Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-08-24Bitstream added on 2014-06-13T19:03:06Z : No. of bitstreams: 1 radomski_mi_dr_fca.pdf: 1011129 bytes, checksum: 7a5b32a9262d4bf7478fa65afff7c9ff (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A espécie medicinal Maytenus ilicifolia, localiza-se naturalmente sob diferentes condições edafo-climáticas. Este fato implica em prováveis mecanismos de adaptação das populações naturais, cujas características químicas podem, ou não, estar fixadas geneticamente. A identificação da variabilidade fenotípica da espécie permite viabilizar práticas de manejo visando a produção de fitoterápicos com qualidade organoléptica, nutricional e terapêutica. Para identificar a influência do ambiente na composição fitoquímica de M. ilicifolia foram efetuados três estudos, o primeiro em quatro populações naturais distribuídas no Estado do Paraná, o segundo em um banco de germoplasma, e o terceiro em uma unidade de cultivo experimental onde foi conduzido um ensaio de fertilização baseado na aplicação de diferentes doses de um resíduo de siderurgia rico em Si. Foram avaliados os teores foliares de N, P, K, Ca, Mg, Fe, Mn, Cu, Zn, Si, Al, lignina, fenóis totais, fenóis não tanantes e taninos. Nas populações naturais também foi determinada a massa específica foliar. No banco de germoplasma, em função da elevada diversidade morfológica, foi efetuada a classificação dos indivíduos em morfotipos, tendo sido identificados nove morfotipos foliares, os quais apresentaram relação com alguns dos ambientes de origem das populações. Os estudos efetuados indicam que é possível efetuar o controle de compostos fenólicos presentes em M. ilicifolia, seja através do manejo de luz, interferindo tanto na síntese de lignina quanto dos taninos, seja por meio da aplicação de Si e Ca, regulando principalmente a síntese de fenóis totais e taninos. / Maytenus ilicifolia is a medicinal species that occurs naturally under different soils and light conditions. This fact involves adaptation mechanisms of the natural populations whose chemical characteristics can be or not genetically fixed. The identification of the genetic variability can viabilize the management practices to the production of phytotherapics with organoleptical, nutritional and therapeuthic quality. Three studies were developed to determine the influence of the environment in the phytochemical content of M. Ilicifolia and the samples were collected from four natural communities, a germoplasm bank, and an experimental area in wich there was fertilized with different doses a rich Si residue. There was determinate the specific leaf mass in leaves from the natural populations, also there was determinate the total content of N,P, K, Ca, Mg, Fe, Mn, Cu, Zn, Si, Al, lignin, total phenols and tannins in all samples. In the germoplasm bank the individual plants were classified in nine morphotypes, too. The studies indicate that is possible to controle the M. ilicifolia lignin and tannin composition by light management, as well as the total phenols and tannin by Si and Ca fertilization.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:34:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseCD.pdf: 6879107 bytes, checksum: c167cda73860ef0c5e5b15af0e2e7280 (MD5) Previous issue date: 2006-08-01 / The use of herbal medicines in the Brazilian market has increased in the last few decades. Therefore, the quality control for herbal products, as well as traditional medicines, is extremely important and for both: the manufactured products and the raw material. However, to guarantee the product s quality implies in an increase of the process costs in an industry. Currently, the quality of herbal extracts is predicted by analysis of selected marker compounds, which are often characteristic chemicals of a specific herb, but that many times do not present any relation with bioactivity. As a consequence, the marker-based approach is an incomplete and unsatisfactory method for quality control of herbal medicines In order to cope with this problem, current developments in improving sensitivity and analytical capacity of known techniques, had made possible the plant s complex extract evaluation. The present work describes an analytical methodology for the phytomedicines catuaba, espinheira-santa and guaco, based on the metabolic profile approach, where the Nuclear Magnetic Resonance techniques, as well as the High Performance Liquid Chromatography, are employed to obtain a fingerprinting of these herbal medicines. Nevertheless, due to the complex spectral data profile (1H spectra and chromatograms) evaluation it was necessary to employ chemometrics. These multivariate methods made possible to extract some relevant information and to prove the authenticity of the analyzed commercial samples. The commercial catuaba samples analysis by HR-MAS NMR/ chemometrics showed be more efficient, when compared with liquid NMR, indicating that the species sold as the phytomedicine catuaba is Trichillia catigua. Whereas, the results obtained for espinheira-santa showed an opposite situation pointing out that the efficiency of the HR-MAS is correlated with the physiological constitution of the plant material analyzed. Beside NMR results, HPLC analysis showed that the majority of the espinheira-santa commercial samples do not employ Maytenus ilicifolia species. The guaco results obtained by both, NMR and HPLC techniques were inconclusive needing the use of a complementary technique. Therefore, the present work also describes the use of the High Performance Liquid Chromatography coupling with Abstract Tandem Mass Spectrometry, by means of SRM experiments, to evaluate some commercial guaco samples. This technique provides the detection of the coumarin 1,2-benzopyrone in all the analyzed samples, due to the SRM high sensitivity, thus certifying its authenticity. The results obtained by Nuclear Magnetic Resonance, High Performance Liquid Chromatography and chemometrics, proved to be valuable tools for the evaluation of complex phytomedicines matrix. In specific cases, where high sensitivity in the analytical method is required, Mass Spectrometry can be used as an additional technique. / A utilização dos fitoterápicos no mercado nacional tem se tornado crescente nas últimas décadas. Desse modo, o controle de qualidade para os produtos de origem vegetal, assim como para os medicamentos tradicionais, é de extrema importância; e não só para o produto tecnologicamente acabado, como também para sua matéria-prima. Contudo, garantir a qualidade de um produto implica em um aumento de custos para as indústrias. Atualmente, uma das maiores práticas para a padronização das ervas baseia-se na identificação de marcadores químicos, característicos para as espécies, mas que muitas vezes não apresentam qualquer relação com sua atividade biológica. Assim sendo, essa abordagem se mostra incompleta, ou muitas vezes, insatisfatória para o controle de qualidade desse tipo de medicamento. Para contornar esse problema recentes desenvolvimentos, principalmente no aumento da sensibilidade e na capacidade analítica das técnicas existentes, tornaram possível a avaliação de extratos de plantas complexos em sua totalidade. O presente trabalho descreve uma metodologia de análise para os fitofármacos catuaba, espinheira-santa e guaco, fundamentada na abordagem analítica conhecida como metabolic profile, onde a Ressonância Magnética Nuclear, assim como a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência, são empregadas para a obtenção do fingerprinting desses fitomedicamentos. Entretanto, os dados gerados (espectros de 1H e cromatogramas) apresentaram um perfil muito complexo sendo então necessária a utilização da quimiometria para sua avaliação. O emprego de métodos multivariados possibilitou à extração de informações relevantes, assim como, a constatação da autenticidade das amostras comerciais analisadas. O emprego da RMN de HR-MAS, juntamente com a quimiometria, na análise de amostras comerciais de catuaba, se mostrou mais eficiente quando comparado a RMN de líquidos, indicando que a espécie mais comercializada como o fitofármaco é a Trichillia catigua. Entretanto, os resultados obtidos para a espinheira-santa foram contrários, evidenciando a limitação da HR-MAS no que diz respeito à constituição fisiológica do material analisado. Adicionalmente a RMN, a utilização da CLAE Resumo possibilitou verificar que a maioria das amostras comerciais de espinheira-santa não utiliza a espécie Maytenus ilicifolia em sua formulação. Já para o fitofármaco guaco os resultados obtidos, tanto com a RMN como com a CLAE, se mostraram contraditórios, sendo necessária a utilização de uma outra técnica analítica complementar. Assim sendo, o trabalho também descreve a utilização do acoplamento da CLAE com a Espectrometria de Massas Tandem, através dos experimentos de SRM, na avaliação de extratos de amostras comerciais de guaco. O emprego dessa técnica permitiu a detecção da cumarina 1,2-benzopirona em todas as amostras analisadas, devido à sua elevada sensibilidade, atestando assim suas autenticidades. Portanto, através dos resultados obtidos no desenvolvimento deste trabalho, pôde-se concluir que a Ressonância Magnética Nuclear, assim como a CLAE, aliada a Quimiometria, apresentam um grande potencial em estudos que visam a avaliação de matrizes complexas, como os medicamentos fitoterápicos. Em casos específicos, onde uma maior sensibilidade no método analítico se faz necessária, a Espectrometria de Massas pode ser empregada de forma complementar.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-14Bitstream added on 2014-06-13T20:35:39Z : No. of bitstreams: 1 gullo_fp_me_arafcf.pdf: 1209208 bytes, checksum: eb8202940f1c96815dc70f8524aa0063 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / A criptococose é uma micose sistêmica e oportunista causada principalmente pelas leveduras Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. Entre as principais manifestações clínicas estão o desenvolvimento de meningite, encefalite, meningoencefalite e infecções pulmonares. Estima-se que mais de um milhão dos casos de criptococose ocorrem por ano em indivíduos HIV positivos, o que classifica esta doença como a terceira mais importante entre as infecções fúngicas sistêmicas. A ecologia deste gênero está diretamente relacionada ao meio ambiente, sendo a espécie C. neoformans, comumente encontrada em excretas secas de pombos (Columbia livia) e a espécie C. gattii é encontrada, principalmente, em plantas, como espécies de Eucalyptos. O tratamento da criptococose é realizado com os fármacos antifúngicos, anfotericina B e fluconazol, sendo este último de ação fungistática utilizado para tratamento de longo prazo, que apesar de eficiente, pode causar uma série de reações adversas e ainda desenvolvimento de resistência. Tendo em vista o difícil controle da levedura e o tratamento, este trabalho tem como objetivo principal, a pesquisa de substâncias naturais com alto potencial antifúngico com finalidade saneante e medicamentosa, combatendo a levedura em seu nicho ecológico natural e também atuando no combate à infecção no hospedeiro. Uma forma de diminuir os casos desta infecção é através do processo de desinfecção ambiental com produtos saneantes, os quais apresentam capacidade fungicida. Por meio do projeto Biota/FAPESP, foram selecionados dois triterpenóides quinonamétideos extraídos de Maytenus ilicifolia, a maitenina e a pristimerina, as quais apresentaram potentes CIMs anti-Cryptococcus, mais de 90 % de eficiência na desinfecção e baixa toxicidade, o que revela que... / Cryptococcosis is a systemic mycosis caused mainly by opportunistic yeast Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii. Among the main clinical manifestations are the development of encephalitis, meningoencephalitis and pulmonar infections. It is estimated that more than one million cases of cryptococcosis occur per year in HIV positive individuals, which classifies the disease as the third among the most importante systemic fungal infections. The ecology of this genus is directly related to the environment. Specie C. neoformans is commonly found in dried excremento of pigeons (Columbia livia) and the species C. gattii is found primarily in plants such as Eucalyptus species. Cryptococcosis treatment is performed with the antifungal drugs amphotericin B and fluoconazole, the later being of a fungistatic used to treat long-term, while effective, may cause a number of adverse reactions and also the development of resistence. Given the difficult control of the yeast and treatment, this work has as main objective, the research of natural substances with high potential antifungal drug with purpose and saneante, fighting yeast in their natural ecological niche and also acting in fighting infection in the host. One way to reduce the cases of infection is through the capacity fungicide. Through the Project BIOTA / FAPESP, we selected two quinonametides triterpenids extracted from Maytenus ilicifolia, the maitenin and pristimerin, which showed potente anti-Cryptococcus MICs, more than 90 % of the disinfection efficiency and low toxicity... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: Para determinar a influência do ambiente sobre as características fitoquímicas de Maytenus ilicifolia Mart., foram coletadas amostras em comunidades arbóreas nativas crescendo sobre quatro ambientes, com diferentes solos e condições de luminosidade, em maio de 1994, no Estado do Paraná, Brasil. Três comunidades localizaram-se sob diferentes níveis de sombreamento (5, 9 e 12% de luminosidade relativa) e uma comunidade a pleno sol (100% de luminosidade). Foram classificados os seguintes solos: Solo Litólico A chernozêmico textura média, Cambissolo podzólico profundo Álico A moderado textura argilosa, Cambissolo gleico pouco profundo Distrófico A proeminente textura argilosa e Cambissolo gleico pouco profundo/Solo Aluvial Álico Epieutrófico A moderado textura muito argilosa. Foi determinado o peso específico foliar, o teor total de N, P, K, Ca, Mg, Fe, Mn, Cu, Zn, Al, B e Si e a fiação solúvel em água de K, Ca, Mg, Mn, Çu, Zn, Al e Si, em folhas e ramos. Também foi determinado o teor de polifenóis totais e taninos em folhas e ramos. A fiação solúvel em água, em relação ao conteúdo total, apresentou a seguinte ordem decrescente de elementos solúveis: K > Mg > Zn > Si > Mn > Ca > Cu > Al. O peso específico foliar e o teor de polifenóis totais e taninos foi maior nas amostras das plantas crescendo a pleno sol. Este resultado indica um possível mecanismo de defesa das plantas à maior insolação. Nas plantas sob sombreamento foram observados maiores teores médios de N, K, B e Si. Para P, Mn e Cu foram observadas diferenças entre todas as amostras, indicando uma possível interação entre solo e luminosidade na absorção destes elementos. Não houve diferenças no teor médio de Ca, Mg, Fe, Al e Zn. Estes resultados sugerem que a luminosidade foi o principal fator influenciando as características fitoquímicas de Maytenus ilicifolia.

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-23. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:14:14Z : No. of bitstreams: 1 000858684_20161123.pdf: 468196 bytes, checksum: d603bccfef4c56b66406d939f6d55a8b (MD5) Bitstreams deleted on 2016-11-28T18:47:37Z: 000858684_20161123.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-11-28T18:48:21Z : No. of bitstreams: 1 000858684.pdf: 1274503 bytes, checksum: c82757fda11d310edd644184e40c1bf3 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O câncer de colo de útero é um problema de saúde pública mundial, especialmente nos países em desenvolvimento, configurando a quarta neoplasia feminina mais comum no mundo. A infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV) é o principal fator de risco para o desenvolvimento do referido câncer, estando presente em 90% dos casos de câncer de colo uterino na população mundial. Frente a busca por novos agentes quimioterapêuticos, os produtos naturais tem contríbuido intensamente para a identificação dessas substâncias e o desenvolvimento da terapêutica moderna. Maitenina, é um triterpeno quinonametídeo extraído das raízes da plana Maytenus ilicifolia, que possui algumas atividades biológicas já relatadas, como antifúngica, antiprotozoária e principalmente ação antitumoral. No momento não existem relatos na literatura relacionando a atividade da maitenina em células infectadas por HPV-16. O objetivo do presente estudo foi avaliar a citotoxicidade da maitenina em linhagem de carcinoma cervical infectada por HPV-16 (SiHa), não-infectada pelo vírus (C-33 A) e queratinócitos humanos imortalizados (HaCaT), bem como verificar a indução de apoptose e/ou necrose pelo ensaio de Hoechst e Iodeto de Propídeo e indução de apoptose pela atividade de caspase-3 nas três linhagens celulares, além de verificar alterações no ciclo celular das células tratadas com maitenina e o potencial de genotoxicidade e mutagenicidade, além de avaliar a proliferação das três linhagens. O ensaio de citotoxicidade foi realizado pelo método da sulforodamina B, e as três linhagens celulares foram tratadas durante 6, 12 ou 24 horas. Foi possível observar um efeito concentração e tempo resposta nas três linhagens analisadas. O CI50 foi de 3,26, 8,49 e 3,09 μM para as linhagens SiHa, C-33 A e HaCaT respectivamente, no tempo de tratamento de 24 horas. Com o intuito de avaliar o potencial efeito indutor de apoptose foi realizado o ensaio... / Cervical cancer is a worldwide public health problem, especially in developing countries, setting the fourth most common female cancer in the world. The infection by human papillomavirus (HPV) is the main risk factor for the development of this cancer, being present in 90% of cases of cervical cancer in the world population. Forward the search for new chemotherapeutic agents, natural products have strongly contributed to the identification of these substances and the development of modern therapeutics. Maytenin is a quinonemethide triterpene extracted from the roots of Maytenus ilicifolia plant, which has some biological activities previously reported as an antifungal, antiprotozoal and especially antitumor action. At the moment there are no reports in the literature relating the activity of maytenin in infected cells by HPV-16. The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity of maytenin in cervical carcinoma line infected by HPV-16 (SiHa), non-infected by the virus (C-33 A) and by immortalized human keratinocytes (HaCaT), as well as verifying the induction of apoptosis and / or necrosis by Hoechst test and propidium iodide and the induction of apoptosis by caspase-3 activity in all three cell lines, in addition to check for changes in the cell cycle of treated cells with maytenin and the potential of genotoxicity and mutagenicity, and to evaluate the proliferation of the three cell lines. The cytotoxicity assay was performed by sulforhodamine B method and the three cell lines were treated during 6, 12 or 24 hours. It was possible to observe a concentration effect and response time in three lines analyzed. The IC50 was 3,26, 8,49 and 3,09 μM for SiHa, C-33 A and HaCaT lines respectively, in 24 hours treatment time. In order to evaluate the potential inductive effect of apoptosis it was performed a marking cytomorphological test with Hoechst and propidium iodide in 6 and 12 hours treatment times, and for the three cell lines it was ...

Orientador: Ana Marisa Fusco de Almeida / Coorientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Maristela Pereira / Banca: Luis Octávio Regasini / Resumo: A criptococose é uma micose sistêmica e oportunista causada principalmente pelas leveduras Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii. Entre as principais manifestações clínicas estão o desenvolvimento de meningite, encefalite, meningoencefalite e infecções pulmonares. Estima-se que mais de um milhão dos casos de criptococose ocorrem por ano em indivíduos HIV positivos, o que classifica esta doença como a terceira mais importante entre as infecções fúngicas sistêmicas. A ecologia deste gênero está diretamente relacionada ao meio ambiente, sendo a espécie C. neoformans, comumente encontrada em excretas secas de pombos (Columbia livia) e a espécie C. gattii é encontrada, principalmente, em plantas, como espécies de Eucalyptos. O tratamento da criptococose é realizado com os fármacos antifúngicos, anfotericina B e fluconazol, sendo este último de ação fungistática utilizado para tratamento de longo prazo, que apesar de eficiente, pode causar uma série de reações adversas e ainda desenvolvimento de resistência. Tendo em vista o difícil controle da levedura e o tratamento, este trabalho tem como objetivo principal, a pesquisa de substâncias naturais com alto potencial antifúngico com finalidade saneante e medicamentosa, combatendo a levedura em seu nicho ecológico natural e também atuando no combate à infecção no hospedeiro. Uma forma de diminuir os casos desta infecção é através do processo de desinfecção ambiental com produtos saneantes, os quais apresentam capacidade fungicida. Por meio do projeto Biota/FAPESP, foram selecionados dois triterpenóides quinonamétideos extraídos de Maytenus ilicifolia, a maitenina e a pristimerina, as quais apresentaram potentes CIMs anti-Cryptococcus, mais de 90 % de eficiência na desinfecção e baixa toxicidade, o que revela que... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Cryptococcosis is a systemic mycosis caused mainly by opportunistic yeast Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii. Among the main clinical manifestations are the development of encephalitis, meningoencephalitis and pulmonar infections. It is estimated that more than one million cases of cryptococcosis occur per year in HIV positive individuals, which classifies the disease as the third among the most importante systemic fungal infections. The ecology of this genus is directly related to the environment. Specie C. neoformans is commonly found in dried excremento of pigeons (Columbia livia) and the species C. gattii is found primarily in plants such as Eucalyptus species. Cryptococcosis treatment is performed with the antifungal drugs amphotericin B and fluoconazole, the later being of a fungistatic used to treat long-term, while effective, may cause a number of adverse reactions and also the development of resistence. Given the difficult control of the yeast and treatment, this work has as main objective, the research of natural substances with high potential antifungal drug with purpose and saneante, fighting yeast in their natural ecological niche and also acting in fighting infection in the host. One way to reduce the cases of infection is through the capacity fungicide. Through the Project BIOTA / FAPESP, we selected two quinonametides triterpenids extracted from Maytenus ilicifolia, the maitenin and pristimerin, which showed potente anti-Cryptococcus MICs, more than 90 % of the disinfection efficiency and low toxicity... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador : Christiane Pienna Soares / Coorientador: Valeria Valente / Banca: Raquel Alves dos Santos / Banca: Cleverton Roberto de Andrade / Resumo: O câncer de colo de útero é um problema de saúde pública mundial, especialmente nos países em desenvolvimento, configurando a quarta neoplasia feminina mais comum no mundo. A infecção pelo Papilomavírus Humano (HPV) é o principal fator de risco para o desenvolvimento do referido câncer, estando presente em 90% dos casos de câncer de colo uterino na população mundial. Frente a busca por novos agentes quimioterapêuticos, os produtos naturais tem contríbuido intensamente para a identificação dessas substâncias e o desenvolvimento da terapêutica moderna. Maitenina, é um triterpeno quinonametídeo extraído das raízes da plana Maytenus ilicifolia, que possui algumas atividades biológicas já relatadas, como antifúngica, antiprotozoária e principalmente ação antitumoral. No momento não existem relatos na literatura relacionando a atividade da maitenina em células infectadas por HPV-16. O objetivo do presente estudo foi avaliar a citotoxicidade da maitenina em linhagem de carcinoma cervical infectada por HPV-16 (SiHa), não-infectada pelo vírus (C-33 A) e queratinócitos humanos imortalizados (HaCaT), bem como verificar a indução de apoptose e/ou necrose pelo ensaio de Hoechst e Iodeto de Propídeo e indução de apoptose pela atividade de caspase-3 nas três linhagens celulares, além de verificar alterações no ciclo celular das células tratadas com maitenina e o potencial de genotoxicidade e mutagenicidade, além de avaliar a proliferação das três linhagens. O ensaio de citotoxicidade foi realizado pelo método da sulforodamina B, e as três linhagens celulares foram tratadas durante 6, 12 ou 24 horas. Foi possível observar um efeito concentração e tempo resposta nas três linhagens analisadas. O CI50 foi de 3,26, 8,49 e 3,09 μM para as linhagens SiHa, C-33 A e HaCaT respectivamente, no tempo de tratamento de 24 horas. Com o intuito de avaliar o potencial efeito indutor de apoptose foi realizado o ensaio... / Abstract: Cervical cancer is a worldwide public health problem, especially in developing countries, setting the fourth most common female cancer in the world. The infection by human papillomavirus (HPV) is the main risk factor for the development of this cancer, being present in 90% of cases of cervical cancer in the world population. Forward the search for new chemotherapeutic agents, natural products have strongly contributed to the identification of these substances and the development of modern therapeutics. Maytenin is a quinonemethide triterpene extracted from the roots of Maytenus ilicifolia plant, which has some biological activities previously reported as an antifungal, antiprotozoal and especially antitumor action. At the moment there are no reports in the literature relating the activity of maytenin in infected cells by HPV-16. The aim of this study was to evaluate the cytotoxicity of maytenin in cervical carcinoma line infected by HPV-16 (SiHa), non-infected by the virus (C-33 A) and by immortalized human keratinocytes (HaCaT), as well as verifying the induction of apoptosis and / or necrosis by Hoechst test and propidium iodide and the induction of apoptosis by caspase-3 activity in all three cell lines, in addition to check for changes in the cell cycle of treated cells with maytenin and the potential of genotoxicity and mutagenicity, and to evaluate the proliferation of the three cell lines. The cytotoxicity assay was performed by sulforhodamine B method and the three cell lines were treated during 6, 12 or 24 hours. It was possible to observe a concentration effect and response time in three lines analyzed. The IC50 was 3,26, 8,49 and 3,09 μM for SiHa, C-33 A and HaCaT lines respectively, in 24 hours treatment time. In order to evaluate the potential inductive effect of apoptosis it was performed a marking cytomorphological test with Hoechst and propidium iodide in 6 and 12 hours treatment times, and for the three cell lines it was ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:59:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_marcia_vaz_ribeiro.pdf: 3498598 bytes, checksum: 7e2417006373e96bad648e6cfe508c8a (MD5) Previous issue date: 2008-07-08 / Maytenus ilicifolia Mart. ex Reis., popularly known as espinheira-santa, is an autochthonous specie belonging to Celastraceae family. Presents high medicinal value for treatment of ulcers, chronicle gastritis, dyspepsia and indigestion. Due its medicinal importance, have been an increase of extractivism in natural populations. So, this specie is priority for conservation, to avoid the risk of genetic erosion. The tissue culture is important because allows massive production of plants free from pathogenic agents and genetically uniforms. The in vitro establishment is the first phase of the micro propagation process, where the plant material used can vary according to the finality of the work. Studies evidence that genetic flux by seeds or pollen grains, and also the environment, mainly the habitats, has the potential to improve the genetic variability of populations from one locality. The objective of this work was to establish and evaluate the capacity of in vitro multiplication of M. ilicifolia plantlet, and also analyze by AFLP the genetic variability of 20 accessions collected in different localities from Rio Grande do Sul State. For the in vitro establishment previously disinfected seeds were inoculated in three different media: MS; MS + Active Coal (1g L-1) and MS + Vermiculite. The variables analyzed were plantlet height and root length. For the molecular analysis it was tested eight primers combinations. Values of genetic similarities were calculated by Simple-matching coefficient and used to generate a similarity dendrograma by UPGMA method. The analyzed variables showed significant differences. The greater media for plantlet height (5.06 cm) and root x length (3.4 cm) were obtained in the MS medium with Vermiculite. The morphological aspect of the roots must be considered, because the roots from plantlets germinated in MS medium was very fibrous and without root hairs, differently from plantlets germinated the MS medium + Vermiculite, were presented roots adequate for absorption of nutrients from the medium culture. The eight primers generate 455 eletrophoretical profiles, obtaining 100% of polymorphism. The primers E-ACC/M-CAA, E-ACG/M-CTA and E-ACG/M-CTC presented the greater number of eletrophoretical profile, 71 each, totalizing 46.80% of the total polymorphism. Dendrograma analysis showed a high coefficient of correlation (r = 0.94), demonstrating high representativity from the data of genetic similarity and those of groupings. By AMOVA it was verified that 89.33% of the total variability happened among individuals from the same population. Based on the discussed can be concluded that the more adequate medium for the in vitro establishment is the MS medium added of Vermiculite and AFLP molecular markers allow the characterization and genetic variability estimative of M. ilicifolia populations. / Maytenus ilicifolia Mart. ex Reis., popularmente conhecida como espinheira-santa, é uma espécie autóctone pertencente à família Celastraceae que apresenta alto valor medicinal para o tratamento de úlceras, gastrites crônicas, dispepsias e indigestão. Devido a sua importância medicinal, houve um aumento no extrativismo em populações naturais, tornando-a prioritária para a conservação, a fim de evitar o risco de erosão genética. A cultura de tecidos tem importante papel por proporcionar produção massiva de plantas, livres de agentes patogênicos e geneticamente uniformes, sendo o estabelecimento in vitro a primeira fase do processo de micropropagação, onde o material vegetal utilizado pode variar de acordo com a finalidade do estudo. Estudos evidenciam que o fluxo gênico por sementes ou dispersão de grãos de pólen, bem como o ambiente, principalmente o habitat, tem o potencial de aumentar a variabilidade genética de populações de uma mesma localidade. O objetivo deste trabalho foi estabelecer e avaliar a capacidade de multiplicação in vitro de plântulas de M. ilicifolia, bem como, analisar a variabilidade genética de 20 acessos coletados em diferentes localidades no estado do Rio Grande do Sul, através da técnica AFLP. Para o estabelecimento in vitro, sementes previamente desinfestadas foram inoculadas em três meios diferentes: MS; MS + Carvão Ativado (1g L-1) e MS + Vermiculita. As variáveis analisadas foram altura das plântulas e comprimento de raiz. Para a viii análise molecular foram testadas oito combinações de primers AFLP. Os valores de similaridade genética foram calculados pelo Simple-matching coefficient e utilizados para gerar o dendrograma de similaridade pelo método UPGMA. As variáveis analisadas apresentaram diferença significativa, onde as maiores médias para altura das plântulas (5,06 cm) e comprimento de raiz (3,4 cm), foram obtidas no meio MS acrescido de Vermiculita. Observou-se que o aspecto morfológico das raízes deve ser considerado, pois as raízes das plântulas germinadas em meio MS apresentaram-se bastante fibrosas e com ausência de pêlos radiculares, diferentemente das plântulas germinadas em meio MS + Vermiculita, onde apresentaram raízes adequadas para a absorção de nutrientes do meio de cultura. As oito combinações de primers geraram 455 perfis eletroforéticos, com 100% de polimorfismo. Os primers E-ACC/M-CAA, E-ACG/MCTA, E-ACG/M-CTC apresentaram o maior número de perfis eletroforéticos, 71 cada, totalizando 46,80% do polimorfismo total. Na análise do dendrograma foi observado um alto coeficiente de correlação (r = 0,94), demonstrando elevada representatividade dos dados de similaridade genética e os de agrupamento. Pela AMOVA verificou-se que 89,33% da variabilidade total ocorreu entre indivíduos da mesma população. Com base no exposto conclui-se que o meio mais adequado para o estabelecimento in vitro é o meio MS acrescido de Vermiculita e marcadores moleculares tipo AFLP permitem a caracterização e a estimativa da variabilidade genética de populações de M. ilicifolia.

Orientadores: Marcos José Salvador, Carlos Amilcar Parada / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T07:08:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Teixeira_AlyneGrasiela_M.pdf: 2262328 bytes, checksum: 66c66f7a3fa3f4137fae0f3a0d3fe076 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Este estudo teve por objetivo a preparação de extratos padronizados (fluidos e secos em leito de jorro) das folhas de Maytenus ilicifolia (Celastraceae), a elaboração de formulações tópicas (creme, gel e gel-creme) contendo os extratos ativos, a caracterização química dos extratos por CLAE-DAD/ESI-MS e UPLC-MS e a avaliação in vitro da atividade antioxidante utilizando ensaios indiretos mediados pela transferência de elétrons, tais como redução do radical DPPH e Folin-Ciocalteu (FCR) e ensaios diretos baseados em mecanismos de transferência de hidrogênio, tais como ensaio beta-caroteno e ORACFL. O extrato fluido concentrado foi submetido ao processo de secagem por leito de jorro, utilizando como adjuvante de secagem o dióxido de silício coloidal (Tixosil 333®, Rhodia, São Paulo, Brasil) na proporção de 40, 60 e 80% em relação ao total de sólidos do extrato fluido e a capacidade antioxidante dos extratos foram analisados. Observou-se que tanto o extrato fluido concentrado, como os extratos secos apresentaram atividade antioxidante in vitro, porém os extratos secos mostraram atividade mais intensa, com destaque para o extrato seco com 40% de dióxido de silício coloidal (Mi40). A análise dos constituintes químicos presentes nos extratos ativos utilizando CLAE-DAD/ESI-MS e UPLC-MS sugeriu a presença de flavonols (aglicona e O-heterosídeos) e catequinas, sendo quantificados por UPLC-MS a (+)-catequina, (-)-epicatequina e rutina que apresentaram promissora atividade antioxidante nos ensaios DPPH e ORACFL. Os extratos (fluidos e secos em leito de jorro) mostraram considerável conteúdo de constituintes fenólicos (2,15 a 3,72 mg de GAE/kg), assim como atividade antioxidante elevada nos dois ensaios (IC50 entre 7,98 e 51,79 ?g/mL no DPPH e capacidade antioxidante entre 5828,3 e 15249,3 ?mol de TE/g de extrato no ORACFL). Os resultados demonstraram que, de maneira geral, a atividade antioxidante e os perfis cromatográficos dos extratos secos não foram consideravelmente afetados pela operação de secagem em leito de jorro, mas os melhores resultados quanto à atividade antioxidante e maior quantidade de (+)-catequina, (-)-epicatequina e rutina foram verificados no extrato seco Mi40 com menor percentagem de adjuvante de secagem. Visando avaliar o comportamento dos extratos ativos em formulação farmacêutica e com o propósito de avaliar a possibilidade de uma nova aplicação para o extrato hidroalcoólico das folhas de M. ilicifolia em uso tópico, os extratos com promissora atividade antioxidante foram incorporados em formulações tópicas (creme, gel e gel creme), estabelecendo-se um estudo comparativo da atividade antioxidante dos extratos (fluidos e secos em leito de jorro) e destes nas formulações elaboradas. Os melhores resultados observados em termos de atividade antioxidante foram para as formulações creme, gel e gel creme contendo como ativo o extrato seco Mi40 a 10% / Abstract: This study aimed to the preparation of standardized fluid and spouted bed-dried extracts from the leaves of Maytenus ilicifolia, preparation of topical formulations (cream, gel and gel-cream) containing the active extracts, chemical characterization of the extracts by HPLC-DAD/ESI-MS and UPLC-MS and in vitro evaluation of antioxidant activity assays using indirect mediated electron transfer, such as reduction of DPPH and Folin-Ciocalteu (FCR) and direct assays based on hydrogen transfer, such as beta-carotene assay and ORACFL. The concentrate fluid extract was subjected to spouted bed drying, using as drying adjuvant, the colloidal silicon dioxide (Tixosil 333®, Rhodia, Sao Paulo, Brazil) in a proportion of 40, 60 and 80% in relation to total solids of the fluid extract, and the antioxidant capacity of the extracts was analyzed. It was observed that both the concentrated fluid extract, such as spouted bed-dried extracts showed antioxidant activity in vitro, but the dried extracts showed the strongest activity, with emphasis on the dried extract with 40% colloidal silicon dioxide (Mi40). The analysis of chemical constituents present in the active extracts using HPLC-DAD/ESI-MS and UPLC-MS suggested the presence of the flavonols (aglycone and O-glycosides) and catechin. Using UPLC-MS analysis were quantify the (+)-catechin, (-)-epicatechin and rutin that showed antioxidant activity in the DPPH and ORACFL assays. The fluid and spouted bed-dried extracts showed significant content of phenolic constituents (2.15 to 3.72 mg of GAE kg) and high antioxidant activity in both methods (IC50 between 7.98 and 51.79 ?g/ mL in DPPH and antioxidant capacity between 5828 and 15249 micromol TE/g extract in ORACFL). The results showed that, in general, the antioxidant activity and the chromatographic profiles of the dried extracts were not significantly affected by the drying operation in spouted bed, but the best results for antioxidant activity and higher amount of (+)-catechin, (-)-epicatechin and rutin were observed in the dry Mi40 with lowest percentage of drying adjuvant. To evaluate the behavior of active extracts in pharmaceutical formulation, the extracts with antioxidant activity have been incorporated into topical formulations (cream, gel cream and gel), setting up a comparative study of the antioxidant activity of the fluid and spouted bed-dried extracts and these in developed formulations. The best results were observed in terms of antioxidant activity for formulations cream, gel and gel cream containing the dried extract Mi40 as active at 10% / Mestrado / Fármacos, Medicamentos e Insumos para Saúde / Mestra em Biociências e Tecnologia de Produtos Bioativos

Com o objetivo de verificar a viabilidade de obtenção de comprimidos contendo alto teor de produto seco nebulizado (PSN) de Maytenus ilicifolia Martius ex Reiss., foi avaliada a influência de adjuvantes farmacêuticos através da realização de planejamento fatorial 2 3. Os fatores qualitativos estudados foram: tipo de desintegrante (croscarmelose sódica e glicolato de amido sódico), tipo de lubrificante (dióxido de silício coloidal e estearato de magnésio) e tipo de material de carga/aglutinante (celulose microcristalina e lactose). Os complexos farmacêuticos (CF) apresentaram características tecnológicas diferenciadas, dependentes da composição da formulação. Todos os CF demonstraram baixa densidade e más propriedades de fluxo. Os compactos foram obtidos em máquina de comprimir altenativa, por compressão direta e pesagem individual de cerca de 650 mg de cada formulação, contendo 375 mg de PSN de M. ilicifolia. As condições de compressão foram fixadas de modo que todos as compactos possuíssem a mesma dureza. Os parâmetros tecnológicos analisados foram friabilidade, tempo de desintegração e eficiência de dissolução. O material de carga/aglutinante (MCA) foi a classe de adjuvantes com maior influência sobre os parâmetros estudados. Todos os fatores estudados apresentaram efeito significativo sobre a friabilidade, sendo que os compactos contendo lactose apresentaram valores, cerca de vinte vezes superiores aos com celulose microcristalina. Os fatores significantes sobre o tempo de desintegração foram o tipo de desagregante e tipo de MCA. Todos os compactos produziram diferentes perfis de dissolução. A eficiência de dissolução mostrou-se superior a 50% e, neste parâmetro, os fatores mais significantes foram o tipo de lubrificante e o tipo de MCA. / The influence of pharmaceutical excipients on the technological characteristics of compacts containing high amounts of Maytenus ilicifolia Martius ex Reiss. spray dried extract was evaluated by a 2 3 factorial design. The qualitative factors studied were: type of disintegrant (croscarmellose sodium and sodium starch glycolate), lubricant (colloidal silicon dioxide and magnesium stearate) and filler/binder (microcrystalline cellulose and lactose). The compacts were prepared by direct compression using a single flat punch tablet machine by individual weighing of 650 mg each formulation, containing circa 60 % of spray dried extract. The compression parameters were chosen in order to produce compacts with similar hardness. The technological parameters analyzed were: friability, disintegration time, and dissolution efficiency (DE%). The results showed that the filler/binder was the excipient class with greatest influence on the compact characteristics. All factors influenced significantly the friability. Compacts containing lactose presented higher friability than the microcrystalline cellulose ones. The type of disintegrant and filler/binder were the most important factor affecting the disintegration time. All compacts showed DE% values higher than 50% but different dissolution profiles. The release was stronger influenced by the type of lubricant and filler/binder. The results demonstrated the technological feasibility of compacts containing high quantity of M. ilicifolia spray dried extract.