A atividade física intensa pode induzir resposta inflamatória subclínica e aumento nos níveis plasmáticos de citocinas pró-inflamatórias. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre a liberação de citocinas (IL-1β, IL-6, e TNF-α), o exercício físico agudo e o exercício regular em pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC). Foram estudados 18 pacientes do sexo masculino com DPOC moderada a muito grave, divididos em dois grupos: 11 pacientes foram incluídos em programa de reabilitação pulmonar (RP) durante 8 semanas e 7 pacientes sem atividade física regular foram incluídos como grupo controle (C). Todos os pacientes realizaram espirometria, teste de exercício cardiopulmonar incremental máximo e teste de endurance em cicloergômetro com carga constante (60% da carga máxima do teste incremental) no início do projeto e após oito semanas. Foi coletado sangue venoso periférico para dosagem de citocinas, antes e 15 minutos após os testes de endurance (TE1 e TE2). IL-1β, IL-6, e TNF-α foram dosadas com kits ELISA específicos (Quantikine®, R&D Systems). Os pacientes submetidos à RP liberaram menos IL-1β que os controles após o treinamento (RP: TE1 0,96±0,66; TE2 -0,24±0,27 pg/ml; grupo C: TE1 -1,48±1,14; TE2 0,66±0,61 pg/ml; p=0,03). Não houve diferença significativa na liberação de IL-6 quando comparados os dois testes de endurance (RP: TE1 0,44±1,21; TE2 0,80±1,24 pg/ml; grupo C: TE1 0,88±0,85; TE2 0,78±0,95 pg/ml; p=0,68). Não foi observada diferença na liberação de IL-6 entre os dois grupos. Apenas cinco pacientes (quatro no grupo da RP) liberaram TNF-α e o exercício não modificou o seu padrão de liberação (RP: TE1 2,86±1,18; TE2 2,57±1,37pg/ml; grupo C: TE1 4,98; TE2 6,84 pg/ml; p=0,14). Não houve associação significativa entre intensidade de exercício e liberação de citocinas (IL-1β r=0,10; IL-6 r=-0,23). Houve maior liberação de IL-6 após o TE2 nos pacientes que apresentaram exacerbação da DPOC (exacerbados 9,59±1,32; estáveis 6,31±0,92 pg/ml; p=0,03) e não houve diferença nos níveis de IL-1β. Apenas pacientes com exacerbação da DPOC liberaram TNF-α (2,82±1,48 pg/ml). Concluiu-se que o exercício físico regular reduz a liberação de IL-1β e as exacerbações estimulam a liberação de IL-6 e TNF-α em pacientes com DPOC.

A Doença de Gaucher (DG) é a doença lisossômica de depósito mais frequente, sendo causada pela deficiência da atividade da enzima β-glicosidase ácida (GBA), que é responsável pela degradação de glicosilceramidas nos lisossomos. Seu déficit resulta no acúmulo intracelular de glicosilceramidas formando as chamadas Células de Gaucher. A DG é dividida em três grupos baseada na ausência (tipo 1) ou presença e gravidade de envolvimento do sistema nervoso central (tipo 2 e 3). A demonstração da deficiência da atividade da GBA é considerada o método padrão ouro para o diagnóstico, sendo complementada pela medida da atividade da enzima quitotriosidase (QT), que é considerada um biomarcador para a DG. Embora a função exata das células de Gaucher ainda permaneça desconhecida, acredita-se que elas secretam fatores que induzem resposta inflamatória e a produção de espécies reativas. Sabe-se que a instituição do tratamento por reposição enzimática (TRE) diminui significativamente a atividade da QT, porém essa diminuição não chega até os níveis de normalidade. A deficiência da GBA na DG também induz uma cascata de eventos, culminando secundariamente na produção de espécies reativas. Visto isso, o objetivo deste trabalho foi mensurar os níveis de citocinas próinflamatórias (IL-6, TNF-α e IL-17a), proteína S100B em pacientes com DG com e sem tratamento por reposição enzimática e relacioná-los com a atividade da QT, e também, determinar o nível de alguns marcadores de dano oxidativo como substancias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), conteúdo de carbonilas, atividade da catalase (CAT) e superoxido dismutase (SOD) e mensurar o conteúdo total de sulfidrilas (SH), marcadores da defesa antioxidante, visando um método auxiliar para o diagnóstico e acompanhamento do tratamento destes pacientes. Observamos que os níveis de IL-6 em pacientes DG sem tratamento foi duas vezes maior do que os encontrados nos indivíduos saudáveis e que a instituição do TRE provoca uma diminuição significativa nos níveis de IL-6 no soro dos pacientes. Também foi observada uma correlação positiva entre os níveis de IL-6 e a atividade da QT, ou seja, quanto maior a atividade da QT, maior os níveis de IL-6 no soro de pacientes em tratamento. Já as outras citocinas pró-inflamatórias mensuradas, TNF-α e IL-17a, não apresentaram diferença significativa entre os indivíduos saudáveis e os pacientes Gaucher, bem como a medida da proteína S100B. Nos fatores oxidativos observamos alterações na CAT, SOD e sulfidrilas, o que sugere que pacientes DG sofrem mudanças na produção de espécies reativas quando comparados aos indivíduos normais. Este aumento na CAT, SOD e sulfidrilas poderia estar relacionado com a prevenção do aumento do peróxido de hidrogênio e a prevenção de danos lipídicos. No entanto, os outros três parâmetros (TBARS, carbonila e relação SOD / CAT) não demonstraram uma diferença significativa entre os grupos. Com isso, concluímos que a IL-6 mostrou-se a melhor ferramenta a ser utilizada juntamente com a QT para auxiliar no diagnóstico e acompanhamento do tratamento de pacientes DG.

Submitted by Chaylane Marques (chaylane.marques@ufpe.br) on 2015-03-11T18:34:00Z No. of bitstreams: 2 Dissertação.pdf: 1918159 bytes, checksum: 757ff07961831d3d67ed683fe070a781 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-11T18:34:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação.pdf: 1918159 bytes, checksum: 757ff07961831d3d67ed683fe070a781 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / O Papillomavirus Humano (HPV) é responsável por afetar anualmente 500 mil mulheres com câncer cervical invasivo. Fatores de risco podem facilitar a persistência do vírus da cérvice uterina. Polimorfismos genéticos em regiões regulatórias e codificadoras de genes de citocinas estão associadas a patogênese de um vasto número de doenças humanas. Este trabalho objetivou determinar se existe relação entre os polimorfismos existentes na região - G308A do gene TNFα e nas regiões -G137C e -C607A do gene IL18 na susceptibilidade a infecção pelo HPV e na progressão das lesões intraepitelial cervical. O estudo foi realizado com 122 mulheres HPV+ e 132 mulheres HPV- (controle). Os polimorfismos dos genes TNFα e IL18 foram analisados pela técnica Specific Sequence Polymosphism (PCR-SSP) e analisadas em gel de agarose a 1,5%. As análises estatísticas para verificar a significância do estudo dos genótipos foram realizadas utilizando o programa BioEstat 5.0. Os resultados mostraram uma prevalência de 49,18% da infecção pelo HPV-16 e 70,49% delas apresentaram lesão cervical de alto grau. Em relação aos polimorfismos houve associação do alelo mutante na região -308A do gene TNFα e -607A do gene IL18 com a susceptibilidade a infecção pelo HPV (p=0,0008; p<0,0001, respectivamente), mas não foi verificada relação destes genes com a susceptibilidade ao desenvolvimento das lesões (p>0,05). Porém não foi encontrada associação significativa em relação a região na região -137 do gene IL-18. Estes resultados sugerem dois possíveis marcadores genéticos de susceptibilidade a infecção pelo HPV na população em estudo e que estes não podem ser usados como marcadores de progressão da lesão cervical.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T15:33:09Z No. of bitstreams: 2 TESE Helker da Silva.pdf: 5271384 bytes, checksum: 9fef714693de56d2aa1962cb3968e3de (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T15:33:09Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Helker da Silva.pdf: 5271384 bytes, checksum: 9fef714693de56d2aa1962cb3968e3de (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / O Lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença autoimune sistêmica e crônica, com uma patogênese envolvendo múltiplos fatores. As citocinas têm um papel crucial no desenvolvimento e progressão do LES. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a associação dos polimorfismos dos genes das interleucinas proinflamatórias IL2, IL12B, IL17A, IL17F, IL23R e TNF com o desenvolvimento do LES, atividade da doença e manifestações clínicas apresentadas. Foram selecionadas 122 mulheres com Lupus atendidas no Hospital das Clínicas-UFPE. Os polimorfismos TNF (-308 G/A), IL17A -197(G/A), IL17F (7488 A/G), IL23R (2199 A/C) e IL12B (3’UTR +1188 A/C) foram identificados por PCR-RFLP e a genotipagem do polimorfismo 3’UTR +1188 (A/C) IL2 foi por ARMS-PCR. Nossos resultados mostram que os polimorfismos dos genes TNF (p=0,0012), IL17F (p=0,0005), IL2 (p=0,0011), IL12 (p=<0,0001) e IL23R (p=<0,0001) estão associados à suscetibilidade ao LES. Nenhum dos polimorfismos mostrou associação com o nível de atividade da doença. Na análise de associação entre os polimorfismos e o desenvolvimento de características clínicas, o alelo A do TNF mostrou associação com o desenvolvimento de Serosite (p=0,0228). Além disso, observou-se que polimorfismo do gene IL12B mostrou associação com Fator Anti-nuclear (FAN) (p=<0,0001). Desta forma, concluímos que, na população estudada, polimorfismos em genes de citocinas próinflamatórias e seus receptores podem ser fatores de risco para o desenvolvimento do LES, mas não se associam com a atividade da doença, e que os polimorfismos nos genes TNF e IL12B podem influenciar no desenvolvimento de características clínicas da doença.

Submitted by João Arthur Martins (joao.arthur@ufpe.br) on 2015-04-08T19:29:53Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO CORRIGIDA E CATALOGRAFADA COMPLETA.pdf: 3717540 bytes, checksum: 41a0d81eb96ccc02580318b27166ccb9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T19:29:53Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO CORRIGIDA E CATALOGRAFADA COMPLETA.pdf: 3717540 bytes, checksum: 41a0d81eb96ccc02580318b27166ccb9 (MD5) Previous issue date: 2012-08-27 / Introdução: A doença de Crohn (DC) é uma das mais graves doenças inflamatórias intestinais, constituídas por um grupo heterogêneo de doenças cuja manifestação final comum é a inflamação, e com etiopatogenia que envolve fatores genéticos, imunológicos e ambientais. Objetivos: Avaliar se existe associação entre polimorfismos das Regiões Promotoras dos genes da TNF-α (-308G/A) e da Interleucina-10 (-1082G/A), alterações hematológicas e bioquímicas nas diferentes formas clínico-anatômicas da DC em uma população do nordeste brasileiro. Patients e Métodos: Foram estudados 49 pacientes ambulatoriais (com idade entre 14 a 81 anos) com diagnóstico de DC. Durante a consulta clínica foi realizada entrevista para obtenção de dados clínico-epidemiológicos através do preenchimento de ficha clínica personalizada. Também foi coletado sangue venoso periférico, para realização das análises hematológica, bioquímica e genética. Foram utilizadas 132 amostras de um banco de dados de DNA de indivíduos normais como controle. Resultados: A idade média dos participantes foi de 41,8 anos e o gênero predominante foi o masculino (53,1%.). A idade de diagnóstico da doença prevaleceu em indivíduos com menos de 40 anos (63,3%). Em relação à localização da doença, 44,9% apresentava sítio ileal, seguida da região colônica em 28,5% dos pacientes. A forma anátomo-clínica predominante foi a fistulizante (38,7%), seguida pela inflamatória (32,6%) e pela estenosante com 28,5%. Quanto aos marcadores inflamatórios PCR e VSH, ambos estavam aumentados em 57,1% e 65,3% dos casos, respectivamente, principalmente em pacientes com a forma fistulizante da doença. Em relação ao polimorfismo da TNF-α (-308G/A) não foi encontrado significância estatística genotípica (p=0.9816) e alélica (p=0.9826), em relação aos controles. Quanto ao polimorfismo da IL-10 (-1082G/A), também não foi encontrado diferença estatística (p=0.0843) entre os genótipos dos pacientes em relação aos controles. Não foi encontrada relação entre os genótipos pesquisados e as formas anátomo-clínicas da doença de Crohn na população estudada. Conclusão: De acordo com nossos achados, os marcadores inflamatórios encontram-se aumentados na maioria dos pacientes com DC, principalmente naqueles na forma fistulizante da doença. Não foi evidenciada diferenças significantes no polimorfismo de regiões promotoras das interleucinas TNF-α e IL-10 entre os pacientes com diferentes formas anátomo-clínicas da DC. Estudos posteriores com mais marcadores genéticos e um número maior de pacientes necessitam ser realizados para que seja traçado um perfil genético diferencial nas diferentes manisfestações clínicas da DC em nossa população.

Submitted by Leonardo Freitas (leonardo.hfreitas@ufpe.br) on 2015-04-14T13:32:59Z No. of bitstreams: 2 TESE ELVIA BARROS.pdf: 1865050 bytes, checksum: 9d5d80f53c3507afa22244172a691397 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-14T13:32:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE ELVIA BARROS.pdf: 1865050 bytes, checksum: 9d5d80f53c3507afa22244172a691397 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-06-12 / CAPES / A imunidade inata e a imunidade adaptativa são ferramentas fundamentais de resposta do sistema imune contra a invasão microbiana. O objetivo deste trabalho foi avaliar a presença de polimorfismos nos genes da Beta-defensina-1 (hBD-1), da Lectina de Ligação da Manose 2 (MBL-2), da Interleucina 6 (IL-6) e do Fator de Necrose Tumoral - alfa (TNF-α) em pacientes portadores de alterações pulpares e perirradiculares. Foram incluídos no estudo 73 pacientes, sendo divididos em 4 grupos: 13 pacientes com Pulpite Irreversível, 12 pacientes com Abscesso Periapical Agudo, 23 pacientes com Periodontite Apical Crônica e 25 pacientes sem tratamento endodôntico realizado (Grupo Controle). Foi realizada a coleta de sangue dos pacientes e extração do DNA das amostras. A genotipagem dos Polimorfismos de Único Nucleotídeo dos genes da hBD-1, da MBL-2, da IL-6 e do TNF-α foi realizada através da Técnica de Reação em Cadeia de Polimerase em tempo real (qPCR). Os resultados demonstraram que os indivíduos com o genótipo IL-6 GC possuem 5% menos chance de não ter o quadro clínico de Periodontite Apical Crônica (p = 0,0113). Conclui-se que o genótipo IL-6 (-174G/C) GG mostrou-se associado ao desenvolvimento de alterações perirradiculares crônicas na população estudada. Os Polimorfismos dos genes da hBD1(-44C/G), MBL-2 (codons 52, 54 e 57) e TNF-α (-308) não se mostraram associados ao desenvolvimento de alterações perirradiculares na população estudada. Esta pesquisa sugere que fatores genéticos possam estar relacionados com a susceptibilidade para desenvolver alterações perirradiculares

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:02:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9457_1.pdf: 567516 bytes, checksum: 6a2c440598380b8f4276b0d42882bf4f (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2012 / O Papillomavirus humano (HPV) é responsável por afetar anualmente 500 mil mulheres com câncer cervical invasivo. Fatores de risco podem facilitar a persistência do vírus da cérvice uterina. Polimorfismos genéticos em regiões regulatórias e codificadoras de genes de citocinas estão associadas a patogênese de um vasto número de doenças humanas. Este trabalho objetivou determinar se existe relação entre os polimorfismos existentes na região -G308A do gene TNFalfa; e nas regiões -G137C e -C607A do gene IL18 na susceptibilidade a infecção pelo HPV e na progressão das lesões intraepitelial cervical. O estudo foi realizado com 122 mulheres HPV+ e 132 mulheres HPV-(controle). Os polimorfismos dos genes TNFalfa; e IL18 foram analisados pela técnica Specific Sequence Polymosphism (PCR-SSP) e analisadas em gel de agarose a 1,5%. As análises estatísticas para verificar a significância do estudo dos genótipos foram realizadas utilizando o programa BioEstat 5.0. Os resultados mostraram uma prevalência de 49,18% da infecção pelo HPV-16 e 70,49% delas apresentaram lesão cervical de alto grau. Em relação aos polimorfismos houve associação do alelo mutante na região -308A do gene TNFalfa; e -607A do gene IL18 com a susceptibilidade a infecção pelo HPV (p=0,0008; p<0,0001, respectivamente), mas não foi verificada relação destes genes com a susceptibilidade ao desenvolvimento das lesões (p>0,05). Porém não foi encontrada associação significativa em relação a região na região -137 do gene IL-18. Estes resultados sugerem dois possíveis marcadores genéticos de susceptibilidade a infecção pelo HPV na população em estudo e que estes não podem ser usados como marcadores de progressão da lesão cervical.

Orientadores: Marcelo Lopes de Lima, Nelson Rodrigues Netto Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-17T00:02:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pedro_RenatoNardi_D.pdf: 3805668 bytes, checksum: 8b1ea901163cf75ede5f727e7f455e0c (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: O tratamento definitivo das massas renais malignas é primordialmente cirúrgico, sendo a nefrectomia radical eleita por muitos anos a cirurgia padrão para o tratamento do câncer renal localizado. Entretanto, com o envelhecimento populacional, maiores são as preocupações em se manter a capacidade funcional dos órgãos e sistemas do corpo humano. Portanto, a necessidade de se preservar tecido renal sadio durante o tratamento do câncer renal localizado, com auxílio de cirurgias parciais poupadoras de néfrons, se tornou imperativa. O tratamento de lesões renais sólidas pequenas passou a ter diferentes formas de abordagem, que variam desde técnicas de termoablação percutânea ou laparoscópica, nefrectomia parcial laparoscópica e aberta à até tradicional nefrectomia radical aberta. O uso de modalidades de tratamento cirúrgico com mínimo grau de agressão passou a ganhar atenção, devido à rápida recuperação do paciente, ao menor risco de complicações cirúrgicas e aos bons resultados oncológicos. Ablação por radiofreqüência (ARF) tem se mostrado um meio eficiente no tratamento de tumores renais pequenos e exofiticos. Atualmente, sua indicação é restrita a lesões de até 4 cm. O presente estudo foi montado para avaliar o uso conjunto da nanopartícula de ouro e fator alfa de necrose tumoral (TNF alfa) à ARF no tratamento de um modelo experimental de tumor renal. Materiais e Métodos: Trinta e sete coelhos brancos da raça New Zealand tiveram implantados em seus rins, através de uma laparotomia, um fragmento de 1 mm3 de tumor VX-2. Após 14 dias do implante, quando seus rins haviam desenvolvido uma lesão tumoral sólida menor que 1 cm, os animais foram divididos em 3 grupos de 10 e 1 grupo de 7 integrantes (sham) de acordo com o tratamento selecionado para o tumor renal focal: 1) Nanopartícula com TNF alfa; 2) Ablação por radiofreqüência; 3) Nanopartícula com TNF alfa seguido de Ablação por radiofreqüência; 4) Grupo sham. Todos os animais foram submetidos a mesma cronologia de tratamento, composta por 2 laparotomias e eutanásia. Os grupos tratados com as nanopartículas de ouro com fator alfa de necrose tumoral isolada ou complementarmente, as receberam 4 horas antes do procedimento cirúrgico na dose de 200 µm/Kg. A análise de resultados foi realizada com medidas macroscópicas e microscópicas do volume da área de ablação ou tumoral, segundo a fórmula do volume de uma elipsóide. Avaliação estatística foi realizada com Teste T Student, sendo considerado significante p<0.05. Resultados: O grupo que recebeu a nanopartícula com fator alfa de necrose tumoral e depois foi submetido à ARF apresentou maior zona de morte celular completa quando comparado ao grupo tratado somente com ablação por radiofreqüência (0.30 ± 0.07 vs 0.23 ± 0.03 mL, P=.03). A zona de transição foi menor no grupo que recebeu a nanopartícula com fator alfa de necrose tumoral e ablação por radiofreqüência quando comparada ao grupo tratado somente com ablação por radiofreqüência (0.08 ± 0.02 vs 0.13 ± 0.05 mL, P =.01). Conclusão: O presente estudo demonstrou que o uso da nanopartícula de ouro com TNF alfa sensibiliza o insulto térmico sofrido por tumores sólidos decorrentes da ablação por radiofreqüência / Abstract: Radical nephrectomy has long been considered as gold standard treatment for localized renal tumors. However due to an increase in life expectation, organ sparing surgeries have emerged with the purpose of preserving as much healthy tissue as possible. Therefore, nephron sparing surgeries have become another valid option for localized renal tumors. There are different modalities of nephron sparing procedures, including open partial nephrectomy, laparoscopic nephrectomy and termoablative procedures. The later is associated with less morbidity and fast patient recovery. Radiofrequency ablation (RFA) is a well-known termoablative procedure and it has been most effective when the tumors are small, exophytic, and away from vital structures. The present study was designed to analyze the adjuvant use of gold nanoparticle with tumor necrosis factor alpha prior to radiofrequency ablation in a translational model of localized renal tumor. Material and Methods: A total of 37 New Zealand White rabbits had VX-2 tumors implanted into their kidneys; they were allowed to grow for 14 days, when a tumor mass of less than 1 cm could be detected. The animals were then split into 3 treatment groups of 10 rabbits each and a sham group of 7 rabbits as follows: (1) Tumor necrosis factor alpha plus nanoparticle, (2) Radiofrequency ablation, (3) Tumor necrosis factor alpha nanoparticle (200 µm/Kg) followed 4 hours later by radiofrequency ablation. All groups were subjected to the same milestones of the experiment which was comprised of 2 laparotomies and sacrification. Gross and microscopic measurements of the ablation size as well as histological analysis using hematoxylin and eosin staining were performed to determine the effect of TNF alpha nanoparticle on the ablation. Statistical analysis was performed with Student's T test, considering p < 0.05 as significant. Results: The RFA plus TNF alpha nanoparticle group had a larger zone of complete cell death than the RFA-only group (0.30 ± 0.07 vs 0.23 ± 0.03 mL, P=.03). The zone of partially ablated tissue was smaller in the RFA plus TNF alpha nanoparticle group than in the RFA-only group (0.08 ± 0.02 vs 0.13 ± 0.05 mL, P =.01). Conclusions: We have demonstrated the efficacy of TNF alpha nanoparticle in enhancing RFA in a translational kidney tumor model. The potential usage of TNF alpha nanoparticle to improve RFA of renal cell carcinoma merits further study / Doutorado / Fisiopatologia Cirúrgica / Doutor em Ciências

Orientador: Selma Giorgio / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-05T22:06:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Albuquerque_MarcosEduardoLamasde_M.pdf: 618346 bytes, checksum: d8a7d01dacd5919516d8000db3c0e660 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: A leishmaniose tegumentar é uma parasitose causada por protozoários do gênero Leishmania que acomete preferencialmente a pele e/ou as mucosas e caracteriza-se pelo aparecimento de lesões ulcerosas. Histologicamente, esta lesão caracteriza-se pela desintegração da epiderme e da membrana basal, com grande incidência de histiócitos, linfócitos, granulomas e proliferação de parasitos. Como conseqüência, a região lesada apresenta redistribuição de vasos sanguíneos, e dificuldades na difusão de oxigênio, resultando em microambiente hipóxico. Macrófagos se adaptam a hipóxia, alterando seu metabolismo, produção de linfocinas e atividade fagocítica. No presente trabalho comparamos os efeitos da hipóxia (6% O2) e da normóxia (21% O2) na infecção in vitro de macrófagos humanos obtidos de monócitos de sangue periférico com o parasito Leishmania amazonensis. Culturas de macrófagos humanos expostos a hipóxia antes da infecção com L. amazonensis mostraram redução na porcentagem de células infectadas quando comparadas com culturas de macrófagos humanos que permaneceram em normóxia. Nós também investigamos se a hipóxia estaria inviabilizando a sobrevivência dos macrófagos (teste do MTT) e induzindo a produção da linfocina TNF-a (boiensaio com células L929). Macrófagos humanos submetidos à hipóxia não mostraram diferenças significativas em relação viabilidade quando comparados aos macrófagos que permaneceram em ambiente normóxico culturas de macrófagos humanos estimulados com LPS e submetidos a períodos de hipóxia produziram mais TNF- a do que culturas de macrófagos estimulados com LPS que permaneceram em normóxia. Porém quando infectados com L. amazonensis, macrófagos estimulados com LPS em hipóxia mostraram produção significativamente menor de TNF- a quando comparados a macrófagos não infectados e estimulados por LPS, em ambiente hipóxico. Verificamos também que a produção de TNF- a nas culturas de macrófagos infectados com L. amazonensis, estimuladas com LPS, em hipóxia foi similar a produção de TNF- a dos macrófagos infectados com L. amazonensis, estimulados com LPS, mas que permaneceram em normóxia. Nossos resultados indicam que hipóxia altera a susceptibilidade de macrófagos humanos obtidos de monócitos de sangue periférico para a infecção com L. amazonensis, e que a produção de TNF- a não está envolvida no mecanismo pelo qual estas células controlam a carga parasitária / Abstract: The tegumentary leishmaniasis is a parasitic disease caused by protozoa Leishmania which attacks skin and/or mucosal tissues. The lesions are histologically characterized by degeneration of epidermal and the basal membranes with infiltration of histiocytes, lymphocytes, granuloma and parasite proliferation. Cutaneous lesions are associated with rearrangement of the blood vessels and decreased oxygen diffusion, resulting in a hypoxic microenvironment. Macrophages adapt to hypoxia altering their metabolism, lymphocytes production and phagocytosis activity. In the present study we have compared the effect of hypoxia (6% O2) with normoxia (21% O2) in human macrophages, derived from peripheral blood monocytes, infected with Leishmania amazonensis. Human macrophages exposed to hypoxia before infection with L. amazonensis showed a reduction of the percentage of infected cells. Cell viability was tested by MTT and TNF- a production was detected by bioassay using cell line L929. Human macrophages exposed to hypoxia showed similar viability when compared with human macrophages in normoxia. Human macrophages stimulated with LPS and exposed to hypoxia increased TNF- a production when compared with macrophage timulated by LPS cultured in normoxia. However, macrophage, infected with L. amazonensis stimulated with LPS and exposed to hypoxia showed a reduction in TNF- a production when compared with non infected macrophage, stimulated with LPS and exposed to hypoxia. We also observed that TNF- a production in L. amazonensis infected macrophages stimulated with LPS and exposed to hypoxia was similar to TNF- a production of infected macrophages stimulated with LPS, in normoxia. Our data indicated that hypoxia cam alter human macrophages susceptibility to L. amazonensis infection and no correlation between TNF-a production and control of parasite infection in this cells under hypoxia conditions / Mestrado / Mestre em Parasitologia

Orientador: Ibsen Bellini Coimbra / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-12T21:15:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sartori_AngelicaRossi_D.pdf: 3838547 bytes, checksum: 0be815456ed0b3b8faf496ae6738da31 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: O Fator Induzido por Hipóxia-1 (Hypoxia Inducible Factor-1 - HIF-1) é um fator de transcrição responsável por transcrever genes relacionados às alterações nas concentrações de oxigênio e sobrevivência celular. A cartilagem articular é um tecido avascular e o ambiente dos condrócitos é caracterizado por condições de hipóxia dentro da matriz. Nestas condições a proteína HIF-1alfa do Fator de transcrição Induzido por Hipóxia-1alfa (HIF-1alfa) é necessário para controlar o metabolismo e a integridade funcional da cartilagem. Além da hipóxia algumas citocinas como IL-1? e TNF? são também capazes de estabilizar HIF-1?, além de serem consideradas as principais mediadoras da osteoartrite (OA). Objetivo: Verificar a participação da IL-1? na regulação do HIF-1? em condições normais de oxigênio; Verificar a utilização da via da Fosfatidil-Inositol-3-Kinase (PI-3K) pelo HIF-1? e analisar a participação HIF-1? na expressão de colágeno tipo II e agrecano e a sua regulação pelas citocinas TNF-? e da IL-1?. Material e Métodos: Condrócitos humanos provenientes de pacientes em OA, submetidos à artroplastia de joelho, foram cutivados em suspensão e em monocamada, submetidos ou não ao silenciamento do gene do HIF-1? pela técnica de Interferência por RNA e estimulados com IL-1?, TNF? e LY294002, o inibidor da via da PI-3K em condições normais de oxigênio e em hipóxia e foram submetidos à extração de proteína nuclear, extração de RNA e precipitação das proteínas do meio de cultura das células. A análise das proteínas foi feita por meio da técnica de Western Blotting para a detecção da proteína nuclear HIF-1? e do colágeno tipo II no meio de cultura das células. O RNA foi analisado pela técnica de PCR em Tempo Real para a quantificaçãos dos genes do HIF-1?, Colágeno tipo II e Agrecano. Resultados: IL-1? aumentou a expressão da proteína nuclear HIF-1?, mas não alterou a expressão do RNAm. Essa modulação utilizou a via da PI-3K. A hipóxia aumentou as concentrações do RNAm do HIF-1? em comparação com as condições normais de oxigênio, mas IL-1? e TNF? não alteraram o RNAm do HIF- 1? em condições normais de oxigênio e em associação com a hipóxia, inibiram o efeito regulatório positivo desta sobre o HIF-1?. A hipóxia isoladamente também aumentou RNAm de colágeno tipo II, o que foi anulado pelo estímulo associado com a IL-1?. Nos grupos de condrócitos com deficiência do HIF-1? (silenciados), em quaisquer condições de oxigênio, IL-1? e TNF? não alteraram significativamente a expressão de HIF-1?, mas em hipóxia, a expressão de colágeno tipo II foi regulada negativamente nesses grupos. A associação entre a falta do HIF-1? e as citocinas diminuiu ainda mais a expressão do colágeno tipo II em condições de hipóxia. Em todas as análises não foram observadas diferenças significativas nas expressões do RNAm do agrecano e na análise do colágeno tipo II das proteínas precipitadas dos meios de cultura das células. Conclusão: IL-1? aumentou a expressão da proteína nuclear HIF-1? pós-transcrição. A regulação do HIF-1? pela IL-1? em situação normal de oxigênio ocorreu, ao menos em parte, pela PI-3K. O HIF-1? se relacionou positivamente com a expressão do gene do colágeno tipo II, principalmente em hipóxia, mas não com os níveis da proteína. Não houve associação com a expressão do gene do agrecano / Abstract: Introduction: Hypoxia Inducible Factor -1 (HIF-1) is a transcription factor that regulates the expression of genes related with oxygen concentration e cellular survive. Articular cartilage is a non-vascular tissue and the condrocytes microenviroment are caracterized by hypoxic conditions inside the extracelluar matrix. In this condition, the protein HIF-1?, from HIF-1 is necessary to the metabolism control and cartilage functional intengrity. Some citokines like IL-1? and TNF?, as well as hypoxia, are capable to stabilize HIF-1? and are essential in oateoarthritis (OA) progression disease. Objective: To verify the participation of IL-1? in the HIF-1? regulation under normal conditions of oxygen; To verify if the pathway of phosphatidilynositol-3-Kinase (PI-3K) is used in this modulation; To analyse HIF-1? participation in the collagen type II and aggrecan gene expression and your regulation by TNF-? and IL-1?. Material and Methods: Human OA chondrocytes were obtained from patients with OA that underwent total knee joint replacement surgery, were cultured either in suspension or monolayer. They were submitted to HIF-1? gene silencing by RNA Interference and lately stimulated with IL-1?, TNF? and LY294002, a specific inhibitor to Phosphatidilinosiltol - 3- Kinase (PI-3K) pathway in normal conditions of oxygen and in hypoxia. The condrocytes were submitted to protein nuclear extraction, RNA extraction and protein precipitation of culture media from the experiments. The proteins were analyzed by Western Blotting to HIF-1? detection in nuclear extraction and collagen type II detection in precipitated media. The RNA were analized by Real Time PCR to HIF- 1?, collagen type II and aggrecan gene quantification. Results: HIF-1? expression is up-regulated by IL-1? at the protein level but not in the mRNA expression. This modulation used, at least in part, the PI-3K pathway. Hypoxia enhanced the mRNA concentrations of HIF-1? when compared with normal conditions of oxygen, but in this cases IL-1? and TNF? did not change mRNA expression of HIF-1?. In association with hypoxia, these citokines inhibited the positive regulatory effect under HIF-1? mRNA expression. Hypoxia up-regulated collagen type II gene expression and that was inhibited by the association with IL-1?. In the groups with lack of HIF-1? (silenced), in both oxygen conditions, IL-1? and TNF? did not cause any significant change of the HIF-1? mRNA expression, but in hypoxia, collagen type II was up-regulated in those groups. The association between the lack of HIF- 1? and citokines down-regulated more strongly collagen type II in hypoxia. In all analyzes it was not observed significant differences in the aggrecan mRNA expression and collagen tipe II protein from cultured media of the cells Conclusion: IL-1? post-trancriptionaly up-regulated the HIF-1? protein level. HIF- 1? regulation by IL-1? in normal conditions of oxygen used, at least in part, the PI- 3K pathway. HIF-1? positively related with gene expression, but not with the protein levels, of collagen type II, mainly in hypoxia. There was no relation in the HIF-1? and aggrecan gene expression / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica