Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Recursos Genéticos Vegetais. / Made available in DSpace on 2012-10-21T05:05:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 190165.pdf: 999324 bytes, checksum: 8c60740f200f58e3a34696bfe9610df7 (MD5) / Foram estudados aspectos básicos da autoecologia de Maytenus ilicifolia Mart. ex Reiss., visando a geração de critérios para o manejo de populações naturais da espécie. O trabalho foi realizado a partir de avaliações realizadas em duas populações naturais, localizadas em Guarapuava, centro do Paraná. Procedeu-se a análise de parâmetros fenotípicos não destrutivos para a estimativa do rendimento foliar e a avaliação do incremento de características após diferentes sistemas de poda. Aspectos da biologia floral foram analisados. Foi também avaliada a diversidade genética e o sistema de cruzamento de M. ilicifolia nas populações estudadas. Com base nos resultados obtidos, fundamentos para o manejo de populações naturais da espécie foram propostos.

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T19:53:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Malacrida_SolangeAparecida_D.pdf: 2637555 bytes, checksum: 4cab03e4ab1ef1f1045bcc26432ea8fe (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Neste trabalho, investigamos o efeito do extrato de Maytenus i/icifolia Mart. ex Reissek (ES), sobre o crescimento e diferenciação de precursores hematopoeticos para granulócitos e macrófagos (CFU-GM) da medula óssea e do baço, a atividade estimuladora de colônias do soro de animais infectados com dose sub-Ietal (5xI03 BaclmL) de Listeria monocytogenes, a atividade das células "natural killer" (NK) e a produção de INF-y. Redução significativa no número de CFU-GM da medula óssea foi observada na fase inicial da infecção em paralelo a um aumento significativo na hematopoése esplênica. O tratamento dos camundongos, com as doses de 250, 500 e 1000 mgIKgldia por 5 dias anteriores .à infecção, estimulou a produção de CFU-GM na medula óssea, reduziu, aos níveis normais o número de CFU-GM no baço e aumentou a atividade hematopoética do soro. A presença da infecção estimulou a produção de IFN-y e a atividade lítica das células NK nestes animais, o tratamento com as três doses do extrato de ES utilizando-se o mesmo protocolo anterior, potencializou a produção de IFN-y e a atividade lítica das células NK, sendo este efeito mais marcante às 48 horas para as células NK e às 72 horas para o IFN-y . A avaliação da eficácia terapêutica do extrato de ES, avaliada através da resistência produzida em camundongos infectados com dose letal da bactéria (5xI05 BaclmL), demonstrou proteção de 40% com a dose de 1000 mglKg e 30% com a dose de 250 mgIKg, sendo que esta diferença entre as doses não foi significativa. Nossos resultados demonstram que o extrato de ES pode aumentar a resistência antibacteriana na listeriose através da geração de CFU-GM, da produção de IFN-y e do aumento na atividade lítica das células NK / Abstract: In this work, we have investigated the effects of Maytenus ilicifolia Mart. ex Reissek (ES) extract on the growth and differentiation of bone marrow and spleen granulocyte- macrophage progenitor cells (CFU-GM), serum colony stimulating activity (CSA), natural killer (NK) cell activity and IFN-y production in a Listeria monocytogenes infected mice.A significant rOOuction in the CFU-GM number was observed in the initial phase of the infection with sublethal dose of (5x103 baclrnL), in parallel to a signiticant increase in the spleen hematopoiesis. The treatment of mice with 250, 500 and 1000 mg/Kg/day ES extract for tive days prior to the infection stimulated bone marrow myelopoiesis, reduced to normal levels CFU-GM number in the spleen and increased the serum colony stimulating activity. The infection enhanced IFN-y levels and NK cell activity. Treatment with ES extract using the same dose schOOule presented above, 100 to further increases in IFN-y levels and NK cell activity. Peak levels of IFN-y was seen at 72 h after the infection and NK cell activity was mostly increased at 48 h after the infection. Evaluation of the therapeutic efficacy of the ES extract, evaluatOO by the resistence of infected mice exposed to letha1 dose of the bacteria (5x10s BaclmL), resulted in protection of 400.10 with dose of 1000 mg/Kg and of 30% with 250 mg/Kg. Difference between the doses was not significant. Our results show that ES extract can increase antibacterial resistance in the listeriosis by modulation of CFU- GM generation, increased IFN-y production and lytic NK cells activity / Doutorado / Doutor em Farmacologia

Orientador: Maysa Furlan / Co-orientador: Lidiane Gaspareto Felippe / Banca: Rafael Victorio Carvalho Guido / Banca: Adriana Aparecida Lopes / Resumo: A clonagem de oxidoesqualeno ciclase das folhas de M. ilicifolia já foi estudada por nosso grupo, bem como os estudos de expressão em S. cerevisiae geneticamente modificada para melhor produção da friedelina. Para o desenvolvimento do trabalho, optou-se por realizar a expressão do gene de friedelina sintase de Kalanchoe daigremontiana obtido comercialmente, cuja sequência foi otimizada de acordo com o codon usage de S. cerevisiae. A partir das mutações sítio-dirigidas, duas mutações no gene sintético foram confirmadas. A primeira mutação do resíduo de leucina para valina na posição 483 do gene sintético levou à produção da friedelina e dos triterpenos -amirina e taraxerol enquanto a segunda mutação do resíduo de leucina para treonina na mesma posição deste gene produziu unicamente a -amirina. Após a padronização e análises das mutações no gene sintético, as mesmas mutações foram realizadas no gene da friedelina sintase de Maytenus ilicifolia. A mutação por valina levou à produção de -amirina e friedelina e, igualmente ao gene sintético, a mutação por treonina levou à formação apenas da -amirina. De acordo com a mutação gerada, os compostos produzidos pela levedura foram analisados por cromatografia gasosa acoplada a detector de massas e observou-se que algumas mutações levavam a uma alteração da especificidade do produto formado pela enzima. Esses estudos sugerem que a relação da estrutura proteica-função da enzima produtora da friedelina possa estar associada ao ajuste da cavidade ativa da enzima e, quando um resíduo de aminoácido do sítio ativo é substituído por resíduos menores, a ampliação da cavidade proporciona a estabilização prévia do carbocátion em um triterpeno com menor número de rearranjos, como a -amirina. Desta forma, estes dados contribuem com o entendimento da especificidade desta enzima, são os primeiros a... / Abstract: The cloning of oxidosqualene cyclase from Maytenus ilicifolia leaves and expression in Saccharomyces cerevisiae has been studied by our group to generate friedelin. The main objective of this project was to carry out the expression of friedelin synthase gene using commercially Kalanchoe daigremontiana, whose sequence has been optimized according to the codon usage of S. cerevisiae. In such studies, two mutations in the synthetic gene were confirmed. The first mutation of valine for leucine residue at position 483 synthetic gene led to the production of friedelin, β-amyrin and tararexol, while the second mutation of leucine to threonine residue, at the same position, produced exclusively β-amyrin. The same mutations were performed using the gene of friedelin synthase of Maytenus ilicifolia. The compound identities were confirmed by gas chromatography and mass spectrometry. The results suggested that the ratio of protein production-enzyme function, involved in the production of friedelin, may be associated with the active cavity of the enzyme setting, when an amino acid residue of the active site is replaced for smaller, expanding the cavity to provide the prior stabilization of the carbocation in the biosynthetic pathway of triterpenes to produce β-amyrin. Thus, these data contribute to understand the specificity of such enzyme. Furthemore, this studie was the first one to show the importance of each amino acid in the active site of the enzyme to produce a pentacyclic triterpene with the highest number of rearrangements and was the basis for future studies of enzyme engeenering to increase productivity of such compounds. / Mestre

Orientador: Cleslei Fernando Zanelli / Banca: Tatiana Maria de Souza Moreira / Banca: Cintia Duarte de Freitas Milagre / Banca: Rafael Victório Carvalho Guido / Resumo: Triterpenos são produtos naturais de plantas estruturalmente complexos com numerosas aplicações medicinais. Como exemplo, friedelina é um triterpeno pentacíclico com atividade gastroprotetora, enquanto que seus derivados quinonametídicos maitenina e pristimerina apresentam promissoras atividades antiinflamatória, antitumoral, antimicrobiana, antimalárica, espermicida e antioxidante. O único triterpeno pentacíclico cetônico formado diretamente na ciclização do oxidoesqualeno é a friedelina. Sua produção se dá a partir da enzima friedelina sintase, uma oxidoesqueleno ciclase que se difere das demais oxidoesqualeno ciclases por estabilizar a ciclização promovida pelo carbocátion formado no sítio catalítico produzindo uma cetona. As oxidoesqualeno ciclases têm o mesmo substrato, porém se diferenciam pela especificidade de seus produtos formados e, por isto, a análise da estrutura primária da friedelina sintase permite estudar sua especificidade pela produção de friedelina. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo realizar o estudo da especificidade da friedelina sintase clonada de Maytenus ilicifolia por meio de mutantes desta enzima. Por meio de análises de docking da molécula de friedelina no sítio ativo da enzima foram observados resíduos de aminoácidos cuja interação poderia se relacionar à produção singular de friedelina. Os mutantes destes resíduos foram então gerados por mutagênese sítiodirigida para avaliar tais interações de acordo com o prod... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Triterpenes are natural plant products structurally complex with numerous medicinal applications. As an example, friedelin is a pentacyclic triterpene with gastroprotective activity whereas its quinone methide derivates maytenin and pristimerin present promising anti-inflammatory, antitumor, antimicrobial, antimalarial, spermicidal and antioxidant activities. Friedelin is the only pentacyclic ketone triterpene obtained directly from ciclization of oxidosqualene. Its production occurs from the enzyme friedelin synthase, an oxidosquelene cyclase, which differs from the other oxidosqualene cyclases by stabilizing the cyclization promoted by the carbocation formed at the catalytic site forming a ketone. The oxidosqualene cyclases have the same substrate, but are differentiated by the specificity of their products formed and, therefore, the analysis of the primary structure of friedelin synthase allows to study its specificity by the production of friedelin. Thus, the present work aimed to study the specificity of the friedelin synthase cloned from Maytenus ilicifolia using mutants of the enzyme. Through the analysis of docking of the molecule friedelin in the active site of the enzyme, it was observed amino acids residues whose interation could be related to the unique production of friedelin. Mutants of these residues were generated by site-directed mutagenesis to evaluate such interactions according to the product formed heterologously by the mutants expressed in Saccharomyces ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2016-08-12T18:48:46Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-07-27. Added 1 bitstream(s) on 2016-08-12T18:51:00Z : No. of bitstreams: 1 000849826_20170730.pdf: 873601 bytes, checksum: aba6ada5ec0fbb61f3b3604c66aafb07 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-08-07T14:09:12Z: 000849826_20170730.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-08-07T14:10:16Z : No. of bitstreams: 1 000849826.pdf: 4209967 bytes, checksum: fe80c7e6b5372db8ddddd264003573c2 (MD5) / A clonagem de oxidoesqualeno ciclase das folhas de M. ilicifolia já foi estudada por nosso grupo, bem como os estudos de expressão em S. cerevisiae geneticamente modificada para melhor produção da friedelina. Para o desenvolvimento do trabalho, optou-se por realizar a expressão do gene de friedelina sintase de Kalanchoe daigremontiana obtido comercialmente, cuja sequência foi otimizada de acordo com o codon usage de S. cerevisiae. A partir das mutações sítio-dirigidas, duas mutações no gene sintético foram confirmadas. A primeira mutação do resíduo de leucina para valina na posição 483 do gene sintético levou à produção da friedelina e dos triterpenos -amirina e taraxerol enquanto a segunda mutação do resíduo de leucina para treonina na mesma posição deste gene produziu unicamente a -amirina. Após a padronização e análises das mutações no gene sintético, as mesmas mutações foram realizadas no gene da friedelina sintase de Maytenus ilicifolia. A mutação por valina levou à produção de -amirina e friedelina e, igualmente ao gene sintético, a mutação por treonina levou à formação apenas da -amirina. De acordo com a mutação gerada, os compostos produzidos pela levedura foram analisados por cromatografia gasosa acoplada a detector de massas e observou-se que algumas mutações levavam a uma alteração da especificidade do produto formado pela enzima. Esses estudos sugerem que a relação da estrutura proteica-função da enzima produtora da friedelina possa estar associada ao ajuste da cavidade ativa da enzima e, quando um resíduo de aminoácido do sítio ativo é substituído por resíduos menores, a ampliação da cavidade proporciona a estabilização prévia do carbocátion em um triterpeno com menor número de rearranjos, como a -amirina. Desta forma, estes dados contribuem com o entendimento da especificidade desta enzima, são os primeiros a... / The cloning of oxidosqualene cyclase from Maytenus ilicifolia leaves and expression in Saccharomyces cerevisiae has been studied by our group to generate friedelin. The main objective of this project was to carry out the expression of friedelin synthase gene using commercially Kalanchoe daigremontiana, whose sequence has been optimized according to the codon usage of S. cerevisiae. In such studies, two mutations in the synthetic gene were confirmed. The first mutation of valine for leucine residue at position 483 synthetic gene led to the production of friedelin, β-amyrin and tararexol, while the second mutation of leucine to threonine residue, at the same position, produced exclusively β-amyrin. The same mutations were performed using the gene of friedelin synthase of Maytenus ilicifolia. The compound identities were confirmed by gas chromatography and mass spectrometry. The results suggested that the ratio of protein production-enzyme function, involved in the production of friedelin, may be associated with the active cavity of the enzyme setting, when an amino acid residue of the active site is replaced for smaller, expanding the cavity to provide the prior stabilization of the carbocation in the biosynthetic pathway of triterpenes to produce β-amyrin. Thus, these data contribute to understand the specificity of such enzyme. Furthemore, this studie was the first one to show the importance of each amino acid in the active site of the enzyme to produce a pentacyclic triterpene with the highest number of rearrangements and was the basis for future studies of enzyme engeenering to increase productivity of such compounds.

Orientador: Mary Anne Heidi Dolder / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T21:03:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Montanari_Tatiana_M.pdf: 9576556 bytes, checksum: 88ec5cb06285cc142697733164cd9710 (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: O efeito de Maytenus llicirolia Mart ex. Reiss ("espinheira-santa") e AchiDea milleColium L. ("milfolhas") sobre a espennatogênese de camundongos albinos "Swiss" foi estudado a nfvel morfológico (microscopia de luz e eletrônica). Essas espécies são plantas medicinais, de uso popular e são utilizadas como reguladoras da fertilidade. Extratos alcoólicos de folhas de M.llicifolia fonun administrados em doses diárias de 200 mgtkg, por 20 dias, por via intraperitoneal e em doses de 800 mgtkgldia. por 30 dias, por via oral. Extrato alcoólico de flores de A.millelolium foi administrado em doses diárias de 200 mgIkg, por 20 dias, por via intraperitoneal , e extrato hidroalcoólico, em doses de 300 mgtkgldia, por 30 dias, por via oral. As alterações observadas nos testículos dos animais tratados com M.ilicifolia e com A.millefolium foram: esfoliação de células genninativas imaturas, necrose de células genninativas (constatada através de núcleos picnóticos e hipertróficos) e vacuolização de túbulos seminíferos. Essas alterações variavam em intensidade nos diferentes experimentos. Em alguns controles, também foram encontrados núcleos picnóticos e alguns túbulos vacuolizados ou com somente células de Sertoli. A nível estrutural. os testículos de animais tratados com 200 mg'kgIdia e 800 mgIkgI dia de M.llicifolia não diferiram dos controles. Entretanto, a nível ultra-estrutural for3Ill observados gotfculas lipidicas de grande tamanho nas células de Sertoli e acrossomos defonnados e dilatados nas espennátides jovens dos animais tratados com a maior dose. A maioria dos túbulos seminfferos dos animais tratados por M.i1icifolia apresentava espennatogênese nonnal, resultando na produção de espermatozóides, indicando que o seu extrato alcoólico não continha substâncias, qualitativa ou quantitativamente, capazes de inteITomper o processo espermatogênico. Os túbulos seminfferos dos animais tratados com 200 mgtkg!dia de A.millefolium, por via intraperitoneal, por 20 dias, foram os mais prejudicados. Muitos apresentavam descamação de células genninativas imaturas, que preenchiam a sua luz.. e tinham epitélio germinativo reduzido. Naqueles de animais tratados com 300 mwkg/dia do extrato (por via oral). fonun encontradas muitas células em metáfase. que podem ser decoITentes de um bloqueio no ciclo celular ou de um estimulo à proliferação celular, provocados por substâncias nela presentes. O fato dos testiculos dos animais tratados por via intraperitoneal terem sido mais afetados sugere que as substâncias responsáveis por essas ações ou estio em baixa concentração no extrato hidroalcoólico ou são degradadas dm1mte a absorção oral / Abstract: The effect af Maytf'DJli Wdtolbt Mart. ex. Reiss and AcbIDea mllIetollum (Y9n'ow) was tested on the spennatogenesis of Swiss albino mice, evaluating morphological characteristics with the light gnd electron microscopes. These species are medicinal plams which have been used in popular medicine tor various cures and tor fertitity regtllator. A daily dose of 200 mg/kg of the alcoholic _.xtract of MJ1ldfoJia leaves Wasl administered intraperitonealty, for 20 days, and a daily dose of 800 rnglkg. orally, for 30 days. The alcohotic extract of A..miHefoUum flowers was daily administered aí doses of 200mglkg, intraperitoneally, for 20 daya and 30Omgrkg ofthe hydroalcoholic extract, orally, for 30 days. The alterntions observed in testes treated with M.illcifolia and A.miBefolium included immature genn ceUs, germ cell necrosis (recognised as picnotic and hypertrophic nuelei) and vacuolized seminipherous tubules. These variations were not the same in the di.fferent experiments. In some controls, were algO fO / Mestrado / Biologia Celular / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Maysa Furlan / Banca: Angela Regina Araujo / Banca: Hosana Maria Debonsi / Resumo: As espécies das famílias Celastraceae mostram o acúmulo de substâncias de interesse biológico, com destaque para a friedelina, com potentes efeitos anti-inflamatórios, analgésicos e gastroprotetores, e os triterpenos quinonametídeos, promissores agentes antitumorais. Entretanto, para que sejam utilizados como fármacos, novas metodologias e/ou técnicas para obtenção dos mesmos em larga escala se fazem necessárias. Nesse contexto, um sistema heterólogo composto pela levedura Saccharomyces cerevisiae, foi modificado geneticamente com a inserção de plasmídeos (vetores) contendo genes oriundos de Maytenus ilicifolia que codificam a enzima friedelina sintase, a qual leva a produção de friedelina. A introdução dos genes heterólogos pode perturbar as vias metabólicas do sistema heterólogo e, além do metabólito alvo, outras classes e/ou substâncias de interesse biológico e/ou comercial podem ser produzidas. Para tanto, as leveduras foram cultivadas em meio sintético completo (0,67% de base para levedura nitrogenada sem adição de aminoácidos e 2% de glicose), suplementado com aminoácidos, bases e ácido p-aminobenzóico, sem adição de uracila. Para os estudos de variabilidade metabólica, análises por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas foram realizadas utilizando os extratos etanólicos, clorofórmicos e hexânicos obtidos do sistema heterólogo com e sem modificação genética. Com o auxílio de técnicas metabolômicas foi possível a identificação de uma variedade de substâ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The species of the Celastraceae family shows the accumulation some compounds of biological interest, with emphasis on friedelin, with potent anti-inflammatory, analgesic and gastroprotective effects, as well as quinonemethide triterpenes, promising antitumor agents. However, in order to be used as drugs, new methodologies and / or techniques for obtaining them in large scale are necessary. In this way, a heterologous system of Saccharomyces cerevisiaeyeast was genetically modified with the insertion of plasmids (vectors) containing genes from Maytenus ilicifoliathat encode the enzyme friedelin synthase, looking for the production of friedelin by metabolic engineering. The introduction of the heterologous genes may disrupt the metabolic pathways of the heterologous system and, in addition to the target metabolite, other classes and / or compounds of biological and / or commercial interest may be produced. For this, yeasts were grown in complete synthetic medium (0.67% yeastnitrogen basewithout addition of amino acids and 2% glucose), supplemented with amino acids, bases and p-aminobenzoic acid, without addition of uracil. For metabolic variability studies, gas chromatographic analysis coupled with mass spectrometry were performed using ethanolic, chloroform and hexane extracts, obtained from the heterologous system with and without genetic modification. With the aid of metabolomic techniques it was possible to identify avariety of substances including various fatty acids and derivatives from 1to 5, as well as amides, such as (Z)-9-ocatadecenamide (7), terpenoid precursors such as squalene (8) and 2,3-oxidosesqualene (10), the triterpenes; friedelin (21) and lupeol (15), and alsosteroids ergosterol (14) and lanosterol (19). Due to perturbations in metabolic pathway of mevalonate, different substances were also observed, both in yeasts with the empty vector, plasmid considered as control... / Mestre

Orientadora: Maysa Furlan / Coorientador: Ana Maria Soares Pereira / Banca: Angela Regina Araújo / Banca: Rafael Victorio Carvalho Guido / Banca: Mario Sergio Palma / Banca: Fernando Continguiba da Silva / Resumo: Plantas biossintetizam uma ampla variedade de metabólitos secundários cujas atividades farmacológicas são consolidadas. No entanto, a obtenção em escala de metabólitos secundários a partir de plantas, muitas vezes, é restringida pelo acúmulo minoritário desses compostos em seus tecidos. Como muitas dessas moléculas apresentam elevada complexidade estrutural, sua obtenção por síntese orgânica pode ser ainda mais dificultada, tanto do ponto de vista econômico quanto ecológico. Contudo, as elucidações das vias metabólicas utilizadas pelas plantas na biossíntese dessas moléculas, sobretudo do ponto de vista enzimático, podem subsidiar o desenvolvimento de ferramentas biotecnológicas, como a engenharia metabólica, para enfrentar esses desafios. Nesse contexto, surge a espécie Maytenus ilicifolia (Celastraceae), uma planta medicinal conhecida por produzir uma gama de metabólitos secundários bioativos, em especial, os triterpenos quinonametídeos (TQs), moléculas com pronunciada e abrangente atividade antitumoral. Desta forma, no presente trabalho foi realizado um estudo proteômico de células de M. ilicifolia com o objetivo principal de inventariar as enzimas de suas vias metabólicas secundárias, principalmente relacionadas a biossíntese dos TQs. Para isso, culturas de células de M. ilicifolia produtoras de TQs, maitenina (1) e 22-β-hidroximaitenina (2), foram elicitadas com metil jasmonato (100 µM) por 12, 24, 48 e 96 h e monitoradas quanto a produção dos TQs por CLAE-DAD. Das célul... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Plants biosynthesize a wide variety of secondary metabolites with consolidated pharmacological activities. However, the large - scale production of secondary metabolites by plants is often restricted by minor accumulation of these compounds in their tissues. Many of these molecules shows high structural complexity so their obtainment by organic synthesis can be further complicated both economically and ecologically. However, the elucidation of metabolic pathways used by plants in the biosynthesis of these mol ecules, especially from the enzymatic point of view, can support the development of biotechnological tools such as metabolic engineering, to address these challenges. In this context, emphasis can be given to Maytenus ilicifolia species (Celastraceae), a m edicinal plant that produces a range of bioactive compounds, including quinonamethide triterpenes (QMTs). Thus, in this study we performed a proteomic study of M. ilicifolia cells with the primary goal to provide an enzyme inventory of their secondary meta bolic pathways, mainly for biosynthesis of QMTs. Based on it, M. ilicifolia cell cultures producing the QMTs maytenin ( 1 ) and 22 - β - hydroxymaytenin ( 2 ) were elicited with methyl jasmonate (100 μM) during 12, 24, 48 and 96 h and monitoring for QMTs productio n by HPLC - DAD. Cells that showed a higher QMTs accumulation (when comparing elicited and control cells.) were submitted to protein extractions and analyzed by LCMS - IT - TOF, using shotgun strategy. We have found 1319 proteins in both cells by comparison with proteins of the model plants from databases. Among them, enzymes involved in the biosynthesis of QMTs, including the cytochrome P450 (CYP450s) that potentially catalyze the final steps of this synthesis. We also have found enzymes involved in the biosynth esis of others secondary metabolites characteristic of the species, and proteins related to primary... / Doutor

Orientador: Leonardo Theodoro Büll / Banca: Lin Chau Ming / Banca: Carmem Silvia F. Boaro / Banca: Antonio Francisco J. Bellote / Banca: Hellton Damin da Silva / Resumo: A espécie medicinal Maytenus ilicifolia, localiza-se naturalmente sob diferentes condições edafo-climáticas. Este fato implica em prováveis mecanismos de adaptação das populações naturais, cujas características químicas podem, ou não, estar fixadas geneticamente. A identificação da variabilidade fenotípica da espécie permite viabilizar práticas de manejo visando a produção de fitoterápicos com qualidade organoléptica, nutricional e terapêutica. Para identificar a influência do ambiente na composição fitoquímica de M. ilicifolia foram efetuados três estudos, o primeiro em quatro populações naturais distribuídas no Estado do Paraná, o segundo em um banco de germoplasma, e o terceiro em uma unidade de cultivo experimental onde foi conduzido um ensaio de fertilização baseado na aplicação de diferentes doses de um resíduo de siderurgia rico em Si. Foram avaliados os teores foliares de N, P, K, Ca, Mg, Fe, Mn, Cu, Zn, Si, Al, lignina, fenóis totais, fenóis não tanantes e taninos. Nas populações naturais também foi determinada a massa específica foliar. No banco de germoplasma, em função da elevada diversidade morfológica, foi efetuada a classificação dos indivíduos em morfotipos, tendo sido identificados nove morfotipos foliares, os quais apresentaram relação com alguns dos ambientes de origem das populações. Os estudos efetuados indicam que é possível efetuar o controle de compostos fenólicos presentes em M. ilicifolia, seja através do manejo de luz, interferindo tanto na síntese de lignina quanto dos taninos, seja por meio da aplicação de Si e Ca, regulando principalmente a síntese de fenóis totais e taninos. / Abstract: Maytenus ilicifolia is a medicinal species that occurs naturally under different soils and light conditions. This fact involves adaptation mechanisms of the natural populations whose chemical characteristics can be or not genetically fixed. The identification of the genetic variability can viabilize the management practices to the production of phytotherapics with organoleptical, nutritional and therapeuthic quality. Three studies were developed to determine the influence of the environment in the phytochemical content of M. Ilicifolia and the samples were collected from four natural communities, a germoplasm bank, and an experimental area in wich there was fertilized with different doses a rich Si residue. There was determinate the specific leaf mass in leaves from the natural populations, also there was determinate the total content of N,P, K, Ca, Mg, Fe, Mn, Cu, Zn, Si, Al, lignin, total phenols and tannins in all samples. In the germoplasm bank the individual plants were classified in nine morphotypes, too. The studies indicate that is possible to controle the M. ilicifolia lignin and tannin composition by light management, as well as the total phenols and tannin by Si and Ca fertilization. / Doutor

Made available in DSpace on 2018-06-04T19:14:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2016-04-28 / O Brasil é detentor de uma grande biodiversidade, sendo este um dos motivos pelo qual o Ministério da Saúde elaborou uma lista contendo 71 plantas, que fazem parte da Relação Nacional de Plantas Medicinais de Interesse ao Sistema Único de Saúde (RENISUS). Já a seleção de fitoterápicos, no contexto da Secretaria Municipal de Saúde de São Paulo (SMS-SP), foi realizada pela Comissão Farmacoterapêutica, responsável pela elaboração da Relação Municipal de Medicamentos Essenciais - REMUME-SP. As espécies são: Espinheira-Santa (Maytenus ilicifolia), Garra do Diabo (Harpagophytum procumbens), Valeriana (Valeriana officinalis) e Isoflavona de Soja (Glycine max). A Maytenus ilicifolia Mart. ex Reiss é popularmente usada no combate de várias doenças, entre as quais destacam-se úlceras e gastrites. O presente trabalho teve como objetivo conhecer, através de entrevistas, a opinião dos profissionais de saúde e dos pacientes das Unidades Públicas Ambulatoriais (UPA), as razões da baixa aceitabilidade de um fitoterápico com esta planta. Das 780 UPAs da SMS-SP, 47 (6%) receberam os medicamentos fitoterápicos. Observou-se que 53,08% dos profissionais de saúde entrevistados prescreviam medicamentos fitoterápicos disponíveis no SUS e os profissionais que mais os prescreveram são os clínicos gerais, acupunturistas, homeopatas, geriatras e médicos da família. (37,2%). Este achado também indica que quase a metade, 46,92% deles não prescreviam os fitoterápicos da rede pública de saúde. Entre os principais motivos para este fato estão a falta de conhecimento e a má distribuição e divulgação, havendo relatos de que os fitoterápicos foram introduzidos sem que houvesse um programa prévio de capacitação profissional a respeito desse assunto. Os pacientes que já conheciam a Espinheira-Santa, também não tinham conhecimento dessa planta como fitoterápico. A Espinheira-Santa foi o segundo fitoterápico mais prescrito (28,5%), embora o consumo de Omeprazol tenha sido extremamente elevado, chegando em 2015 a quase 200 milhões de cápsulas. Dos 57 pacientes entrevistados, apenas 8,8% conheciam o programa de fitoterápicos no SUS e apenas 7% se tratavam com esses medicamentos. / BV UNIFESP: Teses e dissertações