicial de 94°C por 5min. e 45
ciclos a 94°C por 1min., 36°C por 2min. e 72°C por 1min.. Para as análises de
microssatélites foram empregados quatro pares de primers. As reações de
amplificação foram feitas em um volume de 25µL. As amplificações consistiram de
um ciclo inicial de 94ºC e 30 ciclos de: 94ºC por 1min.; 50ºC por 1min. e 72ºC por
2min., ao final 1 ciclo de 72ºC por 7min. Os fragmentos amplificados foram
separados em gel de agarose, submetidos à eletroforese em tampão TBE, corados com brometo de etídio (0,5 µg/mL) e visualizados sob luz UV. Observou-se que o inseto inicia sua atividade de vôo as 5h00 até às 18h00, ocorrendo um pico populacional máximo das 9h00 às 11h00. Verificou-se uma mortalidade crescente de adultos de R. palmarum em função do aumento da concentração do fungo e dos tempos de exposição ao inóculo. O maior índice de mortalidade (53%) ocorreu nove dias após a autoinoculação do inseto. As análises de RAPD geraram 138 bandas polimórficas e 14 monomórficas, sendo os padrões empregados para o cálculo das similaridades genéticas que variaram de 2% a 77%. Os isolados 57.99 (Betume2-SE) e 53.96 (Moju-PA) apresentaram maior similaridade (77%), seguidos de 64.99 (Egito) e 53.96 (Moju-PA), com uma similaridade de 73% pelo teste de RAPD. Enquanto que para o microssatélite os isolados BC.05 e 32.91 apresentaram maior similaridade genética (82%), seguidos de 64.99 e 57.99 com similaridade genética de 80%. Não foram observadas variações na amplificação das regiões ITS de DNAr para os isolados de B. bassiana.
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Distribuição espacial, efeito do manejo da palha pós-colheita e da aplicação de Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin (Hypocreales: Cordycipitaceae) na ocorrência de Sphenophorus levis Vaurie, 1978 (Coleoptera: Curculion / Spatial distribution, effect of post-harvest management of straw and Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin (Hypocreales: Cordycipitaceae) application in the occurrence of Sphenophorus levis Vaurie, 1978 (Coleoptera: Curculionidae) in sugarcaneCanassa, Fernanda 23 January 2015 (has links)
O Brasil é o maior produtor de cana-de-açúcar (Saccharum officinarum L.) do mundo e a cultura continua em expansão na safra 2014/15. A expansão das áreas de plantio de cana-de-açúcar e o sistema de colheita mecanizada de cana crua tem levado ao aumento proporcional de inúmeras pragas da cultura, destacando-se o bicudo da cana, Sphenophorus levis, considerado praga primária e limitante da cultura. Inicialmente, essa espécie foi considerada restrita a região de Piracicaba, mas desde 2010 foi encontrada nos estados de São Paulo, Minas Gerais, Paraná, Mato Grosso do Sul, Mato Grosso e Goiás. Suas larvas abrem galerias nos rizomas, causando danos diretos nos tecidos dos colmos, sobretudo nas épocas mais secas do ano, o que ocasiona a morte das touceiras, falhas na rebrota, além de promover danos indiretos, como o aumento do número de plantas invasoras que competem com a cultura. Os métodos químico, mecânico, cultural e biológico já foram testados até o momento, no entanto, o sucesso no seu controle ainda não foi obtido e a população dessa praga continua crescendo e se tornando mais constante nos canaviais pelo Brasil. Dessa forma, estudar estratégias para a melhoria do manejo de S. levis é fundamental para o estabelecimento de métodos de controle eficientes no contexto do MIP. Diante disso, objetivou-se com esse trabalho: 1) Determinar a distribuição espacial e a flutuação populacional de S. levis; 2) Testar o manejo da palha pós-colheita nas linhas de plantio na ocorrência de S. levis e; 3) Avaliar a eficácia da aplicação de Beauveria bassiana na população de S. levis. Em relação à flutuação populacional de S. levis foi observada uma elevação linear da última quinzena de outubro para a primeira de novembro, com queda subsequente e, aumento populacional maior à partir da última quinzena de dezembro. O pico populacional se deu no mês de março, seguido por uma rápida redução a partir de abril. A proporção de fêmeas foi similar a de machos em todos os tratamentos. Os dados sugerem que não houve efeito dos tratamentos na distribuição de adultos do bicudo. Os resultados da flutuação populacional, da distribuição de frequência e distribuição espacial se complementam, pois, em hipótese, a distribuição dos adultos está diretamente relacionada com a flutuação populacional, uma vez que em altas densidades a distribuição foi agregada. Além disso, as estratégias de afastamento da palha da linha de plantio não interferiram nos níveis de infestação de S. levis, quando comparado ao tratamento que não houve manejo da palha e, essa tática utilizada conjuntamente à aplicação de B. bassiana também não influenciou na densidade populacional de adultos de S. levis no período avaliado. Diante disso, concluiu-se que a distribuição de S. levis em cana-de-açúcar apresenta o padrão agregado em altas densidades populacionais; o manejo da palha entre as linhas de cana-de-açúcar não reduz a densidade populacional de S. levis em locais com elevado histórico de infestação e, são necessários mais estudos para ajustar a dose de B. bassiana adequada e eficaz no controle de S. levis. / Brazil is the world\'s largest sugarcane producer and the cultivated area continues to expand in 2014/2015 season. This expansion, along with the mechanical harvesting of green sugarcane leads to a proportional increase in the number of crop pests, especially the sugarcane weevil, Sphenophorus levis, considered a primary and limiting pest in this crop. Initially, this species was restricted to the Piracicaba region, however, since 2010 it has been found in several regions of São Paulo State, and also in other states in the country, such as Minas Gerais, Paraná, Mato Grosso do Sul, Mato Grosso and Goiás. The larvae penetrate the basal part of the plants and the rhizomes, building irregular galleries and causing damage to stem tissues, mainly in the driest season, leading to the death of clumps, failures in regrowth and, consequently, indirect damage due to the increase in the incidence of invasive plants that compete with the crop. Chemical, mechanical, cultural and biological methods have already been tested, however, the success in pest control has not yet been achieved and the population of S. levis continues to grow, becoming more constant in Brazilian sugarcane fields. Thus, the study of strategies to enhance the management of S. levis is essential to adopt effective control methods in the IPM framework. In this sense, this study aims to: 1) Determine the spatial distribution and population dynamics of S. levis; 2) Evaluate the postharvest management of straw on planting rows in occurrence of S. levis and; 3) Evaluate the efficacy of B. bassiana application in the S. levis population in sugarcane. Concerning population dynamics of S. levis, it was observed a linear increase beginning in the last quarter of October until November, with a subsequent decrease and, a highest population increase was observed in the last half of December. The population peak occurred in March, followed by a fast decline in early April. The proportion of females to males was similar in all treatments. The data suggest that there was no effect of treatments on the distribution of adult weevils. The results of population dynamics, frequency distribution and spatial distribution are complementary, because, hypothetically, the distribution of adults is directly related to population dynamics, since at high densities the distribution was aggregated. In addition, strategies for straw management in the planting row did not affect the infestation levels of S. levis and this procedure along with the addition of B. bassiana did not influence population density of adults during the study period. Hence, it is concluded that the distribution of S. levis in sugarcane exhibits an aggregated pattern at high population densities. Straw management between the cane rows does not reduce population density of S. levis in areas with high historical infestation. Therefore, further studies are needed to adjust the appropriate and effective concentration of B. bassiana in the control of S. levis.
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Aplicação do fungo Metarhizium anisopliae em pastagem visando o controle do carrapato Boophilus microplus em bovinosGarcia, Marcos Valério [UNESP] 25 January 2008 (has links) (PDF)
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garcia_mv_dr_jabo.pdf: 282112 bytes, checksum: 05e978f0649d572c4c498e6b838390fe (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho objetivou avaliar o efeito da aplicação de Metarhizium anisopliae em pastagem de Brachiaria decumbens naturalmente infestada, submetida ao pastejo com bovinos, visando o controle do carrapato Boophilus microplus. O estudo foi realizado no período de maio de 2006 a março de 2007, em pastagem de B. decumbens, implantada em solo de textura argilosa da Fazenda do Glória, pertencente à Universidade Federal de Uberlândia (UFU), em Uberlândia, MG. Utilizou-se população de B. microplus naturalmente existente na pastagem com área de 12.000 m2 e 24 novilhos mestiços com cerca de 1 ano de idade, como hospedeiros experimentais. A randomização dos animais foi feita pela contagem de fêmeas ingurgitadas (instar entre 4,5 a 8 mm de comprimento), no terceiro, segundo e primeiro dias anteriores à primeira aplicação do fungo na pastagem. A área da pastagem foi então dividida em dois pastos com 6.000 m2, e grupos homogêneos de 12 animais foram introduzidos em cada pasto, determinando-se por sorteio o pasto tratado e o controle. Para pulverizar o pasto tratado, foram utilizados 5 a 6 kg de arroz contendo o isolado E9 de M. anisopliae esporulado, com os quais se produziu 400 L de suspensão conidial, quantidade suficiente para pulverizar, em média, 66,7 mL de suspensão por metro quadrado de pasto... / In this work the efficacy of spraying Brachiaria decumbens pasture with Metarhizium anisopliae against natural infestation with the cattle tick Boophilus microplus was evaluated. The study was conducted from May 2006 to March 2007 at the Gloria farm from the Federal University of Uberlândia, in Uberlândia, Minas Gerais, Brazil. Experimental pasture of 12.000 m2, naturally infested with B. microplus and had 24 one year old mixed breed bovines was used. The area was halved in two pastures of 6.000 m2 and each pasture received 12 animals. Tick susceptibility of bovines of each area was similar. Pastures were than sprayed with either a conidial suspension of E9 M. anisopliae isolate (treated pasture) or the conidial suspension vehicle without the fungus (control pasture). Pastures were sprayed 12 times with 21 day intervals between applications. Bovines remained on the pasture during the spraying. Fungus persistence on the soil and the grass was evaluated on first, seven and 14 days after each spraying. Pasture infestation with larvae and animal infestation with engorging female ticks were evaluated 17, 19, 21, 26 and 33 days after each pasture treatment ...(Complete abstract, click electronic access below)
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Avaliação da patogenicidade de Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae, sobre os diferentes estádios de Rhipicephalus sanguineus no cão e no ambientePrette, Nancy [UNESP] 30 October 2007 (has links) (PDF)
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Previous issue date: 2007-10-30Bitstream added on 2014-06-13T21:05:10Z : No. of bitstreams: 1
prette_n_dr_jabo.pdf: 397603 bytes, checksum: f2f29adeabc306b7b382c01f4d6b99d5 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho teve como objetivo avaliar “in vitro”, a ação de Beauveria bassiana e Metarhizium anisopliae, para larvas, ninfas e adultos machos e fêmeas não alimentadas de Rhipicephalus sanguineus e para onde as mesmas fases do ciclo de vida do ácaro mantidas alimentadas em cães por meio de câmaras de alimentação coladas no dorso do animal. A ação no ambiente habitado pelo cão foi avaliada por meio de infestações naturais em boxes com todos os estádios do ácaro. Foram usadas suspensões contendo 108 conídios mL-1 de cada isolado. Nos ensaios com as fases não alimentadas os estádios foram imersos nas suspensões dos fungos e no ensaio com de alimentação no cão os diversos estádios do ciclo biológico do carrapato foram imersos ou pulverizados com as suspensões de conídios, e no ensaio do ambiente do cão as suspensões foram pulverizadas em todo o canil. Nos ensaios “in vitro” foram avaliadas a mortalidade de larvas, ninfas e adultos machos e fêmeas, e no ensaio com alimentação no cão avaliou-se a mortalidade de cada estádio e os indivíduos sobreviventes foram colocados para ingurgitar em coelhos, para avaliação dos estádios subseqüentes do ciclo do carrapato, até se obter novamente a mesma fase em que iniciaram o ciclo. No ensaio do ambiente do cão foi avaliada diariamente a infestação dos animais com as diversas fases do ciclo de vida do ácaro. B. bassiana e M. anisopliae promoveram significativa redução da sobrevivência de todos os estádios não alimentados, deixando claro a atividade patogênica para a fase não alimentada de R. sanguineus. No experimento com a alimentação em cães, B. bassiana promoveu mortalidade de fêmea, mas não houve mortalidade de larvas e ninfas, fato este também observado para M. anisopliae... / This work aimed to assess the in vitro” action of Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae, for unfed larvae, nymphs and adult male and female of Rhipicephalus sanguineus and for the same stadiums the tick life cycle maintained fed on dogs through feeding cameras fixed on dog’s dorsal region. The action on the ambient where the dog lives was also evaluated through natural infestations with all of the stadiums of the acarid. Suspensions containing 108 conidia mL-1 of each isolated were used. In every assay with the unfed phase, the stadiums were immersed in the suspensions of the fungus and in the assays with feeding cameras, all the phases of the biological cycle of the tick were immersed or powdered with the conidial suspension and in the assay in the ambient suspensions were spread powdered in the whole box. In the in vitro assays it was evaluated the larvae, nymphs and adult male and female mortality. In the feeding cameras assay, the mortality of each stadium was evaluated and the surviving individuals were put for engorged in rabbits, to evaluate subsequent stadiums of the cycle of the tick, until obtain the same stadium wich was attained at the moment they began the cycle. In the environmental assay it was daily evaluated the infestation of the animals with all the phases of the life cycle of the acarid. B. bassiana and M. anisopliae promoted a significant reduction of the survival rate of all unfed stadiums of the tick what brings a strong evidence of pathogenicicity to unfed phases of R. sanguineus. In the experiment with feeding cameras, B. bassiana promoted female mortality, but mortality of larvae and nymphs were not observed fact this also observed for M. anisopliae. In the environment of the dog naturally infested with the stadiums of R. sanguineus was possible to observe that B. bassiana reduced the number of unfed and engorged larvae in the first week after treatment ...(Complete abstract click electronic access below)
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Avaliação de nematóides entomopatogênicos no controle de Bradysia Mabiusi (Diptera: Sciaridae)Tavares, Fernando Martins [UNESP] 12 March 2010 (has links) (PDF)
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tavares_fm_dr_botfca.pdf: 538754 bytes, checksum: da1ec50d10839c5269a5a1390715eb52 (MD5) / Fundação de Apoio à Pesquisa Agrícola (FUNDAG) / Nematóides entomopatogênicos (NEPs) dos gêneros Heterorhabditis e Steinernema vem sendo utilizados para o controle de mosca-dos-fungos em diversos países. Esse estudo teve por objetivo avaliar diferentes isolados de NEPs, contra larvas de Bradysia mabiusi, em condições de laboratório e casa de vegetação. Nos testes de seleção de isolados, o nematóide Heterorhabditis indica apresentou melhor desempenho comparado a todos os demais isolados, proporcionando mortalidade do inseto de até 98%. Para o estudo em casa de vegetação, avaliou-se o efeito dos nematóides entomopatogênicos Heterorhabditis indica e Steinernema feltiae, nas dosagens de 10, 50 e 100 JI/cm2, em cultivo protegido de Chrysanthemum sp. Foram realizados 3 experimentos. Houve diferença significativa entre os tratamentos somente no terceiro teste, entretanto, nos três testes os nematóides demonstraram uma tendência de redução na população do inseto, em função do aumento das dosagens, o que sugere o efeito dos agentes no controle do inseto. Da mesma forma, em todos os testes, o nematóide H. indica apresentou maior redução na população da mosca-dos-fungos que o S. feltiae, confirmando sua maior eficiência com níveis de controle variando de 6 a 67,5% no primeiro ensaio, de 17 a 77,5% no segundo, e de 62,5 a 78,5% no terceiro. Os resultados revelam que H. indica apresenta potencial de uso para o controle da mosca-dos-fungos. / Entomopathogenic nematodes (EPNs) of the genus Heterorhabditis and Steinernema have been use against the fungus gnat in several countries. This study aimed to evaluate different strains of EPNs against larvae of Bradysia mabiusi, in laboratory and greenhouse conditions. At the screening of EPNs, the nematode H. indica showed better performance compared to the other nematodes, providing up to 98% mortality of the insect. To the study in greenhouse, evaluated the effects of the entomopathogenic nematodes Heterorhabditis indica e Steinernema feltiae, at dosage of 10, 50 and 100 IJ/cm2 in commercial growth of Chrysanthemum sp., in greenhouse conditions. Three experiments were accomplished. There were significative difference among the treatments only for the third experiment, mean while, in the three tests, the nematodes showed a tendency of reduction on the insect population according to the dosage increase, which suggest the effect of the agents on the insect control. In addition, in all the tests, the nematode H. indica showed higher reduction on the insect population compared to the S. feltiae, confirming its higher efficiency with control levels ranging from 6 to 67,5% in the first test, from 17 to 77,5% in the second, and from 62,5 to 78,5% in the third. The data show that H. indica has potential use for the controlling of the fungus gnat.
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