Neste trabalho foram estudados os perfis renal, hepático, energético, hormonal e de proteínas de fase aguda (proteinograma) para avaliar possíveis interações com o desempenho reprodutivo em bovinos. Para isso, foram delineados três experimentos. No experimento 1 o objetivo foi verificar se a inseminação artificial (IA) causa alterações nos perfis renal, hepático, energético, hormonal e de proteínas de fase aguda e estudar as relações entre esses perfis e a hemodinâmica uterina. Foram utilizadas amostras de sangue de vacas Nelore que foram inseminadas (GIA, n=9) ou não (GC, n=9). As amostras foram coletadas 30 horas antes da IA, 4, 24, 48 e 168 horas após a IA. No experimento 2 o objetivo foi estudar os efeitos da qualidade do sêmen sobre o perfil hepático e proteinograma, e estudar a relação dos perfis renal, hepático, energético, hormonal e proteinograma sobre a vascularização uterina. Foram utilizadas amostras sanguíneas de 362 vacas, que foram divididas em três grupos experimentais de acordo com a qualidade do sêmen: Boa (n=121), Média (n=121) e Regular (n=120). As amostras foram coletadas 30 horas antes da IA, 4 e 24 horas após a IA. Por fim, o experimento 3 é um estudo retrospectivo, realizado com o objetivo de comparar os perfis renal, hepático, energético, hormonal, e proteínas de fase aguda entre animais prenhes e vazios após a IA, e verificar se há relação entre a hemodinâmica uterina e a fertilidade. Neste experimento, os animais foram divididos em dois grupos experimentais de acordo com o resultado da IA (prenhe, n=76 X vazia, n=45). Em todos os experimentos, nos mesmos momentos da coleta de sangue, foram realizadas avaliações ultrassonográficas do útero no modo color Doppler e espectral. As amostras dos experimentos 1, 2 e 3 foram submetidas à quantificação das proteínas de fase aguda e dos componentes metabólicos utilizando analisador bioquímico automático (RX Daytona) e à dosagem hormonal, pela técnica de radioimunoensaio. Os dados foram analisados pelo PROC MIXED (SAS, versão 9.2, 2010). Foram consideradas diferenças estatísticas quando P<0,05. No experimento 1, os grupos não diferiram quanto aos perfis renal, hepático, energético, hormonal e proteinograma, no entanto, o RI apresentou correlações positivas com AST e BHB e correlação negativa com estradiol. O estradiol também foi correlacionado com EV, entretanto essa correlação foi positiva. No experimento 2, os animais inseminados com sêmen B, M ou R apresentaram concentrações semelhantes das variáveis do perfil hepático e proteínograma. O RI foi correlacionado positivamente com colesterol, HDL, LDL, e progesterona, e negativamente com glicose, estradiol, albumina e proteína total. Já o EV apresentou correlações negativas com ureia, GGT e cortisol. No experimento 3, os grupos Vazio e Prenhe foram semelhantes quanto aos perfis renal, hepático, energético, hormonal, proteiograma e hemodinâmica uterina. Sendo assim, conclui-se que o processo da IA e a qualidade do sêmen utilizado não causam alterações sistêmicas, bem como a fertilidade não pode ser explicada por estas alterações. Adicionalmente, a hemodinâmica uterina é correlacionada com diversos parâmetros, no entanto, o padrão vascular do útero não mostrou relação com a fertilidade / In this study, were evaluated kidney, liver, energy, hormonal and acute phase proteins profiles to evaluate the possible interactions with the reproductive performance in cattle. For this, three experiments were designed. In experiment 1 the objective was to verify if artificial insemination (AI) causes changes in renal, liver, energetic, hormonal and acute phase proteins profiles and to study the relationship between these profiles and uterine hemodynamics. Blood samples from inseminated (GIA, n = 9) or non inseminated Nellore cows (CG, n = 9) were used. Samples were collected 30 hours before AI, 4, 24, 48 and 168 hours after AI. In experiment 2 the objective was to study the effects of semen quality on liver and protein profiles and study the relationship of renal, liver, energetic, hormonal and protein profiles on uterine vascularization. Blood samples of 362 cows were used, which were divided into three groups according to semen quality: Good (n = 121), medium (n = 121) and Regular (n = 1200. Samples were collected 30 hours before AI, 4 and 24 hours after AI. Finally, experiment 3 is a retrospective study, carried out in order to compare the renal, liver, energetic, hormonal, and acute phase proteins profiles between pregnant and non pregnant animals after AI, and check for relationship between uterine hemodynamics and fertility. In this experiment, animals were divided into two groups according to the result of AI (pregnant, n = 76 and non pregnant, n = 45). In all experiments, at the same time of blood sampling were performed sonographic evaluations of the uterus in color Doppler and spectral mode. The samples of experiments 1, 2 and 3 were subjected to quantification of acute phase proteins and metabolic components using automatic biochemical analyzer (RX Daytona) and to hormone dosage, by radioimmunoassay. Data were analyzed using PROC MIXED (SAS, version 9.2, 2010). Statistics differences were considered when P<0,05. In experiment 1, the groups did not differ about kidney, liver, energetic, hormonal and protein profiles, however, the RI showed positive correlations with AST and BHB and negative correlation with estradiol. Estradiol was also correlated with EV, however this correlation was positive. In experiment 2, the animals inseminated with semen B, M or R showed similar concentrations of the variables of liver and proteinogram profiles. The RI was positively correlated with cholesterol, HDL, LDL, and progesterone, and negatively with glucose, estradiol, albumin and total protein. EV showed negative correlations with urea, GGT and cortisol. In Experiment 3, the non pregnant and pregnant groups were similar about kidney, liver, energetic, hormonal, proteiogram profiles and uterine hemodynamics. Thus, in this study were not observed systemic changes caused by AI process and by quality of semen, and systemic differences did not notice is between non pregnant and pregnant animals. Additionally, uterine hemodynamic is correlated with various parameters, however, the vascular pattern of the uterus was not correlated with fertility

O presente estudo avaliou a dinâmica da onfalite, diarreia e Doença Respiratória Bovina (DRB), além do comportamento da haptoglobina (Hp) em bezerras Holandesas nos primeiros 41 dias de vida. Ainda, foi possível determinar os parâmetros de performance da Hp frente à detecção de doenças. Para tanto, foram avaliadas 216 bezerras nos momentos D2-6; D7-13; D14-20; D21-27 e D31-41. A haptoglobina (Hp) foi mensurada por técnica espectrofotométrica, enquanto a sanidade das bezerras foi avaliada segundo o Calf Health Scoring Criteria, da University of Wisconsin Madison. A diarreia foi monitorada pela avaliação da consistência das fezes, sendo adotada a seguinte classificação: escore 0 fezes com consistência normal; escore 1- fezes pastosas e semi-formada; escore 2- fezes pastosas com maior quantidade de água e conteúdo fecal aderido ao períneo e cauda; escore 3- fezes líquidas com conteúdo fecal aderido no períneo e cauda. Escores 2 e 3 foram considerados positivos para diarreia. A matéria seca das fezes também foi determinada para avaliação da saúde intestinal, sendo os animais com valores ≤15% classificados como positivos para diarreia. A DRB foi determinada adotando-se os seguintes parâmetros: tosse, secreção nasal, secreção ocular, posicionamento de orelhas e temperatura corpórea, sendo pontuados de 0 a 3 de acordo com a intensidade da sintomatologia. Soma das pontuações escore ≥5 foi adotada para classificar os animais positivos para DRB. As onfalites foram determinadas pela inspeção e palpação das estruturas umbilicais externas. O período de maior prevalência da onfalite foi no D7-13 (8,8%; 19/216), seguida pelas diarreias no D14-20 (42,9%; 76/177) e DRB no D31-41 (26,4%; 55/208). A média da concentração de Hp durante o experimento foi de 0,03±0,05 g/L, com valores mínimo e máximo de 0,00 e 0,52 g/L, respectivamente. Os picos de haptoglobina foram detectados nos momentos D7-13 (0,04±0,07) e D14-20 (0,04±0,05 g/L). Em relação às diarreias (escore fecal 2 e 3), a Hp apresentou sensibilidade de 56,9% e especificidade 74,07%, sendo o ponto de corte estabelecido equivalente a 0,02 g/L. Resultados semelhantes foram observados para diarreias determinadas pelo teor de matéria seca: sensibilidade 58,1; especificidade 76,2; e ponto de corte 0,02 g/L. Em relação a DRB, a sensibilidade e especificidade foi de 72,7 e 81,2%, respectivamente, quando utilizado a soma do escore respiratório≥ 5 associado à temperatura retal >39,5ºC, com ponto de corte de 0,02 g/L. O ciclo de doenças foi caracterizado cronologicamente pelas onfalites, diarreias e DRB nos primeiros 41 dias de vida. A haptoglobina pode ser usada como biomarcador para a detecção da DRB. Por outro lado, a proteína apresentou baixa sensibilidade para detecção de diarreia usando dois padrões-ouro. / This research evaluated the dynamic of navel inflammation, diarrhea and Bovine Respiratory Disease (BRD), besides the haptoglobin (Hp) profile in Holstein heifers in the first 41 days of life. Moreover, it was possible to determine the development of haptoglobin to detect diseases. For this, it was evaluated 216 Holstein heifers in the following moments D2-6; D7-13; D14-20; D21-27 e D31-41. Haptoglobin was measured using spectrophotometric, and the health status of calves were assessed in accordance with the Calf Health Scoring Criteria from The University of Wisconsin (Madison). Diarrhea was monitored according to fecal consistency, using the following classification: score 0- normal consistency, score 1- pasty, semi-formed, score 2- pasty with largest amount of water, score 3- liquid with fecal content adhered in the perineum and tail. Calves were assessed having diarrhea when the score were 2 or 3. Fecal dry matter also was determined to evaluate the gut health, so animals with values ≤15% were classified such as positive for diarrhea. BRD was assessed using the following parameters: rectal temperature, nasal secretion, ocular secretion, cough and ear/head position with score of 0-3 based on severity of each. Calves were assessed having BRD when the sum of these scores was ≥5. Omphalitis was evaluated by inspection and palpation of navel external structures. The highest prevalence of omphalitis was observed on D7-D13 (8.8%; 19/216), followed diarrhea on D14-D20 (42.9%, 76/177) and BRD on D31-D41 (26.4%; 55/208). The mean of Hp along this research was 0.03±0.05 g/L, with minimum and maximum values of 0.00 e 0.52 g/L, respectively. The peak of haptoglobin was detected on D7-13 (0.04±0.07) e D14-20 (0.04±0.05 g/L). In relation to diarrhea (fecal score 2 and 3), the haptoglobin had sensibility of 56.9% and specificity of 74.07%, and the cut-off established was 0.02 g/L. Similar results was observed for diarrhea determined using fecal dry matter: sensibility of 58.1; specificity of 76.2; and cut-off of 0.02 g/L. In relation to BRD, sensibility and specificity detected was 72.7 and 81.2%, respectively, when the sum of score was ≥5 associated with rectal temperature >39.5ºC, with cut-off equal 0.02 g/L. The cycle of diseases was characterized by omphalitis, diarrhea and BRD in the first 41 days of life. Haptoglobin can be used as a biomarker to detect BRD. On the other hand, this protein had low sensibility to detect diarrhea using two gold standard.

Neste trabalho foram estudados os perfis renal, hepático, energético, hormonal e de proteínas de fase aguda (proteinograma) para avaliar possíveis interações com o desempenho reprodutivo em bovinos. Para isso, foram delineados três experimentos. No experimento 1 o objetivo foi verificar se a inseminação artificial (IA) causa alterações nos perfis renal, hepático, energético, hormonal e de proteínas de fase aguda e estudar as relações entre esses perfis e a hemodinâmica uterina. Foram utilizadas amostras de sangue de vacas Nelore que foram inseminadas (GIA, n=9) ou não (GC, n=9). As amostras foram coletadas 30 horas antes da IA, 4, 24, 48 e 168 horas após a IA. No experimento 2 o objetivo foi estudar os efeitos da qualidade do sêmen sobre o perfil hepático e proteinograma, e estudar a relação dos perfis renal, hepático, energético, hormonal e proteinograma sobre a vascularização uterina. Foram utilizadas amostras sanguíneas de 362 vacas, que foram divididas em três grupos experimentais de acordo com a qualidade do sêmen: Boa (n=121), Média (n=121) e Regular (n=120). As amostras foram coletadas 30 horas antes da IA, 4 e 24 horas após a IA. Por fim, o experimento 3 é um estudo retrospectivo, realizado com o objetivo de comparar os perfis renal, hepático, energético, hormonal, e proteínas de fase aguda entre animais prenhes e vazios após a IA, e verificar se há relação entre a hemodinâmica uterina e a fertilidade. Neste experimento, os animais foram divididos em dois grupos experimentais de acordo com o resultado da IA (prenhe, n=76 X vazia, n=45). Em todos os experimentos, nos mesmos momentos da coleta de sangue, foram realizadas avaliações ultrassonográficas do útero no modo color Doppler e espectral. As amostras dos experimentos 1, 2 e 3 foram submetidas à quantificação das proteínas de fase aguda e dos componentes metabólicos utilizando analisador bioquímico automático (RX Daytona) e à dosagem hormonal, pela técnica de radioimunoensaio. Os dados foram analisados pelo PROC MIXED (SAS, versão 9.2, 2010). Foram consideradas diferenças estatísticas quando P<0,05. No experimento 1, os grupos não diferiram quanto aos perfis renal, hepático, energético, hormonal e proteinograma, no entanto, o RI apresentou correlações positivas com AST e BHB e correlação negativa com estradiol. O estradiol também foi correlacionado com EV, entretanto essa correlação foi positiva. No experimento 2, os animais inseminados com sêmen B, M ou R apresentaram concentrações semelhantes das variáveis do perfil hepático e proteínograma. O RI foi correlacionado positivamente com colesterol, HDL, LDL, e progesterona, e negativamente com glicose, estradiol, albumina e proteína total. Já o EV apresentou correlações negativas com ureia, GGT e cortisol. No experimento 3, os grupos Vazio e Prenhe foram semelhantes quanto aos perfis renal, hepático, energético, hormonal, proteiograma e hemodinâmica uterina. Sendo assim, conclui-se que o processo da IA e a qualidade do sêmen utilizado não causam alterações sistêmicas, bem como a fertilidade não pode ser explicada por estas alterações. Adicionalmente, a hemodinâmica uterina é correlacionada com diversos parâmetros, no entanto, o padrão vascular do útero não mostrou relação com a fertilidade / In this study, were evaluated kidney, liver, energy, hormonal and acute phase proteins profiles to evaluate the possible interactions with the reproductive performance in cattle. For this, three experiments were designed. In experiment 1 the objective was to verify if artificial insemination (AI) causes changes in renal, liver, energetic, hormonal and acute phase proteins profiles and to study the relationship between these profiles and uterine hemodynamics. Blood samples from inseminated (GIA, n = 9) or non inseminated Nellore cows (CG, n = 9) were used. Samples were collected 30 hours before AI, 4, 24, 48 and 168 hours after AI. In experiment 2 the objective was to study the effects of semen quality on liver and protein profiles and study the relationship of renal, liver, energetic, hormonal and protein profiles on uterine vascularization. Blood samples of 362 cows were used, which were divided into three groups according to semen quality: Good (n = 121), medium (n = 121) and Regular (n = 1200. Samples were collected 30 hours before AI, 4 and 24 hours after AI. Finally, experiment 3 is a retrospective study, carried out in order to compare the renal, liver, energetic, hormonal, and acute phase proteins profiles between pregnant and non pregnant animals after AI, and check for relationship between uterine hemodynamics and fertility. In this experiment, animals were divided into two groups according to the result of AI (pregnant, n = 76 and non pregnant, n = 45). In all experiments, at the same time of blood sampling were performed sonographic evaluations of the uterus in color Doppler and spectral mode. The samples of experiments 1, 2 and 3 were subjected to quantification of acute phase proteins and metabolic components using automatic biochemical analyzer (RX Daytona) and to hormone dosage, by radioimmunoassay. Data were analyzed using PROC MIXED (SAS, version 9.2, 2010). Statistics differences were considered when P<0,05. In experiment 1, the groups did not differ about kidney, liver, energetic, hormonal and protein profiles, however, the RI showed positive correlations with AST and BHB and negative correlation with estradiol. Estradiol was also correlated with EV, however this correlation was positive. In experiment 2, the animals inseminated with semen B, M or R showed similar concentrations of the variables of liver and proteinogram profiles. The RI was positively correlated with cholesterol, HDL, LDL, and progesterone, and negatively with glucose, estradiol, albumin and total protein. EV showed negative correlations with urea, GGT and cortisol. In Experiment 3, the non pregnant and pregnant groups were similar about kidney, liver, energetic, hormonal, proteiogram profiles and uterine hemodynamics. Thus, in this study were not observed systemic changes caused by AI process and by quality of semen, and systemic differences did not notice is between non pregnant and pregnant animals. Additionally, uterine hemodynamic is correlated with various parameters, however, the vascular pattern of the uterus was not correlated with fertility

Submitted by Socorro Pontes (socorrop@ufersa.edu.br) on 2017-04-27T13:18:30Z No. of bitstreams: 1 IsabellaOB_TESE.pdf: 902178 bytes, checksum: d42880aee64b712a238f040f4408a579 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-05-02T15:22:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 IsabellaOB_TESE.pdf: 902178 bytes, checksum: d42880aee64b712a238f040f4408a579 (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Christiane (referencia@ufersa.edu.br) on 2017-05-02T15:23:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 IsabellaOB_TESE.pdf: 902178 bytes, checksum: d42880aee64b712a238f040f4408a579 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-02T15:23:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 IsabellaOB_TESE.pdf: 902178 bytes, checksum: d42880aee64b712a238f040f4408a579 (MD5) Previous issue date: 2016-10-31 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Acute phase proteins are glycoproteins produced by hepatocytes and released into the bloodstream in response to tissue damage resulting from acute inflammatory processes. Currently, they are considered biomarkers of inflammation or infection, compared with other variables such as hyperthermia, leukocytosis and neutrophilia, but in donkeys have not yet been analyzed. This study aimed to evaluate acute inflammatory response in donkeys submitted to ovariectomy by two different approaches. We randomly selected 18 adult females animals weighing on average 100 kg, which were divided into two groups: Group I, 9 animals were ovariectomized by laparotomy and group II, 9 animals by laparoscopy. After the surgeries were evaluated the following variables in whole blood: blood count, white blood cell count differential cell count, fibrinogen, haptoglobin, albumin, antitrypsin, alpha-1-acid glycoprotein, ceruloplasmin, transferrin, immunoglobulins A and G (acute phase proteins) . In the same time, the peritoneal fluid were measured: number of erythrocytes and leukocytes, cytological analysis differential (leukocytes and mesothelial cells), total protein, pH and acute phase proteins. All variables were analyzed before surgery, 12, 24, 48, 72 hours, 8 and 16 days after surgery. There was an increase (p <0.05) in the number of leukocytes with neutrophilia after surgery, regardless of the surgical serum and peritoneal procedure. Acute phase proteins had different behaviors in blood and peritoneal fluid. For the first time, we identified a P23.000kD protein in serum and peritoneal samples in donkeys. The interest on the role of acute phase proteins in the veterinary medicine, particularly in horses is growing, mainly aiming to use them as early markers of inflammation / Proteínas de fase aguda são glicoproteínas produzidas pelos hepatócitos e liberadas na corrente sanguínea em resposta a dano tecidual, decorrente de processos inflamatórios agudos. Atualmente, são consideradas biomarcadores da resposta inflamatória e infecciosa, quando comparada com outras variáveis como hipertermia, leucocitose e neutrofilia, porém em asininos ainda não foram bem analisadas. Objetivou-se avaliar resposta inflamatória aguda em asininos submetidos à ovariectomia por duas diferentes abordagens. Foram utilizados 18 animais, fêmeas adultas, pesando em média 100 kg, as quais foram divididas em dois grupos, de 09 animais cada, onde grupo I, foram ovariectomizadas por laparotomia e o grupo II por laparoscopia. Após as cirurgias foram avaliadas as seguintes variáveis no sangue total: hemograma, fibrinogênio, haptoglobina, albumina, antitripsina, alfa-1 glicoproteína ácida, ceruloplasmina, transferrina, imunoglobulinas A e G. Nos mesmos momentos, no líquido peritoneal, foram mensuradas: número de hemácias e leucócitos, análise citológica diferencial (leucócitos e células mesoteliais), proteínas totais, pH e proteínas de fase aguda. Todas as variáveis foram analisadas antes das cirurgias, 12, 24, 48, 72 horas, 8 e 16 dias após os procedimentos cirúrgicos. Houve um aumento (p<0,05) do número de leucócitos com neutrofilia após as cirurgias, independente do procedimento cirúrgico, no soro e líquido peritoneal. As proteínas de fase aguda tiveram comportamentos diferentes no sangue e líquido peritoneal. Neste trabalho identificamos, pela primeira vez, a proteína P23.000kD no soro e amostras peritoneais de asininos. O interesse sobre o papel das proteínas de fase aguda na medicina veterinária, em especial em equídeos vem crescendo, principalmente, visando utilizá-las como marcadores precoces do processo inflamatório / 2017-04-26

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-10-11T18:05:38Z No. of bitstreams: 1 ailin_l_oliveira_ioc_bcm_0048_2011.pdf: 2784238 bytes, checksum: 109591f3b041c2482398b825d1bb7d51 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-11T18:05:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ailin_l_oliveira_ioc_bcm_0048_2011.pdf: 2784238 bytes, checksum: 109591f3b041c2482398b825d1bb7d51 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Pesquisa sobre o Timo. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / No curso das doenças infecciosas, os circuitos neuroendócrinos e imunes atuam em conjunto facilitando a resposta do hospedeiro. Alterações no eixo hipotálamo-hipófise- adrenal são frequentemente associadas a infecções, como as causadas pelo Trypanosoma cruzi, o agente etiológico da doença de Chagas. Durante a fase aguda da infecção por T. cruzi, a ação pró-apoptótica de glicocorticóides (GC), sistemicamente aumentados, sobre timócitos CD4+CD8+ (DP), resulta em atrofia tímica. Recentemente, nosso grupo demonstrou expressão alterada de prolactina (PRL), um outro hormônio relacionado ao estresse, durante a infecção por T. cruzi. Com base no conhecimento das ações imunomoduladoras de PRL, como a proteção de timócitos da apoptose induzida por GC, pretendemos no presente estudo investigar uma possível função da ativação cruzada entre os receptores intratímicos de PRL e GC (PRLR e GR, respectivamente) no desencadeamento da atrofia tímica induzida por T. cruzi. Observamos um circuito intratímico específico de modulação de ambos os hormônios durante a infecção experimental por T. cruzi em camundongos adultos jovens. Enquanto os níveis plasmáticos de PRL e GC apresentaram-se aumentados no início da fase aguda da infecção, quando o processo de atrofia tímica é instaurado, os níveis intratímicos desses hormônios diminuíram, restabelecendo-se posteriormente aos níveis fisiológicos do controle não-infectado. Paralelamente, variações da expressão intratímica de PRLR e GR, ocorreram em acordo com a modulação local de seus ligantes. No início do processo de atrofia tímica, quando muitas células DP estão entrando em apoptose, observamos aumento da expressão de GR e diminuição de PRLR. Em um segundo momento, durante a fase mais tardia da infecção experimental por T. cruzi, houve restabelecimento da expressão gênica de ambos os receptores nessas células. Nessa fase, quando o processo de morte celular encontra-se estabilizado e somente algumas células aparentemente mais resistentes à ação pró-apoptótica de GC sobreviveram, observamos aumento da proteína Bcl-xl, um importante fator anti apoptótico induzido por PRL. Em acordo com esses achados, utilizando-se um modelo de indução de apoptose in vitro, verificamos maior Suscetibilidade de timócitos à morte induzida por GC nos períodos iniciais da infecção, bem como aos efeitos protetores de PRL, o que não foi observado na fase mais tardia da infecção. Tomados em conjunto, nossos dados apontam para uma função cruzada (cross-talk) entre PRLR e GR intratímicos, e que seria responsável pela manutenção da homeostasia tímica. Nesse sentido, alterações desse circuito podem contribuir para o processo de atrofia tímica característico da fase aguda da infecção pelo T. cruzi. / During infectious diseases, neuroendocrine and immune networks act in concert, facilitating host response. Disorders in the hypothalamic-pituitary-adrenal axis are frequently observed associated to infections. It has been demonstrated that increased level of circulating glucocorticoids (GC) systemic levels during the acute phase of Trypanosoma cruzi infection, the etiological agent of Chaga ́s disease, results in thymus atrophy. Such steroid can trigger apoptosis on cortical thymocytes bearing the phenotype CD4+CD8+ (DP) via a specific glucocorticoid receptor (GR). Changes in thymocyte development may have an important consequence for the disease, i.e., further autoimmune reactions. Recently our group demonstrated altered expression of prolactin (PRL), another hormone related to stress, during T. cruzi infection. Based on studies showing expression of PRL receptors (PRLR) on lymphocytes, and its effects on growth, differentiation, and apoptosis in lymphoid cells, this hormone is supposed to functions as an immunomodulator. Furthermore, prolactin protects T cells from GC- induced apoptosis both in vivo and in vitro, which corroborates to this hypothesis. Based on these data, here we aim to investigate the possible role of intrathymic GR- PRLR cross-talk to the outcome of T. cruzi induced thymus atrophy. Our results demonstrate altered intrathymic PRL and corticosterone levels during the acute phase of T. cruzi infection. When the same hormones were evaluated on plasma, a different modulation was detected, suggesting an independence of intrathymic and systemic circuits that may be related to thymus atrophy. Furthermore, we detected the variation of PRLR and GR intrathymic expression, that ocurred in accordance to the modulation of their locally produced ligands. The analysis of DP cells that survived to the apoptosis process at the late phase of acute infection, demonstrated increased PRLR expression in parallel to the decrease of GR levels, This receptor expression profile courses with an increase of anti apoptotic proteins and the stabilization of the thymus atrophy process and seems an important factor for the survival of these cells. Using an in vitro model of thymocyte apoptosis induction, we observed that such alterations result in different GC-induced cell death susceptibility as well as an altered answer to prolactin anti -apoptotic effects. Taken together our results point to an relevant intrathymic PRLR-GR cross-talk involved in thymus homeostasis. In this way, changes of this circuit may contribute to the outcome of the thymus atrophy characteristic of the acute phase of T. cruzi infection.

Submitted by ANNITA MORAIS GIRARDI null (annitamgirardi@gmail.com) on 2016-02-16T19:49:59Z No. of bitstreams: 1 Tese_Annita_Morais_Girardi.pdf: 19183057 bytes, checksum: cf7a9853bcc87aef37b3ca91a2afceea (MD5) / Approved for entry into archive by Sandra Manzano de Almeida (smanzano@marilia.unesp.br) on 2016-02-17T13:22:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 girardi_am_dr_jabo.pdf: 19183057 bytes, checksum: cf7a9853bcc87aef37b3ca91a2afceea (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-17T13:22:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 girardi_am_dr_jabo.pdf: 19183057 bytes, checksum: cf7a9853bcc87aef37b3ca91a2afceea (MD5) Previous issue date: 2016-01-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este estudo avaliou o uso da termografia infravermelha e do exame radiológico digital como ferramentas de diagnóstico precoce da laminite em ovinos com acidose ruminal subaguda induzida experimentalmente e os efeitos da ingestão prolongada de alta proporção de alimento concentrado sobre as variáveis clínicas e laboratoriais. Foram utilizadas sete ovelhas adultas, com cânulas ruminais permanentes, que não tiveram prévio contato com alimento concentrado. Para a indução da acidose ruminal, incluiu-se ao volumoso, diariamente, 10% de alimento concentrado até atingir 80%, porcentagem mantida até completarem 19 semanas. A observação dos sinais de diarreia deu-se do quarto ao 22º dia e de laminite do quinto ao 24º dia. O fluido ruminal foi predominantemente líquido, de odor ácido e coloração amarelada. Observou-se elevação inicial nos valores da frequência cardíaca, tempo de sedimentação e flotação no fluido ruminal, plaquetas, neutrófilos segmentados, AST, FA, GGT, cálcio ionizado, magnésio, glicose, ureia, triglicérides e bilirrubinas indireta e total. No início do experimento, notou-se redução da frequência respiratória, linfocitopenia, monocitopenia, hipocalcemia, hipofosfatemia, hiponatremia, hipoproteinemia e hipocolesterolemia. A frequência de movimentos ruminais, o tempo de redução do azul de metileno, os níveis sanguíneos de creatinina, bilirrubina direta, lactato e CK foram reduzidos, enquanto as médias de temperatura, peso e escore corporal, eosinófilos, albumina, cloretos e potássio no sangue aumentaram durante todo o período de observação. Redução do pH ruminal ocorreu nos primeiros dias, a despeito de sua manutenção acima de 5,5 durante as 19 semanas de observação. Mecanismos compensatórios respiratórios e metabólicos, principalmente a acidificação da urina, mantiveram o pH sanguíneo dentro dos limites fisiológicos considerados para a espécie ovina. Dezesseis frações proteicas séricas foram separadas pela eletroforese, dentre elas oito proteínas identificadas pelos seus pesos moleculares, de funções desconhecidas. A maioria das proteínas de fase aguda e as imunoglobulinas identificadas no fracionamento eletroforético variaram durante o período de observação, sugerindo reação inflamatória. Nenhuma alteração macroscópica foi detectada à necropsia. A radiologia digital não permitiu a identificação de alterações podais decorrentes de laminite durante o período de avaliação. A termografia infravermelha detectou aumentos na temperatura da parede do casco mesmo sem a manifestação clínica de dor, indicando que esta técnica pode ser uma ferramenta útil para detectar laminite em ovinos numa fase precoce de evolução da doença. / This study evaluated the use of infrared termography and digital radiologic examination as early diagnostic tools for laminitis in sheep with experimentally induced subacute ruminal acidosis, and the effects of long-term ingestion of a high concentrate diet on clinical and laboratory variables. Seven adult ewes with permanent rumen cannula were used, which did not have any previous ingestion of concentrate feed. For the induction of ruminal acidosis, it was added to the roughage, 10% of concentrate feed until reach 80%, percentage held to the end of the 19-week experiment. Diarrhea signs were observed from fourth to 22nd day and laminitis from fifth to 24th day. Ruminal fluid was predominantly liquid, sour-smelling and yellowish. Initial increases of heart rate, sedimentation and flotation time, platelets, segmented neutrophils, AST, ALP, GGT, ionized calcium, magnesium, glucose, urea, triglycerides, indirect and total bilirubin were noted. At the beginning of the experiment, there was reduction of respiratory rate, lymphocytopenia, monocytopenia, hypocalcemia, hypophosphatemia, hyponatremia, hypoproteinemia, and hypocholesterolemia. Ruminal movement rate, methylene blue reduction time, creatinine, direct bilirubin, lactate and CK blood levels decreased, while body temperature, weight and score, eosinophils, albumin, chloride and potassium blood levels increase throughout the period. Ruminal pH reduction occurred within the first days, despite its maintenance above 5.5 during the 19 weeks. Respiratory and metabolic mechanisms, mainly urine acidification, remained the blood pH between physiologic limits for sheep. Sixteen protein fractions were separated by electrophoresis, among them eight proteins of unknown functions, identified by their molecular weights. Most acute phase proteins and the immunoglobulins identified in the electrophoretic fractionation varied throughout the observation period, suggesting inflammation. No macroscopic alteration was detected at necropsy. The digital radiology did not allow the identification of podal changes resulting from laminitis during the trial period. Infrared thermography has detected increases in the maximum temperature of the hoof wall, even without the clinical manifestation of pain, indicating that this technique can be an useful tool to detect laminitis in sheep at an early stage of the disease. / FAPESP: 2012/09111-7

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Trypanosomiasis is a disease of worldwide distribution which in Brazil is called "mal das cadeiras", owing the clinical signs shown by horses, which are the major species affected. The disease is caused by the protozoan Trypanosoma evansi, characterized by clinical signs such as weight loss, pale mucous membranes, swelling of the eyelid and vulva. Rabbits have been reported as a resistant species to T. evansi, however, is not yet known how immune aspects, such as innate immune and cholinergic system, behave in this species, not even as this inflammations pathways influence in rabbits's trypanotolerance. Thus, the aim of this study was to investigate the inflammatory response and cholinergic anti-inflammatory pathway and its relation to trypanotolerance in rabbits infected with T. evansi. For this, twelve female adult New Zealand rabbits, weighing 3.6 4.5 kg were used in this study. The animals were divided into two groups, a control group and an infected group, both with six animals. The rabbits belonging to the infected group received, intraperitoneally, 0.5 ml of rat blood containing 108 parasites per animal, while the control group received physiological solution by the same route. The experimental period reached 118 days. Blood was collected on days 0, 2, 7, 12, 27, 42, 57, 87, 102, and 118, for to determine the cholinesterases, and days 0, 5, 20, 35, 65, 95 and 118, for to evaluate blood count, total protein, serum proteinogram, immunoglobulins and acute phase proteins. There was an increase in the activity of butyrylcholinesterase (BChE), at 7th day PI, and in the activity of acetylcholinesterase (AChE), in 27th day PI. Furthermore, the infected group showed an increase in total protein and the fractions alpha, beta and gamma globulins along of experimental period. The reduction in albumin and hematocrit were observed in precise periods of experimental infection, as well as the increase in immunoglobulin G. Infection with T. evansi stimulated the production of acute phase proteins, such as C-reactive protein, haptoglobin, α-2 macroglobulin, being observed increase in immunoglobulin M (IgM) throughout the experimental period (118 days post-infection). From these results, it is concluded that the cholinergic pathway had influence the inflammatory response, through the action of AChE and BChE in the regulation of concentrations of acetylcholine, resulting in increased concentrations of cytokines and, consequently, in the production phase protein acute. The increase in IgM, associated with increased C-reactive protein and haptoglobin, suggests the involvement of these proteins in host defense against flagellated, with possible participation in trypanotolerance of rabbits infected with T. evansi. / A tripanossomose é uma enfermidade de distribuição mundial que, no Brasil, é denominada mal das cadeiras , em função dos sinais clínicos apresentados pelos equinos, principal espécie afetada. A doença é causada pelo protozoário Trypanosoma evansi, sendo caracterizada por sinais clínicos como perda de peso, mucosas pálidas, edema de pálpebra e vulva. Coelhos têm sido relatados como uma espécie resistente ao T. evansi, contudo, ainda não se sabe de que modo aspectos imunitários, como a imunidade inata e o sistema colinérgico, comportam-se nessa espécie, nem mesmo como essas vias da inflamação influenciam a tripanotolerância de coelhos. Assim, o objetivo deste trabalho foi investigar a resposta inflamatória e a via anti-inflamatória colinérgica e sua relação na tripanotolerância em coelhos infectados experimentalmente pelo T. evansi. Para tanto, foram utilizados 12 coelhos adultos, fêmeas, da raça Nova Zelândia, com peso corporal entre 3,6 a 4,5 Kg, divididos em dois grupos, um grupo controle e um grupo infectado, ambos com seis animais. Os coelhos pertencentes ao grupo infectado receberam, pela via intraperitoneal, 0,5 mL de sangue de rato contendo 108 tripanossomas por animal, enquanto que o grupo controle recebeu, pela mesma via, solução fisiológica. O período experimental foi de 118 dias, sendo o sangue coletado nos dias 0, 2, 7, 12, 27, 42, 57, 87, 102, e 118, para determinar as colinesterases, e nos dias 0, 5, 20, 35, 65, 95 e 118, para avaliar hemograma, proteínas totais, proteinograma sérico, imunoglobulinas e proteínas de fase aguda. Foi observado aumento na atividade da butirilcolinesterase (BChE) no 7° dia PI e da atividade da acetilcolinesterase (AChE) no 27° dia PI. Além disso, o grupo infectado apresentou aumento nas proteínas totais, bem como nas frações alfa, beta e gama globulinas ao longo do período experimental. A redução na albumina e no hematócrito foram observados em períodos pontuais da infecção experimental, bem como o aumento na imunoglobulina G. A infecção pelo T. evansi estimulou a produção de proteínas de fase aguda como a proteína C-reativa, haptoglobina, α-2 macroglobulina, sendo observado um aumento na imunoglobulina M (IgM) em todo o período experimental (118 dias pós-infecção). A partir desses resultados, conclui-se que a via colinérgica pode ter influência na resposta inflamatória, através da ação da BChE e AChE na regulação das concentrações de acetilcolina, acarretando em aumento nas concentrações de citocinas e, consequentemente, na produção de proteínas de fase aguda. A elevação na IgM, relacionada ao aumento da proteína C-reativa e haptoglobina, sugere o envolvimento dessas proteínas na defesa do hospedeiro contra o flagelado, e, possivelmente, na tripanotolerância de coelhos infectados com T. evansi.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Neste trabalho, estudos comportamentais, farmacolÃgicos e neuroquÃmicos em Ãreas cerebrais foram realizados em animais adultos (2 meses de idade) que apresentaram convulsÃo e estado epilÃptico (EP), atravÃs da administraÃÃo de pilocarpina 400mg/kg, s.c., P400, com a finalidade de investigar os mecanismos envolvidos durante a fase aguda (1 e 24h) do processo convulsivo. Os estudos comportamentais em animais mostraram que a administraÃÃo de P400 produziu sinais colinÃrgicos perifÃricos (SCP) e movimentos estereotipados (ME) em todos os animais em ambos os perÃodos de observaÃÃo. Os animais observados por 1h apresentaram parÃmetros comportamentais semelhantes ao grupo de 24h, somente o Ãndice de desenvolvimento de convulsÃes, EP, foi um pouco menor, e nÃo houve nenhuma morte. Os estudos farmacolÃgicos com antagonista colinÃrgico bloqueou todos os parÃmetros comportamentais observados. Das drogas gabaÃrgicas, os antagonistas dopaminÃrgico e glutamatÃrgico apresentaram melhor resultado, aumentado a latÃncia da primeira convulsÃo (LC), a latÃncia do EP (LEP) e reduzindo o nÃmero de mortes. Os antagonistas dopaminÃrgico D2, o opÃide, os antidepressivos e o agonista dopaminÃrgico reduziram a LC, LEP e aumentou o nÃmero de mortes, enquanto o antipsicÃtico testado aumentou a LC, a LEP e reduziu as mortes. O lÃtio potencializou os efietos da pilocarpina aumentado o nÃmero de mortes e reduzindo a LC e a LEP. Os estudos neuroquÃmicos revelaram que a atividade da acetilcolinesterase no hipocampo, cÃrtex frontal (CF) e corpo estriado dos animais sofreu uma reduÃÃo significativa apenas na primeira hora da fase aguda, enquanto que no perÃodo de 24h de observaÃÃo a atividade enzimÃtica praticamente se normalizou. O nÃvel de lipÃdio peroxidaÃÃo e o conteÃdo de nitrito e nitrato aumentaram, enquanto que, a concentraÃÃo de GSH diminui nos dois perÃodos do estudo nas Ãreas investigadas. A atividade da SOD aumentou durante 1h em todas a Ãreas. Por sua vez, no perÃodo de 24h aumentou apenas no CF. Na atividade da catalase em ambos os perÃodos e nas Ãreas estudadas verificou-se um aumento significativo. Estudos sobre a densidade mÃxima (Bmax) dos receptores colinÃrgicos muscarÃnicos (M1 e M2) e dopaminÃrgicos (D1 e D2) nas Ãreas analisadas durante 1 e 24h de observaÃÃo foram diminuÃdos e nÃo alterados, respectivamente. Em relaÃÃo aos receptores serotonÃrgicos (5-HT2) nÃo foi verificado alteraÃÃo no Bmax apÃs 1 e 24h de observaÃÃo, nas trÃs Ãreas estudadas. Nas trÃs Ãreas estudadas observou-se um aumento e uma diminuiÃÃo no Bmax dos receptores glutamatÃrgicos e GABAÃrgicos, respectivamente. O P400 alterou de forma diversificada a constante de dissociaÃÃo (Kd) dos receptores M1, M2, D1, D2, 5-HT2, GABAÃrgicos e glutamatÃrgicos nos animais que apresentaram convulsÃo, EP e que foram sacrificados 1 e 24 h depois do tratamento. Na determinaÃÃo de monoaminas e seus metabÃlitos com HPLC, o P400 alterou a concentraÃÃo de DA, DOPAC e HVA, bem como da NA e da 5-HT e seu metabÃlito o 5-HIAA nas diferentes regiÃes do cÃrebro apÃs 1 e 24 h de observaÃÃo. Nos experimentos de determinaÃÃo do conteÃdo dos aminoÃcidos com HPLC, o P400 alterou a concentraÃÃo de (glutamato) GLU estriatal, (glutamina) GLN hipocampal, (aspartato) ASP cortical e nÃo modificou o conteÃdo de tirosina com 1h nas trÃs Ãreas estudadas. JÃ com 24 horas de observaÃÃo nÃo houve alteraÃÃo em nenhuma das Ãreas nos aminoÃcidos GLU, GLN e ASP, mas o conteÃdo de tirosina aumentou de forma significativa nas Ãreas investigadas. / The present study was aimed at investigating behavioural and neurochemical alterations in brain areas of adults rat (2-month-old) which presented seizures and status epilepticus (SE) after treatment with a single dose of pilocarpine (400mg/kg, s.c., P400) in order to clarify the mechanisms of the acute phase in the convulsive process (1 and 24h). Behavioural studies have demonstrated that the P400 administration produced peripheral cholinergic signs and stereotyped movements in all of the animals in both periods of observation. The behavioural parameters assessed between 1 and 24 h were similar, but the seizure and SE development index was slightly lower in the 1h group and in the same group no case of fatality was observed. The pharmacological studies with antagonist cholinergic did not present any of the behavioural alterations. The drugs gabaergic, the antagonist dopaminergic D1, antipsychotic used and glutamatergic antagonist presented increased in the latency to first seizure (LS), latency of the SE (LSE) and decreasing the number of the death. The antagonists dopaminergic D2, the opioide, the antidepressants, and the dopaminergic agonist decreased the LS and a LSE and increased the number of the death. The lithium increased the effects of the pilocapine as well as the number of the death and decreased the LS and LSE. Neurochemical assessments revealed that acetylcholinesterase activity in hippocampus, frontal cortex and striatum decreased significantly only the first hour of the acute phase, meanwhile after 24h, the enzymatic activity remained unaltered. Lipid peroxidation level and nitrite e nitrate content were augmented whereas the GSH concentration was decreased in the areas investigated in both periods of observation. The SOD activity was increased during the first hour in the three areas. In turn, in the 24h period it was augmented in the frontal cortex alone. The catalase activity was significantly increased in both periods and in all areas. Works concerning maximum density (Bmax) of muscarinc cholinergic (M1 e M2) and dopaminergic (D1 e D2) receptors in the areas studied during 1h and 24h of observation were decreased and unaltered, respectively. Regarding the serotonergic receptors (5-HT2) was not verified alteration in the Bmax after 1 and 24h of observation in the three areas studied. In the areas studied the Bmax from glutamatergic and GABAergic receptors were increased and decreased, respectively. P400 altered the M1, M2, D1, D2, 5-HT2, GABAergic e glutamatergic receptors dissociation constant values (Kd) in distinct ways after 1 e 24h from the treatment. In the monoamine and their metabolites with HPLC determination P400 changes the DA, DOPAC and HVA as well as NA and 5-HT and its metabolite 5-HIIAA concentrations in the different cerebral areas after 1 and 24h of observation. In the experimental determinations of the amino acids contents, the P400 altered the content of (glutamate) GLU striatal, (glutamine) GLN hippocampal and the (aspartate) ASP cortical and no modified the concentration od tyrosine in the areas observed. However the TYR contents after 24 h of observation increas in striatum, hippocampus and frontal cortex, but GLU, GLN e ASP reamained unaltered in this period of the observation .

Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-12-09T18:59:13Z No. of bitstreams: 1 Tese-Liliane Aparecida Tanus Benatti-2013.pdf: 1297536 bytes, checksum: 448305a12775a03108961cc2d74864d3 (MD5) / Rejected by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com), reason: on 2014-12-09T18:59:23Z (GMT) / Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-12-12T19:34:32Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese-Liliane Aparecida Tanus Benatti-2013.pdf: 1297536 bytes, checksum: 448305a12775a03108961cc2d74864d3 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-12-16T09:23:21Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese-Liliane Aparecida Tanus Benatti-2013.pdf: 1297536 bytes, checksum: 448305a12775a03108961cc2d74864d3 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-16T09:23:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Tese-Liliane Aparecida Tanus Benatti-2013.pdf: 1297536 bytes, checksum: 448305a12775a03108961cc2d74864d3 (MD5) Previous issue date: 2013-07-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / This study aimed at evaluating the productive performance and physiological markers of stress of bovines from different breeds. We evaluated 45 bovines, Curraleiro Pe-Duro (Gcur), Pantaneiro (Gpan) and Nellore (Gnel), finished in feedlot. We analyzed cortisol and acute phase proteins levels, hemogram, protein and energetic profiles and enzymatic evaluation at three moments, M0, M56 and M103, we also carried out the histopathological examination of liver and lymph nodes fragments. Cortisol values in Gnel were higher at M0 than at M103. In all groups, the values of globular volume, hemoglobin, albumin and α-1-acid glycoprotein were higher at M0 than at M103, the same occurred to transferrin in Gpan and Gnel. IgG showed higher concentrations at M0 in all three groups. Fibrinogen in Gpan and Gnel was lower at M103 than in M0. Weight gain was satisfactory in all groups. The ALP and GGT serum values were lower at M0 and AST was lower at M103. The protein and the energetic profile (cholesterol) increased throughout the experiment. Histopathological analysis of liver and mesenteric lymph nodes showed cholangiohepatitis. Feedlot system for Curraleiro Pé-Duro, Pantaneiro and Nellore bovines causes discrete alterations in eritrogram and acute phase protein (α-1-acid glycoprotein). Metabolic and enzymatic profiles as well as hepatic and lymph nodes histopathological evaluation showed presence of cholangiohepatitis; however such alterations did not affect productive performance. / Com este estudo propôs-se avaliar o desempenho e os marcadores fisiológicos de estresse de bovinos de diferentes raças. Foram avaliados 45 bovinos Curraleiro Pé-Duro (Gcur), Pantaneiro (Gpan) e Nelore (Gnel) terminados em confinamento. Analisaram-se os índices cortisol, proteínas de fase aguda, hemograma, perfil proteico, energético e a avaliação enzimática em três momentos, M0, M56 e M103; o desempenho ponderal e o exame histopatológico de fragmentos de fígado e linfonodos. Os valores de cortisol em Gnel no M0 foram maiores em relação ao M103. Nos três grupos, os valores do volume globular, hemoglobina, albumina e α-1 glicoproteína ácida foram mais elevados em M103 quando comparados ao M0 e o mesmo ocorreu com a transferrina em Gpan e Gnel. A IgG foi maior em M0 nos três grupos. O fibrinogênio no Gpan e Gnel foi menor em M103 em relação ao M0. O ganho em peso foi satisfatório em todos os grupos. Os valores séricos da ALP e a GGT foram menores em M0 e da AST em M103. Os perfis proteico e energético (colesterol) aumentaram ao longo do experimento. A análise histopatológica do fígado e linfonodos mesentéricos revelou presença de colangio hepatite. O sistema de confinamento para bovinos da raça Curraleiro Pé-Duro, Pantaneiro e Nelore ocasiona discretas alterações no eritrograma e na proteína de fase aguda (α1- glicoproteína ácida). Os perfis metabólico e enzimático, a avaliação histopatológica hepática e de linfonodos indicaram presença de colangiohepatite, e essas alterações aparentemente não comprometeram o desempenho produtivo.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2017-09-22T19:23:19Z No. of bitstreams: 1 thiagodealmeidaoliveira.pdf: 1376099 bytes, checksum: 1223858331fe263a8bdcce2a114266c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-09-27T13:42:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 thiagodealmeidaoliveira.pdf: 1376099 bytes, checksum: 1223858331fe263a8bdcce2a114266c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-27T13:42:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 thiagodealmeidaoliveira.pdf: 1376099 bytes, checksum: 1223858331fe263a8bdcce2a114266c5 (MD5) Previous issue date: 2017-06-28 / A modulação da resposta imune inata seria uma ferramenta capaz de elhorar a capacidade do sistema imune de combater a infecção por patógenos e outros estímulos externos. A utilização de vias sinalizadoras com a participação de alguns receptores específicos, como o peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARα) surgiria como importante hipótese para modular a produção de proteínas de fase aguda e do complemento em hepatócitos bovinos, órgão principal envolvido nessa síntese. Nesse sentido, o presente trabalho se utilizou de técnicas de cultivo primário de hepatócitos bovinos, provenientes de 5 animais diferentes, que foram isolados, cultivados e estimulados com um ligante desse receptor nuclear, o fenofibrato. Após 48 horas de cultivo as células tiveram seu ácido ribonucleico (RNA) extraído e quantificado, seguindo-se à síntese de ácido desoxirribonucleico complementar (cDNA) e execução das reações em cadeia da polimerase quantitativo (qPCR), a fim de se verificar a expressão e produção de proteínas de fase aguda e do sistema complemento por meio de de reações de qPCR. Os sobrenadantes de cultura também foram avaliados após esse período de tempo, onde foram dosadas as mesmas proteínas, por meio da técnica de Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Os resultados demonstraram que o cultivo se provou ineficiente no que diz respeito à viabilidade celular e à quantificação de RNA extraído, indicando que mais estudos devem ser feitos para padronização dessa técnica. Além disso, os resultados demonstraram que o PPARα, ativado frente ao seu ligante específico, o fenofibrato, não foi capaz de modular a expressão e tampouco a produção dos fatores de complemento e das proteínas de fase aguda analisadas, podendo indicar que em hepatócitos bovinos a modulação por esse receptor não ocorre da mesma maneira como em humanos e em murinos. No entanto, devido à grande variabilidade racial dos animais cujos fígados foram coletados e ao pequeno número amostral utilizado, análises mais refinadas são necessárias. Dessa maneira, estudos devem ser realizados visando novas moléculas capazes de modular proteínas relacionadas ao sistema imune em bovinos. / The innate immune modulation is a tool capable of improve the immune system capacity to fight infections by pathogens and other external stimuli. The use of signaling paths with participation of some specific receptors, such as peroxisome proliferator-activated receptor alpha (PPARα) arises as an important hypothesis to modulate the acute phase proteins (APP) and complement proteins in bovine liver cells, where most of these molecules are produced in a systemic level. In this way, this work aimed to establish a protocol of primary culture of bovine hepatocytes suitable to analyze intracellular signaling paths and genetic expression and synthesis of proteins related to innate immune system. For that, bovine hepatocytes from five different animals were isolated, cultivated and activated by a receptor ligand - fenofibrate, both alone and associated with proinflammatory stimuli, in different concentrations. After 48 hours of culture, ribonucleic acid (RNA) was extracted and quantified, complementary deoxyribonucleic acid was synthetized and real-time polymerase chain reactions were setup to verify the acute phase and complement proteins expression and synthesis. The culture supernatant was used to analyze the protein dosage by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). The results showed that the hepatocytes isolation and culture were not very effective, since the extracted RNA showed low concentration and bad integrity, indicating that more studies must be performed to standardize this technique. Considering the low quantification and bad quality of RNA, it was not possible to access the role of the receptor PPARα in complement factors and acute phase proteins genetic expression and production, when activated by its specific ligand (fenofibrate). Thus, the development of isolation and culture techniques for bovine hepatocytes must continue to be developed in order to better evaluate the intracellular signaling pathways and the search for new molecules capable to modulate proteins related to the immune system in bovines.