Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-05Bitstream added on 2014-06-13T18:58:51Z : No. of bitstreams: 1 000735355.pdf: 1354100 bytes, checksum: e69296eb81e8a6cd0752363e21364dad (MD5) / O excessivo acúmulo lipídico que acontece ao longo da produção in vitro de embriões (PIVE) tem sido apontado como prejudicial à criopreservação. Como o soro fetal bovino (SFB) é um dos fatores que provoca maior impacto neste acúmulo, e pelo mesmo ser de composição indefinida, procura-se substituí-lo nos meios de cultivo. Entre os possíveis substitutos, está o composto semi-definido, livre de ácidos graxos, a albumina sérica bovina (BSA). O presente estudo teve como objetivo avaliar a influência da BSA e/ou SFB na MIV sobre o acúmulo lipídico nos oócitos e embriões bovinos, e para isso, cinco experimentos foram realizados. No primeiro experimento, demostrou-se que o meio contendo SFB possui dezoito vezes mais lipídeos que o meio contendo apenas BSA como fonte proteica. No segundo experimento, confirmou-se que, ao contrário da maturação in vivo, a maturação in vitro (MIV) provoca acúmulo lipídico, sendo este acúmulo mais acentuado no grupo suplementado exclusivamente com SFB, comparado ao grupo suplementado com BSA, sem observar-se diferença nos tamanhos das gotas oocitárias entre os grupos. Oócitos maturados na presença do SFB apresentaram melhores taxas de maturação nuclear e citoplasmática, porém, mostraram diferenças com relação à quantidade e migração de lipídeos e mitocôndrias em comparação àqueles obtidos após maturação in vivo. Nos experimentos III e IV, observou-se que, além de não levar a uma esperada diminuição da quantidade de lipídeos nos blastocistos produzidos, a BSA na MIV levou a menores taxas de desenvolvimento embrionário. Sobre o tamanho das gotas embrionárias, constatou-se que a MIV suplementada com SFB provoca maior porcentagem de gotas entre 2 a 6 μm de diâmetro comparada a MIV suplementada por ambas as substancias. Além do mais, percebeu-se um aumento do tamanho das gotas ao longo da PIVE independente da suplementação... / The excessive lipid accumulation that occurs during in vitro production of embryos (IVPE) has been described as harmful to cryopreservation. Because fetal bovine serum (FBS) is one of the factors that cause the greatest impact in this accumulation, and because it is an undefined medium supplement, current research is aimed at replacing this supplement in culture media. Among the possible substitutes, there is a semi defined compound, fatty acid free bovine serum albumin (BSA). The present study aimed to evaluate the influence of BSA and/or FBS during IVM on lipid accumulation in oocytes and embryos, and for that, five experiments were performed. The first experiment demonstrated that the medium containing FBS has eighteen times more lipids than the medium containing only BSA as a protein source. In the second experiment, it was confirmed that, unlike in vivo maturation, in vitro maturation (IVM) causes a lipid accumulation, which is more pronounced in the group supplemented only with FBS, compared with BSA group, without showing difference in oocytes droplets sizes between groups. Oocytes matured in the presence of FBS showed better rates of nuclear and cytoplasmic maturation, however, they also showed differences relative to the amount and migration of lipids and mitochondrias in comparison to those obtained after in vivo maturation. In the experiments III and IV, it was observed that the expected decrease in the amount of lipids produced in blastocysts, supplemented solely with BSA, did not take place, and the use of BSA alone in IVM led to lower rates of embryo development. Furthermore, for embryos lipid droplets sizes, a higher percentage of droplets between 2-6μm was observed in IVM supplemented with FBS compared to supplemented with both substances.The last experiment determined the expression of genes involved in lipid synthesis, DGAT2 and PLIN2. Increased expression of PLIN2 and ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-02-13Bitstream added on 2014-06-13T20:59:33Z : No. of bitstreams: 1 goncalves_fs_me_jabo.pdf: 514303 bytes, checksum: 2ff947581f5831ab66e019d8c9ec7990 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Recentemente, tem-se dado atenção crescente aos efeitos deletérios dos radicais livres sobre os oócitos e embriões cultivados in vitro em mamíferos. No entanto, poucos estudos foram conduzidos sobre a ação desses agentes sobre a interação entre o espermatozóide-oócito durante a fertilização in vitro (FIV). Com o intuito de melhorar os resultados da produção in vitro de embriões bovinos, este trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos da suplementação do meio de fecundação in vitro com antioxidantes cisteamina (Cist) e 2-Mercaptoetanol (2-ME) sobre a capacitação espermática, fecundação, qualidade dos zigotos e competência no desenvolvimento embrionário. Os espermatozóides apresentaram o DNA íntegro quase na totalidade entre os diferentes tratamentos e durante o tempo no processo da FIV. / Recently, deleterious effects of free radicals over oocytes and embryos cultivated in vitro in mammals have received increasing attention. Nonetheless, few studies were conducted about the action of those agents over the interaction between the sperm-oocyte during in vitro fertilization (IVF). Aimed at improving results of in vitro production of bovine embryos, this work had as objective to evaluate the effects of supplementation of the in vitro fertilization environment with antioxidants cisteamine (Cist) and 2-Mercaptoethanol (2-ME) over the spermatic capacitation, fertilization, quality of zygotes and competency in the embryonic development. Spermatozoas exhibited an integral DNA almost in the totality of the different treatments and along the time in the IVF process.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-02-26Bitstream added on 2014-06-13T19:38:29Z : No. of bitstreams: 1 tetzner_tad_me_jabo.pdf: 994984 bytes, checksum: dc3b9f9b3b09f1b6ee7040b88cd31ad8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente trabalho objetivou avaliar os efeitos da substituição do SFB e do BSA pela OVA na PIV, por estudos nas etapas de maturação, fecundação e cultivo in vitro. Observamos que durante a etapa de maturação, a concentração 4mg/mL de OVA não afetou a maturação nuclear (82,66%) e a migração de grânulos corticais (GC) para a periferia dos oócitos (54,21%), sendo, portanto, utilizada nos experimentos subseqüentes. Foi observado que as fontes protéicas SFB, BSA, OVA, e BSA com OVA (BO) não afetaram (p>0,05) as taxas de maturação nuclear e migração de GC. Para a sigla dos tratamentos, as fontes protéicas foram identificadas pelas iniciais (SFB=S, BSA=B e OVA=O). Cada tratamento foi abreviado com a primeira letra referente à etapa de maturação, a segunda à fecundação, e a terceira ao cultivo. Quanto às taxas de formação de pronúcleo (PN) observamos que o grupo SO (76,67% de 2 PN) foi semelhante (p>0,05) ao grupo controle (82,95% de 2 PN). A etapa de CIV permitiu avaliar que os diferentes tratamentos foram semelhantes (p>0,05) quanto à taxa de clivagem. Entretanto, quanto à taxa de produção de blastocistos, o grupo OOO (26,0%) foi semelhante (p>0.05) aos grupos SOS (33,8%), BBB (35,8%), BOB (32%), e OBO (33%), mas foi inferior (p<0,05) aos grupos CONT (45%) e SBS (42,8%). Quanto à taxa de eclosão, o grupo OOO (20,4%), foi inferior (p<0,05) aos grupos CONT (46,2%), SBS (43,4%), SOS (38,4%), BBB (41,6%), e semelhante aos grupos BOB (28,2%) e OBO (25,4%). Concluímos que é possível produzir embriões bovinos na ausência de SFB e/ou BSA, com a fonte protéica OVA, embora tanto a quantidade como a qualidade dos blastocistos tenham se apresentado inferiores em relação àqueles produzidos na presença de SFB e/ou BSA. / The present work aimed to evaluate the effects of FCS and BSA substitution for OVA on in vitro production of bovine embryos, studying in vitro maturation, fertilization, and development. For maturation, we observed that the concentration 4mg/mL of OVA didn't affect nuclear maturation (82.66%), and cortical granule (CG) migration (54.21%), which indicated its use in the subsequent experiments. It was observed that the protein sources FBS, BSA, OVA and BO didn't significantly affect (p>0.05) the rates of nuclear maturation and CG migration. For evaluation of pronucleus (PN) formation rates, we observed that the SO group (the first letter means the protein source for the maturation stage, the second for the fertilization, and the third for the development), (76.67% of 2 PN) was similar (p>0.05) to the control group (82.95% of 2 PN). However, two pronucleus formation rates in BB (56.98%), BO (39.02%), OB (37.36%) and OO (39.24%) were different (p<0.05) from the control group (82.95% of 2 PN). Different treatments (CONT, SBS, SOS, BBB, BOB, OOO, OBO) were similar (p>0.05) in cleavage rates. However, regarding to blastocyst production rates, the OOO group (26.0%) was similar (p>0.05) to the SOS group (33.8%), BBB (35.8%), BOB (32%), and OBO (33%) groups, but it was inferior (p <0.05) compared to the CONT (45%) and SBS (42.8%) groups. In relation to blastocyst hatching rate, the OOO group (20.4%) was inferior (p<0.05) when compared to the CONT (46.2%), SBS (43.4%), SOS (38.4%), BBB (41.6%) groups, and it was to BOB (28.2%) and OBO (25.4%) groups. We concluded that it s possible to produce bovine embryos in the absence of FBS and/or BSA using ovalbumin (OVA) as the protein source, even though decreased quantity and quality rates of bovine blastocysts were observed.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-19Bitstream added on 2014-06-13T18:58:54Z : No. of bitstreams: 1 gottardi_fp_me_jabo.pdf: 551122 bytes, checksum: 296df34d2ff79346b4bafb7a4da03dc9 (MD5) / Facta / Butirolactona I (Bl-I) pode ser utilizada em sistemas PIV de embriões para bloquear a meiose durante o transporte de oócitos obtidos de OPU. O objetivo deste estudo foi verificar a concentração de BL-I eficaz durante o transporte de oócito bovinos. Oócitos (n=4581) foram pré-maturados em criotubos contendo meio com 10 ou 100μM de Bl-I, acrescido ou não de HEPES (20mM), no período de 5 horas em estufa portátil Minitub e transferidos para incubadora com atmosfera e temperatura controlada, permanecendo por mais 19 horas. Em seguida foram maturados a 38,5ºC em atmosfera de 5% de CO2 durante 20 horas, fecundados e os zigotos cultivados. Foram avaliadas a maturação nuclear e a maturação citoplasmática após pré-MIV e MIV (24h.-controles e 20h.-tratados). A fertilização foi avaliada após 18 h. da inseminação. Os embriões foram analisados quanto ao seu desenvolvimento e qualidade. Os dados foram avaliados por ANOVA (p<o,o5). A maioria dos oócitos tratados permaneceu em GV e após MIV houve a reversão do bloqueio, mas a eficiência foi menor com 10 μM de Bl-I. A maturação citoplasmática foi beneficiada de acordo a distribuição das mitocôndrias, no entanto, quanto à distribuição dos grânulos corticais apenas o bloqueio realizado com 100 μM Bl-I permitiu uma maturação. A taxa de fecundação foi prejudicada pelo tempo de transporte, mesmo nos oócitos tratados. A ocorrência de polispermia foi correlacionada à porcentagem de oócitos com grânulos corticais imaturos. O desenvolvimento embrionário sofreu um atraso pela utilização de 100μM de Bl-I, porém boa porcentagem de blastocistos de qualidade foi atingida. Assim, o bloqueio com 100μM de Bl-I possui efeitos benéficos na PIV de embriões de oócitos transportados por longo tempo. / Butirolactone-I (Bl-I), can be used in systems for in vitro production (IVP) of embryos to block meiosis during the transport of oocytes from OPU. The objective of this study is to assess the concentration of BL-I more efficient during the transport of bovine oocytes. Oocytes (n = 4581) were prematured in criotubes containing medium with 10 or 100 μM of Bl-I with or without HEPES (20mM) in a portable incubator at 38,5°C without CO2 equilibration in the first 5 h, being later transferred to a incubator at 38.5°C and 5% CO2 in humidified air during the 19 hours remaining. Following were matured, fertilized and the zygotes cultured at 38.5°C and 5% CO2. Were evaluated the nuclear maturation and the cytoplasmic maturation after pre-IVM and after IVM (24h. controls and 20 h. treatments). Fertilization was assessed 18 hours after insemination. The embryos development and quality were analyzed. The data were evaluated by ANOVA (P< 0, 05). Most remained in GV oocytes treated and after IVM was the reversal of the blockage, but the efficiency was lower with 10 μM of Bl-I. The cytoplasmic maturation during the time of meiosis blockage was benefited from the distribution agreement and potential of mitochondria, however, about the distribution of cortical granules only blocking conducted with 100μM Bl-I had a complete maturation. The rate of fertilization was damage by the time of transport, and the meiosis blockage with Bl-I did not improve the percentage of fertilized oocytes. The occurrence of polispermia was correlated with the percentage of oocytes with immature cortical granules. The embryo developmentb was delayed by the use of 100μM of Bl-I, but a good percentage of blastocysts of good quality reached. So, the use of 100μM of Bl-I has beneficial effects on the IPV of embryos from oocytes transported at a long time.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-30Bitstream added on 2014-06-13T19:59:07Z : No. of bitstreams: 1 silva_rb_me_jabo.pdf: 1298125 bytes, checksum: 1ad82f6104f2a03b81c31c4de310d4d7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Foram investigados os efeitos da irradiação com diodos lasers operando em 780 nm (infravermelho) e 660 nm (visível) na maturação, fertilização e cultivo in vitro de embriões bovinos. Verificou-se que a irradiação de oócitos com ambos os lasers, durante 30, 60, 120 e 180 segundos (L30, L60, L120, L180) não afetou (p>0,05) as taxas de maturação nuclear (Infravermelho: L30 - 88,92% vs. C30 – 81,84%; L60 – 83,56% vs. C60 – 87,40%; L120 – 76,06% vs. C120 – 85,30%; L180 – 77,42% vs. C180 - 80,16%; e Visível: L30 – 65,81% vs. C30 – 71,59%; L60 – 62,75% vs. C60 – 69,62%; L120 – 70,38% vs. C120 – 64,04%; L180 – 56,72% vs. C180 – 67,41%), e de maturação citoplasmática, avaliada por meio da distribuição dos grânulos corticais (Infravermelho: L30 – 86,18% vs. C30 – 61,04%; L60 – 66,03% vs. C60 – 56,16%; L120 – 53,75% vs. C120 – 79,81%; L180 – 57,70% vs. C180 – 82,04% e Visível: L30 – 81,08% vs. C30 – 74,42%; L60 – 68,11% vs. C60 – 61,63%; L120 – 75,95% vs. C120 – 48,33%; L180 – 77,77% vs. C180 – 59,52%). As porcentagens de produção embrionária ao sétimo dia de cultivo in vitro não foram alteradas (p>0,05) após a irradiação de oócitos com laser infravermelho (L30 – 29,20% vs. C30 – 42,60%; L60 – 32,0% vs. C60 – 31,0%; L120 – 38,0% vs. C120 – 35,0%; L180 – 37,0% vs. C180 – 32,0%), mas foram reduzidas após a irradiação com laser visível durante 180 seg. (L180 – 36,0% vs. C180 – 56,0 %). A irradiação em espermatozóides com ambos os lasers não afetou (p>0,05) as taxas de clivagem ao terceiro dia de cultivo in vitro (Infravermelho: L30 – 90,0% vs. C30 – 95,83%; L60 – 85,56% vs. C60 – 98,33%; L120 – 90,83% vs. C120 – 90,83%; L180 – 89,72% vs. C180 – 97,50%; e Visível: L30 – 82,96% vs. C30 – 85,61%; L60 – 82,10% vs. C60 – 82,53%; L120 – 80,48% vs. C120 – 82,44%;... / The diodo lasers irradiation effects, operating in 780nm (infrared light) and 660 nm (visible light), were evaluated on in vitro maturation, fertilization and culture rates of bovine embryos. Both infrared and visible laser irradiation on oocytes, during 30, 60, 120 and 180 seconds (30, 60, 120, 180) did not change (p>0,05) the rates of nuclear maturation (Infrared: L30 – 88.92% vs. C30 – 81.84%; L60 – 83.56% vs. C60 – 87.40%; L120 – 76.06% vs. C120 – 85.30%; L180 – 77.42% vs. C180 – 80.16%; and Visible: L30 – 65.81% vs. C30 – 71.59%; L60 – 62.75% vs. C60 – 69.62%; L120 – 70.38% vs. C120 – 64.04%; L180 – 56.72% vs. C180 – 67.41%), and the cytoplasmic cortical granule distribution (Infrared: L30 – 86.18% vs. C30 – 61.04%; L60 – 66.03% vs. C60 – 56.16%; L120 – 53.75% vs. C120 – 79.81%; L180 – 57.70% vs. C180 – 82.04% and Visible: L30 – 81.08% vs. C30 – 74.42%; L60 – 68.11% vs. C60 – 61.63%; L120 – 75.95% vs. C120 – 48.33%; L180 – 77.77% vs. C180 – 59.52%). The in vitro embryo production rates measured on seventh day of culture were not changed (p.0,05) after the infrared laser irradiation (L30 – 29.20% vs. C30 – 42.60%; L60 – 32.0% vs. C60 – 31.0%; L120 – 38.0% vs. C120 – 35.0%; L180 – 37.0% vs. C180 – 32.0%), but they were reduced (p<0,05) after the visible laser irradiation during 180 seconds (L180 – 36.0% vs. C180 – 56.0 %). When spermatozoa were irradiated, both lasers did not change the rates of cleavage (p>0,05) on third day of in vitro culture (Infrared: L30 – 90.0% vs. C30 – 95.83%; L60 – 85.56% vs. C60 – 98.33%; L120 – 90.83% vs. C120 – 90.83%; L180 – 89.72% vs. C180 – 97.50%; and Visible: L30 – 82.96% vs. C30 – 85.61%; L60 – 82.10% vs. C60 – 82.53%; L120 – 80.48% vs. C120 – 82.44%; L180 – 83.53% vs. C180 – 87.15%), the embryo production percentages on seventh day ...(Complete abstract, click electronic access below)

Orientador: Sony Dimas Bicudo / Coorientador: Fernanda da Cruz Landim Alvarenga / Banca: Eunice Oba / Banca: Nereu Carlos Prestes / Banca: José Antonio Visintin / Banca: Lindsay Unno Gimenes / Resumo: Esta pesquisa visou avaliar o perfil de expressão de determinados genes e o potencial de desenvolvimento in vitro de complexos cumulus-oócitos (COCs) de ovinos temporariamente bloqueados no estadio de vesícula germinativa (GV) com uso da roscovitina. Neste contexto, diferentes composições de meio (com e sem soro fetal bovino e gonadotrofinas), tempos (0, 6, 12 e 20 horas) e métodos de cultivo (com e sem cobertura de óleo mineral) foram testados com intuito de garantir a máxima eficiência de inibição meiótica promovida pela roscovitina a 75μM. A avaliação do grau de expansão das células do cumulus, em estereomicroscópio, e do estadio da maturação nuclear, por meio da coloração com Hoescht 33342, revelou que a presença ou ausência de LH, FSH e soro fetal bovino não interferiu no potencial de ação da roscovitina. No entanto, máxima eficiência inibitória foi observada em meio suplementado apenas com soro fetal bovino. Foi constatado ainda que, na ausência de óleo mineral, quantidade significativamente maior de oócitos tratados com roscovitina foi mantida em GV o que reforça a hipótese de lipossolubilidade do referido inibidor. Embora o potencial de inibição meiótica da roscovitina tenha se mantido nos diferentes tempos de cultivo, a exposição prolongada dos COCs ao inibidor afetou de maneira irreversível a expansão do cumulus. Em todas as situações, a inibição meiótica foi completamente reversível após cultivo por 18 horas em meio de maturação livre de inibidor. Sendo assim, para análise da expressão gênica e desenvolvimento embrionário in vitro, foi preconizado o tratamento com roscovitina a 75μM por 6 horas na presença de soro e sem óleo mineral. Nestas condições assim como após a reversibilidade por 18 h, a quantidade relativa da maioria dos genes investigados nas células do cumulus e nos oócitos foi similar ao observado nos COCs não inibidos (controle). Do mesmo modo, não foi ... / Abstract: This study aimed to evaluate the expression profile of certain genes and the potential of in vitro development of sheep cumulus-oocytes complexes (COCs) temporarily arrested at germinal vesicle (GV) stage using roscovitine. In this context, different medium compositions (with and without fetal bovine serum and gonadotropins), times (0, 6, 12 and 20 hours) and methods of culture (with and without mineral oil overlay) were tested in order to ensure maximum efficiency of meiotic inhibition promoted by 75μM roscovitine. The evaluation of cumulus expansion degree, under stereomicroscope, and nuclear maturation stage, by staining with Hoechst 33342, revealed that the presence or absence of LH, FSH and fetal bovine serum did not influence the action potential of roscovitine. However, maximum efficiency of meiotic inhibition was observed in medium supplemented with fetal bovine serum. It was also found that, in the absence of mineral oil overlay, significantly higher quantity of oocytes treated with roscovitine was kept at GV, which reinforces the hypothesis of liposolubility of this inhibitor. Although the potential of meiotic inhibition of roscovitine had remained at different culture times, the prolonged exposure of COCs to inhibitor irreversibly affect the cumulus expansion. In all cases, the meiotic arrest was completely reversible after culture for a further 18 h in inhibitor-free medium. Therefore, for analysis of gene expression and in vitro embryo development, it was chosen the treatment with 75μM roscovitine for 6 h under serum-supplemented medium and without mineral oil overlay. Under these conditions as well as after the reversibility for 18 h, the relative amount of most investigated genes in cumulus cells and oocytes was similar to that observed in the uninhibited COCs (control). Similarly, no difference was found between roscovitine treatment and control with respect to blastocyst rate and quality of embryos obtained. Therefore, ... / Doutor

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Coorientador: Eliandra Antônia Pires Buttler / Coorientador: Maricy Apparício Ferreira / Banca: Ana Paula Coelho Ribeiro / Banca: Idércio Luiz Sinhorini / Banca: Aracélle Elisane Alves / Banca: Naiara Zoccal Saraiva / Resumo: Relativamente ao uso de técnicas de reprodução assistida em canídeos, a maturação e a fertilização in vitro (MIV) e (FIV), tem como principal objetivo a preservação do genoma dos canídeos ameaçados de extinção. Entretanto, os meios de cultivo empregados para maturação são adaptações de metodologias adotadas para outras espécies. Inúmeros estudos avaliaram a suplementação dos meios com gonadotrofinas, estrógeno, progesterona, antioxidantes, proteínas e entre outros, porém, nenhum deles releva a ação seriada de hormônios sobre a maturação de oócitos caninos. Deste modo, o objetivo do presente estudo foi o de avaliar os efeitos da suplementação seriada do meio de maturação com gonadotrofina coriônica humana (hCG) e progesterona (P4), em diferentes momentos do processo de MIV de oócitos caninos. Vinte e três cadelas, com idades entre 1 a 7 foram selecionadas por meio de citologia vaginal, dosagem de progesterona e agrupadas em dois grupos: Fase Folicular (n=12) e Fase Não FolicularDiestro (n=11). Os ovários foram obtidos durante o procedimento de ovariohisterectomia (OH) e somente complexos cumulus-oócito (COCs) grau 1 e diâmetro superior a 120 μm foram selecionados. A avaliação foi feita por meio de microscopia eletrônica de varredura (MEV) e transmissão (MET), antes e após o período de cultivo in vitro por 96h em 5 meios: I (hCG + P4 durante 96 h), II (hCG nas primeiras 48 h de MIV), III (hCG nas primeiras 48h e P4 após 48h), IV (P4 após 48h de MIV) e V (sem suplementação durante 96h de MIV). Os resultados revelaram que a morfologia, assim como a ultraestrutura oocitárias não são afetadas pela fase do ciclo estral. Entretanto, oócitos da fase folicular quando submetidos ao processo de MIV em meios suplementados com hormônios são mais sensíveis e responsivos a sua ação, quando comparados... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: On the use of assisted reproduction techniques in dogs, in vitro, maturation (IVM) and fertilization (IVF) has the main goal to preserve the genome of endangered canids. However, the culture media used for maturation are adapted from those used in other species. Numerous studies evaluated the supplementation with gonadotropins, estrogens, progesterone, antioxidants and proteins on the IVM media, however none of them assessed the effects of a bi-phasic human chorionic gonadotropin (hCG) and progesterone (P4) supplementation on in vitro maturation media of canine oocytes. Thus, the aim of the present study was to evaluate the effects of a bi-phasic system using human chorionic gonadotrophin (hCG) and progesterone (P4) on IVM media of canine oocytes. Twenty-three female dogs, including 12 from follicular phase (FF) and 11 from non-folicular phase (FN) aged 1-7 years underwent ovariohysterectomy (OH). After the procedure, the ovaries were sliced and cumulus-oocyte complexes (COCs) released. Only COCs grade 1, with diameter greater than 120 μm were selected. Scanning electron microscopy (SEM) and transmission (TEM) were carried out before and after 96h of in vitro maturation (IVM) in 5 different culture media: I (TCM-199 + hCG + P4 for 96 h), II (TCM -199 + hCG within 48h of IVM), III (TCM-199 + hCG in the first 48h and after 48h P4), IV (TCM-199 + P4 after 48h of IVM) and V (no hormone supplementation during 96h of IVM. The results revealed that the oocyte morphology and ultrastructure are not affected by the phase of the estrous cycle. However, follicular phase oocytes undergoing IVM are more sensitive and responsive to hormonal supplementation of the IVM media when compared to oocytes from the non-follicular phase. The association or the bi-phasic human chorionic gonadotropin (hCG) and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: José Camisão de Souza / Banca: José Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: Naiara Zoccal Saraiva / Banca: Cássia Maria Barroso Orlandi / Resumo: Raças zebuínas (Bos taurus indicus) e seus cruzamentos têm papel fundamental na pecuária brasileira, e a raça Gir, em especial, acrescenta rusticidade e produtividade nas suas descendentes leiteiras. A produção in vitro de embriões bovinos é uma biotécnica de alto valor econômico, que, aliada à utilização de sêmen sexado para cromossoma X, possibilita a multiplicação com fêmeas de valor genético superior. Foram realizados dois experimentos com o objetivo de avaliar a produção in vitro (PIV) de embriões de doadoras da raça Gir na Fazenda Experimental da EPAMIG, em Uberaba, MG. O experimento 1 (EXP 1) visou verificar o efeito da ablação do folículo dominante sobre os resultados da PIV. No experimento 2 (EXP 2) os efeitos da estação do ano, idade da doadora, DNA mitocondrial materno e efeito do touro sobre a PIV foram estudados. No EXP 1, 42 multíparas e primíparas foram submetidas à aspiração de oócitos (OPU) a partir dos 15 dias pós-parto e a intervalos de 21 dias, sendo efetuada (65 sessões de OPU) ou não (115 sessões de OPU) a ablação do folículo dominante 3 dias antes da aspiração. Das 198 aspirações realizadas foram coletados 3.884 oócitos viáveis, que resultaram em 1.114 blastocistos. O número médio de oócitos viáveis aspirados e de blastocistos por sessão foi de 20,0 ± 10,6 e de 5,70 ± 4,9, respectivamente. Não foram identificados efeito da ordem de parto e aspiração, do dia após o parto para início da coleta e da condição corporal da doadora nos resultados da PIV. No entanto, a produção de blastocistos por sessão foi superior (5,65±1,02 vs. 3,78±0,97) nas vacas que sofreram ablação do folículo dominante (p<0,05). No EXP 2 foram avaliadas 363 aspirações de 85 doadoras fertilizadas com 23 touros diferentes que geraram 6.084 oócitos viáveis, 2.537 embriões, 1.105 gestações... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Zebu breeds (Bos taurus indicus) and its crosses have an essential role on the Brazilian cattle industry, and the Gyr breed, especially, incorporates hardiness and productivity onto its dairy descendants. The in vitro production of bovine embryos is a biotechnique of high economic value, which, combined to the use of sex-sorted semen bearing X chromosomes, allows for the multiplication of superior genetic value dams. Two experiments were conducted to evaluate the in vitro production (IVP) of embryos from Gyr donor cows at the EPAMIG Research Farm in Uberaba, MG, Brazil. Experiment 1 (EXP 1) aimed to verify the effect of ablation of the dominant follicle on IVP results. In experiment 2 (EXP 2), the effects of season, donor age, mitochondrial DNA and sire on IVP were studied. In EXP 1, 42 multiparous and primiparous cows underwent ovum pick up (OPU) after removal (65 OPU sessions- DFR) or non removal (115 OPU sessions- Control) of the dominant follicle 3 days before aspiration, starting from 15 days postpartum at approximately 21 day-intervals. Of the 180 OPU sessions performed, 3,884 viable oocytes were collected, which resulted in 1,114 blastocysts. The overall average numbers of oocytes aspirated and viable blastocysts per session were 20.0 ± 10.6 ± 4.9 and 5.70, respectively. OPU session, parity, calving to OPU interval and donor body condition did not influence IVP results. However, the production of blastocysts per session was higher (5.65 ± 1.02 vs. 3.78 ± 0.97) in DFR-cows (P <0.05). In EXP 2, a total of 363 OPU sessions from 85 donors was studied. Semen from 23 different bulls was used for in vitro fertilization, yielding 6,084 viable oocytes, 2,537 embryos and 1,105 pregnancies overall. Thirty and sixty-day day pregnancy rates after embryo transfer were 41.7% and 39.5%, respectively... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Roberto Calderon Gonçalves / Banca: Nereu Carlos Prestes / Banca: Francisco Leydson Formiga Feitosa / Resumo: O Brasil é líder mundial na produção de embriões por fertilização in vitro (FIV). A FIV contribui para o melhoramento genético do rebanho, contudo, alguns trabalhos indicam que os bezerros nascidos por FIV são mais susceptíveis à doença neonatal e têm maiores taxas de mortalidade neonatal quando comparados a outras técnicas de produção de bezerros como a inseminação artificial (IA) e monta natural. Portanto, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência da forma de concepção, FIV e IA, na sanidade e desenvolvimento de bezerros Brahman nascidos por FIV (Grupo FIV, n = 80) e IA (Grupo IA, n = 20) do nascimento à desmama. Todos os bezerros amostrados eram provenientes de uma mesma propriedade e mamaram o colostro de forma direta ou indireta até seis horas após o nascimento. Amostras sanguíneas destinadas à determinação da atividade sérica da gamaglutamiltransferase (GGT), da gamaglobulina e da concentração sérica de proteína total (PT) foram colhidas de todos os bezerros às 24 horas de vida com o objetivo de avaliar a transferência de imunidade passiva. A duração da gestação e o peso ao nascimento foram significantemente maiores nos bezerros do grupo FIV. Contudo, não foi observada diferença estatística no peso à desmama nos bezerros dois grupos estudados. Também não foi evidenciada diferença significante na ocorrência de partos distócicos, de assistência à ingestão do colostro, de falha de transferência de imunidade passiva (FTIP) e de enfermidades do nascimento à desmama entre os bezerros dos grupos FIV e IA. O peso ao nascimento, a forma de ingestão do colostro e a ocorrência de distocia não foram correlacionados com a FTIP em nenhum dos grupos estudados. Portanto, nas condições estudadas a forma de concepção, FIV ou IA, não influenciou a sanidade e desenvolvimento de bezerros da raça Brahman, e nem interferiu na aquisição de imunidade passiva / Abstract: Recent data ranked Brazil as the leading country in the production of in vitro-fertilization (IVF) bovine embryos. IVF embryos contributes to the genetic improvement, however, some reports indicate that calves derived from IVF embryos are more susceptible to neonatal disease and have higher rates of neonatal mortality than calves produced through artificial insemination (AI) or natural mating. Therefore the goal of the present study was to evaluate the influence of conception method, IVF embryos and AI, in health and development of Brahman calves derived from IVF (Group IVF, n = 80) and from AI (Group AI, n = 20) from birth to weaning. All of the calves were from same farm and received colostrum within 6 hours of birth. Blood samples were obtained from calves at 24 hours of life to determine the activity gammaglutamyltransferase (GGT) and gammaglobulin and serum total protein (PT) concentration to evaluate passive transfer of maternal immunity. Gestation period and birth weight were significantly higher in claves from IVF group. However, there was no statistically difference in the weaning weight calves in both groups. The occurrence of dystocia, to assistance to provide colostrums, passive transfer of maternal immunity and of diseases from birth to weaning was not significantly different in the two groups. No correlation was observed among birth weight, the form of colostrum ingestion and dystocia occurrence, and passive immunity failure in both groups. Therefore, under study conditions the conception method, IVF or AI, did not influence the health and performance of Brahman calves, and not interfere with the acquisition of passive immunity / Mestre

Resumo: Foram investigados os efeitos da irradiação com diodos lasers operando em 780 nm (infravermelho) e 660 nm (visível) na maturação, fertilização e cultivo in vitro de embriões bovinos. Verificou-se que a irradiação de oócitos com ambos os lasers, durante 30, 60, 120 e 180 segundos (L30, L60, L120, L180) não afetou (p>0,05) as taxas de maturação nuclear (Infravermelho: L30 - 88,92% vs. C30 - 81,84%; L60 - 83,56% vs. C60 - 87,40%; L120 - 76,06% vs. C120 - 85,30%; L180 - 77,42% vs. C180 - 80,16%; e Visível: L30 - 65,81% vs. C30 - 71,59%; L60 - 62,75% vs. C60 - 69,62%; L120 - 70,38% vs. C120 - 64,04%; L180 - 56,72% vs. C180 - 67,41%), e de maturação citoplasmática, avaliada por meio da distribuição dos grânulos corticais (Infravermelho: L30 - 86,18% vs. C30 - 61,04%; L60 - 66,03% vs. C60 - 56,16%; L120 - 53,75% vs. C120 - 79,81%; L180 - 57,70% vs. C180 - 82,04% e Visível: L30 - 81,08% vs. C30 - 74,42%; L60 - 68,11% vs. C60 - 61,63%; L120 - 75,95% vs. C120 - 48,33%; L180 - 77,77% vs. C180 - 59,52%). As porcentagens de produção embrionária ao sétimo dia de cultivo in vitro não foram alteradas (p>0,05) após a irradiação de oócitos com laser infravermelho (L30 - 29,20% vs. C30 - 42,60%; L60 - 32,0% vs. C60 - 31,0%; L120 - 38,0% vs. C120 - 35,0%; L180 - 37,0% vs. C180 - 32,0%), mas foram reduzidas após a irradiação com laser visível durante 180 seg. (L180 - 36,0% vs. C180 - 56,0 %). A irradiação em espermatozóides com ambos os lasers não afetou (p>0,05) as taxas de clivagem ao terceiro dia de cultivo in vitro (Infravermelho: L30 - 90,0% vs. C30 - 95,83%; L60 - 85,56% vs. C60 - 98,33%; L120 - 90,83% vs. C120 - 90,83%; L180 - 89,72% vs. C180 - 97,50%; e Visível: L30 - 82,96% vs. C30 - 85,61%; L60 - 82,10% vs. C60 - 82,53%; L120 - 80,48% vs. C120 - 82,44%; ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The diodo lasers irradiation effects, operating in 780nm (infrared light) and 660 nm (visible light), were evaluated on in vitro maturation, fertilization and culture rates of bovine embryos. Both infrared and visible laser irradiation on oocytes, during 30, 60, 120 and 180 seconds (30, 60, 120, 180) did not change (p>0,05) the rates of nuclear maturation (Infrared: L30 - 88.92% vs. C30 - 81.84%; L60 - 83.56% vs. C60 - 87.40%; L120 - 76.06% vs. C120 - 85.30%; L180 - 77.42% vs. C180 - 80.16%; and Visible: L30 - 65.81% vs. C30 - 71.59%; L60 - 62.75% vs. C60 - 69.62%; L120 - 70.38% vs. C120 - 64.04%; L180 - 56.72% vs. C180 - 67.41%), and the cytoplasmic cortical granule distribution (Infrared: L30 - 86.18% vs. C30 - 61.04%; L60 - 66.03% vs. C60 - 56.16%; L120 - 53.75% vs. C120 - 79.81%; L180 - 57.70% vs. C180 - 82.04% and Visible: L30 - 81.08% vs. C30 - 74.42%; L60 - 68.11% vs. C60 - 61.63%; L120 - 75.95% vs. C120 - 48.33%; L180 - 77.77% vs. C180 - 59.52%). The in vitro embryo production rates measured on seventh day of culture were not changed (p.0,05) after the infrared laser irradiation (L30 - 29.20% vs. C30 - 42.60%; L60 - 32.0% vs. C60 - 31.0%; L120 - 38.0% vs. C120 - 35.0%; L180 - 37.0% vs. C180 - 32.0%), but they were reduced (p<0,05) after the visible laser irradiation during 180 seconds (L180 - 36.0% vs. C180 - 56.0 %). When spermatozoa were irradiated, both lasers did not change the rates of cleavage (p>0,05) on third day of in vitro culture (Infrared: L30 - 90.0% vs. C30 - 95.83%; L60 - 85.56% vs. C60 - 98.33%; L120 - 90.83% vs. C120 - 90.83%; L180 - 89.72% vs. C180 - 97.50%; and Visible: L30 - 82.96% vs. C30 - 85.61%; L60 - 82.10% vs. C60 - 82.53%; L120 - 80.48% vs. C120 - 82.44%; L180 - 83.53% vs. C180 - 87.15%), the embryo production percentages on seventh day ...(Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: César Roberto Esper / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Nivaldo Antonio Parizotto / Mestre