Orientador: Gun Birgitta Bergsten Mendes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T04:08:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_FrancisSolangeVieiraTourinho_M.pdf: 1288504 bytes, checksum: d14d47aaa174cc1d3d16d1fed1792303 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Os antagonistas de receptores H2 da histarnina (AH2) e os inibidores da bomba de prótons (IBP) são efetivos no tratamento de condições clinicas que se acompanham de hipersecreção ácida gástrica, sendo amplamente utilizados na prevenção de dano gastroduodenal por fármacos antiinflamatórios e de úlcera de estresse. É muito freqüente o uso destes fármacos em contexto hospitalar. Um estudo transversal determinou a prevalência de prescrição de AH2 e de IBP em três hospitais de atenção terciária, gerais: um universitário e dois filantrópicos. Foram incluídos todos os pacientes internados e com prescrição destes dia do estudo. Foram excluídos do estudo os pacientes da pediatria e da tocoginecologia. Ao prescrito r foi dirigida uma pergunta aberta sobre o motivo da prescrição. No dia do estudo 229 pacientes estavam recebendo AH2 ou IBP, o que representa 54,8% do total de pacientes internados. Dentre os pacientes do estudo 55,5% eram do sexo masculino, 28,8% tinham idade :2: 65 anos. Os principais diagnósticos dos pacientes do estudo foram: neoplasias (22,5%), doenças cardiovasculares (13,9%), envenenamentos e outras causas externas (9,7%), doenças gastrintestinais (10,6%). A ranitidina foi o fármaco antissecretor mais prescrito (200 pacientes, 87,3%). Pacientes com idade :2: 65 anos receberam significativamente mais prescrições de fármacos antissecretores, e não se observou ajuste da dose destes fármacos para pacientes deste estrato etário. Os prescritores de 121 pacientes (52,9%) deram as seguintes justificativas para as prescrições de AH2 ou IBP: profilaxia de úlcera de estresse (28,0%), uso concomitante de antiinflamatórios esteróídes (24,8%), uso concomitante de antiinflamatórios não esteroidais (15,7%), tratamento de doenças gastrintestinais (14,0%). Algumas indicações profiláticas encontradas não correspondem às recomendadas na literatura. Intervenções educativas parecem necessárias para promover o uso racional destes medicamentos / Abstract: A cross sectional study was conducted in three general hospitaIs in state of São Paulo, Brazil: one teaching hospital and two private non profit hospitaIs. In 1999, age, gender, the diagnosis, concomitant use of NSAIDs or corticosteroids and the prescription of all patients on histamine 2 receptor antagonists and proton pump inhibitors on the study day were recorded. The indications, as well as the type, dose of these drugs were investigated. The prescribers were asked about the reasons for prescribing these medications. The aim of this study was to evaluate the prescription patterns and evaluates the appropriateness of H2 blockers and proton pump inhibitors. Among the 418 patients evaluated 229 ( 54.8%) received H2 blockers and proton pump inhibitors prescriptions. Among these 229 patients, 55.5% were male and 28.8% were 2: 65 years old. The most common diagnoses were: neoplasms (22.5%); diseases of the circulatory system (13.6%); injury, poisoning and certain other consequences of external causes (9.7%); diseases of the digestive system (10.6%). Ranitidine was the most prescribed drug (83.7%). None of the prescribers refused to give the reason for the prescription, put only in 52.9% of the patients the prescribers were found for interview. The most common justifications were stress ulcer prophylaxis (28.1%); concomitant use ofcorticosteroids (24.8%); concomitant use ofNSAIDs (15.7%); treatment of gastrointestinal diseases (14.0%). Some ofthe prophylactic indications did not agree with current guidelines. Educative interventions seem to be necessary to promote rational use of these drugs / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Julia Prado Franceschi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-27T10:30:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_RejaneMariaLirada_D.pdf: 35252135 bytes, checksum: d8fa4a7fb76a10643309ff440ecc76fc (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Este trabalho trata do estudo farmacológico do veneno de Bothrops leucurus, conhecida como jararaca-do-rabo-branco. Objetivou-se caracterizar suas atividades bioquúnicas e imunobiológicas, como forma de avaliar o grau de soroproteção conferido pelos anti-venenos produzidos no Brasil e anti-B. leucurus, produzido na Argentina. Utilizou-se venenos de duas regiões geográficas da Bahia (Região Metropolitana do Salvador - RMS e Sul/Sudeste baiano - SB) e de machos e remeas, a fim de se estabelecer possíveis variações geográficas e sexuais. Procedeu-se a determinação da dosagem protéica, perfil cromatográfico e eletroforético, das atividades tóxica, proteolítica, edemaciante, hemorrágica, necrosante, defibrinante, pró-coagulante, miotóxica e sobre a junção neuromuscular, caracterização imunoquúnica e neutralização das atividades biológicas da peçonha, frente aos soros antibotrópico-crotálico (SABC) do Instituto Butantan (IB), Instituto Vital Brazil (IVB), Fundação Ezequiel Dias (FUNED) e Soro anti- B. leucurus do Instituto Carlos Malbrán. O perfil eletroforético do veneno caracterizou-se pela presença de 4 bandas e o perfil cromatográfico por 7 picos, sendo semelhantes nos diferentes pools. Houve variação regional e sexual, nas atividades biológicas, já que o veneno das serpentes do SB apresentou atividades tóxica, hemorrágica, necrosante e miotóxica maior que da RMS, no entanto, a atividade coagulante desta última foi maior que o da primeira. O veneno das remeas foi mais coagulante que o dos machos. Todas as amostras induziram mionecrose, caracterizada por "balonização", vacuolização, lesões "delta", hipercontração, condensação das miofibrilas e áreas de degeneração muscular. As amostras, em concentrações a partir de 50 J.!glrnl,inibirama transmissão neuromuscular, de maneira dose-dependente e irreversível(com exceção do veneno dos machos), devido às suas ações pós-juncionais. Na dose de 10 µg/ml,veneno de machos e remeas induziu aumento na amplitude das respostas musculares, demonstrando ação pré-sináptica. A peçonha de espécimens da RMS foi mais potente em provocar 50% do bloqueio da resposta contrátil que os da SB, assim como o veneno das remeas foi mais potente que dos machos. Observou-se inibição da resposta acetilcolínica nas preparações tratadas com 50 e 100 µg/mldas diferentes amostras e da amplitude da resposta muscular, de maneira dose-dependente e irreversível, com variação geográfica e sexual. O ELISA demonstrou que todos os pools apresentaram títulos de anticorpos frente a todos os anti-soros testados, sendo maiores frente ao soro específico, com exceção do pool da RMS, cuja titulação do soro específico foi equivalente a do SABC do IB. Dentre os soros inespecíficos,o do IB foi o que apresentou maior titulação, seguido do SABC da FUNED e do IVB. Houve variação na capacidade neutralizante dos soros frente às amostras, e o SABC/IB apresentou maior reatividade cruzada frente ao veneno de machos e da RMS. Os SABCIFUNED e IVB foram melhor reconhecidos pelo veneno de machos, da RMS e SB. O Westemblot demonstrou que o veneno desta espécie apresentou reação cruzada tanto frente ao soro anti-B. leucurus quanto ao SABC do IB e que a reação foi mais intensa quando utilizou-se o soro específico. Todos os anti-venenos foram capazes de neutralizar as atividades hemorrágica, necrosante e hemolítica das duas amostras de veneno, apesar da variação regional observada nesta soroneutralização / Abstract: The present work was a phannacological study of the action Bothrops leucurus venoro, popular known as "white-tailed lancehead". Venom effects (males and females from 1v1RSand South/Southeast region - SSR, Bahia, Brazil) were examined to establish geographical and sexual variability. The venom was characterized based on biochemical (total protein content, chromatographic and electrophoretic pattern), biological (lethal - LDso, proteolytic, venom-induced oedema - ED3o, haemorrhagic - MHD, necrotizing - MND, procoagulant - MCD, defibrinogenating- MDD, myotoxic and neurotoxic activities), imunochemical (ELISA, Westemblot) properties and neutralization of the toxic activities (haemorrhage, necrosis and coagulation). The antibothropic antivenom was provided Instituto Butantan, Instituto Vital Brazil and Fundação Ezequiel Dias (Brazil) and anti-Bothrops leucurus antivenom provided Instituto Malbrán (Argentina). The electrophoretic pattem showed 4 bands and chromatographic pattem 7 peaks without sexual and geographical variability. Lethal, haemorrhagic, necrotizing and myotoxic activities are more intense in snakes proceeding of the SSR than MRS. The coagulant activity of the female's venom is more coagulant than male. All samples induced myonecrosis characterized by swollen, vacuolization, "delta" lesions, myofilament hypercontraction and areas of the muscular damage. Results indicated that by indirect stimulation, B. leucurus venom induced neuromuscular blockade dose-dependent and is irreversible under concentration upper of 50 µg/ml, with exception of the male's venom (upper 100 µg/ml). This occurred probably due to postsynaptic action (depolarizing the cellular membrane, characterized for the severe contracture in 100 µg/ml e 200µg/ml concentrations) of the venom proceeding of the 1v1RSand SSR regions and moderated contracture in 200 µg/ml concentration of the males and females venoro. A males and females venom-induced effect on presynaptic activity was suggested by the marked increase in the twitch tension in 10 µg/ml concentration. The female's B. leucurus venom and proceeding of the 1v1RS region were more potent than male's venom of the SSR region in provocked 50% of the neuromuscular blockade (P<0.05) / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O lÃtex vermelho (Dragonâs Blood ou Sangre de Grado) extraÃdo de algumas espÃcies de Croton à utilizado na medicina popular no tratamento de cÃncer, reumatismo, feridas, Ãlceras, diarrÃia e tambÃm no combate a infecÃÃes. O presente trabalho tem por objetivo geral avaliar uma possÃvel atividade antidiarrÃica do lÃtex do Croton urucurana Baill. (LCU), bem como esclarecer os possÃveis mecanismos de aÃÃo envolvidos nesta atividade, de modo a explicar e justificar o uso popular desta planta no tratamento da diarrÃia. Foram utilizados os modelos de diarrÃia induzida por Ãleo de rÃcino em ratos e camundongos, trÃnsito gastrintestinal e secreÃÃo intestinal induzida pela toxina da cÃlera em camundongos, e contraÃÃes induzidas por agonistas (acetilcolina, cloreto de bÃrio e 5-HT) em jejuno isolado de rato. A administraÃÃo oral do LCU (400, 600 e 800 mg/kg) produziu significativa atividade antidiarrÃica. Contudo, no modelo de diarrÃia induzida por Ãleo de rÃcino em ratos, L-arginina (600 mg/kg, i.p.) e naloxona (2 mg/kg, s.c.) nÃo foram capazes de reverter a atividade antidiarrÃica do LCU (800 mg/kg, v.o.). No modelo de trÃnsito gastrintestinal, o LCU produziu um inibiÃÃo significativa do mesmo (p<0,01) em todas as doses utilizadas. PorÃm, naloxona (2 mg/kg, s.c.), L-arginina (600 mg/kg, i.p.) e ioimbina (1 mg/kg, i.p.) falharam em reverter, de forma significativa, o efeito inibitÃrio do LCU sobre o trÃnsito gastrintestinal. No modelo de trÃnsito gastrintestinal estimulado por fisostigmina (0,25 mg/kg, i.p.), o LCU (600 mg/kg, v.o.) nÃo foi capaz de inibir o mesmo de forma significativa, indicando a ausÃncia de uma aÃÃo anticolinÃrgica. O LCU (600 mg/kg) inibiu a secreÃÃo intestinal induzida pela toxina da cÃlera e esta inibiÃÃo foi maior que aquela mostrada pela clorpromazina (25 mg/kg, v.o.), uma droga conhecida por seu efeito anti-secretÃrio. No modelo de jejuno isolado de rato, o LCU inibiu de forma marcante as contraÃÃes induzidas por 5-HT, enquanto falhou em alterar as contraÃÃes induzidas pelos outros dois agonistas, cloreto de bÃrio e acetilcolina. O LCU demonstrou baixa toxicidade, a DL50 (dose letal para 50% dos animais) encontrada foi de 5,20  0,13 g/Kg, por via oral. Em conclusÃo, os resultados obtidos em nosso estudo sugerem que o lÃtex do Croton urucurana Baill. apresenta atividade antidiarrÃica, confirmando seu uso popular, podendo ser explorado como uma alternativa para o tratamento da diarrÃia, sozinho ou em combinaÃÃo com a soluÃÃo de reidrataÃÃo oral. Muito embora seu mecanismo de aÃÃo ainda nÃo seja claro, seu efeito à independente da participaÃÃo de mecanismo opiÃide, colinÃrgico, &#945;2-adrenÃrgico ou nitriÃrgico. / The red sap (Dragonâs Blood ou Sangre de Grado) extracted from some Croton species is used in folk medicine for the treatment of cancer, rheumatism, wounds, ulcers, diarrhoea and to combat infections. The aim of this study is to evaluate a possible antidiarrhoeic activity of the sap extracted from Croton urucurana Baill. (SCU) and to elucidate the possible mechanism involved on this activity, explaining and justifying the popular use of this plant for the treatment of diarrhoea. The experimental models used were, castor oil-induced diarrhoea in rats and mice, gastrointestinal transit and cholera toxin-induced intestinal secretion in mice, and contractile responses evoked by agonists (acetylcholine, barium chloride and 5-HT) in isolated rat jejunum. SCU (400, 600 and 800 mg/kg, p.o.) produced a significant antidiarrhoeic activity. However, in the castor oil-induced diarrhoea model, in rats, neither L-arginine (600 mg/kg, i.p.) nor naloxone (2 mg/kg, s.c.) reverted the SCU (800 mg/kg, p.o.) antidiarrhoeic activity. On the gastrointestinal transit SCU produced a significant (p<0,01) inhibitory effect at all the test doses employed. However, naloxone (2 mg/kg, s.c.), L-arginine (600 mg/kg, i.p.) and ioimbine (1 mg/kg, i.p.) failed to mitigate in a significant manner, this inhibitory effect of SCU. When tested on physostigmine-induced gastrointestinal transit, SCU (600 mg/kg, p.o.) showed no significant inhibition indicating absence of anticholinergic action. The cholera toxin-induced intestinal secretion was inhibited by SCU (600 mg/kg, p.o.) and this inhibition was greater than that observed with chlorpromazine (25 mg/kg, p.o.), an established antisecretory drug. In isolated rat jejunum, SCU markedly inhibited the contractile responses evoked by 5-HT, but failed to modify the contractile responses of other two agonists, barium chloride and acetylcholine. SCU showed low toxicity, the LD50 (letal dose for 50% of the animals) registered was 5,20 +/- 0,13 g/Kg, per oral route. In conclusion, the results of this study suggest that the sap extracted from Croton urucurana presents antidiarrhoeic activity, confirming its popular use, and can be explored as an alternative treatment for diarrhoea, alone or in combination with the oral rehydration solution. Though, its mechanism of action is unclear, but its effect is independent of opioid, cholinergic, alpha2-adrenergic or nitriergic mechanism.

nÃo hà / The Hasumi vaccine is based on peptides of plasmatic membrane of tumor cells and a extract of bovine spleen associated with immunostimulants substances. The aim of the present work was to evaluate the possible anticancer effect of the Hasumi vaccine and its mechanism of action in animals inoculated with experimental tumors. For the evaluation of the in vivo antitumoral activity, two groups of female Wistar rats were subcutaneously inoculated with 1.0 X 106 cells of the Walker 256 carcinossarcoma in the armpit area. The groups were subcutaneously vaccinated immediately with 500 ÂL of Hasumi vaccine (250 ÂL of peptides) or 500 ÂL of saline, and then, they received boosters of these doses every other day until their death. It was analyzed their survival function and the volume of tumor growth during the treatment period. The blood of these animals was taken for cell count. Other two groups of rats were also inoculated with 1.0 X 106 cells of the Walker 256 carcinossarcoma but they suffered surgical excision of the tumor 5 days after inoculation. After surgery, they received the same treatment of the above mentioned groups. In another set of experiments, four groups of mice C57BL/6 were inoculated with 1.0 X 106 melanoma B/16 cells maintained in culture. Three groups were subcutaneously vaccinated with 1 ÂL, 10 ÂL, 100 ÂL of Hasumi vaccine (0.006 g, 0.06 g, and 0.6 g of peptides) diluted in 200 ÂL of saline solution, and the fourth group received only 200 ÂL of saline. The animals received reinforcements of those doses every 7 days until their death. During the treatment, it was measured the volume of the tumor and the survival time of the animals. Other four groups of mice C57BL/6 were also treated in the same way that the previous groups, however the vaccination were performed by intraperitoneal injection. For the evaluation of the immunogenicity of the Hasumi vaccine, five groups of Swiss mice were immunized with 200 ÂL (100 Âg of peptides) of Hasumi vaccine. Egg-albumine (100 Âg) was used as positive control. The results showed that inoculated animals treated with Hasumi vaccine had their tumor partially inhibited. The total blood count revealed the Hasumi vaccine reverted the leukocytes rising observed in control group, suggesting an anti-inflammatory activity of the vaccine. The animals that suffered surgical retreat of the tumor plus vaccination also presented an inhibition of the tumor growth, and an animal was completely cured. The Hasumi vaccine was also active in mice inoculated with melanoma, and the vaccine seemed to be more efficient when injected intraperitoneally. The presence of antibodies IgG1 was verified by the method of PCA, indicating an immune answer of the Th2 type that is favorable to the anti-inflammatory activity, but it was not possible to detect antipeptides antibodies using ELISA assay. Our results suggest that Hasumi vaccine, as the most alike against cancer vaccines, shows an antitumor in vivo activity with some efficiency, suiting an induction of an immune response of Th2 type. / A vacina Hasumi à formada de peptÃdeos localizados na membrana plasmÃtica de cÃlulas tumorais e um extrato de baÃo bovino associado a substÃncias imunoestimulantes. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o possÃvel efeito anticÃncer da vacina Hasumi, e seu possÃvel mecanismo de aÃÃo, em animais inoculados com tumores experimentais. Para a avaliaÃÃo da atividade antitumoral in vivo foram utilizados dois grupos de ratos Wistar fÃmeas inoculados com 1,0 X 106 cÃlulas do carcinossarcoma de Walker 256 via subcutÃnea na regiÃo da axila. Os animais dos grupos controle e tratado foram imediatamente vacinados com 500 ÂL de vacina Hasumi (3 Âg de peptÃdeos) e 500 ÂL de salina, respectivamente, pela via subcutÃnea e receberam reforÃos dessas doses em dias alternados atà sua morte. Os parÃmetros avaliados foram a sobrevida e o crescimento tumoral durante o perÃodo de tratamento. Amostras de sangue foram coletadas dos animais controles e tratados para a obtenÃÃo do hemograma. Outros dois grupos de ratos tambÃm foram inoculados com 1,0 X 106 cÃlulas do carcinossarcoma de Walker 256 mas sofreram excisÃo cirÃrgica do tumor 5 dias apÃs a sua inoculaÃÃo. ApÃs a cirurgia, receberam o mesmo tratamento dos outros dois grupos acima citados. Em um outro experimento, quatro grupos de camundongos C57BL/6 foram inoculados com 1,0 X 106 cÃlulas de melanoma B/16 mantido em cultura. TrÃs grupos foram imediatamente vacinados com 1 ÂL, 10 ÂL, 100 ÂL de vacina Hasumi (0,006 Âg, 0,06 Âg, e 0,6 Âg de peptÃdeos) diluÃdos em 200 ÂL de soluÃÃo salina, e o quarto grupo recebeu 200 ÂL de salina pela via subcutÃnea. Todos os camundongos receberam reforÃos dessas doses a cada 7 dias atà a sua morte. Foram avaliados o crescimento tumoral e a sobrevida do animal. Outros quatro grupos de camundongos C57BL/6 tambÃm foram tratados da mesma forma que os grupos anteriores, a nÃo ser pela vacinaÃÃo intraperitoneal. Para a avaliaÃÃo da imunogenicidade da vacina Hasumi, cinco grupos de camundongos Swiss foram imunizados pela via subcutÃnea com 200 ÂL (2,4 Âg de peptÃdeos) de vacina Hasumi para identificaÃÃo de anticorpos anti-peptÃdeos. Como controle positivo, outro grupo de camundongos foi imunizado com 100 Âg de Ovalbumina. Os ratos inoculados com carcinosarcoma de Walker 256 vacinados tiveram seu tumor parcialmente inibido. O hemograma revelou a ausÃncia de aumento da quantidade de leucÃcitos 10 dias apÃs a inoculaÃÃo do tumor nos animais imunizados, sugerindo uma atividade antiinflamatÃria da vacina. Os ratos que sofreram retirada cirÃrgica do tumor de Walker 256 e foram vacinados tambÃm sofreram inibiÃÃo do crescimento do tumor, sendo que um animal ficou completamente curado. Os camundongos inoculados com o melanoma e vacinados pela via intraperitoneal tiveram seu cresimento tumoral inibido de forma significativamente superior quando comparados aos animais vacinados pela via subcutÃnea em todas as doses testadas. Foi constatado a presenÃa de anticorpos IgG1 anti-peptÃdeos pelo mÃtodo do PCA, indicando uma resposta imune do tipo Th2 que à favorÃvel à atividade antiinflamatÃria, mas nÃo foi possÃvel detectar anticorpos anti-peptÃdeos pelo mÃtodo de ELISA. Nossos resultados sugerem que a vacina Hasumi, assim como a maioria das vacinas anticÃncer em estudo, apresenta uma atividade antitumoral in vivo com eficiÃncia diferente para cada animal, favorecendo a induÃÃo de uma resposta imune do tipo Th2.

As vitafisalinas sÃo lactonas esteroidais (C28), estruturalmente baseadas no esqueleto do ergostano, comumente encontradas em plantas da famÃlia Solanaceae. A fim de avaliar as propriedades anticÃncer desses compostos, cinco vitafisalinas [O, F, M, N e (17S, 20R, 22R) -5 &#946;, 6&#946; :18,20-2-diepÃxi &#946;-4, 18 - diidrÃxi-1 - oxovita-3-24-enolido] isoladas da Acnistus arborescens, planta tÃpica do nordeste brasileiro, foram analisadas utilizando diversos modelos biolÃgicos. Todas as cinco vitafisalinas mostraram efeitos citotÃxicos em linhagens de cÃlulas tumorais, sendo a vitafisalina O a mais potente e a vitafisalina (17S, 20R, 22R) -5 &#946;, 6&#946; :18,20-2-diepÃxi &#946;-4, 18 - diidrÃxi-1-oxovita-3 - 24-enolido) a menos potente. Ao compararmos as estruturas quÃmicas das vitafisalinas e suas atividades, foi observado que a ligaÃÃo dupla entre os carbonos 2 e 3 à essencial para os efeitos citotÃxicos desses compostos. No entanto, as vitafisalinas (O, F e N) nÃo mostraram qualquer especificidade para linhagens tumorais, jà que tambÃm apresentaram efeitos citotÃxicos e genotÃxicos, semelhantes, em cÃlulas leucÃmicas (HL-60) e em cÃlulas normais (PBMC). A viabilidade celular e curvas de crescimento foram determinadas, para as linhagens de HL-60 e K-562, utilizando o ensaio de exclusÃo de azul de tripan. As vitafisalinas O, F, M e N reduziram o nÃmero de cÃlulas viÃveis de modo dose e tempo dependente, apresentando valores de CI50 variando de 0,7 a 3,5 &#956;M apÃs 72 horas de incubaÃÃo. Nas mesmas linhagens leucÃmicas, as vitafisalinas tambÃm inibiram a sÃntese de DNA, causaram alteraÃÃes morfolÃgicas tÃpicas de apoptose, e apenas na linhagem HL-60 induziram a ativaÃÃo da caspase-3. AlÃm disso, foi realizado, em cÃlulas de HL-60, a anÃlise da integridade da membrana celular, distribuiÃÃo do ciclo celular, fragmentaÃÃo de DNA e o potencial transmembrÃnico de mitocÃndria, utilizando citometria de fluxo. Nestes experimentos, as vitafisalinas O e F, somente na concentraÃÃo de 10 &#956;M, reduziram o nÃmero de cÃlulas viÃveis para 60 e 40%, respectivamente. Na anÃlise do ciclo celular, ambas vitafisalinas, na concentraÃÃo de 5 &#956;M, causaram um acÃmulo de cÃlulas na fase G2/M do ciclo celular. Ambas vitafisalinas tambÃm causaram um aumento significativo do nÃmero de cÃlulas apresentando fragmentaÃÃo de DNA. Os resultados da anÃlise do potencial transmembrÃnico de mitocÃndria mostraram um aumento na despolarizaÃÃo de 4,7, 17,5 e 9,1% causado pela vitafisalina O e de 7,6, 16,6 e 5,6% pela vitafisalina F. O efeito antitumoral (in vivo) da vitafisalina F foi analisado em camundongos transplantados com o tumor Sarcoma 180, nas doses de 5, 10 e 20 mg/Kg/dia por via intraperitoneal e na dose de 20 mg/Kg/dia por via oral. O crescimento do tumor foi inibido em mais de 76% na maior doses testada (20mg/Kg/dia), tanto por via intraperitoneal quanto por via oral. A anÃlise histopatolÃgica dos ÃrgÃos dos animais mostraram que a vitafisalina F provoca efeitos tÃxicos moderados, principalmente no fÃgado e nos rins, mas esses podem ser considerados como reversÃveis. Tendo em vista todos estes dados, pode concluir-se que as vitafisalinas podem ser consideradas como uma classe emergente de novos compostos anticÃncer. / Withaphysalins are C28-steroidal lactones structurally based on the ergostane skeleton commonly found in Solanaceae species. In order to evaluate the anticancer properties of these compounds, five withaphysalins [O, F, M, N and (17S,20R,22R)-5&#946;,6&#946;: 18,20-diepoxy-4&#946;,18-dihydroxy-1-oxowitha-24-enolide] isolated from Acnistus arborescens, a plant from the northeastern Brazilian flora, were analyzed in several biological models. All five withaphysalins showed cytotoxic effects against tumor cell lines, being withaphysalin O the most potent and withaphysalin (17S,20R,22R)-5&#946;,6&#946;: 18,20-diepoxy-4&#946;,18-dihydroxy-1-oxowitha-24-enolide, the less potent. Based on these results, its shown that a double-bond between carbons 2 and 3 is essential for the cytotoxic activity of withaphysalins. Withaphysalins (O, F and N) did not show any specificity to tumor cell lines, showing similar cytotoxic and genotoxic effects against leukemic cells (HL-60) and normal cells (PBMC). Cell viability and growth curves of HL-60 and K-562 treated cells were determined using trypan blue exclusion assay, where all withaphysalins reduced the number of viable cells in a dose-and time-dependent fashion, with IC50 values ranging from 0.7 to 3.5 &#956;M after 72 h of incubation. In HL-60 and K-562 cells, the withaphysalins inhibited DNA synthesis, induced morphological alterations, typical of apoptosis, and only in the HL-60 cell line, and they induced activation of caspase-3. Moreover, it was performed the analyzes of cell membrane integrity, cell cycle distribution, DNA fragmentation and the mitochondrial membrane potential using flow citometry. In these experiments, withaphysalins O and F, only at concentration of 10ÂM, reduced the number of viable cells to 60 and 40% respectively. In the cell cycle analysis, both withaphysalins led to a cell cycle arrest at G2/M, at the concentration of 5&#956;M. Cells treated with both withaphysalins also showed a significant increase in DNA fragmentation when compared to the negative control. Results of the mitochondrial transmembrane potential showed depolarization changes in accordance to the tested concentration (2.5, 5 and 10&#956;g/mL) with 4.7, 17.5 and 9.1% for withaphysalin O and 7.6, 16.6 and 5.6% for withaphysalin F, respectively. The in vivo antitumor effects of withaphysalin F was performed in animals bearing the sarcoma 180 tumor, and at the highest dose tested (20mg/Kg/day), growth tumor was inhibited in 77%. Histopatological analysis of mice organs showed that withaphysalin F causes moderate toxic effects mostly in liver and kidney, but they may be considered reversible effects. Taking in account all these data, it can be concluded that withaphysalins could be considered as an emerging class of new anticancer compounds.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / A presente pesquisa visou determinar a contratilidade do mÃsculo liso traqueal de ratos submetidos a exercÃcio leve de curto prazo, ou seja, treinados 1h ou prÃ-treinados e posteriormente exercitados por 1, 5 e 10 hs (PT1, PT5 e PT10, respectivamente), bem como de animais sensibilizados com OVA, submetidos ao exercÃcio por 5hs e posteriormente desafiados, com o objetivo de verificar as alteraÃÃes causadas pelo exercÃcio neste mÃsculo determinando tambÃm a interferÃncia da broncoprovocaÃÃo antigÃnica sobre a contratilidade traqueal de animais previamente exercitados. Para a realizaÃÃo da pesquisa, ratos machos (250-350g) foram submetidos a diferentes protocolos de nado, por 1, 5 e 10hs, sendo um grupo submetido à sensibilizaÃÃo com OVA e, 21 dias depois, desafiados em intervalos de 15 minutos atravÃs da inalaÃÃo do antÃgeno sensibilizante (grupo S/D). No grupo sensibilizado e submetido ao exercÃcio, este Ãltimo foi realizado durante 5 dias antes do desafio (grupo S/E prà desafio). O sacrifÃcio dos animais ocorreu 30 min apÃs a sessÃo de nado ou 24 horas apÃs o desafio antigÃnico no caso dos animais submetidos ao modelo de asma. Os ratos sedentÃrios nÃo foram submetidos a nenhum treino. Os controles do grupo asma inalaram apenas o veÃculo (NaCl 0,9%). Para os experimentos in vitro a traquÃia foi removida e montada em cuba para ÃrgÃo isolado contendo 5ml de soluÃÃo Tyrod (mantida a 37  0,5 ÂC) e aerada com mistura de O2. Foram confeccionadas curvas concentraÃÃo-efeito (CCE) para carbacol e cloreto de potÃssio. Os resultados mostraram que o pD2 nÃo apresentou valores significativos nos grupos em estudo, exceto em PT5 e PT10, ambos em relaÃÃo ao grupo PT1. A resposta mÃxima (%) apresentou valores significativamente crescentes e maiores nos grupos PT1 (107,62  3,57),PT5 (116,35  0,54) e PT10 (123,50  2,59) em relaÃÃo ao grupo sedentÃrio (82,70  5,90), quando o carbacol foi utilizado como estÃmulo contrÃtil. SituaÃÃo semelhante ocorreu nos grupos PT1 (105,19 Â1,12), PT5 (112,02  1,44) e PT10 (119,56  0,95) em relaÃÃo ao grupo sedentÃrio (90,45  2,22), para o potÃssio e nos grupos S/D (100,74  4,79) e S/E prÃ-desafio (109,09 Â3,68) em relaÃÃo ao grupo sensibilizado (82,69 Â5,90) para o carbacol, e nos grupos S/D (105,50  2,37) e S/E prÃ-desafio (115,05  1,96) em relaÃÃo ao grupo sensibilizado (93,11  3,58). Para verificar a participaÃÃo do Ãxido nÃtrico, acetilcolina e estresse oxidativo no mecanismo da aÃÃo prÃcontrÃtil da musculatura lisa traqueal induzida pelo exercÃcio foram determinados, respectivamente os nÃveis de nitrito, atividade da acetilcolinesterase (AChE) e espÃcies reativas ao Ãcido tiobarbitÃrico (TBARs) como uma maneira de determinar a peroxidaÃÃo lipÃdica. Os valores de nitrito foram significativos para o grupo PT5 em relaÃÃo aos grupos sedentÃrio e treinado 1h. Nos animais submetidos ao protocolo da asma ocorreu queda significativa dos nÃveis de nitrito nos grupos S/D e S/E prÃ-desafio. Ocorreu aumento da peroxidaÃÃo lipÃdica nos grupos PT1, PT5 e PT10 em relaÃÃo ao grupo sedentÃrio. Jà no grupo asmÃtico, os valores foram significativamente maiores nos grupos S/D e S/E prÃdesafio em relaÃÃo ao grupo controle. A atividade da AChE apresentou reduÃÃo significativa nos grupos PT1, PT5 e PT10 em relaÃÃo aos grupos sedentÃrio e treinado 1h. No grupo asmÃtico, tambÃm ocorreu reduÃÃo na atividade da AChE nos grupos S/D e S/E prÃ-desafio. Portanto, os resultados mostram que o exercÃcio a curto prazo aumenta a contratilidade da musculatura lisa traqueal isolada em ratos, para o carbacol e o potÃssio dos grupos em estudo; provavelmente com a participaÃÃo do Ãxido nÃtrico, acetilcolina e peroxidaÃÃo lipÃdica neste mecanismo prÃ-contrÃtil. / This work aimed to determine the contractility of tracheal smooth muscle of rats submitted to short-term light exercise, trained for 1h or pre-trained and, then, trained for 1, 5 and 10hs (PT1, PT5 and PT10, respectively), as well as, animals sensitized with OVA, submitted to exercise for 5hs and subsequently challenged, with the objective of verifying the changes caused by exercise in this muscle, also determining the interference of antigen bronchoprovocation on the contractility of tracheal smooth muscle of animals previously exercised. To conduct the study male rats (250-350g) were subjected to different protocols of swimming, by 1, 5 and 10hs, in addition to one group that was subjected to sensitization with OVA and 21 days later, challenged at intervals of 30 min through sensitizing antigen inhalation (group S/D). In the sensitized group submitted to exercise, this latter was held for 5 days before OVA challenge (group S/E pre-challenge). The animals were sacrificed 15 min after the swimming session or 24 hs after antigen challenge, in the case of rats submitted to asthma model. Sedentary rats were not subjected to any training session. Asthma control group inhaled only the vehicle (NaCl 0.9%). For in vitro experiments the trachea was removed and mounted in an isolated organ bath containing 5ml of Tyrode solution (maintained at 37  0.5 ÂC) and aerated with O2. Concentration-effect curves (CEC) were designed for carbachol and potassium chloride. The results showed that the pD2 values were not significant among the groups except in PT5 and PT10, both in relation to group PT1. The maximum response values were significantly increased and higher in the groups PT1 (107,62  3,57), PT5 (116,35  0,54) and PT10 (123,50  2,59) compared to the sedentary group (82.70  5,90), when carbachol was used as the contractile stimulus. A similar situation occurred in the groups PT1 (105,19  1,12), PT5 (112,02  1,44) and PT10 (119,56  0,95) as compared to the sedentary group (90,45  2,22), for potassium and S/D (100,74  4,79) and S/E pre-challenge groups (109,09  3,68) as compared to the sensibilized group (82,69  5,90) for carbachol, as well as, S/D (105,50  2,37) and S/E pre-challenge (115,05  1,96) groups when compared to the sensibilized one for potassium (93,11  3,58). To verify the involvement of nitric oxide, acetylcholine, and oxidative stress on the pro-contractile mechanism of the tracheal smooth muscle induced by exercise, nitrite levels, acetylcholinesterase (AChE) activity and thiobarbituric acid reactive species (TBARS), as a way of determining lipid peroxidation, were determined. Nitrite levels decreased in the PT5 group as compared to sedentary and 1h trained groups. In the animals subjected to the asthma protocol there was a significant decrease in the nitrite levels in the S/D and S/E prechallenge groups. An increase in lipid peroxidation occurred in the groups PT1, PT5 and PT10 in relation to the sedentary one. In the asthmatic group, the TBARS values were significantly higher in S/D and S/E pre-challenge groups as compared to the control one. The AChE activity showed a significant reduction in the groups PT1, PT5 and PT10 in relation to sedentary and 1h trained groups. The groups S/D and S/E pre-challenge also presented a decrease on AChE activity. Therefore, the results showed that short-term light exercise increases the tracheal smooth muscle contractility of the study groups, probably with the participation of nitric oxide, acetylcholine, and lipid peroxidation in this pro-contractile mechanism.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O cÃncer à uma doenÃa grave que atinge milhares de pessoas no mundo, possuindo altos Ãndices de morbidade e mortalidade. Atualmente existem diversos alvos terapÃuticos no tratamento do cÃncer, um deles reside no fato de inibir a replicaÃÃo do DNA impossibilitando a cÃlula tumoral de se duplicar como à o caso do 5-fluoruracil (5-FU).O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito antiinflamatÃrio do peptÃdeo mimÃtico da ApoE (COG 133) em camundongos Swiss desafiados pela mucosite intestinal induzida pelo 5-FU. Utilizamos camundongos Swiss machos com peso de 30g, sendo desafiados com injeÃÃo (dose Ãnica) intraperitoneal de 5-FU (450 mg/kg).Alguns animais foram tratados com diferentes doses (0,3, 1,0 e 3,0 ÂM) do peptÃdeo mimÃtico da apolipoproteÃna E (ApoE) COG133 por via intra-peritoneal, apÃs o desafio com 5-FU. Animais tratados com PBS foram usados como controles. Os camundongos foram sacrificados com soluÃÃo de deslocamento cervical 3 dias apÃs o desafio com 5-FU.Algumas amostras de intestino foram congeladas imediatamente em nitrogÃnio lÃquido e em seguida armazenadas em freezer a -80ÂC para biologia molecular. Outras amostras foram fixadas em formaldeÃdo para processamento histolÃgico.Monitoramos o peso corporal dos animais e fizemos leucometria a partir de coleta retrorbital de sangue para avaliaÃÃo do efeito citotÃxico mielosupressor do 5-FU nos grupos experimentais.Avaliamosos parÃmetros morfomÃtricos de altura de vilo e profundidade de cripta em segmentos do duodeno. Para a detecÃÃo de proteÃnas de interesse, utilizamos o Western blot com a utilizaÃÃo dos seguintes anticorpos IL-1&#946;, TNF-&#945; e iNOS. Para o RT-PCR, avaliamos os seguintes primers IL-1&#946;, TNF-&#945; e iNOS. No ensaio de citocinas por ELISA, utilizamos os seguintes anticorpos IL-1&#946;, IL-10, TNF-&#945;. Nas anÃlises morfomÃtricas de duodeno, encontramos uma grande reduÃÃo na altura de vilos e profundidade de criptas nosanimais tratados com 5-FU, que foi reduzida com com a utilizaÃÃo do peptÃdeo COG133 na dose 3,0 ÂM (p<0,001).Nas anÃlises histopatolÃgicas, observamos um intensoinfiltrado inflamatÃrio nos animais do grupo que foi injetadocomo 5-FU, que foi parcialmente revertido pela administraÃÃo do peptÃdeo COG133.Os dados de ELISA evidenciaram um aumento da quantidade de citocinas prÃ-inflamatÃrias IL-1&#946; (p<0,05), TNF-&#945; (p<0,05) e uma reduÃÃo da citocina antiinflamatÃria IL-10 (p<0,05), quando comparados ao controle salina, em duodenos de animais que foram injetados com 5-FU. A administraÃÃo do peptÃdeo COG 133 reduziu os nÃveis de IL-1&#946; de maneira estatisticamente significante (p<0,05 1&#956;M; p<0,001 3&#956;M), TNF-&#945; (p<0,001 na dose de 1,0 &#956;M); p<0,001 na dose de 3&#956;M) e para IL-10 (p<0,001 na dose de 3&#956;M).Dados de Western blot evidenciam que o peptÃdeo na dose de 3&#956;M reduziu de maneira estatisticamente significante a expressÃo de citocinas como IL-1&#946; (p<0,001), TNF-&#945; (p<0,05) e do mediador inflamatÃrio iNOS (p<0,05) no duodeno. Pelo protocolo de RT-PCR,encontramos uma elevaÃÃo na expressÃo do transcrito para TNF-&#945; e iNOS nos animais injetados com 5-FU, o que foi parcialmente diminuÃdo pela administraÃÃo do peptÃdeo na dose de 3&#956;M para TNF-&#945; (p<0,05) e iNOS (p<0,05)pelo ANOVA.A partir dos nossos achados, podemos concluir que o peptÃdeo mimÃtico da ApoE (COG 133) possui uma aÃÃo anti-inflamatÃria, especialmente no segmento duodeno, visto que reduz a expressÃo de citocinas prÃ-inflamatÃrias de animais desafiados, dessa forma sugerindo sua utilizaÃÃo em humanos com mucosite intestinal sob quimio/radioterapia.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / 1,4-Cineol à um monoterpeno Ãter amplamente distribuido, o qual à um dos constituintes responsÃveis pelo odor do limÃo. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito gastroprotetor de 1,4-Cineol (CIN 100 e 200 mg/Kg) nos modelos de lesÃo induzidas por etanol ou piroxicam em camundongos e, posteriormente, investigar os possÃveis mecanismos de aÃÃo farmacolÃgica envolvidos nesta aÃÃo. A administraÃÃo oral de 1,4-cineol 200 mg/Kg foi capaz de proteger a mucosa gÃstrica dos danos causados pelo etanol (0,2 ml/amimal, v.o). Esta gastroproteÃÃo foi tambÃm avaliada microscopicamente mostrando que CIN (200 mg/Kg, p.o.) diminuiu o edema na submucosa, o infiltrado inflamatÃrio e a hemorragia. 1,4-Cineol (100 e 200 mg/Kg, v.o.) tambÃm reduziu significantemente as lesÃes gÃstricas causadas pelo piroxicam (30 mg/Kg, s.c.). O mecanismo de gastroproteÃÃo de CIN foi examinado na dose de 200 mg/Kg no modelo de lesÃo gÃstrica induzida por etanol em camundongos. Nos animais prÃ-tratados com L-NAME (10 mg/Kg, i.p.), um inibidor da oxido nÃtrico sintetase, com glibenclamida (10 mg/Kg i.p.), uma substÃncia que bloqueia os canais de potÃssio ATP-dependente, ou com capsazepina (5 mg/Kg i.p.) um antagonista dos receptores vanilÃides TRPV-1, o efeito gastroprotetor de CIN nÃo foi significantemente inibido por estes mecanismos. Por outro lado, o efeito gastroprotetor de CIN foi revertido em animais prÃ-tratados com indometacina (10 mg/Kg v.o.), um inibidor nÃo seletivo da ciclooxigenase, demostrando que hà uma ativaÃÃo desta enzima no mecanismo de aÃÃo de CIN. Este trabalho avaliou tambÃm o mecanismo antioxidante de CIN como um agente gastroprotetor contra as lesÃes induzidas pelo etanol. Sob as nossas condiÃÃes experimentais, o modelo de induÃÃo pelo etanol causou mudanÃas nos sistema antioxidante da mucosa gÃstrica dos camundongos, como a diminuiÃÃo dos nÃveis de grupamentos sulfidrila (GSH) e da atividade da superÃxido dismutase (SOD), tambÃm mostrou um aumento da atividade da mieloperoxidade (MPO) e uma concentraÃÃo aumentada das espÃcies que reagem com o Ãcido tiobarbitÃrico (TBARS) como Ãndice de peroxidaÃÃo lipÃdica (LPO). 1.4-Cineol (200 mg/Kg, v.o.) no modelo de Ãlcera por etanol, nÃo interferiu na concentraÃÃo do GSH, mas permitiu a restauraÃÃo da atividade normal de SOD, nÃveis normais de LPO e de atividade da MPO. Estes dados sugerem que CIN 100 e 200 mg/Kg promovem gastroproteÃÃo contra lesÃes induzidas pelo etanol e/ou piroxicam em camundongos nos quais o mecanismo de aÃÃo incluem o envolvimento de prostaglandinas endÃgenas e uma potente atividade antioxidante. / 1,4-Cineole is a widely distributed monoterpene ether, which is one of the flavor constituents of lime juice. The aim of this work was to evaluate the gastroprotective effect of 1,4-Cineole (CIN 100 and 200 mg/Kg) on ethanol or piroxicam-induced lesions in mice and further investigate the possible pharmacological mechanisms involved in this action. The oral administration of 1,4-cineole 200 mg/kg was able to protect the gastric mucosa from ethanol injury (0.2 ml/animal, p.o.). This gastroprotection was also evaluated microscopically showing that CIN (200 mg/kg, p.o.) decreased the cell loss in the mucosa, submucosal edema, inflammatory infiltration and hemorrhage. 1,4-Cineole (100 and 200 mg/kg, p.o.) also reduced significantly the gastric lesions induced by piroxicam (30 mg/kg, s.c.). Gastroprotective mechanism of CIN was examined in the dose of 200 mg/kg, in the model of gastric lesions induced by ethanol in mice. In animals pretreated with L-NAME (10 mg/kg, i.p.), an inhibitor of nitric oxide synthase, or with glibenclamide (10 mg/kg, i.p.), a drug that blocks ATP-dependent potassium channels, or with capsazepine (5 mg/kg, i.p.), an antagonist of vanilloid receptor TRPV-1, the gastroprotective effect of CIN was not inhibited significantly, suggesting that the effect of CIN is not involved with this mechanisms. Otherwise, the gastroprotective effect of CIN (200 mg/kg, p.o.) was reverted in animals pretreated with indomethacin (10 mg/kg, p.o.), a nonselective inhibitor of cyclooxygenase, demonstrating that there is activation of these enzymes in the mechanism of action of CIN. This work also evaluated the antioxidant mechanism of CIN as gastroprotective agent against ethanol-induced lesions. Under our experimental conditions, the model of induction of ethanol injury caused changes in the antioxidant system of the gastric mucosa of mice as the decrease in the levels of sulfhydryl groups (GSH) and activity of superoxide dismutase (SOD), also showed increased activity of myeloperoxidase (MPO) and high concentration of species that react with thiobarbituric acid (TBARS) as index of lipid peroxidation (LPO). 1,4-Cineole (200 mg/kg, p.o.) in the model of ethanol did not interfere with the concentration of GSH, but allowed the restoration of normal SOD activity, normal levels of LPO and MPO activity. The data suggest that CIN 100 and 200 mg/kg promote gastroprotection against lesions induced by ethanol or piroxicam in mice whose mechanisms include the involvement of endogenous prostaglandins and potent antioxidant activity.

Submitted by Cibele Nogueira (cibelenogueira@ufgd.edu.br) on 2016-03-10T14:32:16Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) encrypted_VANESSASOUZA.pdf: 971182 bytes, checksum: 44d1c3ca8c2ebd3c60d5a11f78bcbf86 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-10T14:32:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) encrypted_VANESSASOUZA.pdf: 971182 bytes, checksum: 44d1c3ca8c2ebd3c60d5a11f78bcbf86 (MD5) Previous issue date: 2014-08-19 / Flavonoids are polyphenolic compounds found in medicinal plants, scientific studies show that some flavonoids have anti-inflammatory activity, antioxidant and anticarcinogenic. The flavone (2-phenyl-4H-1-benzopyran-4-one) is a flavonoid with heart stimulating activity, antibacterial, antiallergic and inhibition or stimulation of enzymes. Thus, this study evaluated the anti-mycobacterial effects of flavone in vitro on H37Rv ATCC 27294. strain was also performed acute toxicity tests, genotoxicity and mutagenicity with flavone in vivo. The minimum inhibitory concentration (MIC) flavone was measured at concentrations of 0.98 to 250 mg / mL. Experimental models of acute toxicity and genotoxicity have been developed in female mice orally is flavone administered by gavage in test of acute toxicity at doses of 175, 560, 1792 and 2000 mg / kg-1 and 175 560, 1792 mg / Kg1 in genotoxicity and mutagenicity assays. Hippocratic signs were observed as well as biochemical analyzes were performed, hematological, genotoxic (comet assay, micronucleus) and mutagenic (phagocytosis). The flavone presented antimycobacterial activity MIC = 31.25 mm / ml. The data obtained was found to increase in macrophage recruitment into the splenic tissue was an average 55% phagocytosis of cells compared to the negative control in 37% phagocytosed cells, these data demonstrate that the flavone could play immunostimulatory activity. In vivo tests were not observed signs of toxicity and no changes in biochemical, hematological, genotoxic and mutagenic parameters. Macroscopic examination of organs such as kidneys, liver and lungs showed no significant difference between groups. Thus, this study demonstrates the flavone has vitro antimycobacterial activity (efficacy against Mycobacterium tuberculosis). In addition, the flavone is not toxic in the models made in this work. These results together lead to the demonstration of efficacy against mycobacteria flavone and safety of a compound present in nature. / Flavonóides são compostos polifenólicos encontrados em algumas plantas medicinais, estudos científicos demonstram que, alguns flavonóides tem atividades anti-inflamatória, anticarcinogênica e antioxidante. A flavona (2-fenil-4H-1-benzopirano-4-ona) é um flavonóide com atividade de estimulação cardíaca, antibacteriana, antialérgica e de inibição ou estimulação de enzimas. Dessa forma, esse trabalho avaliou os efeitos antimicobacterianos da flavona in vitro sobre a cepa H37Rv ATCC 27294. Foi realizado também os testes de toxicidade aguda, genotoxicidade e mutagenicidade com a flavona in vivo. A concentração inibitória mínima (CIM) da flavona foi mensurada nas concentrações de 0.98 a 250 µg/mL. Modelos experimentais de toxicidade aguda, genotoxicidade e mutagenicidade foram desenvolvidos em camundongos fêmea por via oral, sendo a flavona administrada por gavagem no ensaio de toxicidade aguda nas doses de 175, 560, 1792 e 2000 mg/Kg-1 e em 175, 560, 1792 mg/Kg1 nos ensaios de genotoxicidade e mutagenicidade. Foram observados sinais hipocráticos bem como, foram efetuadas análises bioquímicas, hematológicas, genotóxicas (ensaio cometa, micronúcleo) e mutagênicas (fagocitose). A flavona apresentou atividade antimicobacteriana de CIM = 31,25 mm/mL. Nos dados obtidos verificou-se aumento no recrutamento de macrófagos para o tecido esplênico houve uma média de 55% de células fagocitadas, quando comparado ao controle negativo com 37% de células fagocitadas, estes dados demonstram que a flavona poderia desempenhar atividade imunoestimulatória. Nos testes in vivo, não foram observados sinais de toxicidade e nem alterações nos parâmetros bioquímicos, hematológicos, genotóxicos e mutagênicos. A análise macroscópica de órgãos como: rins, fígado e pulmões não apresentou nenhuma diferença significativa entre os grupos. Desta forma, o presente estudo demonstra a flavona apresenta atividade antimicobacteriana in vitro (eficácia contra Mycobacterium tuberculosis). Além disso, a flavona não é tóxica nos modelos realizados nesse trabalho. Esses resultados juntos levam a demonstração da eficácia da flavona contra micobactérias e a segurança de um composto presente na natureza.

Orientador : Sergio Marangoni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T04:10:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ponce-Soto_LuisAlberto_M.pdf: 12886909 bytes, checksum: d45d6b46b5f324d21504b1ca07ebdfde (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: Crotalus durissus collilineatus é uma serpente de grande importância médica na região Centro Oeste do Brasil. Desta forma justifica-se o interesse em isolar e caracterizar compostos como a crotoxina que representa a principal fração do veneno bruto, com importantes atividades farmacológicas. Aproximadamente 20 mg de veneno total foram aplicados em uma coluna Protein Pack SW 300 (0,78X30cm Waters) acoplada a um sistema HPLC (Waters) resultando no isolamento da crotoxina. Nessa fase o perfil cromatográfico não mostrou a fração correspondente á crotamina o que reforça a importância do estudo da crotoxina desse veneno. O isolamento das frações crotapotina e fosfolipase A2 a partir da crotoxina purificada foi realizado em uma coluna de fase reversa, C-18 J.l-Boundapak em HPLC. Quatro isoformas de crotapotina, sendo as isoformas F3 e F4 majoritariamente recuperadas e apenas uma de fosfolipase A2, (F6) foram purificadas com um alto grau de pureza segundo a caracterização bioquímica e estudos eletroforéticos como SDS-PAGE revelando a massa mo/ecular a crotoxina de 24 kDa e da PLA2 de 15 kDa e das crotapotinas F3 e F4 com 9 kDa. O estudo em forma cruzada do efeito inibitório das crotapotinas sobre as PLA2 provenientes de Cdcoll, Cdt e Cdcas, sugere que as diferenças estruturais são responsveis pelas diferenças no mecanismo de inibição. A caracterização cinética da fosfolipase A2 de Cdcoll evidencia um comportamento de enzima alostérica em nossas condições experimentais, dado não relatado ainda na literatura especializada. Este fato reforçou nosso interesse em estabelecer comparações entre outras fosfolipases dependentes de calcio provenientes de veneno de serpentes que possuam um comportamento michaeliano. O efeito neurotóxico do veneno total, crotoxina, isoformas de crotapotina (F3 e F4); assim como a fração, PLA2 (F6) isolados, suas reassociações com a PLA2 (F6) de Cdcoll, foi estudada em registros miográficos, em preparações nervo frênico-diafragma isolado de camundongo e biventer cervicis de pintainho. Evidenciou-se ainda que a reassociação das isoformas da crotapotina de Cdcoll (F3 e F4) e a PLA2 (F6) restabelece o efeito bloqueador neuromuscular característico da crotoxina nativa. Foram realizadas abordagens bioquímica e farmacológica comparando as duas isoformas de crotapotina (F3 e F4) e reassociação de ambas com a fosofolipase isolada da mesma crotoxina de Cdcoll, são resultados ainda não registrados na bibliografía. Portanto este trabalho é importante para comprender a integridade ou pureza dos componentes isolados, assim como para identificar o efeito neurotóxico. É importante ressaltar que a reassociação entre as isoformas de crotapotina e fosfolipase (PLA2) não implicou em perda do efeito biológico, o que mostra que a metodologia utilizada foi satisfatória para a purificação das proteínas, preservando a integridade estrutural e funcional das isoformas estudadas / Abstract: Crotalus durissus collilineatus is a serpent of great medical importance in the region Center West of Brazil. af this form the interest in isolating is justified and characterizing composites as the crotoxina like that they present the main fraction of the raw poison, with important pharmacology activities. Approximately 20 mg of total poison had been applied in a column Protein Pack SW 300 (0,78X30cm Waters) coupled to a system HPLC (Waters) resulting in the isolation of the crotoxina. In this phase the chromatographic profile did not show crotamina to the corresponding fraction a what it strengthens the importance of the study of the crotoxina of this poison. The isolation of the fractions crotapotina and fosfolipase A2 from the crotoxina purificaty was carried through in a phase column reversa, C-18 I-l-Boundapak in HPLC. Four. isoformas of crotapotina (F3 and F4) to greater recover, and only one of phospholipase A2, (F6) they had been purificatory with one high degree of pureness according to characterization electrophoretics biochemist and studies as SDS-PAGE disclosing relative the molecular mass of the 24 kDa crotoxina of 15 kDa PLA2 kDa and the crotapotinas F3 and F4 with 9 kDa respectively. The inibitory effect of the crotapotins on the PLA2 in crossed form proceeding from CdcolI, Cdt and Cdcas discloses to differences structured in the inhibition mechanism. The kinetic characterization of phospholipase A2 de Cdcoll evidences a alosteritic enzyme behavior in our experimental conditions, still dates not told in specialized literature. This fact strengthened our interest in establishing matchings among others fosfolipases dependents of calcio proceeding from poison of serpents that possess a michaeliano behavior. The neurotoxicity effect of the total poison, as well as of the crotoxina, beyond the components of the crotoxina; isoforms of crotapotina (F3 and F4); as well as the fraction, PLA2 (F6) isolated, as of of these reasociations with PLA2 (F6) of Cdcoll, was studied in miographics registers, red tapes isolated nerve frenic-diaphragm of mouse and to biventer cervicis of chick. It was still proven that the to reconstruct of isoformas of the crotapotina of Cdcoll (F3 and F4) and PLA2 (F6) commit the effect choke to neuromuscular characteristic of the native crotoxina. Boardíngs the two biochemist and pharmacology comparing isoformas of crotapotina (F3 and F4) and to reconstruct of both with phospholipase isolated of the same crotoxina of Cdcoll, still not registered in the bibliography, for in such a way this whork were important to comprender the integrity or purity of the isolatedcomponents, as well as identifying the neurotoxocity effect. It is important to resaltar that the to reconstruct enters isoformas of crotapotina and phospholipase (PLA2) did not imply in loss of the biological effect, what sample that the used methodology was satisfactory for the purification of proteins, preserving studied the structural and functional integrity of isoformas / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular