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Estudo da ação de um indutor peroxissomal em fibroblastos de pacientes com doença de Niemann-Pick tipo CBeheregaray, Ana Paula Costa January 2002 (has links)
Resumo não disponível.
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Efectos del condensado de humo de cigarrillo y nicotina sobre la migración y diferenciación miofibroblástica en fibroblastos gingivales humanosSilva Vargas, Daniel Ignacio January 2010 (has links)
Memoria para optar el título de Bioquímico / Si bien la exposición al humo de cigarrillo puede comprometer la capacidad de reparación de los tejidos gingivales, el papel de los elementos que componen el humo de cigarrillo ha sido, a la fecha, poco caracterizado. El presente estudio fue desarrollado con el fin de analizar el papel de la nicotina y del condensado de humo de cigarrillo (CHC) sobre la viabilidad celular, migración e invasión celular, y diferenciación miofibroblástica en cultivos primarios de fibroblastos gingivales humanos (FGH).
Los FGH fueron estimulados con concentraciones de nicotina equivalentes a la descrita en el plasma de fumadores crónicos. A su vez, se utilizaron concentraciones de CHC proporcionales al contenido de nicotina en un cigarrillo de investigación. La viabilidad de FGH expuestos a CHC y nicotina fue evaluada mediante el ensayo de MTS. La migración celular fue analizada a través de ensayos de cierre de heridas, migración en nido y sistemas de invasión bicameral. El nivel relativo del marcador de miofibroblastos, actina muscular alfa (α-SMA), fue evaluado mediante Western-blot.
A bajas concentraciones de CHC (50 μg/mL), pero no de nicotina, los FGH experimentaron un incremento en la viabilidad celular. A mayores concentraciones de CHC (sobre 200 μg/mL) y de nicotina, sólo el CHC indujo muerte celular. Tanto la nicotina como el CHC indujeron un estímulo sobre la migración celular (50 μg/mL CHC; 3,2 μg/mL nicotina), seguido por una disminución en esta respuesta sólo frente al CHC (150 μg/mL). Tanto la nicotina como el CHC disminuyeron los niveles relativos de α-SMA. El CHC puede estimular la viabilidad y migración celular a bajas concentraciones e inhibir estas respuestas a mayores niveles de exposición. Tanto la nicotina como el CHC pueden inhibir la diferenciación de miofibroblastos. Por otro lado, la nicotina no afecta la migración celular, como ha sido propuesto en estudios previos.
Los resultados de la presente tesis contribuyen a comprender los efectos del tabaquismo, y más específicamente de nicotina y de la fase particulada del humo de cigarrillo sobre la capacidad de reparación de células del tejido gingival humano
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Interação funcional entre o receptor do peptídeo liberador de gastrina (GRPR) e o fator de crescimento de fibroblastro básico (bFGF) na formação da memória no hipocampo dorsalPreissler, Thales January 2008 (has links)
O peptídeo liberador da gastrina (GRP), pertencente à família dos peptídeos semelhantes à bombesina, e seus receptores (GRPR) estão presentes em todo o sistema nervoso central, em particular em áreas límbicas cerebrais como o hipocampo e a amídala, as quais estão envolvidas de forma importante na regulação emocional, na função cognitiva e, possivelmente, em transtornos neuropsiquiátricos e neurodegenerativos. Crescentes evidências indicam que o receptor do peptídeo liberador de gastrina (GRPR) está envolvido na regulação da plasticidade sináptica e formação da memória no hipocampo e em outras áreas cerebrais. Entretanto, o mecanismo molecular do efeito prejudicial da memória do antagonismo do GRPR não está claro. O fator de crescimento de fibroblasto básico (bFGF/FGF-2), é um peptídeo que possui efeitos estimulatórios na proliferação, diferenciação e motilidade de diferentes tipos celulares. Em neurônios atua como um fator neurotrófico que estimula a sobrevida neuronal e neurogênese. Evidências de interações entre o bFGF e o GRPR foram dadas por estudos que mostraram que antagonistas do GRPR inibiam a expressão do bFGF em tumores. Neste trabalho mostramos que o fator de crescimento de fibroblasto básico (bFGF/FGF-2) recupera o prejuízo da memória induzida pelo antagonismo do GRPR no hipocampo dorsal de ratos. O antagonista [D-Tpi6, Leu13 psi(CH2NH)-Leu14] bombesin (6–14) (RC- 3095) na dose de 1.0 Tg prejudica, enquanto o bFGF na dose de 0,25 Tg aumenta a retenção da esquiva inibitória (um tipo de tarefa de condicionamento aversivo) quando infundidos imediatamente após o treino, na área CA1 do hipocampo dorsal em ratos machos. A coinfusão com uma dose sem efeito de bFGF bloqueou o efeito amnésico do RC- 3095. Estes achados sugerem que o efeito prejudicial dos antagonistas do GRPR devem ser parcialmente mediados pela inibição da função e/ou expressão do bFGF neuronal e pela diminuição da ativação das cascatas de proteína cinases intracelulares associadas com a sinalização do bFGF. / Gastrin-releasing peptide (GRP), a bombesin-like peptide, and its receptor, GRP receptor (GRPR) are found throughout the central nervous system (CNS), including limbic areas such as the hippocampus and amygdala, which are significantly involved in emotional responses, cognitive function, and, possibly, neurodegenerative and neuropsychiatric disorders. Increasing evidence indicates that the gastrin releasing peptide receptor (GRPR) is implicated in regulating synaptic plasticity and memory formation in the hippocampus and other brain areas. However, the molecular mechanisms underlying the memory-impairing effects of GRPR antagonism have remained unclear. bFGF is a polypeptide displaying stimulatory actions on proliferation, differentiation and motility of different cell types. In neurons, bFGF acts as neurotrophic factor that stimulates neuronal survival, and neurogenesis. Evidence of functional interactions between bFGF and the GRPR was provided by studies showing that GRPR antagonists inhibit the expression of bFGF in tumours. Here we report that basic fibroblast growth factor (bFGF/FGF-2) rescues the memory impairment induced by GRPR antagonism in the rat dorsal hippocampus. The GRPR antagonist [D-Tpi6, Leu13 psi(CH2NH)-Leu14] bombesin (6–14) (RC-3095) at 1.0g impaired, whereas bFGF at 0.25g enhanced, 24 h retention of inhibitory avoidance (IA) when infused immediately after training into the CA1 hippocampal area in male rats. Coinfusion with an otherwise ineffective dose of bFGF blocked the memory-impairing effect of RC-3095. These findings suggest that the memory-impairing effects of GRPR antagonists might be partially mediated by an inhibition in the function and/or expression of neuronal bFGF or diminished activation of intracellular protein kinase pathways associated with bFGF signaling.
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Caracterização imunoistoquímica de fibroblastos associados ao câncer em carcinoma epidermoide de bocaDourado, Raísa Cavalcante January 2016 (has links)
Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandarego@gmail.com) on 2016-09-05T16:15:43Z
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Dissertação_ODONTO_ Raísa Cavalcante Dourado.pdf: 1340259 bytes, checksum: 25efba36317cd74e62607e5bd27b5970 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-06T13:14:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Dissertação_ODONTO_ Raísa Cavalcante Dourado.pdf: 1340259 bytes, checksum: 25efba36317cd74e62607e5bd27b5970 (MD5) / CAPES / Os miofibroblastos são células diferenciadas contráteis com capacidade para
secretar componentes da matriz extracelular, citocinas, proteases e fatores próangiogênicos.
Em processos neoplásicos como o Carcinoma Epidermoide de
Boca (CEB), os miofibroblastos são reconhecidos como Fibroblastos Associados
ao Câncer (FAC) e têm participação ativa no processo de progressão tumoral.
Visto que a presença de FAC no estroma tumoral pode representar um parâmetro
importante de invasão e proliferação, o presente trabalho visou avaliar a presença
de FAC em CEB através de imunofenotipagem e sua associação com a
classificação histológica de FAC e parâmetros clínicopatológicos. Foram utilizados
34 casos de CEB parafinados e fixados em formalina para determinação do
imunofenótipo FAC, sendo considerado positivo pela co-expressão proteica à α-
SMA, Fibronectina, FSP1, HHF35 e Vimentina através de imunoistoquímica. Em
19 casos (56%) o imunofenótipo foi positivo para FAC e em 15 casos (44%) o
imunofenótipo foi variável. De acordo com a classificação histológica de FAC, 16
casos (47%) foram considerados com o fenótipo de FAC maduro, e 18 casos
(53%) como fenótipo FAC imaturo. O imunofenótipo FAC foi associado ao tipo
histológico FAC imaturo (p<0,05, Teste Exato de Fisher). Sendo assim,
caracterização de FAC pelo imunofenótipo pode indicar em CEB, tumores com
perfil biológico distinto, Estudos que ampliem a abordagem de FAC em CEB são
necessários para estabelecer o real papel desse grupo celular como possível
marcador prognóstico.
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Expressão de marcadores de células germinativas e de oócitos em fibroblastos bovinos tratados com 5-aza-citidina e em células-tronco adultas cultivadas in vitro na presença de BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular / Expression of markers for germ cells and oocytes in cow dermal fibroblast treated with 5-aza-cytidine and adult stem cells in vitro cultured in presence of BMP-2, BMP-4 or follicular fluidCosta, José Jackson do Nascimento January 2016 (has links)
COSTA, José Jackson do Nascimento. Expressão de marcadores de células germinativas e de oócitos em fibroblastos bovinos tratados com 5-aza-citidina e em células-tronco adultas cultivadas in vitro na presença de BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular. 2016. 207 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Jairo Viana (jairo@ufc.br) on 2016-08-31T20:28:44Z
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Previous issue date: 2016 / This study aimed to investigate the effect of 5-Aza-cytidine during induction of pluripotency, and evaluate the effects of culture in medium containing BMP-2, BMP-4 or follicular fluid in the differentiation of fibroblasts in primordias germ cells (CGP) and oocytes (stage 1). Furthermore, isolation of stem cells from the bovine ovarian epithelium and evaluate the effects of BMP-2, BMP-4 or follicular fluid on the differentiation of these stem cells into structures similar to oocytes (stage 2). In phase 1, fibroblasts were treated with 0.5, 1.0 or 2.0 μM of 5-Aza for 18, 36 or 72 h. Morphology cell viability and gene expression (OCT-4, NANOG, SOX2 and REX), were assessed, for the selection of the concentration/time more efficient. The fibroblasts were then cultured in medium supplemented with 10 ng/mL BMP-2 or 10 ng/mL BMP-4 or 5% bovine follicular fluid by 7 or 14 days. Subsequently, evaluation of the morphology and cell viability was taken, and gene expression (VASA, DAZL, c-Kit, SCP3, ZPA and GDF-9). For phase 2, the stem cells of ovarian surface were isolated, expanded, grown in differentiation medium containing 50 ng/mL BMP-2 or 50 ng/mL BMP-4, or BMP-2+BMP-4 or 5% bovine follicular fluid for 14 days. Morphological characteristics, cell viability and expression of alkaline phosphatase and gene expression (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA and GDF-9), were evaluated. The gene expression results were analyzed using ANOVA followed by Kruskal-Wallis test (P <0.05). In stage 1, the culture with 2.0 μM of 5-Aza for 72 h caused changes in morphology and cell proliferation rate, and significantly increased the expression of pluripotency factors. The culture in medium containing BMP-2, BMP-4 or follicular fluid for 7 or 14 days, altered cellular morphology, and expression of specific genes for stem cells and oocytes. In stage 2, the ovarian stem cells expressed pluripotent genes, and after culture, this cells showed morphologic characteristics similar to PGC and oocytes, including the expression of alkaline phosphatase, and the expression of specific genes for PCG and oocytes. In conclusion, the present study describes the possibility of conversion of the skin fibroblasts and stem cells from ovarian surface of the bovine, in oocyte-like cells, similar oocyte cells, through the cell reprogramming process associated with the supplementation of BMP-2, BMP- 4 and follicular fluid. / Este estudo teve como objetivo investigar o efeito da 5-Aza-citidina durante a indução da pluripotência, e avaliar os efeitos do cultivo em meio contendo BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular na diferenciação de fibroblastos em células germinativas primordias (CGP) e oócitos (fase 1). Além disso, isolar células-tronco do epitélio ovariano de bovinos e avaliar os efeitos da BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular sobre a diferenciação destas células-tronco em estruturas semelhantes a oócitos (fase 2). Na fase 1, os fibroblastos foram tratados com 0.5, 1,0 ou 2.0 μM de 5-Aza por 18, 36 ou 72 h. Foi avaliada a morfologia, viabilidade celular e a expressão gênica (OCT-4, NANOG, REX e SOX2), para a seleção da concentração/tempo mais eficientes. Os fibroblastos foram então cultivados em meio suplementado com 10 ng/mL de BMP-2, ou 10 ng/mL de BMP-4 ou 5% de fluido folicular bovino, por 7 ou 14 dias. Posteriormente, foi feita a avaliação da morfologia e viabilidade celular, e expressão gênica (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA e GDF-9). Para a fase 2, as células-tronco da superfície ovariana foram isoladas, expandidas, cultivadas em meio de diferenciação contendo as 50 ng/mL de BMP-2, ou 50 ng/mL de BMP-4, ou BMP-2+BMP-4 ou 5% de fluido folicular bovino por 14 dias. Foram avaliadas as características morfológicas, viabilidade celular, e expressão da fosfatase alcalina e expressão gênica (VASA, DAZL, C-KIT, SCP3, ZPA e GDF-9). Os resultados de expressão gênica foram analisados usando ANOVA seguido pelo Teste de Kruskal Wallis (P<0,05). Na fase 1, o cultivo com 2.0 μM de 5-Aza por 72 h provocou mudanças na morfologia e na taxa de proliferação celular, e aumentou significativamente a expressão de fatores de pluripotência. Já o cultivo em meio contendo BMP-2, BMP-4 ou fluido folicular, durante 7 ou 14 dias, alterou a morfologia celular, e a expressão de genes específicos para células germinativas e oócitos. Na fase 2, as células-tronco do ovário expressaram genes de pluripotência e após o cultivo, as células apresentaram características morfológicas que se assemelhavam a CGP e a células semelhantes a oócitos, incluindo a expressão da fosfatase alcalina e a expressão de genes específicos de células germinativas e oócitos. Em conclusão, o presente estudo descreve a possibilidade de converter os fibroblastos da pele de bovinos e células-tronco da superfície ovariana, em células semelhantes a oócitos, através do processo de reprogramação celular, associado à suplementação do meio com BMP-2, BMP-4 e fluido folicular.
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Polissacarídeos sulfatados de algas marinhas: formulação de géis e análise dos seus efeitos na cicatrização em experimentos in vivo e in vitro. / Sulphate polystacarides of seaweeds: formulation of gels and analysis of their effects on wound healing in in vivo and in vitro experiments.Ribeiro, Natássia Albuquerque January 2016 (has links)
RIBEIRO, Natássia Albuquerque. Polissacarídeos sulfatados de algas marinhas: formulação de géis e análise dos seus efeitos na cicatrização em experimentos in vivo e in vitro. 2016. 132 f. Tese (Doutorado em Bioquímica)-Universidade Federal Ceará, Fortaleza, 2016. / Submitted by Anderson Silva Pereira (anderson.pereiraaa@gmail.com) on 2017-01-24T18:50:21Z
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Previous issue date: 2016 / The use of marine algae as potential tools for obtaining pharmaceuticals has shown a worldwide trend and has grown substantially over the last two decades. Bioactive Molecules obtained from seaweeds such as proteins, carbohydrates, phenolics, polyunsaturated fatty acids, terpenoids, etc. they showed numerous biological activities. Among these molecules, it highlights the sulfated polysaccharides from seaweed. This work aimed to evaluate the effect of the healing potential gels developed from sulfated polysaccharide of seaweed: Caulerpa racemosa (CrII), Cryptonemia crenulata (CcII) e Gracilaria birdiae (GbI), native of Ceará in healing in vivo and in vitro models. The sulfated polysaccharides were obtained by chromatographic procedure of ion exchange. The macromolecules obtained were evaluated in toxicological testing and analyzed for their potential to interfere in the central nervous system (CNS). Later, it was used in procoagulant in vitro/ex vivo and antibacterial activity experiments. Then the sulfated polysaccharides were used in the formulation of gels that were evaluated for their dermal irritant for 7 days, which was analyzed macroscopic skin reactions, skin thickness and the amount of exudate present in the tissue. The gels were applied to wounds in healthy mice induced by mechanical trauma and evaluated for their potential healing for 15 days. A histopathological evaluation was performed to prove the efficiency of the gels in the treatment of injuries. CcII was used in in vitro experiments where it was observed its potential adhesion, proliferation and cytotoxicity using HaCaT cells. Finally, CcII was evaluated in a 3D model of human skin equivalent (3D EPHS) for 7 days, which was analyzed parameters such as re-epithelialization area and lateral migration of keratinocytes. The results obtained showed that CrII, CcII and GbI present income 20.5%; 21.3% and 23.6%, respectively, and shown to be non-toxic and without CNS effects. In the coagulant test, CrII shown to be pro-coagulant and CcII showed anticoagulant activity in APTT assay in vitro. However, these activities have not been confirmed in the ex vivo assay. The GbI polysaccharide showed no anticoagulant and procoagulant activities in any of the assays tested. CrII, CcII and GbI showed no antibacterial activity against gram-negative and gram-positive bacteria. The gels formulated with CrII, CcII and GbI were not irritating in a skin irritation model in mice. And, when tested in wounds, only the gel formulated with CcII presented healing effect. Considering this fact, CcII was evaluated in experiments in vitro where it was not able to cause adherence, proliferation and cytotoxicity in HaCaT cells. CcII when analysed in the 3D EPHs model has a healing effect, accelerating the process of re-epithelization, and keratinocytes migrating. In view of the results obtained, CcII has a promising potential for formulating bioproduct with a healing activity. / A utilização de algas marinhas como ferramentas potenciais para a obtenção de produtos farmacêuticos tem se mostrado uma tendência mundial e cresceu substancialmente nas duas últimas décadas. Moléculas bioativas obtidas a partir de algas marinhas tais como proteínas, carboidratos, compostos fenólicos, ácidos graxos poliinsaturados, terpenóides etc. possuem inúmeras atividades biológicas. Dentre essas moléculas, destacam-se os polissacarídeos sulfatados de algas marinhas. Este trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia do potencial cicatrizante de géis desenvolvidos à base de polissacarídeos sulfatados das algas marinhas: Caulerpa racemosa (CrII), Cryptonemia crenulata (CcII) e Gracilaria birdiae (GbI), nativas do litoral cearense em modelos de cicatrização in vivo e in vitro. Os polissacarídeos sulfatados foram obtidos por procedimento cromatográfico de troca iônica. As macromoléculas obtidas foram avaliadas em ensaio toxicológico e analisadas quanto ao seu potencial de interferir no sistema nervoso central (SNC). Posteriormente foram utilizadas em experimentos de atividades pró-coagulante in vitro/ex vivo e antibacteriana. Em seguida os polissacarídeos sulfatados foram utilizados na formulação de géis que foram avaliados quanto à sua irritabilidade dermal durante 7 dias, onde foi analisado as reações dermatológicas macroscópicas, espessura da pele e o valor de exsudato presente no tecido. Os géis foram aplicados em feridas induzidas em camundongos sadios por trauma mecânico e avaliados quanto ao seu potencial cicatrizante durante 15 dias. Uma avaliação histopatológica foi realizada para comprovação da eficiência dos géis no tratamento das lesões. CcII foi utilizado em experimentos in vitro onde foi observado o seu potencial de aderência, proliferação e citotoxicidade utilizando células HaCaT. E por fim, CcII foi avaliado em um modelo 3D de equivalentes de pele humana (3D EPHs) durante 7 dias, onde foi analisado parâmetros como área de re-epitelização e migração lateral dos queratinócitos. Os resultados observados demonstraram que CrII, CcII e GbI apresentaram rendimentos de 20,5%; 21,3% e 23,6%, respectivamente, e mostraram-se atóxicos e sem efeitos sobre o SNC. No ensaio de atividade pró-coagulante CrII demonstrou ser pró-coagulante e CcII apresentou atividade anticoagulante no ensaio do APTT in vitro. Entretanto, estas atividades não foram confirmadas no ensaio ex vivo. O polissacarídeo de GbI não apresentou atividades anticoagulante e pró-coagulante em nenhum dos ensaios testados. CrII, CcII e GbI não apresentaram atividade antibacteriana frente às bactérias gram-negativa e gram-positiva. Os géis formulados com CrII, CcII e GbI não se mostraram irritantes em um modelo de irritação cutânea em camundongos. E quando testados em feridas, apenas o gel formulado com CcII apresentou efeito cicatrizante. Diante deste fato, CcII foi avaliada em experimentos in vitro, em que, não foi capaz de provocar a aderência, proliferação e citotoxidade em células HaCaT. CcII quando analisada no modelo 3D EPHs apresentou um efeito cicatrizante, acelerando o processo de re-epitelização e migração dos queratinócitos. Tendo em vista os resultados obtidos, CcII apresenta um potencial para formulação de um bioproduto promissor com uma função de cicatrização.
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BK modula la expresión de moléculas pro-inflamatorias inducidas por activación del TLR4 en fibroblastos cardiacos neonatosFernández Sandoval, Samuel Esteban January 2016 (has links)
Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / Los fibroblastos cardiacos son las principales células encargadas de la reparación y mantenimiento de la matriz extracelular del tejido cardiaco, aunque en los últimos años se ha determinado que pueden secretar y responder a citoquinas y quimioquinas pro inflamatorias. También se ha determinado que poseen el receptor TLR4, el cual es capaz de responder a PAMPS (como LPS), sugiriendo así que el fibroblasto cardiaco tiene un rol clave en el proceso inflamatorio cardiaco gatillado por un daño o patógeno.
Las cininas son péptidos pro inflamatorios asociados principalmente a la vasodilatación y a la formación de edema cuando se unen a sus receptores en el sitio de injuria. Se ha demostrado que el fibroblasto cardiaco posee de forma constitutiva receptor B2 (cuyo ligando es BK), no así receptor B1 (cuyo ligando es DAKD), ya que este último es inducible en este fenotipo celular.
Se ha descrito en células endoteliales que tanto LPS, así como también las cininas, son capaces de aumentar los niveles proteicos de moléculas de adhesión celular (ICAM-1 y VCAM-1), favoreciendo así la adhesión de células del sistema inmune al sitio de daño. Sin embargo, se desconoce si los fibroblastos cardiacos tratados de manera conjunta con cininas y LPS modulan la expresión de estas moléculas de adhesión.
Mediante análisis de inmunowestern blot se demostró que LPS aumentó considerablemente los niveles proteicos de las moléculas de adhesión desde las 8 hasta las 48 h, mientras que no se observó efecto con BK o DAKD, sugiriendo así que el efecto pro inflamatorio de las cininas no favorecería de manera directa la adhesión de células del sistema inmune a los fibroblastos cardiacos. Por otro lado, se determinó que BK aumentó de forma significativa los niveles proteicos de TLR4 a las 72 h y a su vez que disminuyó los niveles basales de -SMA en fibroblasto cardiaco. También se determinó que el pre tratamiento por 48 h con BK moduló negativamente la acción de LPS sobre VCAM-1 a las 24 h.
Estos resultados en conjunto indican que el pre tratamiento de fibroblastos cardiacos con BK es capaz de evitar la diferenciación de estos a miofibroblastos, favoreciendo así una respuesta pro inflamatoria y antifibrótica por parte de estos / Cardiac fibroblasts are the main cells responsible for the repair and maintenance of cardiac matrix. Although in the last years has been determined to be able of secreting and also respond to proinflammatory cytokines and chemokines (IL-1 and TNF-). Also it has been determined the presence of TLR4, which is able to respond to PAMPs (such as LPS), suggesting that cardiac fibroblast has a key role in cardiac inflammatory process triggered by damage or pathogen.
Kinins are proinflammatory peptides mainly associated to vasodilation and edema formation when are bind to their receptors at the site of injury. It has been shown that cardiac fibroblast express constitutively B2 receptor (whose ligand is BK), not B1 receptor (whose ligand is DAKD), since the latter is inducible in this cell phenotype.
It has been described that LPS and kinins are able to increase protein levels of celular adhesion molecules (ICAM-1 and VCAM-1) in endothelial cells, thus enhancing the adhesion of immune cells to the site of injury. However, it is unknown whether cardiac fibroblasts treated together with kinins and LPS modulate the expression of these adhesion molecules.
Through analysis of immuno western blot it was determined that LPS is able to significantly increase the protein levels of adhesion molecules from 8 to 48 hours, not BK and DAKD, thus suggesting that the proinflammatory effect of kinins are not directly linked to the adhesion of immune system cells. Furthermore, it was determined that BK can significantly increase TLR4 protein levels at 72 hours and in turn is capable of decreasing basal levels of -SMA in cardiac fibroblast. It was also determined that pretreatment for 48 hours with BK is able to modulate negatively the action of LPS on VCAM-1 at 24 hours.
These results together indicate that pretreatment of cardiac fibroblasts with BK is capable of preventing differentiation of these to myofibroblast, thus supporting a proinflammatory response from these
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Papel regulatório do TGF-\03B2 na matriz extracelular em diversos tipos celulares e seu efeito após infecção pelo Trypanosoma cruziSilva, Tatiana Araújo January 2015 (has links)
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Previous issue date: 2016-02-23 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / As manifestações mais severas da doença de Chagas são a cardiomiopatia e fibrose cardíaca, mas o tecido muscular esquelético também é afetado pela infecção pelo T. cruzi, resultando em necrose e miosite. O acúmulo de matriz extracelular (MEC) durante o processo de fibrose está envolvido com a patogenia da doença de Chagas, mas seus mecanismos de regulação durante a infecção ainda não estão elucidados. Assim, nos propomos a comparar a resposta de cardiomiócitos (CM), fibroblastos cardíacos (FC) e mioblastos esqueléticos (L6E9) infectados pelo T. cruzi frente ao estímulo de TGF-\03B2, importante citocina fibrogênica envolvida no desenvolvimento da cardiomiopatia chagásica, analisando também os mecanismos de sinalização envolvidos neste processo. FC foram purificados a partir de culturas de CM. Purificação adequada de FC foi obtida somente a partir da 5ª dissociação de culturas de CM, revelada pela baixa detecção de desmina, proteína específica de cardiomiócitos. Culturas de CM, FC e L6E9 normais e infectados pelo T. cruzi (cepa Y) foram tratadas por 1h ou 48h com TGF-\03B2 (1-10 ng/ml). A expressão de FN, SMAD 2 fosforilada (PS2), fosfo-p38 e fosfo-c-Jun foram avaliadas por Western blot (WB) após 1h e 48h de tratamento com TGF-\03B2 (1-10 ng/ml). Análises de WB revelaram que mioblastos L6E9 e FC apresentam aumento de FN já a partir de 1ng/ml de TGF-\03B2, em contraste com CM, em que só foi observado aumento de MEC com 15ng/mL. A infecção pelo T. cruzi induziu uma diminuição da expressão deste componente de MEC em L6E9. FC, por sua vez, apresentam modulação de FN de acordo com o grau de infecção da cultura, com culturas com baixo grau de infecção apresentando redução de FN e culturas altamente infectadas mostrando aumento desta proteína de MEC. A distribuição de fibronectina (FN) também foi analisada por imunofluorescência indireta
FC e L6E9 apresentaram um aumento na expressão de FN a partir de 1ng/ml de TGF-\03B2, confirmando o WB. Após infecção pelo T. cruzi, foi observada uma desorganização e redução na expressão de FN em CM, FC e L6E9 infectados, enquanto células não infectadas adjacentes apresentaram perfis de FN similares ao controle. A resposta diferencial entre os tipos celulares frente ao estímulo com TGF-\03B2 resulta de mecanismos distintos de sinalização intracelular, uma vez que FC e L6E9 apresentam maior disparo da via de SMADs que CM, enquanto a via de p38 (independente de SMADS) é menos estimulada em FC quando comparados com CM e L6E9. Também foi avaliado o perfil de expressão de proteínas das vias de sinalização clássica e alternativa do TGF-\03B2 em culturas de FC normais e infectados com T. cruzi e tratados com 10ng/ml da citocina. Culturas infectadas e tratadas com TGF-\03B2 (10ng/ml) apresentaram uma redução nos níveis de fosforilação de SMAD 2 quando comparados com células normais tratadas. Culturas de FC infectadas não apresentaram aumento de fosfo-p38MAPK, mas disparo na via foi observado após tratamento com 10ng/ml de TGF-\03B2 em FC infectados. Aumento na fosforilação de c-Jun após a infecção e após tratamento com 10ng/ml de TGF-\03B2 também foi detectado em FC. Em conjunto, nossos dados sugerem que a expressão de FN é modulada diferencialmente por TGF-\03B2 em mioblastos L6E9, FC e CM, e que as vias moduladas por SMADS, p38 MAPK e c-Jun possam estar participando no processo de regulação de fibrose mediado pela citocina TGF-\03B2 após infecção pelo T. cruzi / The most severe manifestations of Chagas disease are cardiomyopathy and cardiac
fibrosis,
but the skeletal muscle tissue is also affected by
T. cruzi
infection, resulting in
necrosis and myositis. The accumulation of extracellular matrix (ECM) during the fibrosis
process is involved in the pathogenesis of Chagas disease, but the mechanisms of
its
regulation during infection are not clear yet. Therefore, we propose to compare the response
of cardiomyocytes (CM), cardiac fibroblasts (CF) and skeletal myoblasts (L6E9) infected with
T. cruzi
after TGF
-
β
stimulation, which is an important fibrogenic
cytokine involved in the
development of Chagas cardiomyopathy, also analyzing the signaling mechanisms involved
in this process. CF were purified from CM cultures
. Adequate
purification
was obtained after
the 5th dissociation
of CM cultures
,
as revealed b
y
low detection of desmin, a
cardiomyocyte
-
specific protein. Cultures of normal and
T. cruzi
(Y strain) infected CM, CF
and L6E9 were treated for
1h or
48 hs with TGF
-
β
(1
-
10 ng/ml)
. The expression of FN
,
phosphorylated
SMAD
2 (PS2), phospho
-
p38, and phospho
-
c
-
Jun were also evaluated by
Western blot (WB) after 1h and 48h treatment with TGF
-
β
(1
-
10 ng / ml). WB analysis
revealed that CF and L6E9 showed an increase in FN
expression from 1ng/ml of TGF
-
β
,
contrasting to CM, in which an increased in ECM was only o
bserved after 15ng/ml treatment
.
T. cruzi
infection induced a decrease in the expression of this
ECM
component in L6E9.
CF
presented FN modulation according to the d
egree of infection of the culture, with cultures
containing
a low degree of infection presenting a reduction of FN and highly infected cultures
showing an increase of this ECM protein.
T
he distribution of fibronectin (FN) was
also
analyzed by indirect immu
nofluorescence.
CF and L6E9 displayed a raise in FN expression
rfom 1 ng/mL, confirming WB.
After
T. cruzi
infection, disorganization and reduced FN
expression was observed in infected CM
, CF
and L6E9, while adjacent uninfected cells
showed similar FN prof
iles as controls. The differential response between cellular types
facing TGF
-
β
stimulation results from distinct intracellular signaling mechanisms, since CF
and L6E9 have higher
activation
of
SMAD
s pathway than CM, while p38 pathway
(independent of
SMAD
S
) is less stimulated in CF when compared to CM and L6E9. We also
evaluated the protein expression profile of classical and alternative TGF
-
β
signaling
pathways in normal and
T. cruzi
infected CF cultures, treated with 10 ng/ml of the cytokine.
Infected CF
cultures treated with TGF
-
β
(10ng/ml) showed a reduction in the levels of
phosphorylation of
SMAD
2 when compared with normal and treated controls. CF infected
cultures
did not
show increased phosphorylation of p38MAPK,
but activation in the pathway
was ob
served
after treatment with 10 ng/ml TGF
-
β
.
An increase in phosphorylation of c
-
Jun
after infection and after treatment with 10 ng/ml TGF
-
β
was also detected in CF.
When
considered together, o
ur data suggest that
FN expression is differentially modulated b
y TGF
-
β
in L6E9 mioblasts, CF and CM, and
pathways
modulated by
SMAD
S,
p38 MAPK
and c
-
Jun
may be participating in fibrosis regulatory process mediated by with TGF
-
β
cytokine after
T. cruzi
infection
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Efeito da infecção pelo Trypanosoma cruzi e do TNF sobre a ativação de fibroblastos cardíacos in vitroCoelho, Laura Lacerda January 2015 (has links)
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Previous issue date: 2016-02-26 / A fibrose cardíaca é uma importante manifestação da cardiomiopatia chagásica. O papel dos fibroblastos cardíacos (FCs) nesse processo é pouco estudado. Nesse trabalho investigamos o efeito da infecção pelo Trypanosoma cruzi (cepa Y) e do fator de necrose tumoral (TNF) sobre a ativação de FCs in vitro, visando compreender o papel de FCs ativados no processo de gênese da fibrose cardíaca na infecção chagásica. Os FCs foram obtidos a partir de culturas primárias de células cardíacas de fetos de camundongos Swiss Webster, e sua ativação avaliada através da análise da proliferação, diferenciação destas células em miofibroblastos e a expressão de proteínas de matriz extracelular (ECM) através de imunofluorescência (IF) e Western blotting (WB). A caracterização das culturas foi feita através de análise morfológica e funcional e pela análise da expressão dos marcadores tropomiosina sarcomérica (TS) e receptor de domínio de discoidina 2 (DDR2). No nosso sistema de cultivo, 40% dos FCs foram infectados pelo T. cruzi quando utilizamos uma multiplicidade de infecção (MOI) de 10 e 24h de interação
As análises da expressão de alfa actina de músculo liso (\03B1-SMA) por WB, revelaram aumento desta proteína nas culturas infectadas sugerindo diferenciação para miofibroblasto nos tempos de 6h e 24h pós-infecção. As análises de proteínas de ECM revelaram aumento na expressão de fibronectina (FN) após 6h, 24h e 48h de infecção e de laminina (LN) após 6h e 24h, quando comparadas as culturas não infectadas. O tratamento com TNF não estimulou a produção de TNF e NO pelos FCs. TNF também não induziu a diferenciação e a síntese de ECM, porém influenciou o processo de proliferação destas células, revelado pelo aumento de células ki-67+ por IF. Ainda, a citocina reduziu as taxa de infecção dos FCs pelo parasita. Assim, nossos resultados demonstram um efeito da infecção pelo T. cruzi e do TNF sobre a ativação de fibroblastos cardíacos, seja através da indução de diferenciação celular e expressão de proteínas de ECM, ou ainda pela indução de proliferação dos FCs, processos estes que podem contribuir para a gênese da fibrose cardíaca observada na doença de Chagas / Cardiac fibrosis is an important manifestation of Chagas cardiomyopathy
. The
involvement of cardiac fibroblasts (CFs) in this process is understudied. Here we
investigated the effect of
Trypanosoma cruzi
infection (Y strain) and tumor necrosis
factor (TNF) on CFs
in vitro
, aiming to understand the role of activated CFs in the
process of genesis of cardiac fibrosis in chagasic infection. The CFs were obtained
from primary cardiac cell cultures from Swiss Webster mice fetuses, and CFs
activation analyzed by proliferation, myofibroblast differentiation and extracellular
matrix (E
CM) proteins expression, through immunofluorescence (IF) and
Western
blotting
(WB). The characterization of cultures was made through morphological and
functional analysis and through analysis of expression of the markers sarcomeric
tropomyosin (TS) and di
scoidin domain receptor 2 (DDR2). In our culture system,
40% of CFs were infected by
T. cruzi
using a multiplicity of infection (MOI) of 10 e
24h of interaction. WB analysis of alpha sm
ooth muscle actin (α
-
SMA) expression
revealed increased expression of this protein in
T. cruzi
-
infected CFs suggesting cell
differentiation into myofibroblasts at 6h and 24h post infection. ECM proteins
analyses revealed increased expression of fibronectin
(FN) at 6h, 24h e 48h pos
infection and laminin (LN) at 6h and 24h in
T. cruzi
-
infected cultures compared with
non
-
infected ones. TNF treatment did not stimulate TNF and NO production by CFs.
TNF also did not induce differentiation and ECM production by C
Fs, but influenced
the proliferation process of these cells, revealed by increase of ki
-
67+ cells, through
IF. Furthermore, the cytokine decrease the infection rate of CFs by
T. cruzi
.
Therefore, our results demonstrate an effect of
T. cruzi
infection and
TNF on cardiac
fibroblasts activation, either through induction of cell differentiation and expression of
ECM proteins, or by induction of CFs proliferation, processes which may contribute to
the genesis of cardiac fibrosis in Chagas disease.
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Fibroblastos gengivais humanos em co-cultura com Aggregatibacter actinomycetemcomitans lisogênico induzem a liberação de fago / Human gingival fibroblasts in co-culture with Aggregatibacter actinomycetemcomitans lysogenic induces the release of phageCaroline de Moura Martins Lobo dos Santos 18 November 2011 (has links)
A relação entre bacteriófagos e virulência bacteriana é um modelo muito intrigante e pouco estudado na patogênese periodontal, uma vez que um patógeno periodontal pode ser lisogênico. O objetivo do nosso estudo é determinar a capacidade de fibroblastos gengivais humanos de induzir as cepas lisogênicas de Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Dois experimentos foram realizados seguidos da titulação de fago. Os experimentos consistiram da co-cultura com fibroblastos gengivais humanos e três cepas de Aa [Aa29524, Aa2112, Aa29524(Ø2112)], não lisogênica, lisogênica e lisogênica induzida em laboratório, respectivamente. Em três momentos distintos (no experimento 1: 0, 2 e 4 horas; e no experimento 2: 2, 4 e 6 horas), o sobrenadante da co-cultura foi filtrado e cultivado overnight com a bactéria indicadora (Aa29524) e analisado para a capacidade de lisar a célula indicadora. Em ambos os experimentos, o sobrenadante da co-cultura de fibroblastos gengivais humanos com Aa lisogênico e Aa lisogênico induzido em laboratório, ao ser cultivado com a bactéria indicadora, promoveu lise da mesma, resultando no aumento da produção de fago. Pode-se concluir que, nesse estudo os fibroblastos gengivais humanos foram capazes de induzir cepas lisogênicas de Aggregatibacter actinomycetemcomitans. / The relationship between bacteriophages and bacterial virulence is a very intriguing, but rarely studied model in periodontal pathogenesis, as a periodontal pathogens can be lysogenic. The aim of our study is to determine the ability of human gingival fibroblasts to induce lysogenic strains of Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Two experiments were performed followed by titration of phage. The experiments consisted of co-culture with human gingival fibroblasts and three strains of Aa [Aa29524, Aa2112, Aa29524 (Ø2112)], not lysogenic, lysogenic and lysogenic induced in the laboratory, respectively. In three different times (in experiment 1: 0, 2 and 4 hours, and in experiment 2: 2, 4 and 6 hours), the co-culture supernatant was filtered and cultured overnight with the indicator strain (Aa29524) and analyzed for ability to lyse the cell indicator. In both experiments, the supernatant of the co-culture of human gingival fibroblasts with Aa lysogenic and Aa lysogenic induced in the laboratory to be cultured with the indicator bacteria, caused lysis of the same, resulting an increased phage production. It can be concluded that in this study, human gingival fibroblasts were able to induce lysogenic strains of Aggregatibacter actinomycetemcomitans.
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