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Influência do tratamento com os antiplasmodiais artemeter, lumefantrina e mefloquina em funções dos monócitos envolvidas na defesa contra as formas eritrocitárias do Plasmodium falciparum

Couto, Shirley Claudino Pereira 20 July 2015 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2015. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-03-03T17:43:05Z No. of bitstreams: 1 2015_ShirleyClaudinoPereiraCouto.pdf: 2005336 bytes, checksum: 109e6489df275decec29166652ec4123 (MD5) / Approved for entry into archive by Ruthléa Nascimento(ruthleanascimento@bce.unb.br) on 2017-03-31T16:30:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_ShirleyClaudinoPereiraCouto.pdf: 2005336 bytes, checksum: 109e6489df275decec29166652ec4123 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-31T16:30:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_ShirleyClaudinoPereiraCouto.pdf: 2005336 bytes, checksum: 109e6489df275decec29166652ec4123 (MD5) / A malária continua sendo um importante problema de saúde pública mundial acometendo milhões de pessoas principalmente nas regiões tropicais, e resulta em aproximadamente em 600 mil mortes por ano. As drogas antimaláricas influenciam indiretamente as respostas do sistema imunitário pela capacidade de diminuir a carga parasitária, diminuindo a quantidade de antígenos capazes de ativar o sistema imunitário. Entretanto, ainda está pouco esclarecida a ação das drogas antiplasmodiais sobre os mecanismos de defesa contra o plasmódio. A fagocitose encontra-se entre os principais mecanismos de eliminação do parasito, principalmente pela produção de radicais de oxigênio e nitrogênio pelos monócitos. A biogênese dos corpos lipídicos encontra-se aumentada na malária e pode estar envolvida na defesa e na fisiopatogenia da malária grave. O objetivo desse trabalho foi avaliar a influência do efeito imunomodulador do artemeter, lumefantrina e mefloquina na malária, pela avaliação da influência dessas drogas na fagocitose das formas eritrocitárias do plasmódio, na produção de óxido nítrico e peróxido de hidrogênio e na biogênese de corpos lipídicos. A influência do artemeter, da lumefantrina ou da mefloquina sobre a fagocitose por monócitos de indivíduos normais foia valiada in vitro utilizando 106 eritrócitos parasitados pelo Plasmodium falciparum, pelos receptores para padrões moleculares de patógenos (rPMP) e pelos receptores para opsoninas (rOps). Os monócitos e/ou os eritrócitos foram tratados previamente com as drogas por 60 min. O índice fagocitário foi determinado pela média de eritrócitos parasitados ingeridos por monócito multiplicado pela proporção de monócitos envolvidos na fagocitose. A produção de óxido nítrico foi avaliada pela reação de Griess e a produção de peróxido de hidrogênio foi avaliada pela oxidação do vermelho fenol na presença de peroxidase, sendo os monócitos estimulados pelos eritrócitos parasitados. Os corpúsculos lipídicos foram avaliados pela coloração com Oil Red O. As drogas foram utilizadas in vitro considerando os picos séricos observados quando do tratamento in vivo, sendo 360 ng/mL para o artemeter, 4,9g/mL para a lumefantrina e 687ng/mL para a mefloquina. Quando foi feito o tratamento dos monócitos e dos eritrócitos com o artemeter, observamos diminuição no IF quando avaliado pelos rOps (7,6x 5,2) (p= 0,02). A diminuição da fagocitose foi semelhante quando quantificada para hemozoína (p=0,036). Para a lumefantrina, houve diminuição do IF de 8,4 para 4,6 (p=0,02), quando apenas os monócitos foram tratados e a fagocitose avaliada pelos rPMP. Também houve diminuição do IF para esquizontes pelos rPMP, quando apenas os monócitos foram tratados (p=0,006). Quando os monócitos foram estimulados com os eritrócitos parasitados pelos rPMP, as três drogas diminuíram a expressão de corpúsculos lipídicos (p<0,05). Entretanto, quando os monócitos foram estimulados com os eritrócitos infectados sensibilizados, pelos receptores para opsoninas, houve aumento da expressão dos corpúsculos lipídicos pelo tratamento com a lumefantrina e a mefloquina (p<0,05). O estímulo dos monócitos com os eritrócitos parasitados aumentou a produção de peróxido de hidrogênio (p=0,009). E a mefloquina diminuiu a produção basal de H2O2 pelos monócitos (p<0,05). A diminuição da expressão de corpúsculos lipídicos nos monócitos estimulados com eritrócitos parasitados pelo P. falciparum pelos rPMP e seu aumento pelos rOps indica que a expressão dos corpúsculos lipídicos foi dependente da via pelo qual o monócito foi estimulado pelo eritrócito parasitado. A lumefantrina deprimiu a fagocitose dos eritrócitos parasitados pelos rPMP, enquanto a depressão da fagocitose ocasionada pelo artemeter foi dependente da ingestão do parasito pelos receptores para complemento. Nossos dados mostraram que o artemeter, a lumefantrina e a mefloquina modulam as respostas dos monócitos aos eritrócitos parasitados pelo P. falciparum em aspectos fundamentais relacionados com a defesa inata, nas interações iniciais do parasito com as células de defesa do hospedeiro. Mostrando, portanto, que a ação desses fármacos não depende exclusivamente de sua atividade antiparasitária, mas que o resultado final da ação desses medicamentos depende também da modulação de diversos mecanismos de defesa inato contra o parasito. / Malaria remains a worldwide public health issue, affecting millions of people, especially those living in tropical regions. Statistics confirm the magnitude of this disease, with, approximately, 600 thousand deaths each year. Antimalarial drugs indirectly influence immune response through its capacity to reduce parasite load, reducing the quantity of antigens that are capable of activating immune system. However, the role played by antiplasmodial drugs on defense against Plasmodium is still not well established. Phagocytosis remains one of the main mechanisms of eliminating parasites, especially through production of radical oxygen and nitrogen molecules by monocytes. The lipid body biogenesis is also enhanced in malaria e may be involved in defense and pathophysiology of severe disease. Therefore, the objective of the current study was to evaluate the immunomodulatory effect of arthemeter, lumefantrine and mefloquine drugs in malaria, based on the role of these drugs on phagocytosis of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes, on the production of nitric oxide and hydrogen peroxide and on the biogenesis of lipid bodies. The influence of arthemeter, lumefantrine and mefloquine on phagocytosis by monocytes in healthy individuals was evaluated in vitro using 106 Plasmodium falciparum-infected erythrocytes, through pathogen-associated molecular pattern receptors (PAMPr) or opsonin receptors. Monocytes and/or erythrocytes were previously treated with the drugs for 60 minutes. The phagocitic index was determined by the product of the mean number of parasitized erythrocytes ingested by monocyte and the proportion of monocytes involved in phagocytosis. The production of nitric oxide was evaluated through the Griess reaction, while de hydrogen peroxide production through the red phenol oxidation in presence of peroxidase. Lipid body formation was evaluated by oil red O staining. The drug concentrations used in vitro were obtained by the higher serum levels observed in vivo after ingestion of the drugs, which was 360 ng/mL for arthemeter 4,9 μg/mL for lumefantrine and 687ng/mL for mefloquine. When monocytes and erythrocytes were treated with arthemeter, it was observed a decrease in the phagocitic index when analyzed through opsonin receptors (7,5x5,2) (p=0,02). The reduction in phagocytosis was similar when quantified by hemozoine ingestion (p=0,02). Regarding the lumefantrine treatment, a reduction from 8,4 to 4,6 was observed in the phagocytic index when only monocytes were treated and phagocytosis was assessed through pathogen-associated molecular pattern receptors. An additional reduction was also observed in phagocytic index for esquizonts, through PAMPr when only monocytes were treated (p=0,006). When monocytes were stimulated with parasitized erythrocytes by PAMPr, all three drugs diminished the lipid body formation. However, when monocytes were stimulated with sensitized infected erythrocytes by the opsonin receptors, an increase in lipid body formation was observed when lumefantrine or mefloquine treatment were done (p>0,05). When monocytes were stimulated with Plasmodium falciparum-infected erythrocytes there was an increase in hydrogen peroxide production (p=0,009), whereas mefloquine treatment reduced the basal production of H2O2 by monocytes (p<0,05). Reduction observed in lipid body production after monocyte stimulation with Plasmodium falciparum-infected erythrocytes by PAMPr and its increase when monocyte stimulation occurred by opsonin receptors show that lipid body formation depended on the intracellular pathway by which monocytes were stimulated. Lumefantrine reduced phagocytosis of infected erithrocytes through PAMPr, while reduction caused by arthemeter was observed when phagocytosis occurred by complement receptors. Our dada show that arthemeter, lumefantrine and mefloquine modulate monocyte functions in defense against P. falciparum. Therefore, we conclude that beside the antiparasitic action of these drugs they also modulate the innate defense against parasite.
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Avaliação do efeito do ácido fumarprotocetrárico sobre a viabilidade e as funções de macrófagos peritoneais de camundongos da linhagem Swiss

Silva, Graciene Araujo da 14 August 2012 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-11-22T13:57:41Z No. of bitstreams: 1 2012_GracieneAraujodaSilva.pdf: 2104104 bytes, checksum: 774f89c439b5a7d9fb167ed984b74118 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-11-27T13:45:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_GracieneAraujodaSilva.pdf: 2104104 bytes, checksum: 774f89c439b5a7d9fb167ed984b74118 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-27T13:45:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_GracieneAraujodaSilva.pdf: 2104104 bytes, checksum: 774f89c439b5a7d9fb167ed984b74118 (MD5) / Doenças infecciosas são responsáveis por milhões de mortes em todo o mundo e o uso abusivo de antibióticos para tratamento dessas doenças tem provocado aumento da resistência aos antimicrobianos. O desenvolvimento de novas drogas faz-se necessário e os compostos extraídos de liquens são uma promissora fonte de novos medicamentos, pois têm apresentado forte ação antifúngica e antibacteriana. O ácido fumarprotocetrárico, extraído do líquen Cladonia verticilaris, mostrou ser um potente agente antimicrobiano, o que justifica o objetivo deste trabalho que foi avaliar o efeito desse ácido sobre a viabilidade e a função de macrófagos peritoneais de camundongos da linhagem Swiss em ensaios in vitro. Para o teste da viabilidade celular utilizou-se o método do MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil brometo de tetrazolina). A produção de peróxido de hidrogênio foi avaliada pelo teste de oxidação do vermelho de fenol e a de óxido nítrico pela reação de Griess. A capacidade fagocitária foi avaliada utilizando Saccharomyces cerevisiae, sensibilizadas ou não com soro de camundongos. Os níveis das citocinas Interleucina-6 (IL-6), Interleucina-10 (IL-10), Interleucina-12 (IL-12), Interleucina-23 (IL-23), proteína quimiotáctica de monócitos (MCP-1) e fator de necrose tumoral (FNT) foram analisados nos sobrenadantes das culturas celulares por meio de ensaio imunoenzimático (ELISA – Enzyme-Linked Immunoabsorbent Assay). Todos os ensaios foram efetuados utilizando-se o ácido fumarprotocetrárico nas concentrações de 10, 50 ou 100 µg/mL e os resultados mostraram que as células permaneceram viáveis. O ácido fumarprotocetrárico, nas concentrações testadas, não interferiu com a produção de NO, IL-6, IL-10 e IL-12, mas aumentou a produção de IL-23 e inibiu a produção de MCP-1. Em uma concentração de 10 ug/mL, o ácido inibiu a produção de H2O2, mas nas concentrações de 50 ou 100 ug/mL essa produção foi estimulada. O ácido, em uma concentração de 100 ug/mL, inibiu a produção de FNT. Além dos efeitos antimicrobianos já relatados na literatura, o conjunto de resultados obtidos mostrou que o ácido fumarprotocetrárico possui efeitos imunomodulatórios, o que o torna um potencial agente para o desenvolvimento de novos medicamentos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Infectious diseases are responsible for millions of deaths worldwide and the excessive use of antibiotics to treat these diseases has led to increased antimicrobial resistance. The development of new drugs is necessary and the compounds extracted from lichens are a promising source of new medicaments as they have presented strong antifungal and antibacterial activity. The fumarprotocetraric acid, extracted from the lichen Cladonia verticilaris, proved to be a potent antimicrobial agent, justifying the purpose of this study that was to evaluate the effect of this acid on the viability and function of peritoneal macrophages from Swiss mice lineage in in vitro tests. For the cell viability test it was used the MTT (3 – (4,5-dimethylthiazol-2yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide)method. The production of hydrogen peroxide was evaluated by oxidation of phenol red and nitric oxide by Griess reaction. The phagocytic capacity was evaluated using Saccharomyces cerevisiae, sensitized or not with serum from mice. The levels of the cytokines Interleukin-6 (IL-6), Interleukin-10 (IL-10), Interleukin-12 (IL-12), Interleukin-23 (IL-23), monocyte chemotactic protein (MCP-1) and Tumor Necrosis Factor (TNF) were examined in cell culture supernatants by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). All assays were performed using the fumarprotocetraric acid at concentrations of 10, 50 or 100 μg/mL and the results showed that cells remained viable. The fumarprotocetraric acid did not interfere on NO, IL-6, IL-10, IL-12 production but increased IL-23 and inhibited MCP-1 production. At a concentration of 10 µg/mL the acid inhibited H2O2 production but at concentrations of 50 or 100 µg/mL this production was stimulated. The acid, at a concentration of 100 µg/mL, inhibited TNF production. In addition to the antimicrobial effects already described in the literature, the set of results obtained showed that fumarprotocetraric acid has immunomodulatory effects, which makes it a potential agent for the development of new drugs.
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Influência do tratamento com corticóide inalatório na ativação dos eosinófilos e função fagocitária em crianças e adolescentes com asma

Martins, Carmen Lívia Faria da Silva 12 August 2013 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2013. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-11-07T14:50:58Z No. of bitstreams: 1 2013_CarmenLiviaFariaSilviaMartins.pdf: 16116688 bytes, checksum: 5dcfefeee434226dbfb8c1c483e66182 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-11-12T11:02:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_CarmenLiviaFariaSilviaMartins.pdf: 16116688 bytes, checksum: 5dcfefeee434226dbfb8c1c483e66182 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-12T11:02:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_CarmenLiviaFariaSilviaMartins.pdf: 16116688 bytes, checksum: 5dcfefeee434226dbfb8c1c483e66182 (MD5) / Introdução e justificativa: A asma é doença inflamatória crônica e o corticóide padrão ouro de tratamento, entretanto, o efeito dele na imunidade inata carece esclarecimento, urge marcadores inflamatórios não invasivos na pediatria para avaliar e acompanhar o tratamento. O objetivo do trabalho foi avaliar influência do tratamento com corticóide inalatório (CI) por seis meses na ativação dos eosinófilos e na função fagocitária de neutrófilos e monócitos do sangue periférico em crianças e adolescentes com asma. Metodologia: Sangue venoso periférico foi coletado de 149 crianças e adolescentes asmáticos e 26 crianças controle normais. A ativação dos eosinófilos foi avaliada pelas alterações morfológicas (emissão de pseudópodes generalizados ou localizados, emissão de grânulos em pequena, moderada ou grande quantidade, espraiamento, presença de vacúolos citoplasmáticos, eosinófilos em degeneração, contato entre células) após aderência em lâmina, e a fagocitose de Saccharomyces cerevisiae, bem como a produção de ânions superóxido por monócitos e neutrófilos, antes do tratamento com CI, aos 3 e 6 meses. O teste de Mann-Whitney comparou crianças asmáticas antes do tratamento e controles normais e o teste de Kruskal-Wallis/Dunn a influência do CI antes, aos 3 e 6 meses. Resultados: Houve uma maior porcentagem de eosinófilos ativados nas crianças asmáticas que no controle, antes do tratamento, e dentre as alterações morfológicas, espraiamento em crianças APL (P=0,003), grânulos pequena quantidade em APM (P=0,0003), grânulos moderada quantidade em APL (P=0,0001), pseudópodes localizados em APM (P=0,0062), contato entre células em APL (P=0.028), degeneração celular em APL (P=0,007). Seis meses de tratamento diminuíram espraiamento em crianças APL(P=0,0009), grânulos em pequena quantidade em APM (P=0,0006), grânulos em moderada quantidade em APL (P<0.0001), grânulos em grande quantidade em APG (P=0,038), pseudópodes localizados em APL (P=0,0033), contato entre células em APG (P=0,0033) e degeneração celular em APM (P=0,04). A fagocitose dos monócitos e neutrófilos via receptores ou por opsoninas em crianças asmáticas, antes do tratamento, foi menor que nos controles (P<0.05) sem influencia da gravidade da asma. CI por 6 meses não normalizou fagocitose dos neutrófilos e monócitos, embora melhore clínicamente. Produção de ânions superóxido foi menor em crianças asmáticas antes do tratamento e o CI normalizou a produção em crianças com APL quando avaliado sem estímulo, havendo diminuição da produção quando estimulado (p<0,05). Conclusões: A imunodeficiência dos fagócitos permaneceu mesmo após seis meses de tratamento com CI. Entretanto, houve melhora na ativação dos eosinófilos em crianças com APL e APM. Assim, analisar quantitativamente alterações morfológicas nos eosinófilos é fácil e possível, e pode objetivar a avaliação da inflamação durante o tratamento com CI. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Introduction and aim: Asthma is a chronic inflammatory disease and corticosteroids are the first-line therapy for the disease. However, the effect of corticosteroids on the innate immune system remains unclear. Furthermore, there aren’t non-invasive reliable markers of inflammation to follow-up the treatment. The aim of this work was to evaluate the influence of inhaled corticosteroid therapy (ICT) for 6 months on the activation of eosinophils and phagocyte functions in asthmatic children. Methods: Peripheral venous blood was collected from 149 children with asthma and 26 healthy control children. The percentage of eosinophils with morphological changes (emission of single or multiple pseudopods, releasing a small, moderate, or large quantity of granules, spreading, presence of cytoplasmic vacuoles, eosinophil death, and contact between cells) was quantified after the adherence to a slide before, after 3 and 6 months ICT. The phagocytosis of Saccharomyces cerevisiae by blood monocytes and neutrophils and the production of superoxide anions were assessed before and after three and six months of ICT. The Mann-Whitney was used to compare asthmatic children before and after treatment and the Kruskal-Wallis/Dunn was used to analyze the influence of ICT thoughout the treatment. Results: The percentage of activated eosinophils was hingher in asthmatic children than in healthy control. The more significant increase before treatment were spreading in children with mPA (P=0,003); releasing a small quantity of granules in mPA (P=0,0001); releasing moderate quantity of granules in mPA (P=0,0001); emission of single pseudopods in MPA (P=0,0062); eosinophils in contact between cells in mPA (P=0.028); and eosinophil death MPA (P=0,007). After 6 months treatment there was a decrease in the following morphological changes: spreading in children with mPA (P=0,0009); releasing a small quantity of granules in MPA (P=0,0006); releasing moderate quantity of granules in mPA ( P<0.0001); releasing a large quantity of granules in SPA (P=0,038); emission of single pseudopods in mPA (P=0,0033); eosinophils in contact between cells in SPA (P=0,0033) and eosinophil death in MPA (P=0,04). The phagocytosis via opsonines receptors was lower in asthmatic children before treatment and was independent from asthma severity. ICT treatment for 6 months was insufficient to normalize phagocytosis function. Superoxide anion production was also decreased in the asthmatic children before treatment, and ICT -normalized the O production only for children with mild persistent asthma when assessed at baseline but caused this function to decrease after stimulation. Conclusion: The phagocyte immunodeficiency remained lower after 6 months of treatment. However, there was an improvement in several morphological changes in eosinophils characteristic of activation in children with mPA and MPA. Quantifying the morphological changes in eosinophils is feasible, easy and reliable and therefore might to be used as an objective mark to follow up inflammation during ICT.
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Validação da mensuração da explosão respiratória em granulócitos humanos normais e leucêmicos induzida por zymosan e éster de forbol pela técnica de citometria de fluxo

Lunardi, Fabiane January 2004 (has links)
Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa catarina, Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-graduação em Biotecnologia. / Made available in DSpace on 2012-10-22T05:28:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 208366.pdf: 815423 bytes, checksum: ec812f1ce0f5b909e707ec36b6207424 (MD5)
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Resposta imune celular e humoral de Rhipicephalus sanguineus (Latreille, 1806) (Acari: Ixodidae) desafiados com Leishmania infantum (Nicolle, 1908)

FEITOSA, Ana Paula Sampaio 26 February 2015 (has links)
Submitted by Isaac Francisco de Souza Dias (isaac.souzadias@ufpe.br) on 2016-02-25T19:12:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Ana Paula Sampaio Feitosa.pdf: 3707255 bytes, checksum: 56c270d2bf8dd01798cd86abcc07a877 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-25T19:12:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESE Ana Paula Sampaio Feitosa.pdf: 3707255 bytes, checksum: 56c270d2bf8dd01798cd86abcc07a877 (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / CNPQ / O Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) é um ectoparasita de cães domésticos e possui grande importância médica e veterinária por está associado à transmissão de inúmeros patógenos, entre eles existe a suspeita do mesmo está associado à transmissão da Leishmania infantum. O objetivo do presente estudo foi avaliar a resposta imune inata celular e humoral através da caracterização morfológica e ultraestrutural de hemócitos, avaliação da dinâmica hemocitária no 1º, 2º e 5º dia após infecção (dpi) com L. infantum, fagocitose com 1º dpi, atividade da fenoloxidase no 1º, 2º e 5º dpi, produção de óxido nítrico no 1º, 2º e 5º dpi, expressão gênica da denfesina e Glutationa S-transferase em Rh. sanguineus no tempo 0 e no 1º, 2º, 5º e 7º dpi, além de avaliar a permanência do parasita no tempo 0 e nos dias 1, 2, 5 e 7 após a infecção com L. infantum (dpi). Foram identificados cinco tipos celulares, prohemócitos, plasmatócitos, granulócitos, esferulócitos e adipohemócitos na hemolinfa do Rh. sanguineus. A partir da contagem total e diferencial dos hemócitos circulantes na hemolinfa de fêmeas de Rh. sanguineus a média do número total de hemócitos no grupo inoculado com L. infantum apresentou-se significantemente elevado (P < 0.001), no 1° e 2° dpi em relação ao grupo controle. Na contagem diferencial de hemócitos observou-se que a percentagem de plasmatócitos e granulócitos no grupo infectado, aumentou significantemente no 1°, 2° e 5° dpi (P < 0.001). Nos ensaios de fagocitose observou-se que plasmatócitos e granulócitos foram capazes de realizar fagocitose de partículas de látex e promastigotas de L. infantum, no 1dpi. A produção de NO aumentou significativamente (P < 0.05) no 2° e 5° dpi e a atividade da PO apresentou aumento significativo (P < 0.05) no 5° dpi. A expressão do gene 18S ribossomal de L. infantum teve um aumento significativo (P < 0.05) no 2°, 5° e 7° após a infecção em relação ao tempo 0. A expressão da GST foi maior no 1º e 2º dpi e o gene defensina foi maior apenas no 5º dpi. Embora não existam estudos sobre a resposta do Rh. sanguineus frente a infecção com L. infatum, estes resultados sugerem, que após a infecção com L.infantum a resposta imune celular e humoral em Rh. sanguineus é ativada, porém mais estudos são necessários para avaliar o impacto dessa resposta no combate a infecção. / The Rhipicephalus sanguineus (Acari: Ixodidae) is an ectoparasite of domestic dogs and has great medical and veterinary importance for being associated with the transmission of many pathogens, among them there is a suspicion of it is association with the transmission of Leishmania infantum. The aim of this study was to evaluate the innate cellular and humoral immune response by morphological and ultrastructural characterization of hemocytes, hemocyte dynamics evaluation, phagocytosis, phenoloxidase activity, nitric oxide production at the 1st, 2nd and 5th dpi, gene expression of denfesina and Glutathione S-transferase in Rh . sanguineus and on days 1, 2, 5 and 7 after infection with L. infantum and to evaluate the persistence of the parasite at time 0 and on days 1, 2, 5 and 7 after infection with L. infantum (dpi). Five cell types were identified, prohemocytes, plasmatocytes, granulocytes, and spherulocytes adipohemocytes in Rh. sanguineus hemolymph. From the total and differential counts of circulating hemocytes in the hemolymph of Rh. sanguineus females the average of total number of hemocytes in the group inoculated with L. infantum showed to be significantly higher (P <0.001), on 1st and 2nd dpi in comparison to control group. In differential counting of hemocytes, it was observed that the percentage of granulocytes and plasmatocytes in the infected group, increased significantly at the 1st, 2nd and 5th dpi (P <0.001). In phagocytosis assays, it was observed that plasmatocytes and granulocytes were able to perform phagocytosis of latex particles and promastigotes of L. infantum, 1 day after infection. NO production increased significantly (P < 0.05) in the 1st, 2nd and 5th dpi and the PO activity increased significantly (P < 0.05) in the 5th dpi. The expression of the 18S ribosomal gene expressed by L. infantum had a significant increase (P < 0.05) in the 2st, 5th and 7th after infection in comparison to time 0. The expression of GST was higher in the 1st and 2nd dpi and the defensin gene was higher only in 5 dpi. Although there are no studies on Rh. sanguineus response against infection with L. infatum, these results suggest that after infection with L.infantum cellular and humoral immune response in Rh. sanguineus is activate, nevertheless more studies are needed to assess the impact of such response in fighting infection.
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Estudo da participação dos reguladores de transcrição gênica VicRK e CovR na susceptibilidade de Streptococcus sanguinis à opsonização pelo sistema complemento / Analysis of the role of the transcriptional regulators VicRK and CovR in the susceptibility of Streptococcus sanguinis to opsonization by the complement system

Oliveira, Thaís Rossini de, 1989- 12 December 2014 (has links)
Orientadores: Renata de Oliveira Mattos Graner, Flávia Sammartino Mariano Rodrigues / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-26T11:30:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_ThaisRossinide_M.pdf: 1438459 bytes, checksum: a127a667898930e41649ac3faebb8d1a (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Streptococcus sanguinis é uma espécie pioneira comensal das superfícies dos dentes, que também está envolvida na endocardite infecciosa. Sua alta prevalência na cavidade oral indica capacidade de adaptar-se e sobreviver a diversos fatores de defesa presentes nesse nicho. Para se adaptar ao ambiente e a fatores do hospedeiro, as bactérias utilizam-se de sistemas reguladores de transcrição de dois componentes (SDC), que modulam a regulação de genes em respostas a diferentes estímulos. Neste estudo avaliou-se o papel do SDC VicRK e CovR, na susceptibilidade de S. sanguinis a opsonização pelo sistema complemento. Para isso, foram analisados os níveis de deposição de C3b / iC3b na presença de soro em um total de sete cepas clínicas de S. sanguinis, e as frequências de fagocitose por polimorfonucleares (PMNs) do sangue humano foram comparados entre as cepas S. sanguinis SK36 e mutantes knockout de vicK (SKvic) e covR (SKcov), genes estes que codificam componentes VicK e CovR, respectivamente. A cepa de S. mutans U159 foi utilizada como referência. Resumidamente, as cepas foram incubadas com soro humano a 2 ou 20% por 30 min (37 ° C, 10% de CO2), lavadas, e a presença de C3b associada à superfície foi detectado utilizando anticorpos anti-C3b humano (conjugado com FITC), sendo quantificadas por citometria de fluxo. Para avaliar as frequências de fagocitose por PMNs, as cepas foram incubadas com sangue humano durante tempos de 5, 15, 30 e 60 min (37 ° C, 10% de CO2), fixadas e coradas com Giemsa. PMNs com bactérias intracelulares, foram contados utilizando um microscópio de luz (1000 x) e os resultados expressos em relação a análise de um total de 200 PMNs. Resultados: As percentagens de deposição de C3b em SKvic, SKcov e SK36 foram de 11,3 (± 2,61), 40,2 (± 1,46) e 37,9% (± 3,97), respectivamente. Percentagem de superfície C3b foi significativamente menor em cepas de S. sanguinis em comparação a cepa de S.mutans (Kruskal Wallis, p <0,05), e em SKvic em comparação a cepa SK36 (Kruskal Wallis, p <0,05). As frequências médias de fagocitose por PMNs não foram afetadas, e foram 88, 99,3 e 99% em SKvic, SKcov e SK36, respectivamente. Conclusão: a inativação do VicK, mas não de CovR, reduz a deposição de C3b em S. sanguinis SK36. Cepas de S. sanguinis também são menos suscetíveis a deposição de C3b em comparação a S. mutans / Abstract: Streptococcus sanguinis is a commensal pioneer species of the tooth surfaces, which is also involved in infectious endocarditis. Its high prevalence in the oral cavity indicates ability to survive to several host defense factors present in the oral niches. To sense and respond to environmental and host factors, bacteria apply regulatory two-component systems (TCSs), which modulate gene transcription in response to different stimuli. This study evaluated the role of TCS VicRK and CovR in S. sanguinis susceptibility to opsonization by the complement system. To this aim, a total of seven S. sanguinis strains were analyzed, and levels of deposition of C3b/iC3b on the present of serum, and the frequencies of phagocytosis by polymorphonuclear (PMNs) in human blood were compared between parent S. sanguinis strain SK36 and knockout mutants of vicK (SKvic) and covR (SKcov) (genes encoding VicK and CovR components, respectively). S. mutans strain U159 was used as reference. Briefly, strains were incubated with 2 or 20% of human serum during 30 min (37°C, 10%CO2), washed, and the presence of surface-associated C3b was detected using anti-human C3b antibodies (FITC conjugated), which were quantified by flow cytometry. To assess the frequencies of phagocytosis by PMN, strains were incubated with human blood during 5, 15, 30 and 60 min (37°C, 10% CO2), fixed and stained with Giemsa. PMN with intracellular bacteria were counted using a light microscope (1000 x) and expressed in relation to a total of 200 PMN analyzed. Results: The percentages of C3b deposition on SKvic, SKcov and SK36 were 11.3 (± 2.61), 40.2 (± 1.46) and 37.9% (± 3.97), respectively. Percentage of surface C3b was significantly lower in S. sanguinis strains compared to S. mutans (Kruskal Wallis, p < 0.05), and in SKvic compared to SK36 (Kruskal Wallis, p < 0.05). The mean frequencies of phagocytosis by PMN was not affected, and were 88, 99.3 and 99% in SKvic, SKcov and SK36, respectively. Conclusion: the inactivation of the vicK, but not of covR, reduces the deposition of C3b in S. sanguinis SK36. S. sanguinis strains are also less susceptible to C3b deposition compared to S. mutans / Mestrado / Microbiologia e Imunologia / Mestra em Biologia Buco-Dental
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Interação de Trichophyton rubrum com macrófagos peritoneais de camundongos / Stimulation, inhibition and death of macrophages infected with Trichophyton rubrum

Marina Reis de Moura Campos 15 December 2004 (has links)
Trichophyton rubrum, importante agente de dermatofitoses, é um fungo queratinofílico, capaz de parasitar tecidos como pele e unha. É o principal responsável pelas dermatofitoses crônicas e refratárias ao tratamento e como é uma espécie antropofílica encontra-se muito bem adaptado ao parasitismo humano. Por tratar-se de uma micose cutânea, torna-se necessário o estudo dos fenômenos que ocorrem durante o encontro deste fungo com uma das principais células do sistema imunológico que primeiramente reconhecem o antígeno. Assim sendo, o objetivo deste trabalho é estudar a interação de T.rubrum com macrófagos, para aumentar o conhecimento dos mecanismos envolvidos na resposta imunológica nesta importante patologia. Para isso, foram realizados ensaios de fagocitose de conídios de T.rubrum, seguidos da análise da expressão de moléculas de superfície celular, dosagem de citocinas e viabilidade de macrófagos. Verificamos que o exoantígeno de T.rubrum provocou diminuição da fagocitose de conídios e partículas de zymosan pelos macrófagos. Entretanto, o exoantígeno não interferiu na expressão de moléculas de superfície celular e não foi capaz de estimular os macrófagos a secretar TNF-&#945;, IL-12, IL-10 e óxido nítrico. Já os conídios fagocitados por macrófagos, provocaram diminuição significativa na expressão de suas moléculas de superfície, tais como MHC classe II, CD80 e CD54. Após fagocitose de conídios, os macrófagos foram capazes de secretar uma grande quantidade de TNF-&#945; e IL-10 e após 8 horas de cultivo, os conídios internalizados iniciaram processo de formação de hifa, provocando lise e a conseqüente morte destas células. Por estes achados e pelos estudos prévios já realizados com o T.rubrum, pensamos que a persistência desta infecção fúngica possa estar relacionada com a ação inibitória do fungo sobre os macrófagos, levando à cronicidade observada nestas lesões. / Trichophyton rubrum is the most common pathogen causing dermatophytosis, accounting for approximately 80% of the reported cases of onychomycosis. Since 90% of the chronic dermatophyte infections are caused by T. rubrum, it is likely that this pathogen must have evolved mechanisms that evade or suppress cell-mediated immunity. Several reports have highlighted the participation of phagocytes in the immune defense against fungi; however, few studies have addressed the role of these cells in dermatophytosis. In this study, we investigated the interactions of resident and peritoneal macrophages with T. rubrum. We show here that the interaction of T. rubrum conidia with resident macrophages results in the production of TNF-&#945; and IL-10 but not IL-12 and nitric oxide. Infected macrophages down-regulated the expression of co-stimulatory molecules (CD80 and CD54). We also show that phagocytosis of T. rubrum conidia is inhibited by the addition of fungal exoantigens or mannan. Cytotoxicity assays indicated that after 8 h of conidia ingestion macrophage viability decreased drastically. Electron microscopy revealed that the ingested conidia grow and differentiate into hyphae inside macrophages leading to rupture of the macrophage membrane.
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Melatonina sintetizada por microglias de cerebelo em cultura regula o processo de fagocitose / Synthesis of melatonin by microglial cerebellar cell culture regulate phagocytoses process

Adriessa Aparecida dos Santos 08 April 2015 (has links)
A melatonina é uma indolamina sintetizada principalmente pela glândula pineal, cuja função está associada à marcação do escuro. Além deste papel cronobiótico, a melatonina também tem papel na defesa e é sintetizada por outros sítios podendo exercer ação parácrina e autócrina, como em células imunocompetentes. Concentrações substancialmente elevadas de melatonina são encontradas no liquido cefalorraquidiano (LCR) que tem sido vinculada à síntese de melatonina por células do sistema nervoso central (SNC), como as microglias. Sabendo-se que estas células são os macrófagos residentes no SNC e que a síntese de melatonina por estes fagócitos já é comprovada, nosso trabalho teve por objetivo avaliar se microglias cerebelares sintetizam essa indolamina e se esta atua potencializando a fagocitose destas células. Nossos resultados mostram que o bloqueio dos receptores de melatonina com o antagonista luzindol, diminuiu tanto a fagocitose induzida por melatonina exógena, quanto à fagocitose basal, indicando que há síntese de melatonina por microglias cerebelares que, por sua vez, age na fagocitose. Esses resultados são relevantes e indicam que a melatonina sintetizada pela microglia, pode estar relacionada com a homeostase do ambiente neural. Sendo assim, nossos dados podem contribuir com estudos que estabeleçam novas estratégias terapêuticas para doenças neuroinflamatórias. / Melatonin is a indolamine synthesized primarily by the pineal gland, whose function is associated with the marking of the dark phase. Beyond this chronobiotic function, melatonin also plays a role in defense and is synthesized by other sites. It may exert paracrine and autocrine action, like in immunocompetent cells. High substantially concentrations of melatonin are found in the cerebrospinal fluid (CSF) that has been linked to the synthesis of melatonin by the central nervous system cells (CNS), such as microglia. Knowing that these cells are the resident macrophages in the CNS and that melatonin synthesis by these phagocytes is proven, our study aims to assess whether cerebellar microglia synthesize this indolamine and whther this acts enhancing phagocytosis of these cells. Our results show that blocking the melatonin receptors with the antagonist, luzindole, both the exogenous melatonin-induced phagocytosis and the basal phagocytosis decreased, indicating that there is melatonin synthesis by cerebellar microglia which acts on phagocytosis. These results are significant and indicate that melatonin synthesized by microglia may be related to the neural environment homeostasis. In this way, our data can contribute, for example, in studies to establish new therapeutic strategies for neuroinflammatory diseases.
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Interação de Trichophyton rubrum com macrófagos peritoneais de camundongos / Stimulation, inhibition and death of macrophages infected with Trichophyton rubrum

Campos, Marina Reis de Moura 15 December 2004 (has links)
Trichophyton rubrum, importante agente de dermatofitoses, é um fungo queratinofílico, capaz de parasitar tecidos como pele e unha. É o principal responsável pelas dermatofitoses crônicas e refratárias ao tratamento e como é uma espécie antropofílica encontra-se muito bem adaptado ao parasitismo humano. Por tratar-se de uma micose cutânea, torna-se necessário o estudo dos fenômenos que ocorrem durante o encontro deste fungo com uma das principais células do sistema imunológico que primeiramente reconhecem o antígeno. Assim sendo, o objetivo deste trabalho é estudar a interação de T.rubrum com macrófagos, para aumentar o conhecimento dos mecanismos envolvidos na resposta imunológica nesta importante patologia. Para isso, foram realizados ensaios de fagocitose de conídios de T.rubrum, seguidos da análise da expressão de moléculas de superfície celular, dosagem de citocinas e viabilidade de macrófagos. Verificamos que o exoantígeno de T.rubrum provocou diminuição da fagocitose de conídios e partículas de zymosan pelos macrófagos. Entretanto, o exoantígeno não interferiu na expressão de moléculas de superfície celular e não foi capaz de estimular os macrófagos a secretar TNF-&#945;, IL-12, IL-10 e óxido nítrico. Já os conídios fagocitados por macrófagos, provocaram diminuição significativa na expressão de suas moléculas de superfície, tais como MHC classe II, CD80 e CD54. Após fagocitose de conídios, os macrófagos foram capazes de secretar uma grande quantidade de TNF-&#945; e IL-10 e após 8 horas de cultivo, os conídios internalizados iniciaram processo de formação de hifa, provocando lise e a conseqüente morte destas células. Por estes achados e pelos estudos prévios já realizados com o T.rubrum, pensamos que a persistência desta infecção fúngica possa estar relacionada com a ação inibitória do fungo sobre os macrófagos, levando à cronicidade observada nestas lesões. / Trichophyton rubrum is the most common pathogen causing dermatophytosis, accounting for approximately 80% of the reported cases of onychomycosis. Since 90% of the chronic dermatophyte infections are caused by T. rubrum, it is likely that this pathogen must have evolved mechanisms that evade or suppress cell-mediated immunity. Several reports have highlighted the participation of phagocytes in the immune defense against fungi; however, few studies have addressed the role of these cells in dermatophytosis. In this study, we investigated the interactions of resident and peritoneal macrophages with T. rubrum. We show here that the interaction of T. rubrum conidia with resident macrophages results in the production of TNF-&#945; and IL-10 but not IL-12 and nitric oxide. Infected macrophages down-regulated the expression of co-stimulatory molecules (CD80 and CD54). We also show that phagocytosis of T. rubrum conidia is inhibited by the addition of fungal exoantigens or mannan. Cytotoxicity assays indicated that after 8 h of conidia ingestion macrophage viability decreased drastically. Electron microscopy revealed that the ingested conidia grow and differentiate into hyphae inside macrophages leading to rupture of the macrophage membrane.
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Melatonina sintetizada por microglias de cerebelo em cultura regula o processo de fagocitose / Synthesis of melatonin by microglial cerebellar cell culture regulate phagocytoses process

Santos, Adriessa Aparecida dos 08 April 2015 (has links)
A melatonina é uma indolamina sintetizada principalmente pela glândula pineal, cuja função está associada à marcação do escuro. Além deste papel cronobiótico, a melatonina também tem papel na defesa e é sintetizada por outros sítios podendo exercer ação parácrina e autócrina, como em células imunocompetentes. Concentrações substancialmente elevadas de melatonina são encontradas no liquido cefalorraquidiano (LCR) que tem sido vinculada à síntese de melatonina por células do sistema nervoso central (SNC), como as microglias. Sabendo-se que estas células são os macrófagos residentes no SNC e que a síntese de melatonina por estes fagócitos já é comprovada, nosso trabalho teve por objetivo avaliar se microglias cerebelares sintetizam essa indolamina e se esta atua potencializando a fagocitose destas células. Nossos resultados mostram que o bloqueio dos receptores de melatonina com o antagonista luzindol, diminuiu tanto a fagocitose induzida por melatonina exógena, quanto à fagocitose basal, indicando que há síntese de melatonina por microglias cerebelares que, por sua vez, age na fagocitose. Esses resultados são relevantes e indicam que a melatonina sintetizada pela microglia, pode estar relacionada com a homeostase do ambiente neural. Sendo assim, nossos dados podem contribuir com estudos que estabeleçam novas estratégias terapêuticas para doenças neuroinflamatórias. / Melatonin is a indolamine synthesized primarily by the pineal gland, whose function is associated with the marking of the dark phase. Beyond this chronobiotic function, melatonin also plays a role in defense and is synthesized by other sites. It may exert paracrine and autocrine action, like in immunocompetent cells. High substantially concentrations of melatonin are found in the cerebrospinal fluid (CSF) that has been linked to the synthesis of melatonin by the central nervous system cells (CNS), such as microglia. Knowing that these cells are the resident macrophages in the CNS and that melatonin synthesis by these phagocytes is proven, our study aims to assess whether cerebellar microglia synthesize this indolamine and whther this acts enhancing phagocytosis of these cells. Our results show that blocking the melatonin receptors with the antagonist, luzindole, both the exogenous melatonin-induced phagocytosis and the basal phagocytosis decreased, indicating that there is melatonin synthesis by cerebellar microglia which acts on phagocytosis. These results are significant and indicate that melatonin synthesized by microglia may be related to the neural environment homeostasis. In this way, our data can contribute, for example, in studies to establish new therapeutic strategies for neuroinflammatory diseases.

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