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Impacto da expressão do gene PNPLA3 na esteatose hepática em pacientes com infecção pelo vírus da hepatite C / Impact of PNPLA3 gene expression in hepatic steatosis in patients infected with hepatitis C virusCaroline Manchiero 02 February 2017 (has links)
Introdução: O vírus da hepatite C (HCV) possui distribuição mundial, ocorrendo em indivíduos de todas as idades e etnias. Cerca de 80% dos casos de hepatite C aguda progridem para infecção crônica e 10-20% desses casos desenvolverão complicações de doença hepática crônica, como cirrose hepática, dentro de duas a três décadas e 1-5% vão desenvolver câncer de fígado. Estudos indicam que o polimorfismo rs738409 do gene PNPLA3 pode estar relacionado ao desenvolvimento da esteatose hepática e à progressão da fibrose. O presente estudo avaliou a associação entre o polimorfismo rs738409 presente no gene da PNPLA3 e presença de esteatose e o grau de fibrose em pacientes com hepatite C crônica. Métodos: Foram selecionados 314 pacientes com hepatite C crônica atendidos no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. Foi realizada a genotipagem do polimorfismo rs738409 (I149M) do gene PNPLA3, utilizando a técnica de reação em cadeia da polimerase - análise de tamanho de fragmentos de restrição (PCR-RFLP). Resultados: Dos pacientes incluídos no estudo, 133 (45,9%) apresentaram o genótipo CC, 63 (21,7%) o genótipo CG e 94 (32,4%) o genótipo GG. Idade, infecção pelo vírus da hepatite C genótipo 3, moderada ou alta atividade inflamatória (A2-A3), IMC elevado, nível elevado de GGT e presença do alelo G (GG ou GC) mantiveram-se associados à esteatose hepática na análise multivariada. Permaneceram associados à fibrose avançada: idade, sexo masculino, níveis elevados de AST e GGT, moderada ou alta atividade inflamatória (A2-A3) e presença de esteatose hepática ( > 5%) na análise multivariada. Conclusões: Observou-se associação entre o polimorfismo rs738409 do gene PNPLA3 e esteatose hepática nos pacientes com hepatite C crônica, mas essa associação não foi encontrada com fibrose avançada / Introduction: The hepatitis C virus (HCV) has a worldwide distribution, occurring in individuals of all ages and ethnicities. About 80% of acute hepatitis C cases progress to chronic infection and 10-20% of these cases will develop the complications of chronic liver disease such as liver cirrhosis, within 2 to 3 decades, and 1-5% will develop liver cancer. Studies indicate that the rs738409 polymorphism of the PNPLA3 gene may be related to the development of hepatic steatosis and fibrosis progression. The present study evaluated the association between the rs738409 polymorphism present in the PNPLA3 gene and the presence of steatosis and the degree of fibrosis in patients with chronic hepatitis C. Methods: Three hundred and fourteen patients with chronic hepatitis C assisted at the Clinical Hospital of the Medical School of the University of São Paulo were selected. Genotyping for the PNPLA3 rs738409 (I149M) polymorphism was performed by a polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism assay (PCR-RFLP). Results: Of the patients included in the study, 133 (45.9%) had the CC genotype, 63 (21.7%) the CG genotype and 94 (32.4%) the GG genotype. The multivariate analysis showed an association between hepatic steatosis and age, infection with hepatitis C genotype 3, moderate or high inflammatory activity (A2-A3), high BMI, high level of GGT and presence of the G allele (GG or GC). Furthermore, multivariate analysis also showed an association between advanced fibrosis and male gender, high levels of AST and GGT, moderate or high inflammatory activity (A2-A3) and the presence of hepatic steatosis ( > 5%). Conclusions: It was observed an association between PNPLA3 rs738409 polymorphism and hepatic steatosis in patients with chronic hepatitis C but this association was not found with advanced fibrosis
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Reprogramação fenotípica por excesso de glicocorticoides: participação de micro-RNAs no desenvolvimento hepático e possíveis repercussões na vida adulta. / Programming by glucocorticoid excess: actions of miRNAs on hepatic development and outcome.Lucas Carminatti Pantaleão 24 February 2015 (has links)
Avaliamos o efeito da RCIU induzida por glicocorticoides sobre a regulação da expressão de miRNAs no fígado de ratos albinos. Animais expostos intrauterinamente à dexametasona apresentaram menor peso ao nascer, fígados relativamente menores dos que os observados em animais controle e menores concentrações hepáticas de PCNA. Em longo prazo, os animais DEX desenvolveram distúrbios metabólicos caracterizados por intolerância à glicose e maior potencial gliconeogênico no desmame e na vida adulta. Ao avaliarmos o perfil de miRNAs no fígado, detectamos aumento da expressão de todo o cluster do miR-322 no período perinatal, com menor conteúdo de alvos preditos desses transcritos (AKT3, CCND1 e INSR). A superexposição ao miR-322-5P reduz a taxa de proliferação em linhagens celulares de hepatocarcinoma e a expressão dos alvos observados no fígado dos animais estudados. Propomos um link entre a expressão aberrante do miR-322-5P e a reduzida taxa de proliferação detectada no tecido hepático em desenvolvimento, contribuindo para o estabelecimento do fenótipo em longo prazo. / We evaluated the effects of glucocorticoid induced IUGR on the expression of miRNA on Wistar rat livers. Dexamethasone (DEX) treated animals were lighter and had smaller liver weight:body weight ratio when compared to control animals. Furthermore, liver PCNA expression was downregulated, sugesting a reduction on cell proliferation rate. In the long term, DEX animals developed metabolic disturbances such as glucose intolerance e increased gluconeogenesis rate in a fast state. The analysis of miRNA expression profile showed an upregulation of miR-322 cluster on perinatal period, together with a downregulation of three putative targets: Akt3, CCND1 and INSR. Later, we used in vitro studies to prove that overexpression of miR-322-5P arrests cell cycle and impairs proliferation of HEPG2 cells as well as it downregulates the predicted targets. Based on this data, we suggest a link between overexpression of miR-322-5P and impaired proliferation rate on the developing liver, which affects the phenotype in the long term.
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Efeitos de nanopartículas de ouro sobre o tecido ósseo, rim, fígado e coração de ratosRuffoni, Leandro Dias Gonçalves 05 July 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013-07-05 / Financiadora de Estudos e Projetos / The process of formation and remodeling of bone tissue is influenced by several factors such as hormones, nutrition, genetics, sex, age, intercurrent disease and environmental factors. There are published reports of the performance of nanoparticles on the development and bone remodeling, and also on kidney, liver and heart. The objective of this study was to analyze the possible influence of gold nanoparticle (AuNPs) exposure on bone tissue and on kidney, heart and liver. After a single intravenous AuNPs exposure biometric, biophysical and biomechanical bone parameters of adult rats were analyzed. The animals were randomly distributed into three groups (1 week, 1 month and 2 months), divided into four, which were respectively treated with polymer poliaminoamida (PAMAM), PAMAM + AuNPs, citrate (citrate buffer) and citrate + AuNPs. Gold nanoparticles were administered by a single dose (0,01 mg Au/kg MC),via the jugular vein. The biomechanical properties of femurs were obtained by the three point bending test. The mass of the kidney, liver and heart were also analyzed. There were no significant differences of the different bone parameters and organs weights among the groups in their respective treatment periods. Therefore, the results indicated that the dose of AuNPs used in this study did not impair the quality of bone tissue as well as the organ weights. These results may help in understanding the possible actions of AuNPs on the bone tissue and organs. / O processo de formação e remodelamento do tecido ósseo é influenciado por diversos fatores tais como hormonais, alimentação, genética, sexo, idade, doenças intercorrentes e fatores ambientais. Há relatos na literatura da atuação de nanopartículas sobre o desenvolvimento e remodelamento ósseo e de sua influência sobre rim, fígado e coração. O objetivo deste estudo foi analisar possíveis influências da exposição de nanopartículas de ouro (AuNPs ) sobre o tecido ósseo, rim, fígado e coração. Após uma única exposição intravenosa, foram analisados parâmetros biométricos, biofísicos e biomecânicos ósseos de ratos adultos e o peso úmido do rim, coração e fígado. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em três grupos (uma semana, um mês e dois meses), subdivididos em quatro, os quais foram tratados respectivamente com polímero poliaminoamida (PAMAM), PAMAM + AuNPs, Citrato (tampão citrato) e Citrato + AuNPs. As nanopartículas de ouro foram administradas em dose única (0,01 mg Au/kg MC), via veia jugular. As propriedades biomecânicas dos fêmures foram obtidas pelo teste de flexão a três. Não houve diferenças significativas dos diferentes parâmetros ósseos e massa dos órgãos entre os grupos nos seus respectivos períodos de tratamento. Portanto, os resultados apontam que a dose de AuNPs utilizada neste estudo não prejudicou a qualidade do tecido ósseo assim como a massa dos órgãos. Estes resultados podem auxiliar no entendimento de possíveis ações de AuNPs sobre o tecido ósseo e dos órgãos.
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Papel potencial do ácido rosmarínico sobre biomarcadores de estresse oxidativo e acetilcolinesterase de ratos diabéticos induzidos por estreptozotocina / Potential role of rosmarinic acid on biomarkers of oxidative stress and acetylcholinesterase in streptozotocin-induced diabetic ratsMushtaq, Nadia 22 April 2013 (has links)
Oxidative stress plays an important role in diabetic pathogenesis. Rosmarinic acid
(RA) was used for the first time as an antioxidant agent for inhibition of diabetic
nephropathy. Oxidative stress induced by Streptozotocin (STZ) has been shown to damage
pancreatic beta cell and produce hyperglycemia in rats, inducing diabetes. In the present
study, an attempt was made in investigation, the efficiency of rosmarinic acid in preventing
alteration of oxidative parameters in liver, kidney and acetylcholinesterase (AChE) in brain
of diabetic rat induced by STZ. The animals were divided into six groups (n=8): control;
ethanol; RA 10 mg/kg; diabetic; diabetic/ethanol; diabetic/RA 10 mg/kg.In diabetes, the brain
region become affected and showed increased level of lipid peroxidation in hippocampus,
cortex and striatum, compared with control. The increased in lipid peroxidation was
decreased or maintained to the level of control by RA in hippocampus (28%), cortex (38%)
and striatum (47%) of diabetic rats after 21 days treatment at the dose of 10 mg/kg body
weight. Furthermore, we found that diabetes caused significant decreased in the activity of
antioxidant enzymes i.e. superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), Delta-aminolevulinic
acid dehydratase (ALA-D) and non- enzymatic parameter like ascorbic acid, non proteinthiol
(NPSH) in liver and kidney. The diabetic group treated with RA (10 mg/kg body weight
for 21 days) significantly increased the activity of enzymes SOD, CAT, ALA-D and nonenzymatic
ascorbic acid, NPSH in liver and kidney. Furthermore, these results indicate that
rosmarinic acid sigificantly mimic the oxidative stress produced during hyperglycemia in
STZ-induced diabetic rats. In addition, rosmarinic acid is potential candidate in the
prevention of any alteration of pathological condition in diabetes. We suggest that rosmarinic
acid could be a suitable candidate for the treatment of diabetes. / O estresse oxidativo desempenha um papel significativo na patogênese do diabetes. O
ácido rosmarínico (RA) foi utilizado pela primeira vez como agente antioxidante para a
inibição da nefropatia diabética. O diabetes induzido por estreptozotocina (STZ) é capaz de
destruir as células beta pancreáticas e produzir hiperglicemia causando estresse oxidativo.
No presente estudo, investigou, a eficiência do ácido rosmarínico na prevenção de alteração
de parâmetros oxidativos no fígado, rim e acetilcolinesterase (AChE) no cérebro de ratos
diabéticos induzidos por STZ. Os animais foram divididos em seis grupos (n = 8): controle;
etanol; RA 10 mg / kg; diabéticos; diabéticos /etanol; diabético / RA 10 mg / kg. Ratos
diabéticos apresentaram um aumento do nível de peroxidação lipídica no hipocampo, córtex
e estriado, em comparação com o controle. O tratamento com ácido rosmarínico (10 mg/kg)
durante 21 dias preveniu o aumento da peroxidação lipídica no hipocampo (28%), no córtex
(38%) e no estriado (47%) de ratos diabéticos. Além disso, o diabetes causou uma
diminuição significativa na atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD), catalase
(CAT) e delta aminolevulínico-desidratase (ALA-D) e nos níveis dos antioxidantes nãoenzimáticos
ácido ascórbico e tióis não-proteicos (NPSH) no fígado e no rim. O tratamento
com ácido rosmarínico preveniu o decréscimo na atividade da SOD, CAT e ALA-D e o
decréscimo nos níveis de ácido ascórbico e NPSH no fígado e no rim. Assim, os resultados
encontrados neste estudo indicam que o ácido rosmarínico diminuiu o estresse oxidativo
produzido pela hiperglicemia em ratos diabéticos induzidos por STZ. Dessa forma, é
plausível sugerir que o ácido rosmarínico é um potencial candidato na prevenção de
alterações no sistema colinérgico bem como de danos oxidativos observados no diabetes.
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Estudo comparativo de precursores da PpIX (ALA e MAL) utilizados topicamente em terapia fotodinâmicaRego, Raquel Ferreira 08 August 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008-08-08 / Universidade Federal de Sao Carlos / Photodynamic therapy (PDT) is a modality for treatment of tumors, and uses a combination of a drug (photosensitizer) and light in the presence of the molecular oxygen to selectively damage target tissue. In the absent of one of these components, the cytotoxic effect is not observed. Since 1990, many works in the literature studies the topical application of precursors of protoporphyrin IX (PpIX) in PDT, such 5- aminolevulinic acid (ALA) and methyl aminolevulinate (MAL). The purpose of this work was realized an comparative study in vivo between two commercial and available drugs precursors of PpIX, the ALAsense (5-aminolevulinic acid - ALA) from Russian and Metvix (methyl aminolevulinate MAL) from United Kingdom. Experiments were carried out in animals to analyze the performance and the ALA photodynamic MAL in
liver of rats. The fluorescence spectra of the liver were collected at pre-determined time. The time of accumulation of PpIX was observed by 2 hours and 45 minutes for the ALA and MAL for 4 hours after application of drugs in the liver. The formation, accumulation and depth of penetration of PpIX in liver tissue were determined by fluorescence spectroscopy. Using a total of 21 animals were the irradiation of the liver
fotossensibilizado with ALA or MAL alone with different doses of light (20, 50, 100 and 200J/cm2) or in a combination MAL + ALA to 8%, 16% and 32 dose of 100J/cm2. Thirty hours after the lighting, the animals were killed and livers removed. The area of necrosis of the liver was assessed macroscopically and the samples were prepared for histological study, considering especially the aspects and depth of necrosis. In
histological analysis were carried out many aspects of necrosis and the normal liver. The depths of necrosis were measured and the threshold dose obtained using a mathematical model proposed in the literature. Moreover, the monitoring was carried out of O2 consumption of mitochondria isolated from livers of rats, after topical administration of drugs precursors of PpIX (ALA and MAL) in order to check the
influence of these substances in mitochondrial bioenergetics. The results showed a higher penetration of MAL in the tissue, as well as greater depth of necrosis when compared to the ALA. These results suggest that MAL has a tendency to better
photodynamic response than ALA to the criteria studied. / Terapia Fotodinâmica (TFD) é uma modalidade terapêutica para tratamento de tumores que provoca a destruição do tecido alvo através da combinação de uma droga (fotossensibilizador) e uma fonte de luz na presença de oxigênio molecular. Na ausência de algum desses componentes, o efeito citotóxico não é observado. Desde 1990, têm-se estudado a aplicação tópica de substâncias precursoras da protoporfirina IX (PpIX) associada à TFD, como o ácido 5-aminolevulínico (ALA) e o metil aminolevulinato
(MAL). O objetivo do presente trabalho foi realizar um estudo comparativo in vivo entre duas substâncias precursoras da PpIX , o ALAsense (ácido 5-aminolevulínico - ALA) da Rússia e o Metvix (metil aminolevulinato MAL) do Reino Unido. Foram realizados experimentos em animais para analisar o desempenho fotodinâmico ALA e pelo MAL em fígado de ratos. Os espectros de fluorescência do fígado foram coletados em tempos prédeterminados. O tempo de acúmulo da PpIX observado foi de 2 horas e 45 minutos para o ALA e 4 horas para o MAL após a aplicação da droga no fígado. A formação, acúmulo e a profundidade de penetração da PpIX no tecido hepático foram determinados através da espectroscopia de fluorescência. Utilizando um total de 21 animais foi realizada a
irradiação do fígado fotossensibilizado com ALA ou com MAL isoladamente com diferentes doses de luz (20, 50, 100 e 200J/cm2) ou na forma combinada MAL + ALA a 8%, 16 e 32% com dose de 100J/cm2. Trinta horas após a iluminação, os animais foram mortos e os fígados removidos. A área necrosada do fígado foi avaliada macroscopicamente e as amostras foram preparadas para o estudo histológico,
considerando, principalmente, os aspectos e a profundidade da necrose. Na análise histológica realizada foram observados vários aspectos da necrose e da região normal do fígado. As profundidades de necrose foram medidas e a dose limiar obtida utilizando-se um modelo matemático proposto na literatura. Além disso, foi realizado o monitoramento do consumo de O2 de mitocôndrias isoladas de fígados de ratos, após administração tópica dos medicamentos precursores da PpIX (ALA e MAL) afim de verificar a influência dessas
substâncias na bioenergética mitocondrial. Os resultados obtidos mostraram uma maior penetrabilidade do MAL no tecido, bem como uma maior profundidade de necrose quando
comparado ao ALA. Esses resultados sugerem que o MAL possui uma tendência a melhor resposta fotodinâmica que o ALA para os critérios estudados.
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Obtenção e caracterização de hidrolisados proteicos de subprodutos do abate de caprinosQueiroz, Ângela Lima Menêses de 16 February 2017 (has links)
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Previous issue date: 2017-02-16 / The utilization of goat viscera to obtain protein hydrolysates presents itself as an option to increase the income of the rural producer, since the viscera exhibit high nutritional value, with protein content similar to that of goat meat. In this context, the aim of this thesis was to obtain, through the enzymatic hydrolysis of goat viscera, a new product, a protein hydrolyzate, with alimentary and / or functional properties to be used directly or indirectly in human and / or animal feed, Goat slaughter by-products. A first chemical composition study was carried out to investigate the potentials of three goat viscera (lung, heart and liver) and their mixture in a ratio of 1: 1: 1 for use as new functional products and / or ingredients. The results showed that individual and mixed goat viscera present a remarkable nutritional quality, with a high protein content (average of 18 g / 100 g), excellent total amino acid profile, all essential amino acids being present. Twenty-two fatty acids were identified, with seven being saturated, fifteen unsaturated, with emphasis on C18: 2n6t. The analytical data of hydrophobicity, electrophoretic profile and total amino acids indicate its potential to obtain protein hydrolyzates with technological applications. Subsequently, considering the results of the potential chemical composition and the lack of studies on the use of goat viscera in functional products, a second study was performed to obtain a protein hydrolyzate of viscera. In this study, the mixture of viscera, Alcalase® 2,4L and Brauzyn® enzymes was used in a DCCR². Therefore, the independent variables were the time and the enzymatic loading in the hydrolysis process and dependent variable the degree of hydrolysis of the proteins. From these studies was registered a patent BR102015023135-0, and carried out the chemical characterization and some functional properties of hydrolysates that presented higher (> GH) and lower degree of hydrolysis (<GH). The protein hydrolysates of goat viscera presented excellent nutritional quality, with high protein content (16.8 to 22.6 g / 100g), balanced amino acid profile in essential amino acids, hydrophilicity profile with hydrophilic characteristic and reduced fat content (2.3 to 6.4 g / 100g). Hydrolyzates also exhibited significant technological functional properties, such as solubility (maximum value of 59% in Alcalase® GH hydrolyzate), oil retention capacity (> 6 ml oil / g proteins in <GH hydrolysates), emulsifying property (63.2 to 64.8 ml oil / g proteins) and emulsion stability (95.3 to 97.2%). In addition, in the studies of antioxidant potential, it was possible to observe higher percentages of reduction of free radical ABTS • + in comparison with the tests than for free radical DPPH •. In view of these results, we can conclude that goat viscera are ingredients that present potential for use in the manufacture and production of new products, such as protein hydrolysates, which have wide technological applicability, as well as add value to the by-products of slaughter. / O aproveitamento de subprodutos do abate de caprinos para obtenção de hidrolisados proteicos apresenta-se como opção para o aumento da renda do produtor rural, uma vez que as vísceras exibem elevado valor nutricional, com teores de proteínas similares ao da carne caprina. Neste contexto, a presente tese objetivou a obtenção, através da hidrólise enzimática a partir dos sub-produtos do abate de caprinos, um hidrolisado proteico, com propriedades alimentícias e/ou funcionais para ser utilizado direta ou indiretamente na alimentação humana e/ou animal, agregando-se valor aos subprodutos do abate caprino. Um primeiro estudo de composição química foi realizado, para pesquisar as potencialidades de três vísceras caprinas (pulmão, coração e fígado) e de sua mistura na proporção de 1:1:1 para aproveitamento como novos produtos e/ou ingredientes funcionais. Os resultados mostraram que as vísceras caprinas, individuais e em sua mistura, apresentam destacável qualidade nutricional, com elevado teor de proteína (com média de 18 g/100g), excelente perfil de aminoácidos totais, estando presentes todos os aminoácidos essenciais. Foram identificados vinte e dois ácidos graxos, sendo sete saturados, quinze insaturados, com destaque para o C18:2n6t. Os dados analíticos de hidrofobicidade, perfil eletroforético e de aminoácidos totais indicam sua potencialidade para obtenção de hidrolizados proteicos com aplicações tecnológicas. Posteriormente, considerando os resultados da potencialidade da composição química e a inexistência de estudos sobre o aproveitamento de vísceras caprinas em produtos funcionais, realizou-se um segundo estudo, para obter um hidrolisado proteico de vísceras. Neste estudo foi utilizada a mistura de vísceras, as enzimas Alcalase® 2,4L e Brauzyn® em um DCCR². Portanto, as variáveis independentes foram o tempo e a carga enzimática no processo de hidrólise e variável dependente o grau de hidrólise das proteínas. A partir destes estudos foi registrada uma patente BR102015023135-0, e realizada a caracterização química e algumas propriedades funcionais dos hidrolisados que apresentaram maior (> GH) e menor grau de hidrólise (< GH). Os hidrolisados proteicos de vísceras caprinas apresentaram excelente qualidade nutricional, com conteúdo elevado de proteína (16,8 a 22,6 g/100g), perfil de aminoácidos balanceado em aminoácidos essenciais, perfil de hidrofobicidade com característica hidrofílica e reduzido teor de gordura (2,3 a 6,4 g/100g). Os hidrolisados exibiram também propriedades funcionais tecnológicas significativas, tais como solubilidade (valor máximo de 59% no hidrolisado de >GH da Alcalase®), capacidade de retenção de óleo (> 6 ml óleo/g proteínas nos hidrolisados de < GH), propriedade emulsificante (63,2 a 64,8 ml óleo/g proteínas) e estabilidade da emulsão (95,3 a 97,2%). Adicionalmente nos estudos de potencialidade antioxidante foi possível observar maiores percentuais de redução do radical livre ABTS•+ em comparação com os testes que para o radical livre DPPH•. Diante destes resultados, podemos concluir que as vísceras caprinas são ingredientes que apresenta potencial de utilização na fabricação e produção de novos produtos, como os hidrolisados proteicos, que possuem larga aplicabilidade tecnológica, além de agregar valor aos subprodutos do abate.
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Desenvolvimento de método simples e rápido para determinação multiclasse de resíduos de medicamentos veterinários em rim, fígado e músculo bovino por UHPLC-MS/MS / Development of simple and quick method for determination multiclasse of veterinary drug residues in kidney, liver and bovine muscle by UHPLC-MS/MSRizzetti, Tiele Medianeira 10 March 2017 (has links)
In food security area, the application of good agricultural practices is a growing concern for public health in the Brazilian domestic market and for the competitiveness countries in the external market. To ensure safety of food from animal origin, monitoring is required and Maximum Residue Limits (MRLs) must be evaluated. Therefore, the development of appropriate analytical methods for residues determination is necessary. In this work a simple, fast and efficient multiclass method of sample preparation was developed for the determination of veterinary drugs residues in bovine kidney, liver and muscle. Determination step was performed by ultra-high-performance liquid chromatographic–tandem mass spectrometry (UHPLC-MS/MS). UHPLC-MS/MS and sample preparation conditions were optimized using experimental designs. Extraction and clean up were performed by solid-liquid extraction and dispersive solid-phase extraction (d-SPE). Central composite designs were used in order to optimize the clean up step. The proposed method was validated using acetonitrile as solvent extraction followed by clean up with EMR-Lipid® sorbent and aqueous solution of 5% trichloroacetic acid (m/v). The proposed method was validated according to the criteria of the European Commission Decision 2002/657/EC. Linearity presented r2 ≥ 0.99 for most the evaluated compounds and recoveries values and RSD in the range recommended by EU. Decision limit (CCα) and detection capability (CCβ) presented values around the maximum residue limits (MRL) of each compound. Monensin was the only compound that did not present satisfactory results for bovine kidney and muscle. The developed sample preparation followed by UHPLC-MS/MS analysis was efficient for the determination of veterinary drug residues in bovine liver, kidney and muscle. The proposed methodology has been successfully applied in real samples and also in proficiency test and proved to be a great option for routine analysis. / No âmbito da segurança dos alimentos a aplicação das boas práticas agropecuárias é uma preocupação crescente tanto para a saúde pública no mercado interno brasileiro quanto para à competitividade do país no mercado externo. Para garantir a inocuidade dos alimentos de origem animal são realizados monitoramentos em diferentes tipos de amostras e adotados Limites Máximos de Resíduo (LMR). Diante disso, se faz necessário o desenvolvimento de métodos analíticos adequados para determinação de resíduos. Neste trabalho desenvolveu-se um método multiclasse de preparo de amostras simples, rápido e eficaz para a determinação de resíduos de medicamentos veterinários em rim, fígado e músculo bovino. A etapa de determinação foi realizada por cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas em série (UHPLC-MS/MS). O sistema UHPLC-MS/MS e a etapa de preparo de amostra foram otimizados com auxílio de planejamento experimental. As etapas de extração e limpeza do extrato foram realizadas por extração sólido-líquido e extração em fase sólida dispersiva (d-SPE). Planejamentos composto central foram utilizados para otimização da etapa de limpeza do extrato. O procedimento otimizado consistiu de extração por acetonitrila, seguido de limpeza com o sorvente EMR-Lipid® e solução aquosa de 5% (m/v) ácido tricloroacético. O método proposto foi validado de acordo com os critérios de referência da Decisão 2002/657/CE da Comunidade Europeia. A linearidade apresentou r2 ≥ 0,99 para maioria dos compostos avaliados e os valores de recuperação e RSD estão na faixa recomendada pela Comunidade Europeia. O limite de decisão (CCα) e a capacidade de detecção (CCβ) apresentaram valores em torno dos LMR de cada composto. Apenas a monensina não obteve resultados satisfatórios para rim e músculo bovino. O preparo de amostra desenvolvido seguida de análise por UHPLC-MS/MS foi eficiente para a determinação de resíduos de medicamentos veterinários em rim, fígado e músculo bovino. A metodologia proposta foi aplicada com sucesso em amostras reais e também em ensaio de proficiência e provou ser uma ótima opção para análise de rotina.
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Turnover do carbono (δ13C) em tecidos corporais e desempenho de leitões desmamados alimentados com dietas contendo nucleotídeos / Carbon turnover (δ13C) in body tissues and performance of weanling pigs fed diets containing nucleotideMiassi, Gabriela de Mello [UNESP] 19 August 2016 (has links)
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Previous issue date: 2016-08-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se com este estudo avaliar a influência dos nucleotídeos (inosinato e guanilato dissódico) sobre o desempenho, peso relativo e turnover do 13C no intestino delgado, baço, fígado e pâncreas de leitões desmamados com idade média de 21 dias. Foram avaliados os seguintes tratamentos: dieta controle sem suplementação de nucleotídeos (Nu); dietas contendo 0,2% de Nu; 0,4% de Nu e 0,6% de Nu. No primeiro experimento 84 leitões desmamados (6,04 ± 0,25 kg) foram distribuídos em um delineamento experimental em blocos ao acaso com quatro tratamentos (níveis de Nu), sete repetições e três animais por unidade experimental, para avaliação do desempenho. No segundo experimento foram utilizados 87 leitões desmamados (6,03 ± 0,23 kg) em delineamento experimental em blocos ao acaso, com os mesmos tratamentos, sendo abatidos três leitões no dia do desmame (dia zero) e três leitões por tratamento nos dias 3, 5, 8, 12, 23, 35 e 49 após o desmame, para avaliar o turnover do 13C na mucosa e na parede intestinal (duodeno e jejuno), no baço, fígado e pâncreas, e o peso relativo do intestino delgado e do baço, fígado e pâncreas. No primeiro experimento não foi verificado efeito dos tratamentos (P > 0,05) nas variáveis de desempenho dos leitões no período de 21 a 36 dias de idade. No período de 21 a 48 dias de idade dos leitões houve efeito quadrático (P < 0,01) dos níveis de Nu no consumo diário de ração e ganho diário de peso. No período experimental total (21 a 55 dias de idade dos leitões) verificou-se efeito quadrático dos níveis de Nu no ganho diário de peso. No segundo experimento foram observadas diminuições da meia-vida do 13C para a mucosa e parede do duodeno nos animais que receberam dietas com 0,4% de Nu e para a mucosa e parede do jejuno naqueles alimentados com dietas com 0,2% de Nu. No 12º dia de abate houve efeito linear (P < 0,01) dos níveis de Nu no peso relativo do intestino delgado. Os valores da meia-vida do carbono foram para o baço de 19,5; 18,1; 18,4 e 17,1 dias, para o fígado de 10,4; 10,1; 10,1 e 11,3 dias, e para o pâncreas de 17,2; 14,6; 13,8 e 15,4 dias, respectivamente, para os leitões que receberam dietas com adição com 0%; 0,2%; 0,4% e 0,6% de Nu. Observou-se menores valores de meia-vida do baço, fígado e pâncreas dos animais que receberam dietas com adição de 0,6%; 0,2% e 0,4% de Nu, respectivamente. A suplementação de Nu na dieta de leitões melhora o desempenho e acelera o turnover do carbono da parede e mucosa intestinal, no baço fígado e pâncreas, sugerindo recuperação e crescimento mais rápido no período pós-desmame. / This study was conducted to evaluate effects of dietary supplementation of nucleotide (disodium 5´guanylate and disodium 5´inosinate) on the growth performance, relative weight and carbon turnover 13C of the small intestine, spleen, liver and pancreas of weaned piglets of 21 days of age. The treatments were dietary supplementation with 0% (control); 0.2%; 0.4% or 0.6% nucleotide of diet. In the first trial eighty-four weaned piglets (6.04 ± 0.25 kg average initial BW) were allotted to four dietary treatments (Nu levels) with seven pens per treatment and three pigs per pen, in a randomized complete block design to evaluate the performance. In the second trial eighty-seven weaned piglets (6.03 ± 0.23 kg average initial BW) were used in a randomized complete block design, with the same treatments, and on the day of weaning (day zero) were slaughtered three piglets and days 3, 5, 8, 12, 23, 35 and 49 after weaning, three pigs per treatment were slaughtered, to evaluate the effect of nucleotide on the turnover 13C in the mucosa and intestinal wall (duodenum and jejunum), spleen, liver and pancreas and relative weight of the small intestine and spleen, liver and pancreas. During the first period (21 to 36 days of age), no differences were detected on the performance. During the second period (21 to 48 days of age), a quadratic effect (P < 0.01) of the levels of nucleotide was verified on average daily feed intake and average daily weight gain. During the whole experimental period (21 to 55 days of age), there was a quadratic effect of the levels of nucleotide (P < 0.01) on average daily weight gain. In the second experiment were observed decrease half-life to the duodenum mucosal and wall in treatment 0.4% Nu and jejunum mucosa and wall in treatment 0.2% Nu and 12th day of slaughter there was a linear effect (P < 0.01) of Nu levels relative weight of the small intestine. The values of carbon half-life to the spleen were 19.5; 18.1; 18.4 and 17.1, to the liver were 10.4; 10.1; 10.1 and 11.3 day, to the pancreas were 17.2; 14.6; 13.8 and 15.4 day, respectively, for the piglets fed 0,0%; 0.2%; 0.4% and 0,6% de Nu, respectively. Lower values of half-life was observed to the spleen, liver and pancreas of animal were dietary supplementation with 0.6%, 0.2% and 0.4% Nu, respectively. The nucleotide supplementation in the diets of pigs improves performance and accelerates the carbon turnover of mucosa and intestinal wall, in the spleen, liver and pancreas suggesting a faster recovery and growth in the post-weaned period. / CNPq: 141843/2013-6 / FAPESP: 2013/17964-2
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Avaliação por ressonância magnética funcional da necrose coagulativa por ablação de radiofrequência nas metástases hepáticas colorretais / Functional magnetic resonance evaluation of coagulative necrosis radiofrequency ablation of colorectal liver metastasesLia Roque Assumpção 16 July 2012 (has links)
A maioria dos pacientes que apresentam metástases hepáticas colorretais (MHCR) não são elegíveis para ressecção. Por isso, outras técnicas para se alcançar o controle locorregional da doença têm sido utilizadas. A Ablação por Radiofrequência (ARF) hepática tem sido empregada frequentemente para o tratamento desta condição devido às boas taxas de resposta, principalmente quando associada ao emprego de quimioterápicos modernos. Apesar da caracterização das MHCR no pré-operatório estar bem estabelecida, os parâmetros de ressonância magnética (RM) após ARF no período pós-cirúrgico requerem maior padronização objetiva. O coeficiente de difusão aparente de água (CDA) tem sido usado na RM como um parâmetro de isquemia e necrose. Entretanto, não está ainda bem definido seu papel e das imagens ponderadas de difusão (DWI) na avaliação da necrose coagulativa gerada pela ARF, especificamente em pacientes com MHCR. O objetivo deste estudo consiste em avaliar o espectro de mudança em RM funcional após a ARF de MHCR. Foi realizado estudo retrospectivo entre 2001 e 2006, avaliando 51 pacientes que foram submetidos à ARF por MHCR no Hospital Johns Hopkins (Baltimore, EUA) dos quais 16 preencheram os critérios de inclusão. Os critérios de inclusão foram: (1) apresentar MHCR tratada cirurgicamente com intenção curativa por ARF guiados por ultrassom per-operatório, e (2) ter uma RM anterior e imediatamente após a cirurgia (até 10 dias). As imagens de RMs antes e após a ablação hepática para MCHR foram identificadas e revistas. As imagens de RM de difusão e captação de contraste foram feitas numa unidade de 1.5 T. Imagens em T2 e T1 foram realizadas na presença e ausência de contraste venoso. Todos os exames tiveram a espessura de 4 a 6 mm e um intervalo de 2 mm, apresentando um angulo de rotação de 150. O índice de difusão foi determinado com um b-valor (intensidade do gradiente de difusão) de 500 seg/mm2. As análises de parâmetros para avaliar e comparar o pré e pós ARF através da RM funcional incluiram: (1) valores do mapa de CDA, (2) captação de contraste, (3) difusão e (4) mudança no tamanho da lesão. Em adição, a sobrevida mediana global e tempo para recorrência local foram calculados. As imagens foram avaliadas por um consenso de dois radiologistas/cirurgiões. Foram avaliados no total 65 lesões, com tamanho médio pré-ablação de 1,7 cm. Após ablação o tamanho médio da lesão aumentou para 3,5 cm (p<0,001). A captação de contraste nas fases arterial e venosa diminuíram significativamente após ARF (diminuição média 10% e 17,5%, respectivamente, p = 0,002 e <0,001). O valor médio do mapa de CDA da lesão foi de 2.79 x 10-3 mm2/seg pré-ARF, e após ARF diminui em média para 1.75 x 10-3 mm2/seg (p<0.001). A sobrevida mediana global foi de 34,7 meses. A ressonância magnética funcional através da captação de contraste e difusão pode prover uma estimativa subjetiva e objetiva da necrose coagulativa tissular e da desidratação celular na área ablada por radiofrequência. Quando combinada ao aumento no tamanho do tumor, podem atuar como um marcador adicional de resposta tumoral. / The majority of patients who have colorectal liver metastases (CLM) are not eligible for resection. Therefore other techniques to achieve locoregional control of the disease have been used. Liver radiofrequency ablation (RFA) have been more frequently used for treatment of this condition due to good response rates, particularly when associated to modern chemotherapy. Although characterization of CLM pre ablation are well established, parameters post RFA require more objective standardization. Apparent water diffusion coefficient (ADC) have been used as a necrosis and ischemic parameters in MR analyzes. Even though it is not yet well defined its rule and the diffusion weighted images (DWI) in evaluation of RFA generated coagulative necrosis, specifically in patients with CLM. The objective of this study is to analyze the spectrum of changes in functional MR after CLM RFA. A retrospective study was done between 2001 and 2006, where 51 patients were submitted to CLM RFA in Johns Hopkins Hospital (Baltimore, USA) and 16 fulfilled inclusion criteria. The inclusion criteria were: (1) to have CLM treated with curative intention on surgery guided by intra-operative ultra-sound (IOUS), and (2) to have an MR immediately and after (until 10 days) the RFA procedure. MR images before and after RFA were identified and reviewed. Contrasted and DWI MR Images were done in 1.5 T unit. T1 and T2 images were done with and without venous contrast. All of exams had 4 to 6 mm thickness, 2mm gap and a flip angle of 150. ADC was determined with a b-value of 500 sec/mm2 (intensity of diffusion gradient). Pre and post RFA functional MR analyzes included the following parameters: (1) ADC value, (2) contrast enhancement, (3) diffusion and (4) change in tumor size. In addition, survival and time to local recurrence were calculated. The images were reviewed by two radiologist/surgeon consensus. A total of 65 lesions were evaluated, with 1,7cm mean size pre RFA. After RFA the mean size increased to 3,5 cm(p<0,001). Arterial and venous contrast enhancement diminished significantly post RFA (lowered to mean 10% and 17,5%, respectively, p = 0,002 and p<0,001). Mean ADC lesion pre RFA was 2.79 x 10-3 mm2/sec, and pré-ARF, after RFA lowered to mean 1.75 x 10-3 mm2/sec (p<0.001). Median overall survival was 34,7 months. Functional MR through diffusion and contrast enhancement can provide coagulative necrosis and cellular dehydration subjective and objective estimation in the ablated area. When associated with increase in tumor size can act as an additional marker of tumor response.
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Dieta rica em sacarose: perfil inflamatório e danos hepáticos em camundongos / Sucrose-rich diet: an inflammatory profile and liver damage in miceLiliane Soares Corrêa de Oliveira 18 July 2013 (has links)
Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / Ainda não está bem definido na literatura se uma dieta rica em sacarose, mesmo sendo isoenergética, provoca danos à saúde. Camundongos C57BL/6 foram alimentados com uma dieta controle (10% da energia proveniente de gordura, 8% da energia proveniente da sacarose - SC), uma dieta rica em sacarose (10% de energia proveniente da gordura, 32% da energia proveniente da sacarose - HSu), uma dieta hiperlipídica (42% da energia proveniente de gordura, 8% da energia proveniente da sacarose - HF) ou uma dieta combinada HF/HSu (42% da energia proveniente de gordura, 32% da energia proveniente da sacarose), durante oito semanas. Apesar da massa corporal e do índice de adiposidade não terem sofrido alteração, o grupo HSu apresentou hipertrofia dos adipócitos, o que também foi observado nos grupos HF e HF/HSu. Os grupos HF, HSu e HF/HSu foram intolerantes à glicose e apresentaram níveis séricos de insulina elevados. Os níveis séricos de leptina, resistina e proteína quimiotática de monócitos-1 (MCP-1) aumentaram, enquanto adiponectina sérica reduziu nos grupos HF, HSu e HF/HSu. No tecido adiposo, os animais HF, HSu e HF/HSu apresentaram maiores níveis de expressão protéica de leptina e níveis mais baixos de expressão protéica de adiponectina, em comparação ao grupo SC. Colesterol hepático foi maior nos grupos HF e HF/HSu, enquanto TG hepático foi maior nos grupos HSu e HF/HSu. Os animais dos grupos HF, HSu e HF/HSu apresentaram esteatose hepática, aumento da expressão protéica hepática de elemento regulador de esterol ligante da proteína 1 (SREBP-1c) e diminuição da expressão protéica do receptor ativador de proliferação peroxissomal alfa (PPAR-α). Em conclusão, a dieta rica em sacarose não provoca obesidade nos animais, mas provoca alterações nos adipócitos (hipertrofia), intolerância à glicose, hiperinsulinemia, hiperlipidemia, esteatose hepática e aumento de citocinas inflamatórias. Os efeitos prejudiciais da dieta rica em sacarose, mesmo quando a sacarose substitui isocaloricamente o amido na alimentação, pode ter consequências para a saúde. / It is still unclear if an isoenergetic, sucrose-rich diet leads to health conse-quences. Mice were fed a control diet (10% energy from fat, 8% energy from sucrose - SC), a high-sucrose diet (10% energy from fat, 32% energy from sucrose - HSu), a high-fat diet (42% energy from fat, 8% energy from sucrose - HF) or a HF/HSu diet (42% energy from fat, 32% energy from sucrose) for eight weeks. Despite the un-changed body mass and adiposity indices, HSu presented adipocyte hypertrophy, which was also observed in the HF and HF/HSu. The HF, HSu and HF/HSu were glucose intolerant and had elevated serum insulin levels. The levels of leptin, resistin and Monocyte Chemotactic Protein-1 (MCP-1) increased, while the serum adiponectin decreased in the HF, HSu and HF/HSu. In the adipose tissue, the HF, HSu and HF/HSu showed higher levels of leptin protein expression and lower levels of adiponectin protein expression in comparison with the SC. Hepatic cholesterol was higher in the HF and HF/HSu, while hepatic TG was higher in the HSu and HF/HSu. Liver steatosis was higher, sterol regulatory element-binding protein-1c (SREBP-1c) hepatic expression was increased, and peroxisome proliferator-activated receptor-alpha (PPAR-α) hepatic protein expression was decreased in the HF, HSu and HF/HSu in comparison with the SC. In conclusion, a sucrose-rich diet does not lead to a state of obesity but has the potential to cause changes in the adipocytes (hypertrophy) as well as glucose intolerance, hyperinsulinemia, hyperlipidemia, hepatic steatosis, and increases in the number of inflammatory cytokines. The deleterious effects of a sucrose-rich diet in an animal model, even when the sucrose replaces starch isocalorically in the feed, can have far-reaching consequences for health.
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