CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Death from acute diarrhea has been reduced since 80Âs. However diarrhoeal diseases account for nearly 1.34 million deaths a year among children under-five years of age, making them the second most common cause of child deaths worldwide. As mortality acute diarrhea was reduced, persistent diarrhea (PD) has become a major enteric diseases infant collaborating to morbidity of affected populations. Small intestinal mucosa injury that becomes prolonged has been named as a central mechanism in the pathophysiology of PD. The protein malnutrition and infection by Escherichia coli enteroaggregative (EAEC) are strongly associated with development PD. The present study investigated the effect of supplementation of Alanyl-Glutamine on monolayer of intestinal cells in the absence of infection, evaluated some parameters of the injury caused by EAEC (strain 239-1) on the intestinal mucosa in vitro and modulation of such injury by Alanyl-Glutamine 10mM. The result show that effects of supplementation of Alanyl-Glutamine 10mM is no different from effects free glutamine 4mM. Compared to E. coli HS, EAEC infection reduced the number of migrating cells, increased the percentage of necrosis, decreased the proliferation and transcription-reverse from small GTPases (RhoA, Rac1 and Cdc42), within 6 hours of contact. The contact EAEC reduced transcription of IL-8 (6h and 0h), NF-κB (6h) and TLR5 (6h and 12h) and increased TNF-α expression. The treatment of infection with Ala-Gln 10mM altered the following parameters: reduced the percentage of necrosis, increase of cell migration, although it has not caused changes in the transcription of Rho GTPases genes, increased transcription IL-8, NF-κB (6h) e TLR5 (6h and 12h). Treatment with dipeptidio significantly reduced the secretion of TNF-α (12h) while increased protein expression of IL-6 (6 e 12h). In conclusion, found that glutamine deprivation decreases cellular response against the infectious stimulus. The EAEC appears to minimize the innate host immune defenses by reducing the transcription of NF-kB and TLR5 and limit the increased transcription of IL-8. The Ala-Gln seems to make the cell more reactive against injurious stimuli, increasing their responsiveness through increased transcriptional IL-8, NF-kB and TLR5. Moreover increased protein expression of IL-6 appears to be one of the mechanisms by which promotes Ala-Gln protective effect on the intestinal epithelial barrier. / A morte por diarreia aguda tem apresentado grande declÃnio desde a dÃcada de 80 em todas as regiÃes do mundo. Entretanto as doenÃas diarreicas ainda sÃo responsÃveis por 1,34 milhÃes de mortes infantis a cada ano e representam a segunda maior causa de mortalidade no grupo etÃrio com idade inferior a 5 anos. Com o declÃnio de mortalidade por casos de diarreia aguda a diarreia persistente (DP) se tornou uma das principais doenÃas entÃricas infantis contribuindo para morbidade das populaÃÃes afetadas. Uma lesÃo no intestino delgado que se torna prolongada tem sido colocada como elemento central da patofisiologia da DP. A desnutriÃÃo proteica e a infecÃÃo por Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) estÃo fortemente associados ao desenvolvimento da DP. O presente estudo investigou o efeito da suplementaÃÃo de Alanil-Glutamina sobre monocamada de cÃlulas da mucosa intestinal na ausÃncia de infecÃÃes. Avaliou alguns parÃmetros da lesÃo promovida por EAEC (cepa 239-1) sobre a mucosa intestinal in vitro e a modulaÃÃo de tal dano pela Alanil-Glutamina 10Mm. Os resultados obtidos mostram que os efeitos da suplementaÃÃo de Ala-Gln 10mM nÃo diferem dos efeitos exibidos pela glutamina livre 4mM. Em relaÃÃo a cepa comensal E. coli HS, a infecÃÃo com EAEC reduziu de forma significativa a quantidade de cÃlulas em migraÃÃo, aumentou o percentil de necrose, diminuiu a proliferaÃÃo celular e reduziu significativamente a transcriÃÃo dos genes das pequenas GTPases (RhoA, Cdc42 e Rac1) apÃs 6h de contato com enterÃcitos. O contato com EAEC reduziu a transcriÃÃo de IL-8 (0h e 6h), NF-κB (6h) e TLR5 (6h e 12h) e aumentou a expressÃo proteica de TNF- α (12h). O tratamento da infecÃÃo com Ala-Gln 10mM alterou significativamente os seguintes parÃmetros: aumento da quantidade de cÃlulas em migraÃÃo embora nÃo tenha causado alteraÃÃo na transcriÃÃo dos genes da pequenas GTPases, reduÃÃo do percentual de necrose, aumento da proliferaÃÃo celular, aumento da transcriÃÃo IL-8, NF-κB (6h) e TLR5 (6h e 12h). O tratamento com o dipeptidio reduziu significativamente a secreÃÃo de TNF-α (12h) enquanto aumentou a expressÃo proteica de IL-6 (6 e 12h). Em conclusÃo, verificamos que a privaÃÃo de glutamina diminui a resposta celular frente ao estÃmulo infeccioso. A EAEC, por sua vez, parece minimizar as defesas imunes inatas hospedeiro ao reduzir a transcriÃÃo de NF-kB e TLR5 e limitar o aumento da transcriÃÃo de IL-8. A Ala-Gln parece tornar a cÃlula mais reativa frente aos estÃmulos lesivos, aumentando sua capacidade de resposta atravÃs do aumento transcricional de IL-8, NF-kB e TLR5. Por outro lado o aumento da expressÃo proteica de IL-6 parece ser um dos mecanismos pelas quais Ala-Gln promove efeito protetor sobre a barreira epitelial intestinal.

nÃo hà / Introdução: O cÃncer Ãum dos principais problemas mundiais de saÃde e uma das causas mais importantes de morbidade e mortalidade em saÃde pÃblica. Segundo a OrganizaÃÃo Mundial de SaÃde (OMS) Ãa segunda causa de morte no mundo;perdendo apenas para as doenÃas cardiovasculares.Temos alta incidÃncia nacional de pacientes com cÃncer de pulmÃo avanÃado. Hà imprevisibilidade de perfis epidemiolÃgicos e respostas terapÃuticas. A biologia molecular tem sido importante na caracterizaÃÃo sobre a diferenciaÃÃo tumoral e prognÃstico da doenÃa.Novos tratamentos sÃo direcionados por caracterÃsticas farmacogenÃmicas. Pouco se sabe sobre a prevalÃncia desses genes no CearÃe na AmÃrica Latina, bem como sobre caracterÃsticas clÃnicas e desfechos relacionados. Objetivo: Identificar as caracterÃsticas e distribuiÃÃo do perfil epidemiolÃgico dos pacientes portadores de neoplasia de pulmÃo avanÃado, atendidos no ambulatÃrio de oncologia do Hospital de Messejana - Dr. Carlos Alberto Studart. Material e Métodos: Estudo observacional, prospectivo e analítico com inclusão de 135 pacientes portadores de neoplasia de pulmÃo avanÃado, entre 08/2012 a 12/2014; sendo analisados quanto a distribuiÃÃo de frequÃncia por procedÃncia, sexo, raÃa, escolaridade, queixas clinicas, tabagismo e perfil molecular. Resultados: Houve predominÃncia na procedÃncia de pacientes oriundos de cidades do interior do Cearà (69%); pacientes do sexo feminino (51,1%), baixa escolaridade (1o grau ou menos -19%), agricultores (22,4%), Pardos (47,4%) e tabagistas.(79%)O subtipo histolÃgico adenocarcinoma foi predominante (32,5%). DispnÃia foi a principal queixa clinica. O atendimento inicial predominante se deu no perÃodo de internamento (75,5%). Conclusão: Neste grupo de pacientes identificou-se um perfil de caracterÃsticas epidemiolÃgicas prÃprias. Criou-se um registro de cÃncer do hospital.Hà proporcionalidade de resultados com a literatura. / Introduction: Cancer is a leading global health problems and one of the most important causes of morbidity and mortality in public health. According to the World Health Organization (WHO) is the second leading cause of death worldwide, second only to the diseases cardiovasculares.Temos national high incidence of patients with advanced lung cancer. There unpredictability of epidemiological profiles and therapeutic responses. Molecular biology has been important in the characterization of tumor differentiation and prognosis of the disease. New treatments are directed by pharmacogenomic characteristics. Little is known about the prevalence of these genes in CearÃand Latin America as well as on clinical characteristics and outcomes related. Objective: To identify the characteristics and distribution of the epidemiological profile of patients with advanced lung cancer, treated at the oncology clinic at the Messejana Hospital - Dr. Carlos Alberto Studart. Material and Methods: An observational, prospective and analytical study with inclusion of 135 patients with advanced lung cancer, between 08/2012 to 12/2014; being analyzed for the distribution of origin by frequency, sex, race, education, clinical complaints, smoking and molecular profile. Results: There was a predominance in the success of patients from small towns of CearÃ(69%); female patients (51.1%), low education (first degree or less -19%), farmers (22.4%), Pardos (47.4%) and smokers. (79%) The histological subtype was adenocarcinoma predominantly (32.5%). Dyspnea was the main complaint clinica.O predominant initial treatment occurred in hospital stay (75.5%). Conclusion: In this group of patients identified a profile of epidemiological characteristics. Created a hospital cancer registry. There proportionality results with the literature.

A doenÃa de Parkinson (DP) à caracterizada pela degeneraÃÃo nigroestriatal, com depleÃÃo dopaminÃrgica, alteraÃÃes inflamatÃrias e oxidativas cerebrais levando a prejuÃzo no controle do movimento e coordenaÃÃo. Trabalhos recentes mostram que a atividade fÃsica em esteira pode ser benÃfica para estes pacientes, mas hà poucas evidÃncias avaliando os parÃmetros sanguÃneos relacionados, como estresse oxidativo e nÃveis de neurotrofinas. Assim, o presente estudo objetivou avaliar o impacto do treinamento da marcha atravÃs da esteira ergomÃtrica na capacidade funcional e marcadores de estresse oxidativo bem como os nÃveis de neurotrofinas em pacientes com DP. Tratou-se de ensaio clÃnico controlado, aberto e aleatorizado, de agosto de 2013 a fevereiro de 2014. IncluÃdos 22 indivÃduos com DP estÃgio II e/ou III, na escala de Hoehn e Yahr, acima de 40 anos, e que nÃo apresentaram quadro de demÃncia pelo Mini Teste do Estado Mental (escore> 21). ExcluÃdos os que apresentaram sinais de piora clÃnica apÃs o inicio do estudo com aumento no tremor Ãs atividades e com duas faltas consecutivas ao tratamento proposto ou trÃs no tempo total deste. Os pacientes foram aleatorizados em dois grupos: Grupo Controle (GC) e Grupo de IntervenÃÃo (GI). As avaliaÃÃes relacionadas à capacidade funcional (qualidade de vida, anÃlise estÃtica e dinÃmica da marcha) e parÃmetros sanguÃneos como peroxidaÃÃo lipÃdica (TBARS), glutationa reduzida (GSH) e fator neurotrÃfico derivado do cÃrebro (BDNF) foram realizadas antes e apÃs as oito semanas de intervenÃÃo. O GI iniciou o protocolo individualmente, com duas intervenÃÃes semanais na esteira ergomÃtrica, utilizando 80% da velocidade mÃxima encontrada no protocolo de Harbor, num total de 16 atendimentos. Jà o GC manteve-se somente com o tratamento medicamento previsto. Resultados foram avaliados pelo programa estatÃstico SPSS versÃo 17.0 e expressos como mÃdia  desvio padrÃo, sendo estatisticamente significante valores de p< 0,05. Os dados demogrÃficos dos grupos foram homogÃneos quanto Ãs variÃveis idade, gÃnero, altura, peso, tempo de doenÃa, teste mini mental e teste da escala de depressÃo. A qualidade de vida nÃo mostrou diferenÃas no coeficiente fÃsico sumarizado, entretanto no coeficiente mental sumarizado foi observado diferenÃa entre os grupos no perÃodo pÃs-intervenÃÃo (p=0,03), o SF-36 considera QV acima de 50 pontos. NÃo foram encontradas diferenÃas na superfÃcie do pà (P) direito (D) e esquerdo (E), nem na distÃncia dos pÃs em relaÃÃo ao barocentro, tambÃm nÃo houve diferenÃa na pressÃo mÃdia e mÃxima dos PD e PE, em ambos os grupos. Com relaÃÃo a variÃvel superfÃcie, viu-se diferenÃa no perÃodo prÃ-intervenÃÃo no PE (p=0,001). No perÃodo pÃs-intervenÃÃo houve diferenÃa na superfÃcie do PD (p=0,001), na oscilaÃÃo Ãntero-posterior do PE (0,01) e na oscilaÃÃo lÃtero-lateral do PD (p=0,01). Na velocidade da marcha foi encontrado, antes da intervenÃÃo, diferenÃa na velocidade mÃdia do PD (p=0,04). No GI, viu-se associaÃÃo forte entre BDNF e GSH com valores de significÃncia estatÃstica (r= 0,8; p=0,001), assim como entre BDNF e prÃtica de atividade fÃsica (r= 0,7; p=0,03). Conclui-se que a caminhada controlada na esteira melhora o equilÃbrio estÃtico, qualidade de vida e os nÃveis plasmÃticos de GSH em pacientes com DP. / Parkinson disease (PD) is characterized by nigrostriatal degeneration with consequent depletion of dopamine content in the striatum as well as brain inflammatory and oxidative alterations leading to movement and coordination impairment. Recent studies showed that physical exercise in the treadmill is benefic for PD patients although there is a lack in the literature of plasma alterations in oxidative stress parameters and neurotrophins in PD patients submitted to physical exercise. Based on this, the present study had the goal to evaluate the impact of controlled treadmill walking in the functional capacity and plasma levels of oxidative stress parameters and brain derived neurotrophic factor (BDNF) of PD patients. To do this, participants from both sexes were submitted to an open and randomized trial from august 2013 to February 2014. The participants were randomized in two groups control (CG) and intervention group (IG). The IG comprised PD patients in stage II and/or III, based on the Hoehn and Yahr scale. These patients were 40 years old or above and did not present dementia as evaluated by Mini-mental state examination (score> 21). Patients who presented signals of clinical worsening, such as increased tremor during activities, or presented two consecutive absences during the treatment or a total of three absences were excluded from the study. The evaluation related to the functional capacity (e.g. quality of life, static analyses and dynamic gait) and plasma parameters (lipid peroxidation, reduced glutathione (GSH) and BDNF were performed before and immediately after eight weeks of intervention. The IG group started the protocol individually with two weekly interventions in the treadmill with 80 % of maximum velocity based on the Harbor protocol in a total of 16 interventions. The CG was maintained only in drug treatment. The results were evaluated using the SPSS software version 17.0 considering differences when p<005. The demographic data were homogeneous based on the variables age, sex, weight, time of disease, mini-mental and depression tests. Quality of life did not present significant differences in the physical coefficient summarized, however in the mental coefficient summarized there was a difference between groups in the post intervention period (p= 0.03). There were no differences in the surface of right (RF) and left feet (LF) neither in the distance of the feet in relation to the barocenter. There was no alteration in the medium and maximal pressure of RF and LF. In relation to the variable surface, a significant difference in the period pre-intervention in the LF was observed (p= 0.001). In the period post-intervention there as a difference in the surface of RF (p= 0.001), in the antero-posterior oscillation of the LF (p= 0.01) and in the latero-lateral oscillation of the RF (p= 0.01). Regarding the gait velocity we observed before intervention a difference in the mean velocity of RF (p= 0.04). In the IG we observed a strong association before intervention between BDNF and GSH (r= 0,8; p=0,001), as well as between BDNF and physical activity (r= 0,7; p=0,03). We can conclude that controlled treadmill walking improves functional capacity of PD patients, accompanied by increased levels of antioxidant defenses.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A mortalidade infantil afeta milhÃes de crianÃas em todo mundo e a desnutriÃÃo contribui com cerca de um terÃo dessa mortalidade. A vitamina A jà à utilizada no tratamento da desnutriÃÃo infantil. Contudo, poucos ou nenhum estudo fora realizado, ao nÃvel celular, para avaliar o impacto da suplementaÃÃo com a vitamina A em cÃlulas epiteliais intestinais com desnutriÃÃo proteica in vitro. Desse modo, objetivamos demonstrar os efeitos da desnutriÃÃo e do tratamento com retinoides nos processos de proliferaÃÃo, apoptose/necrose, ciclo celular e diferenciaÃÃo celular, assim como na ativaÃÃo das vias de sinalizaÃÃo em cÃlulas IEC-6 de rato com desnutriÃÃo proteica. Demonstramos que a desnutriÃÃo diminuiu a proliferaÃÃo celular nos tempos de 6, 12, 24 e 48 horas. Em adiÃÃo, nos tempos de 24 e 48 horas a suplementaÃÃo com palmitato de retinol intensificou esta reduÃÃo em comparaÃÃo ao grupo desnutrido. Contudo, a diminuiÃÃo da proliferaÃÃo nÃo estava relacionada à morte celular. Na verdade, o palmitato de retinol reduziu apoptose no tempo de 48 horas apÃs a induÃÃo de desnutriÃÃo. Adicionalmente, a desnutriÃÃo estimulou a quiescÃncia celular e a mesma foi intensificada pelo retinol identificada pelo aumento do percentual de cÃlulas na fase G0/G1 e diminuiÃÃo dos percentuais de cÃlulas nas fases S e G2/M, principalmente nos tempos entre 24 e 48 horas. Para verificar se a desnutriÃÃo, associada ou nÃo à suplementaÃÃo dos retinoides, estimulava a diferenciaÃÃo celular foi realizada a anÃlise da transcriÃÃo gÃnica dos marcadores especÃficos FABP e IAP no perÃodo de 42 horas. Os dois retinoides testados aumentaram em aproximadamente cinco vezes a expressÃo dos mRNAs de FABP e IAP. Visto que a diferenciaÃÃo fora estimulada, foram verificadas quais as vias de sinalizaÃÃo intracelular, acopladas à ativaÃÃo da proteÃna G, estavam ativadas. Os resultados deste trabalho demonstraram que a desnutriÃÃo proteica diminuiu a transcriÃÃo gÃnica de c-Jun, STAT3, MEF2C, e ATF2, mas aumentou a expressÃo dos mRNAs de GLI-3 e c-Fos em relaÃÃo ao grupo nutrido. Entretanto, os retinoides aumentaram a transcriÃÃo dos mRNAs de ELK-1, SRF, c-Jun, FOXO, STAT3, ATF2, GLI-3 e NF-&#954;B em relaÃÃo com o grupo desnutrido. Deste modo, este trabalho mostrou que a desnutriÃÃo interferiu na proliferaÃÃo estimulando a quiescÃncia celular. PorÃm, o tratamento com os retinoides intensificou a quiescÃncia diminuindo a apoptose com estimulaÃÃo da diferenciaÃÃo celular associado com a ativaÃÃo das vias moleculares do ATF2, MAPK/ERK/JNK, IL-6, Hedgehog, PI3K/AKT e NF-&#954;B. / Infant mortality affects millions of children around the world and malnutrition contributes about one third of this mortality. Vitamin A is already used in the treatment of childhood malnutrition. However, few or no study has been done, carried out at the cellular level, to assess the impact of vitamin A supplementation in intestinal epithelial cells under in vitro protein malnutrition. Thus, we aimed to demonstrate the effects of malnutrition and treatment with retinoids in the processes of proliferation, apoptosis/necrosis, cell cycle and cell differentiation as well as activation of signaling pathways in IEC-6 rat cells under protein malnutrition. We demonstrated that malnutrition decreased cell proliferation in periods of 6, 12, 24 and 48 hours. In addition, retinyl palmitate treatment intensified the decrease of cell proliferation when compared to the malnourished group in the periods of 24 and 48 hours after supplementation. However, the reduction in proliferation was not related to cell death. Indeed, retinyl palmitate reduced apoptosis in the period of 48 hours after induction of malnutrition. Additionally, malnutrition stimulated cell quiescence, and the same was enhanced by retinol, which was identified by the increase in the percentage of cells in G0/G1 phase and the reduction of the percentage of cells in S phase and G2/M, especially in periods of 24 and 48 hours. To check if malnutrition, with or without supplementation of retinoids, was stimulating cell differentiation, we evaluated the gene transcription of the specific markers FABP and IAP within 42 hours. Both retinoids tested increased approximately 5-fold the expression of FABP and IAP mRNAs. Knowing that differentiation had been stimulated, we decided to check which intracellular signaling pathways, coupled to the activation of G proteins, were activated. Our results demonstrated that protein malnutrition decreased gene transcription of c-Jun, STAT3, MEF2C and ATF2, but increased the expression of the GLI-3 and c-Fos mRNAs in relation to the nourish group. However, retinoids increased the transcription of ELK-1, SRF, c-Jun, FOXO, STAT3, ATF2, GLI-3, NF-kB in relation to the malnourished group. Thus, this study showed that cell malnutrition interfered with cell proliferation stimulating cell quiescence. However, retinoids treatment intensified cell quiescence, decreased IEC-6 apoptosis and stimulated cell differentiation associated with the activation of the molecular pathways of ATF2, MAPK/ERK/JNK, IL-6, Hedgehog, PI3K/AKT and NF-kB.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Himatanthus drasticus à uma planta laticÃfera pertencente à famÃlia Apocynaceae encontrada na AmÃrica do Sul e conhecida popularmente como janaguba. Seu lÃtex à conhecido como âleite de janagubaâ e apresenta vÃrias atividades farmacolÃgicas. O presente trabalho teve como objetivo estudar o efeito das proteÃnas isoladas do lÃtex de Himatanthus drasticus (HdLP) em modelo de artrite experimental induzida por zymosan (Zy). A artrite foi induzida em camundongos machos swiss (n=6) atravÃs da administraÃÃo de 0,1 mg Zy i.a. Os animais foram tratados com HdLP (5 e 50 mg/kg i.v.) ou Salina i.v. 1 hora apÃs o Zy e com HdLP (50 mg/kg v.o.) ou Dexametasona (2 mg/kg s.c.) 1 hora antes do Zy. Seis horas apÃs a induÃÃo os animais foram eutanasiados, foi realizada a lavagem da articulaÃÃo e o lavado articular coletado para avaliaÃÃo do efeito de HdLP sobre a migraÃÃo de leucÃcitos, atividade da mieloperoxidase (MPO) e liberaÃÃo de mediadores inflamatÃrios (NO, TNF-&#945;, IL-1&#946;, IL-6 e IL-10). O edema foi avaliado pela mediÃÃo do diÃmetro transversal da articulaÃÃo e pela avaliaÃÃo da permeabilidade vascular. AlÃm disso, foi avaliado o efeito de HdLP sobre processo inflamatÃrio na membrana sinovial e sobre a hipernocicepÃÃo mecÃnica utilizando uma versÃo eletrÃnica (VonFrey). Para as anÃlises estatÃsticas foi utilizado o teste ANOVA/Bonferroni ou Kruskal Wallis/Dunns; p <0,05 foi considerado significante. Este estudo foi aprovado pela ComissÃo de Ãtica em Pesquisas com Animais da UFC - CEPA (38/14). HdLP 50 mg/kg i.v. apresentou uma diminuiÃÃo significativa na contagem de leucÃcitos, nos nÃveis de MPO e na liberaÃÃo de medidores inflamatÃrios (NO, IL-1&#946;, e IL-6). TambÃm foi observado uma diminuiÃÃo do edema e no dano à membrana sinovial. Na hipernocicepÃÃo mecÃnica os grupos (HdLP 50 mg/kg i.v. e 50 mg/kg v.o.) apresentaram um aumento no limiar nociceptivo. HdLP apresenta atividade antinociceptiva e anti-inflamatÃria no modelo de artrite induzida por Zy. O efeito parece estar relacionado com a diminuiÃÃo da migraÃÃo de neutrÃfilos e da liberaÃÃo de mediadores inflamatÃrios, reduzindo o dano na membrana sinovial e a hipernocicepÃÃo. / Himatanthus drasticus is a laticiferous plant of the family Apocynaceae found in South America and popularly known as janaguba. Your latex is known as "janaguba milk" and has several pharmacological activities. This work aimed to study the effect of isolated proteins from Himatanthus drasticus latex (HdLP) zymosan (Zy) induced arthritis. Arthritis was induced in male Swiss mice (n = 6) by administering 0.1 mg Zy intra-articular. The animals were treated with HdLP (5 and 50 mg/kg i.v.) or Saline i.v. 1 hour after the Zy and HdLP (50 mg/kg v.o.) or Dexamethasone (2 mg/kg s.c.) 1 hour before Zy. After six hours of induction the animals were euthanized, the joint washing carried, and collected for leukocyte count, determination of the myeloperoxidase (MPO) activity and inflammatory mediators (NO, TNF-&#945;, IL-1&#946;, IL-6 and IL-10). The edema was evaluated by measuring the diameter articular and the vascular permeabilitym through extravasation. In addition, we evaluated the effect of HdLP on synovial inflammation as well the mechanical hypernociception. For statistical analysis we used the ANOVA/Bonferroni or Kruskal Wallis/Dunns; p <0.05 considered significant. This study was approved by the Ethics Committee on Animal Research of the UFC - CEPA (38/14). HdLP (50 mg/kg i.v.) a significant decrease on the leukocyte count in MPO activity and levels (NO, IL-1&#946;, and IL-6). It was also observed a decrease in swelling and damage to the synovial membrane. The nociceptive threshold was increased by HdLP 50 mg/kg i.v. and 50 mg/kg v.o. HdLP has antinociceptive and anti-inflammatory activity in the model of arthritis induced by Zy. The effect seems to be related to the decreased migration of neutrophils and the release of inflammatory mediators, reducing damage to the synovial membrane and hypernociception.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Os PeptÃdeos NatriurÃticos (NPs) tÃm significativa participaÃÃo na regulaÃÃo na homeostasia cardiovascular, renal e endÃcrina, e tÃm sido descritos nos venenos de serpentes peÃonhentas. A Crotalus durissus cascavella, uma serpente terrÃcola caracterÃstica da caatinga do Nordeste do Brasil, possui em seu veneno total um NP (NPCdc), ao qual sÃo relatados efeitos vasculares e renais. O objetivo desse trabalho foi sintetizar em fase sÃlida o NPCdc e avaliar suas aÃÃes renais atravÃs da perfusÃo de rim isolado e em cultura de cÃlulas tubulares renais da linhagem MDCK e LLC-MK2. Rins de ratos Wistar machos, pesando entre 250-300 g, foram excisados cirurgicamente e perfundidos com soluÃÃo de Krebs-Henseleit modificada com 6% p/v de albumina bovina previamente dialisada. Foram investigados os efeitos do NPCdc em quatro concentraÃÃes (0,03 Âg/mL; 0,1 Âg/mL; 0,3 Âg/mL e 1 Âg/mL; n=6). As cÃlulas MDCK e LLC-MK2 foram cultivadas em meio de cultura RPMI 1640 suplementado com 10% v/v de Soro Bovino Fetal e entÃo avaliadas na presenÃa do NPCdc em diversas concentraÃÃes em um perÃodo de incubaÃÃo de 24 horas. ApÃs esse perÃodo, foram realizados ensaios de viabilidade celular. Os dados foram comparados estatisticamente considerando P<0,05. Houve aumento na pressÃo de perfusÃo (PP) em 0,03 Âg/mL e reduÃÃo em 1 Âg/mL. A resistÃncia vascular renal (RVR) apresentou aumento em 0,03 Âg/mL. O fluxo urinÃrio (FU) aumentou em 0,03 Âg/mL e diminuiu em 0,1 Âg/mL e 1 Âg/mL. O ritmo de filtraÃÃo glomerular (RFG) encontrou-se diminuÃdo nas quatro concentraÃÃes testadas. O clearance osmolar (COsm) apresentou-se aumentado em 0,03 &#956;g/mL e reduzido em 0,1 &#956;g/mL e 1 &#956;g/mL. O percentual de transporte tubular total e proximal de sÃdio (%TNa+ e %TpNa+, respectivamente) e cloreto (%TCl- e %TpCl-, respectivamente) apresentaram reduÃÃes nas quatro concentraÃÃes testadas. JÃ o percentual de transporte tubular total e proximal de potÃssio (%TK+ e %TpK+, respectivamente) apresentaram-se reduzidos em 0,03 &#956;g/mL e 0,3 &#956;g/mL. A anÃlise histopatolÃgica mostrou a presenÃa de alteraÃÃes morfolÃgicas significativas, como degeneraÃÃo hidrÃpica concentraÃÃo-dependente em todas as concentraÃÃes, juntamente com discreta a moderada deposiÃÃo de material proteÃceo nos tÃbulos na concentraÃÃo de 0,03 &#956;g/mL. Na cultura de cÃlulas MDCK e LLC-MK2, porÃm, o NPCdc nÃo foi capaz de diminuir a viabilidade celular. Esses resultados demonstram que o NPCdc modificou todos os parÃmetros avaliados na perfusÃo de rim isolado, alÃm de revelar alteraÃÃes de carÃter citotÃxico na anÃlise histopatolÃgica dos mesmos, todavia, nÃo as apresentando em culturas de cÃlulas tubulares renais. / Natriuretic Peptides (NPs) have significant interest in regulating the cardiovascular, renal and endocrine homeostasis, and have been described in the venom of venomous snakes. Crotalus durissus cascavella, a characteristic terrestrial snake of caatinga biome of northeastern Brazil, has in his whole venom an NP (NPCdc), of which are reported vascular and renal effects. The aim of this study was to synthesize NPCdc in solid phase and evaluate its renal actions through isolated kidney perfusion and culture of renal tubular cells of MDCK and LLC-MK2 line. Kidneys from male Wistar rats weighing 250-300 g were surgically excised and perfused with modified Krebs-Henseleit solution with 6 g% of previously dialyzed bovine serum albumin. The effects of NPCdc were investigated in four concentrations (0.03 &#956;g/mL, 0.1 &#956;g/mL, 0.3 &#956;g/mL and 1 &#956;g/mL, n=6). MDCK and LLC-MK2 cells were cultured in RPMI 1640 culture medium supplemented with 10% v/v Fetal Bovine Serum and then evaluated in presence of several concentrations of NPCdc at an incubation period of 24 hours. After this period, cell viability assays were performed. Data were statistically compared considering P<0.05. There was increase in perfusion pressure (PP) in 0.03 &#956;g/mL and reduction in 1 &#956;g/mL. Renal vascular resistance (RVR) was increased at 0.03 &#956;g/mL. Urinary flow (UF) increased in 0.03 &#956;g/mL and decreased in 0.1 &#956;g/mL and 1 &#956;g/mL. The glomerular filtration rate (GFR) was reduced at all the concentrations tested. Osmolar clearance (OsmC) was increased in 0.03 &#956;g/mL and reduced in 0.1 &#956;g/mL and 1 &#956;g/mL. Percentage of the total and proximal tubular transport of sodium (%TNa+ and %pTNa+, respectively) and chloride (TCl-% and pTCl-%, respectively) showed reductions at all concentrations tested. Percentage of the total proximal tubular transport and potassium (%TK+ and pTK+%, respectively) were reduced in 0.03 &#956;g/mL and 0.3 &#956;g/mL. The histopathological analysis revealed the presence of significant morphological changes, such as concentration-dependent hydropic degeneration at all concentrations, along with mild to moderate deposition of proteinaceous material in the tubules in concentration 0.03 &#956;g/mL. In the culture of MDCK and LLC-MK2 cells, however, NPCdc was not able to lower cell viability. These results demonstrate that NPCdc modified all parameters assessed in renal perfusion of isolated kidney, and showed cytotoxic alterations in histopathological analysis, however, not presenting it in cultures of renal tubular cells.

nÃo hà / Com a cirurgia de catarata moderna realizada em cÃrneas normais, independente da tÃcnica cirÃrgica utilizada, hà uma perda celular endotelial mÃdia de 10 a 20%. SubstÃncias viscoelÃsticas foram desenvolvidas com a funÃÃo de manter os espaÃos naturais do olho e conferir proteÃÃo mecÃnica Ãs estruturas intraoculares durante a cirurgia. O objetivo deste estudo foi realizar uma anÃlise comparativa do efeito de duas formulaÃÃes viscoelÃsticas, metilcelulose a 2% e 4%, na proteÃÃo do endotÃlio corneano contra o dano secundÃrio à facoemulsificaÃÃo. Foi realizado um estudo prospectivo, randomizado e duplo cego com pacientes portadores de catarata senil, submetidos à cirurgia de facoemulsificaÃÃo com Implante de Lente Intraocular (LIO). Todos os pacientes foram submetidos a uma avaliaÃÃo oftalmolÃgica completa, incluindo microscopia especular. ApÃs o exame inicial, os pacientes foram randomizados em dois grupos: no grupo A (n=63) foi utilizada a metilcelulose 2% e no grupo B (n=63) a metilcelulose 4%. A mÃdia da Densidade de CÃlulas Endoteliais (DCE) mostrou-se significativamente reduzida (p<0,05), tanto na anÃlise intra como na intergrupo no 1Â, 15 e 30 dias de pÃs-operatÃrio, representando uma perda de cÃlulas endoteliais de 15,26% e 6,79% nos grupos A e B, respectivamente. A Espessura Central da CÃrnea (ECC) mostrou-se aumentada no 1 dia pÃs operatÃrio (DPO) no grupo A, sendo este dado estatisticamente significante (p<0,05). Houve aumento no Coeficiente de VariaÃÃo da tamanho celular (CV) e diminuiÃÃo no Percentual de CÃlulas Hexagonais (6 A), no entanto, sem significÃncia estatÃstica para esses dois parÃmetros. ConcluÃmos que, à despeito das vantagens da metilcelulose a 4% em relaÃÃo à diminuiÃÃo de perdas de cÃlulas endoteliais apÃs facoemulsificaÃÃo, ambos os viscoelÃsticos sÃo semelhantes em relaÃÃo a parÃmetros clÃnicos como ECC, CV e 6A, os quais refletem a manutenÃÃo de condiÃÃes fisiologicamente adequadas para o bom funcionamento do endotÃlio. No entanto, devido à pequena diferenÃa de custo entre os dois produtos e os benefÃcios da metilcelulose 4%, esta pode ser considerada um produto de escolha em cirurgias de catarata de rotina, uma vez que as indicaÃÃes de facoemulsificaÃÃo estÃo sendo cada vez mais precoces, devido Ãs exigÃncias visuais dos pacientes, promovendo, desta forma, cÃrneas mais saudÃveis por longo prazo. / Modern cataract surgery in normal corneas, independent of the surgical technique used, causes a mean 10 to 20% loss of endothelial cells. Viscoelastic substances were developed with the function of maintaining the natural spaces of the eye and providing mechanical protection to the intraocular structures during surgery. The objective of this study was to perform a comparative analysis of the effect of two viscoelastic compositions, methylcellulose 2% and 4%, in corneal endothelial protection against secondary damage to the phacoemulsification procedure. We performed a prospective, randomized, double-blind study with senile cataract patients, submitted to phacoemulsification surgery with intraocular lens (IOL) implant. All patients were submitted to a complete ophthalmological assessment, including specular microscopy. After initial assessment, the patients were randomized into two groups: in Group A (n=63) we used methylcellulose 2%, and in Group B (n=63) methylcellulose 4%. There was no statistically significant difference for the parameters analyzed between groups before surgery. However, at 30 days after surgery, mean density of endothelial cells (DCE) was 2128.78Â277.55 cells/mm in Group A and 2395.79Â262.16 cells/mm in Group B, representing a 15.15 and 6.76% loss of endothelial cells in Groups A and B, respectively. Mean DCE was significantly reduced (p<0.05), in both the inter- and inter-group analysis on the 1st, 15th, and 30th day after surgery. ECC increased on the 1st day after surgery in group A, this datum was statistically significant (p<0.05). There was no statistical difference for the other parameters assessed. In this study, we conclude that, despite the advantages of methylcellulose 4% over 2% in regards to the reduction of endothelial cell loss after phacoemulsification, both viscoelastic substances are similar in relation to clinical parameters such as central corneal thickness, coefficient of variation in cell size and percentage of hexagonal cells, which reflect corneal preservation and maintain adequate physiological conditions for proper endothelial function. However, due to the slight difference in cost between the two products and the benefits of methylcellulose 4% on endothelial cell preservation, this may be considered a choice product in routine cataract surgery, as indications for phacoemulsification are increasingly early, due to patientsâ visual demands, promoting, in this manner, healthier corneas in the long term.

Nos últimos anos, o ambiente marinho tem sido pesquisado para uma variedade de compostos com diferentes atividades biológicas. Entre todos os organismos marinhos, as esponjas representam uma das fontes mais promissoras de novas drogas contra o câncer. Embora o litoral brasileiro seja o segundo mais extenso depois da Austrália, existem poucos estudos com esponjas marinhas coletadas no Brasil objetivando a descoberta de novos fármacos. Nesse trabalho, nós investigamos os efeitos de diferentes extratos da esponja marinha Polymastia janeirensis na viabilidade de uma linhagem de glioma humano (U138MG). Além disso, avaliamos a seletividade do efeito, caracterizamos os mecanismos envolvidos no processo de morte celular e isolamos as frações ativas responsáveis pelas atividades encontradas. De uma maneira geral, um efeito antiproliferativo foi observado quando as células forma expostas aos extratos (aquoso e orgânico) da esponja. Entretanto, as doses mais altas (50 e 100 μg/ml) foram extremamente citotóxicas, inibindo mais de 80% a proliferação e a viabilidade celular. Além disso, uma morte celular por necrose foi observada com essas doses, enquanto uma morte celular por apoptose foi observada com a dose mais baixa (10 μg/ml). Nós também demonstramos que a rota apoptótica ativada em resposta aos extratos era a via intrínseca, e que a produção de radicais livres estava, pelo menos em parte, relacionada ao efeito bifásico (apoptose ou necrose) encontrado. Os resultados aqui apresentados demonstram a existência de uma seletividade do efeito citotóxico, uma vez que os extratos não induziram morte em culturas de astrócitos na dose em que foi observada morte por apoptose nos gliomas. Ademais, uma potente atividade apoptótica foi observada com o composto ativo isolado da esponja marinha alvo desse estudo. Os nossos resultados sugerem que a esponja marinha alvo desse estudo pode ser considerada uma boa fonte para o desenvolvimento de novas drogas contra o câncer. / Over the last years, the marine environment has been screened for a variety of compounds with different biological activities. Among all marine organisms, sponges represent one of the most promising source of new drug leads for cancer. Although Brazil has the second most extensive coastline after Australia, there are just few reports in which the authors have screened Brazilian sponge extracts for biological activities. In this work, we examine the anti-proliferative effects of crude extracts of the marine sponge Polymastia janeirensis in the U138MG human glioma cell line. Moreover, we investigate the effects on selective cytotoxicity in the glioma cells in comparison with a normal, untransformed cell culture, as well as examine the apoptotic pathway activated in response to treatments with extracts of P. janeirensis. Yet, we performed a bioassayguided fractionation to found the active fractions in the extracts. Exposure of glioma cells to treatments resulted in cell number decrease with both aqueous and organic extracts. Moreover, sponge extracts reduced glioma cell viability. However, higher doses (50 e 100 μg/ml) induced a stronger cytotoxic effect when compared to the lower dose tested (10 μg/ml), inhibiting more than 80% of cellular growth and viability. Our results showed that sponge extracts caused necrosis in the glioma cell line at higher doses, while a high percentage of apoptotic glioma cells were observed at 10 μg/ml. We also demonstrated that marine sponge extracts induces oxidative cell death through a receptor-independent pathway under our assays condictions, and ROS productions may be related to the biphasic effect (apoptosis or necrosis) observed. Furthermore, our results suggested a selective cytotoxic effect on glioma cell line compared to a normal cell culture, since the effect on viability found in glioma cells was not observed in astrocyte cultures with the lower dose (10 μg/ml). Yet, a strong apoptotic activity was observed with the active fraction isolated from P. janeirensis. Our results suggest that this marine sponge may be considered a good source for new antiglioma metabolites.

Orientadores: Marcos Dias Fontana, Maria Alice da Cruz-Hofling / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-26T15:39:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Serafim_FrancineGonzaga_M.pdf: 4224320 bytes, checksum: 6a88dc7a6201661e92cad25dc5ea78fe (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A serpente Micrurus dumerilii carinicauda (Md.carinicauda) é uma espécie de coral, encontrada do Norte de Santander, região nordeste da Colômbia, atravessa a Bacia do Maracaibo e estende-se até Caracas no Estado de Miranda, na Venezuela. Pouco se conhece sobre o modo de ação do veneno desta espécie de Micrurus, que contém uma variedade de neurotoxinas e miotoxinas. Neste trabalho, o veneno de M d. carinicauda induziu bloqueio neuromuscular nas preparações nervo frênico-diafragma de rato e biventer cervicis de pintainho. Em ambas as preparações, o veneno (5 ~g!ml) não deprimiu a resposta contrátil evocada pela estimulação elétrica direta. A Neo (5,8 ~) e a 3,4-DAP (230~) antagonizaram, parcialmente, efeito bloqueador neuro~uscular produzido pelo veneno (5, 10 e 20 ~gIml) nas preparações nervo frênico-diafragma de rato, enquanto a~ sucessivas lavagens da preparação com Tyrode foram ineficazes na tentativa de reverter o bloqueio neurotnuscular induzido pelo veneno. Tais resultados sugerem uma ação do veneno nos receptores colinérgicos nicotínicos pós-sinápticos. As contraturas induzidas pela adição de acetilcolina (ACh; 15 J..IM) tanto no diafragma desnervado como no biventer cervicis de pintainho (ACh; 37 tJM) foram inibidas pela ação do veneno (5 J..1g1ml), mas a contratura evocada pela adição do KCI (134 tJM) não foi deprimida. Sugerindo mais uma vez, que a ação do veneno ocorre nos receptores colinérgicos nicotínicos e que não possui ação sobre a fibra muscular, nesta dose estudada. Esta hipótese foi confirmada com o estudo dos potenciais bioelétricos. O veneno, na dose de 5 /-lg/ml, produziu um progressivo decréscimo na amplitude e freqüência dos potenciais de placa terminal em miniatura (pptm) até seu bloqueio completo. A Neo e a 3,4-DAP foram capazes de reverter totalmente o bloqueio dos pptm, sugerindo assim que a ação do veneno (5 /-lg/ml) ocorra pós sinapticamente. O estudo do potencial de membrana mostrou que o veneno (5 /-lg/ml) não possui ação despolarizante sobre a fibra muscular do diafragma de rato, embora os estudos morfológicos tenham demonstrado que este possui ação miotóxica já com esta dose. A dissociação dos efeitos miotóxicos dos efeitos farmacológicos está relacionado com o número de fibras musculares que permaneceram íntegras. O efeito miotóxico do veneno, na preparação nervo frênico-diafragma de rato, mostrou ser dose-dependente. Estudos histológicos e ultra-estruturais mostraram que nas doses de 5 e 10 /-lg/ml o veneno induziu miotoxicidade e, esta foi mais evidente com a dose de 10 /-lg/ml, afetando a integridade do sarcolema de numerosas fibras musculares e produziu desorganização dos sarcômeros e ainda condensação dos miofilamentos. Nestas mesmas doses, o veneno também causou alterações ultra-estruturais sobre a junção neuromuscular, dentre as quais a bipartição do terminal nervoso e invaginação dos processos da célula de Schwann, alterações topológicas na distribuição das vesículas sinápticas, bem como a presença de mitocôndrias degeneradas e indentações ômega, formando pequenas invaginações no axolema. Em conclusão, os resultados sugerem que o veneno induz miotoxicidade nas preparações estudadas, mas o efeito predominante do ocorre nos receptores colinérgicos nicotínicos pós-sinápticos / Abstract: The effects of the venom of Micrurus dumerilii carinicauda (M d. carinicauda), a coral snake restricted to north of South America (Venezuela and Colombia), was studied in mammal (rat hemidiaphragm) and avian (chick biventer cervicis) muscle preparations by pharmacological and morphological approaches. The venom induced neuromuscular blockade in the rat phrenic nerve-diaphragm preparation and on the chick biventer cervicis nerve-muscle preparation. Neostigmine (Neo) and 3,4-Diaminopyridine (3,4-DAP), antagonize partially the effect of the venom on the neuromuscular transmission in the rat nerve-diaphragm. Either in rat phrenic nerve~diaphragm preparation as well as on the chick biventer cervicis nerve-muscle preparation, the venom does not depress the twitch response elicited by direct muscle stimulation. The contractures induced by acetylcholine (ACh) .in the denervated rat hemidiaphragm and in the chick biventer cervicis are inhibited by the venom. This fmdings - suggests that the main cause of the neuromuscular blockade is due to a post synaptic action on the nicotinic receptors. It is corroborated by our findings on the bioelectrical potentials where Ju. d. carinicauda venom (5 ~g/m1) produced a progressive decrease in the amplitude of the miniature end-plate potentials until these were abolished. Neo (5.8 ~M) and 3,4-DAP (230 ~M) antagonized this blocked effect on neuromuscular transmission and fully prevented the venom-induced blockade of m.e.p.p.s These results indicates that M d. carinicauda venom produces neuromuscular blockade mainly by apost synaptic action. M d. carinicauda venom (5 ~g/ml) had no effect on the resting membrane potential and had no effects on the muscle contractile response under direct stímulation. Our fmdings also shown that this venom (5 or 10 Jlg/ml) induces pronounced myotoxicity (1 °Jlg/ml), affecting in a number of fibers the sarcolemma integrity and producing sarcomere disorganization and clumping of myofllaments. This effect though seems to have little influence on the neuromuscular-inducing effect, since even with 20 Jlg/ml of the venom there is no change in the muscle contractile response under direct stimulation. In parallel, Md.carinicauda venom produced adose-dependent morphological change on the mammal preparation. In addition the higher the dose the more frequent the presence of multiple zones of closely-massed myofibrils in diaphragm preparation. In biventer cervicis, changes have a slow onset and were greatly characterized by undulation of fibers and rarely by collapsing zones of myofibrils by the end of the incubation period. In this work, also was observed, that the most markedy morphological changes related was related to bipartition of the presynaptic elements with invagination of the Schwann cell processes. Furthermore, was observed topological ) / Mestrado / Mestre em Farmacologia